CN102363780A - 靶向人cd147小分子rna干扰序列及其用途 - Google Patents
靶向人cd147小分子rna干扰序列及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102363780A CN102363780A CN2011103091742A CN201110309174A CN102363780A CN 102363780 A CN102363780 A CN 102363780A CN 2011103091742 A CN2011103091742 A CN 2011103091742A CN 201110309174 A CN201110309174 A CN 201110309174A CN 102363780 A CN102363780 A CN 102363780A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- interference sequence
- cell
- sirna
- sequence
- tumor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
靶向人CD147小分子RNA干扰序列及其用途,涉及抑制宫颈癌细胞增殖,诱导细胞凋亡及增强细胞对化学药物敏感性的小片段RNA类药物及其用途,其干扰序列为:正义链:CGUCAGAACACAUCAACGATT反义链:UCGUUGAUGUGUUCUGACGTT;靶向人CD147小分子RNA干扰序列的用途,在人源性肿瘤抑制增殖、诱导凋亡,抑制肿瘤浸润转移及增强肿瘤药物敏感性。
Description
技术领域
本发明涉及抑制宫颈癌细胞增殖,诱导细胞凋亡及增强细胞对化学药物敏感性的小片段RNA类药物及其用途。
背景技术
RNA干扰具有强大的抑制基因表达的效应和高度的特异性,而引起生物医学界几乎所有研究领域的广泛兴趣。RNAi技术迅速从实验室推进到临床。首先,人基因组项目的完成使得有可能设计能沉默任何基因的小干涉RNA(siRNA)。其次,我们认识到许多新的靶标对小分子药物或生物药物是难以接近的。因此,设想出一种在mRNA水平上影响这些靶标的方法就具有极大的吸引力。
RNAi技术在很短的时间内迅速从体外细胞、动物试验发展到临床试验,第1个临床试验是由Acuity Pharmaceuticals公司于2004年底开发的靶向VEGF的siRNA用于治疗老年性黄斑变性(AMD),并且发展迅速。siRNA作用于癌症的首例临床研究是Calando公司的用于治疗实体肿瘤的CALAA01,已于2008年5月获FDA批准进入I期临床。CALAA01是包被在环糊精-转铁蛋白-AD-PEG纳米颗粒中的靶向核糖核苷酸还原酶M2亚基的siRNA,通过降低核糖核苷酸还原酶M2亚基的表达从而起到抑制肿瘤生长,缩小肿瘤体积的作用[51]。啮齿类及灵长类动物的研究显示,CALAA01具有抗肿瘤活性且安全性良好,I期临床试验中36例实体瘤患者接受为期2I天的静脉注射循环治疗[52]。2009年3月,Alnylam公司也开展了用于治疗肝癌的RNA干扰药物ALN-VSP02的I期临床试验[53]。该药物是包被在脂质体中靶向KSP(纺锤体驱动蛋白)和VEGF(血管内皮生长因子)的siRNA,通过阻滞细胞周期和抑制肿瘤血管生成以达到抑制肿瘤生长增殖。I期临床试验中58例肝癌患者接受每两周一次的静脉注射治疗。
CDI47属免疫球蛋白超家族中高度糖基化的单次跨膜糖蛋白,是一种新的细胞表面黏附分子,介导细胞与细胞和细胞与间质的黏附作用。研究证明,纯化或重组的CD147可以在体外诱导成纤维细胞合成MMP-1、MMP-2、MMP-3。随后对CD147和肿瘤关系的研究发现,在骨巨细胞瘤、泌尿系肿瘤、肺癌、乳腺癌、结直肠癌、口腔鳞状细胞癌、神经胶质瘤、成釉细胞癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、骨髓癌、皮肤基底细胞癌、黑色素瘤、皮肤鳞状细胞癌等肿瘤细胞中均发现CD147表达增高,同时MMP活性增加,且与肿瘤的浸润和转移相关。免疫组织化学显示,相对于正常组织和癌旁组织,癌组织中CD147mRNA的表达升高。CD147在原发性肿瘤和恶性程度较低的肿瘤中高表达,提示其在肿瘤发展和早期转移中的作用。
体内研究显示,多种肿瘤基质成纤维细胞的MMP表达与CD147的表达水平密切相关,提示在肿瘤与基质的相互作用中,CD147与MMP的表达发挥重要作用。免疫组化结果显示,CD147主要在侵袭性肿瘤的外周表达,从而推测CD147可能诱导了肿瘤的侵袭和转移。对黑色素瘤细胞系和口腔鳞癌细胞系的体外研究证实,使用CD147抗体能够显著抑制肿瘤侵袭和转移。CD147还通过旁分泌的方式与内皮细胞产生的MMP相互作用,提示肿瘤细胞产生的CD147通过调节内皮细胞产生的MMP诱导肿瘤血管生成。CD147的作用不仅局限于肿瘤-成纤维细胞、肿瘤-内皮细胞的相互作用中,CD147也可以在肿瘤细胞或成纤维细胞中诱导MMP分泌。在肿瘤细胞中转染CD147或用重组的CD147分子处理肿瘤细胞,发现肿瘤细胞本身MMP尤其是MMP-2的表达增加。在成纤维细胞中转染重组CD147腺病毒载体,也可以诱导MMP-1和MMP-3高表达。
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一。在全球女性恶性肿瘤中其发病率仅次于乳腺癌。在发展中国家则居首位,严重威胁妇女生命。传统治疗方法以手术、化疗及放疗为主,许多抗癌剂不仅对癌细胞,对正常生产的细胞也具有毒性,致使许多患者的生存率仍不理想,宫颈癌仍然是全球女性死亡的一个主要疾病。因此,采用具有靶向性治疗的药物就显得优势凸出,正逐渐成为针对宫颈癌的基本手段,本发明所采用并设计完成的正是基于此进行的研究成果,不仅具有靶向性,而且相比与同期能用于治疗宫颈癌的基因药物如:一种靶向Survivin基因的siRNA分子及其应用(CN 101935651A);抑制人RabJ基因表达的siRNA及其应用(CN1948483);抑制血管内皮生长因子受体基因表达的siRNA及其应用(CN101353655)等,能增加现有抗肿瘤药物的敏感性的优点,具有协同作用,非常具有潜力。
发明内容
本发明的目的是提供靶向人CD147小分子RNA干扰序列及其用途。
靶向人CD147小分子RNA干扰序列,其特征在于:
正义链:CGUCAGAACACAUCAACGATT
反义链:UCGUUGAUGUGUUCUGACGTT。
靶向人CD147小分子RNA干扰序列的用途,在人源性肿瘤抑制增殖、诱导凋亡,抑制肿瘤浸润转移及增强肿瘤药物敏感性。
本发明的体外实验结果表明,siRNA干扰序列BSG1对HeLa细胞的体外增殖表现出良好的抑制活性,其抑制率达到56%;RT-PCR实验结果显示siRNA干扰序列BSG1能够下调CD147基因在mRNA水平的表达。并且能够不同程度下调相关基因MMP-9、VEGF及MDR-1在mRNA水平的表达;免疫细胞化学染色结果显示siRNA干扰序列BSG1能够下调CD147基因在蛋白质水平的表达;流式细胞术实验结果显示siRNA干扰序列能够影响细胞周期,其中siRNA干扰序列BSG1作用后处于S期细胞较阴性对照减少32.60%,而处于G1期细胞增大32.60%,细胞被阻滞在G1期;药物敏感性实验结果显示siRNA干扰序列BSG1与5-FU联用,能够增强HeLa细胞对5-FU的敏感性。
综上所述,在体外,siRNA干扰序列BSG1能够明显下调CD147mRNA水平和蛋白质水平的表达,对HeLa细胞具有明显增殖抑制活性,显著影响细胞周期,诱导细胞凋亡,并能明显增强细胞对化学药物的敏感性。
附图说明
图1是BSG1抑制肿瘤增殖活性实验结果,其中PC表示阴性对照,IR表示抑制率。
图2是RT-PCR实验结果,其中泳道1表示阴性对照组,泳道2表示BSG1组。
图3是免疫细胞化学染色结果,其中A表示阴性对照组,B表示BSG1组。
图4是流式细胞实验结果,其中A表示阴性对照组,B表示BSG1组。
图5是药物敏感性实验结果,其中5-FU表示5-FU单独作用结果,5-FU/BSG1表示5-FU与BSG1联用结果。
具体实施方式
本发明是靶向人CD147小分子RNA干扰序列及其用途,靶向人CD147小分子RNA干扰序列,其特征在于:
正义链:CGUCAGAACACAUCAACGATT
反义链:UCGUUGAUGUGUUCUGACGTT。
根据以上所述的干扰序列,其特征在于靶向人源性CD147基因。
根据以上所述的干扰序列,在抗肿瘤基因治疗中的应用。
靶向人CD147小分子RNA干扰序列的用途,在人源性肿瘤抑制增殖、诱导凋亡,抑制肿瘤浸润转移及增强肿瘤药物敏感性。
本发明是以下述方式实现的:以CD147基因为靶点,用RNAdraw和Sfold分析CD147可能的二级结构及二级结构中单链核酸的概率,用在线ClustLW工具分析CD147基因的序列保守区,然后针对CD147基因的序列保守区和二级结,构松散区,设计靶向该基因的siRNA,并在国际人类基因组库中进行BLAST比对,除去可以跟靶序列外的其它人类基因有较强配对的siRNA,最终得到所需要的小干扰序列BSG1并进行化学合成。将合成的靶向人CDI47基因的siRNA小干扰序列BSG1转染人宫颈癌HeLa细胞株,观察其对HeLa细胞株增殖、凋亡及对药物敏感性的影响,并检测其对CDI47基因在mRNA和蛋白质水平表达的敲减状况。
靶向CD147的小干扰序列BSG1序列如下:
BSG1Sense siRNA Strand:CGUCAGAACACAUCAACGATT
BSG1Antisense siRNA Strand:UCGUUGAUGUGUUCUGACGTT。
下面用更为具体的实施例展开本发明。
1、以人CD147基因的第一个转录本为标准(NCBI登陆号:NM_001728.2),用RNAdraw和Sfold分析CD147可能的二级结构及二级结构中单链核酸的概率,用EBI提供的在线ClustLW工具分析CD147基因的序列保守区,然后针对CD147基因的序列保守区和二级结构松散区,设置筛选条件,用Sfold软件设计靶向该基因的siRNA,初选的siRNA在国际人类基因组库中进行BLAST比对,除去可以跟靶序列外的其它人类基因有较强配对的siRNA,以确保所选的siRNA与非靶基因没有强的同源性,最终得到所需要的siRNA。靶向CD147的小干扰序列BSG1序列如下:
BSG1Sense siRNA Strand:CGUCAGAACACAUCAACGATT
BSG1Antisense siRNA Strand:UCGUUGAUGUGUUCUGACGTT
2、将Hela细胞以适当数量种入96孔板,待贴壁后,EntransterTM-R纳米聚合物转染试剂介导小干扰片段BSG1转染细胞,培养72小时,收集细胞进行MTT实验。结果显示,干扰序列BSG1对HeLa细胞的体外增殖表现出良好的抑制活性,计算得其对HeLa细胞抑制率为56%(参见图1)。
3、将Hela细胞以适当数量种入6孔板,待贴壁后,EntransterTM-R纳米聚合物转染试剂介导小干扰片段BSG1转染细胞,培养48小时,收集细胞,提取总RNA进行RT-PCR实验。结果显示,CD147基因及血管生成因子VEGF、CD147下游调控因子MMP-9及多药耐药基因MDR-1在mRNA水平表达均表现出不同程度的下调(参见图2)。
4、将Hela细胞以适当数量种入6孔板,待贴壁后,EntransterTM-R纳米聚合物转染试剂介导小干扰片段BSG1转染细胞,培养72小时,收集细胞,进行免疫化学染色实验,染色结果显示CD147蛋白量表达显著降低(参见图3)。
5、将Hela细胞以适当数量种入6孔板,待贴壁后,EntransterTM-R纳米聚合物转染试剂介导小干扰片段BSG1转染细胞,培养48小时,收集细胞,流式细胞术检测细胞周期,结果显示处于G1期细胞较阴性对照增大32.60%,而处于S期细胞减少32.60%,细胞被阻滞在G1期(参见图4)。
6、将Hela细胞以适当数量种入96孔板,待贴壁后,EntransterTM-R纳米聚合物转染试剂介导小干扰片段BSG1转染细胞,稳定转染,弃去培养液,加入适当剂量(50ul/ml)5-FU,并设置阴性对照(转染试剂与5-FU联用)培养48小时,收集细胞进行MTT实验。结果显示显示50ul/ml 5-FU对HeLa细胞的抑制率为36%,而5-FU与siRNA序列BSG1联用其抑制率达到67%。表明siRNA序列BSG1在体外能够增强HeLa细胞对5-FU的敏感性(参见图5)。
Claims (4)
1.靶向人CD147小分子RNA干扰序列,其特征在于:
正义链:CGUCAGAACACAUCAACGATT
反义链:UCGUUGAUGUGUUCUGACGTT。
2.根据权利要求1所述的干扰序列,其特征在于靶向人源性CD147基因。
3.根据权利要求1所述的干扰序列,在抗肿瘤基因治疗中的应用。
4.靶向人CD147小分子RNA干扰序列的用途,在人源性肿瘤抑制增殖、诱导凋亡,抑制肿瘤浸润转移及增强肿瘤药物敏感性。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2011103091742A CN102363780A (zh) | 2011-10-13 | 2011-10-13 | 靶向人cd147小分子rna干扰序列及其用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2011103091742A CN102363780A (zh) | 2011-10-13 | 2011-10-13 | 靶向人cd147小分子rna干扰序列及其用途 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102363780A true CN102363780A (zh) | 2012-02-29 |
Family
ID=45690374
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2011103091742A Pending CN102363780A (zh) | 2011-10-13 | 2011-10-13 | 靶向人cd147小分子rna干扰序列及其用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102363780A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103131710A (zh) * | 2013-03-05 | 2013-06-05 | 西藏自治区人民医院 | 一种抑制肿瘤细胞侵袭的shRNA |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1325907A (zh) * | 2001-05-25 | 2001-12-12 | 陈志南 | 肝癌转移相关因子HAb18G及其反义RNA表达质粒载体PCI-asHAb18G |
-
2011
- 2011-10-13 CN CN2011103091742A patent/CN102363780A/zh active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1325907A (zh) * | 2001-05-25 | 2001-12-12 | 陈志南 | 肝癌转移相关因子HAb18G及其反义RNA表达质粒载体PCI-asHAb18G |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
LIGUO WANG等人: "Inhibition of CD147 Expression Reduces Tumor Cell Invasion in Human Prostate Cancer Cell Line via RNA Interference", 《CANCER BIOLOGY&THERAPY》, vol. 5, no. 6, 30 June 2006 (2006-06-30), pages 608 - 614 * |
WEI ZHOU等人: "Inhibition of CD147 gene expression via RNA interference reduces tumor cell invasion, tumorigenicity and increases chemosensitivity to paclitaxel in HO-8910pm cells", 《CANCER LETTERS》, vol. 248, no. 2, 18 April 2007 (2007-04-18), pages 211 - 218, XP005912875, DOI: doi:10.1016/j.canlet.2006.07.005 * |
XIANG CHEN等人: "A small interfering CD147-targeting RNA inhibited the proliferation, invasiveness, and metastatic activity of malignant melanoma", 《CANCER RESEARCH》, vol. 66, no. 23, 4 December 2006 (2006-12-04), pages 11323 - 11330, XP008141272, DOI: doi:10.1158/0008-5472.CAN-06-1536 * |
闫伟等人: "小分子干扰RNA ( siRNA) 沉默CD147基因对脑胶质瘤细胞系SHG - 44生长及凋亡的影响研究", 《实用心脑肺血管病杂志》, vol. 18, no. 12, 31 December 2010 (2010-12-31), pages 1748 - 1750 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103131710A (zh) * | 2013-03-05 | 2013-06-05 | 西藏自治区人民医院 | 一种抑制肿瘤细胞侵袭的shRNA |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Moisan et al. | Enhancement of paclitaxel and carboplatin therapies by CCL2 blockade in ovarian cancers | |
CN104342444B (zh) | 一种重组trail蛋白及其制备方法和用途 | |
Bianco et al. | Synergistic antitumor activity of ZD6474, an inhibitor of vascular endothelial growth factor receptor and epidermal growth factor receptor signaling, with gemcitabine and ionizing radiation against pancreatic cancer | |
Li et al. | Tumour targetable and microenvironment-responsive nanoparticles simultaneously disrupt the PD-1/PD-L1 pathway and MAPK/ERK/JNK pathway for efficient treatment of colorectal cancer | |
Tan et al. | Erchen plus huiyanzhuyu decoction inhibits the growth of laryngeal carcinoma in a mouse model of phlegm-coagulation-blood-stasis syndrome via the STAT3/Cyclin D1 pathway | |
CN102363780A (zh) | 靶向人cd147小分子rna干扰序列及其用途 | |
CN104069509A (zh) | Sr-b1作为鼻咽癌生物标记物及治疗靶点的应用 | |
CN101812452B (zh) | Rala基因的小干扰rna在制备抗白血病药物中的应用 | |
CN105617401B (zh) | miRNA的肿瘤辐射增敏及减弱辐射旁效应作用、实施方法及用途 | |
CN104531711B (zh) | 一种具有抗肿瘤及放化疗增敏效应的基于竞争性内源rna机制的lna寡核苷酸 | |
CN102816792A (zh) | 一种调控热休克蛋白70表达、数量及活性的方法及其应用 | |
CN105543182A (zh) | 携带microRNA-101的重组溶瘤痘苗病毒及其药物组合物 | |
CN105176999A (zh) | 抑制survivin基因表达的双链siRNA、其应用及包含其的表达质粒及传递体 | |
CN102432671A (zh) | 能够抑制肝癌生长转移的靶向多肽spscvlp及用途 | |
CN101168742A (zh) | 一种溶癌病毒及其制备方法 | |
CN114558140B (zh) | Cxcr2抑制剂和肺癌化疗药的组合物在制备抗肺癌药物中的用途 | |
KR102212699B1 (ko) | 유방암 예방 또는 치료용 조성물 | |
Jiménez et al. | Automatic interpretation of cancer genomes creates the largest repository of tumour genetic driver events | |
KR101658593B1 (ko) | Pi4k 동위효소 저해제를 유효성분으로 포함하는 방사선 민감성 증진용 조성물 | |
Petrella et al. | Stem cell technology for antitumor drug loading and delivery in oncology | |
Yu et al. | STEM-37. GENETIC EDITING OF NEURAL STEM CELLS FOR INTRANASAL THERAPEUTIC DELIVERY TO MALIGNANT BRAIN TUMORS | |
CN102978278B (zh) | 内源性的非编码小RNAs及其应用 | |
CN100430412C (zh) | 核酸分子rtn4bsr6及其在制备抗癌药物中的应用 | |
CN111647601A (zh) | 人纤维蛋白原单链的特异性shRNA、重组干扰载体及应用 | |
CN115804853A (zh) | 包含rna分子的组合物及其在制备瘤内注射剂中的用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120229 |