CN102391148A

CN102391148A - 一种高纯度替加环素的合成方法

Info

Publication number: CN102391148A
Application number: CN2011103241311A
Authority: CN
Inventors: 赵俊; 宗在伟; 杨建楠
Original assignee: Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nanjing Hairun Pharmaceutical Co. Ltd.
Priority date: 2011-10-24
Filing date: 2011-10-24
Publication date: 2012-03-28
Anticipated expiration: 2031-10-24
Also published as: CN102391148B

Abstract

本发明涉及抗生素药物替加环素（tigecycline）的制备新方法，以9-氨基米诺环素和N-叔丁基甘氨酸为起始原料，其特征在于：N-叔丁基甘氨酸溶于惰性溶剂中，在酸性接受体和氨基酸缩合剂存在下，与9-氨基米诺环素以氨基酸缩合的路线反应3～10h，冷却至室温。通过酸化、中和、萃取、干燥、浓缩、精制得到替加环素。本发明的制备方法简化了操作，所制得的产品纯度达99.5%以上，单杂控制在0.1%以下，差向异构体控制在0.5%以下；收率高，产品稳定性好，适合工业化生产。

Description

一种高纯度替加环素的合成方法

技术领域

本发明涉及抗生素药物替加环素的制备方法，属于药物化学技术领域。

背景技术

替加环素（tigecycline）化学名（4S,4aS,5aR,12aS）-4,7-双（二甲氨基）-9-[（叔丁基氨基）乙酰胺基]-3,10,12,12a-四羟基-1,11-二氧代-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-八氢并四苯-2-甲酰胺，是首个被批准用于临床的静脉内给药的甘氨酰环素类抗生素，其结构与四环素类药物相似，2005年6月美国FDA批准其用于成人复杂皮肤及软组织感染和成人复杂的腹内感染。替加环素结构式为：

Figure 2011103241311100002DEST_PATH_IMAGE002

尽管替加环素与米诺环素在结构上有许多相似之处，但前者在抗菌谱范围以及耐药菌产生等方面要明显优于传统四环素类药物，有广谱抗微生物活性，用于治疗由革兰阴性或阳性病原体、厌氧性生物及耐甲氧西林金葡菌（MRSA）和甲氧西林敏感金葡菌（MSSA）导致的复杂性腹腔内感染（cIAI）和复杂性皮肤和皮肤结构感染（cSSSI）。替加环素是一种新的、可在治疗初期当病因尚未明了时供选择的广谱抗生素，并且不需要根据肾功能受损情况调整剂量。

关于替加环素的制备，主要有以下几篇文献报道。

专利CN101228114A报道，以9-氨基米诺环素为原料，与氯乙酸酐反应得中间体9-氯乙酰氨基米诺环素，再与叔丁胺反应生成替加环素。该路线相对较长，容易产生杂质，单元操作比较复杂、不适合工业化生产。合成路线如下：

Figure 2011103241311100002DEST_PATH_IMAGE004

文献(Bioorg. Med. Chem. Lett., 9(1999),1459～1462)报道了类似的路线，以米诺环素经硝化、酰化、缩合制得替加环素；得到9-氨基米诺环素后，与卤乙酰卤（氯乙酰氯、溴乙酰溴）进行酰氨化得中间体9-氯乙酰氨基米诺环素，再与叔丁胺反应生成替加环素。此路线只是在酰胺化过程使用卤乙酰卤替代上面的氯乙酸酐，同样存在路线长，贵重原料9-氨基米诺环素损耗大，反应体系复杂，副产物多，后处理及产品精制难度大，不适合工业化。路线如下：

Figure 2011103241311100002DEST_PATH_IMAGE006

在WO2006130500A2中，先由叔丁胺与溴乙酸叔丁酯反应生成N-叔丁基甘氨酸，再通过酰氯化反应得到N-叔丁基甘氨酸酰氯盐酸盐，最后与9-氨基米诺环素进行缩和反应生成替加环素。此路线中，N-叔丁基甘氨酸酰化过程中，不是一个均相反应，需要补加大量氯化亚砜和延长反应时间；同时由于高温酰化产生大量的酸性气体和腐蚀性废液对环境以及工作人员有较大危害。路线如下：

Figure 2011103241311100002DEST_PATH_IMAGE008

另外，三条路线有一共同缺点是中间体或粗品质量难以控制，产品纯度需要多次精制才能勉强达到99%，但要在此基础上继续提高其纯度非常困难，尤其是需将单一杂质控制在0.1%以下是无法达到的，难以满足注射剂原料的质量要求，同样达不到欧盟质量研究技术指导原则ICH的相关技术要求。若使用杂质较高的原料药制成注射剂，势必会给患者带来较高的不良反应。

发明内容

针对已有文献报道的抗生素药物替加环素制备方法的不足，本发明旨在提供一种替加环素的制备方法，该制备方法合成路线短、原料易得、单元操作简单，从而使反应能够有效地进行，收率高，在精制过程中加入一定量乳糖，有效抑制替加环素的降解，替加环素成品单杂＜0.1%，差向异构体＜0.5%，纯度＞99.5%，能够应用于工业化生产。

本发明所述的替加环素的制备方法为：

（1）替加环素粗品制备

以9-氨基米诺环素和N-叔丁基甘氨酸为起始原料，在惰性气体保护下，酸性接受体存在9-氨基米诺环素与N-叔丁基甘氨酸于惰性溶剂中，在氨基酸缩合剂作用下，进行氨基酸缩合反应；反应完全后用盐酸调节pH3.0～4.5，氨水调节pH7.0～7.5，二氯甲烷/甲醇混合溶剂萃取，干燥，浓缩得替加环素粗品；

（2）替加环素的纯化

将（1）所得粗品溶于丙酮，于38～45℃下，缓慢加入含质量浓度为0.5～5%乳糖的甲醇溶液，脱色，过滤，滤液加入同体积的甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得精制品。

酸与胺的缩合反应广泛地应用于肽合成，随着反应活性高、区域选择性强、产物消旋更小的新型多肽缩合剂的开发和应用，许多空间位阻大，活性低的胺和酸也能在合适的催化条件下发生缩合反应，并且反应速率快，收率高。实验中发现，9-氨基米诺环素与N-叔丁基甘氨酸可以在合适的催化剂存在下，发生酸与胺的缩合反应。本发明中缩合剂为1-羟基-7-偶氮苯并三唑（HOAt）、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳化二胺基盐酸盐（EDC·HCl），N,N'-羰基二咪唑（CDI）、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU）、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯（TBTU）、N-羟基丁二酰亚胺（HOSu）、S-(1-氧-2-吡啶)-巯基-1,3-二甲基丙基脲四氟硼酸酯（TPTDP）、双（2-氧代-3-恶唑烷基）次磷酰氯(BOP-Cl)或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷（PyBOP的任一种或其组合。

酸与胺的缩合过程中，除缩合剂外，一般需要提供酸性接受体（碱），以便形成活性中间态，提高催化效率。本发明中酸性接受体为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)的一种或其组合。

本发明中，反应溶剂为反应溶剂为N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、N,N-二甲基乙酰胺（DMA）、二氯甲烷的一种或组合。

本发明中9-氨基米诺环素与N-叔丁基甘氨酸以9-氨基米诺环素：N-叔丁基甘氨酸=1:1～1:3的摩尔比缩合反应得到替加环素。

本发明中反应温度为10～40℃，反应温度可由本领域专业技术人员经实验确定。

为了提高催化效率，反应过程中，可以先用溶剂溶解N-叔丁基甘氨酸,再加入溶剂溶解的缩合剂和酸性接受体，反应一段时间后，再加入9-氨基米诺环素进行反应。

本发明中9-氨基米诺环素与缩合剂以及酸接受体的摩尔比为1：1：1～1：3：3。

本发明替加环素精制过程中，粗品于38～45℃温度下溶于一定量丙酮中；向清液中缓慢加入的与丙酮等量的甲醇(含质量浓度0.5～5%乳糖)，再加入5～10%粗品重量的活性炭脱色15min，过滤，滤液中缓慢滴加与丙酮等量的甲醇，于20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得替加环素精制品。所述粗品与丙酮的投料比优选1：8-10（g/mL）。

采用本发明制备的替加环素化学纯度达到99%以上，HPLC检测光学纯度均在99%以上，单杂<0.1%，C-4差向异构体<0.5%。所得替加环素经核磁氢谱、质谱以及元素分析确认，符合式（Ⅰ）结构。

本发明所使用的起始原料9-氨基米诺环素和N-叔丁基甘氨酸均可依据早期公知技术制备，也可通过市场商业渠道获得。

具体实施方式

下面通过实施例来进一步说明本发明。应该正确理解的是：本发明的实施例中的方法仅仅是用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要求保护的范围。

实施例1 替加环素的制备

在500ml的三口瓶中加入N-叔丁基甘氨酸4.2g（0.025mol），加入二氯甲烷126ml，搅拌下加入缩合剂HOAt（4.1g,0.03mol），三乙胺（7.6g，0.075mol），30分钟后，加入9-氨基米诺环素（12.7g，0.025mol），于35～40℃搅拌反应3h。HPLC监控反应液中9-氨基米诺环素含量小于1.0%（面积归一），用1mol/L盐酸溶液调节反应液pH3.0～4.5，分出有机层，氨水调节pH7.0～7.5，水相二氯甲烷/甲醇混合溶剂（250ml*3）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到替加环素粗品8.2g。

所得粗品溶于82ml丙酮中，于38～45℃下，缓慢加入82ml含2%乳糖的甲醇溶液，加入活性炭0.8g脱色15min，过滤，滤液加入82ml甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得橙色替加环素7.4g（90.2%）。化学纯度99.7%，C-4差向异构体0.3%，比旋度：-208°。

HPLC条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为4.35g磷酸氢二钾和0.93g乙二胺四乙酸二钠溶解于950ml水中，加三乙胺5ml，用磷酸调节pH值为6.4后，加乙腈50ml，混合，过滤。流动相B为4.35g磷酸氢二钾和0.93g乙二胺四乙酸二钠溶解于500ml水中，加三乙胺5ml，用磷酸调节pH值为6.4后，加乙腈500ml，混合，过滤。梯度洗脱。检测波长为248nm。

元素分析：Calcd（C29H39N5O8）：C, 59.47; H, 6.71; N, 11.96。Found（C29H39N5O8）：C, 59.43; H, 6.81; N, 11.90。

ESI-MS：585.63，符合替加环素分子量（585）.核磁氢谱与替加环素结构一致。

实施例2 替加环素的制备

在500ml的三口瓶中加入N-叔丁基甘氨酸6.3g（0.038mol），加入二氯甲烷150ml，搅拌下加入缩合剂CDI（9.2g,0.057mol），N,N-二异丙基乙胺（14.7g，0.114mol），20分钟后，加入9-氨基米诺环素（19.3g，0.038mol），于10℃搅拌反应6h。HPLC监控反应液中9-氨基米诺环素含量小于1.0%（面积归一），用1mol/L盐酸溶液调节反应液pH3.0～4.5，分出有机层，氨水调节pH7.0～7.5，水相二氯甲烷/甲醇混合溶剂（250ml*3）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到替加环素粗品10.1g。

所得粗品溶于100ml丙酮中，于38～45℃下，缓慢加入100ml含2%乳糖的甲醇溶液，加入活性炭1g脱色15min，过滤，滤液加入100ml甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得橙色替加环素8.8g（87.1%）。化学纯度99.5%，C-4差向异构体0.4%，比旋度：-205°。

实施例3 替加环素的制备

在500ml的三口瓶中加入N-叔丁基甘氨酸4.2g（0.025mol），加入N,N-二甲基甲酰胺63ml，搅拌下加入缩合剂HATU（5.23g,0.014mol），三乙胺（2.53g，0.025mol），30分钟后，加入9-氨基米诺环素（6.4g，0.013mol），于25℃搅拌反应3h。HPLC监控反应液中9-氨基米诺环素含量小于1.0%（面积归一），用1mol/L盐酸溶液调节反应液pH3.0～4.5，分出有机层，氨水调节pH7.0～7.5，水相二氯甲烷/甲醇混合溶剂（250ml*3）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到替加环素粗品4.1g。

所得粗品溶于40ml丙酮中，于38～45℃下，缓慢加入40ml含2%乳糖的甲醇溶液，加入活性炭0.4g脱色15min，过滤，滤液加入100ml甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得橙色替加环素3.6g（87.8%）。化学纯度99.82%，C-4差向异构体0.18%，比旋度：-201°。

实施例4 替加环素的制备

在500ml的三口瓶中加入N-叔丁基甘氨酸8.4g（0.05mol），加入二氯甲烷160ml，搅拌下加入缩合剂BOP-Cl（6.4g,0.025mol），N,N-二异丙基乙胺（5.1g，0.05mol），30分钟后，加入9-氨基米诺环素（8.5g，0.017mol），于10℃搅拌反应10h。HPLC监控反应液中9-氨基米诺环素含量小于1.0%（面积归一），用1mol/L盐酸溶液调节反应液pH3.0～4.5，分出有机层，氨水调节pH7.0～7.5，水相二氯甲烷/甲醇混合溶剂（250ml*3）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到替加环素粗品4.7g。

所得粗品溶于47ml丙酮中，于38～45℃下，缓慢加入47ml含5%乳糖的甲醇溶液，加入活性炭0.5g脱色15min，过滤，滤液加入47ml甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得橙色替加环素4.3g（91.5%）。化学纯度99.65%，C-4差向异构体0.35%，比旋度：-202°。

实施例5 替加环素的制备

在500ml的三口瓶中加入N-叔丁基甘氨酸8.4g（0.05mol），加入二氯甲烷168ml，搅拌下加入缩合剂EDC·HCl（4.8g,0.025mol），TBTU（8.1g，0.025mol），N-甲基吗啉（7.6g，0.075mol），1h后，加入9-氨基米诺环素（12.7g，0.025mol），于30℃搅拌反应4h。HPLC监控反应液中9-氨基米诺环素含量小于1.0%（面积归一），用1mol/L盐酸溶液调节反应液pH3.0～4.5，分出有机层，氨水调节pH7.0～7.5，水相二氯甲烷/甲醇混合溶剂（250ml*3）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到替加环素粗品6.9g。

所得粗品溶于55ml丙酮中，于38～45℃下，缓慢加入55ml含0.5%乳糖的甲醇溶液，加入活性炭0.7g脱色15min，过滤，滤液加入55ml甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得橙色替加环素5.9g（85.5%）。化学纯度99.64%，C-4差向异构体0.35%，比旋度：-198°。

实施例6 替加环素的制备

在500ml的三口瓶中加入N-叔丁基甘氨酸6.3g（0.038mol），加入N,N-二甲基甲酰胺80ml，搅拌下加入缩合剂CDI（9.2g,0.057mol），1-羟基-7-偶氮苯并三唑（HOAt，7.76g，0.057mol），N,N-二异丙基乙胺（9.8g，0.075mol），20分钟后，加入9-氨基米诺环素（19.3g，0.038mol），于15℃搅拌反应8h。HPLC监控反应液中9-氨基米诺环素含量小于1.0%（面积归一），用1mol/L盐酸溶液调节反应液pH3.0～4.5，分出有机层，氨水调节pH7.0～7.5，水相二氯甲烷/甲醇混合溶剂（250ml*3）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到替加环素粗品8.9g。

所得粗品溶于80ml丙酮中，于38～45℃下，缓慢加入80ml含1%乳糖的甲醇溶液，加入活性炭0.9g脱色15min，过滤，滤液加入80ml甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得橙色替加环素7.3g（82%）。化学纯度99.72%，C-4差向异构体0.26%，比旋度：-204°。

实施例7 替加环素的制备

在500ml的三口瓶中加入N-叔丁基甘氨酸12.6g（0.075mol），加入二氯甲烷80ml，搅拌下加入缩合剂HOSu（3.2g,0.028mol），三乙胺（7.6g，0.075mol），30分钟后，加入9-氨基米诺环素（12.7g，0.025mol），于30℃搅拌反应10h。HPLC监控反应液中9-氨基米诺环素含量小于1.0%（面积归一），用1mol/L盐酸溶液调节反应液pH3.0～4.5，分出有机层，氨水调节pH7.0～7.5，水相二氯甲烷/甲醇混合溶剂（250ml*3）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到替加环素粗品6.6g。

所得粗品溶于66ml丙酮中，于38～45℃下，缓慢加入66ml含3%乳糖的甲醇溶液，加入活性炭0.4g脱色15min，过滤，滤液加入66ml甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得橙色替加环素5.8g（87.9%）。化学纯度99.76%，C-4差向异构体0.21%，比旋度：-200°。

实施例8 替加环素的制备

在1000ml的三口瓶中加入N-叔丁基甘氨酸16.8g（0.1mol），加入二氯甲烷500ml，搅拌下加入缩合剂TPTDP（34.4g,0.11mol），N,N-二异丙基乙胺（38.7g，0.03mol），30分钟后，加入9-氨基米诺环素（50.8g，0.1mol），于20℃搅拌反应5h。HPLC监控反应液中9-氨基米诺环素含量小于1.0%（面积归一），用1mol/L盐酸溶液调节反应液pH3.0～4.5，分出有机层，氨水调节pH7.0～7.5，水相二氯甲烷/甲醇混合溶剂（500ml*3）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到替加环素粗品26.9g。

所得粗品溶于260ml丙酮中，于38～45℃下，缓慢加入260ml含2%乳糖的甲醇溶液，加入活性炭2.5g脱色15min，过滤，滤液加入260ml甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得橙色替加环素23.6g（87.7%）。化学纯度99.81%，C-4差向异构体0.19%，比旋度：-201°。

实施例9 替加环素的制备

在1000ml的三口瓶中加入N-叔丁基甘氨酸25.2g（0.15mol），加入二氯甲烷300ml，搅拌下加入缩合剂PyBOP（46.8g,0.09mol），N,N-二异丙基乙胺（19.4g，0.15mol），30分钟后，加入9-氨基米诺环素（38.2g，0.075mol），于35～40℃搅拌反应3h。HPLC监控反应液中9-氨基米诺环素含量小于1.0%（面积归一），用1mol/L盐酸溶液调节反应液pH3.0～4.5，分出有机层，氨水调节pH7.0～7.5，水相二氯甲烷/甲醇混合溶剂（500ml*3）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到替加环素粗品18.5g。

所得粗品溶于185ml丙酮中，于38～45℃下，缓慢加入185ml含2.5%乳糖的甲醇溶液，加入活性炭1.8g脱色15min，过滤，滤液加入185ml甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得橙色替加环素15.6g（84.3%）。化学纯度99.65%，C-4差向异构体0.32%，比旋度：-197°。

对照例替加环素的制备

在500ml的三口瓶中加入N-叔丁基甘氨酸6.3g（0.038mol），加入二氯甲烷150ml，搅拌下加入缩合剂CDI（9.2g,0.057mol），N,N-二异丙基乙胺（14.7g，0.114mol），20分钟后，加入9-氨基米诺环素（19.3g，0.038mol），于10℃搅拌反应6h。HPLC监控反应液中9-氨基米诺环素含量小于1.0%（面积归一），用1mol/L盐酸溶液调节反应液pH3.0～4.5，分出有机层，氨水调节pH7.0～7.5，水相二氯甲烷/甲醇混合溶剂（250ml*3）萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到替加环素粗品9.7g。

所得粗品溶于100ml丙酮中，于38～45℃下，缓慢加入100ml甲醇，加入活性炭1g脱色15min，过滤，滤液加入100ml甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得橙色替加环素6.8g（70.1%）。化学纯度99.1%，C-4差向异构体0.67%，比旋度：-194°。

Claims

1.一种高纯度替加环素的合成方法，其包括如下步骤：

（1）替加环素粗品制备

在惰性气体保护下，酸性接受体存在下，式（Ⅲ）9-氨基米诺环素与式（

）N-叔丁基甘氨酸于惰性溶剂中，在氨基酸缩合剂作用下，进行氨基酸缩合反应；反应完全后用盐酸调节pH3.0～4.5，氨水调节pH7.0～7.5，二氯甲烷/甲醇混合溶剂萃取，干燥，浓缩得式（

）替加环素粗品；

替加环素的纯化

将步骤（1）所得粗品溶于丙酮，于38～45℃下，缓慢加入含0.5～5%（w/w）乳糖的甲醇溶液，加入活性炭脱色，过滤，滤液加入与丙酮同体积的含0.5～5%(w/w)乳糖的甲醇，冷却至20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得精制品。

2.根据权利要求1所述的替加环素的合成方法，其特征在于，步骤（1）中所述氨基酸缩合剂为1-羟基-7-偶氮苯并三唑、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳化二胺基盐酸盐，N,N'-羰基二咪唑、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯、N-羟基丁二酰亚胺、S-(1-氧-2-吡啶)-巯基-1,3-二甲基丙基脲四氟硼酸酯、双（2-氧代-3-恶唑烷基）次磷酰氯或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷的任一种或其组合。

3.根据权利要求1所述的替加环素的合成方法，其特征在于，步骤（1）中缩合反应时间为3～10h，反应温度为10～40℃。

4.根据权利要求1所述的替加环素的合成方法，其特征在于9-氨基米诺环素与N-叔丁基甘氨酸的摩尔比为1:1～1:3。

5.根据权利要求1所述的替加环素的合成方法，其特征在于，酸性接受体为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺的一种或其组合。

6.根据权利要求1所述的替加环素的合成方法，其特征在于，反应溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二氯甲烷的一种或其组合。

7.根据权利要求1所述的替加环素的合成方法，其特征在于，9-氨基米诺环素与缩合剂以及酸接受体的摩尔比为1：1：1～1：3：3。

8.根据权利要求1所述的替加环素的合成方法，其特征在于，步骤（2）操作是：替加环素粗品于38～45℃温度下溶于丙酮中；向清液中缓慢加入的与丙酮等量的含0.5～5%(w/w)乳糖的甲醇，再加入5～10%粗品重量的活性炭脱色15min，过滤，滤液中缓慢滴加与丙酮等量的甲醇，于20～25℃析晶1h，再冷却至0～5℃析晶2小时，过滤，干燥得单杂＜0.1%，差向异构体＜0.5%，纯度＞99.5%的替加环素精制品。

9.根据权利要求8所述的替加环素的合成方法，其特征在于，替加环素粗品与丙酮的投料比例为1g:8～10mL。

10.根据权利要求1所述的替加环素的合成方法，其特征在于，所述二氯甲烷/甲醇混合溶剂中，二氯甲烷与甲醇体积比为4:1。