CN102387813A - 用于免疫治疗的隐蔽hla-a24表位的鉴定、优化和用途 - Google Patents
用于免疫治疗的隐蔽hla-a24表位的鉴定、优化和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102387813A CN102387813A CN2009801585912A CN200980158591A CN102387813A CN 102387813 A CN102387813 A CN 102387813A CN 2009801585912 A CN2009801585912 A CN 2009801585912A CN 200980158591 A CN200980158591 A CN 200980158591A CN 102387813 A CN102387813 A CN 102387813A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peptide
- epi
- hla
- restricted
- positions
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000005457 optimization Methods 0.000 title claims description 30
- 108010013476 HLA-A24 Antigen Proteins 0.000 title description 7
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 236
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 claims abstract description 112
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims abstract description 60
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 39
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 19
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 claims abstract 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 39
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 31
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 31
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 31
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 25
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 15
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 15
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 10
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000012956 testing procedure Methods 0.000 claims description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010048293 HER2-neu-derived peptide (780-786) Proteins 0.000 claims 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 6
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 90
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 14
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 11
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 7
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 108010055196 EphA2 Receptor Proteins 0.000 description 5
- 102100030340 Ephrin type-A receptor 2 Human genes 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 4
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 4
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 102100024423 Carbonic anhydrase 9 Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 2
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100021663 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 108700012439 CA9 Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100039361 Chondrosarcoma-associated gene 2/3 protein Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010055191 EphA3 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010055179 EphA4 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100030322 Ephrin type-A receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100030324 Ephrin type-A receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100021616 Ephrin type-A receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 101100165850 Homo sapiens CA9 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000745414 Homo sapiens Chondrosarcoma-associated gene 2/3 protein Proteins 0.000 description 1
- 101000938354 Homo sapiens Ephrin type-A receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001014223 Homo sapiens MAPK/MAK/MRK overlapping kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000628547 Homo sapiens Metalloreductase STEAP1 Proteins 0.000 description 1
- 101001114057 Homo sapiens P antigen family member 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001114052 Homo sapiens P antigen family member 4 Proteins 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 1
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 102100031520 MAPK/MAK/MRK overlapping kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100026712 Metalloreductase STEAP1 Human genes 0.000 description 1
- 101100346932 Mus musculus Muc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100023219 P antigen family member 1 Human genes 0.000 description 1
- 108060006580 PRAME Proteins 0.000 description 1
- 102000036673 PRAME Human genes 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 229920001231 Polysaccharide peptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 101710173693 Short transient receptor potential channel 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710173694 Short transient receptor potential channel 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 description 1
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 description 1
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000636 anti-proteolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000088 lip Anatomy 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 108010022457 polysaccharide peptide Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011191 terminal modification Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 230000017105 transposition Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16311—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV regulatory proteins
- C12N2740/16322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及一种方法，所述方法用于鉴定抗原中HLA-A*2402限制性隐蔽表位并提高其免疫原性，以获得能够触发针对HLA-A*2402限制性隐蔽表位的免疫反应的HLA-A*2402限制性表位。本发明还提供由隐蔽或优化的HLA-A*2402限制性表位构成的分离的肽。
Description
本发明涉及肽免疫治疗领域。特别地，本发明提供用于有效治疗具有HLA-A*2402表型的患者的新方法和材料。
肽接种或免疫治疗是当前癌症治疗背景下作为大量研究主题的治疗方法。其原理基于用复制细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别的肿瘤抗原T细胞表位的肽进行免疫，所述CTL在肿瘤细胞的清除中起主要作用。
应该想到的是，CTL不识别全蛋白抗原，而是识别其由表达于细胞表面的I类主要组织相容复合物(MHC I)分子提呈的、通常包含8-10个氨基酸的肽片段。所述肽的提呈是抗原加工的结果，所述抗原加工包括如下三个步骤：
-称作蛋白酶体的多酶复合物对所述抗原的细胞质降解，
-TAP转运蛋白对衍生自所述降解的肽在内质网(ER)中的转位，
-所述肽与所述MHC I分子的结合，及所述肽/MHC I复合物向细胞表面的输出。
肽/MHC I复合物与CTL上的特异T细胞受体(TCR)相互作用，从而诱导所述CTL的刺激和扩增，所述CTL变得能够攻击表达衍生所述肽的抗原的靶细胞。
在抗原加工中，发生肽选择，这产生肽提呈的层级。由MHC I分子优选提呈的肽称作免疫显性的，而弱提呈的肽称作隐蔽的。免疫显性肽表现对MHC I的高亲和性且是免疫原性的，而隐蔽肽表现对MHC I的低亲和性且是非免疫原性的。
在结果令人失望的临床前和临床研究中，肿瘤疫苗已广泛靶向免疫显性肽(Gross et al.，2004；Rosenberg et al.，2004)。
肿瘤抗原常常是由肿瘤过表达且由正常细胞和组织较低水平表达的自身蛋白。由于自身耐受过程，免疫系统不能针对所述自身抗原反应。自身耐受主要涉及免疫显性肽(Cibotti et al.，1992；Gross et al.，2004)，从而解释了所述肽在诱导肿瘤免疫性上的无能。
隐蔽肽少得多地在自身耐受过程中涉及(Cibotti et al.，1992；Gross et al.，2004；Moudgil et al.，1999)并因而能够诱导有效的肿瘤免疫性，前提是其免疫原性得到增强(Engelhorn et al.，2006；Gross et al.，2004)。
增强隐蔽肽免疫原性的常用策略由经氨基酸取代而提高其对MHC I分子的亲和性构成，所述隐蔽肽由于其低MHC I亲和性而是非免疫原性的。对MHC I分子的肽亲和性主要依赖称作“主要锚定残基”的残基在良好定义的位置(主要锚定位置)的存在。所述残基具有MHC I等位基因特异性。主要锚定残基的存在尽管通常不是必需的，但是足以确保高MHC I亲和性。已表明，位于主要锚定位置之外的残基(次级锚定残基)可对肽对MHC I的亲和性施加有利或不利影响。所述次级锚定残基的存在使得能够解释在具有主要锚定基序的肽内结合亲和性存在大的变化(Ruppert et al.，1993)。
旨在增强对MHC I分子亲和性的氨基酸取代应当保留所述优化肽的抗原性。事实上，由优化肽产生的CTL必须与相应的天然肽交叉反应。
许多小组已在通过提高已具免疫原性的肽对HLA-A*0201的亲和性来增强其免疫原性方面取得了成功(Bakker et al.，1997；Parkhurst et al.，1996；Valmori et al.，1998)。本发明人之前已描述增强HLA-A*0201限制性隐蔽肽(Scardino et al.，2002；Tourdot和Gould，2002)和HLA-B*0702(WO2008/010098)的亲和性和免疫原性的一般策略。
HLA-A*2402为频繁表达的分子(群体的27％)并且为日本人和亚洲人中最常见的等位基因之一。对HLA-A*2402限制性肿瘤隐蔽肽的鉴定和优化因而为开发用于表达HLA-A*2402的患者的有效癌症疫苗所必需。
至今已描述数种由HLA-A*2402提呈的肿瘤免疫原性肽(表1)。
表1：肿瘤免疫原性HLA-A24T细胞表位
如以下实验部分所描述，本发明人现已发现鉴定抗原中由HLA-A*2402分子提呈的隐蔽肽和优化其免疫原性从而保留与相应天然隐蔽肽的交叉反应性的策略。
因此，本发明的第一方面是鉴定抗原中HLA-A*2402限制性隐蔽表位的方法，其包括如下步骤：选择所述抗原中在主要锚定位置2具有酪氨酸(Y)的8至12个氨基酸的肽，条件是所述肽不同时在位置1具有带正电的氨基酸(精氨酸(R)或赖氨酸(K))和在C末端位置具有亮氨酸(L)或苯丙氨酸(F)或异亮氨酸(I)。此类表位因而具有序列X1YX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11(SEQ ID No：20)，其中X1至X6是任意氨基酸，X7至X10是任意氨基酸或无氨基酸，且如果X1＝R或K，那么X11≠L或F或I。
当单独进行以上选择步骤时，所获序列是推定的隐蔽表位的那些。虽然服从以上标准的表位具有非免疫原性的可能性很大，但是功能性测试是必需的，以确实地鉴定真正的隐蔽表位。特别地，本发明人已观察到，具有如上所定义的主要序列的一些肽事实上在表达HLA-A*2402的个体中是具有免疫原性的。因此，在优选实施方式中，鉴定抗原中HLA-A*2402限制性隐蔽表位的方法还包括如下步骤：在合适模型中测试SEQ ID NO：20的每一推定隐蔽表位的免疫原性以及选择不具有免疫原性的那些表位。
为进行本发明的该方面，合适模型是预测所述肽在表达HLA-A*2402的个体中的免疫原性的模型。此类合适模型的实例描述于实验部分并由HLA-A*2402转基因小鼠构成。在该模型中，通过接种小鼠和使用表达HLA-A*2402并荷载所述肽的人细胞作为靶细胞测试是否已产生特异性CTL而检验推定隐蔽肽的非免疫原性。
下文中，短语“HLA-A*2402限制性隐蔽表位”或“天然肽”用于指SEQ IDNO：20的任意肽，无论其非免疫原性是否被测试。必要时，短语“推定的HLA-A*2402限制性隐蔽表位”用于表达如下事实，即该肽的免疫原性尚未被测试，而短语“经确认的HLA-A*2402限制性隐蔽表位”用于已在合适模型中测试并证明为不具有免疫原性的肽。
本文中，术语“肽”不仅指氨基酸残基(L或D构型)由肽键(-CO-NH-)连接的分子，还指合成假肽或模拟肽，其中肽键被修饰，尤其是被修饰而变得更抗蛋白水解，前提是该修饰不损害其免疫原性。
根据本发明优选实施方式，所选肽具有9至11个氨基酸、更优选9或10个氨基酸，并且在次级锚定位置具有一个或多个不利氨基酸，例如在位置1具有P(脯氨酸)和/或在C末端位置具有D或E或G或H或P或Q或R或K(谷氨酸或天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸或赖氨酸)。
本发明的第二方面是提高HLA-A*2402限制性隐蔽表位免疫原性的方法，其包括如下步骤：用带正电的氨基酸(R或K)取代所述表位的N末端残基和/或用L、F或I取代所述表位的C末端残基。优选地，C末端修饰是用L取代。
当然，在本方法中，词语“取代”会被理解为获得肽，所述肽的序列通过上述取代衍生自所述HLA-A*2402限制性隐蔽表位的序列，无论使用何种技术方法获得所述肽。例如，可以通过人工肽合成或通过重组表达来产生所述肽。
特别地，前两个残基是RY或KY的HLA-A*2402限制性隐蔽表位的免疫原性可以通过用L、F或I、优选用L取代其最末氨基酸(或通过在其C末端添加L、I或F，前提是它不长于11个氨基酸)来提高。当所选HLA-A*2402限制性隐蔽表位的序列是X1YX2X3X4X5X6X7X8X9X10L(SEQ ID No：21)，其中X1是除R或K以外的任意氨基酸，X2至X6是任意氨基酸，X7至X10是任意氨基酸或无氨基酸，用R或K取代X1足以提高其免疫原性。更一般地，当所选HLA-A*2402限制性隐蔽表位的序列是X1YX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11(SEQ ID No：22)时，其中X1是除R或K以外的任意氨基酸，X2至X6是任意氨基酸，X7至X10是任意氨基酸或无氨基酸，X11为不利氨基酸(D或E或G或H或P或Q或R或K)，用R或K取代X1可足以提高其免疫原性。
下文中，表述“优化肽”或“优化的免疫原性A*2402限制性表位”将指通过以上方法衍生自HLA-A*2402限制性隐蔽表位的免疫原性肽，所述HLA-A*2402限制性隐蔽表位被称作该免疫原性肽的“同系天然肽”。
在本发明优选实施方式中，优化肽可以触发交叉识别其同系天然肽的免疫反应。本发明的另一方面因而是获得能够触发针对抗原的HLA-A*2402限制性隐蔽表位的免疫反应的HLA-A*2402限制性表位的方法，所述方法包括如下步骤：
(i)通过如权利要求1所述的方法，鉴定所述抗原中一个或数个天然推定HLA-A*2402限制性隐蔽表位；
(ii)在合适模型中测试步骤(i)所选每一天然表位的免疫原性，并选择不具有免疫原性的那些表位；
(iii)对于步骤(ii)所选每一天然表位，通过如上所述方法提高其免疫原性来获得优化表位；
(iv)在合适模型中测试步骤(iii)所获每一优化表位的免疫原性，并选择具有免疫原性的那些表位；
(v)对于步骤(iv)所选每一表位，测试针对所述优化表位产生的CTL是否也识别其同系天然表位，并选择所述测试为阳性的那些表位。
在该方法中，可用于步骤(ii)和步骤(iv)的合适模型如上所述。在步骤(v)中，可以通过本领域技术人员已知的任何方法、例如实验部分所述的方法来进行交叉识别。
如以下实验部分所公开，本发明人已在不同肿瘤相关抗原(hTERT，EphA2，MAGE或Her2/neu)中鉴定大量推定的HLA-A*2402限制性隐蔽表位。当测试所述表位的免疫原性时，其中之一被确认是免疫原性的。本发明人已选择下表2所公开的肽，其是经确认的HLA-A*2402限制性隐蔽表位。所述肽是本发明的一部分。
表2：所选经确认的隐蔽HLA-A*2402限制性肽
本发明还涉及通过本发明的方法衍生自SEQ ID No：1-9的隐蔽肽的优化肽。优化肽的优选实例是KYGVLLKTL(SEQ ID No：11)、RYMRQFVAL(SEQID No：12)、RYVSRLLGI(SEQ ID No：13)、RYGKGWDLL(SEQ ID No：14)、RYLVQVQAL(SEQ ID No：15)、RYWELSNHL(SEQ ID No：16)。在所述肽中，已通过用R取代SEQ ID No：3和5的隐蔽HLA-A*2402限制性表位的N末端氨基酸而分别从其衍生出SEQ ID No：13和SEQ ID No：15。已通过用R或K取代SEQ ID No：1、2、4和6的肽的N末端氨基酸和用L取代其C末端氨基酸而分别从其衍生出SEQ ID No：11、12、14和16的肽。
多特异性肿瘤接种相比单特异性接种提供了对肿瘤细胞更为广泛的控制，从而降低了出现免疫逃逸变体的风险。在大多数情况下，靶向数个表位相比靶向仅一个表位，免疫治疗更有效，前提是已知肿瘤表达所有被靶向的抗原。本发明人之前已描述称作Vx-006的多肽，所述多肽由衍生自三种不同的通用肿瘤抗原(TERT988Y、HER-2/neu402Y和MAGE-A248V9)的HLA-A*0201限制性优化隐蔽肽组成(WO 2007/073768)。Vx-006能够在HLA-A*0201转基因HHD小鼠中体内诱导和在人中体外诱导多特异性CD8细胞反应，然而TERT988Y、HER-2/neu402Y和MAGE-A248V9肽的混合物无法诱导三特异性反应。因而，包含数个表位的嵌合多肽相比于仅仅是同样表位的混合物可以更为有效地触发针对多于一个表位的反应。依照该情况，包含一单表位重复的嵌合多肽相比由所述表位构成的肽还可以触发更强的反应。事实上，多肽结构(具有数个不同表位或具有一单表位重复)可以产生能够优化被靶向的一个或多个肽-特异性免疫反应的新的接合表位(junctional epitope)、尤其是CD4限制性表位。此外，当皮下注射游离肽时，肽直接结合存在于注射部位的每个细胞的MHC分子。因为多肽需要被加工，用多肽接种在将抗原性肽靶向作为树突细胞的专职抗原提呈细胞(APC)方面更为有效。
本发明的另一方面因而是嵌合多肽，所述嵌合多肽包含一个、两个、三个或更多个如上所述的HLA-A*2402限制性隐蔽表位或者一个、两个、三个或更多个如上所述的优化的免疫原性HLA-A*2402限制性表位。在本发明的嵌合多肽中，所述表位可以是互不相同的，和/或相同表位可以重复数次。
要注意的是，当对于相同HLA分子具有特异性的数个表位以混合物或嵌合多肽一起使用时，所述表位竞争结合相应的HLA分子。相反地，通过使用不同HLA限制性表位(HLA-A*0201、HLA-A*2402、HLA-B*0702或其它)的混合物或包含同样的不同HLA限制性表位的嵌合多肽，将不存在对HLA结合的竞争，并且多特异性反应将确实地获得，前提是所有HLA分子在接种个体中均被表达。
在本发明的嵌合多肽中，上述HLA-A*2402限制性隐蔽表位或优化的免疫原性表位因而可以有利地与前述HLA-A*0201(WO 02/02716)和/或HLA-B*0702肽(WO 2008/010010和WO 2008/010098)结合或与衍生自前述肿瘤相关抗原的免疫原性表位结合，所述肿瘤相关抗原包括CEA、PRAME、酪氨酸酶、TRAG-3、NY-Eso-1、P53、Muc-1、PSA/PSMA、存活素、Melan-A/MART-1、TRP-1、TRP-2、WT1、EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、G250/MN/CAIX、STEAP、α甲胎蛋白、RAGE-1、PAGE-1。当然，多等位基因肽混合物也是本发明的一部分，所述混合物至少包括本发明的肽和一种不同的HLA限制性表位(HLA-A*0201、HLA-A*2402、HLA-B*0702或其它)。
能够(以混合物或嵌合多肽)有利地结合HLA-A*2402限制性隐蔽表位的隐蔽表位的实例以及能够有利地结合优化的免疫原性HLA-A*2402限制性表位的优化的免疫原性表位的实例描述于下表3。当然，所述列举并非限制性的。
表3：可以以本发明的嵌合多肽结合HLA-A*2402限制性表位的表位
本领域技术人员可以选择任意已知技术产生此类多肽。例如，通过化学合成或使用遗传工程技术获得多肽(Velders et al.，2001)。
本发明的另一目的是分离的核酸分子，所述核酸分子被设计成表达如上所述的隐蔽HLA-A*2402限制性表位、优化的免疫原性HLA-A*2402限制性表位或嵌合多肽。“被设计成表达”肽在本文中表示，当核酸被导入合适细胞时，所述肽被表达，与从中选择(并在合适情况下，如上所述地优化)所述肽序列的全抗原相分离。编码表位或嵌合多肽的区域通常位于适当启动子控制的多核苷酸中。细菌启动子为细菌中的表达所优选，其可体外产生或在特定情况下体内产生多肽。可用以体内直接产生本发明的肽或多肽的细菌实例是单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)，该菌是通过主动吞噬作用进入专职抗原提呈细胞的兼性胞内细菌(Paterson和Maciag，2005)。可选择地，本发明的核酸可以使用合适载体直接施用。在这种情况下，可以使用组织特异性、强组成型或内源性启动子控制肽表达。适当的载体系统包括裸DNA质粒、增强递送的脂质体组合物和引起瞬时表达的病毒载体。病毒载体的实例是腺病毒或痘苗病毒载体以及疱疹科的载体，所述载体尤其是非复制形式的。
本发明还涉及药物组合物，所述药物组合物至少包括作为活性成分的如上所述的HLA-A*2402限制性隐蔽表位、或如上所述的优化的免疫原性表位多肽、或本发明的嵌合多肽、或编码它们中任一者的核酸、和/或携带所述核酸的载体。药物组合物的配制将依照当代标准和技术。意在人施用的药物将在足够无菌的条件下制备，其中一种或多种活性成分与等渗溶液或适合所推荐治疗用途的其它药物载体组合。适当的制剂和技术一般性地描述于最新版的Remington药物科学(Maack Publishing Co，Easton PA)。
特别地，本发明的HLA-A*2402限制性表位或嵌合多肽或核酸可用以制备用于预防性或治疗性免疫治疗、尤其是抗病毒或抗癌症免疫治疗的组合物。
在特定实施方式中，本发明的药物组合物是疫苗。在这后一情况下，上述组分可以与佐剂组合以加强免疫反应。经典的佐剂包括油性乳剂、例如不完全弗氏佐剂或Montanide，以及诸如明矾的粘附性表面。尤其有用的是特别地经TLR募集和活化树突细胞(诸如细菌DNA或细菌膜衍生蛋白)或辅助引发细胞毒性T细胞的佐剂。所述组合物还可以包括另外地增强免疫反应或促进癌症细胞凋亡或清除的其它因子，诸如IL-2或IL-12细胞因子或GM-CSF。
多剂量和/或不同组合的本发明的免疫原性组合物可以被分别或一同包装用以分配。每一组合物或每组组合物(诸如下述部件试剂盒)可以配上关于组合物或组合引发免疫反应和/或治疗癌症的用途的书面说明。
在此前的专利申请(WO 2006/120038)中，申请人已描述能使靶向亚显性/隐蔽表位的T细胞反应起始和维持的接种方案。WO 2006/120038所报道的结果证明，注射对应亚显性/隐蔽表位的天然肽(此前用其同系优化肽接种)可以维持由所述优化肽起始的免疫反应。
根据本发明，HLA-A*2402限制性隐蔽表位可因此用以制备用于维持由其同系优化肽起始的CTL免疫反应的医药组合物。还可以将具有衍生自HLA-A*2402限制性隐蔽表位的优化的免疫原性HLA-A*2402限制性表位序列的免疫原性肽用以制备用于起始针对所述HLA-A*2402限制性隐蔽表位的CTL免疫反应的医药组合物。本发明还包括针对肿瘤抗原或病毒抗原接种患者的方法，其中所述方法包括用与所述抗原的天然HLA-A*2402限制性隐蔽表位同系的优化的免疫原性肽接种的第一步骤，之后使用所述天然肽接种的第二步骤。在此类方法中，可以通过使用嵌合多肽而非单表位的肽进行第一步骤和/或第二步骤，所述嵌合多肽包含一个、二个、三个或更多个如上所述的优化或隐蔽肽。
本发明还涉及部件试剂盒，所述试剂盒以分离制剂或容器(瓶、管等)包含：
(i)第一肽，所述第一肽包含HLA-A*2402限制性隐蔽表位序列，和
(ii)第二肽，所述第二肽包含对应于与(i)所述隐蔽表位同系的优化的免疫原性表位的序列。
能够作为本发明试剂盒部件的肽的实例为SEQ ID No：1-6的肽，其可构成第一肽，如上所述，第二肽随后通过提高其免疫原性的方法，衍生自所述第一肽。本发明的优选试剂盒因而可以包含SEQ ID No：1和11的肽(以分离容器)、或SEQ ID No：2和12的肽(以分离容器)、或SEQ ID No：3和13的肽(以分离容器)、或SEQ ID No：4和14的肽(以分离容器)、或SEQ ID No：5和15的肽(以分离容器)、或SEQ ID No：6和16的肽(以分离容器)。
本发明其它的部件试剂盒包含至少一种嵌合多肽。在该实施方式中，该试剂盒至少还包含与嵌合多肽中所包含的表位之一同系的肽，其中所述同系肽是分离的或包含在另一嵌合多肽中。
本发明涉及了此类试剂盒的数个优选变体：在第一实施方式中，所述试剂盒以分离的制剂包含第一嵌合多肽和第二嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包含一个、两个、三个或更多个HLA-A*2402限制性隐蔽表位，所述第二嵌合多肽对应于其同系HLA-A*2402限制性免疫原性嵌合多肽(这意味着它包含与所述第一嵌合多肽中所包含的隐蔽表位同系的优化的HLA-A*2402限制性免疫原性表位)。在第二种实施方式中，所述试剂盒包含一个、两个、三个或更多个与不同HLA-A*2402限制性隐蔽表位相对应的肽(其中所述肽混合在一单一制剂中或分离为数个制剂)，以及以分离的制剂包含嵌合多肽，所述嵌合多肽包含与所述隐蔽肽同系的优化的HLA-A*2402限制性免疫原性表位。
如上所述，可以有利地进行多等位基因刺激(即使用对于不同HLA分子具有特异性的表位)来获得多特异性反应。因此，本发明的试剂盒的优选实施方式以分离的容器包含：
(i)多等位基因肽混合物或多等位基因嵌合多肽，其至少包含如上所述的HLA-A*2402限制性隐蔽表位和至少一种不同的HLA限制性隐蔽表位，和
(ii)多等位基因肽混合物或多等位基因嵌合多肽，其至少包含与(i)中所述的HLA-A*2402限制性隐蔽表位同系的HLA-A*2402限制性免疫原性表位，以及至少另一与(i)中所述的其它隐蔽表位同系的免疫原性表位。
可选择地，本发明的试剂盒可以不包含至少一部分的肽或嵌合多肽，而包含编码所述肽或嵌合多肽的一种或多种核酸。在此情况下，所述的一种或多种核酸如上所述。
在对本发明的一些特定试剂盒的如下描述中，将仅提及其中包含的肽(天然的或优化的)；应理解的是，所述试剂盒可包含一种或多种嵌合多肽(其包含天然隐蔽表位或优化表位)而不包含单表位的肽，并且除了至少一部分的所述肽或嵌合多肽还可以包含一种或多种核酸，或包含一种或多种核酸而不包含至少一部分的所述肽或嵌合多肽。
在本发明的特定实施方式中，所述试剂盒是接种试剂盒，其中所述第一(天然)肽和第二(同系优化)肽为单独的接种剂量。在优选实施方式中，所述接种试剂盒包含2剂量或3剂量的优化肽以及3剂量、4剂量、5剂量或6剂量的天然肽。本发明的特定接种试剂盒适于6次注射的第一接种顺序，并且包含2剂量或3剂量的优化肽以及4剂量或3剂量的天然肽。在久病情况下，优选的是，通过定期回忆(regular recall)维持该首次接种后获得的免疫水平。这可以通过例如每1-6个月进行的注射而完成。因此，包含至少2剂量且最多40或50剂量的天然肽的补充性试剂盒(complementary kit)也是本发明的一部分。可选择地，所述接种试剂盒可以包含2-3剂量的优化肽和3至40或最多至50剂量的天然肽。当然，所述试剂盒中存在的所述天然肽和优化肽如上所述。
每一剂量包括0.1-10mg、优选地1-5mg的肽或者1-20mg的多肽。在优选实施方式中，每一剂量被配制用于皮下注射。例如，每一剂量以用作佐剂的Montanide ISA51乳化的0.3-1.5ml水性溶液乳剂配制。本领域技术人员可以选择一种或多种任何其它佐剂来代替Montanide ISA51(或者除Montanide ISA51，还选择一种或多种任何其它佐剂)。在特定实施方式中，所述剂量是水性溶液的形式。可选择地，所述剂量可以是冻干肽的形式，用于现制待注射的液体溶液。所述试剂盒的其它可能组分是施用前待加入所述肽组合物的一种或数种佐剂以及描述如何使用所述试剂盒的说明书。
通过如下附图和实施例进一步阐述本发明。
附图说明
图1：HLA-A*2402隐蔽肽的免疫原性。按照所述方案用隐蔽肽接种HLA-A*2402转基因小鼠，并如所示，针对荷载肽(NR非相关肽)的T2-A24靶测试所生成的CTL。将特异性裂解百分比确定为：裂解＝(实验性释放-自发释放)/(最大释放-自发释放)×100。测试了4个CTL稀释物，其对应4个CTL/靶细胞比。
图2：HLA-A*2402限制性优化的隐蔽肽的免疫原性。按照所述方案用优化肽接种HLA-A*2402转基因小鼠，并如所示，针对荷载优化肽(免疫原性)、相应天然肽(天然肽交叉识别)或不相关肽(NR)的T2-A24靶测试所生成的CTL。将特异性裂解百分比确定为：裂解＝(实验性释放-自发释放)/(最大释放-自发释放)×100。测试了4个CTL稀释物，其对应4个CTL/靶细胞比。
实施例
已使用以下材料和方法进行实施例。
转基因小鼠。通过将之前描述的HLA-A24转基因小鼠(Barra et al.，1993)和对于人β2微球蛋白和CD8α链两者转基因的H2Kb-H2Db-敲除小鼠(Perarnau et al.，1999)杂交，来获得用于所述实验的转基因小鼠。
肽。由Epytop(Nimes，France)合成肽。
细胞。HLA-A*2402转染的人TAP阴性T2-A24细胞为此前所述(Miyaharaet al.，2005)并由Lemonnier博士(Institut Pasteur，Paris，France)提供。所有细胞系在添加10％FCS的RPMI1640培养基中培养。
测量对HLA-A*2402的肽相对亲和性。此前已描述所用方案(Rohrlich etal.，2003)。简言之，用100μM-0.1μM的肽浓度在37℃下将T2-A24细胞孵育16小时，随后用0041HA单克隆抗体(mAb)(One Lambda，Inc.)染色，以对HLA-A*2402的表面表达定量。对于每一肽浓度，将HLA-A*2402特异性染色计算为用100μM参照肽标准品A24(AYIDNYNKF，SEQ ID NO：111)获得的染色百分比。将相对亲和性(RA)确定为：RA＝(诱导30％的HLA-A*2402表达的每一肽的浓度/诱导30％的HLA-A*2402表达的参照肽的浓度)。
HLA-A*2402转基因小鼠中的体内CTL诱导。在150μg的I-Ab限制性HBV核心蛋白128T辅助表位(TPPAYRPPNAPIL，SEQ ID NO：112)存在下，用不完全弗氏佐剂(IFA)乳化的100μg肽皮下注射小鼠。15天后，用肽(10μM)体外刺激5×107个脾细胞两次，以6天为间隔。在培养的第13天，测试团应答细胞(bulk responder)群针对表达HLA-A*2402并荷载相同肽的靶细胞的特异性细胞毒性。
交叉识别测定法。在150μg的I-Ab限制性HBV核心蛋白128T辅助表位(TPPAYRPPNAPIL，SEQ ID NO：112)存在下，用不完全弗氏佐剂(IFA)乳化的100μg优化肽皮下注射小鼠。15天后，首先用优化肽(10μM)体外刺激5×107个脾细胞，随后在培养第6天用对应的天然肽体外刺激所述脾细胞。在第13天，测试团应答细胞群针对表达HLA-A*2402并荷载优化肽、天然肽或不相关肽的靶细胞的特异性细胞毒性。
细胞毒性测定法。用100μCi的Cr51标记靶60分钟，将其铺于96孔V形底平板(3×103个细胞/100μL的RPMI 1640培养基的孔)，并且必要时，在37℃下用优化肽或天然肽(1μM)脉冲靶2小时。随后在孔中添加4个效应细胞稀释物，并在37℃下孵育4小时。将特异性裂解百分比确定为：裂解＝(实验性释放-自发性释放)/(最大释放-自发性释放)×100。
实施例1：所选隐蔽肽的亲和性和免疫原性
本发明人已根据上述选择方法选择了10种天然肽。首先，测试7种肽在结合HLA-A*2402分子方面的能力。除2个肽外，其它所有肽不能结合HLA-A*2402或弱结合HLA-A*2402。
表4：隐蔽肽的HLA-A*2402亲和性。RA＝相对亲和性＝(诱导30％的HLA-A*2402表达的每一肽的浓度/诱导30％的HLA-A*2402表达的参照肽的浓度)，(-)表示RA＞100，(+/-)10＜RA＜100，(+)5＜RA＜10，(++)RA＜5，ND：未确定
随后用所选肽接种HLA-A24转基因小鼠，并且在15天后，用所述肽体外刺激其脾细胞两次，以6天为间隔。在用具有主要Y2和/或C末端锚定基序(数据未示出)的所选对照高亲和性肽接种的小鼠中，检测肽特异性CTL。在转基因小鼠中，天然肽也显示为不具有免疫原性(图1)，所述天然肽不能结合HLA-A*2402，Her2/neu 802显示具有免疫原性，所述Her2/neu 802结合HLA-A*2402。这证实对HLA-A*2402限制性肽的结合亲和性和免疫原性间存在关联。
然而，由于Her2/neu 780强结合HLA-A*2402但最终是非免疫原性的，本发明人决定仅根据其在HLA-A24转基因小鼠中诱导特异性免疫反应的无能来选择天然肽。最后，根据所述选择方法选择的唯一天然肽能够在HLA-A*2402转基因小鼠中产生特异性免疫反应，从而证实所述方法能有效选择推定的隐蔽肽。表5示出所选天然肽的免疫原性。
表5：所选隐蔽肽的HLA-A*2402免疫原性。(-)表示用相应天然肽接种的小鼠均未出现特异性免疫反应，(+)表示少于50％的所接种小鼠曾应答，(++)表示多于50％曾应答。ND：未确定
实施例2：增强所选隐蔽肽的免疫原性
为增强具有HLA特异锚定基序的低亲和性肽的HLA-A*2402亲和性和因此其免疫原性，鉴定不利次级锚定基序并用有利基序取代它们是必需的。然而，所述取代必须保留与TCR相互作用的肽段(位置4至位置8)的构象。因此，兴趣集中在次级锚定位置1。带正电的氨基酸(赖氨酸(K)或精氨酸(R))是位置1的有利基序，然而脯氨酸(P)是不利氨基酸。
此外，如下表6所示，多于50％的在肿瘤和HIV细胞两者中均鉴定的HLA-A*2402 CD8表位在C末端位置具有亮氨酸(L)。本发明人因而决定将L用作C末端修饰，以增强在该位置优选具有不利氨基酸(天冬氨酸或谷氨酸(D、E)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、谷氨酰胺(Q)、赖氨酸(K)、脯氨酸(P)或精氨酸(R))的肽的免疫原性。
表6：肿瘤和HIV衍生的HLA-A*2402限制性表位
测试优化肽的免疫原性(表7、图2)，显示所选修饰增强诱导HLA-A24转基因小鼠中对6种天然肽的特异性免疫反应的能力。用TERT 403KIL9、TERT 770R1L9、HER 780R1、EphA2 47R1L9、EphA2 502R1和EphA2 817R1L9肽接种的HLA-A24转基因小鼠出现肽特异性CTL。
重要的是，在用优化肽接种的小鼠中产生的CTL识别荷载相应天然肽的靶细胞(图2)。
表7：天然肽和修饰肽免疫原性及天然肽交叉识别。(-)表示用相应天然肽接种的小鼠均未出现特异性免疫反应，(+)表示少于50％的所接种小鼠曾应答，(++)表示多于50％曾应答。(X/Y)表示X小鼠出现对全部所接种Y小鼠的特异性反应。ND：未确定
总之，本发明人描述了优化HLA-A*2402限制性隐蔽肽免疫原性的方法。它包括以下步骤：(a)选择具有Y2和在次级锚定位置1和/或9具有不利氨基酸的隐蔽肽；和(b)用带正电氨基酸(R或K)取代N末端位置的不利氨基酸和当用L取代C末端残基必要时，用L取代C末端残基。
使用所述的选择/优化方法，本发明人还描述了6种优化隐蔽肽，所述肽在转基因小鼠中诱导能够识别提呈相应天然肽的细胞的特异CTLs。
参考文献
Bakker，A.B.，van der Burg，S.H.，Huijbens，R.J.，Drijfhout，J.W.，Melief，C.J.，Adema，G.J.and Figdor，C.G.(1997)Analogues of CTL epitopes withimproved MHC class-I binding capacity elicit anti-melanoma CTL recognizingthe wild-type epitope.Int J Cancer，70，302-309.
Barra，C.，Gournier，H.，Garcia，Z.，Marche，P.N.，Jouvin-Marche，E.，Briand，P.，Fillipi，P.and Lemonnier，F.A.(1993)Abrogation of H-2-restricted CTLresponses and efficient recognition of HLA-A3 molecules in DBA/2 HLA/A24responder mice.J Immunol，150，3681-3689.
Cibotti，R.，Kanellopoulos，J.M.，Cabaniols，J.P.，Halle-Panenko，O.，Kosmatopoulos，K.，Sercarz，E.and Kourilsky，P.(1992)Tolerance to aself-protein involves its immunodominant but does not involve its subdominantdeterminants.Proc Natl Acad Sci USA，89，416-420.
Engelhorn，M.E.，Guevara-Patino，J.A.，Noffz，G.，Hooper，A.T.，Lou，O.，Gold，J.S.，Kappel，B.J.and Houghton，A.N.(2006)Autoimmunity and tumorimmunity induced by immune responses to mutations in self.Nat Med，12，198-206.
Gross，D.A.，Graff-Dubois，S.，Opolon，P.，Cornet，S.，Alves，P.，Bennaceur-Griscelli，A.，Faure，O.，Guillaume，P.，Firat，H.，Chouaib，S.，Lemonnier，F.A.，Davoust，J.，Miconnet，I.，Vonderheide，R.H.andKosmatopoulos，K.(2004)High vaccination efficiency of low-affinity epitopes inantitumor immunotherapy.J Clin Invest，113，425-433.
Miyahara，Y.，Naota，H.，Wang，L.，Hiasa，A.，Goto，M.，Watanabe，M.，Kitano，S.，Okumura，S.，Takemitsu，T.，Yuta，A.，Majima，Y.，Lemonnier，F.A.，Boon，T.and Shiku，H.(2005)Determination of cellularly processedHLA-A2402-restricted novel CTL epitopes derived from two cancer germ linegenes，MAGE-A4 and SAGE.Clin Cancer Res，11，5581-5589.
Moudgil，K.D.，Southwood，S.，Ametani，A.，Kim，K.，Sette，A.and Sercarz，E.E.(1999)The self-directed T cell repertoire against mouse lysozyme reflectsthe influence of the hierarchy of its own determinants and can be engaged by aforeign lysozyme.JImmunol，163，4232-4237.
Parkhurst，M.R.，Salgaller，M.L.，Southwood，S.，Robbins，P.F.，Sette，A.，Rosenberg，S.A.and Kawakami，Y.(1996)Improved induction ofmelanoma-reactive CTL with peptides from the melanoma antigen gp100modified at HLA-A*0201-binding residues.J Immunol，157，2539-2548.
Paterson，Y.and Maciag，P.C.(2005)Listeria-based vaccines for cancertreatment.Curr Opin Mol Ther，7，454-460.
Perarnau，B.，Saron，M.F.，San Martin，B.R.，Bervas，N.，Ong，H.，Soloski，M.J.，Smith，A.G.，Ure，J.M.，Gairin，J.E.and Lemonnier，F.A.(1999)SingleH2Kb，H2Db and double H2KbDb knockout mice：peripheral CD8+T cellrepertoire and anti-lymphocytic choriomeningitis virus cytolytic responses.Eur JImmunol，29，1243-1252.
Rohrlich，P.S.，Cardinaud，S.，Firat，H.，Lamari，M.，Briand，P.，Escriou，N.and Lemonnier，F.A.(2003)HLA-B*0702 transgenic，H-2KbDb double-knockoutmice：phenotypical and functional characterization in response to influenza virus.Int Immunol，15，765-772.
Rosenberg，S.A.，Yang，J.C.and Restifo，N.P.(2004)Cancer immunotherapy：moving beyond current vaccines.Nat Med，10，909-915.
Ruppert，J.，Sidney，J.，Celis，E.，Kubo，R.T.，Grey，H.M.and Sette，A.(1993)Prominent role of secondary anchor residues in peptide binding to HLA-A2.1molecules.Cell，74，929-937.
Scardino，A.，Gross，D.A.，Alves，P.，Schultze，J.L.，Graff-Dubois，S.，Faure，O.，Tourdot，S.，Chouaib，S.，Nadler，L.M.，Lemonnier，F.A.，Vonderheide，R.H.，Cardoso，A.A.and Kosmatopoulos，K.(2002)HER-2/neu and hTERT crypticepitopes as novel targets for broad spectrum tumor immunotherapy.J Immunol，168，5900-5906.
Tourdot，S.and Gould，K.G.(2002)Competition between MHC class Ialleles for cell surface expression alters CTL responses to influenza A virus.JImmunol，169，5615-5621.
Valmori，D.，Gervois，N.，Rimoldi，D.，Fonteneau，J.F.，Bonelo，A.，Lienard，D.，Rivoltini，L.，Jotereau，F.，Cerottini，J.C.and Romero，P.(1998)Diversity ofthe fine specificity displayed by HLA-A*0201-restricted CTL specific for theimmunodominant Melan-A/MART-1 antigenic peptide.J Immunol，161，6956-6962.
Velders，M.P.，Weijzen，S.，Eiben，G.L.，Elmishad，A.G.，Kloetzel，P.M.，Higgins，T.，Ciccarelli，R.B.，Evans，M.，Man，S.，Smith，L.and Kast，W.M.(2001)Defined flanking spacers and enhanced proteolysis is essential for eradication ofestablished tumors by an epitope string DNA vaccine.J Immunol，166，5366-5373.
Claims (17)
1.一种鉴定抗原中HLA-A*2402限制性隐蔽表位的方法，所述方法包括如下步骤：选择所述抗原中在位置2具有酪氨酸的8至12个氨基酸的肽，条件是所述肽不同时在位置1具有带正电的氨基酸(赖氨酸或精氨酸)和在C末端位置具有亮氨酸或异亮氨酸或苯丙氨酸。
2.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括如下步骤：在合适模型中测试由权利要求1所述方法选择的所述肽的免疫原性，和如果所述肽不具有免疫原性，则选择所述肽。
3.一种提高(推定的)HLA-A*2402限制性隐蔽表位免疫原性的方法，所述方法包括用精氨酸或赖氨酸取代所述表位的N末端残基的步骤，和/或用亮氨酸或异亮氨酸或苯丙氨酸、优选地用亮氨酸取代所述表位的C末端残基的步骤。
4.一种获得能够触发针对抗原HLA-A*2402限制性隐蔽表位的免疫反应的HLA-A*2402限制性表位的方法，所述方法包括如下步骤：
(i)通过权利要求1所述的方法，鉴定所述抗原中一个或数个天然(推定的)HLA-A*2402限制性隐蔽表位；
(ii)在合适模型中测试步骤(i)所选每一天然表位的免疫原性，并选择不具有免疫原性的表位；
(iii)对于步骤(ii)所选每一天然表位，通过权利要求3所述的方法提高其免疫原性，而获得优化表位；
(iv)在合适模型中测试步骤(iii)所获每一优化表位的免疫原性，并选择具有免疫原性的那些表位；
(v)对于步骤(iv)所选每一表位，测试针对所述优化表位产生的CTL是否也识别其同系天然表位，并选择所述测试为阳性的那些表位。
5.由HLA-A*2402限制性隐蔽表位构成的分离的肽，其中所述分离的肽选自PYGVLLKTH(SEQ ID NO：1)、PYMRQFVAH(SEQ ID NO：2)、PYVSRLLGI(SEQ ID NO：3)、PYGKGWDLM(SEQ ID NO：4)、TYLVQVQAL(SEQ ID NO：5)、PYWELSNHE(SEQ ID NO：6)、PYDGIPARE(SEQ ID No：7)、RYEFLWGPR(SEQ ID No：8)和PYNYLSTDV(SEQ ID No：9)。
6.一种分离的肽，其由免疫原性HLA-A*2402限制性表位构成，所述免疫原性HLA-A*2402限制性表位通过权利要求2所述的方法衍生自权利要求4所述的HLA-A*2402限制性隐蔽表位，其中所述分离的肽选自KYGVLLKTL(SEQ ID No：11)、RYMRQFVAL(SEQ ID No：12)、RYVSRLLGI(SEQ ID No：13)、RYGKGWDLL(SEQ ID No：14)、RYLVQVQAL(SEQ ID No：15)和RYWELSNHL(SEQ ID No：16)。
7.一种嵌合多肽，所述嵌合多肽包含一个、两个、三个或更多个权利要求4所述的HLA-A*2402限制性隐蔽表位。
8.一种嵌合多肽，所述嵌合多肽包含一个、两个、三个或更多个权利要求5所述的免疫原性HLA-A*2402限制性表位。
9.一种分离的核酸分子，所述核酸分子被设计成表达权利要求5所述的HLA-A*2402限制性隐蔽表位、权利要求6所述的免疫原性表位或者权利要求7或8所述的嵌合多肽。
10.一种药物组合物，其至少包含作为活性成分的权利要求5所述的HLA-A*2402限制性隐蔽表位、权利要求6所述的免疫原性表位多肽、权利要求7或8所述的嵌合多肽或者权利要求9所述的核酸。
11.如权利要求10所述的药物组合物，所述药物组合物为疫苗。
12.一种部件试剂盒，所述试剂盒以分离容器包含：
(i)第一肽，所述第一肽包含HLA-A*2402限制性隐蔽表位的序列，和
(ii)第二肽，所述第二肽包含由HLA-A*2402限制性免疫原性表位构成的序列，所述HLA-A*2402限制性免疫原性表位通过权利要求3所述的方法衍生自(i)中所述的HLA-A*2402限制性隐蔽表位。
13.如权利要求12所述的试剂盒，其中所述第一肽是权利要求5所述的分离的隐蔽表位，所述第二肽是权利要求6所述的其同系免疫原性表位。
14.如权利要求12所述的试剂盒，其中所述第一肽是包含一个、两个、三个或更多个HLA-A*2402限制性隐蔽表位的嵌合多肽，和/或所述第二肽是包含一个、两个、三个或更多个HLA-A*2402限制性免疫原性表位的嵌合多肽，其中所述第二肽包含的至少一种免疫原性表位与所述第一肽包含的至少一种HLA-A*2402限制性隐蔽表位同系。
15.如权利要求14所述的试剂盒，其中所述第一肽是权利要求7所述的嵌合多肽，所述第二肽是权利要求8所述的嵌合多肽。
16.如权利要求12至15中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒是接种试剂盒，其中所述第一肽和第二肽或嵌合多肽为单独的接种剂量。
17.用作预防性或治疗性免疫治疗药物的权利要求5或权利要求6所述的分离的肽、权利要求7或权利要求8所述的嵌合多肽或者权利要求9所述的核酸。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/IB2009/005753 WO2010112962A1 (en) | 2009-04-02 | 2009-04-02 | Identification, optimization and use of cryptic hla-a24 epitopes for immunotherapy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102387813A true CN102387813A (zh) | 2012-03-21 |
| CN102387813B CN102387813B (zh) | 2018-07-31 |
Family
ID=41381983
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200980158591.2A Active CN102387813B (zh) | 2009-04-02 | 2009-04-02 | 用于免疫治疗的隐蔽hla-a24表位的鉴定、优化和用途 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8900600B2 (zh) |
| EP (1) | EP2413956B1 (zh) |
| JP (1) | JP5756792B2 (zh) |
| CN (1) | CN102387813B (zh) |
| BR (1) | BRPI0924827A2 (zh) |
| CA (1) | CA2756238A1 (zh) |
| DK (1) | DK2413956T3 (zh) |
| ES (1) | ES2608715T3 (zh) |
| HR (1) | HRP20161710T1 (zh) |
| HU (1) | HUE030195T2 (zh) |
| PL (1) | PL2413956T3 (zh) |
| PT (1) | PT2413956T (zh) |
| WO (1) | WO2010112962A1 (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106061499A (zh) * | 2013-12-18 | 2016-10-26 | 瓦克松生物技术公司 | 用montanide乳化三表位肽的方法以及执行该方法的试剂盒 |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105377292A (zh) * | 2013-04-07 | 2016-03-02 | 博德研究所 | 用于个性化瘤形成疫苗的组合物和方法 |
| JP6788500B2 (ja) | 2013-10-23 | 2020-11-25 | アメリカ合衆国 | Ｍｕｃ１−ｃ癌タンパク質のｈｌａ−ａ２４アゴニストエピトープ及び組成物及び使用方法 |
| WO2015077717A1 (en) | 2013-11-25 | 2015-05-28 | The Broad Institute Inc. | Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status |
| US11725237B2 (en) | 2013-12-05 | 2023-08-15 | The Broad Institute Inc. | Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data |
| NZ721908A (en) | 2013-12-20 | 2022-12-23 | Massachusetts Gen Hospital | Combination therapy with neoantigen vaccine |
| EP2977059A1 (en) * | 2014-07-22 | 2016-01-27 | Vaxon Biotech | Immunogenic polypeptide composed of HLA-B7 restricted tumor antigen-derived optimized cryptic peptides, and uses thereof |
| EP3757211A1 (en) | 2014-12-19 | 2020-12-30 | The Broad Institute, Inc. | Methods for profiling the t-cell-receptor repertoire |
| US10975442B2 (en) | 2014-12-19 | 2021-04-13 | Massachusetts Institute Of Technology | Molecular biomarkers for cancer immunotherapy |
| US10835585B2 (en) | 2015-05-20 | 2020-11-17 | The Broad Institute, Inc. | Shared neoantigens |
| WO2018140391A1 (en) | 2017-01-24 | 2018-08-02 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide |
| KR20210144737A (ko) * | 2019-03-04 | 2021-11-30 | 유니버시티 헬스 네트워크 | T 세포 수용체 및 이의 사용 방법 |
| CN111363026B (zh) * | 2020-03-31 | 2022-03-25 | 浙江省中医院、浙江中医药大学附属第一医院（浙江省东方医院） | 一种增强抗原多肽亲和力和稳定性的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1462456A1 (en) * | 2001-12-10 | 2004-09-29 | Kyogo Itoh | Tumor antigens |
| EP1715042A1 (en) * | 2004-01-20 | 2006-10-25 | Aichi Prefecture | EPITOPE/PEPTIDE RECOGNIZED BY HLA-A2402-RESTRCITED Ep-CAM-SPECIFIC CTL AND USE OF THE SAME |
| WO2007094924A2 (en) * | 2006-01-19 | 2007-08-23 | The Regents Of The University Of California | Human telomerase reverse transcriptase peptides |
| WO2008010010A1 (en) * | 2006-07-12 | 2008-01-24 | Vaxon Biotech | Identification, optimization and use of cryptic hla-b7 epitopes for immunotherapy |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6337200B1 (en) | 1998-03-31 | 2002-01-08 | Geron Corporation | Human telomerase catalytic subunit variants |
| EP1455816A4 (en) * | 2000-10-19 | 2007-03-28 | Epimmune Inc | HLA CLASS I AND II BINDING PEPTIDES AND THEIR USE |
| JP4624377B2 (ja) * | 2001-12-10 | 2011-02-02 | 株式会社グリーンペプタイド | 腫瘍抗原 |
| US20060018915A1 (en) * | 2002-04-05 | 2006-01-26 | Glenn Ishioka | Heteroclitic analogs and related methods |
-
2009
- 2009-04-02 ES ES09785926.8T patent/ES2608715T3/es active Active
- 2009-04-02 PL PL09785926T patent/PL2413956T3/pl unknown
- 2009-04-02 WO PCT/IB2009/005753 patent/WO2010112962A1/en active Application Filing
- 2009-04-02 JP JP2012502822A patent/JP5756792B2/ja active Active
- 2009-04-02 CN CN200980158591.2A patent/CN102387813B/zh active Active
- 2009-04-02 DK DK09785926.8T patent/DK2413956T3/en active
- 2009-04-02 CA CA2756238A patent/CA2756238A1/en not_active Abandoned
- 2009-04-02 BR BRPI0924827A patent/BRPI0924827A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2009-04-02 PT PT97859268T patent/PT2413956T/pt unknown
- 2009-04-02 HU HUE09785926A patent/HUE030195T2/en unknown
- 2009-04-02 EP EP09785926.8A patent/EP2413956B1/en active Active
- 2009-04-02 US US13/258,227 patent/US8900600B2/en active Active
-
2016
- 2016-12-13 HR HRP20161710TT patent/HRP20161710T1/hr unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1462456A1 (en) * | 2001-12-10 | 2004-09-29 | Kyogo Itoh | Tumor antigens |
| EP1715042A1 (en) * | 2004-01-20 | 2006-10-25 | Aichi Prefecture | EPITOPE/PEPTIDE RECOGNIZED BY HLA-A2402-RESTRCITED Ep-CAM-SPECIFIC CTL AND USE OF THE SAME |
| WO2007094924A2 (en) * | 2006-01-19 | 2007-08-23 | The Regents Of The University Of California | Human telomerase reverse transcriptase peptides |
| WO2008010010A1 (en) * | 2006-07-12 | 2008-01-24 | Vaxon Biotech | Identification, optimization and use of cryptic hla-b7 epitopes for immunotherapy |
| WO2008010098A2 (en) * | 2006-07-12 | 2008-01-24 | Vaxon Biotech | Identification, optimization and use of cryptic hla-b7 epitopes for immunotherapy |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| A YAO，ET AL: "Identification of parathyroid hormone-related protein-derived peptides immunogenic in human histocompatibility leukocyte antigen-A24+ prostate cancer patients", 《BRITISH JOURNAL OF CANCER》 * |
| ACCESSION NO: "AAD17210", 《GENBANK》 * |
| REINHARD MAIER，ET AL: "Peptlde motifs of HLA-A3, -A24, and -B7 molecules as determined by pool sequencing", 《LMMUNOGENETIC》 * |
| SATOKO MORISHIMA，ET AL: "Identification of an HLA-A24-restricted cytotoxic T lymphocyte epitope from human papillomavirus type-16 E6: The combined effects of bortezomib and interferon-γ on the presentation of a cryptic epitope", 《INT. J. CANCER》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106061499A (zh) * | 2013-12-18 | 2016-10-26 | 瓦克松生物技术公司 | 用montanide乳化三表位肽的方法以及执行该方法的试剂盒 |
| CN106061499B (zh) * | 2013-12-18 | 2020-07-17 | 瓦克松生物技术公司 | 用montanide乳化三表位肽的方法以及执行该方法的试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT2413956T (pt) | 2016-12-30 |
| EP2413956A1 (en) | 2012-02-08 |
| CA2756238A1 (en) | 2010-10-07 |
| WO2010112962A1 (en) | 2010-10-07 |
| CN102387813B (zh) | 2018-07-31 |
| ES2608715T3 (es) | 2017-04-12 |
| HUE030195T2 (en) | 2017-04-28 |
| US20120082692A1 (en) | 2012-04-05 |
| DK2413956T3 (en) | 2017-01-09 |
| HRP20161710T1 (hr) | 2017-02-24 |
| JP5756792B2 (ja) | 2015-07-29 |
| US8900600B2 (en) | 2014-12-02 |
| JP2012522500A (ja) | 2012-09-27 |
| BRPI0924827A2 (pt) | 2019-01-08 |
| PL2413956T3 (pl) | 2017-06-30 |
| EP2413956B1 (en) | 2016-09-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102387813A (zh) | 用于免疫治疗的隐蔽hla-a24表位的鉴定、优化和用途 | |
| ES2590462T3 (es) | Polinucleótidos que codifican epítopos hTERT restringidos al MHC clase I HLA-B7, análogos de los mismos y poliepítopos | |
| JP2017522312A5 (zh) | ||
| CN102076843A (zh) | 包含prfa*突变体李斯特菌的组合物及其使用方法 | |
| CA2624498A1 (fr) | Epitopes t cd4+ de la survivine et leurs applications | |
| CN102459322B (zh) | 用于免疫治疗的hla-b*0702共有表位的鉴定、优化与应用 | |
| US20170202936A1 (en) | Identification, Optimization And Use Of Cryptic HLA-B7 Epitopes For Immunotherapy | |
| Sundaram et al. | A novel multivalent human CTL peptide construct elicits robust cellular immune responses in HLA-A∗ 0201 transgenic mice: implications for HTLV-1 vaccine design | |
| ES2340357T3 (es) | Antigeno tumoral. | |
| US20230203130A1 (en) | A peptide cocktail | |
| Sun et al. | Enhanced anti-colon cancer immune responses with modified eEF2-derived peptides | |
| Dakappagari et al. | Intracellular delivery of a novel multiepitope peptide vaccine by an amphipathic peptide carrier enhances cytotoxic T‐cell responses in HLA‐A* 201 mice | |
| US20180355015A1 (en) | Methods and materials for generating t cells | |
| JP6255360B2 (ja) | 共有ｈｌａ−ｂ＊０７０２エピトープの同定、最適化および免疫療法のための使用 | |
| Ercolini | Dissecting the mechanisms of CD8+ T cell tolerance to the proto-oncogene HER-2/NEU in the HER-2/NEU transgenic mouse model of mammary cancer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1165289 Country of ref document: HK |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230809 Address after: Irish Dublin Patentee after: Kriptec Biopharmaceutical Co.,Ltd. Address before: Paris France Patentee before: VAXON BIOTECH |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20231116 Address after: Room 301, No. 817 Lianting Road, Xiang'an District, Xiamen City, Fujian Province Patentee after: Jinwei Biopharmaceutical Technology Co.,Ltd. Address before: Irish Dublin Patentee before: Kriptec Biopharmaceutical Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |