CN102406621A - 用于治疗肝病的冻干粉针剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于治疗肝病的冻干粉针剂。具体而言，所述冻干粉针剂包括以下式I化合物：和甘露醇，以及任选的pH调节剂，所述式I化合物与所述赋形剂的重量比为1∶0.2～1∶5。本发明还涉及所述冻干粉针剂的制备方法。本发明冻干粉针剂具有令人期待的药学上的优点。

Description

用于治疗肝病的冻干粉针剂

技术领域

本发明属医药技术领域，涉及一种可用于治疗肝病的冻干粉针剂，特别是涉及一种包含如本发明式I所示化合物的冻干粉针剂。本发明的冻干粉针剂具有期望的良好性质。

背景技术

近年来，随着人们生活水平的提高和饮食结构的变化，我国脂肪肝发病率已接近乙肝病毒携带率，并呈明显上升趋势。其中，30～40岁的男性是脂肪肝患者大军中的“主力”，基本占到全部脂肪肝患者的1/4。据估计，现在脂肪肝发病率较20世纪80年代以前增加了30倍左右。据报道15％脂肪肝患者会发展成肝硬化，3％的脂肪肝患者会死于肝衰竭。因此脂肪肝及早预防和治疗具有非常重要的意义。

肝炎是指由于不同病因的肝脏炎症，日常生活中病毒性肝炎最常见，它具有发病率高，病程长，病势反复性强，危害性大的特点，若不进行及时治疗，有转变为肝硬化及肝癌的可能。我国又是肝炎高发的国家，据统计，我国有超过1.2亿人感染乙肝病毒，慢性乙肝病人约3000万，3800万人携带丙肝病毒，仅从乙肝病毒携带者的数字来说，差不多占国民十分之一。

目前，虽然肝病药物种类很多，但尚无一种药物能真正杀灭乙肝病毒。目前多采用抑制病毒复制、或改善症状、控制病情发展两种治疗思路。前者虽然能快速抑制病毒复制，但存在长期用药风险。如肝病一线药物拉米夫定虽可以将乙肝病毒抑制在较低水平(DNA＜10³拷贝/ml)，但需要长期用药(通常2-3年)，并不能随意停用，不仅费用高昂，而且长期用药直接导致部分患者乙肝病毒出现耐药变异株，病情更趋复杂。因此，研制一种能有效改善肝病症状、适合长期用药、且价格合理的药物，用于肝脏疾病的预防和治疗，符合当前的国情，满足临床需要。

水飞蓟，菊科，是优良的护肝植物，其主要成分为水飞蓟宾(silybin)。药理实验证明，水飞蓟宾有保护肝细胞膜，改善肝功能的作用，预防多种肝脏毒物所致的肝损伤，促进肝细胞再生，主要用于治疗各种急慢性肝炎、初期肝硬化和肝中毒等症。

水飞蓟宾非常难溶于水，限制了其口服吸收，成盐后水溶性明显增加。目前，主要研究集中在水飞蓟宾葡甲胺盐和水飞蓟宾磷脂复合物。西利宾安片的主要成分即是水飞蓟宾葡甲胺，但仍存生物利用度不高的缺点。水林佳的主要成分是水飞蓟宾卵磷脂复合物，虽然通过改善脂溶性在一定程度上提高了生物利用度，但是其水溶性仍较差。

影响体内生物利用度的因素包括剂型因素和生理因素两个方面：剂型因素如药物的脂溶性、水溶性和pKa值，药物的剂型特性(如崩解时限、溶出速率)及一些工艺条件的差别；生理因素包括胃肠道内液体的作用，药物在胃肠道内的转运情况，吸收部位的表面积与局部血流，药物代谢的影响，肠道菌株及某些影响药物吸收的疾病等。由此，一个药物在体内的吸收情况不仅与药物本身的脂溶性有关，而且水溶性也是一关键参数。

水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠盐是一种水飞蓟宾的衍生物，其在水溶性方面显著优于水飞蓟宾，据信其具有降低血清中游离脂肪酸和甘油三酯的含量、调节磷脂代谢的紊乱、清除氧自由基、抑制脂质过氧化、稳定肝细胞膜、减轻脂肪变性、对抗肝细胞坏死的功能，可用于鬼笔鹅膏引起的急性肝中毒的治疗，还可用于急性、慢性肝损伤的治疗，以及用于脂肪肝和酒精肝所造成的肝功能异常的恢复。

CN101302212A公开了水飞蓟宾二偏琥珀酸酯及其盐类的制备方法和用途，这种据说有效的制备方法是使水飞蓟宾在适合的有机溶剂中与丁二酸酐反应合成得到水飞蓟宾丁二酯单甲酯，然后在特定的介质中与氢氧化钠反应生成氟苯尼考丁二酸酯钠盐而实现的。

CN101244041A公开了一种用于预防及治疗急性肝损伤的药物及其制备方法。该发明专利文献具体涉及一种成分为水飞蓟宾丁二酸钠冻干粉针的制备方法，包括以下步骤：(1)将水飞蓟宾丁二酸钠溶解于注射用水中，充分搅拌成溶液；(2)于上述溶液加入甘露醇或乳糖使溶解；(3)将上述溶解用活性炭加热脱色并用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH7～9，过滤；(4)滤液无菌分装，冷冻干燥，即得。

然而，本发明人在制备水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠的冷冻干燥粉针剂时，发现在某些配方比例出现一些不期望的缺点，例如得到的粉针剂溶解速度较慢和/或冻干燥形态较差等。因此本领域期待能够为临床提供一种具有良好质量的包含水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠的冻干粉针剂。

发明内容

本发明目的在于提供一种具有某些/某种良好性质的包含水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠的冻干粉针剂，期待其可以避免溶解速度较慢和/或冻干燥形态较差和/或稳定性不足等问题。本发明人令人意外地发现，具有特定配方比例的包含水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠的冻干粉针剂具有所期望的良好特征。本发明因此而得以完成。

因此，本发明提供了以下各个方面：

[1]一种冻干粉针剂，其包括以下式I化合物：

和作为赋形剂的甘露醇，以及任选的pH调节剂，所述式I化合物与所述赋形剂的重量比为1∶0.2～1∶5，优选1∶0.5～1∶2.5，优选1∶0.5～1∶2。

[2]项目1的冻干粉针剂，其在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为5～20％(w/v)，优选8～15％(w/v)，再更优选10～15％。或者，该冻干粉针剂中式I化合物和甘露醇的重量之和占冷冻干燥前溶液体积的5～20％(w/v)，优选8～15％(w/v)。

[3]项目1至2任一项的冻干粉针剂，其用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液中的固形物含量为5～20％(w/v)，优选8～15％(w/v)。或者，该冻干粉针剂用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，其中式I化合物和甘露醇的重量之和占复溶溶液体积的5～20％(w/v)，优选8～15％(w/v)，再更优选10～15％。

[4]项目1至3任一项的冻干粉针剂，其用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液根据中国药典2005年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为5.2～6.8。在一个实施方案中，pH值为5.5～6.5。

[5]项目1至3任一项的冻干粉针剂，其中该冻干粉针剂用水制成每1ml中含式I化合物20mg的溶液并根据中国药典2005年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为5.2～6.8。在一个实施方案中，pH值为5.5～6.5。

[6]项目1至5任一项的冻干粉针剂，其中水份含量低于10％，优选低于8％，优选低于5％，更优选低于3％。

[7]项目1至6任一项的冻干粉针剂，其中还包括pH调节剂。在一个实施方案中，该pH调节剂的种类不受特别限制，只要其可以将所述冻干粉针剂(和/或在配制该冻干粉针剂过程中将配制中间物)的pH值调节至期望的范围即可。在一个实施方案中，所述pH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。

[8]项目1至7任一项的冻干粉针剂，其基本上是按包括如下的步骤制备的：

(a)称取处方量的式I化合物和赋形剂，加入适量注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(b)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸溶液或碱溶液调节至pH5.2～6.8，优选pH5.5～6.5；

(c)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中；

(d)冷冻干燥除去水分，压塞，即得。

[9]项目8的冻干粉针剂，其中步骤(c)所得经过滤的滤液，其中固形物含量是为5～20％(w/v)，优选8～15％(w/v)，再更优选10～15％。

[10]制备项目1至7任一项的冻干粉针剂的方法，其基本上包括以下步骤：

(a)称取处方量的式I化合物和赋形剂，加入适量注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(b)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸溶液或碱溶液调节至pH5.2～6.8，优选pH5.5～6.5；

(c)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中；

(d)冷冻干燥除去水分，压塞，即得。

[11]项目10的方法，其中步骤(c)所得经过滤的滤液，其中固形物含量是为5～20％(w/v)，优选8～15％(w/v)，再更优选10～15％。

[12]项目10至11任一项的方法，其中步骤(a)所述适量注射用水是注射用水处方量的约70～90％。

[13]项目10至12任一项的方法，其中步骤(a)所述活性炭用量是溶液重量的0.05％～1％，优选0.05％～0.5％。

[14]项目10至13任一项的方法，其中步骤(b)中所述酸溶液和碱溶液是使用选自下列的pH调节剂配制成的水溶液：氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。这些水溶液的浓度是本领域技术人员公知的，例如1～10％，例如2％～5％。

[15]项目10至14任一项的方法，其中步骤(d)中除去水份后所得冷冻干燥物料中水份含量低于10％，优选低于8％，优选低于5％，更优选低于3％。

在以上项目[10]所述方法步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上项目[10]所述方法步骤。

根据本发明，其中具有下式结构的式I化合物：

亦可称为水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠或水飞蓟宾二偏琥珀酸酯二钠，其为水飞蓟宾的苯并吡喃环3位上以琥珀酸取代，并在苯并二氧六环2位甲基上以琥珀酸取代，由此而形成的二钠盐，其化学名称为：琥珀酸单[[6-[3-(3-羧基-1-氧丙氧基)-3，4-二氢-5，7-二羟基-4-氧-2H-1-苯并吡喃-2-基]-2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1，4-苯并二氧六环-2-基]甲基]酯二钠，或者Butanedioicacid，mono((6-(3-(3-carboxy-1-oxopropoxy)-3，4-dihydro-5，7-dihydroxy-4-oxo-2H-1-benzopyran-2-yl)-2，3-dihydro-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1，4-benzodioxin-2-yl)methyl)ester，disodium salt。其分子式为：C₃₃H₂₈O₁₆Na₂，分子量为：726.48。在本发明中式I化合物还将包括式I所示化合物可能存在的任一种单一异构体，或者式I所示化合物可能存在的任意2个以上的异构体以任意比例的混合物。

根据本发明，术语“赋形剂”亦可称为辅料、填充剂等。

本文所用的“药学可接受的赋形剂”指的是可用于配制药物的赋形剂，其对生物体基本上没有不良影响，并且通常是生物体可耐受的。

在本发明中，优选的本发明冻干粉针剂在用水制成每1ml中含式I化合物20mg的溶液后，再根据中国药典2005年版二部附录VI H项下的方法即pH值测定法测定，该溶液的pH值为5.2～6.8。本发明人出人意料地发现，这样得到的组合物具有特别优异的效果。

虽然本领域技术人员理解，本发明的赋形剂可以是任一种可用于冷冻干燥的赋形剂，特别是甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘氨酸、右旋糖苷、氯化钠、及其组合，然而在本发明中，特别优选的赋形剂是甘露醇。

在一个实施方案中，本发明组合物是冷冻干燥的药物制剂，其中式I化合物与所述赋形剂的重量比为1∶0.2～1∶5，优选1∶0.5～1∶2.5，优选1∶0.5～1∶2，再更优选1∶0.5～1∶1.5。此外，该冻干粉针剂在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为5～20％(w/v)，优选8～15％(w/v)，再更优选10～15％。这样，在冷冻干燥前所配制的药液是包括以下组成的配方：

在一个实施方案中，本发明组合物是冷冻干燥的药物制剂，其中式I化合物与所述赋形剂的重量比为1∶0.2～1∶5，优选1∶0.5～1∶2.5，优选1∶0.5～1∶2。此外，该冷冻干燥得到的冻干粉针剂，其在用水制成每1ml中含式I化合物20mg的溶液后，根据中国药典2005年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为5.2～6.8。在一个实施方案中，pH值为5.5～6.5。这样，在冷冻干燥得到的冻干粉针剂包括：1重量份的式I化合物、0.2～5重量份(优选0.5～2.5重量份，优选0.5～2重量份)的赋形剂、以及任选的pH调节剂。在一个实施方案中，发现在特别优选的本发明组合物中，式I化合物与所述赋形剂的重量比为1∶0.6～1∶1.5，并且在冷冻干燥前固形物含量为5～20％(w/v)，特别是8～15％(w/v)时具有出人意料的优异性能。在一个实施方案中，发现在特别优选的本发明组合物中，式I化合物与所述赋形剂的重量比为1∶0.6～1∶1.5，并且所用注射用水是式I化合物重量的10～15倍，在此比率范围内，在此情况下配制的冷冻干燥粉针剂具有出人意料的优点，例如稳定性好、用注射用水重新溶解(即复溶)快。

冷冻干燥粉针剂的制备过程是本领域技术人员公知的制药工艺，例如如下冻干曲线A和冻干曲线B所示的两种示意性的冻干曲线：

冷冻干燥粉针剂中的水含量是一般在8％以下，优选低于5％，更优选低于3％。水份控制可通过适当调整冷冻干燥程序来控制。该冷冻干燥粉针剂中的水份含量可根据许多已知方法来测定，例如干燥失重法。

在本发明中，为了在必要时调节药液的pH值，可以向组合物中加入适当的pH调节剂。尽管本发明人仅用不具缓冲能力的强酸或强碱溶液例如氢氧化钠水溶液和盐酸水溶液进行调节，然而，本领域技术人员理解，如果用这种不具缓冲能力的pH调节剂处理能满足体系的pH要求，则具有缓冲能力的pH调节剂将更加能够实现本发明目的，因此这些缓冲剂不但能够调节pH值，而且能稳定pH值。因此本发明所列任一pH调节剂或其组合均包括在本发明精神和范围内。

在制备本发明冻干粉针剂时，所配制的药液中，固形物的含量优选是在5-20％之间，更优选8～15％，再更优选10～15％。由于冻干粉针剂通常是在管状西林瓶中进行冷冻干燥得到，本领域技术人员理解这种产品在获得成品甚至在供医生使用之前，通常均呈现一个圆饼状，尽管该圆饼的体积理论上讲会比原有水溶液的体积少(稍有缩小)，然而通常这种缩小通常不会缩小到原水溶液体积50％，通常会在原水溶液体积的80-120％之间，更通常在原水溶液体积的90-100％之间，而从终产品西林瓶内可观察到原水溶液液面痕迹(主体饼状物因冻干缩小后残留在瓶壁上的液面痕迹，即便西林瓶中的冻干品因各种原因例如碰撞等原因而呈粉末状，通常仍然可以保留原有的液面痕迹)，据此痕迹亦可估计出该冷冻干燥组合物在冷冻干燥之前的水溶液体积。因此，虽然本发明提供的是一种基本无水的冷冻干燥粉针剂，然而根据该粉针剂仍然可以大致估计出其在配制时，至少在冷冻干燥开始之前的药液体积，根据该估计出的体积以及西林瓶中的干燥终产物的重量，亦可计算到在制备本发明冻干粉针剂时，所配制的药液中的固形物的含量。因此，根据本发明第一方面的冻干粉针剂，其在配制时的药液的固形物含量为5-20％，更优选8～15％，更优选10～15％。

在本发明中，短语“步骤(b)所述注射用水的处方量是式I化合物重量的5～30倍”是指向体系中加入注射用水，注射用水的量是使得药液的体积达到处方标示的体积。由于固体物质溶解于溶剂中时存在体积效应，溶液终体积并不等于溶剂量的体积，因此其中所述的“注射用水的处方量”是指加入一定量的注射用水，其使药液体积达到标示的体积。例如对于处方为“式I化合物75g、甘露醇50g、注射用水至1000ml”时，因两种固体物质存在体积效应，其配制成1000ml药液时所用的注射用水的量会稍低于1000ml。本领域技术人员理解，“注射用水的处方量”可以是使配方总体积达到标示体积所用的一个不确定数值的注射用水的量，因此在描述“注射用水的处方量”时，无需具体指明所用注射用水的具体量，只要所用的注射用水使药液终体积达到期望体积即可。

术语“固形物含量”是指固体物质(例如本发明式I化合物及所用的全部赋形剂，重量/克)加入到溶剂(例如注射用水)中，溶解后得到一个溶液，所述固体物质的重量除以终溶液体积的百分数(重量/体积百分数，例如g/100ml)。例如在本发明中，以75g式I化合物和赋形剂50g甘露醇加适量注射用水溶液，配制成终体积为1000ml的溶液，其固形物含量即为12.5％。

在本发明中，符号％，根据其所使用的语境，可以具有本领域技术人员容易理解的含义。例如在提及固形物含量时，该符号表示重量/体积的百分数(w/v，例如g/100ml)；又例如在提及冷冻干燥粉针剂中的“水含量”时，例如水含量在8％以下，此时该符号％表示重量/重量的百分数(w/w，g/100g)。一般而言，在固体分散在液体中时，％表示重量/体积百分数；在固体分散在固体中或者液体分散在固体中(例如粉针的含水量)时，％表示重量/重量百分数。在其它情况下，如无另外说明，符号％表示重量/重量百分数。

在配制本发明的药液时，本领域技术人员公知，可使用例如约0.45um的微孔滤膜进行粗滤过滤，在将药液灌装到西林瓶中之前，可以使用例如约0.22um的微孔滤膜进行精滤过滤以除菌，必要时可以过滤多次。

根据本发明的冻干粉针剂，其为冷冻干燥粉针剂。在一个实施方案中，该冷冻干燥粉针剂为单剂量制剂(例如西林瓶装的粉针剂)，每一单位剂量中式I化合物的量可以例如但不限于约75mg、约150mg、约225mg、约300mg、约375mg、约450mg、约600mg、或约750mg；或者每一单位剂量中式I化合物的量折算成水飞蓟宾计可以为例如但不限于约50mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约400mg、或约500mg。

本发明提供的冻干粉针剂(例如约20mg)加三氯化铁试液适量(例如1ml)溶解后，滴加(例如20％的)氢氧化钠溶液(例如2ml)后，可生成典型的棕红色沉淀。此外，本发明提供的冻干粉针剂用水溶解成1ml中含有水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠约0.3mg的溶液，其照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV A)测定，在288±2nm的波长处有最大吸收，在252±2nm的波长处有最小吸收。

在本发明中，本发明组合物中式I化合物的含量可以采用高效液色谱法(例如参见中国药典2005年版二部附录V D)测定，或者采用分光光度法测定。在一个示例性含量测定方法中，采用分光光度法测定，具体方法为：取水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠对照品适量，加水溶解制成浓度约0.3mg/ml，为对照品溶液；另取本发明冻干粉针剂适量，加水溶解制成水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠浓度约0.3mg/ml的溶液，作为供试品溶液；照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV A)在288±2nm的波长处测定吸光度，计算本发明组合物中水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠的含量(％，w/w)，还可进一步计算其相对于标示含量的百分数。另外，用本发明所述的各种赋形剂(其用量范围按照“式I化合物与所述赋形剂的重量比为1∶0.2～1∶5”计)，分别配制成相当于在水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠浓度约0.3mg/ml时的溶液，作为空白对照溶液，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV A)在288±2nm的波长处测定吸光度，各种赋形剂的吸光度基本为0。术语“标示含量的百分数”是指每瓶组合物中含有水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠的平均含量占每瓶组合物中所标示的水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠的量的百分数(％，w/w)，即百分标示量。以百分标示量理解或判断药品的质量是一种常用的方法。在本发明中，如未另外说明，测定本发明冻干粉针剂中或者其配制过程中涉及的药液中式I化合物的含量，均采用上述分光光度法。

根据本发明的冻干粉针剂，其用注射用水复溶，通常而言复溶时间在30秒内，优选在20秒内，更优选在15秒内。

根据本发明的冻干粉针剂，其用水制成每1ml中含式I化合物20mg的溶液并根据中国药典2005年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为5.2～6.8。在一个实施方案中，pH值为5.5～6.5。

在本发明中，式I化合物，或者水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠，以及它们的标准品，均可从市场购得，或者采用现有技术公开的方法制备，例如采用例如CN101302212A或GB2167414A所记载的方法制备。在本发明中可以采用例如GB2167414A中的方法制备，例如其中实施例1和2记载的方法制备，经纯化后水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠的纯度为99.6％。

本发明提供的冻干粉针剂可以在在25℃以下干燥处保存至少24个月，可以满足一般的冷冻干燥粉针剂的贮藏要求。

本发明所得冻干粉针剂特别是冷冻干燥粉针剂通常为类白色或淡黄色的冻干块状物或其碎块或其粉末，无臭、味苦，易溶于水。

本发明的冻干粉针剂可用于急性、慢性肝损伤治疗，还可用于脂肪肝和酒精肝所造成的肝功能异常的恢复。本发明的冻干粉针剂在使用时，可以用0.9％氯化钠注射液或5％葡萄糖注射液稀释后静脉滴注，例如一次注射5mg/kg，例如可以在2小时内注完，例如一天注射1、2、3或4次。此外，本发明的冻干粉针剂可以用于鹅膏菌引起的肝脏中毒时，在此情况下，应尽早开始使用本发明的冻干粉针剂，直至中毒症状消失为止。

本发明冻干粉针剂中的活性成分式I化合物为水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠(在本文中可缩写为SDH)，其具有抗氧化活性，其对自由基所介导的肝脏微粒体和线粒体磷脂过氧化有抑制作用，具有膜稳定效应。大鼠静脉注射SDH可抑制苯肼介导的氧气过量消耗和磷脂的过氧化作用，减弱谷胱肝肽(GSH)的增加趋势，SDH还可将此效应降低为正常水平。SDH可减少乙醇在体内的代谢过程，尤其是微粒体乙醇氧化系统的影响，还可纠正由乙醇所导致的肝的磷脂代谢紊乱。式I化合物还具有抗肝毒性活性，大鼠腹腔注射SDH可增强肝的总磷酯、游离胆固醇、甘油三酯、总磷脂和磷脂酰基乙醇胺以及血清中甘油三脂的活性。SDH具有降低大鼠线粒体后的脂肪酸的合成作用。此外，式I化合物还具有抗毒素作用，SDH对毒性物质如盐酸D-半乳糖胺、金属镨以及其化合物(Pr(NO₃)₃)、苯肼、青蛙病毒3号、异腈酸α萘酯等对肝脏的损害亦有效果。再者式I化合物还对抗药源性肝损害具有保护作用，对扑热息痛和苯巴比妥等药导致的肝损害具有保护作用。

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。在下面的例子中，使用的pH调节剂，如无另外说明，是1M氢氧化钠溶液或者1M盐酸溶液，其用量是使制备粉针剂时，使冷冻干燥前所配制的溶液的pH值调节至规定值(在标明值的±0.05范围内)或范围。下文制备步骤为了举例的目的，并基于各举例的可比较性而作了某些具体描述，本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本发明制备冻干粉针剂的方法。

A、制备例部分：制备包含式I化合物的本发明粉针剂

制备例1、本发明粉针剂

配方：

式I化合物	75g，
		甘露醇	50g，
pH调节剂	至pH6.0，
		注射用水	至1000ml。

制备方法：

(1)称取处方量的主药和赋形剂，置于不锈钢桶中，加入处方量约80％的注射用水，使各组分溶解，再按溶液体积加入0.2％(w/v)的活性炭，搅拌30分钟，过滤脱炭，补加注射用水至接近处方全量。

(2)滤液取样，测定pH值，必要时用pH调节剂调节至规定值，再补加注射用水至处方全量。

(3)药液先用0.45um微孔滤膜过滤，再用0.22um微孔滤膜过滤2次。

(4)以每瓶灌装药液2ml灌装于10ml西林瓶中(在以下各例子中，引用本制备例方法时，如未另外说明，灌装药液量为包含150mg式I化合物的药液体积；在其它例子中如果灌装药液体积明显增加或者明显减小，可以根据经验适当调整西林瓶的体积)，半加胶塞。

(5)按照本文所述冻干曲线A进行冷冻干燥，至水分低于5％；冻干结束后，进行液压加塞；扎铝盖，即得。在本发明中制备例1的样品可简称为Ex1或者E1；其它制备例的样品亦可类似表示，例如制备例2的样品可简称为Ex2或者E2。

制备例2、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为53g和27g以外，其它与制备例1相同。

制备例3、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为50g和100g以外，其它与制备例1相同。

制备例4、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为75g和75g以外，其它与制备例1相同。

制备例5、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为80g和60g以外，其它与制备例1相同。

制备例6、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为40g和60g以外，其它与制备例1相同。

制备例7、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为100g和50g以外，其它与制备例1相同。

制备例8、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为46g和34g以外，其它与制备例1相同。

制备例9、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为86g和64g以外，其它与制备例1相同。

制备例10、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为40g和40g以外，其它与制备例1相同。

制备例11、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为36g和44g以外，其它与制备例1相同。

制备例12、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为67g和83g以外，其它与制备例1相同。

制备例12、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为29g和51g以外，其它与制备例1相同。

制备例14、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为55g和95g以外，其它与制备例1相同。

制备例15、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为27g和53g以外，其它与制备例1相同。

制备例16、本发明粉针剂

除了式I化合物和甘露醇使用量分别为50g和100g以外，其它与制备例1相同。

制备例17、本发明粉针剂

除了调pH6.5以外，其它与制备例1相同。

制备例18、本发明粉针剂

除了调pH6.8以外，其它与制备例1相同。

制备例19、本发明粉针剂

除了调pH5.5以外，其它与制备例1相同。

制备例20、本发明粉针剂

除了调pH5.2以外，其它与制备例1相同。

B、对比例部分：制备含有式I化合物的粉针剂

对比例1：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为10g和10g以外，其它与制备例1相同，得到对比例1的样品1。另外进行另一批次制备，除了式I化合物和甘露醇使用量分别为10g和10g，并且药液调节至pH9.0以外，其它与制备例1相同，得到对比例1的样品2。用样品1和2进行了下文的试验，结果两个样品结果类似。下文试验结果中，仅示意性地给出了样品1的结果。在本发明中对比例1的样品可简称为D1；上述样品1可简称为D1-1，样品1可简称为DI-2；其它对比例的样品亦可类似表示，例如对比例3的样品可简称为D3。

对比例2：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为75g和10g以及终体积为1500ml以外，其它与制备例1相同，得到对比例2的样品1。另外进行另一批次制备，除了式I化合物和甘露醇使用量分别为75g和10g以及终体积为1500ml，并且不调节药液的pH值以外，其它与制备例1相同，得到对比例2的样品2。用样品1和2进行了下文的试验，结果两个样品结果类似。下文试验结果中，仅示意性地给出了样品1的结果。

对比例3：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为50g和20g以外，其它与制备例1相同。

对比例4：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为40g和20g以外，其它与制备例1相同。

对比例5：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为30g和20g以外，其它与制备例1相同。

对比例6：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为20g和20g以外，其它与制备例1相同。

对比例7：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为80g和80g以外，其它与制备例1相同。

对比例8：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为70g和110g以外，其它与制备例1相同。

对比例9：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为80g和120g以外，其它与制备例1相同。

对比例10：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为75g和150g以外，其它与制备例1相同。

对比例11：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为86g和34g以外，其它与制备例1相同。

对比例12：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为92g和28g以外，其它与制备例1相同。

对比例13：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为37g和83g以外，其它与制备例1相同。

对比例14：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为34g和86g以外，其它与制备例1相同。

对比例15：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为35g和35g以外，其它与制备例1相同。

对比例16：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为25g和25g以外，其它与制备例1相同。

对比例17：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为90g和90g以外，其它与制备例1相同。

对比例18：除了式I化合物和甘露醇使用量分别为100g和100g以外，其它与制备例1相同。

对比例18：除了pH5.0外，其它与制备例1相同。

对比例19：除了pH4.5外，其它与制备例1相同。

对比例20：除了pH4.0外，其它与制备例1相同。

对比例21：除了pH7.0外，其它与制备例1相同。

对比例22：除了pH7.5外，其它与制备例1相同。

对比例23：除了pH8.0外，其它与制备例1相同。

C、试验例部分

试验例1：粉针剂的外观和溶解性测定

分别取各制备例和对比例所得粉针剂，揭开瓶盖塑料顶，用注射器从瓶塞穿刺注入注射用水(用量约为相应样品冷冻干燥前溶液体积的3倍)，用秒表记录复溶时间，每批样品测试5次，取平均值。

结果，Ex1至Ex20的复溶时间均小于15秒，例如Ex1的复溶时间为6秒。Ex2、Ex5、Ex7-11、Ex14-17的复溶时间在4-7秒之间，Ex3-4、Ex6、Ex12、Ex19的复溶时间在2-5秒之间，Ex20的复溶时间为12秒，Ex13、Ex18的复溶时间在6-9秒之间。Ex1至Ex20的外观均呈结实、完整的圆饼状，无裂块、喷瓶等异常情况。

D1-6、D11-12、D15-16的复溶时间在23-44秒之间，例如D3、D5、D11、D15的复溶时间分别为23秒、29秒、28秒、26秒，D1、D2、D4、D12、D16的复溶时间分别为33秒、37秒、31秒、33秒、35秒，D6的复溶时间为41秒。D7-10、D13-14、D17-24的复溶时间在16-23秒之间，例如D7-8、D18-21的复溶时间在17-20秒之间，D9、D13-14、D17的复溶时间在21-23秒之间，D19-23的复溶时间在16-20秒之间。

D1-6、D11-12、D15-16各样品的冻干粉块均呈现明显的萎缩，而且D1-2、D5-6、D11-12、D16各样品的冻干粉块均呈现明显的塌陷。D7-10、D17-18各样品均出现不同程度的裂块、喷瓶。

试验例2：测定各制备例和对比例样品高温放置后的残余率

本试验例中，测定各制备例和对比例所得的冷冻干燥粉针剂在40℃下放置2个月后，其中式I化合物的含量[40℃，2月，可称为高温平均含量，mg/瓶，测定10瓶的平均值]相对于该试样在20℃下处理相应时间时式I化合物的含量[20℃，2月，可称为常温平均含量，mg/瓶，测定10瓶的平均值]的百分数，即残余百分数(％)，即

其中，高温平均含量(mg/瓶)和常温平均含量(mg/瓶)是样品溶解后经分光光度法测定并经计算得到的每瓶中式I化合物的含量(10瓶的均值)。

结果显示，Ex1至Ex20的残余百分数(％)均在97.5％～100.5％之间，例如Ex1的残余百分数(％)为98.2％，Ex2-4、Ex7-9、Ex13-14、Ex17-19的残余百分数(％)在98.0-99.0％之间，Ex5、Ex10-12、Ex16、Ex20的残余百分数(％)在99.0-100.0％之间，Ex6的残余百分数(％)为97.6％，Ex15的残余百分数(％)为100.5％。Ex1至Ex20在40℃下经2个月处理后颜色无变化。

D13、D14的残余百分数(％)分别为93.3％和88.7％，D19、D20、D21的残余百分数(％)分别为95.4％、93.1％和89.4％，并且这些样品在40℃下经2个月处理后颜色变成微黄。其它各对比例样品的的残余百分数(％)分别在97.0％和100.5％之间。

试验例3：测定各制备例和对比例的药液浓度

本试验例中，测定各制备例和对比例所配制的药液最终过滤后、冷冻干燥前(在本发明中可称为最终药液浓度)，该最终药液浓度相对于配方理论浓度的百分数(药液百分浓度)，即：

其中，最终药液浓度是经分光光度法测定的溶液中式I化合物的浓度(mg/ml)；配方理论浓度是根据各制备例和对比例的配方计算的式I化合物的浓度(mg/ml)。

结果显示，Ex1至Ex20的药液百分浓度(％)均在98.5％～100.5％之间，例如Ex1的残余百分数(％)为100.2％。D22、D23、D24的药液百分浓度(％)分别为98.2％、96.3％、93.7％；D7-10、D17-18的药液百分浓度(％)在91.5％～98.0％之间，例如D7、D8、D9、D10的药液百分浓度(％)分别为98.0％、96.6％、93.0％、91.5％。

试验例4：冷冻干燥条件的影响

用上文A、制备例部分和B、对比例部分的配方，配制药液，并制备粉针剂，不同之处是使用冻干曲线B进行冷冻干燥，至水分低于5％。

然后参考以上试验例1的方法，测定各样品的相应性质。结果显示，对于相同的配方，冻干曲线B所得样品的复溶时间与冻干曲线A所得样品的复溶时间相差均较小，差值均不超过2秒。

然后参考以上试验例2的方法，测定各样品的相应性质。结果显示，对于相同的配方，冻干曲线B所得样品的残余百分数(％)与冻干曲线A所得样品的药液百分浓度(％)相差均较小，差值均不超过1％。例如对于Ex1配方，经冻干曲线B制备后，其残余百分数(％)为98.5％(相差0.3％)。

然后参考以上试验例3的方法，测定各样品的相应性质。结果显示，对于相同的配方，冻干曲线B所得样品的药液百分浓度(％)与冻干曲线A所得样品的药液百分浓度(％)相差均较小，差值均不超过1％。

试验例5：粉针剂酸碱度的测定

分别取各制备例和对比例所得粉针剂粉末适量，用水制成每1ml中含式I化合物20mg的溶液，根据中国药典2005年版二部附录VI H项下的方法测定该溶液的pH值。

结果，制备例的各样品的pH值与其配制时的pH值相差均在0.2个pH单位以内。例如制备例1的配方pH值为pH6.0，而其所得粉针剂按以上方法测定，结果为pH6.14，相差0.14个pH单位。对比例的各样品的pH值与其配制时的pH值相差均在0.3个pH单位以内。

Claims (10)

1.一种冻干粉针剂，其包括以下式I化合物：

和作为赋形剂的甘露醇，以及任选的pH调节剂，所述式I化合物与所述赋形剂的重量比为1∶0.2～1∶5。

2.权利要求1的冻干粉针剂，其在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为5～20％(w/v)。

3.权利要求1至2任一项的冻干粉针剂，其用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液中的固形物含量为5～20％(w/v)。

4.权利要求1至3任一项的冻干粉针剂，其用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液根据中国药典2005年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为5.2～6.8。

5.权利要求1至3任一项的冻干粉针剂，其中该冻干粉针剂用水制成每1ml中含式I化合物20mg的溶液并根据中国药典2005年版二部附录VIH项下的方法测定，该溶液的pH值为5.2～6.8。

6.权利要求1至5任一项的冻干粉针剂，其中水份含量低于10％。

7.权利要求1至6任一项的冻干粉针剂，其基本上是按包括如下的步骤制备的：

(a)称取处方量的式I化合物和赋形剂，加入适量注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(b)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸溶液或碱溶液调节至pH5.2～6.8；

(c)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中；

(d)冷冻干燥除去水分，压塞，即得。

8.权利要求7的冻干粉针剂，其中步骤(c)所得经过滤的滤液，该滤液中固形物含量是为5～20％(w/v)；或者该滤液中式I化合物和甘露醇的重量之和占溶液体积的5～20％(w/v)。

9.制备权利要求1至6任一项的冻干粉针剂的方法，其基本上包括以下步骤：

(a)称取处方量的式I化合物和赋形剂，加入适量注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(b)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸溶液或碱溶液调节至pH5.2～6.8；

(c)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中；

(d)冷冻干燥除去水分，压塞，即得。

10.权利要求9的方法，其中步骤(c)所得经过滤的滤液，该滤液中固形物含量是为5～20％(w/v)；或者该滤液中式I化合物和甘露醇的重量之和占溶液体积的5～20％(w/v)。