CN102343090A

CN102343090A - 一种治疗类风湿性关节炎的医药组成物

Info

Publication number: CN102343090A
Application number: CN2011102212044A
Authority: CN
Inventors: 张明熙
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-08-03
Filing date: 2011-08-03
Publication date: 2012-02-08
Also published as: US20120034224A1; TW201206476A; WO2012018776A9; WO2012018776A2

Abstract

本发明是关于一种以抗IL-19抗体治疗类风湿性关节炎的医药组合物，该医药组合物包含：有效剂量的一第一抗体，其中该第一抗体为抗IL-19抗体或其抗原结合片段；以及一医药上可接受的载体。而本发明的医药组成物还包含一第二抗体，其中该第二抗体为抗IL-20抗体、抗IL-20R1抗体抗TNF抗体含抗IL-20抗原结合片段的抗体、含抗IL-20R1抗原结合片段的抗体、含抗TNF抗原结合片段的抗体。此外，本发明的第一抗体及第二抗体为一种基因工程抗体，如单株抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体或功能区块抗体。

Description

一种治疗类风湿性关节炎的医药组成物

技术领域

本发明是关于一种治疗类风湿性关节炎的医药组合物，尤其指一种包括抗IL-19抗体(anti-IL-19antibody)的治疗类风湿性关节炎的医药组合物。

背景技术

类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)，是一种自免疫反应疾病，其自体的免疫细胞会攻击并摧毁体内正常组织，而导致发烧、疲劳、体重减轻、及伴随关节红肿。

RA的特征为关节液中的单核白血球、淋巴球、以嗜中性白血球，渗透至关节膜而导致严重的发炎反应。目前仍无法解释RA病患的自体抗原为何会驱使自体免疫反应。

介白素19(IL-19)为一种表现于休眠状态的单核白血球及B细胞的细胞激素，而IL-19扮演了调控发炎反应的角色。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗类风湿性关节炎的医药组成物。

本发明关于一种抗IL-19单株抗体1BB1，其于胶原蛋白诱导关节炎的大白鼠中(RA的示范动物)，能减缓其疾病的严重性，并减缓骨质密度的流失。

因此，本发明治疗RA的医药组成物是由投予所需个体一有效剂量的组合物，该组合物包含抗IL-19抗体(如：单株抗体1BB1或由1BB1延伸的基因工程抗体)，选择性含其它抗RA试剂，如：抗IL-20抗体、抗IL-20R1抗体、抗肿瘤坏死因子(TNF)抗体、抗IL-6受体抗体、一可溶的TNF受体(如：依那西普(etanercept))。其抗IL-19、抗IL-20、抗IL-20R1、抗IL-6受体、或抗TNF抗体能自然产生的抗体(如单株抗体)、抗体结合片段(如：F(ab’)₂、Fab或Fv)、或基因工程抗体(如：嵌合抗体、人源化抗体、或单链抗体)，以中和IL-19、IL-20、IL-20R1、IL-6受体、或TNFα。即该抗体会与上述的其中一抗原结合，而阻断由上述抗原所调控的讯号途径。

本发明所使用的抗IL-19抗体包含(1)重链变异区(V_H)，其包含1BB1抗体V_H的完整互补性决定区(CDRs)(SEQ ID NO：2)，以及(2)轻链变异区(V_L)，其包含1BB1抗体V_L的完整互补性决定区(CDRs)(SEQ ID NO：6)。于一实施例中，其抗IL-19抗体包含与1BB1相同的V_H与V_L。

而能与抗IL-19抗体共同治疗RA的抗IL-20抗体包含：(1)重链变异区(V_H)，其包含7E单株抗体V_H的完整互补性决定区(CDRs)(SEQ ID NO：12)，以及(2)7E单株抗体的轻链变异区(V_L)，其包含包含7E单株抗体V_H的完整互补性决定区(CDRs)(SEQ ID NO：16)。于一实施例中，其抗IL-20抗体包含与7E抗体相同的V_H与V_L。

当上述所使用组成物包含两种抗体(即一抗IL-19抗体与IL-20、IL-20R1、IL-6受体、或TNFα)，则此两种抗体能形成一双-专一复合体(bi-specific complex)。于一实施例中，两种抗体皆为形成双-专一复合体(bi-specific complex)的Fab片段。

此外，(1)一种治疗RA的医药组成物包含一抗IL-19抗体，且选择包括抗IL-20抗体、抗IL-20R1抗体、抗TNFα抗体、或一可溶的TNFα受体，及(2)以此组成物制造治疗RA的药物的用途，亦于于本发明的范围中。

本发明的一个或多实施例细节如以下所述，而其它本发明的特征或优点则以下列附图、多项实施例细节的描述、及专利范围加以详述。

附图说明

图1是单株抗体1BB1减缓胶原蛋白诱导(CIA)大白鼠的疾病严重性的结果图。图A为注射生理食盐水的健康及CIA大白鼠、注射老鼠抗体(mIgG)的控制组或注射1BB1抗体组。其图上所示的值表示±标准差；图B为盒状图，其显示健康大白鼠以及处理生理食盐水、mIgG或1BB1的CIA大白鼠的疾病严重程度。图上箱形的上限与下限，标明中位数(为横过箱形的线)的25％与75％数值，而上下须线分别标明中位数的90％与10％数值。

图2是1BB1抗体抑制大白鼠骨质流失结果图，其中的值代表±标准差。

*：P＜0.05是与施予生理食盐水的大白鼠比较。

具体实施方式

本发明于此揭示使用一有效剂量的抗IL-19抗体治疗RA的医药组成物，且可选择与其它抗RA试剂，如抗IL-20抗体、抗IL-20R1抗体、抗TNFα抗体、抗IL-6受体抗体、或一可溶的TNFα受体使用。

而本发明于此所指的「治疗」意指施用或给予一个体(如：人类病患)包含上述的组成物，其中对该个体罹患RA、具有RA症状、或倾向罹患此疾病者，以达到治疗、治愈、减轻、舒缓、改变、改善、改进、或影响此疾病、此疾病的病征、或患此疾病的倾向的目的。而于此所指的「有效剂量」是指用以治疗个体的每一种活性试剂所需的量，其可单独或组合一或以上的活性试剂而使用。而有效剂量的判断是根据本领域中通常知识，依服用的途径、辅剂的选择、及与其它活性剂共享而判断。

本发明中所使用的任一抗体皆能为一自然产生的抗体、其抗原结合片段抗体、或延伸的基因工程抗体(即：与自然产生的抗体大至相同的抗原结合片段，如此以保有相同抗原结合专一性)。

生物所制造的抗IL-19抗体可为多株抗体或单株抗体，其能以传统方法制备。而该方法是以IL-19蛋白或其片段为诱导抗原，参考如：Harlow andLane，(1988)Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory，New York。「单株抗体」表一群同源抗体，而「多株抗体」则表一群异源抗体，而此两词汇不限制该抗体的来源或制备方法。IL-19为已知的细胞激素，如人类的IL-19是能于GenBank以登入号(accession number)搜寻：

人类IL-19异形态(isoform)1：NP_715639(蛋白质)and NM_153758.1(基因)

人类IL-19异形态(isoform)2：NP_037503(蛋白质)and NM_013371.2(基因)

首先，制备抗IL-19抗体的方法为：将该抗IL-19抗体的蛋白或胜肽片段结合于一承载蛋白，例如KLH，再与辅剂混合后，注射入宿主动物体内。其中，由动物体内所产生的抗体，是能以蛋白质A管柱及/或亲合性管柱纯化。通常宿主包括兔子(rabbits)、老鼠(mice)、天竺鼠(guinea pigs)、大白鼠(rats)。许多辅剂能依据不同宿主提升其免疫反应，包括佛朗式辅剂(Freund’s adjuvant)(完全与不完全)、氢氧化铝或CpG的矿物胶、表面活性物质，如溶血软磷脂(lysolecithin)、聚阴离子(polyanions)、胜肽(peptides)、油乳剂(oil emulsions)、血氰蛋白(keyhole limpet hemocyanin)与二硝基酚(dinitrophenol)，对人类有效的辅剂包含卡介苗(Bacille-Cuerin，BCG)及小棒杆菌(Corynebaterium parvum)。

多株抗体出现于免疫个体的血清，而单株抗体则能以标准融合瘤细胞制备(参考Kohler et al.(1976)Eur J Immunol 6,292；and Hammerling et al.(1981)Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas，Elsevier，N.Y.)。特别是，单株抗体能通过连续细胞株繁殖而获得，如Kohler等人于1975年在自然杂志256,495及美国专利号4,376,110中的人类B细胞融合瘤细胞技术描述(Kosbor et al.(1983Immunol Today 4，72；Cole et al，(1983)Proc，Natl.Acad，Sci，USA 80，2026)以及EBV-融合瘤细胞技术(Cole et al.(1983)Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96)。在此，上述抗体可为任何免疫球蛋白抗体，包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD，及其任一亚型。本发明中，该融合瘤细胞产生的单株抗体能培养于活体及试管中。因单株抗体具有于活体内生产高校价(titer)的能力，故较佳使用单株抗体制备本发明所需的抗体。在获得抗IL-19抗体后，即可由此领域公知实验，侦测抗体IL-19的中和效力。

完整抗IL-19人类抗体，如表现于基因转殖动物中的抗体，亦为本发明的特征。参考Green et al.，Nature Genetics 7：13(1994)，and U.S.Patent Nos.5,545,806 and 5,569,825.。

自然产生的抗原结合片段(如F(ab’)₂、Fab或Fv)是由公知技术所制备，例如以胃液素分解抗体分子，而得到F(ab’)₂片段，以及由还原F(ab’)₂片段双硫键而得到Fab片段。

本发明所使用的抗IL-19抗体，亦可为基因工程抗体，如：人源化单株抗体、嵌合抗体、单链抗体(scFv)或单一模块抗体(domain antibody)(dAb；参考Ward，et.Al.，1989，Nature，341：544-546)。

人源化单株抗体包含人类免疫球蛋白(即，受予抗体(recipientantibody))，其中抗原结合区上负责抗原结合的区域/残基(region/residues)(即，互补决定区域(CRD)，尤其是专一决定性的残基)是被非人类免疫球蛋白(即，赠予抗体(donor antibody))的该些区域/残基所取代。在某些情况下，受予抗体中框架区域内也会有一个或多个残基被赠予抗体的片段取代，人源化抗体也可能包含既非来自受予抗体亦非来自赠予抗体的残基。这些所包含的受予抗体或赠予抗体的残基，进一步提升抗体效力且使抗体效力最佳化。通过本领域公知技术，如重组技术，亦可制作出人源化抗体。

嵌合抗体为一源自不同物种的不同抗体片段所获得的分子，如具有源自老鼠单株抗体的变异区(variable region)与人类免疫球蛋白恒定区(constant region)的抗体。这类抗体可通过公知技术制备，如参考：Morrisonet al.(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81，6851；Neuberger et al.(1984)Nature 312，604；及Takeda et al.(1984)Nature 314：452所述。

可通过重组技术，将编译V_H链与V_L链的核酸序列串连制备单链抗体。两变异区中较佳并入可折迭的连结片段(flexible linker)。或者，可使用单链抗体的制备技术(美国专利第4,946,778及4,704,692号)建立噬菌体scFV数据库，且对IL-19具有专一性的scFC复制株(clone)也能以公知技术从基因库中加以鉴定。最后，可再进一步确认正确的复制株其抑制IL-19的活性。

于一实施例中，本发明所使用的IL-19抗体为1BB1单株抗体(参考Hsinget al.，Cytokine 44：221-228；2008)、其抗原结合片段、或其基因工程变异区。以下为此单株抗体的重链、轻链的胺基酸序列，以及其所对应的核酸序列：

重链胺基酸序列：

AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCG CKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK(SEQ ID NO：1)

斜体区域：讯号胜肽

粗体区域：变异区(SEQ ID NO：2)

粗体加底线区域：CDR区

一般字体区域：恒定区

底线区域：枢纽区(hinge region)

重链核酸序列：

GCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCA TATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SEQ ID NO:3)

斜体区域：讯号胜肽编码区

粗体区域：变异区编码区(SEQ ID NO：4)

粗体加底线区域：CDR编码区

一般字体区域：恒定区编码区

底线区域：枢纽区(hinge region)编码区

轻链胺基酸序列：

WTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ ID NO：5)

斜体区域：讯号胜肽

粗体区域：变异区(SEQ ID NO：6)

粗体加底线区域：CDR区

一般字体区域：恒定区

底线区域：连结区

轻链核酸序列：

GCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQ IDNO：7)

斜体区域：讯号胜肽编码区

粗体区域：变异区编码区(SEQ ID NO：8)

粗体加底线区域：CDR编码区

一般字体区域：恒定区编码区

底线区域：连结区编码区

1BB1抗体是能以传统方法所制备，如：融合瘤细胞株制备，其描述于Hsing et al.，Cytokine 44：221-228；2008.中、化学合成制备、或通过重组技术而表现。

具有功能的1BB1变异抗体包含：V_H，其与1BB1(SEQ ID NO：2)至少具有75％(80％，85％，90％，或95％)的一致性；以及V_L，其与1BB1(SEQ IDNO：6)至少具有75％(80％，85％，90％，或95％)的一致性。如前所述，两胺基酸序列的「同源性百分比”(percent homology)」可依照一已知的算法所决定，其中该算法于Karlin and Altschul，Proc，Natl.Acad.Sci.USA87：2264-2268，1990.中所提出，并于Karlin and Altschul，Proc，Natl.Acad.Sci.USA 5873-5877，1993.所述的方法加以修饰。此算法便成为NBLAST及XBLAST两程序的演算基础(Altschul et al.，J.Mol.Biol.215：403-410，1990)，BLAST蛋白质搜寻由XBLAST程序在分数(score)为50及字符长度(wordlength)为3的设定条件下所执行，以获得多胜肽样本的同源胺基酸序列，使用在「Altschul et al.，Nucleic Acids Res.25：3389-3402，1997」中揭露的间隔BLAST(gapped BLAST)程序以获得可用作进行序列比较的间隔排比(gapped alignments)结果，当运算BLAST及间隔BLAST程序时，各程序(例如XBLAST及NBLAST)分别使用其预设参数，详细说明请参考www.ncbi.nih.gov。

由导入1BB1V_H或V_L框架区(frame region，FR)内的突变区，并维持完整的互补决定区域(CDR)，可获得具有功能的1BB1变异抗体(如，人源化抗体)。已知专一性取决于抗体的(CDR)与抗体，因此框架区上的突变并不影响抗体的专一性。抗体的互补决定区域(CDR)及框架区(frame region)可由其V_H及V_L胺基酸序列决定，参考www.bioinf.org.uk/abs。于本发明中，抗体功能结合专一性可由公知技术分析，如酵素免疫分析法(ELISA)、或西方墨点法(western-blot)分析。

另一方面，具有功能的1BB1变异抗体为一种基因工程抗体，包含与1BB1相同的V_H与V_L。而此类的变异抗体(如：嵌合抗体或单链抗体)可由上述方法制得。

若需要，任何抗IL-19抗体能与治疗RA的抗RA试剂共同使用。如：抗IL-20、抗IL-20R1、抗TNFα、抗IL-6受体抗体、或可溶性TNFα。而抗IL-20、抗IL-20R1、抗TNFα、抗IL-6受体的抗体皆能以上述方法制备，即以IL-20、IL-20R1、IL-6、TNFα或其片段，为诱导抗原。参考如：美国专利7,582,298。以下所列为Genbank中的人类抗原的登入号：

人类IL-20：NP_061194(蛋白质)以及NM_018724(基因)。

人类IL-20R1：NP_055247(蛋白质)以及NM_014432.2(信使核糖核酸(mRNA))

人类TNF：NP000585.2(蛋白质)以及000594.2(基因)。

人类IL-6受体：NP_852004(蛋白质)以及NM_181359.1(基因)；NP_000556(蛋白质)以及NM_000565.2(基因)。

于一实施例中，能中和IL-20活性的单株抗体7E，或其具功能的变异抗体，能与抗IL-19抗体共同使用以治疗RA。而mAb7E是由融合瘤细胞株所分泌，其中，该融合瘤细胞株寄存于美国菌种保存中心(American TypeCulture Collection，10801 University Boulevard，Manassas，VA20110-2209，USA)编号PTA-8687。参考US 7,435,800及US 20090048432。此融合瘤细胞株将会在美国专利申请后径自无条件地公开释出，并会于美国菌种保存中心中保存，其保存期限自即日起的五年内，而在维持本专利有效性的前提下，其保存期限自寄存当日起算至少三十年。mAb7E的重链与轻链的胺基酸序列/cDNA序列如下。

mAb7E的重链核酸序列(SEQ ID NO：9)及胺基酸序列(SEQ ID NO：10)

atg tac ttg gga ctg aac tat gta ttc ata gtt ttt ctc tta aat

M Y L G L N Y V F I V F L L N 15

ggt gtc cag agt

30

45

60

75

90

105

120

135

gcc aaa acg aca ccc cca tct gtc tat cca

A K T T P P S V Y P 150

ctg gcc cct gga tct gct gcc caa act aac tcc atg gtg acc ctg

L A P G S A A Q T N S M V T L 165

gga tgc ctg gtc aag ggc tat ttc cct gag cca gtg aca gtg acc

G C L V K G Y F P E P V T V T 180

tgg aac tct gga tcc ctg tcc agc ggt gtg cac acc ttc cca gct

W N S G S L S S G V H T F P A 195

gtc ctg cag tct gac ctc tac act ctg agc agc tca gtg act gtc

V L Q S D L Y T L S S S V T V 210

ccc tcc agc acc tgg ccc agc gag acc gtc acc tgc aac gtt gcc

P S S T W P S E T V T C N V A 225

cac ccg gcc agc agc acc aag gtg gac aag aaa att gtg ccc agg

H P A S S T K V D K K I V P R 240

gat tgt ggt tgt aag cct tgc ata tgt aca gtc cca gaa gta tca

D C G C K P C I C T V P E V S 255

tct gtc ttc atc ttc ccc cca aag ccc aag gat gtg ctc acc att

S V F I F P P K P K D V L T I 270

act ctg act cct aag gtc acg tgt gtt gtg gta gac atc agc aag

T L T P K V T C V V V D I S K 285

gat gat ccc gag gtc cag ttc agc tgg ttt gta gat gat gtg gag

D D P E V Q F S W F V D D V E 300

gtg cac aca gct cag acg caa ccc cgg gag gag cag ttc aac agc

V H T A Q T Q P R E E Q F N S 315

act ttc cgc tca gtc agt gaa ctt ccc atc atg cac cag gac tgg

T F R S V S E L P I M H Q D W 330

ctc aat ggc aag gag ttc aaa tgc agg gtc aac agt gca gct ttc

L N G K E F K C R V N S A A F 345

cct gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa acc aaa ggc aga ccg

P A P I E K T I S K T K G R P 360

aag gct cca cag gtg tac acc att cca cct ccc aag gag cag atg

K A P Q V Y T I P P P K E Q M 375

gcc aag gat aaa gtc agt ctg acc tgc atg ata aca gac ttc ttc

A K D K V S L T C M I T D F F 390

cct gaa gac att act gtg gag tgg cag tgg aat ggg cag cca gcg

P E D I T V E W Q W N G Q P A 405

gag aac tac aag aac act cag ccc atc atg gac aca gat ggc tct

E N Y K N T Q P I M D T D G S 420

tac ttc gtc tac agc aag ctc aat gtg cag aag agc aac tgg gag

Y F V Y S K L N V Q K S N W E 435

gca gga aat act ttc acc tgc tct gtg tta cat gag ggc ctg cac

A G N T F T C S V L H E G L H 450

aac cac cat act gag aag agc ctc tcc cac tct cct ggt aaa TGA

N H H T E K S L S H S P G K -464

粗体代表mAb7E重链的V_H(DNA序列SEQ ID NO：11；蛋白质序列：SEQ ID NO：12)

mAb7E的轻链核酸序列(SEQ ID NO：13)及胺基酸序列(SEQ ID NO：14)

atg atg agt cct gcc cag ttc ctg ttt ctg tta gtg ctc tgg att

M M S P A Q F L F L L V L W I 15

cgg gaa acc aac ggt

R E T N G

30

45

60

75

90

105

120

gct gat

A D 135

gct gca cca act gta tcc atc ttc cca cca tcc agt gag cag tta

A A P T V S I F P P S S E Q L 150

aca tct gga ggt gcc tca gtc gtg tgc ttc ttg aac aac ttc tac

T S G G A S V V C F L N N F Y 175

aag tgg aag att gat ggc agt gaa cga caa aat ggc gtc ctg aac

P K D I N V K W K I D G S E R 180

agt tgg act gat cag ccc aaa gac atc aat gtc gac agc aaa gac

Q N G V L N S W T D Q D S K D 195

agc acc tac agc atg agc agc acc ctc acg ttg acc aag gac gag

S T Y S M S S T L T L T K D E 210

tat gaa cga cat aac agc tat acc tgt gag gcc act cac aag aca

Y E R H N S Y T C E A T H K T 225

tca act tca ccc att gtc aag agc ttc aac agg aat gag tgt tag

S T S P I V K S F N R N E C - 239

粗体代表mAb7E重链的V_L(DNA序列SEQ ID NO：15；蛋白质序列：SEQID NO：16)

当使用两种抗体来共同治疗RA时，则两种抗体会形成一双-专一性复合体(如：双-专一性抗体)，其包含两种抗原结合区(如：两对重-轻链)，一者是对IL-19具专一性，另一者是对IL-20、IL-20R1、或TNFα具专一性。而此种抗体能由传统方法而制得。

于另一实施例中，本发明将抗IL-19抗体与可溶性的TNFα受体共同使用。而其可溶性的TNFα受体胺基酸序列系如下：

人类可溶性的TNF受体的胺基酸序列(SEQ ID NO：17)

aqvaft pyapepgstc rlreyydqta qmccskcspg qhakvfctkt sdtvcdsced stytqlwnwv peclscgsrc ssdqvetqactreqnrictc rpgwycalsk qegcrlcapl rkcrpgfgva rpgtetsdvv ckpcapgtfs nttsstdicr phqic

而此可溶性的受体较佳是与免疫球蛋白(如：人类IgG1)的Fc结合，而形成一结合胜肽(如：依那西普(etanercept))。而此结合胜肽能以传统重组技术而制备。

于将上述抗体用以治疗RA时，任一上述的抗IL-19的抗体，可单独或添加抗RA试剂后，再与医药上所能接受的载体混合而形成一种医药组合物。于此，「可接受」意指载体须能与该组成物的活性成分兼容(较佳是能稳定活性成分)，且不可在治疗过程中危害个体。一般而言，适宜的载体可包括微晶质纤维素(microcrystalline cellulose)、甘露糖醇(mannitol)、葡萄糖、脱脂奶粉、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylprrolidone)、及淀粉，或其组合。

上述的医疗组成物可经口服、肠胃外(parentally)、喷剂吸入、局部给予(topically)、直肠、鼻、口颊(buccally)、阴道或植入式药物储槽等传统途径完成投药，以治疗罹患RA的病患。其中，所称的经「肠胃外(parental)」投药一词可包括经皮下(subcutaneous)、皮内(intracutaneous)、静脉内(intravenous)、肌肉内(intramscular)、关节内(intraarticular)、动脉内(intraarterial)、滑液内(intrasynovial)、胸骨内(intrasternal)、脑脊髓膜内(intrathecal)、脑病灶内(intralesional)、及头盖骨内(intracarnial)的注射或注入方式。

一种无菌注射型医疗组成物，例如无菌注射型水溶性或脂溶性悬浮液，其调配方法可利用相关技术领域中适宜使用的分散剂(dipersing agent)或润湿剂(wetting agent)(例如Tween 80)以及悬浮剂(suspending agent)。无菌注射型制剂亦可为以无毒性可肠胃外接受的稀释剂或溶剂所制成的无菌注射型溶液或悬浮液，其中，无毒性可肠胃外接受的稀释剂或溶剂的例子可为1，3-丁二醇(1，3-butanediol)。其它能运用的可接受医药载体及溶剂可包括甘露醇(mannitol)、水、林格式剂(Ringer’s solution)、及等渗透压氯化钠溶液(isotonic sodium chloride solution)。此外，亦可使用无菌或不挥发性(fixed)油类等(例如合成的单或双酸甘油脂(mono-or diglyceride))，作为溶剂或悬浮用介质。若系考虑天然油类，其它如脂肪酸等，例如油酸(oleic acid)及其甘油脂衍生物，亦可以用于注射型制剂的制备，而这类脂肪酸制成的制剂其组成相似于天然的医药用可接受性油类，如橄榄油或蓖麻油(castoroil)，特别是此二油类的多氧乙基化(polyoxyethylated)型态。于此，可接受的油类或悬浮液中亦可加入一长链的乙醇稀释剂或悬浮剂，又或加入羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose)或其相似的悬浮剂。至于制剂调配过程亦可添加界面剂，一般使用者为Tweens、Spans或其相似的乳化剂(emulsifying agent)，又或普遍使用在药物生产上可接受性固体、液体或其它剂型，其能依照目的规划而使用。

此外，上述的医药组成物尚可通过储存式注射型药剂(injectable depot)的途径投予受试者，如投予一、三或六个月的储存式注射型或生物可分解性质的材料的药剂。

本领域技术人员在不需详述下即能通过上述说明实施本发明，以下实施例仅需以说明内容即能推断，不限于任何形式的揭示。所有本发明引用的出版物皆并入参考文献。

实施例：以单株抗体1BB1治疗RA

以胶原蛋白诱导关节炎的大白鼠(collagen-induced arthritis，CIA)侦测单株抗体1BB1的抗RA效用。而该CIA大白鼠为研究人类类风湿性关节炎的较佳示范动物。

以八周大的公Sprague-Dawley大白鼠进行CIA的诱导。首先，以200μtl的乳剂，于大白鼠进行皮内注射(于背部)，其中该乳剂包含1∶1∶1(v/v/v)的佛朗式全佐剂(Freund’s complete adjuvant)、4mg/ml热致死结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis；Arthrogen-CIA；Chondrex，Redmond，WA)、以及牛科第二型胶原(CII；2mg/ml溶于0.05M醋酸)。注射后第八天，再以100μl上述的乳剂，于大白鼠的尾巴末端进行皮下注射，以促进其免疫反应。观测起始免疫反应后的第11天至13天间的CIA大白鼠：

本实验分为四组大白鼠(n＝7)：

第一组：健康大白鼠

第二组：第一次注射第二型胶原蛋白后，即注射10天的PBS(s.c.)的CIA大白鼠

第三组：第一次注射第二型胶原蛋白后，即注射8天的控制组老鼠的IgG mIgG(5mg/kg，s.c.)

第四组：第一次注射第二型胶原蛋白后，即注射8天的的1BB1抗体(5mg/kg，s.c.)。

每一受试的大白鼠，于第二型胶原蛋白诱导初次免疫反应后的第10至18天中，以游标测径器，每天测量一次脚掌厚度(hind-paw thickness)。所有本实验的原始结果会以Prism 4.0；GraphPad(圣地亚哥，CA，USA)软件进行统计分析。而克-瓦二氏测试(Kruskal-Wallis test)是用来比较注射1BB1的CIA大白鼠以及注射PBS的CIA大白鼠的脚掌厚度。当P值＜0.05，则认定结果显著。而所有大白鼠的疾病严重的程度(disease severity scores)，是由其脚掌所伴随的肿大程度与红斑程度而决定。

如图1中的图A所示，其第一组大白鼠(即：健康大白鼠)的脚掌厚度于全实验过程中，仅些微增加；然而第二组及第三组大白鼠(即：注射PBS及mIgG的CIA大白鼠)的脚掌厚度于全实验过程中，则明显增加。比较第二组及第四组的大白鼠(即：注射1BB1的CIA大白鼠)，其第四组大白鼠的脚掌厚度明显变小。意指，其1BB1能降低由CIA诱导的脚掌肿胀程度。且第四组大白鼠的疾病严重程度也远低于第二组以及第三组大白鼠(P＜0.05)，参考图1的图B。其结果表示1BB1能够有效的降低CIA大白鼠的疾病严重度。

接着，以具有高分辨率、低剂量X-光扫描的1076-microCT-40系统(Skyscan，Aartselaar，Belgium)进行X光微测量分析(Microcomputedtomographic analysis)，以评估1BB1防止CIA大白鼠体内，骨质摧毁的功效。于扫描仪中的X-光管是以48kV的光能量，200uA的电流，通过一0.5-mm厚的滤片，及曝光1180ms来进行侦测。其影像的画素大小为17.20μum，而扫描时间约15分钟。对扫描影像标准化重建后，其每一胫骨样品的数据组由软件(CTAn；Skyscan)进行重新取样，以相同方法对各样品进行定位，全部分析重头至尾以一致的条件(如临界值)进行，并以50片连续切片分析骨矿物质的密度(其三维的骨质特征参数)。而其分析结果是以相对于PBS控制组的百分比计算。

由注射PBS的CIA大白鼠所得的胫骨，其与健康大白鼠相较，具有明显的骨质危机，而注射1BB1的大白鼠与注射PBS的CIA大白鼠相比，则有骨质流失减轻的现象。

而对于上述的CIA大白鼠，其骨矿物质密度用以评估疾病严重程度的量化参数。结果如图2所示，其以1BB1注射的大白鼠，较PBS处理的大白鼠有明显较高的骨矿物质密度(P＜0.05)。

所有说明书中揭示的特征皆能于任何形式组合，说明书中所揭示的任何特征能被相同、相似或近似目的的特征取代，因此，除非特别阐述，否则每一揭示特征仅为同类相同或近似特征的举例。

根据以上描述，本领域技术人员能在不偏离本发明精神及范畴下，能了解其必要技术特征，并且能于各种状况下进行各种变更及修改，因此，其它实施例也包含于实施例中。

序列表

Claims

1.一种治疗类风湿性关节炎的医药组成物，包含：

一有效剂量的抗IL-19抗体。

2.如权利要求1所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体为一人类化抗体、一嵌合抗体、一单链抗体、一自然产生的抗体或一其抗原结合片段。

3.如权利要求2所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体包含：一重链变异区以及一轻链变异区，其中该重链变异区包含SEQ ID NO：2的所有互补决定区，而该轻链变异区包含SEO ID NO：6的所有互补决定区。

4.如权利要求3所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体具有一包含SEQ ID NO：2的重链变异区，以及一包含SEQ ID NO：6的轻链变异区。

5.如权利要求4所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体为一嵌合抗体或一单链抗体。

6.如权利要求4所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体为1BB1单株抗体或一其抗原结合片段。

7.如权利要求1所述的医药组成物，其中，该组成物包含至少一试剂，该试剂选自由：一抗IL-20抗体、一抗IL-20R1抗体、一抗肿瘤坏死因子-α(TNFα)抗体、一抗IL-6抗体或一可溶性的TNFα受体所组成的群组。

8.如权利要求7所述的医药组成物，其中，该组成物包含一可溶性的TNFa受体。

9.如权利要求8所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体为一人类化抗体、一嵌合抗体、一单链抗体、一自然产生的抗体或一其抗原结合片段。

10.如权利要求9所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体包含：一重链变异区以及一轻链变异区，其中该重链变异区包含SEQ ID NO：2的所有互补决定区，而该轻链变异区包含SEO ID NO：6的所有互补决定区。

11.如权利要求10所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体具有一包含SEQ ID NO：2的重链变异区，以及一包含SEQ ID NO：6的轻链变异区。

12.如权利要求11所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体为一嵌合抗体或一单链抗体。

13.如权利要求11所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体为1BB1单株抗体或一其抗原结合片段。

14.如权利要求7所述的医药组成物，其中，该组成物包含一抗IL-20抗体，以形成具有抗IL-19抗体的一双-专一性复合物。

15.如权利要求14所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体以及该抗IL-20抗体皆为Fab片段。

16.如权利要求14所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体包含：一重链变异区以及一轻链变异区，该重链变异区包含SEQ ID NO：2的所有互补决定区，而该轻链变异区包含SEO ID NO：6的所有互补决定区；而该抗IL-20抗体包含：一重链变异区以及一轻链变异区，该重链变异区包含SEQID NO：12的所有互补决定区，而该轻链变异区包含SEO ID NO：16的所有互补决定区。

17.如权利要求16所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体为1BB1单株抗体的一Fab片段，且该抗IL-20抗体为7E单株抗体的一Fab片段。

18.如权利要求7所述的医药组成物，其中，该群组中包含一抗IL-20R1抗体，以形成具有抗IL-19抗体的一双-专一性复合物。

19.如权利要求18所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体包含：一重链变异区以及一轻链变异区，该重链变异区包含SEQ ID NO：2的所有互补决定区，而该轻链变异区包含SEO ID NO：6的所有互补决定区

20.如权利要求18所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体以及该抗IL-20R1抗体皆为Fab片段。

21.如权利要求20所述的医药组成物，其中，该抗IL-19抗体为单株抗体1BB1的Fab片段。