CN102380089A - 中介素1-53在制备糖代谢紊乱治疗药物中的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了中介素1-53在制备糖代谢紊乱治疗药物中的新用途。中介素1-53可用于制备预防和/或治疗动物糖代谢紊乱产品，所述糖代谢紊乱为下述四种疾病中的至少一种：糖尿病、胰岛素抵抗、高血糖症和高胰岛素血症。所述预防和/或治疗动物糖代谢紊乱产品活性成分为中介素1-53。本发明使用中介素1-53的生理盐水溶液对高脂饮食小鼠持续治疗四周，明显改善了小鼠的胰岛素抵抗，显著抑制了空腹血糖浓度的升高和血浆胰岛素含量升高。
Description
技术领域
本发明涉及中介素1-53的新用途，特别涉及中介素1-53在制备糖代谢紊乱治疗药物中的新用途。
背景技术
随着我国居民饮食结构的西化以及多坐少动生活方式的流行，与糖脂代谢紊乱相关的重大代谢疾病如2型糖尿病、肥胖症、高脂血症和脂肪肝的发生显著增加。据最新的流行病学调查，我国目前大约3亿多具有各种脂代谢紊乱的病人，糖尿病总体患病率已达10.7‰，在城市人口中患病率已高达27.5‰。与西方国家不同，在我国众多脂代谢紊乱疾病中，高甘油三酯血症和非酒精性脂肪肝是最常见的两种类型。我国高甘油三酯血症患病率超过11.9％，发达地区非酒精性脂肪肝(NonAlcoholic FattyLiver Disease，简称NAFLD)患病率高达15％，在肥胖人群中，NAFLD患病率高达50％以上。据《2002年(第二届)中国居民营养与健康状况调查》发布的中国一线城市百万健康人群数据，NAFLD及高甘油三脂血症已经是男性居民位列前两位、女性居民位列第九和第十位的重大代谢性疾病。目前日益增多的脂肪肝主要为NAFLD，约占脂肪肝的90％。随着年龄的增长NAFLD的患病率逐年增加，在老年人群NAFLD非常常见，另外儿童NAFLD的发病率在我国也显著增加，说明了我国高脂血症和NAFLD发病有明显广泛性。大量证据表明：高甘油三脂血症和高脂肪酸血症(简称为高脂血症)是NAFLD的重要诱因；而作为代谢综合征的一种肝脏表现，NAFLD与胰岛素抵抗和2型糖尿病互为因果，共同促进了糖脂代谢紊乱性疾病、高血压、心脑血管疾病的发生和发展，已成为我国非常严重的公共卫生问题。因此，目前非常迫切需要针对2型糖尿病和非酒精性脂肪肝开发有我国自主知识产权的治疗药物。
中介素(Intermedin，IMD)是2004年美国和日本学者相继发现的降钙素基因相关肽(CGRP)家族(ADM、CGRP、降钙素以及胰岛淀粉样多肽)的新成员，它们的基因具有高度同源性。人IMD基因定位于22号染色体，编码由148个氨基酸残基组成的IMD前体蛋白，N末端为一信号肽，IMD前体分子上有多个蛋白酶切位点，可在体内剪切为含47个氨基酸的Intermedin1-47(IMD1-47)和含40个氨基酸的Intermedin8-47(IMD8-47)两个活性片断。在prepro-IMD分子的第93和94位为一对精氨基酸残基，是内源性肽酶的降解位点，在体内可降解为prepro-AMD95-147即中介素1-53(IMD1-53)。人中介素1-53是由53个氨基酸残基组成的多肽，其氨基酸序列如序列表中的序列1所示，此人工合成多肽序列对应于人中介素第95至147位氨基酸残基(JBiol Chem.2004 Feb 20；279(8)：7264-74.)。
发明内容
本发明的目的是提供一种中介素1-53的新用途。该新用途为中介素1-53在制备预防和/或治疗糖代谢紊乱产品中的应用。
所述糖代谢紊乱为下述四种疾病中的至少一种：糖尿病、胰岛素抵抗、高血糖症和高胰岛素血症。
所述糖尿病具体可为2型糖尿病。
所述预防和/或治疗动物糖代谢紊乱产品具有下述至少一种特性：
1)抑制动物空腹血糖浓度的升高，具体可为抑制高脂饮食引起的动物空腹血糖浓度的升高；
2)抑制动物血浆胰岛素含量的升高，具体可为抑制高脂饮食引起的动物血浆胰岛素含量的升高；
3)改善动物葡萄糖耐量异常，具体可为改善高脂饮食引起的动物葡萄糖耐量异常；
4)改善动物胰岛素耐量异常，具体可为改善高脂饮食引起的动物胰岛素耐量异常；
5)改善动物胰岛素抵抗，具体可为改善高脂饮食引起的动物胰岛素抵抗。
所述预防和/或治疗糖代谢紊乱产品的活性成分为中介素1-53。
所述预防和/或治疗糖代谢紊乱产品为中介素1-53的生理盐水溶液。
所述中介素1-53在所述生理盐水中的浓度为5.978μmol/L。
所述中介素1-53的氨基酸序列为序列表中序列1所示的序列。
所述生理盐水为0.9％(质量分数)的氯化钠水溶液。
经本发明的实验证明，所述中介素1-53可用于制备预防和/或治疗动物(如人、鼠)糖代谢紊乱产品中的应用。
本发明使用中介素1-53的生理盐水溶液对高脂饮食小鼠持续治疗四周，明显改善了小鼠的胰岛素抵抗，显著抑制了空腹血糖浓度的升高和血浆胰岛素含量的升高，证明中介素1-53可应用于预防和/或治疗糖代谢紊乱产品的制备。
附图说明
图1为空腹血糖曲线。其中，Chow代表对照组即普通饮食喂养，HFD代表高脂饮食组，HFD+IMD代表高脂饮食+治疗组；*表示与相应时间点的对照组(Chow)相比具有统计学差异(P＜0.05)，#表示与相应时间点的高脂饮食组(HFD)相比具有统计学差异(P＜0.05)。
图2为葡萄糖耐量曲线。其中，Chow代表对照组即普通饮食喂养，HFD代表高脂饮食组，HFD+IMD代表高脂饮食+治疗组；*表示与相应时间点的对照组(Chow)相比具有统计学差异(P＜0.05)，#表示与相应时间点的高脂饮食组(HFD)相比具有统计学差异(P＜0.05)。
图3为胰岛素耐量曲线。其中，Chow代表对照组即普通饮食喂养，HFD代表高脂饮食组，HFD+IMD代表高脂饮食+治疗组；*表示与相应时间点的对照组(Chow)相比具有统计学差异(P＜0.05)，#表示与相应时间点的高脂饮食组(HFD)相比具有统计学差异(P＜0.05)。
图4为IMD1-53治疗后的高脂饮食小鼠肝脏外观。其中，从左至右依次为：普通饮食组(apoE-/-)、高脂饮食组(apoE-/-+HFD)、高脂饮食+治疗组(apoE-/-+HFD+IMD)。
图5为IMD1-53治疗后的高脂饮食小鼠肝脏组织切片苏木精-伊红染色光镜照相图。其中，从上至下依次为：普通饮食组(apoE-/-)、高脂饮食组(apoE-/-+HFD)、高脂饮食+治疗组(apoE-/-+HFD+IMD)，左列为200倍放大图，右列为1000倍放大图。
图6为IMD1-53治疗后的高脂饮食小鼠肝脏组织切片油红O染色光镜照相图。其中，从上至下依次为：普通饮食组(apoE-/-)、高脂饮食组(apoE-/-+HFD)、高脂饮食+治疗组(apoE-/-+HFD+IMD)，左列为200倍放大图，右列为1000倍放大图。
图7为各处理小鼠的血脂外观。其中，从左至右依次为：对照组(C57BL/6J小鼠)、普通饮食组(apoE-/-)、普通饮食+治疗组(apoE-/-+IMD)、高脂饮食组(apoE-/-+HFD)、高脂饮食+治疗组(apoE-/-+HFD+IMD)。
图8为快速蛋白液相色谱(FPLC)法测定各处理小鼠的血浆脂蛋白图谱。其中，vLDL为极低密度脂蛋白，LDL为低密度脂蛋白、HDL为高密度脂蛋白。
图9为油红O染色显示各处理小鼠的主动脉粥样硬化斑块分布。其中，从左到右依次为：对照组(C57BL/6J)、普通饮食组(apoE-/-)、普通饮食+治疗组(apoE-/-+IMD)、高脂饮食组(apoE-/-+HFD)、高脂饮食+治疗组(apoE-/-+HFD+IMD)。
图10为各处理小鼠主动脉根部切片的油红O染色结果。其中，从左到右各列依次为：普通饮食组(apoE-/-)、高脂饮食组(apoE-/-+HFD)、高脂饮食+治疗组(apoE-/-+HFD+IMD)，每列分别为该组的3个不同样品结果。
图11为各处理小鼠经油红O染色的主动脉粥样硬化斑块面积定量结果。其中，左图横坐标从左至右依次代表C57BL/6J对照组、apoE-/-普通饮食组、apoE-/-高脂饮食组、apoE-/-高脂饮食+治疗组；右图横坐标从左至右依次代表apoE-/-普通饮食组、apoE-/-普通饮食+治疗组；*表示经单因素方差分析检验与普通饮食组(apoE-/-)相比有统计学差异(在α＝0.05水平差异显著)，#表示经单因素方差分析检验与高脂饮食组(apoE-/-+HFD)相比有统计学差异(在α＝0.05水平差异显著)。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所用的材料如下：
雄性C57BL/6J小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司；
载脂蛋白E(apoE)基因敲除的雄性C57BL/6J小鼠(apoE-/-)，购自北京维通利华实验动物技术有限公司；
中介素1-53(IMD1-53)，其氨基酸序列见序列表中的序列1，购自康肽生物科技(北京)有限公司，货号为010-60；
生理盐水：0.9％(质量百分含量)的氯化钠水溶液；
渗透泵：
model 2004，DURECT Corp.，Cupertino，CA，USA；
IMD1-53溶液：IMD1-53溶于生理盐水使IMD1-53的浓度为5.978μmol/L；
普通饮食的饲料成分：蛋白20.3％，碳水化合物66.0％，脂肪5.0％；
1000克普通饲料含酪蛋白(200克)、DL-蛋氨酸(3克)、玉米淀粉(150克)、蔗糖(500克)、纤维素BW200(50克)、玉米油(50克)、矿物质混合物S10001(35克)、混合维生素V10001(10克)、重酒石酸胆碱(2克)。
高脂饮食的饲料成分：蛋白20.0％，碳水化合物50.0％，脂肪21.0％；1001.54克高脂饲料含酪蛋白(195克)、DL-蛋氨酸(3克)、玉米淀粉(50克)、糊精-麦芽糖复合剂10(100克)、蔗糖(341克)、纤维素(50克)、乳脂(200克)、玉米油(10克)、矿物质混合物S10001(35克)、碳酸钙(4克)、混合维生素V10001(10克)、重酒石酸胆碱(2克)、胆固醇(1.5克)、乙氧喹(0.04克)。
胰岛素注射液：速效中性胰岛素注射液，江苏万邦生化医药股份有限公司，H10890001，胰岛素的浓度为40U/ml。
实施例1、中介素1-53(IMD1-53)对小鼠胰岛素抵抗的改善作用
取30只16周龄大小的雄性C57BL/6J小鼠，随机分成3组，每组10只，一组为对照组(饲喂普通饮食饲料)，一组高脂饮食组(饲喂高脂饮食饲料)，一组为高脂饮食+治疗组(饲喂高脂饮食饲料)。三组小鼠先按照各自饮食喂养4周后，在对照组和高脂饮食组的小鼠皮下植入仅含生理盐水的渗透泵，使渗透泵泵出生理盐水的速率为0.25μl/h；在高脂饮食+治疗组的小鼠皮下植入预先灌注好IMD1-53溶液的渗透泵，使渗透泵泵出IMD1-53的速率为300ng/kg/h。植入手术完成两天后，对对照组、普通饮食组小鼠开始普通饮食喂养，对高脂饮食+治疗组的小鼠开始高脂饮食喂养，与普通饮食喂养相比，高脂饮食喂养增加16％脂肪和0.15％胆固醇。
1、血糖测定：从喂养开始，每周测定空腹血糖一次，测定方式为：每周二上午8点开始禁食，6小时后尾静脉取血，用活力型罗氏血糖试纸(Accu-
Active TestStrip)(罗氏诊断产品(上海)有限公司，ECS000094)测定小鼠的血糖水平，结果如图1所示。结果表明，高脂饮食喂养4周后，小鼠血糖明显升高，从第5周开始给予皮下IMD1-53治疗4周，持续给药第3周和第周4时，可明显抑制高脂饮食长期喂养后引起的空腹血糖浓度升高。
2、胰岛素测定：小鼠饲养至第8周时，取血用ELISA法(RAT/MOUSE INSULIN ELISAKIT-96-Well Plate，MILLIPORE，6 Research Park Drive，St.Charles，Missouri 63304U.S.A.，EZRMI-13K)测定血浆胰岛素水平(表1)，结果显示高脂饮食组小鼠血浆胰岛素浓度升高，而IMD1-53治疗后血浆胰岛素浓度显著下降，即IMD1-53治疗可抑制高脂饮食引起的血浆胰岛素浓度的升高，说明IMD1-53治疗可以改善高脂饮食引起的高胰岛素血症。
表1.各处理小鼠的血浆胰岛素水平
注：*指经单因素方差分析与对照组(Chow)相比在α＝0.05水平差异显著，#指经单因素方差分析与高脂饮食组(HFD)相比在α＝0.05水平差异显著。
3、胰岛素抵抗检测：小鼠饲养至第8周时，进行糖耐量(GTT)、胰岛素耐量(ITT)和正糖高胰岛素钳夹试验。
1)糖耐量(GTT)试验：小鼠禁食12小时后，按照3g/kg体重进行20％(质量分数)葡萄糖溶液灌胃，分别于灌胃后0分钟、15分钟、30分钟、60分钟、90分钟，通过尾静脉取血检测血糖水平(方法同步骤1)，结果如图2所示。结果表明，高脂饮食喂养8周后，与普通饮食组相比，葡萄糖灌胃后的高脂饮食组小鼠的血糖峰值显著升高，且其血糖下降速度也显著减慢，而在高脂饮食+治疗组，与高脂饮食组相比，其血糖峰值及血糖下降速度均有明显改善，说明IMD1-53治疗4周可明显改善高脂饮食喂养引起的小鼠葡萄糖耐量异常。
2)胰岛素耐量(ITT)：小鼠禁食4小时后，按照2U/kg体重腹腔注射胰岛素，分别于胰岛素注射后0分钟、15分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、150分钟，通过尾静脉取血检测血糖水平(方法同步骤1)，结果如图3所示。结果表明，高脂饮食喂养8周后，与普通饮食组相比，腹腔注射胰岛素后的高脂饮食组小鼠的血糖下降速度减慢，而其血糖恢复速度显著加快，而在高脂饮食+治疗组，相同时间点的血糖水平均低于高脂饮食组，说明IMD1-53治疗4周可明显改善高脂饮食喂养引起的小鼠胰岛素耐量异常。
3)正糖高胰岛素钳夹试验：小鼠禁食12小时后，称重；麻醉状态下，分别做双侧颈静脉插管，固定插管，并保持颈总静脉血流通畅。左侧连接装有胰岛素溶液(0.9％生理盐水配置，浓度为270mU/ml)的微量注射泵，调节泵流速使胰岛素注射速度为6mU/kg/min；右侧连接20％(质量分数)葡萄糖溶液。在开始注射胰岛素前，测定基础状态小鼠血糖值，开始注射胰岛素后，每10分钟尾静脉测定血糖(方法同步骤1)一次，当血糖低于120mg/dL时，逐渐增加20％葡萄糖的注射速度，并记录，直至血糖水平稳定在120±10mg/dL，并维持60分钟，记录此时的葡萄糖注射速度。葡萄糖注射速度越快，表明小鼠的胰岛素敏感性越高，反之则存在胰岛素抵抗。结果如表2所示，结果表明，高脂饮食喂养8周后，高脂饮食组葡萄糖注射速率明显下降，而在高脂饮食+治疗组，与高脂饮食组相比，其葡萄糖注射速率明显增加，说明IMD1-53治疗4周可明显改善高脂饮食喂养引起的小鼠胰岛素抵抗。
表2.正糖高胰岛素钳夹试验中各处理小鼠的葡萄糖注射速率(平均值±标准差)
注：*指经单因素方差分析与对照组(Chow)相比在α＝0.05水平差异显著，#指经单因素方差分析与高脂饮食组(HFD)相比在α＝0.05水平差异显著。
实施例2、中介素1-53(IMD1-53)对小鼠脂肪肝的改善作用
1、试验方法
取55只20周龄大小的apoE-/-小鼠，随机分成四组：普通饮食组(18只)、普通饮食+治疗组(10)、高脂饮食组(15只)、高脂饮食+治疗组(12只)；以普通饮食饲养的野生型20周龄大小的雄性C57BL/6J小鼠为对照组(9只)。在对照组、普通饮食组和高脂饮食组的小鼠皮下植入仅含生理盐水的渗透泵，使渗透泵泵出生理盐水的速率为0.25μl/h；在普通饮食+治疗组和高脂饮食+治疗组的小鼠皮下植入预先灌注好IMD1-53溶液的渗透泵，使渗透泵泵出IMD1-53的速率为300ng/kg/h。植入手术完成两天后，对对照组、普通饮食组和普通饮食+治疗组的小鼠开始普通饮食喂养，对高脂饮食组和高脂饮食+治疗组的小鼠开始高脂饮食喂养，与普通饮食喂养相比，高脂饮食喂养增加16％脂肪和0.15％胆固醇。
喂养4周后，禁食12小时后，10％水合氯醛麻醉小鼠，剖开腹腔，微距照相机拍摄肝脏大体外观(图4)。切取肝脏组织称重，计算肝脏重量(表3)，并切取部分肝脏组织进行石蜡和冰冻切片，进行苏木精-伊红和油红O染色鉴定(图5和图6)，以及用甲醇氯仿抽提肝脏组织脂质成分，测定甘油三酯和胆固醇的含量(表3)。
表3.IMD1-53对高脂饮食小鼠脂肪肝的定量结果
注：*指经单因素方差分析与普通饮食组(apoE-/-)相比在α＝0.05水平差异显著，#指经单因素方差分析与高脂饮食组(apoE-/-+HFD)相比在α＝0.05水平差异显著。
2、试验结果
图4表明，高脂饮食组(apoE-/-+HFD)小鼠的肝脏外观明显发白，表明其脂质蓄积明显多于普通饮食组(apoE-/-)小鼠，而经过4周IMD1-53治疗的高脂饮食小鼠(apoE-/-+HFD+IMD)肝脏脂质明显少于未经治疗的高脂饮食组(apoE-/-+HFD)。
图5表明，高脂饮食组(apoE-/-+HFD)小鼠的肝脏石蜡切片苏木精伊红染色显示细胞内有较多空泡结构，表明其细胞内脂质蓄积明显多于普通饮食组(apoE-/-)小鼠，而经过4周IMD1-53治疗的高脂饮食小鼠(apoE-/-+HFD+IMD)肝细胞内空泡结构明显少于未经治疗的高脂饮食组(apoE-/-+HFD)。
图6表明，高脂饮食组(apoE-/-+HFD)小鼠的肝脏冰冻切片油红O染色显示胞内有大量油红O染色阳性脂滴形成，说明其细胞内脂质蓄积明显多于普通饮食组(apoE-/-)小鼠，而经过4周IMD1-53治疗的高脂饮食小鼠(apoE-/-+HFD+IMD)肝细胞内油红O染色阳性脂滴明显少于未经治疗的高脂饮食组(apoE-/-+HFD)。
表3结果显示，小鼠肝脏重量、肝脏组织中胆固醇含量在普通饮食+治疗组(apoE-/-+IMD)小鼠中显著低于普通饮食组(apoE-/-)；小鼠肝脏重量、肝脏组织中甘油三酯和胆固醇含量在高脂饮食组(apoE-/-+HFD)小鼠中均明显高于普通饮食组(apoE-/-)，而在高脂饮食+治疗组(apoE-/-+HFD+IMD)小鼠中均显著低于高脂饮食组(apoE-/-+HFD)。
综上所述，高脂饮食可以显著增加小鼠肝脏脂质蓄积，而给予IMD1-53治疗后，则可以显著减少高脂饮食引起的肝脏脂质蓄积。
实施例3、IMD1-53对小鼠血脂谱的改善作用
1、试验方法
取55只20周龄大小的apoE-/-小鼠，随机分成四组：普通饮食组(18只)、普通饮食治疗组(10)、高脂饮食组(15只)、高脂饮食+治疗组(12只)，以普通饮食的野生型20周龄大小的C57BL/6J小鼠为对照组(9只)。在对照组、普通饮食组和高脂饮食组的小鼠皮下植入仅含生理盐水的渗透泵，使渗透泵泵出生理盐水的速率为0.25μl/h；在普通饮食+治疗组和高脂饮食+治疗组的小鼠皮下植入预先灌注好IMD1-53溶液的渗透泵，使渗透泵泵出IMD1-53的速率为300ng/kg/h。植入手术完成两天后，对对照组、普通饮食组和普通饮食+治疗组的小鼠开始普通饮食喂养，对高脂饮食组和高脂饮食+治疗组的小鼠开始高脂饮食喂养，与普通饮食喂养相比，高脂饮食喂养增加16％脂肪和0.15％胆固醇。
喂养4周，禁食12小时后，通过内眦获取血液样本，在约1ml血液中加10％EDTA-Na2抗凝，3000g离心10分钟取血浆。通过微距照相机直接拍摄喂养4周后所取的血浆外观(图7)，按照Yamaguchi Y等人的方法(J Chromatogr B Biomed Sci Appl.1998Sep 25；716(1-2)：57-64.，采用快速高效液相色谱(FPLC)分析血浆脂蛋白(包括极低密度脂蛋白(vLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL))组成(图8)。喂养4周期间，分别于第7、14、21天，禁食12小时后，通过内眦获取血液样本，在约100微升血液中加10％EDTA-Na2抗凝，3000g离心10分钟取血浆，加上第28天所取血浆样本，均采用血浆总胆固醇测定试剂盒、血浆甘油三酯测定试剂盒、血浆低密度脂蛋白(LDL)测定试剂盒以及血浆高密度脂蛋白(HDL)测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，000000180、000000220、000000210和000000190)分别对血浆中的总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)进行定量测定，并通过TC减去LDL-C和HDL-C，计算出极低密度脂蛋白胆固醇(vLDL-C)(表4)。
表4.各处理组小鼠的血浆中各成分含量(mg/dL)
注：*指经单因素方差分析与普通饮食组(apoE-/-)相比在α＝0.05水平差异显著，#指经单因素方差分析与高脂饮食组(apoE-/-+HFD)相比在α＝0.05水平差异显著。
2、试验结果
图7中，对照组(C57)血浆无色透明，普通饮食组(apoE-/-)血浆较浑浊，普通饮食+治疗组(apoE-/-+IMD)血浆的浑浊程度低于普通饮食组(apoE-/-)，高脂饮食组(apoE-/-+HFD)血浆呈乳白色，高脂饮食+治疗组(apoE-/-+HFD+IMD)血浆浑浊程度明显低于高脂饮食+治疗组(apoE-/-+HFD+IMD)。说明高脂饮食可以显著加重apoE-/-小鼠的乳糜血，而经过IMD1-53治疗，可以在一定程度上减轻高脂apoE-/-小鼠的乳糜血。
图8中，各处理组的血浆极低密度脂蛋白(vLDL)峰由高到底依次为(apoE-/-+HFD)＞(apoE-/-+HFD+IMD)＝(apoE-/-)＞(apoE-/-+IMD)＞C57，低密度脂蛋白(LDL)峰由高到底依次为(apoE-/-+HFD)＞(apoE-/-+HFD+IMD)＝(apoE-/-)＝(apoE-/-+IMD)＞C57，高密度脂蛋白(HDL)峰由高到底依次为(apoE-/-+HFD+IMD)＝C57＞(apoE-/-+HFD)＝(apoE-/-+IMD)＞(apoE-/-)。说明高脂饮食可以显著增加apoE-/-小鼠血液中极低密度脂蛋白(vLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量，而经过IMD1-53治疗后，可以明显降低高脂饮食apoE-/-小鼠血液中极低密度脂蛋白(vLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量，同时使高密度脂蛋白(HDL)的含量明显增加。
表4结果显示，高脂饮食的apoE-/-小鼠(apoE-/-+HFD)血浆中总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、极低密度脂蛋白胆固醇(vLDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量较对照C57BL/6J和apoE-/-均有显著升高，同时高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量较对照C57BL/6J显著降低，且较apoE-/-显著升高；而经过IMD1-53治疗的高脂饮食apoE-/-小鼠(apoE-/-+HFD+IMD)血浆中的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量明显高于未经IMD1-53治疗的高脂饮食apoE-/-小鼠(apoE-/-+HFD)，其它各项(TG、TC、vLDL-C和LDL-C)含量均显著低于apoE-/-+HFD。
综上所述，给予IMD1-53治疗，可以在一定程度上减轻apoE-/-小鼠的乳糜血(图7)，降低血浆中vLDL-C的含量(图8)；高脂饮食可以显著加重apoE-/-小鼠的乳糜血、使血浆中vLDL-C、LDL-C、HDL-C、TG和TC的含量显著升高；而给予IMD1-53治疗后，高脂饮食引起的apoE-/-小鼠的乳糜血得到明显减轻，血浆的vLDL-C、LDL-C、TG和TC含量的升高均有显著下降，即给予IMD1-53治疗可明显抑制高脂饮食引起的乳糜血、血浆的vLDL、LDL、TG和TC含量的升高，同时给予IMD1-53治疗后，高脂饮食引起的血浆的HDL-C的含量则进一步升高(表4)。上述结果表明，IMD1-53治疗可以显著改善高脂血症。
实施例4、IMD1-53对小鼠动脉粥样硬化斑块的改善作用
1、试验方法
实施例3小鼠取血处死后，经PBS和4％多聚甲醛灌流，将颈总动脉及其分支、主动脉以及髂动脉及其分支游离出来，并从小弯侧将主动脉及其所有分支剖开，固定于黑色蜡盘上，经4％多聚甲醛固定后，进行油红O染色，显示动脉内膜的粥样斑块大小，取主动脉通过微距照相机直接拍摄(图9)。取主动脉根部切片进行40倍光镜扫描(图10)。
上述剖开的主动脉用微距相机拍摄后，采用Quantity One软件对主动脉内膜的粥样硬化斑块(lesion，红色部分)面积及主动脉(aorta，全部内膜)面积进行定量，统计计算斑块面积占主动脉面积的百分比，对主动脉粥样硬化斑块面积严重程度进行分析(图11)。
2、试验结果
图9中，对照组无红色的粥样斑块，apoE-/-给予普通饮食小鼠的动脉表面分布少量红色粥样斑块，apoE-/-给予普通饮食及IMD1-53治疗的小鼠只有在弓部及分叉处动脉表面有少量红色粥样斑块，apoE-/-给予高脂饮食小鼠的在整根主动脉及其分叉处动脉表面均分布大量的红色粥样斑块，apoE-/-给予高脂饮食及IMD1-53治疗的小鼠只有在弓部及分叉处动脉表面有少量红色粥样斑块。
图10中，apoE-/-给予普通饮食小鼠、apoE-/-给予高脂饮食小鼠、apoE-/-给予高脂饮食及IMD1-53治疗小鼠三组的主动脉瓣膜处均存在不同程度油红O阳性的染色，染色程度大小依次为：apoE-/-+HFD+IMD＝apoE-/-＜apoE-/-+HFD。
图9-11的结果表明，IMD1-53治疗后，apoE-/-小鼠动脉粥样斑块面积有一定程度的减小，而高脂饮食喂养后，apoE-/-小鼠的动脉粥样斑块面积显著增加，给予IMD1-53治疗后，高脂饮食引起的动脉粥样斑块增加被显著抑制。
Claims (10)
1.中介素1-53在制备预防和/或治疗动物糖代谢紊乱产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述糖代谢紊乱为下述四种疾病中的至少一种：糖尿病、胰岛素抵抗、高血糖症和高胰岛素血症。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述糖尿病为2型糖尿病。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：所述预防和/或治疗动物糖代谢紊乱产品具有下述至少一种特性：
1)抑制动物空腹血糖浓度的升高；
2)抑制动物血浆胰岛素含量的升高；
3)改善动物葡萄糖耐量异常；
4)改善动物胰岛素耐量异常；
5)改善动物胰岛素抵抗。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
所述空腹血糖浓度的升高为高脂饮食引起的空腹血糖浓度的升高；
所述血浆胰岛素含量的升高为高脂饮食引起的血浆胰岛素含量升高；
所述葡萄糖耐量异常为高脂饮食引起的葡萄糖耐量异常；
所述胰岛素耐量异常为高脂饮食引起的胰岛素耐量异常；
所述胰岛素抵抗为高脂饮食引起的胰岛素抵抗。
6.根据权利要求1-5中任一所述的应用，其特征在于：所述预防和/或治疗糖代谢紊乱产品的活性成分为中介素1-53。
7.根据权利要求1-6中任一所述的应用，其特征在于：所述预防和/或治疗糖代谢紊乱产品为中介素1-53的生理盐水溶液。
8.根据权利要求1-7中任一所述的应用，其特征在于：所述中介素1-53在所述生理盐水中的浓度为5.978μmol/L。
9.根据权利要求1-8中任一所述的应用，其特征在于：所述中介素1-53的氨基酸序列为序列表中序列1所示的序列。
10.根据权利要求1-9中任一所述的应用，其特征在于：所述生理盐水为0.9％(质量分数)的氯化钠水溶液。
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| WO2009046852A1 (en) * | 2007-09-11 | 2009-04-16 | Mondobiotech Laboratories Ag | Therapeutic uses of intermedin 47 and 53 peptides |
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