一种忍冬硫酸酯皂苷及其制备方法和用途
一、技术领域:
本发明涉及天然药物化学领域,公开了从灰毡毛忍冬花蕾中提取分离的一种新忍冬硫酸酯皂苷类化合物,以及该化合物的制备方法和在医药领域中的用途,尤其在制备治疗自身免疫性肝损伤药物的用途。
二、技术背景:
灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.)为忍冬科忍冬属植物,具有清热解毒、抗菌消炎的功效,在中医临床及民间广泛应用于痈肿疔疮,喉痹,丹毒,热毒血痢,风热感冒,温热发病等疾病的治疗。2005年版《中国药典》收载,将其与红腺忍冬、华南忍冬一同列入山银花项下。江苏省中国科学院植物研究所在对灰毡毛忍冬花蕾中皂苷类成分的研究过程中,得到一种新的硫酸酯皂苷类化合物,命名为Lonimacranthoide V,具有很好的保护肝损伤的作用。Lonimacranthoide V以30mg/kg的剂量能降低ConA诱导小鼠免疫性肝损伤的ALT、AST的升高,降低小鼠血浆TNF-α的水平,Lonimacranthoide V40μmol/L这个浓度可以显著减少ConA诱导体外脾淋巴细胞的增殖。由此,Lonimacranthoide V有望开发成一类新的治疗自身免疫性肝损伤的药物。
自身免疫性肝炎(autoinmune hepatitis,AIH)是近年来新确定的疾病之一,多与其它自身免疫性疾病相伴,该病在欧美国家有较高的发病率,如美国该病占慢性肝病的10%~15%,目前我国对于该病的报道也逐渐增多。该病多见于女性患者,主要表现为血清转氨酶升高、高丙种球蛋白血症、自身免疫性抗体阳性、肝脏慢性纤维化组织学改变等,组织学检查以界面性肝炎为其特征性表现。根据临床表现、生化、影像学和组织病理学特点可简单分为以肝炎为主型,即AIH,以及以胆系损害及胆汁郁积为主型,即原发性胆汁性肝硬化(primary biliarycirrhosis,PBC)和原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)。此外,还有这3种疾病中任意两者之间的重叠综合征。AIH能自行缓解者罕见。免疫抑制剂是治疗AIH首选药物,最常用的免疫抑制剂为糖皮质激素(泼尼松或泼尼松龙),可单独应用也可与硫唑嘌呤联合应用。虽然多数患者对免疫抑制剂反应较好,但长期应用有一定的不良反应,且停药后复发率高达80%以上。中药在治疗AIH取得了一定成果。有研究发现将免疫抑制的中药单体与具有诱导口服耐受作用的自身抗原联结,通过既能抑制已产生的自身免疫反应,又能从根本上纠正免疫耐受缺失的病理机制,达到不仅在于偶联制剂对于AIH的治疗。此外,三七总皂苷、双氢青蒿素等中药单体对小鼠实验性免疫肝损伤都有保护作用。
刀豆蛋白(concanavalin,ConA)是植物凝集素,有促有丝分裂作用,与鼠肝细胞表面的 糖蛋白或膜糖脂结合改变细胞表面的抗原结构,诱发免疫病理。ConA作为有丝分裂原刺激T淋巴细胞表达多种细胞因子TNF2α、IFN2γ、IL22介导肝损伤,损伤有肝特异性和剂量依赖性。ConA诱导T淋巴细胞依赖性肝损伤病理与人类自身免疫性肝病,急、慢性病毒性肝炎相似,并能被免疫抑制剂所缓解。
三、发明内容:
本发明公开了一种硫酸酯皂苷类化合物,简称Lonimacranthoide V,分子式为:C65H106O35S,分子量:1478,
化学名为:3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranosyl hederagenin28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-[4-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl]ester。
化学结构式为:
上述化合物的制备方法,其特征在于以灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoidesHand.-Mazz.)花蕾为原料,经水、甲醇、乙醇、甲醇-水混合溶液或乙醇-水混合溶液提取;水提取液直接过大孔树脂吸附,甲醇、乙醇、甲醇-水混合溶液或乙醇-水混合溶液的提取液浓缩后加水溶解过大孔树脂吸附;大孔树脂吸附物经柱层析分离而得。其中,大孔树脂包括D101、AB-8或HP-20;柱层析用担体选自硅胶、凝胶和反相硅胶中的一种或几种制得。
本发明的新硫酸酯皂苷Lonimacranthoide V与医学上可接受的药用辅料组成药物组合物及其制剂。如洗剂、软膏剂和凝胶剂。
本发明提供了新硫酸酯皂苷Lonimacranthoide V制备治疗自身免疫性肝炎药物的用途。Lonimacranthoide V 20、30mg/kg的剂量能降低ConA诱导小鼠免疫性肝损伤的ALT、AST的升高,30mg/kg能降低小鼠血浆TNF-α的水平;Lonimacranthoide V40μmol/L这个 浓度可以显著减少ConA诱导体外脾淋巴细胞的增殖。
四、附图说明:
以下图可作为附件材料上报。
图1、Lonimacranthoide V的结构式
图2、Lonimacranthoide V的主要HMBC相关关系
图3、Lonimacranthoide V的HR-ESI-MS谱
图4、Lonimacranthoide V的1H-NMR谱
图5、Lonimacranthoide V的13C-NMR谱
图6、Lonimacranthoide V的HSQC谱
图7、Lommacranthoide V的HMBC谱
五、具体实施方式:
结合具体实施方式对本发明作进一步说明,但本发明的内容并不仅仅限于所列举的实施方式。
实施例1.从灰毡毛忍冬中分离和鉴定化合物Lonimacranthoide V
将灰毡毛忍冬干燥花蕾10kg,用100kg95%(体积比)乙醇-水溶液回流提取3次,每次2小时,浓缩至无醇味得浸膏(干重1.7kg);所得浸膏加10倍体积的水溶解,滤纸过滤除去水不溶物,滤液用大孔树脂HP-20进行吸附,再以水,20%,70%乙醇溶液洗脱,合并70%乙醇溶液洗脱液,浓缩得灰毡毛忍冬总皂苷860g。所得灰毡毛忍冬总皂苷进行硅胶柱层析,洗脱剂依次为氯仿-甲醇-水(17∶3∶0.2→4∶1∶0.1→7∶3∶0.5→3∶3∶0.5)、甲醇;其中氯仿-甲醇-水(3∶3∶0.5)部分进行反复反相硅胶C-18柱层析(洗脱剂为40%乙醇-水溶液)分离及凝胶Sephdex LH-20柱层析纯化(洗脱剂为35%乙醇-水溶液)得到化合物Lonimacranthoide V 1.1g,得率为0.011%,纯度为97.79%(HPLC面积归一化法)。
化合物Lonimacranthoide V的鉴定,白色粉末,TLC香草醛-浓硫酸试液加热显紫红色,放置后变蓝。Molish反应和Liebermann-Burchard反应阳性。难溶于氯仿,易溶于水,水-甲醇混合溶液。以上信息提示该化合物为皂苷类化合物。由HR-ESI-MS:[M-H]-at m/z1477.6146(calculated m/z 1477.6157)(见附图3)以及DEPT谱确定其分子式为C65H106O35S,分子量1478。由1H、13C-NMR谱(C5D5N)(见附图4、5)以及完全酸水解后co-TLC实验结果表明其皂苷元为常春藤皂苷元。13C-NMR:C-3(δ81.1)和C-28(δ176.5)表明该化合物在C-3、28位都接有糖链。1H-NMR谱及HMQC谱(见附图6)中六个糖端基信号:δ4.88(1H,d,J=7.0Hz),4.99(1H,d,J=7.7Hz),5.00(1H,d,J=7.7Hz),5.38(1H,d,J=7.1Hz),6.22(1H,d,J=8.1Hz),and 6.24(1H,br s);以及13C-NMR:δ95.7,101.5,104.9,105.3,105.3和106.7显示化合物在C-28与C-3位上共有六个糖取代。糖的种类和比例由GC和2D-NMR确定为L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖(1∶1∶4)。糖链的连接顺序由HMBC谱(见附图2、7)确定:由Glc II的H-1(δ5.00)与Glc I的C-4(δ81.1)相关,Glc I的H-1(δ5.38)与Rha的C-3(δ83.4)相关,Rha的H-1(δ6.24)与Ara的C-2(δ75.2)相关,Ara的H-1(δ4.88)与苷元的C-3(δ81.1)相关,确定C-3的糖链3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranosyl;由Glc II′的H-1(δ4.99)与Glc I′的C-6(δ69.4)相关,Glc I′的H-1(δ6.22)与C-28(δ176.5)相关,确定C-28的糖链28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl。以上推断说明Lonimacranthoide V与灰毡毛忍冬皂苷乙(macranthoidin B)结构近似,但由Lonimacranthoide V的分子式C65H106O35S以及IR(KBr)νmaxcm-1:1230(sulfate S=O),1220(sulfate S=O),可知Lonimacranthoide V比macranthoidin B多一个磺酰基。根据HR-ESI-MS谱中的碎片:1315.5608([M-H-Glc]-),1153.5124([M-H-2Glc]-),1073.5493([M-H-2Glc-SO3]-),1007.4507([M-H-2Glc-Rha]-)和875.3826([M-H-2Glc-Rha-Ara]-),推断磺酰基应接在C-28的糖链28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl上。进一步比较Lonimacranthoide V和macranthoidin B的13C-NMR,发现Glc II′的C-3,C-4,C-5得化学位移值分别-2.8,+6.8,and-2.0ppm,由此确定磺酰基接在Glc II′的4位。综合各数据及与文献对比鉴定化合物Lonimacranthoide V为:3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranosyl hederagenin 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-[4-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl]ester。经CA网络版检索为新化合物。
HPLC法测定Lonimacranthoide V的纯度,色谱条件为:色谱柱C18(Agilent Eclipse XDB-C18,4.6×250mm,5μm);柱温:35℃;流动相:甲醇-水(含0.1%磷酸)(45:55)溶液洗脱;流速:1.0mL/min;进样量5μl;ELSD检测器;理论塔板数按Lonimacranthoide V峰计算应不低于1000。Lonimacranthoide V的保留时间为6.35min,按面积归一化法计算产物的纯度为97.79%。
实施例2、用水提法从灰毡毛忍冬中制备Lonimacranthoide V
灰毡毛忍冬干燥花蕾1kg,用水加热提取三次,水用量为10升,提取时间为2小时,提取温度为60℃,提取液经大孔树脂D101吸附,再用水,15%,75%乙醇洗脱,75%乙醇洗脱液减压回收溶剂得灰毡毛忍冬总皂苷87g。所得灰毡毛忍冬总皂苷进行硅胶柱层
Table 1
1H(500M Hz)and13C NMR(125M Hz)spectral data for Lonimacranthoide V in pyridine-d5
析,流动相依次为氯仿-甲醇-水(17∶3∶0.2→4∶1∶0.1→7∶3∶0.5→3∶3∶0.5)、甲醇;其中氯仿-甲醇-水(3∶3∶0.5)进行反复反相硅胶C-8柱层析(洗脱剂为30%乙醇-水溶液)分离及凝胶柱Sephdex LH-20层析纯化(洗脱剂为35%乙醇-水溶液)得到化合物Lonimacranthoide V 0.15克,得率为0.015%,纯度为96%(外标法)。本实施例中所得产物的鉴定及纯度检查,是以实施例1所得Lonimacranthoide V为对照品采用HPLC法检测计算得到。HPLC测定方法的色谱条件为:色谱柱C18(Agilent Eclipse XDB-C18,4.6×250mm,5μm);柱温:35℃;流动相:甲醇-水(含0.1%磷酸)(45∶55)溶液洗脱;流速:1.0mL/min;进样量5μl;ELSD检测器;理论塔板数按Lonimacranthoide V峰计算应不低于1000。Lonimacranthoide V的保留时间为6.35min。
实施例3、用甲醇冷浸提取法从灰毡毛忍冬中制备Lonimacranthoide V
灰毡毛忍冬干燥花蕾1Kg,用甲醇冷浸提取三次,甲醇用量为20升,提取时间为20天,提取温度为室温,提取液浓缩至无醇味得浸膏(干重为120g);所得浸膏加10倍体积的水溶解,滤纸过滤除去水不溶物,滤液用大孔树脂AB-8进行吸附,再以水,10%,80%乙醇溶液洗脱,合并80%乙醇溶液洗脱液,浓缩得灰毡毛忍冬总皂苷81g。所得灰毡毛忍冬总皂苷再经柱层析(硅胶柱层析:氯仿-甲醇-水梯度洗脱系统,RP-C18柱层析:水-甲醇系统,凝胶柱层析:水-甲醇系统)分离后,得到化合物Lonimacranthoide V 0.18克,得率为0.018%,纯度为98%(外标法)。本实施例中所得产物的鉴定及纯度检查,是以实施例1所得Lonimacranthoide V为对照品采用HPLC法检测计算得到。HPLC测定方法的色谱条件为:色谱柱C18(Agilent Eclipse XDB-C18,4.6×250mm,5μm);柱温:35℃;流动相:甲醇-水(含0.1%磷酸)(45∶55)溶液洗脱;流速:1.0mL/min;进样量5μl;ELSD检测器;理论塔板数按Lonimacranthoide V峰计算应不低于1000。Lonimacranthoide V的保留时间为6.37min。
实施例4、用甲醇加热回流提取法从灰毡毛忍冬中制备Lonimacranthoide V
灰毡毛忍冬干燥花蕾1kg,用8kg甲醇回流提取3次,每次2小时,提取液浓缩至无醇味得浸膏(干重为150g);所得浸膏加10倍体积的水溶解,滤纸过滤除去水不溶物,滤液用大孔树脂D101进行吸附,再以水,10%,75%乙醇溶液洗脱,合并75%乙醇溶液洗脱液,浓缩得灰毡毛忍冬总皂苷89g。所得灰毡毛忍冬总皂苷再经柱层析(硅胶柱层析:氯仿-甲醇-水梯度洗脱系统,RP-C18柱层析:水-甲醇系统,凝胶柱层析:水-甲醇系统)分离后,得到化合物Lonimacranthoide V 0.17克,得率为0.017%,纯度为97%(外标法)。本实施例中所得产物的鉴定及纯度检查,是以实施例1所得Lonimacranthoide V为对照品采用HPLC法检测计算得到。HPLC测定方法的色谱条件为:色谱柱C18(Agilent EclipseXDB-C18,4.6×250mm,5μm);柱温:35℃;流动相:甲醇-水(含0.1%磷酸)(45∶55)溶液洗脱;流速:1.0mL/min;进样量5μl;ELSD检测器;理论塔板数按Lonimacranthoide V峰计算应不低于1000。Lonimacranthoide V的保留时间为6.35min。
实施例5、用高浓度的甲醇-水混合溶液提取法从灰毡毛忍冬中制备Lonimacranthoide V
灰毡毛忍冬干燥花蕾1kg,用10kg 95%(体积比)甲醇-水的混合溶液回流提取3次,每次2小时,提取液浓缩至无醇味得浸膏(干重为170g);所得浸膏加9倍体积的水溶解,滤纸过滤除去水不溶物,滤液用大孔树脂HP-20进行吸附,再以水,10%,75%乙醇溶液洗脱,合并75%乙醇溶液洗脱液,浓缩得灰毡毛忍冬总皂苷78g。所得灰毡毛忍冬总皂苷再经柱层析(硅胶柱层析:氯仿-甲醇-水梯度洗脱系统,RP-C8柱层析:水-甲醇系统,凝胶柱层析:水-甲醇系统)分离后,得到化合物Lonimacranthoide V 0.16克,得率 为0.016%,纯度为97%(外标法)。本实施例中所得产物的鉴定及纯度检查,是以实施例1所得Lonimacranthoide V为对照品采用HPLC法检测计算得到。HPLC测定方法的色谱条件为:色谱柱C18(Agilent Eclipse XDB-C18,4.6×250mm,5μm);柱温:35℃;流动相:甲醇-水(含0.1%磷酸)(45∶55)溶液洗脱;流速:1.0mL/min;进样量5μl;ELSD检测器;理论塔板数按Lonimacranthoide V峰计算应不低于1000。Lonimacranthoide V的保留时间为6.37min。
实施例6、用低浓度的甲醇-水混合溶液提取法从灰毡毛忍冬中制备Lonimacranthoide V
灰毡毛忍冬干燥花蕾1kg,用8kg 40%(体积比)甲醇-水的混合溶液回流提取3次,每次2小时,提取液浓缩至无醇味得浸膏(干重为180g);所得浸膏加4倍体积的水溶解,滤纸过滤除去水不溶物,滤液用大孔树脂HP-20进行吸附,再以水,10%,75%乙醇溶液洗脱,合并75%乙醇溶液洗脱液,浓缩得灰毡毛忍冬总皂苷79g。所得灰毡毛忍冬总皂苷再经柱层析(硅胶柱层析:氯仿-甲醇-水梯度洗脱系统,RP-C18柱层析:水-甲醇系统,凝胶柱层析:水-甲醇系统)分离后,得到化合物Lonimacranthoide V 0.19克,得率为0.019%,纯度为98%(外标法)。本实施例中所得产物的鉴定及纯度检查,是以实施例1所得Lonimacranthoide V为对照品采用HPLC法检测计算得到。HPLC测定方法的色谱条件为:色谱柱C18(Agilent Eclipse XDB-C18,4.6×250mm,5μm);柱温:35℃;流动相:甲醇-水(含0.1%磷酸)(45∶55)溶液洗脱;流速:1.0mL/min;进样量5μl;ELSD检测器;理论塔板数按Lonimacranthoide V峰计算应不低于1000。Lonimacranthoide V的保留时间为6.86min。
实施例7、用乙醇冷浸提取法从灰毡毛忍冬中制备Lonimacranthoide V
灰毡毛忍冬干燥花蕾1kg,用乙醇冷浸提取三次,乙醇用量为20升,提取时间为20天,提取温度为室温,提取液浓缩至无醇味得浸膏(干重为110g);所得浸膏加10倍体积的水溶解,滤纸过滤除去水不溶物,滤液用大孔树脂D-101进行吸附,再以水,10%,75%乙醇溶液洗脱,合并75%乙醇溶液洗脱液,浓缩得灰毡毛忍冬总皂苷75g。所得灰毡毛忍冬总皂苷再经柱层析(硅胶柱层析:氯仿-甲醇-水梯度洗脱系统,RP-C18柱层析:水-甲醇系统,凝胶柱层析:水-甲醇系统)分离后,得到化合物Lonimacranthoide V 0.17克,得率为0.017%,纯度为98%(外标法)。本实施例中所得产物的鉴定及纯度检查,是以实施例1所得Lonimacranthoide V为对照品采用HPLC法检测计算得到。HPLC测定方法的色谱条件为:色谱柱C18(Agilent Eclipse XDB-C18,4.6×250mm,5μm);柱温:35℃;流动相:甲醇-水(含0.1%磷酸)(45∶55)溶液洗脱;流速:1.0mL/min;进样量5μl;ELSD检测器;理论塔板数按Lonimacranthoide V峰计算应不低于1000。Lonimacranthoide V的保留 时间为6.86min。
实施例8、用低浓度的乙醇-水混合溶液提取法从灰毡毛忍冬中制备Lonimacranthoide V
灰毡毛忍冬干燥花蕾1kg,用10kg 30%(体积比)乙醇-水的混合溶液回流提取3次,每次2小时,提取液浓缩至无醇味得浸膏(干重约为170g);所得浸膏加4倍体积的水溶解,滤纸过滤除去水不溶物,滤液用大孔树脂HP-20进行吸附,再以水,10%,75%乙醇溶液洗脱,合并75%乙醇溶液洗脱液,浓缩得灰毡毛忍冬总皂苷82g。所得灰毡毛忍冬总皂苷再经柱层析(硅胶柱层析:氯仿-甲醇-水梯度洗脱系统,RP-C18柱层析:水-甲醇系统,凝胶柱层析:水-甲醇系统)分离后,得到化合物Lonimacranthoide V 0.13克,得率为0.013%,纯度为97%(外标法)。本实施例中所得产物的鉴定及纯度检查,是以实施例1所得Lonimacranthoide V为对照品采用HPLC法检测计算得到。HPLC测定方法的色谱条件为:色谱柱C18(Agilent Eclipse XDB-C18,4.6×250mm,5μm);柱温:35℃;流动相:甲醇-水(含0.1%磷酸)(45∶55)溶液洗脱;流速:1.0mL/min;进样量5μl;ELSD检测器;理论塔板数按Lonimacranthoide V峰计算应不低于1000。Lonimacranthoide V的保留时间为6.87min。
实施例9、化合物Lonimacranthoide V对刀豆蛋白(ConA)诱导的小鼠肝损伤的保护作用
取ICR小鼠72只,随机分成正常对照组、模型组(ConA)、Lonimacranthoide V10、20和30mg/kg三个剂量组和地塞米松组(40mg/kg dexamethasone,Dex)。正常组、模型组给予相当量生理盐水。除正常对照组,各组给药后0.5h尾静脉注射ConA 15mg/kg,8h候后眼眶取血。
血清ALT、AST、TNF-α的测定将小鼠眼眶血室温放置30min,3000r/min离心10min,取上清。采用改良赖式法ALT、AST试剂盒,按操作说明在520nm处测定吸光度;采用ELISA试剂盒,以正常对照组调零,按操作说明在450nm测定吸光度。
MTT法测定Lonimacranthoide V对ConA诱导淋巴细胞增殖的影响常规制备小鼠脾淋巴细胞,加入96孔板,每孔1×106个。正常对照组设5个复孔、模型组12复孔,4个Lonimacranthoide V给药组每组6复孔。给药组分别加入终浓度为2.5、10、20和40μmol/L的Lonimacranthoide V,培养4h;除正常组,各组再加入ConA 4mg/L,正常对照组以培养液补齐,37℃,5%CO2孵箱中培养24h。细胞培养结束前4h,各孔加入1g/LMTT 50μl,培养结束后2000r/min离心15min,弃上清,加入DMSO 100μl溶解甲臢颗粒。酶联免疫仪测定540nm处OD值。相对增殖率/%=(实验组A均值/模型组A均值)×100%。
表2化合物Lonimacranthoide V对ConA诱导小鼠肝损伤模型中转氨酶的影响(
n=12)
#P<0.05与正常组比较。*P<0.05与ConA组比较
结果显示:化合物Lonimacranthoide V能降低ConA诱导的ALT、AST的升高,其中30mg/kg组与ConA组有显著差异(P<0.05)。
表3化合物Lonimacranthoide V对ConA诱导小鼠肝损伤模型中血清TNF-α浓度的影响(
n=12)
#P<0.05与正常组比较。*P<0.05与ConA组比较
结果显示:化合物Lonimacranthoide V能降低ConA诱导小鼠肝损伤血浆TNF-α的水平,其中20、30mg/kg组与ConA组有显著差异(P<0.05)。
表4化合物Lonimacranthoide V对ConA诱导的体外脾淋巴细胞增殖的影响
#P<0.05与正常组比较。*P<0.05与ConA组比较
结果显示:化合物Lonimacranthoide V 40μmol/L这个浓度可以显著减少ConA诱导体外脾淋巴细胞的增殖(P<0.05)。
实施例10、含本发明新皂苷单体Lonimacranthoide V的片剂
取实施例1制得的Lonimacranthoide V10g与微晶纤维素50g及糊精5g混合,用适量30%乙醇做湿润剂,制成软材,常规方法制粒,加入适量硬脂酸镁混合,制成片剂。本片剂中每片含LonimacranthoideV 50mg。
实施例11、含本发明新皂苷单体Lonimacranthoide V的胶囊剂
取Lonimacranthoide V 5g与淀粉7g,糊精10g,糖粉10g混合,用适量30%乙醇做湿润剂,制成软材,常规方法制粒,装入硬胶囊中。本胶囊剂中每粒含Lonimacranthoide V70mg。
实施例12、含本发明新皂苷单体Lonimacranthoide V的注射剂
取Lonimacranthoide V 5g以普通注射剂制备方法,用10000ml 60℃注射用蒸馏水溶解,用NaCl调节等张,封入安瓶。本注射剂10ml含Lonimacranthoide V 5mg。