CN102399731A - 一株用于防治马铃薯甲虫的苏云金芽孢杆菌 - Google Patents

Abstract

一株用于防治马铃薯甲虫的苏云金芽孢杆菌，属农业害虫生物防治领域。从自然环境中的马铃薯甲虫虫体中分离获得，根据形态、生理生化特征和分子生物学鉴定为苏云金芽孢杆菌。其细胞悬浮液对入侵害虫马铃薯甲虫具有强致病作用和杀虫效果，经发酵菌体可生产环保型杀虫剂，具有潜在的商业开发应用价值。该菌最适培养基为Luria-Bertani培养基(LB)，最适温度30℃，最适pH7.0；病菌侵染致病的最佳条件是接种浓度在>10⁹个/mL，接种后保湿4～6h并保持温度28～30℃，病菌对马铃薯甲虫1和2龄幼虫有很强的致病作用，田间杀虫效果是现有Bt制剂的两倍多。

Description

一株用于防治马铃薯甲虫的苏云金芽孢杆菌

技术领域

本发明涉及农业害虫的生物控制技术领域，特别是涉及用对农业害虫有很强致病作用和控制效果的病原微生物作为环境友好型生物杀虫剂，具体是一株用于防治马铃薯甲虫的苏云金芽孢杆菌。 

背景技术

马铃薯甲虫为马铃薯上最重要的害虫，1993年传入新疆后便在其边境地区霍城、察布查尔、伊宁和塔城4个县(市)发生危害，1995年开始已经分布到伊犁、塔城两地的13个县(市)。至此此虫已经进入天山北坡无屏障地带，沿着马铃薯种植带迅速东进。目前在新疆伊犁、塔城、阿勒泰、石河子、昌吉和乌鲁木齐等广大地区发生分布；发生行政辖区总面积29.72万km²，局部地区的马铃薯、茄子和番茄受害很严重。该虫所到之处对当地的马铃薯作物生产构成严重威胁。不仅农作物受到严重危害，而且草原生态区天仙子等野生寄主也收受到威胁，成为马铃薯和其它茄科作物生产上的主要害虫。 

 我国防除马铃薯甲虫的措施主要是农业物理防治和使用拟除虫菊酯等化学杀虫剂，但农业物理防治浪费人力物力且难以达到理想的效果，而过多地使用化学杀虫剂可能会威胁人类的健康和破坏生态环境等。早在1989年Zehnder和 Gelernter的田间试验表明，苏云金芽孢杆菌制剂对马铃薯甲虫1龄和2龄幼虫有较好的控制效果。但在我国应用来源于其它环境的现有苏云金杆菌制剂控制马铃薯甲虫的效果较差，因此很有必要进行对马铃薯甲虫有强致病效果的苏云金芽孢杆菌的发现和研制。 

发明内容

本发明的目的在于提供一株用于防治马铃薯甲虫的苏云金芽孢杆菌，该菌株对马铃薯甲虫有很强致病作用和控制效果，根据形态学特征、生理生化特性和该菌16S rDNA保守序列分析的分子生物技术将其鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)，通过试验测定确定了它生长产孢和侵染致病的最适条件。 

1．菌株的分离和筛选 

在新疆乌鲁木齐、伊犁、昌吉地区的未喷洒任何农药的马铃薯地块采集自然死亡的各龄马铃薯甲虫，放于干净的试管并编号备用，采用Luria-Bertani 培养基(LB)和昆虫苏云金芽孢杆菌分离方法，经室内组织培养和纯化得到不同类型的类似苏云金芽孢杆菌，用柯赫氏证病方法确定其中的致病菌，最后经过室内和田间致病性试验比较筛选获得了对马铃薯甲虫有很强致病作用的苏云金芽孢杆菌(CPB008菌株)。

2．CPB008菌株的鉴定 

2.1形态特征(图1)、生理生化特性与分子技术鉴定：在Luria-Bertani 培养基(LB)上，菌落生长速度很快，该菌落乳白色，湿润，略呈圆形，扁平状，边缘不整齐或较整齐，无粘液，较厚实，有蜡层，易挑起。革兰氏染色观察，细胞杆状，菌体为紫色，具柱形芽孢，芽孢不着色仅见有具有轮廓的折光体（图2）。菌体大小为1.43 ～ 1.84 × 0.05 ～ 0.06 μm，根据这些形态特征和《伯杰氏系统细菌学手册》(第八版)鉴定该菌为一芽孢杆菌(Bacillus sp.)。

2.2 菌株的生理生化鉴定：测定了CPB008菌株的生理生化特性，表1中的数据即为测定结果，这些结果与苏云金芽孢杆菌特性相符。 

表1CPB008菌株生理生化特性 

特征	结果	特征	结果
				甲基红	+	KNO3利用	+
明胶液化	+	D-葡萄糖利用	-
				接触酶	+	蔗糖利用	-
吲哚反应	-	D-木糖利用	+
				V-P	+	柠檬酸盐利用	-
脲酶试验	+	D-葡萄糖发酵	-
				硝酸盐还原	+	甘露醇发酵	+
硫化氢产生	-	D-木糖发酵	-
				(NH4)2HPO4利用	+	D-果糖发酵	-

注：“+”表示阳性，“-”表示阴性

2.3分子生物学鉴定：提取菌株基因组DNA，用细菌通用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1541R(5’-AAGGAGGTGATCCAGCC3’)做PCR扩增，得到此菌的16S rDNA保守序列(图3)，其长度为1153bp，在GenBank的登录号为JF795483。同Blast序列比对和用DNAStar软件分析并用MegAlign建立系统进化树，鉴定为一苏云金芽孢杆菌。

因此，根据形态学和生理生化学特征，结合16S rDNA保守基因序列鉴定结果，将这个细菌菌株定名为苏云金芽孢杆菌，拉丁文学名为Bacillus thuringiensis。该菌种的活体纯培养已于2010年12月08日保藏于‘中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心’，保藏号为CGMCC No. 4424。 

4.CPB008的最佳接种侵染条件和致病性 

大量的实验结果表明，CPB008在LB培养基生生长最快，生长最适温度30℃，最适酸碱度为pH7.0。在这些条件下，菌落生长快，大量产生芽孢子。病菌侵染致病的最佳条件是接种浓度在10⁹个/ml数量级或更高，接种后保湿3～4h，并在侵染期间保持温度在25～30℃。苏 云金芽孢杆菌对马铃薯甲虫1和2龄幼虫有良好的致病作用，能很快(处理后3d)引起虫体死亡。在室内用病菌的孢子悬浮液直接喷雾接种后，12小时后即可发病，3d虫体开始死亡，7d死亡率达77.8％，LC₅₀为0.88×10⁸个/ml，死亡虫体腐烂并流出黄褐色液体(图2)；田间对马铃薯甲虫的控制效果(虫体死亡率)达49.9％，极显著高于当地生产中常用苏云金芽孢杆菌制剂的防虫效果(25.8％)(未施药对照甲虫死亡率为0％)。

本发明的优点是：从马铃薯甲虫上分离获得的CPB008菌株，是一个苏云金芽孢杆菌(B. thuringiensis)新杀虫菌株，其细胞接种体对我国重要的外来入侵生物马铃薯甲虫(L. decemlineata)具有很强的致病控制作用，可通过菌体发酵技术生产无残留的环保型细菌性杀虫剂，还可以克隆其杀虫蛋白基因供研发转Bt抗甲虫马铃薯，具有重要的开发应用价值和商业推广效益。 

附图说明

图1苏云金芽孢杆菌(CPB008)的主要形态特征，a:菌落；b:菌体；c：芽孢 

图2苏云金芽孢杆菌的杀虫效果：致死的马铃薯甲虫虫体，左下角虫体示破裂后溢出黄褐色的菌脓

图3马铃薯甲虫苏云金芽孢杆菌CPB008菌株的16S rDNA序列。

具体实施方式

实施例1. 苏云金芽孢杆菌的分离纯化与筛选方案 

1.1 苏云金芽孢杆菌分离培养用Luria-Bertani 培养基(LB)，其配方是胰蛋白胨1%，酵母粉0.5%，NaCl1%，琼脂2%，自来水1000mL，pH7.0。将称好的琼脂，加热熔化；另称取酵母粉、胰蛋白胨和 NaCl，溶于少量热水后加入混匀，然后加水定容至 1000 mL。用NaOH 调节pH。分装试管或三角瓶后，121℃ 灭菌 25 min。使用前加热熔融，倒入灭菌培养皿或试管中制成平板或斜面培养基，供菌株分离培养或菌种保存用。

1.2 分离培养和纯化：从自然条件下采集死亡的马铃薯甲虫样品，用无菌的镊子取死虫浸入70%酒精中约2 S，虫体表面湿润后，将其移入0.1%升汞水溶液中表面消毒1～2min。用无菌水清洗3次，再将虫体转入装有0.85%无菌生理盐水的指行管中，用无菌玻璃棒压碎虫体，使褐色液体流出制成菌悬液。将菌悬液65℃水浴15分钟，在无菌条件下取0.1ml悬液于固体培养基平板上，图板后30℃培养48 h，待菌落长出后，挑取类似苏云金芽孢杆菌用石碳酸复红镜检，将检出的苏云金芽孢杆菌划线，分离纯化，再转移到LB试管斜面培养基上，并编号标明菌株，保存备用。 

1.3 强致病菌筛选：通过测定菌株的降解酶(几丁质酶和蛋白酶)活性初步筛选生防菌株，将几丁质琼脂(CA)培养基(配方为：NH₄H₂PO₄ 1 g，KCl 0.2 g，MgSO₄·7H₂O 0.2 g，几丁质素1 % (w/v)，琼脂 20 g，蒸馏水 1000 mL，pH 7.0，充分溶解，121℃灭菌25 min)、牛奶琼脂培养基(配方为：55 ℃时50 mL 4 %水琼脂与50 mL脱脂牛奶充分振荡均匀)融化后在无菌条件下制成平板，将分离获得的菌株在无菌条件下接种在平板中，每皿对称接种3点，每个菌株重复接种3次，然后置于恒温培养箱(RH 100 %，28 ℃)培养3d，观察菌落周围是否有清晰透明的圆环，有清晰透明圆环的菌株被筛选为潜在的马铃薯甲虫生防细菌。 

将不同龄期的马铃薯甲虫放置于直径为9cm培养皿中，每皿放置同一龄期大小相近及健康的甲虫10头。将上述试验中具有降解酶活性的所有病原菌制成浓度为10⁹个/mL的菌悬液体，均匀喷洒在虫体上，以充分接触为宜，添加新鲜马铃薯叶片，保湿4～6 h，保持温度在25～30℃，每天记录死亡虫体并将存活的甲虫移入另一灭菌培养皿中添加适量的新鲜马铃薯叶片。同一浓度下，初见死亡时间越短，甲虫死亡率最高的为强致病菌株。 

1.4 强致病菌株CPB008的田间杀虫效果：田间实验在新疆农业科学院植物保护研究所试验示范基地马铃薯（品种为紫花白，常规生产管理，没有喷施任何农药，马铃薯长势基本一致）试验地进行。田间试验试虫为1龄和2龄CPB幼虫。将试验田随机划分为不同的小区，每个小区选取马铃薯10株。试验前将每株马铃薯植株人为划分为上、中、下3层，每个植株接虫龄一致的1或2龄幼虫，1 d后幼虫定植，确定各龄幼虫虫口基数为每层15头，每株45头，每个小区用纱网覆盖。将配好的孢子悬浮液分别装于手动喷雾器中，喷于植株和虫体表面，以武汉科隆生物科技有限公司的苏云金芽孢杆菌制剂(32000IU/mg WP)为标准药剂比较对照，以喷清水为不施药对照。每个处理重复3个小区。以后每天定时检查记录马铃薯甲虫的发病和死亡率，连续调查15 d。施药后气温持续在25 ~ 35 ℃，一周内没有降雨。从喷药日起统计，结果显示田间杀虫效果是现有Bt制剂的两倍多。 

1.5病原菌的鉴定：1)形态学观察与鉴定.在LB平板上培养病原菌，适时观察菌落形态、菌落生长36h后进行革兰氏染色。2)生理生化特性试验.根据东秀珠等的方法，共测定了苏云金芽孢杆菌的12种生理生化特性。3)分子生物学鉴定.根据Weisburg建立的技术，提取菌株的基因组DNA，用细菌通用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1541R(5’-AAGGAGGTGATCCAGCC3’)做PCR扩增得到此菌的16S rDNA保守序列(图3)，测序，并将序列登录到NCBI Genbank中；对该序列做Blast分析，同时采用用DNAStar软件分析与在Blast对比中相似度高的芽孢杆菌种类进行比较，确定该芽孢杆菌的分类地位。 

实施例2. 苏云金芽孢杆菌的培养和接种条件试验方案 

2.1 温度试验：将新鲜的菌种（接种培养12～24 h）接种于LB固体培养平板上，温度>37℃的接种于液体培养基中，分别设4℃、20℃、30℃、37℃、41℃、45℃和65℃ 8个温度初步处理，每个处理重复3次，37℃以上的置于水浴中培养。置于预先设定好所需温度的培养箱和恒温水浴槽中培养，并用逐日观察生长情况。选择好温度范围后，进行进一步温度试验，根据初步试验情况，设置不同的处理。由此确定苏云金芽孢杆菌的最适生长温度。

2.2酸碱度实验：实验采用LB液体培养基，共设置11个酸碱度处理。分别用1.0 mol/L的NaOH和HCl溶液将培养基的pH值分别调节到2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0和12.0 (用电子pH计测定)，每个处理重复3次；病菌接种和观测方法同2.1。接菌处理后置于30℃下250rpm摇床培养。由此确定苏云金芽孢杆菌生长的最佳pH值。 

2.3 培养基种类的筛选：实验共比较了6种培养基对苏云金芽孢杆菌菌落生长的影响，除了LB培养基外，另外五种培养基分别是：1）WA培养基：琼脂20g、蒸馏水1000mL；2）PDA培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000mL；3）PSA培养基：马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000mL；4）PPDA培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蛋白胨10g、蒸馏水1000mL；5) PPSA：马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂20g、蛋白胨10g、蒸馏水1000mL。在配制PDA、PSA，先将所需量的马铃薯切碎并放入水中煮烂（约煮沸30分钟），而后过滤除掉残渣并定容至1000ml，最后再加入所需量的化学物质成分，搅拌均匀，分别盛入三角瓶中湿热灭菌后备用。各种培养基的pH值约为6.8-7.0，培养温度30℃。由此确定病菌培养的最佳培养基。 

2.4革兰氏染色：1）试剂：A：溶液Ⅰ：结晶紫20g，95%乙醇20mL；溶液Ⅱ：草酸铵结晶 0.8g、蒸馏水80mL, 溶液Ⅰ和溶液Ⅱ混合成草酸铵结晶紫；B：Lugol碘液(存于有色磨口玻璃瓶中)：碘 1g、碘化钾 2g、蒸馏水 300mL；C：复染剂：番红（2.5%的95%酒精溶液）10mL、蒸馏水100mL；2）染色步骤：①涂片：取一干净载玻片，用特种笔在载玻片的左右两侧注上菌号，并在两端各滴1小滴蒸馏水，以无菌接种环挑取少量菌体涂成很薄的一层水膜，在酒精灯火焰上过2～3次干燥固定；②初染：将载玻片置于水平位置上，在菌体上滴加草酸铵结晶紫液，染色1 min，倾去染液，小流水冲洗至洗出液为无色；③媒染：用新配的Lugol碘液冲去图面上的水，再用Lugol碘液复盖涂面染1 min，水洗；④脱色：手执载玻片倾斜，滴加95%乙醇脱色20～30 S，至洗出液紫色结晶消失时用水冲洗，终止脱色；⑤复染：甩去载玻片上的水，在涂面上滴加番红染液，染色2～3 min，水洗，干燥；⑥镜检：在油镜下检测染色结果。由此确定苏云金芽孢杆菌杆菌的革兰氏性质并测定菌体大小。 

2.5 生理生化特性试验：实验共测定了苏云金芽孢杆菌的12种生理生化特性，他们及其测定方法分别是：1）碳源利用： 

培养基：(NH₄)₂SO₄ 2.0g、NaH₂PO₄·H₂O 0.5g、0.5g 、MgSO₄·7H₂O 0.2g、CaCl₂·2H₂O 0.1g、碳源(共测定了D-葡萄糖、D-蔗糖、D-木糖、甘露醇等四种) 5g、蒸馏水1000mL；

接种与观察：以新鲜的菌种（菌悬液）接种，30℃下培养，生长者为阳性；2）氮源利用：

培养基：KH₂PO₄ 1.36g、Na₂HPO₄ 2.13g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、NaCl2.5g、葡萄糖10.0g、蒸馏水1000mL、氮源（共测定了NH₄H₂PO₄ 和KaNO₃两种）2.5g；

接种与观察：以新鲜的菌种（菌悬液）接种，30℃下培养，生长者为阳性；3)柠檬酸盐利用：

培养基：NaCl 1g、MgSO₄·7H₂O 0.2g、NH₄H₂PO₄ 0.5g、柠檬酸钠 2g、蒸馏水 1000mL、0.04%酚红溶液20mL,接种与观察：以新鲜的菌种（菌悬液）接种，30℃下培养，培养液变为蓝色或桃红色为阳性，否则为阴性。 4)接触酶：

试剂：3%过氧化氢，接种与观察：将24 h培养的斜面菌种，以铂丝接种环取一小环涂抹于已滴有3%过氧化氢的玻片上，如有气泡产生则为阳性，无气泡为阴性；5）糖醇类发酵：

培养基：(NH₄)₂HPO₄ 1.0g、KCl 0.2g、MgSO₄ 0.2g、酵母膏 0.2g、琼脂5.5g、糖或醇类（共测定了D-葡萄糖、D-果糖、D-木糖、甘露醇等四种）10.0g、蒸馏水1000mL、0.04%溴甲酚紫溶液15mL、pH7.0、分装试管，高度约5 cm；

接种与观察：以幼龄斜面培养物穿刺接种于培养基中，适温培养，1,3,5天后观察，指示剂变黄表示产酸为阳性；不变或变蓝（紫）为阴性；6）甲基红（M-R）试验：

培养基：蛋白胨 5g、葡萄糖5g、NaCl 5g、蒸馏水1000mL、pH7.0,分装试管，每管约5 cm高；

试剂：甲基红 0.1g、95%乙醇 300mL、蒸馏水 20mL；

接种与观察：接种试验菌于培养基中，置适温培养2、6 d，在培养液中加入一滴甲基红试剂，红色为甲基红试验阳性反应，黄色为阴性反应；7）V-P测定：

培养基：与甲基红（M-R）试验相同；

试剂：0.3%肌酸、40%NaOH；

接种与观察：接种试验菌于培养基中，置适温培养2、6天，取培养液和40% NaOH等量混合，加少许肌酸，10分钟如培养液出现红色即为阳性反应，不变为阴性； 8）硝酸盐还原：培养基：MgSO₄ 0.5g、NaCl 0.5g、K₂HPO₄ 0.5g、KNO₃ 1g、蔗糖 20g、蒸馏水1000mL、pH7.2；

试剂：Griess试剂（A液：对氨基苯磺酸0.5g、10%稀醋酸150mL；B液：а—萘胺 0.1g、蒸馏水20mL、10%稀醋酸150mL）；二苯胺试剂：0.5g二苯胺溶于100mL浓硫酸中，用20mL蒸馏水稀释；

接种与观察：将测定菌种接种于培养基中，适温培养1，3和5d后将培养液导入干净的空试管中，再各加一滴A液和B液，溶液变为粉红色、玫瑰红色、橙色、棕色等表示硝酸盐还原阳性，若无红色出现，则加1～2滴二苯胺试剂此时呈蓝色表示硝酸盐还原为阴性，若不呈蓝色则为阳性；9）脲酶试验：

培养基：KH₂PO₄ 2g、蛋白胨1g、NaCl 5g、葡萄糖1g、0.2%酚红水溶液6ml、琼脂20g、蒸馏水1000mL,灭菌后调pH6.8～6.9使培养基呈橘黄色或微带粉红色，分装试管，加入20%灭菌尿素溶液，使尿素总浓度为2%，然后摆成较大斜面备用；

接种与观察：将新鲜的斜面培养物接种于斜面上，分别于2、4小时过夜观察，培养基呈桃红色为阳性，培养基颜色不变为阴性；10）吲哚反应：

培养基：1%胰蛋白胨水溶液，pH7.3,分装1/3试管；试剂：对二甲基氨基苯甲醛 8g、95%乙醇 760mL、浓HCl 160mL；

接种与观察：将测定菌种接种于培养基中，适温培养1,2,4,7天，沿管壁缓缓加入3～5厘米高的试剂于培养液表面，在液层界面发生红色则为阳性反应，无颜色变化为阴性，若颜色不明显，则可加4～5滴乙醚，摇动后静止片刻则颜色明显；11）明胶液化：

培养基：蛋白胨5g、葡萄糖20g、明胶200g、蒸馏水1000mL、pH7.3；

接种与观察：将新鲜的斜面培养物接种于培养基表面，适温下培养，分别在5、10、20、30d观察其液化程度，若液化则为阳性，不液化为阴性；12）H₂S产生：

培养基：蛋白胨10g、柠檬酸铁0.5g、蒸馏水1000mL、pH7.2；

接种与观察：将菌种接种于培养基中，适温培养一段时间后产生黑色素则表示有H₂S产生为阳性，无黑色素产生为阴性。以上培养基都在121℃下湿热灭菌25分钟。由此确定苏云金芽孢杆菌的生理生化特性。 

2.6 病菌致病性试验：将活化的菌落用无菌水洗至三角瓶中，充分振荡均匀，并作适当稀释制成孢子悬浮液，其浓度为10⁹个/mL及其以上数量级。将试虫置于直径15cm的灭菌培养皿（培养皿内垫有一层吸水纸，每皿10头）中，用移液枪吸取已配置好的孢子悬浮液均匀喷洒在虫体体壁周围，以充分接触为宜。待虫体体壁较干，吸水纸较干时，添加一定的干净新鲜马铃薯叶片，然后盖上纱布，置于室温中，让其生长。另以灭菌清水喷洒试虫作为对照。每个菌株处理和对照都设置3次重复；田间试验按照1.4进行。由此确定苏云金芽孢杆菌对马铃薯甲虫的致病效果。 

2.7病菌致病性最佳条件：一般影响昆虫病原菌侵染的影子主要有浓度、温度和保湿时间。本发明中设置了5个浓度(3.76×10⁹、0.75×10⁹ L、0.15×10⁹、0.30×10⁸和0.60×10⁷个/mL)，并设置了20～30℃间的5个温度，保湿时间0、2、4、6和8h，每个浓度、温度和保湿时间处理30头马铃薯甲虫1~2龄幼虫。由此分析确定病菌的最适接种发病条件(接种浓度、温度、保湿时间)以及LC₅₀。 

GenBank登录号：JF795483

CPB008 16S rDNA序列：

   

        1 ttgttacgac ttcaccccaa tcatctgtcc caccttaggc ggctggctcc aaaaaggtta

       61 ccccaccgac ttcgggtgtt acaaactctc gtggtgtgac gggcggtgtg tacaaggccc

      121 gggaacgtat tcaccgcggc atgctgatcc gcgattacta gcgattccag cttcatgtag

      181 gcgagttgca gcctacaatc cgaactgaga acggttttat gagattagct ccacctcgcg

      241 gtcttgcagc tctttgtacc gtccattgta gcacgtgtgt agcccaggtc ataaggggca

      301 tgatgatttg acgtcatccc caccttcctc cggtttgtca ccggcagtca ccttagagtg

      361 cccaacttaa tgatggcaac taagatcaag ggttgcgctc gttgcgggac ttaacccaac

      421 atctcacgac acgagctgac gacaaccatg caccacctgt cactctgctc ccgaaggaga

      481 agccctatct ctagggtttt cagaggatgt caagacctgg taaggttctt cgcgttgctt

      541 cgaattaaac cacatgctcc accgcttgtg cgggcccccg tcaattcctt tgagtttcag

      601 ccttgcggcc gtactcccca ggcggagtgc ttaatgcgtt aacttcagca ctaaagggcg

      661 gaaaccctct aacacttagc actcatcgtt tacggcgtgg actaccaggg tatctaatcc

      721 tgtttgctcc ccacgctttc gcgcctcagt gtcagttaca gaccagaaag tcgccttcgc

      781 cactggtgtt cctccatatc tctacgcatt tcaccgctac acatggaatt ccactttcct

      841 cttctgcact caagtctccc agtttccaat gaccctccac ggttgagccg tgggctttca

      901 catcagactt aagaaaccac ctgcgcgcgc tttacgccca ataattccgg ataacgcttg

      961 ccacctacgt attaccgcgg ctgctggcac gtagttagcc gtggctttct ggttaggtac

     1021 cgtcaaggtg ccagcttatt caactagcac ttgttcttcc ctaacaacag agttttacga

     1081 cccgaaagca ttcatcactc acgcggcgtt gctccgtcag actttcgtcc attggcggaa

     1141 gaattcccta ctg

Claims (1)

1.一株用于防治马铃薯甲虫的苏云金芽孢杆菌(B. thuringiensis)，其特征在于，菌株为CPB008，该菌株的保藏号为CGMCC  NO.4424。

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