CN102351927B - Borojo活性提取物及其制备方法和抗菌抗氧化用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供南美水果Borojo活性提取物及其鉴定与制备方法、含量测定及方法和用途。Borojo的活性提取物具有的天然抗氧化、抗细菌、抗真菌作用。

Description

Borojo活性提取物及其制备方法和抗菌抗氧化用途

技术领域

本发明涉及植物活性成分及用途，尤其涉及Borojo的活性提取物及其制备方法、用途。

背景技术

Borojo(博罗霍)是一种生长在南美洲热带雨林的水果，唯一适应厄瓜多尔气候，茜草科林果属，有Borojoa patinoi Cuatrec和Borojoa sorbilis Cuatrec两个品种，当地人中有食用Borojoa sorbilis Cuatrec的习惯。Borojo果实直径达7-12厘米，未成熟时绿色，成熟后转为茶褐色，重量700-1000克/只，果肉柔软，味酸且粘稠，去种子后果肉重量占88％。

新鲜Borojo是极酸(pH2.74)、低水分(69.22％)、高碳水化物(28.02％)、低糖(9.72％)、高蛋白质(1.22％)、高膳食纤维(2.98％)的水果。B族维生素中的B₁、B₂、烟酸、叶酸和维生素C、维生素E的含量远高于大多数水果。游离氨基酸总含量为1.35％，25种；水解后19种氨基酸物质，总量2.51％，其中含5种人体必须氨基酸，2种条件必须氨基酸。Borojo中微量元素丰富，含钾3500mg/kg，镁280mg/kg，铁160mg/kg和锌0.64mg/kg；含有人体必需微量元素锌、铜、钴、铁，可能必需微量元素锰、硅、镍、硼，以及蔬菜水果中少有的三价铬和镍。稀土总量及16种稀土元素含量都在正常范围内，对人类健康无潜在危害。有害重金属铅为24μg/kg，汞、砷、镉在最低检测限以下。Borojo含有丰富的人体必需亚油酸(9.91％)和亚麻酸(0.89％)。总黄酮达748mg/kg。

Borojo是一种营养价值很高的水果，具有极好的保健食品开发利用价值。几个世纪以来，当地哥伦比亚人俗认Borojo对健康有好处，其中包括：天然男性催情；促进激素生成，帮助维持血压的正常；帮助改善胆固醇症状，增强免疫功能，改善呼吸道炎症症状，抗炎等功效。但并未有报道阐明其活性成分和原理。

发明内容

本发明的目的在于提供Borojo提取物的活性物质。

Borojo的活性提取物，所述的提取物的活性成分为糖基化8，9-环烯醚萜苷，化学式为

Borojo的活性提取物的制备方法，其包括如下步骤：

(1)将Borojo果肉除去种子，均质混匀；

(2)加入体积比为1∶1的水和甲醇混合液，混合震荡均匀；

(3)加热至60-75℃，经旋转蒸发器抽提出黄色浓缩液；

(4)以乙腈-0.1％甲酸为流动相等度洗脱；

(5)将洗脱液进行色谱分离，得到Borojo的提取物，所述的提取物的活性成分为糖基化8，9-环烯醚萜苷，化学式为

优选的，所述的步骤(2)中，用1∶1的水和甲醇混合液溶解，加热温度为70℃。

本发明还提供上述的Borojo的活性提取物在制备抗氧化药物或抗菌药物的用途。

本发明还提供上述的Borojo的活性提取物在制备抗氧化食品或抗菌食品的用途。

发明人对Borojo的活性提取物进行了抗氧化试验和抗菌试验，证明其有良好的抗氧化和抗菌作用，具有以Borojo的活性提取物为原料进行制备抗氧化药物、天然抗氧化食品、抗菌药物和天然抗菌食品的用途。

附图说明

图1为本发明实施例2中Borojo活性物质经ChemDraw Ultra推断的氢谱图；

图2为本发明实施例2中Borojo活性物质实际核磁氢谱图；

图3为本发明实施例2中Borojo活性物质经ChemDraw Ultra推断的碳谱图；

图4为本发明实施例2中Borojo活性物质实际核磁碳谱图；

图5为本发明实施例2中Borojo活性物质红外光谱图；

图6为本发明实施例3中Borojo活性物质的质谱特征离子图；

图7为本发明实施例3中Borojo活性物质的质谱特征离子图。

具体实施方式

为使本发明更加容易理解，下面将进一步阐述本发明的具体实施例。

实施例1活性物质结晶提纯半制备方案

样品及数量：Borojo果肉样品200克。

溶剂和比例：水∶甲醇＝1∶1混合液。

仪器及其条件：汉邦科技分析色谱仪，型号：Newstyle，厂家：江苏汉邦科技紫外检测器波长254。

工业提纯设备：工业半制备色谱系统NP7010C制备泵，型号：NP7010C，厂家：汉邦科技；分离设备(可直接使用NP7010C的方法学)，型号：Prep-300，厂家：汉邦科技。

结晶提纯制备步骤及结果：

1、Borojo果肉除去种子均质混匀；

2、加入1∶1水和甲醇混合液混合震荡均匀；

3、加热至60-75℃，经旋转蒸发器抽提出黄色浓缩液；

4、以乙腈-0.1％甲酸为流动相等度洗脱，以(Borojo/甲醇水溶液)30ml进样，进色谱分析仪扫描确定，Borojo活性物质在254nm处有一主要紫外吸收峰；

5、再取(Borojo/甲醇水溶液)60ml，两次进NP7010C制备泵工业制备色谱系统，紫外检测器吸收峰254nm，进样速度15ml/min，两次分别在5.827min和5.892min保留时间处得到馏分物质12ml；

6、取6ml馏分物质旋转蒸发得结晶物质用于核磁共振分析，保存6ml馏分物质备用。

实施例2活性物质提纯物的分子结构确定

分子结构确定的基本条件：

●实施例1半制备结晶物质(6ml)用于核磁共振碳谱和氢谱分析的样品

●所用仪器：

1、核磁共振谱仪，型号：Avance 500：生产商：瑞士布鲁克公司(BrukerA.G.)

2、傅利叶红外-拉曼-显微光谱仪(FT-IP)，型号：Nexus 670；生产商：美国Nicolet公司，

●化合物结构软件：利用ChemDraw Ultra推断活性物质的氢谱和碳谱结构，得到图1、图3。

结构解析：

一、核磁共振仪氢谱的结果(加入氘代甲醇)，见图1，图2。

从核磁共振氢谱图1，2上看，在理论上预测的Borojo主要活性物质结构和此次实际氢谱是基本重合的。实际氢谱虽然有氘代甲醇的干扰信号，但仍可确定无芳香环等其它结构存在。因此，可以确定在氢谱中是没有芳香环类结构物质的。

二、核磁共振仪碳谱的结果(加入氘代甲醇)，见图3，图4。

从核磁共振仪碳谱图3，4看，同质谱分析理论预测的结构也是基本符合的。在Borojo主要活性物质的实际碳谱中，每个棒状图表示一个碳原子，而且出现了标准的六碳糖集团。即(C’1-98.994，C’2-73.219，C’3-76.379，C’4-70.015，C’5-76.730和C’6-61.260)。糖基化8，9-环烯醚萜苷(8，9-unsaturated iridoids)主要骨架上的碳原子分布情况为：C1-95.022，C3-152.280，C4-111.141，C5-38.849，C6-146.416，C7-134.825，C8-33.89，C9-45.977，C10-166.742和C11-169.242。其它(47.166-48.189)是氘代甲醇的2N+1峰，为试剂的干扰信号。

三、红外光谱检测结果和解析，见图5。

利用提取的Borojo晶体，进行红外光谱检测，可以推断3405.21为游离-OH集团，2890为-CH-集团，1250-909为脂环醚特征集团吸收峰，970-960峰为-C＝C-吸收峰，进一步证实前期结构的判断同实际结构是吻合的。

结论：

利用Borojo果肉甲醇水加热70℃抽提，经过半制备紫外254nm吸收峰馏分分离，实现对Borojo主要活性物质的提取。

通过核磁共振和红外光谱对活性提取物的结构进行分析推断，可以确定：

Borojo主要活性物质(质谱质量分子数388的物质)分子结构是：

化学名：糖基化8，9-环烯醚萜苷(8，9-unsaturated iridoids)

分子式：C₁₆H₂₀O₁₁

精确分子量：M/Z 387.09289

化学结构式：

实施例3Borojo果及其制品中活性物质含量的测定-HPLC-MS/MS法

1.安全提示

本标准操作程序中用到易燃有毒化学品，例如甲醇，应避免吸入其蒸气或直接与皮肤接触，处理此类物质时可在通风橱内操作，必要时可佩带防护手套、防护镜或防毒面具。

2方法提要

本标准操作程序是本实验室参照有关文献的样品前处理方法及测定方法，进行周密验证后，将某些关键步骤进行细化而制定的。

本标准操作程序适用于Borojo原果酱及其制品中活性物的测定。

3原理

试样中的活性物用合适的前处理方法提取，进高效液相色谱仪，经普通反相色谱，根据保留时间定性和峰面积定量。

4测定低限、线性范围、回收率范围和精密度

4.1LC-MS/MS法

方法的最低检出限为1ng/mL，最低定量限为10ng/mL标准曲线的线性范围为：100.0～10000.0ng/L，样品加标回收率情况见下表。

表1Borojo中活性物测定回收率

5仪器和设备

5.1Shimadzu公司HPLC型号：LC20A

5.2AB SCIEX公司质谱仪型号：API2000

5.3恒温水浴锅

5.4电子天平

5.5 0.45μm超滤膜。

6试剂与溶液

6.1试剂

实验用水为高纯水

6.1.1甲醇(色谱纯)；

6.1.2标准品：Borojo活性提取物对照品

6.2.标准溶液

6.2.1标准储备溶液

准确称取按其纯度折算为100％质量的标准品100mg，置于10mL棕色容量瓶中，配成的水溶液浓度为10.0mg/mL。

所用储备液均用铝箔做避光保护，放置在4℃冰箱中储存。

6.2.2标准使用溶液

按1∶10、1∶100、1∶1,000、1∶10,000、1∶100,000、1∶1,000,000比例倍比稀释标准品储备液至2mL进样瓶中。

7实验方法

7.1试样的前处理

7.11Borojo酶解浓缩粉及BOROJO原果酱的前处理方法：称取10g样品至烧杯中，用100mL 1∶1甲醇水溶解，用锡箔纸封住烧杯口，然后70摄氏度水浴加热30分钟，取出烧杯冷却至室温后，用滤纸过滤，滤液再过0.45μm超滤膜。

7.2液质联用法流动相

7.2.1高效液相色谱应用的流动相

有机相(A)：甲醇-色谱纯

水相(B)：高纯水-二级以上

7.2.2进样条件：70％有机相，30％水相等度洗脱

7.2.3流速：0.4mL/min；

7.2.4柱温：无要求

7.2.5进样量：5μL

7.2.6质谱条件：

离子化模式：电喷雾离子化；

扫描模式MRM对扫描：选择负离子化模式扫描；

离子化条件如下：

CUR：20.0；CAD：6；IS：-4500.0；TEM：500.0；GS1：70.0；GS2：70.0；DP：-20.0；FP：-350.0EP：-10.0；CE：-24.0；CXP：-4.0

7.3质谱特征离子图，见图6、图7。所述Borojo的活性提取物在HPLC-MS/MS中准确定性单体分子量为388的强极性物质，该单体物质的二聚体分子量为775。

7.4样液测定

根据Borojo样液中活性物含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中活性物成分响应值均应在仪器检测线性范围内。

8结果计算

用色谱数据处理机或按(1)式计算试样中活性物的含量。

$X=\frac{C\×V}{M}...\left(1\right)$

式中：

X——试样中活性物含量，单位为毫克每千克，mg/kg；

C——从标准工作曲线得到被测样液中活性物的浓度，单位为纳克每毫升，μg/mL；

V——最终样液的定容体积，单位为毫升，mL；

m——最终样液所代表试样质量，单位为克，g。

注：计算结果应表示到小数点后两位。

9检测质量控制标准

9.1测定低限

本方法对Borojo中活性物的测定低限为1ng/kg。

9.2对于每个测定样品均应符合以下检测质量控制标准

9.2.1标准物质添加的回收率(％)：111.6％。

实施例4体外抗氧化实验

将实施例1得到的活性物质(馏分物质)作为样品。

1材料和方法

11材料：

样品：8，9--糖基化环烯醚萜苷(白色，粉末，Borojo中提取)

化合物：ABTS[2，2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6sulfonic acid)]、二苯基苦基肼基DPPH(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)、4-POBN(α-(4-pyridyl-1-oxide)0N-t-butylnitrone)购自Sigma公司。其他试剂为国产分析纯。

仪器：ESR波谱仪(Brucker ER200 D-SRC、ESP300)、分光光度计、WDD-1型发光测试仪。

1.2对ABTS+清除能力(总抗氧化活性)测定

文献中把对ABTS+的清除能力称为总抗氧化活性。这一方法的原理是基于抗氧化剂可以漂白在734nm处有特征蓝绿色吸收的ABTS+阳离子自由基，以此反映抗氧化剂的抗氧化活性。

将7mol/LABTS水溶液与2.45mmol/LK₂S₂O₈(终浓度)混合，形成ABTS+阳离子自由基，在室温暗处存放14-16h。使用前，用乙醇把ABTS+稀释100倍。把一定浓度梯度的抗氧化剂加入ABTS+稀释液中，测试其对于ABTS+在734nm吸收的漂白作用，根据样品浓度和清除率作图，比较抗氧化能力的强弱。

1.3对DPPH的自由基的清除作用

2，2-二苯基苦基苯肼(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)是一种含有未成对电子的稳定自由基，实验过程中通过ESR波谱仪能够测量出溶液中DPPH的数量，在体系中加入样品溶液后，若样品具有清除DPPH的作用，通过测量体系中自由基的减少量便能算出该样品对DPPH的清除率，同时比较各样品对DPPH清除作用的强弱，清除率越大，表明该物质清除自由基的能力越强。

用乙醇配制10μmol/L DPPH溶液，避光放置，加入被测试样品，用ESR检测对DPPH的清除作用，加入样品后15min测定峰高，计算清除率。

清除率(％)＝(1-样品峰高/空白峰高)×100％，ESR测试条件：在Brucker 200D-SRC型ESR波谱仪上，X波段，微波功率20mW，调制频率100kHZ，调幅0.1mT，中心磁场324.5mT，室温下检测。

1.4对超氧自由基的清除作用

化学发光法利用的原理是发光物质在一定条件下被自由基攻击可以氧化而发光。鲁米诺(luminol)是一种发光物质，活性氧可以使其氧化激发，在回到基态时释放出特定波长的光。当有抗氧化物质存在时，发光强度下降，通过计算抗氧化性物质抑制发光的程度(抑制率％)来评价其抗氧化能力。本方法通过邻苯三酚自氧化体系生成超氧自由基，使鲁米诺发光。

配制0.1mM鲁米诺，3M NaOH，3mM邻苯三酚及浓度梯度的所要检测的样品，分别按顺序取900μl鲁米诺、10μl样品、80μlNaOH、10μl邻苯三酚，迅速放入WDD-1型发光测试仪中，按混合后1min读数。

1.5对羟基自由基的清除作用

也是利用的化学发光法，实验原理如上所述。该实验利用Fenton反应产生羟基自由基，使鲁米诺发光，若被检测物质具有清除羟基自由基的能力则可以使发光程度减弱，因此可以根据发光抑制程度来反映其抗氧化的能力。

配制0.1mM鲁米诺，3％的H2O2，0.1mM Fe3+及浓度梯度的待检测样品，按顺序分别取970μl鲁米诺、10μl样品、10μl Fe2+、10μlH2O2，迅速放入WDD-1型发光测试仪中，按混合后1min读数。

1.6体外清除脂质自由基实验

取1只野生型小鼠，取出肝脏约0.7g，加2ml PBS匀浆，1.8ml匀浆液加300μl 4-POBN(400mM)、300μl Fe2+(5mM)、300μlFe3+(5mM)，混合液在37℃温育30min后，取45μl混合液加入5μl待测样品，30min后用ESR进行检测。计算样品对于脂质自由基的清除率。计算方法同上。

ESR检测条件：在ESP300波谱仪上，CF＝3405G，SW＝100G，MF＝100kHZ，MA＝1G，SP＝20mW，室温下检测。

2结果

2.1对ABTS+自由基的清除能力

样品在0.05mg/ml浓度时，对自由基清除率达15.43％；在0.8mg/ml浓度时，对自由基的清除率可达96.78％，基本接近完全清除。

2.2对DPPH自由基的清除作用

样品在0.8mg/ml浓度时，对DPPH清除率达49.10％；在2.0mg/ml浓度时，清除率可达74.30％。

2.3对超氧自由基的清除作用

利用邻苯三酚自氧化体系产生超氧自由基，通过化学发光法得到样品对于超氧自由基的清除率。

样品在20μg/ml浓度时，对超氧自由基清除率达8.2％；在300μg/ml浓度时，清除率可达54.9％。样品在50μg/ml浓度时，清除率达24.6％。

2.4对羟基自由基的清除作用

Fenton反应可以产生羟基自由基，通过化学发光法得到样品对于超氧自由基的清除率。

样品在5μg/ml浓度时，对羟基的清除率达10％；在40μg/ml浓度时，清除率可达86.4％。

2.5对脂质自由基的清除作用

脂质过氧化过程产生脂质自由基，利用4-POBN可以自旋捕集脂质自由基，通过ESR波谱可以特异测定脂类自由基的数量，根据脂质自由基的减少量，可以计算样品对于脂质自由基的清除效率。

样品在8mg/ml浓度时对脂质自由基清除率1.49％，在20mg/ml时清除率达37.69％。

实施例5抗细菌试验

将实施例1得到的活性物质(馏分物质)作为样品，即下述的糖基化8，9-环烯醚萜苷。

1实验方法

1.1测试药物储存液的制备

阳性药物：氨苄青霉素(鼎国生物技术有限公司Aemresco分装)用无菌蒸馏水配制成100mg/mL，保存在-80℃冰箱。

硫酸卡拉霉素(鼎国生物技术有限公司Japan分装)用无菌蒸馏水配制成30mg/mL，保存在-80℃冰箱。

待测样品(糖基化8，9-环烯醚萜苷)：称取160mg环烯醚萜苷，加甲醇∶灭菌去离子水1∶1(必要时加热60℃)配制成浓度为160000μg/mL浓度的储备液。用灭菌离心管分装，每管0.1mL，保存在-80℃冰箱，用于MIC(最小抑菌浓度)测定。

1.2MIC测定

阳性药物(氨苄青霉素)：取储备液1管(0.5mL)加入1.0mL MH培养液，浓度为33000μg/mL，加入96孔板第1列200uL，倍比稀释至第10列，11列无药对照，12列阴性对照。

硫酸卡拉霉素：取储备液200uL直接加入96孔板第1列倍比稀释至第10列，11列无药对照，12列阴性对照。

待测样品：取储备液1管(0.1mL)加入0.1mL MH培养液，浓度为80000μg/mL，加入200uL，同时设立，溶剂对照，1∶1甲醇∶水与待测药一样稀释方法。

待测样品用NaOH中和，然后与待测药一样稀释方法。

加样：药品稀释后每孔100uL，加菌液100uL含10％Alamar Blue，震荡3分钟，混匀，37℃培养24h，OD570双波长判定结果(参考波长630)。

1.3菌液配制

1金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、鼠伤寒沙门氏菌(中国医学科学院实验动物研究所)、大肠杆菌O115a，c:k(中国医学科学院实验动物研究所)用生理盐水调至金黄色葡萄球菌OD570≈0.192，沙门氏菌OD570≈0.178，大肠杆菌OD570≈0.190，然后稀释100倍接种于96孔细胞板，菌液浓度约为1-5×10⁵/mL。

1.4待测物质杀菌效果的评价

上述细胞板培养48h后，取糖基化8，9-环烯醚萜苷80％抑菌孔的培养液转接96孔细胞板进行杀菌效果评价。

2结果

2.1阳性药物抑菌效果见下表。

菌株	氨苄青霉素(ug/mL)	硫酸卡拉霉素(ug/mL)
			金黄色葡萄球菌	MIC80＜32	MIC80＜58
鼠伤寒沙门氏菌	MIC80＜32	MIC80＜58
			大肠杆菌	MIC80＜32	MIC80＜58

2.2糖基化8，9-环烯醚萜苷的抑菌效果见下表.

菌株	环烯醚萜苷(mg/mL)
		金黄色葡萄球菌	MIC80＞5
鼠伤寒沙门氏菌	MIC80＞10
		大肠杆菌	MIC80＞10

8，9-糖基化环烯醚萜苷对金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌的杀菌浓度＞40mg/mL。

实施例6抗真菌试验

将实施例1得到的活性物质(馏分物质)作为样品，即下述的糖基化8，9-环烯醚萜苷。MIC测定方案来自美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)2003年版产孢丝状真菌药敏试验方案M38-A，M27-A。

1.实验方法

1.1测试药物储存液的制备

称取含有12.8mg药品的粉末，加1mL DMSO溶解，配制成浓度为12800μg/mL浓度的储备液，用灭菌离心管分装，每管0.1mL；

称取160mg糖基化8，9-环烯醚萜苷，加0.5mL灭菌去离子水+0.5mL甲醇(必要时加热60℃)配制成浓度为160000μg/mL浓度的储备液。用灭菌离心管分装，每管0.1mL，保存在-80℃冰箱，用于MIC(最小抑菌浓度)测定。

1.2MIC测定

阳性药物：取储备液1管(0.1mL)加入19.9mL1640培养液，浓度为64μg/mL，加入96孔板第1列200uL，倍比稀释至第10列，11、12列空白药对照。

待测药物：取糖基化8，9-环烯醚萜苷储备液1管(0.1mL)加入0.1mL1640培养液，浓度为80000μg/mL，加入96孔板第1列200uL，倍比稀释至第10列，11、12列空白和溶剂对照。加样：药品稀释后每孔100uL，加菌液100uL，加入Alamar Blue 20uL，震荡3分钟，混匀，37℃培养24h，OD570判定结果。

1.3菌液配制(念珠菌)

1.3.1白色念珠菌(来自中国医学科学院)、耐氟康唑白色念珠菌(来自中国医学科学院)近平滑念珠菌(ATCC22019)、克柔念珠菌(ATCC6285)、黑曲霉(AS3.3928)、烟曲霉(GIM3.421)、石膏样毛癣菌(发病动物分离)用生理盐水调至白色念珠菌OD570≈0.42，耐氟康唑白色念珠菌OD570≈0.43，近平滑念珠菌OD570≈0.42，克柔念珠菌OD570≈0.37，然后稀释4000倍接种于96孔细胞板，菌液浓度约为1-5×10⁴/mL。

用生理盐水调至黑曲霉OD570≈0.35，烟曲霉OD570≈0.31，石膏样毛癣菌OD570≈0.35，然后稀释50倍接种于96孔细胞板，菌液浓度约为1-5×10⁴/mL。

2结果

2.1阳性药物抑菌效果见下表。

菌株	酮康唑(ug/mL)
		白色念珠菌	MIC80＞0.0625
耐药白色念珠菌	MIC80＞0.25
		近平滑念珠菌	MIC80＞0.25
克柔念珠菌	MIC80＞1
		黑曲霉	MIC80＞1
烟曲霉	MIC50＞1
		石膏样毛癣菌	MIC50＞2

2.2糖基化8，9-环烯醚萜苷的抑菌效果见下表。

菌株	糖基化8，9-环烯醚萜苷(mg/mL)
		白色念珠菌	MIC80＞1.25
耐药白色念珠菌	MIC80＞2.5
		近平滑念珠菌	MIC80＞1.25
克柔念珠菌	MIC80＞1.25
		黑曲霉	MIC80＞1.25
烟曲霉	MIC50＞1.25
		石膏样毛癣菌	MIC50＞2.5

溶剂甲醇在大于3.125％时，用NaOH中和后对抑菌效果没有影响。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (5)

1.Borojo的活性提取物，其特征在于，所述的提取物的活性成分为糖基化8,9-环烯醚萜苷，化学式为

2.如权利要求1所述Borojo的活性提取物，在HPLC-MS/MS准确定性单体分子量为388的强极性物质，该单体物质的二聚体分子量为775。

3.一种Borojo的活性提取物的制备方法，其包括如下步骤：

（1）将Borojo果肉除去种子，均质混匀；

（2）加入体积比为1:1的水和甲醇混合液，混合震荡均匀；

（3）加热至60-75℃，经旋转蒸发器抽提出黄色浓缩液；

（4）以乙腈–0.1%甲酸为流动相等度洗脱；

（5）将洗脱液进行色谱分离，得到Borojo的提取物，对所述提取物进行核磁共振和晶体衍射鉴定，所述的提取物的活性成分为糖基化8,9-环烯醚萜苷，化学式为

4.如权利要求1所述的Borojo的活性提取物在制备抗氧化药物或抗菌药物的用途。

5.如权利要求1所述的Borojo的活性提取物在制备天然抗氧化食品或天然抗菌食品的用途。

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