CN102368061A

CN102368061A - 一种酒石酸托特罗定原料或制剂的有关物质检测方法

Info

Publication number: CN102368061A
Application number: CN2011100682702A
Authority: CN
Inventors: 赵志全; 刘阿利; 崔祥祯
Original assignee: Lunan Pharmaceutical Group Corp
Current assignee: Lunan Pharmaceutical Group Corp
Priority date: 2011-03-22
Filing date: 2011-03-22
Publication date: 2012-03-07

Abstract

本发明涉及一种酒石酸托特罗定原料或制剂的有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，固定相是氰基键和硅胶为填料的色谱柱，流动相是磷酸盐缓冲液与乙腈的混合液，检测波长为215nm。本发明的检测方法可以很好地将酒石酸托特罗定与其它杂质有效分离，在215nm下可以全面的检出杂质，准确地测定其杂质的含量，具有操作简单、灵敏度高、结果准确可靠、专一性强的特点。

Description

一种酒石酸托特罗定原料或制剂的有关物质检测方法

技术领域

本发明涉及一种酒石酸托特罗定原料或制剂的有关物质检测方法。

背景技术

托特罗定为竞争性M受体拮抗剂，对膀胱的选择性明显强于对唾液腺的选择性，其对膀胱收缩的抑制约为对唾液腺的20倍。用于治疗由膀胱刺激而引起的小便失禁、尿频和尿急等症状。

目前，酒石酸托特罗定原料和制剂有关物质测定方法已经收载于国家转正标准，质量标准号分别为WS1-(X-181)-2003Z、WS1-(X-182)-2003Z，其中有关物质测定方法以甲醇-磷酸缓冲盐(取水500ml，加磷酸3ml，用二乙胺调节pH值至7.2)(80∶20)为流动相，检测波长为282nm。在此条件下，酒石酸托特罗定保留时间约4.0min，用DAD检测器显示主峰峰纯度不合适，随后降低流动相中有机相的比例，峰形较差，且峰纯度仍不合适，同时试验结果表明选择的波长不合理：在波长282nm下，一些杂质不易检出。

由于涉及酒石酸托特罗定原料和制剂有关物质测定方法的国家标准存在上述缺点，研究一种专属性强、灵敏度高的酒石酸托特罗定原料和制剂中有关物质的检测方法显得至关重要。

发明内容

鉴于现有技术存在的缺陷，本发明的目的在于通过对流动相、固定相、检测波长等方面进行改进，提供了一种酒石酸托特罗定原料或制剂的有关物质检测方法，可用于酒石酸托特罗定及其制剂生产中的质量控制。该方法具有流动相的配制操作简单，分析方法稳定，灵敏度高的特点。

为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验，最终获得如下技术方案：

一种酒石酸托特罗定原料或制剂的有关物质检测方法，其特征在于：用高效液相色谱法进行检测，固定相是氰基键和硅胶为填料的色谱柱，流动相是磷酸盐缓冲液与乙腈的混合液，检测波长为215nm。

进一步，所述的磷酸盐缓冲液含0.05mol/L的磷酸盐及0.5％的三乙胺，pH值为2.0～3.0。

再进一步，所述的流动相中乙腈与磷酸盐缓冲液的比例为20～35∶65～80。

再进一步，所述的磷酸盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢胺或磷酸氢二胺。

本发明的目的还可以这样实现：所述的流动相中乙腈与磷酸盐缓冲液30∶70，磷酸盐缓冲液的pH为2.5。

上述酒石酸托特罗定原料或制剂的有关物质检测方法，取每1ml中含酒石酸托特罗定与杂质N，N二异丙基-3-(2-甲氧基-5甲基苯基)-3-苯丙胺富马酸盐各0.25mg的混合溶液各10μl，依法测定，其分离度不低于10。主峰与杂质A之间的分离度大于10，能保证酸、碱破坏性试验中主峰与杂质A相似位置峰之间的三个杂质检出；破坏性试验中主峰与其后相邻杂质峰的分离度均大于4.0，并且主峰的峰纯度均符合规定；各起始物、中间体均不干扰本品有关物质的测定。

与现有技术相比，本发明涉及的酒石酸托特罗定原料或制剂中有关物质的检测方法具有如下优点和显著的进步：

(1)可以很好地将酒石酸托特罗定与其它杂质有效分离，同时在215nm下可以全面的检出杂质，准确地测定其杂质的含量。

(2)采用本发明的检测方法，酒石酸托特罗定主峰保留时间约9min，主峰与杂质A之间的分离度大于10，能保证酸、碱破坏性试验中主峰与杂质A相似位置峰之间的三个杂质检出；破坏性试验中主峰与其后相邻杂质峰的分离度均大于4.0，并且主峰的峰纯度均符合规定；各起始物、中间体均不干扰本品有关物质的测定，适合酒石酸托特罗定原料或制剂中有关物质的检测。

(3)本发明所建立的高效液相色谱法具有操作简单、灵敏度高、结果准确可靠、专一性强的特点。

附图说明

图1酒石酸托特罗定系统适用性HPLC图谱

图2酒石酸峰定位HPLC图谱

图3酒石酸托特罗定原料有关物质HPLC图谱

图4酒石酸托特罗定原料酸破坏HPLC图谱

图5酒石酸托特罗定原料碱破坏HPLC图谱

图6酒石酸托特罗定有关物质定量限HPLC图谱

图7酒石酸托特罗定有关物质检测限HPLC图谱

图8酒石酸托特罗定片空白辅料HPLC图谱

图9酒石酸托特罗定片样品有关物质HPLC图谱

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步的描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

实施例1系统适用性、样品测定及其强制降解试验

仪器与条件：Waters液相色谱系统，DAD检测器，色谱柱：Agilent CN(250×4.6mm，5μm)；检测波长：215nm；以磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钠7.8g，加水1000ml使溶解，加三乙胺5ml，用磷酸调节pH至2.5)-乙腈(70∶30)为流动相，检测波长为215nm。

试验步骤：

1、系统适用性试验：取酒石酸托特罗定与杂质A(N，N二异丙基-3-(2-甲氧基-5甲基苯基)-3-苯丙胺富马酸盐)各适量，精密称定，加乙腈-水(3∶7)溶解并稀释制成每1ml中均含0.25mg的混合溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，HPLC图谱见附图1。

由图1可见：酒石酸托特罗定主峰的保留时间约为9min，与杂质A之间的分离度为11.6。

2、酒石酸峰定位：取酒石酸约15.8mg，置于100ml加乙腈-水(3∶7)溶解并稀释至刻度，摇匀，依法测定，HPLC图谱见附图2。

由图2可见：酒石酸峰在215nm下吸收较大，因此，计算有关物质时应该予以扣除。

3、酒石酸托特罗定原料有关物质的测定：取酒石酸托特罗定原料约12.5mg，置25ml量瓶中，加乙腈-水(3∶7)溶解并稀释至刻度，摇匀，依法测定，HPLC图谱见附图3。

由图3可见：托特罗定峰与各杂质峰能很好分离，同时，主峰的峰纯度符合规定。

4、酒石酸托特罗定原料酸破坏

取酒石酸托特罗定约25mg，置于50ml量瓶中，加1mol/L的盐酸溶液8ml，室温放置22小时，加1mol/L的氢氧化钠溶液中和，再加乙腈-水(3∶7)溶解并稀释至刻度，摇匀，依法测定，HPLC图谱见附图4。

由图4可见：原料在碱破坏条件下，降解产物较多，主峰与相邻杂质峰均能很好分离，同时，主峰的峰纯度均符合规定。

5、酒石酸托特罗定碱破坏

取酒石酸托特罗定约25mg，置于50ml量瓶中，加1mol/L的氢氧化钠溶液8ml，室温放置21小时，加1mol/L的盐酸溶液中和，再加乙腈-水(3∶7)溶解并稀释至刻度，摇匀，依法测定，HPLC图谱见附图5。

由图5可见：原料在酸破坏条件下，降解产物较多，主峰与相邻杂质峰均能很好分离，同时，主峰的峰纯度均符合规定。

由上述试验结果可知：利用本发明的检测方法能将酒石酸托特罗定与其杂质峰很好分离、检测波长选择合理、主峰的峰纯度符合要求，因此本方法可用于酒石酸托特罗定及其制剂的质量控制。

实施例2灵敏度、制剂专属性及样品测定实验

仪器与条件：Agilent 1200液相色谱系统，DAD检测器，色谱柱：Agilent CN(250×4.6mm，5μm)；检测波长：215nm；以磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钠7.8g，加水1000ml使溶解，加三乙胺5ml，用磷酸调节pH至2.5)-乙腈(70∶30)为流动相，检测波长为215nm。

1、灵敏度试验：取酒石酸托特罗定对照品适量，加乙腈-水(3∶7)逐步稀释制成每1ml中含0.25μg(0.05％)、0.05μg(0.01％)的溶液，精密量取10μl，依法检查，结果见附图6、7。

由图6、图7可见：当浓度为0.25μg/ml，信噪比S/N＝36，浓度为0.05μg/ml，信噪比S/N＝6，结果表明本方法的灵敏度高，0.005％的杂质也能检出。证明该方法灵敏度较好。

2、取酒石酸托特罗定片空白辅料适量(约相当于酒石酸托特罗定12.5mg)置于25ml量瓶中，加乙腈-水(3∶7)溶解并稀释至刻度，摇匀，依法测定，HPLC图谱见附图8。

由图8可见：空白辅料对样品的有关物质测定无干扰。

3、取酒石酸托特罗定片适量(约相当于酒石酸托特罗定12.5mg)置于25ml量瓶中，加乙腈-水(3∶7)溶解并稀释至刻度，摇匀，依法测定，HPLC图谱见附图9。

由图9可见：酒石酸托特罗定片样品有关物质检查符合规定，同时酒石酸托特罗定峰的峰纯度符合要求。

实施例3方法耐用性试验

Agilent 1200液相色谱系统，VWD检测器，色谱柱：Agilent CN(250×4.6mm，5μm)；检测波长：215nm；以磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钾6.8g，加水1000ml使溶解，加三乙胺5ml，用磷酸调节pH至3.0)-乙腈(80∶20)为流动相，检测波长为215nm。取酒石酸托特罗定与杂质A(N，N二异丙基-3-(2-甲氧基-5甲基苯基)-3-苯丙胺富马酸盐)各适量，精密称定，加乙腈-水(2∶8)溶解并稀释制成每1ml中均含0.25mg的混合溶液，精密量取该溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，酒石酸托特罗定与杂质A的分离度应大于10，酒石酸托特罗定峰的拖尾因子应小于2.0。

系统适用性试验：取酒石酸托特罗定与杂质A(N，N二异丙基-3-(2-甲氧基-5甲基苯基)-3-苯丙胺富马酸盐)各适量，精密称定，加乙腈-水(2∶8)溶解并稀释制成每1ml中均含0.25mg的混合溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

在此条件下，酒石酸托特罗定主峰的保留时间约为12min，与杂质A之间的分离度为15.1。

实施例4方法耐用性试验

Agilent 1200液相色谱系统，VWD检测器，色谱柱：Agilent CN(250×4.6mm，5μm)；检测波长：215nm；以磷酸盐缓冲液(磷酸氢二钾11.4g，加水1000ml使溶解，加三乙胺5ml，用磷酸调节pH至2.0)-乙腈(65∶35)为流动相，检测波长为215nm。取酒石酸托特罗定与杂质A(N，N二异丙基-3-(2-甲氧基-5甲基苯基)-3-苯丙胺富马酸盐)各适量，精密称定，加乙腈-水(3.5∶6.5)溶解并稀释制成每1ml中均含0.25mg的混合溶液，精密量取该溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，酒石酸托特罗定与杂质A的分离度应大于10，酒石酸托特罗定峰的拖尾因子应小于2.0。

系统适用性试验：取酒石酸托特罗定与杂质A(N，N二异丙基-3-(2-甲氧基-5甲基苯基)-3-苯丙胺富马酸盐)各适量，精密称定，加乙腈-水(3.5∶6.5)溶解并稀释制成每1ml中均含0.25mg的混合溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

在此色谱条件下：酒石酸托特罗定主峰的保留时间7min，与杂质A之间的分离度为10.2。

由试验结果可知：利用本发明的检测方法酒石酸托特罗定与杂质A之间的分离度均能大于10.0，能很好的保证破坏性试验中主峰与杂质A相似位置峰之间的三个杂质检出；破坏性试验中主峰与其后相邻杂质峰的分离度均大于4.0，并且主峰的峰纯度均符合规定；各起始物、中间体均不干扰本品有关物质的测定，同时主峰的峰纯度符合要求，本方法可用于酒石酸托特罗定及其制剂的质量控制。

Claims

1.一种酒石酸托特罗定原料或制剂的有关物质的检测方法，其特征在于：用高效液相色谱法进行检测，固定相是氰基键和硅胶为填料的色谱柱，流动相是磷酸盐缓冲液与乙腈的混合液，检测波长为215nm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲液含0.05mol/L的磷酸盐及0.5％的三乙胺，pH值为2.0～3.0。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的流动相中乙腈与磷酸盐缓冲液的比例为20～35∶65～80。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的磷酸盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢铵或磷酸氢二铵。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述的流动相中乙腈与磷酸盐缓冲液30∶70，磷酸盐缓冲液的pH为2.5。

6.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：取每1mL中含酒石酸托特罗定与杂质N，N二异丙基-3-(2-甲氧基-5甲基苯基)-3-苯丙胺富马酸盐各0.25mg的混合溶液各10μL，依法测定，其分离度不低于10。