CN102335048A - 用于建立膀胱癌原位移植瘤动物模型的造模装置 - Google Patents
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Abstract
本发明为一种用于建立膀胱癌原位移植瘤动物模型的造模装置,解决了现有造模方法手术时间长、操作复杂、对动物膀胱粘膜损伤大等缺点。该装置包括前端固设有针芯的针座和带有空腔的套管座,在套管座前端固设有与空腔相通的软套管,针座前端套插在套管座的空腔内并由设于针座上的定位挡圈定位,此时针座上的针芯正好也套插于套管座的软套管中、且针芯针尖露出软套管端部的长度为0.5~1.0mm,所述的针芯在距针尖1.5~2.0cm处设有5°~7°的折角,所述的定位挡圈上开设有标记槽。该装置设计巧妙、结构简单、操作容易,大大缩短了手术时间,且对动物膀胱粘膜的损伤小,成瘤率可达100%。
Description
技术领域
本发明涉及一种医用器械,具体为一种用于建立膀胱癌原位移植瘤动物模型的造模装置。
背景技术
膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤,90%以上患者为移行细胞癌,其中浅表性膀胱癌占到70~85%。由于膀胱癌病变的多灶性,以及手术后肿瘤细胞种植于创面,术后肿瘤复发率高达50-70%。如今,人们通过建立膀胱癌动物模型来研究膀胱癌的病因、病理等生物学行为,膀胱灌注化疗、免疫治疗和生物治疗的疗效,为临床治疗和预防术后复发提供了科学依据。要开展膀胱癌防治研究就必须建立最大程度上接近人类发病情况的动物模型,其中,小鼠原位膀胱癌移植模型就是比较适合的一种,也是应用最多的肿瘤模型之一。
膀胱原位移植瘤动物模型因具有与临床膀胱肿瘤相似的病理过程而具有更强的实用性。目前常用的造模方法有以下几种:
1、膀胱壁内注射肿瘤细胞法(周洁,华中科技大学学报)。该法的主要缺点是操作复杂,肿瘤细胞悬液易外流造成腹腔转移,与临床病理过程差异大等。
2、先采用化学腐蚀法损伤膀胱粘膜,然后注入肿瘤细胞悬液(李宪平等,现代泌尿外科杂志,14)。该方法采用0.2MOL硝酸银溶液处理膀胱粘膜后,接种膀胱癌MB49细胞,建立C57BL/6小鼠原位膀胱肿瘤动物模型,总成瘤率达到96.7%,但是该方法的缺点是手术过程复杂,费时较长,对动物损伤较大。
3、采用蛋白酶消化法损伤膀胱粘膜后,再接种肿瘤细胞法。该方法的缺点是操作难度大,成瘤率很不稳定,难以推广应用。
4、采用机械损伤法造成膀胱粘膜操作后,再接种肿瘤细胞法(何威,中国临床医学)。该方法采用切开腹壁,取出膀胱,直视下以针尖划伤膀胱粘膜,接入膀胱癌T24细胞,再注入多聚赖氨酸的方法建立祼鼠膀胱癌动物模型,成瘤率达到100%。该方法的缺点是必须切开动物腹壁,取出膀胱后对膀胱粘膜进行划伤,这样不仅手术时间长,而且对动物损伤大,模型难以大量复制。
对于以上的几种造膜方法,如今医学上采用第四种方法的居多,因为该方法的成瘤率极高,可达到100%。但是该方法必须得切开动物腹壁,取出膀胱后对膀胱粘膜进行划伤,这样不仅手术时间长,而且对动物膀胱粘膜损伤很大,那么是否可以设计一种新的机械造模装置,保证成瘤率在100%的基础上实现缩短手术时间、避免或减少对动物膀胱粘膜损伤的目的,成为值得人们考虑和研究的问题。
发明内容
本发明是为了解决现有的膀胱原位移植瘤动物模型造模方法存在手术时间长、操作复杂、对动物膀胱粘膜损伤大等缺点,而提供了一种用于建立膀胱癌原位移植瘤动物模型的造模装置。本发明造模装置可以在不切开动物腹壁的情况下对动物膀胱粘膜进行造模手术,这就在一定程度上大大缩短了手术时间、减少了对动物膀胱粘膜的损伤。
本发明是采用如下技术方案实现的:
一种用于建立膀胱癌原位移植瘤动物模型的造模装置,包括前端固设有针芯的针座和带有空腔的套管座,在套管座前端固设有与空腔相通的软套管,针座前端套插在套管座的空腔内并由设于针座上的定位挡圈定位,此时针座上的针芯正好也套插于套管座的软套管中、且针芯的针尖露出软套管端部的长度为0.5~1.0mm,所述的针芯在距针尖1.5~2.0cm处设有5°~7°的折角,所述的定位挡圈上开设有标记槽。规定针芯的针尖端为该装置的前端。
进一步的,针芯在距针尖1.5~2.0cm处折有5°~7°的偏角,根据几何学公式:Sing A = a / c,其中a为短直角边、c为斜边、A为短直角边所对的锐角,则可以计算出a= Sing A×c,即损伤圆形的半径。例如设定c=1.5cm,由上述公式可以得出当A =5°时,Sing A =0.0871,则a =0.0871×15 = 1.308 mm;当A =7°时,Sing A =0.1218,则a = 0.1218×15 =1.83mm。所以当针芯转动时,可以形成一个半径为1.308mm~1.83mm的圆形转动,这个转动可以造成动物膀胱粘膜稳定的、程度均一的损伤,再有当针座与套管座定位后针尖露出软套管的长度为0.5~1.0mm,所以也不会造成膀胱穿孔,这些都是膀胱肿瘤移植的重要条件。上述的针芯在距针尖1.5~2.0cm处折有5°~7°的偏角以及当针座与套管座定位后针尖露出软套管的长度为0.5~1.0mm都是经过大量的临床试验而得出的,在这种尺寸规格下建立的动物模型的成瘤率都能达到100%。
本发明装置的具体使用方法:
具体使用该造膜装置时,先选取好实验用动物后将其常规麻醉,取仰卧位,并将其下腹部常规消毒,接着取该装置的套管座,将套管座前端的软套管经动物的尿道缓缓插入到膀胱腔内,抽出尿液;再取针座,将针座前端带折角的针芯缓缓的插入套管座前端的软套管内,直至套管座的空腔与针座的前端重合并由定位挡圈定位;当针座与套管座定位好以后,针芯就露出软套管外0.5~1.0mm,此时以左手固定套管座,使软套管头部抵在动物膀胱壁上,那么针芯就插入到了动物膀胱壁、且深度为0.5~1.0mm,右手按顺(逆)时针方向转动针座,针座带动针芯转动数圈(所转动的圈数由具体的手术方案来确定),并通过针座的定位挡圈上的标记槽来记录转动的具体圈数,转动圆形造成动物膀胱粘膜稳定的、程度均一的损伤后,慢慢取出针座,通过套管座上的软套管将肿瘤细胞接入动物体内,最后将套管座慢慢拔出,待动物自然苏醒即可。上述过程中动物的选取、动物的麻醉消毒、肿瘤细胞的接入等都是本领域技术人员所熟知并容易实现的。
所述的软套管外径为0.6~1.2mm、内径为0.3~0.6mm、长度为2~4cm;所述的针芯直径为0.3~0.6mm,长度为3~5cm。
所述的软套管头部钝圆,针芯的针尖部为锋利的锐角。软套管头部钝圆可
以避免其对动物膀胱壁造成意外损伤,针芯针尖为锋利的锐角可以比较容易的对动物膀胱壁造成稳定的、程度均一的损伤。
本发明的造模装置设计巧妙、结构简单,在具体的造模过程中,操作容易方便,大大缩短了造模手术时间,对动物膀胱粘膜的损伤是稳定的、程度均一的,而且成瘤率都为100%。
附图说明
图1为本发明装置的结构示意图。
图2为本发明装置中的针座结构示意图。
图3为本发明装置中的套管座结构示意图。
图4为图2中的A-A抛面图。
图中:1-针芯、2-针座、3-空腔、4-套管座、5-软套管、6-定位挡圈、7-标记槽。
具体实施方式
以下结合附图对本发明做进一步的描述:
一种用于建立膀胱癌原位移植瘤动物模型的造模装置,包括前端固设有针芯1的针座2和带有空腔3的套管座4,在套管座4前端固设有与空腔3相通的软套管5,针座2前端套插在套管座4的空腔3内并由设于针座2上的定位挡圈6定位,此时针座2上的针芯1正好也套插于套管座4的软套管5中、且针芯1的针尖露出软套管5端部的长度为0.5~1.0mm,所述的针芯1在距针尖1.5~2.0cm处设有5°~7°的折角,所述的定位挡圈6上开设有标记槽7。
所述套管座4前端的软套管5由质地较软的材料制成,可以选择用橡胶或塑料,且软套管5的头部钝圆、表面光滑,这样的话,当软套管5经尿道插入动物的膀胱腔时,可以有效避免软套管5对动物膀胱粘膜的损伤,而且当针芯1在软套管5中转动的时候,软套管5可以随针芯1在一定的范围内摆动。
所述的针芯1可由不锈钢制成。
以下是使用本发明造膜装置建立膀胱癌原位移植瘤小鼠模型的具体实施例。
实施例1
T739小鼠,70只,雌性,体重20-24克,随机分为实验组60只,对照组10只,购自北京华阜康实验动物技术有限公司,生产许可证号:SCXK(jing)2009-0004;
小鼠膀胱癌BTT细胞:由山西医科大学泌尿外科杨晓峰教授惠赠。
小鼠按60mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠麻醉,取仰卧位,下腹部常规消毒,将无菌套管座4的软套管5外涂液体石蜡,经尿道缓缓插入膀胱腔内,抽出尿液。将带有5-7°偏角的针芯1缓缓插入套管座4的软套管5内,以左手固定套管座4,使软套管5头部抵在动物膀胱壁上,右手按顺时针方向转动针芯1,转3-5圈(1080~1800°)后拔出针芯1,立即通过套管座4上的软套管5注入0.1ml含有106个BTT细胞的细胞悬液,最后慢慢拔出套管座4,待小鼠自然苏醒即可。
成瘤率观察 :小鼠接种后常规饲养观察40天,观察期间如果小鼠死亡,解剖小鼠观察膀胱肿瘤生成情况,并将膀胱以10%甲醛固定,切片进行病理检查。成瘤率按公式:成瘤小鼠数/接种小鼠数×100%计算。以膀胱内检查出肿瘤细胞或膀胱内长出肉眼可见的肿瘤为判断成瘤的标准。同时称量膀胱湿重,与对照组进行比较。对照组小鼠不做膀胱损伤,只接种肿瘤细胞。
结果:60只损伤后接种的小鼠膀胱中均发现有肿瘤生成,成瘤率为100%。对照组小鼠膀胱中未见肿瘤生成。
实施例2
Bslb/c-nu-nu小鼠70只,雌性,体重20-22克,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证号:SCXK(jing)2006-0009;
细胞株:人膀胱癌T24细胞株,购自中科院上海生物科技有限公司。
小鼠按60mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠麻醉,取仰卧位,下腹部常规消毒,将无菌套管座4的软套管5外涂液体石蜡,经尿道缓缓插入膀胱腔内,抽出尿液。将带有5-7°偏角的针芯1缓缓插入套管座4的软套管5内,以左手固定套管座4,使软套管5头部抵在动物膀胱壁上,右手按顺时针方向转动针芯1,转3-5圈(1080~1800°)后拔出针芯1,立即通过套管座4上的软套管5注入0.1ml含有106个T24细胞的细胞悬液,最后慢慢拔出套管座4,待小鼠自然苏醒即可。
成瘤率观察 :小鼠接种后常规饲养观察60天,观察期间如果小鼠死亡,解剖小鼠观察膀胱肿瘤生成情况,并将膀胱以10%甲醛固定,切片进行病理检查。成瘤率按公式:成瘤小鼠数/接种小鼠数×100%计算。以膀胱内检查出肿瘤细胞或膀胱内长出肉眼可见的肿瘤为判断成瘤的标准。同时称量膀胱湿重,与对照组进行比较。对照组小鼠不做膀胱损伤,只接种肿瘤细胞。
结果:60只损伤后接种的小鼠膀胱中均发现有肿瘤生成,成瘤率为100%。对照组小鼠膀胱中未见肿瘤生成。
表1 膀胱粘膜损伤与不损伤小鼠成瘤率比较
组别 | 动物数 | 细胞接种量 | 成瘤动物数 | 肿瘤发生率 (%) |
T739 未损伤组 | 10 | 1×106 | 0 | 0 |
T739 损伤组 | 60 | 1×106 | 60 | 100 |
Balb/C-nu-nu未损伤组 | 10 | 1×106 | 0 | 0 |
Balb/C-nu-nu损伤组 | 60 | 1×106 | 60 | 100 |
表2 荷瘤小鼠平均生存时间及平均膀胱湿重
组别 | 动物数 | 平均生存时间 | 平均膀胱湿重(g) |
T739 未损伤组 | 10 | >40d | 0.02±0.22 |
T739 损伤组 | 60 | 26.69±9.24d | 0.54±0.37 |
Balb/C-nu-nu 未损伤组 | 10 | >60d | 0.02±0.32 |
Balb/C-nu-nu 损伤组 | 60 | 34.59±9.80d | 0.11±0.13 |
由上述表1、表2表可知,使用本发明造模装置建立的膀胱癌原位移植瘤动物的模型,成瘤率极高,可达100%。
综上所述,由上述试验可知本发明装置建立小鼠原位膀胱肿瘤动物模型不但操作简单、对动物膀胱粘膜的损伤小,而且总的成瘤率可达100%。
Claims (3)
1.一种用于建立膀胱癌原位移植瘤动物模型的造模装置,其特征在于:包括前端固设有针芯(1)的针座(2)和带有空腔(3)的套管座(4),在套管座(4)前端固设有与空腔(3)相通的软套管(5),针座(2)前端套插在套管座(4)的空腔(3)内并由设于针座(2)上的定位挡圈(6)定位,此时针座(2)上的针芯(1)正好也套插于套管座(4)的软套管(5)中、且针芯(1)的针尖露出软套管(5)端部的长度为0.5~1.0mm,所述的针芯(1)在距针尖1.5~2.0cm处设有5°~7°的折角,所述的定位挡圈(6)上开设有标记槽(7)。
2.根据权利要求1所述的用于建立膀胱癌原位移植瘤动物模型的造模装置,其特征在于:所述的软套管(5)外径为0.6~1.2mm、内径为0.3~0.6mm、长度为2~4cm;所述的针芯(1)直径为0.3~0.6mm,长度为3~5cm。
3.根据权利要求1或2所述的用于建立膀胱癌原位移植瘤动物模型的造模装置,其特征在于:所述的软套管(5)头部钝圆,针芯(1)的针尖部为锋利的锐角。
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