CN102316935A

CN102316935A - 用于治疗肝炎的包含聚乙二醇化干扰素、利巴韦林和vx-950的治疗方案

Info

Publication number: CN102316935A
Application number: CN2009801480304A
Authority: CN
Inventors: R·S·考夫曼; C·J·C·蒂托瓦; R·波罗; R·P·G·范赫斯维克; M·G·博蒙; G·R·皮焦
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV; Vertex Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2008-09-24
Filing date: 2009-09-24
Publication date: 2012-01-11
Also published as: WO2010036799A1; AU2009296653A1; CA2738477A1; US20130101554A1; MX2011003121A; US20110236351A1; KR20110074870A; IL211810A0; US8871812B2; EP2328656A1; JP2012503669A; EA201170484A1

Abstract

本发明涉及用于治疗或预防患者的丙型肝炎感染的抗病毒疗法和组合物，并涉及本文中公开的其它方法。本发明还涉及包含组合物和剂型的药盒和药物包。

Description

用于治疗肝炎的包含聚乙二醇化干扰素、利巴韦林和VX-950的治疗方案

交叉引用

本申请要求2008年9月24日提交的美国申请号61/099,849、2008年10月30日提交的美国申请号61/109,655和2009年9月16日提交的美国申请号61/243,041的权益，所述申请的内容通过引用其整体结合到本文中。

通过引用结合到本文的有2009年9月24日创建的名为“08-146PCT_ST25.txt”的序列表，该序列表具有761字节。序列表不包括提交的申请的公开内容以外的任何内容。

发明的技术领域

本发明涉及用于治疗丙型肝炎病毒感染的方法。

发明背景

丙型肝炎病毒(HCV)感染是一个不得不面对的人类医学问题。HCV被公认为是大部分非A、非B型肝炎病例的致病因子，估计全球人血清阳性率为3％。仅在美国就有近4百万人受到感染。

在被HCV感染的人群中，20-25％在急性感染后能够清除病毒，但75-80％将发展成慢性丙型肝炎感染。这一般引起肝脏炎症复发和逐步恶化，常常导致更严重的疾病状态，例如肝硬化和肝细胞癌。遗憾的是，对慢性HCV的消耗性进程尚无明显有效的治疗法。

HCV基因组编码3010-3033个氨基酸的多蛋白。据推测，HCV非结构(NS)蛋白提供病毒复制必不可少的催化机制。通过蛋白水解切割多蛋白得到NS蛋白。

HCV NS蛋白3(NS3)具有丝氨酸蛋白酶活性，有助于加工大多数病毒酶类，因此被认为是病毒复制和感染性必不可少的。已知黄热病毒NS3蛋白酶的突变降低病毒的感染性。研究表明，NS3的头181个氨基酸(病毒多蛋白的残基1027-1207)含有NS3的丝氨酸蛋白酶结构域，该酶加工HCV多蛋白的所有4个下游位点。

HCV NS3丝氨酸蛋白酶及其相关辅因子NS4A有助于加工所有的病毒酶，因此被认为是病毒复制必不可少的。这种加工似乎与由人免疫缺陷病毒天冬氨酰蛋白酶进行的加工类似，其还参与了病毒酶加工。抑制病毒蛋白加工的HIV蛋白酶抑制剂是人类有效的抗病毒药，这就表明中断病毒生命周期的这个阶段可产生治疗活性剂。因此是药物研发颇有吸引力的靶标。

目前尚无任何令人满意的抗HCV药物或治疗法。直到最近，唯一证实的HCV病的疗法是干扰素治疗。最早获准用于HCV感染的疗法是用标准(非聚乙二醇化)干扰素α治疗。然而，干扰素有明显的副作用，且干扰素α单一疗法仅在一部分(约25％)病例中引起长期缓解。在治疗方案中加入利巴韦林略微增加应答率。最近引入与利巴韦林联合的聚乙二醇化形式干扰素(PEG-INTRON

和PEGASYS)仅导致缓解率的适度改进，而且副作用也只是部分降低(PEG是指聚乙二醇)。最新治疗标准是治疗方案持续24-48周，这取决于预后因素，例如HCV基因型和对疗法最初应答的证实。在聚乙二醇化干扰素α-2a/2b和利巴韦林的48周方案后，大多数HCV基因型-1患者无法达到持续病毒学应答(SVR)。然而，既往PR无应答者(零应答者和部分应答者)和复发者用聚乙二醇化干扰素和利巴韦林再次治疗达到的SVR率分别小于10％和30％。有效的抗HCV疫苗的前景仍不明朗。

因此，需要对抗HCV的疗法和对抗HCV的化合物的合适剂量方案。

HCV和其它疾病和病症都与肝损害有关。还需要治疗肝损害的疗法和合适的剂量方案。

发明概述

本发明提供丙型肝炎病毒感染的治疗法。在一个实施方案中，本发明涉及治疗方案，所述方案包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且其中以1125mg的量每天两次给予VX-950，以180微克的量每周给予聚乙二醇化干扰素，以1000-1200mg的量每天给予利巴韦林。

在另一个实施方案中，本发明涉及治疗方案，所述方案包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且其中以1125mg的量每天两次给予VX-950，以1.5微克/千克的量每周给予聚乙二醇化干扰素，以800-1200mg的量每天给予利巴韦林。

附图简述

图1表示C208研究设计。

图2表示log₁₀HCV RNA水平随时间的平均变化(NC＝F)。

图3表示第4周的病毒学应答率。

图4表示未检出HCV RNA(＜10IU/mL)的％患者。

发明详述

PCT公布号WO 02/018369、WO 2006/050250和WO/2008/144072披露有关以下结构式的VX-950或其药学上可接受的盐：

(I)

VX-950的其它描述可参见PCT公布号WO 07/098270和WO08/106151。

因此，本发明的一个实施方案提供包括给予患者VX-950和药学上可接受的载体的治疗方案。这些药物组合物中VX-950的量可为约100mg-约1500mg、约300mg-约1500mg、约300mg-约1250mg、约450mg、约750mg或约1250mg。可以例如每天一次、两次或三次给予这些药物组合物的每一种。这些组合物的每一种可为一种或多种剂型(例如安瓶剂、胶囊剂、乳膏剂、乳剂、液体剂、晶粒剂、滴剂、注射剂、混悬剂、片剂、散剂)。这些药物组合物的每一种可通过本领域技术人员认为适当的一种或多种途径(例如口服、经输注、经注射、局部或胃肠外)并根据剂型给予。

本发明的另一个方面提供用于治疗或预防患者HCV感染的方法，所述方法包括给予患者VX-950。

在一些实施方案中，VX-950的量为至少约300mg(例如至少约450mg、至少约500mg、至少约750mg、至少约1250mg或至少约1500mg)。在一些实施方案中，VX-950的量小于约1500mg(例如小于约1250mg、小于约750mg、小于约450mg、小于约500mg或小于约300mg)。

应当理解的是，可对这些较低和较高的量加以组合以提供给予VX-950的优选剂量范围。例如，在一些实施方案中，以约300mg-约1250mg或约300mg-约1500mg的量给予VX-950。

在一些实施方案中，以约450mg的量给予VX-950。在其它实施方案中，以约500mg的量给予VX-950。在其它实施方案中，以约600mg的量给予VX-950。在其它实施方案中，以750mg的量给予VX-950约。在其它实施方案中，以约1000mg的量给予VX-950。在其它实施方案中，以约1250mg的量给予VX-950。

在这些实施方案的任一个中，一天一次给予VX-950的指定量。或者，一天两次给予VX-950的量(例如BID；q12h)。或者，一天三次给予VX-950的量(例如TID；q8h)。此外，可与食物或不与食物一起给予VX-950。

已在人体中对VX-950进行了试验，发现VX-950有效抑制HCV复制。申请人证实，给予VX-950能够明显减低HCV RNA水平。重要的是，申请人证实，将VX-950给予感染HCV的患者可抑制病毒，使得采用Roche COBAS TaqMan^TM HCV/HPS测定法(可获自RocheMolecular Diagnostics)无法检出病毒RNA。在以前的研究中，每8小时(q8h)接受750mg VX-950的8名受治疗者中，4人的HCV RNA水平低于定量限(LLQ 30IU/mL)，这4名受治疗者中，2人的HCV RNA水平低于检测限(LLD 10IU/mL)。

在以前的研究中，每8小时接受750mg VX-950的受试者在14天的治疗结束时，达到HCV-RNA中位值降低大于4log₁₀(即降低10,000倍)。在14天的治疗结束时，在其它两个VX-950剂量组的每组中观察到HCV-RNA中位值降低大于2log₁₀。接受VX-950的每个受试者在最初3天的治疗中达到HCV-RNA降低大于2log₁₀，接受VX-950的28名受试者中的26人在最初3天的治疗中HCV-RNA降低3log₁₀。参见实施例5。

研究证实，血浆病毒负荷在用VX-950治疗的患者中快速下降。另外，研究证实，在给药结束后，会慢慢回复至基线HCV RNA水平。准确地讲，在治疗结束后回复至HCV RNA基线水平的速率比治疗时HCVRNA下降的速率慢。这些结果与达到未检出HCV RNA水平一起表明了VX-950作为单一疗法的疗效。

因此，可以按以下量给予感染HCV的患者VX-950或其药学上可接受的盐：a)约450mg，每天三次，每8小时；b)以约750mg的量，每天三次，每8小时；c)以约1250mg的量，每天两次，每12小时；或d)以每次约1250的量，每天三次，每8小时。

在其它实施方案中，本发明提供用于治疗感染HCV的患者的方法，所述方法包括以约1125mg的量，每天两次；或以1125mg的量，每12小时，给予患者VX-950或其药学上可接受的盐。

在其它实施方案中，本发明提供通过给予VX-950使得患者的HCV RNA水平比治疗前低至少约2log₁₀(例如至少约4log₁₀)而治疗感染HCV的患者的方法。

本发明的又一个方面提供通过给予VX-950使患者的病毒RNA水平降到未检出水平并保持未检出水平直到达到“持续病毒应答”而治疗感染HCV的患者的方法。

一般而言，术语“RVR”、“SVR”、“EVR”是本领域众所周知的并属于本领域公认的含义。例如，“RVR”是指快速病毒应答，“SVR”是指持续病毒应答，而“EVR”是指早期病毒应答。通常，“RVR”表示在第4周未检出HCV RNA水平；“SVR”表示治疗结束后48周未检出HCV RNA水平；而“EVR”表示在第12周HCV RNA从基线降低≥2-log10或在第12周未检出HCV RNA。如上所述，“未检出(的)”HCVRNA是指用目前市售可获得的检测法测定、优选用Roche COBASTaqMan^TM HCV/HPS测定法测定的HCV RNA的存在小于10IU/mL。

研究表明，每8小时使用750mg VX 950的本发明方法产生较高的峰谷水平。峰谷水平是刚好在下一次剂量前血浆中药物下降达到的浓度(即在剂量之间的最低浓度)。尤其在病毒性疾病中，这对于保持药物水平超过某一浓度以保持对病毒复制的适当抑制是十分重要的。

因此，在一个优选的实施方案中，本发明提供将VX-950给予有其需要的患者的方法，所述方法包括以每次约750mg的量，每天三次，每8小时一次给予所述化合物。

正如公认的一样，具有灵活的给药方案是有利的。因此，在本发明的另一个实施方案中，给药为每天三次，但不是每8小时，而是任选进餐时服用。在某些实施方案中，VX-950与食物一起给予。

本发明还提供向有其需要的患者提供VX-950的方法，所述方法包括给予患者口服剂量的包含VX-950的组合物，其中向患者提供所述剂量，在给药后VX-950的平均血浆浓度(C_平均)至少为约750ng/mL。在一些实施方案中，VX-950的C_平均为约1000ng/mL或约1250ng/mL。在一些实施方案中，所述剂量基本上含有约750mg VX-950。在一些实施方案中，在给药后3小时内、优选在给药后2小时内、更优选1小时内获得/保持C_平均。在这些实施方案的一个优选形式中，保持VX-950的C_平均超过约24小时，优选超过12周。

另一方面，本发明提供通过在24小时期间给予至少一种包含VX-950的剂型而用于治疗患者的HCV感染的方法，其中给予所述剂型以在24小时期间保持最低约750ng/mL VX-950的峰谷血浆水平。

在该实施方案的某些形式中，给予所述剂型以保持约800ng/mL、优选在24小时期间约900ng/ml、更优选在24小时期间约1000ng/mL的最低峰谷血浆VX-950水平。

在某些优选的实施方案中，达到治疗上有效的血浆浓度，并保持某一峰谷水平。这些方法通过给予VX-950剂型而特别用于治疗患有HCV感染的人，其中在24小时时间内保持峰谷VX-950血浆水平最低为约750ng/mL、800ng/mL、900ng/mL或1000ng/mL。虽然不受理论的束缚，但是超过约1500ng/mL的峰谷水平被认为不是本发明所需要的。因此，约750ng/mL、800ng/mL、900ng/mL、1000ng/mL-约1500ng/mL(特别是1000ng/mL-约1500ng/mL)的峰谷水平属于本发明的范围。

本文还提供将VX-950递送给人的剂型，其中所述剂型包含VX-950，所述剂型在24小时期间至少一次给予时，在24小时期间保持峰谷血浆VX-950水平为至少约750ng/mL、800ng/mL、900ng/mL或1000ng/mL至在24小时期间为约1500ng/mL(特别是1000ng/mL-约1500ng/mL)。

理想的是，当本发明的方法包括治疗感染HCV的患者时，所述方法包括相对快地达到治疗上有效的VX-950血浆浓度，然后保持峰谷水平从而获得有效的治疗应答。有效的治疗应答优选为以下的一种或两种：a)达到持续病毒应答；和b)达到在血浆中未检出HCV RNA至少12周(12周以上)。本文使用的是“未检出(的)”HCV RNA是指通过目前市场上可获得的测定法、优选通过Roche COBAS TaqMan^TMHCV/HPS测定法测定的HCV RNA的存在小于10IU/ml。

通过给予患者负荷剂量可获得血浆浓度相对较快的下降。在一个实施方案中，负荷剂量约为1250mg VX-950。

在本发明的某些剂型中，所述剂型(除用来给予负荷剂量的剂型以外)含有约750mg VX-950，并且每8小时一次(即q8h)给予该剂型。

在某些实施方案中，每8小时一次给予VX-950剂型。

在某些实施方案中，每12小时一次给予VX-950剂型。

在某些实施方案中，VX-950的治疗持续时间比现有治疗标准短。

在某些实施方案中，给予VX-950少于约12周(或少于12周)。

在某些实施方案中，给予VX-950约8-12周(或8-12周)。

在某些实施方案中，给予VX-950约10周(或10周)。

建模数据表明，给予VX-950可在10周内根除野生型病毒。

在某些实施方案中，给予VX-950少于约10周。

在某些实施方案中，给予VX-950约2周。

申请人证实，可在接受2周VX-950治疗的患者达到SVR。

在其它实施方案中，给予VX-950少于约8周(或约8周或8周)、少于约6周(或约6周或6周)或者少于约4周(或约4周或4周)。

在某些实施方案中，本发明的方法包括治疗感染基因型1丙型肝炎病毒的患者。基因型1HCV感染是最难治疗的HCV毒株，而且是美国最盛行的毒株。

申请人已经证实，给予VX-950体内降低新蝶呤和ALT水平。AST(天冬氨酸氨基转氨酶)水平也在给予VX-950时降低。ALT是一种存在于肝细胞中的酶；在肝细胞受损或发炎时，ALT从细胞渗漏到血液中。血液ALT水平可用作肝脏炎症或损伤的标志。

新蝶呤(6-d-赤-三羟基丙基蝶啶)是鸟苷三磷酸(GTP)代谢期间产生的蝶啶衍生物。新蝶呤主要是在被干扰素γ或干扰素α激活时由单核细胞和巨噬细胞产生的，并且是炎症的标志。在慢性HCV感染中新蝶呤水平常常升高。在健康个体中，预期的新蝶呤血浆水平介于3.1和7.7nmol/l之间。

因此，申请人测定了血清新蝶呤浓度的变化作为在给予(HCV)NS3·4A蛋白酶抑制剂期间单核细胞/巨噬细胞活性的标志。如本文所述，在一项随机双盲安慰剂对照多剂量研究中，将VX-950给予感染HCV基因型1的34名患者14天。患者接受VX-950 450mg q8h(n＝10)、750mg q8h(n＝8)、1250mg q12h(n＝10)或安慰剂(n＝6)。在治疗前、在第7天和第14天及在随访第10天，通过定量竞争ELISA(ELItest

Neopterin，Brahms，Hennigsdorf，Germany)测定了血清新蝶呤浓度。检测下限(LLD)为2nmol/l。在研究期间，按通常的间隔通过实时PCR评价了HCV RNA(COBAS

TaqMan HCV试验；线性动态范围为3.0x10¹-2.0x10⁸ HCV RNA IU/ml；LLD为10HCV RNA IU/ml；RocheDiagnostics，Branchburg，NJ)。

在VX-950给药期间，所有剂量组的每名患者都显示病毒负荷下降＞2-log₁₀。在750mg q8h剂量组中，平均HCV RNA在第3天下降3.6log₁₀，在第14天下降4.3log₁₀。在450mg q8h和1250mg q12h剂量组中，在第3天至第7天观察到最大作用，接着在第7天和第14天之间平均病毒负荷增加。在随访期间，在所有剂量组中平均病毒负荷都增加。有利的是，HCV初治和既往治疗过的患者均获益于本发明的方法。既往治疗的患者和初治患者都对VX-950有应答。为了避免疑问，可以按照本发明方法治疗的患者包括未尝试HCV治疗或者HCV治疗失效的患者，包括零应答、反弹、复发和突破患者。

在34名患者中有23人基线新蝶呤升高(平均9.33nmol/l；正常上限(ULN)7.7nmol/l)。在750mg剂量组中，与基线和安慰剂相比，新蝶呤在第14天的下降显著(750mg q8h剂量组基线与第14天：10.48±0.84nmol/l与7.32±0.48nmol/l P＝0.0104，Mann Whitney检验；750mg q8h剂量组与安慰剂第14天：7.32±0.48nmol/l与9.81±1.36nmol/lP＝0.0036，非配对双尾T检验)。仅750mg q8h剂量组的平均新蝶呤水平在第14天属于正常值范围。在450mg q8h剂量组和1250mg q12h剂量组中，平均新蝶呤水平的下降较少。在安慰剂组中平均新蝶呤水平没有改变。在随访期间，所有剂量组的平均新蝶呤水平都提高。

可采用市售可获得的方法，测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。在所有组中，在基线高的平均ALT水平在给药期间均降低。在所有剂量组中，在随访期间平均ALT水平均升高，并回复到基线。

在450mg剂量组和1250mg剂量组中，虽然在第7天后HCVRNA增加，但是新蝶呤，尤其是ALT继续减少。在VX-950给药期间，平均新蝶呤浓度的变化与HCV RNA和ALT水平下降有关。平均新蝶呤浓度的最大下降是在第14天的750mg q8h剂量组中。这也是在第14天HCV RNA最大减少的剂量组。在450mg q8h和1250mgq12h剂量组中，在第7天后ALT和新蝶呤水平下降，而HCV RNA水平升高。这些数据表明，VX-950对HCV复制的抑制导致与病毒感染有关的全身性炎症活性显著下降。

在动物模型中，VX-950还使升高的ALT水平得到改善(参见WO2005/025517)。准确地讲，SCID小鼠WT-HCV蛋白酶-SEAP的表达导致ALT水平升高，这可通过用VX-950治疗而得到改善。在SCID小鼠中仅WT-HCV蛋白酶的表达也会导致时间和剂量依赖性的ALT水平升高。

因此，本发明提供用于降低患者的ALT水平(包括使ALT水平正常)的方法。所述方法包括给予有其需要的患者治疗有效量的VX-950(例如每日约1350mg、每日约2250mg或每日约2500mg)。患者可能被HCV感染或不被HCV感染。

在一些实施方案中，每8小时以约450mg或约750mg，或者每12小时以约1250mg给予VX-950。

本发明的另一个方面提供用于治疗或预防HCV阳性或HCV阴性患者的一种或多种以下疾病的方法：肝损害、肝脏炎症、脂肪变性、脂肪肝、NAFLD、NASH、酒精性脂肪变性和雷氏综合征。

属于本发明范围的还有用于HCV阳性或阴性患者的保肝方法。

申请人已经证实，VX-950体外阻断免疫逃避。

在仙台病毒感染的Huh7细胞中，VX-950恢复IFNβ依赖性基因表达。在WT HCVpro存在下，IFNβ启动子活性在响应仙台病毒刺激时降低。VX-950克服WT HCVpro介导的对IFNβ启动子活化的抑制。

此外，已知NS3/4A通过例如TRIF依赖性机制(以及病毒多蛋白加工)参与内在防御的逃避。这种免疫逃避导致病毒感染持续。因此，抑制病毒多蛋白加工和内在防御逃避这两者的化合物是可取的。有利的是，已经证实VX-950对两者都有抑制。具体地讲，VX-950体外抑制TRIF(其是TLR3衔接蛋白)的切割。

虽然不受理论的束缚，但建模表明VX-950抑制TRIF被NS3蛋白酶切割。TRIF与NS3蛋白酶活性部位的非引物端结合。像TRIF一样，VX-950与同一活性部位的非引物端结合并阻断TRIF切割。

研究表明，两种VX-950病毒变异株A156T和A156V表现出切割TRIF或4A/4B的能力降低。因为这些病毒变异株不太适合，因此它们在病毒多蛋白加工和病毒感染持续方面效率低下。虽不受理论的束缚，但这与影响结合4A/4B和TRIF底物的A156V的位阻有关。

这就表明VX-950的作用既是直接的抗病毒剂又是免疫逃避抑制剂。因此，本发明还提供抑制HCV蛋白酶介导的宿主防疫逃避的方法。

这些结果连同本文公开的体内数据表明了VX-950作为单一疗法的疗效。

以单一剂型或以一种以上剂型给予本发明的VX-950的量。在分开剂型的情况下，大致同时给予各剂型。为了避免疑问，对于需要一天不只一次给药的给药方案，一丸(剂)或多丸(剂)可每天在各个时间给予(例如1丸，每天三次，或3丸，每天三次)。本发明的大多数实施方案将采用每剂至少2丸。

正如从业技术人员公知的一样，如果本发明的方法被用于预防性治疗患者，且该患者被丙型肝炎病毒感染，则所述方法可用于治疗感染。因此，本发明的一个实施方案提供用于治疗或预防患者的丙型肝炎感染的方法。

除了治疗感染丙型肝炎的患者以外，本发明的方法可以用来防止患者受丙型肝炎感染。因此，本发明的一个实施方案提供预防患者感染丙型肝炎病毒的方法，所述方法包括给予患者本发明的组合物或剂型。

本文公开的数据表明VX-950作为联合疗法的疗效。

本发明的方法还可包括给予另一种成分，所述成分包含选自以下的其它药物：免疫调节药、抗病毒药、HCV蛋白酶抑制剂(除VX-950以外)、HCV生命周期中其它靶标的抑制剂(除NS3/4A蛋白酶以外)、内部核糖体进入抑制剂、广谱病毒抑制剂或细胞色素P-450抑制剂、或其组合。其它的药物还选自病毒细胞进入抑制剂。

这类抗病毒药包括但不限于免疫调节药，例如α干扰素、β干扰素和γ干扰素或胸腺素、聚乙二醇化衍生化干扰素-α化合物和胸腺素；其它抗病毒药物，例如利巴韦林、金刚烷胺和替比夫定；丙型肝炎蛋白酶的其它抑制剂(NS2-NS3抑制剂和NS3-NS4A抑制剂)；HCV生命周期中其它靶标的抑制剂，包括解旋酶、聚合酶和金属蛋白酶抑制剂；内部核糖体进入抑制剂；广谱病毒抑制剂，例如IMPDH抑制剂(例如美国专利号5,807,876、6,498,178、6,344,465和6,054,472；以及PCT公布号WO 97/40028、WO 98/40381和WO 00/56331中披露的化合物；及麦考酚酸及其衍生物，包括但不限于VX-497、VX-148和VX-944)；或其任意组合。

可与本发明的化合物联用的其它药物(例如非免疫调节化合物或免疫调节化合物)包括但不限于WO 02/18369中规定的药物，该专利通过引用结合到本文中(参见例如第273页第9-22行和第274页第4行至第276页第11行，该公开内容通过引用明确地结合到本文中)。

还有其它的药物包括多种已公布的美国专利申请中披露的药物。这些出版物提供特别用于治疗肝炎的可与本发明方法中的VX-950联用的化合物和方法的其它教导。预期任何这类的方法和组合物都可与本发明的方法和组合物联用。为简明起见，提及这些出版物的公开内容时仅提及公布号，但是应当注意的是化合物的公开内容通过引用特别明确地结合到本文中。这类出版物的实例包括美国专利申请公布号：US 20040058982、US 20050192212、US 20050080005、US20050062522、US 20050020503、US 20040229818、US 20040229817、US 20040224900、US 20040186125、US 20040171626、US20040110747、US 20040072788、US 20040067901、US 20030191067、US 20030187018、US 20030186895、US 20030181363、US20020147160、US 20040082574、US 20050192212、US 20050187192、US 20050187165、US 20050049220和US 20050222236。

还有其它的药物包括但不限于Albuferon^TM(白蛋白-干扰素α)，可获自Human Genome Sciences；PEG-INTRON

(聚乙二醇化干扰素α-2b，可获自Schering Corporation，Kenilworth，NJ)；INTRON-A

，(VIRAFERON

，干扰素α-2b，可获自Schering Corporation，Kenilworth，NJ)；利巴韦林(1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，可获自ICNPharmaceuticals，Inc.，Costa Mesa，CA；参见Merck Index，第8365条目，第十二版)；REBETROL

(Schering Corporation，Kenilworth，NJ)；COPEGUS

(Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ)；PEGASYS

(聚乙二醇化干扰素α-2a，可获得Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ)；ROFERON

(重组干扰素α-2a，可获自Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ)；BEREFOR

(干扰素α2，可获自Boehringer IngelheimPharmaceutical，Inc.，Ridgefield，CT)；SUMIFERON

(纯的天然α干扰素混合物，例如Sumiferon，可获自Sumitomo，Japan)；WELLFERON

(干扰素αn1，可获自Glaxo Wellcome Ltd.，GreatBritain)；ALFERON

(由Interferon Sciences生产的天然α干扰素的混合物，可获自Purdue Frederick Co.，CT)；α-干扰素；天然α干扰素2a；天然α干扰素2b；聚乙二醇化α干扰素2a或2b；复合α干扰素(Amgen，Inc.，Newbury Park，CA)；REBETRON

(Schering Plough，干扰素α2B+利巴韦林)；聚乙二醇化干扰素α(Reddy，K.R.等，“Efficacy and Safety of Pegylated(40-kd)Interferon α-2a Compared withInterferonα-2a in Noncirrhotic Patients with Chronic Hepatitis C(患有慢性丙型肝炎无肝硬化患者中聚乙二醇化(40-kd)干扰素α-2a与干扰素α-2a相比较的功效和安全性)”，Hepatology，33，433-438(2001)；复合α干扰素(INFERGEN

)(Kao，J.H.等，“Efficacy of Consensus Interferon inthe Treatment of Chronic Hepatitis(复合α干扰素在慢性肝炎治疗中的功效)，”J.Gastroenterol.Hepatol.，15，1418-1423(2000)；淋巴母细胞或“天然”干扰素；干扰素τ(Clayette，P.等，“IFN-τ，A New Interferon TypeI with Antiretroviral activity(一种新的具有抗反转录病毒活性的I型干扰素IFN-τ)”Pathol.Biol.(Paris)47，553-559(1999)；白介素-2(Davis，G.L.等，“Future Options for the Management of Hepatitis C(丙型肝炎管理的未来选择).”Seminars in Liver Disease，19，103-112(1999)；白介素-6(Davis等，“Future Options for the Management of Hepatitis C(丙型肝炎管理的未来选择)，”Seminars in Liver Disease，19，103-112(1999)；白介素-12(Davis，G.L.等，“Future Options for the Management ofHepatitis C(丙型肝炎管理的未来选择)，”Seminars in Liver Disease，19，103-112(1999)；以及促进1型辅助T细胞应答发生的化合物(Davis等，“Future Options for the Management of Hepatitis C(丙型肝炎管理的未来选择)，”Seminars in Liver Disease，19，103-112(1999))。还包括在细胞中刺激干扰素合成的化合物(Tazulakhova，E.B.等，“RussianExperience in Screening，analysis，and Clinical Application of NovelInterferon Inducers(在新型干扰素诱导物的筛选、分析和临床应用中的俄罗斯经验)”J.Interferon Cytokine Res.，2165-73)，包括但不限于单独的或与妥布霉素联用的双链RNA，及咪喹莫德(3M Pharmaceuticals；Sauder，D.N.“Immunomodulatory and Pharmacologic Properties ofImiquimod(咪喹莫德的免疫调节和药理学性质)，”J.Am.Acad. Dermatol.，43S6-11(2000)。另参见WO 02/18369，具体为第272页第15行至第273页第8行，该公开内容通过引用明确结合到本文中。

正如从业技术人员公知的一样，优选口服给予VX-950。干扰素通常不经口服给药，虽然口服给药形式正在开发当中。尽管如此，本文绝不将本发明的方法或组合限于任何具体的剂型或方案。因此，本发明的组合的各种成分可分开、同时或以其任何组合方式给予。正如从业技术人员公知的一样，干扰素的剂量通常以IU衡量(例如约400万IU-1200万IU)。干扰素还可按微克给予。例如，Peg-Intron的标准剂量为1.0-1.5μg/kg/周，Pegasys的标准剂量为180μg/周。

利巴韦林通常经口服给药，利巴韦林的片剂形式目前是市售可得的。利巴韦林片剂(例如约200mg片剂)的通用标准日剂量为约800mg-约1200mg。尽管如此，本文绝不将本发明的方法或组合限于任何具体的剂型或方案。通常按照其市售产品标签描述的剂量方案给予利巴韦林。技术从业人员应了解的是，利巴韦林的剂量范围可随体重而变化。从业技术人员还应了解的是，可降低剂量以减少副作用。

在某些方面，所述方法包括分两个阶段即初始阶段和第二阶段给药。例如，初始阶段可以是少于约12周或24周，第二阶段可以长于或等于约12周，例如，第二阶段可介于约12-36周之间。在某些实施方案中，第二阶段为12周。在又一些实施方案中，第二阶段为36周。在某些实施方案中，初始阶段和第二阶段之和约为24-48周(例如24周、36周或48周)。在一些实施方案中，初始阶段和第二阶段在持续时间上可以相同。

可以在初始阶段、第二阶段或这两个阶段给予VX-950。在一些实施方案中，仅在初始阶段给予VX-950。当仅在初始阶段给予VX-950时，VX-950可单独给予或与其它药物联合给予，并且在第二阶段给予一种或多种药物。所述其它药物可以是一种或多种抗病毒药物、一种或多种本文所述的其它药物或其组合。在一些实施方案中，在初始阶段和第二阶段给予的具体药物是相同的。

在一些实施方案中，本发明包括一种治疗方案，其包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且其中以1125mg的量每天两次给予VX-950，每周一次给予聚乙二醇化干扰素，每天一次给予利巴韦林。

在一些实施方案中，本发明包括一种治疗方案，其包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且以1125mg的量每天两次给予VX-950，每周一次给予聚乙二醇化干扰素，每天一次给予利巴韦林。

在一些实施方案中，本发明包括一种治疗方案，其包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且以750mg的量每天三次给予VX-950，以180微克的量每周给予聚乙二醇化干扰素，以1000-1200mg的量每天给予利巴韦林。在一个具体的实施方案中，在初始阶段给予聚乙二醇化干扰素，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素α2a。在另一个具体的实施方案中，每8小时给予VX-950。在又一个具体的实施方案中，在初始阶段给予聚乙二醇化干扰素，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素α2b，且每8小时给予VX-950。

在一些实施方案中，本发明包括一种治疗方案，其包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且以750mg的量每天三次给予VX-950，以1.5微克/千克的量每周给予聚乙二醇化干扰素，以800-1200mg的量每天给予利巴韦林。在一个具体的实施方案中，在初始阶段给予聚乙二醇化干扰素，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素α2b。在另一个具体的实施方案中，每8小时给予VX-950。在又一个具体的实施方案中，在初始阶段给予聚乙二醇化干扰素，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素α2b，且每8小时给予VX-950。

在一些实施方案中，本发明包括一种治疗方案，其包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且其中以1125mg的量每天两次给予VX-950，以180微克的量每周给予聚乙二醇化干扰素，以1000-1200mg的量每天给予利巴韦林。在一个具体的实施方案中，在初始阶段给予聚乙二醇化干扰素，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素α2a。在另一个具体的实施方案中，每12小时给予VX-950。在又一个具体的实施方案中，在初始阶段给予聚乙二醇化干扰素，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素α2a，且每12小时给予VX-950。

在一些实施方案中，本发明包括一种治疗方案，其包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且其中以1125mg的量每天两次给予VX-950，以1.5微克/千克的量每周给予聚乙二醇化干扰素，以800-1200mg的量每天给予利巴韦林。在一个具体的实施方案中，在初始阶段给予聚乙二醇化干扰素，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素α2b。在另一个具体的实施方案中，每12小时给予VX-950。在又一个具体的实施方案中，在初始阶段给予聚乙二醇化干扰素，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素α2b，且每12小时给予VX-950。

在某些前述实施方案中，至少65％的患者在第4周未检出HCVRNA水平。在一些实施方案中，至少75％的患者在第4周未检出HCVRNA水平。在一些实施方案中，至少80％的患者在第4周未检出HCVRNA水平。在一些实施方案中，至少85％的患者在第4周未检出HCVRNA水平。

在某些前述实施方案中，至少80％的患者在第12周未检出HCVRNA水平。在一些实施方案中，至少84％的患者在第12周未检出HCVRNA水平。在一些实施方案中，至少85％的患者在第12周未检出HCVRNA水平。在一些实施方案中，至少90％的患者在第12周未检出HCVRNA水平。在一些实施方案中，至少93％的患者在第12周未检出HCVRNA水平。

在一些实施方案中，所述方法包括给予VX-950持续两周(初始阶段)，接着22周给予聚乙二醇化干扰素α-2a和利巴韦林的组合(第二阶段)。在其它实施方案中，所述方法包括给予VX-950持续两周(初始阶段)，接着46周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。

在另一些实施方案中，所述方法包括结合聚乙二醇化干扰素给予VX-950持续两周(初始阶段)，接着22周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。在其它实施方案中，所述方法包括结合聚乙二醇化干扰素给予VX-950持续两周(初始阶段)，接着46周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。

在另一些实施方案中，所述方法包括结合聚乙二醇化干扰素和利巴韦林给予VX-950持续两周(初始阶段)，接着22周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。在其它实施方案中，所述方法包括结合聚乙二醇化干扰素和利巴韦林给予VX-950持续两周(初始阶段)，接着46周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。

在一些实施方案中，所述方法包括给予VX-950持续4周(初始阶段)，接着20周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。在其它实施方案中，所述方法包括给予VX-950持续4周(初始阶段)，接着44周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。

在又一些实施方案中，所述方法包括结合聚乙二醇化干扰素给予VX-950持续4周(初始阶段)，接着20周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。在其它实施方案中，所述方法包括结合聚乙二醇化干扰素给予VX-950持续4周(初始阶段)，接着44周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。

在另一些实施方案中，所述方法包括结合聚乙二醇化干扰素和利巴韦林给予VX-950持续4周(初始阶段)，接着20周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。在其它实施方案中，所述方法包括结合聚乙二醇化干扰素和利巴韦林给予VX-950持续4周(初始阶段)，接着44周给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合(第二阶段)。

在一些实施方案中，任何上述的初始阶段可进行约12周，而第二阶段可进行约12周。或者，初始阶段可进行约12周，而第二阶段可进行约24周。在另一些方面，初始阶段可进行约12周，而第二阶段可进行约36周。

在一些实施方案中，任何上述的初始阶段可进行约8周，而第二阶段可进行约16周。或者，初始阶段可进行约8周，而第二阶段可进行约28周。在另一些方面，初始阶段可进行约8周，而第二阶段可进行约40周。

在一些实施方案中，所述方法包括给予VX-950与聚乙二醇化干扰素的组合少于48周。例如，所述方法包括给予VX-950与聚乙二醇化干扰素的组合少于24周。

在一些实施方案中，所述方法包括给予VX-950与聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合少于48周。例如，所述方法包括给予VX-950与聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合少于24周。

在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950持续约2周(或2周)，接着给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林持续约22周(或22周)或约46周(或46周)。

建模数据还表明VX-950抗性变异株，例如V36A/M、T54A、R155K/T、A156S A156V/T、V36A/M-R155K/T和V36A/M-A156V/T，主要通过VX-950治疗后接着给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林持续约10-24周(或8-26周)而根除。某些这样的方案代表持续24-48周的现行标准医治方案的治疗减少。

在一些实施方案中，本发明的方法能够达到第4周RVR和第12周未检出状态。

8-12周VX-950治疗后的病毒复发与VX-950抗性变异株有关，24周或48周治疗的复发率基本上相同，特别是在对治疗具有良好的最初应答的受治疗者中。

用VX-950、聚乙二醇化干扰素和利巴韦林治疗12周(并且可能与8周一样短)，似乎足以清除野生型病毒。

因此，本发明还提供给予VX-950与干扰素组合的方法。在某些实施方案中，给予干扰素持续约10周(或10周)、约12周(或12周)、约14周(或14周)。对于总方案或部分方案，还任选给予利巴韦林，包括但不限于整体方案。

在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950和聚乙二醇化干扰素的组合持续约12周(或12周)。

在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950和聚乙二醇化干扰素的组合持续约12±4周(例如8、12或16周)。

在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950和聚乙二醇化干扰素的组合持续约24周(或24周)。

在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950和聚乙二醇化干扰素的组合持续约24±4周(例如20、24或28周)。

为了避免疑问，应当理解的是，本发明包括但不限于这样的方案，即包括给予VX-950和干扰素持续约8周(或8周)，接着给予干扰素持续约16周(或16周)，总的治疗方案约24周(或24周)。本发明还提供这样的方案，即包括给予VX-950和干扰素持续约12周(或12周)，接着给予干扰素持续约12周(或12周)，总的治疗方案约24周(或24周)。这类方案任选为总方案或部分方案提供给予利巴韦林，包括但不限于约24周(或24周)的整体方案。

在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950、聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合持续约12周(或12周)。

在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950、聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合持续约12周(或12周)，接着给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林持续约12周(或12周)。

在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950、聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合持续约12周(或12周)，接着给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林持续约36周(或36周)。

在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950、聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合持续约24周(或24周)，接着给予PEGIFN和利巴韦林持续约24周(或24周)。

在一些实施方案中，所述方法包括提供负荷剂量的VX-950(1250mg)，接着750mg q8h VX-950加聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的组合。

预期细胞色素P450单加氧酶(″CYP″)抑制剂与本发明联用可抑制VX-950的代谢。因此，细胞色素P450单加氧酶抑制剂可以是有效抑制VX-950代谢的量。因此，以一定量给予CYP抑制剂，使得与CYP抑制剂不存在时的VX-950相比，VX-950的生物利用度或暴露增加。CYP抑制剂包括但不限于利托那韦(WO 94/14436)、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、环孢菌素、氯美噻唑、西咪替丁、伊曲康唑、氟康唑、咪康唑、氟伏沙明、氟西汀、萘法唑酮、舍曲林、茚地那韦、奈非那韦、氨普那韦、呋山那韦、沙奎那韦、洛匹那韦、地拉韦啶、红霉素、VX-944和VX-497。优选的CYP抑制剂包括利托那韦、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、环孢菌素和氯美噻唑。

用于测定化合物抑制细胞色素P50单加氧酶活性的能力的方法是已知的(参见美国专利号6,037,157和Yun等，Drug Metabolism &Disposition，21，403-407(1993))。用于评价共同给予受治疗者VX-950和CYP抑制剂的影响的方法也是已知的(US2004/0028755)。任何的这类方法都可与本发明联用以测定某一组合的药代动力学作用。

本发明的一个实施方案提供用于给予CYP3A4抑制剂和VX-950的方法。

本文的方法可包括给予或共同给予a)VX-950和其它药物的组合；或b)一种以上剂型的VX-950。共同给予包括给予同一剂型中或不同剂型中的各个抑制剂。当以不同剂型给予时，抑制剂可在不同时间给予，包括大致同时给予或在给予其它剂型前后的任何时间给予。独立的剂型可以任何顺序给予。也就是说，任何剂型可在其它剂型之前、同时或之后给予。

可将VX-950和任何其它药物配制成独立的剂型。或者，为了减少给予患者的剂型的次数，可将VX-950和任何其它药物以任何组合配制在一起。可以在同一时间或在不同时间给予任何独立的剂型。应当理解的是，剂型应当在某一时间内给予以利于生物效应。

按照本发明的方案和剂型，VX-950以有效减少样品或患者的病毒负荷的量(或有效实施本发明方法的量)存在，其中所述病毒编码病毒生命周期必需的NS3/4A丝氨酸蛋白酶，和药学上可接受的载体。或者，本发明的组合物包含本文所述的其它药物。各种成分可存在于各种组合物、联合组合物或单一组合物中。

如果在这些组合物中使用化合物的药学上可接受的盐，则这些盐优选得自无机酸或有机酸及无机碱或有机碱。在这类酸盐中所包括的盐如下：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基-丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。碱盐包括铵盐、碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙和镁盐)、与有机碱的盐(例如二环己基胺盐、N-甲基-D-葡糖胺)以及与氨基酸的盐(例如精氨酸、赖氨酸)等等。

同样，碱性含氮基团可用以下这类试剂季铵化：低级烷基卤(例如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴和碘)、硫酸二烷基酯(例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰氯、溴和碘)、芳烷基卤(例如苄基溴和苯乙基溴等)。因此可得到水溶性或油溶性或者水分散性或油分散性产物。

用于本发明的组合物和方法的化合物还可通过附加合适的官能团进行修饰以提高选择性生物学性质。这类修饰是本领域已知的，且包括以下修饰：提高生物穿透进入特定的生物系统(例如血液、淋巴系统、中枢神经系统)、提高口服利用度、增加溶解度以供注射给药、改变代谢和改变排泄率。

可以用于这些组合物的药学上可接受的载体包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、胶态硅石、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。

按照优选的实施方案，将本发明的组合物配制成药物给予哺乳动物，特别是人类。

本发明的这类药物组合物(以及用于本发明的方法、组合产品、药盒和药包(pack)的组合物)可以经口服、胃肠外、舌下、经吸入喷雾、局部、直肠、鼻、口腔、阴道或植入药库给予。本文使用的术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选口服或静脉内给予组合物。更优选口服给予组合物。

本发明的组合物的无菌注射形式可以是水性或油性混悬剂。可以按照本领域已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制这些混悬剂。无菌注射制剂还可以是无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液剂或混悬剂，例如在1，3-丁二醇中的溶液剂。在可以使用的可接受的溶媒和溶剂中有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌固定油按惯例用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油，包括合成的单甘油酯或甘油二酯。脂肪酸(例如油酸及其甘油酯衍生物)，像天然药学上可接受的油(例如橄榄油或蓖麻油)一样，尤其以其聚氧乙烯化形式，都可用于注射制剂中。这些油溶液剂或混悬剂还可含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或常用于药学上可接受剂型(包括乳剂和混悬剂)的制剂中的类似分散剂。根据剂型需要也可使用其它常用的表面活性剂，例如吐温、司盘和其它乳化剂或生物利用度增强剂(它们常用于制备药学上可接受的固体制剂、液体制剂或其它制剂)。

在包含VX-950和其它药物的本发明组合物中，VX-950和所述其它药物的剂量水平应为单一疗法方案中通常给药剂量的约10-100％，更优选约10-80％。

本发明的药物组合物可以任何口服可接受的剂型经口服给予，包括但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、水性混悬剂或溶液剂。在口服用片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂，例如硬脂酸镁。对于口服给药的胶囊剂形式，有用的稀释剂包括乳糖和无水玉米淀粉。当需要水性混悬剂用于口服时，可将活性成分与乳化剂和悬浮剂混合。如有需要，还可加入某些甜味剂、矫味剂或着色剂。可接受的液体剂型包括乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。

或者，可以栓剂的形式给予本发明的药物组合物用于直肠给药。可以通过将所述药物与无刺激性的合适赋形剂混合来制备这些栓剂，所述赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体，因此在直肠中融化释放出药物。这类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

还可局部给予本发明的药物组合物，尤其当治疗目标包括通过局部应用容易达到的区域或器官，包括眼、皮肤或下肠道疾病。容易制备用于这些区域或器官每一处的合适的局部剂型。

正如本领域公知的一样，还可以脂质体的形式给予药物组合物。

申请人已经证实口服VX-950具有生物有效性。因此，配制本发明的优选药物组合物用于口服给药。

对于CYP抑制剂，介于约0.001-约200mg/kg体重/天之间的剂量水平是典型的。更典型是介于约0.1-约50mg/kg或约1.1-约25mg/kg/天之间的剂量水平。

对于利托那韦的优选剂型，可参见美国专利号6,037,157及其中引用的文献：美国专利号5,484,801、5,948,436和国际专利申请号WO95/07696和WO 95/09614。

与本发明有关的给药法可用作慢性疗法或急性疗法。可与载体材料混合制成单一剂型的活性成分的量将随受治疗的宿主和具体的给药方式而变化。典型制剂可含有约5％-约95％活性化合物(重量/重量)。这类制剂优选含有约20％-约80％的活性化合物。

在改善患者状况后，需要时，可以给予维持剂量的本发明的化合物、组合物或组合产品。随后，给药的剂量或频率或两者都可随症状变化而降低，直到维持改善的状况，当症状减轻到所需水平，便应停止治疗。然而，在疾病症状有任何复发时，患者可能需要长期基础上的间歇治疗。

还应当了解的是，对于任何具体患者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所采用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄率、药物组合、治疗医师的判断和待治疗的具体疾病的严重程度、既往治疗史、共发病情况或同期治疗、基线病毒负荷、种族、疾病持续时间、肝功状态和肝纤维变性/肝硬化的程度及治疗目的(清除移植前的循环病毒或病毒根除)。活性成分的量还将取决于具体化合物以及组合物中另外的抗病毒药物的存在与否以及性质。

按照另一个实施方案，本发明提供通过给予所述患者药学上可接受的本发明的组合物用于治疗感染病毒的患者的方法，所述病毒的特征在于病毒编码的对于病毒生命周期是必不可少的NS3/4A丝氨酸蛋白酶。本发明的方法优选用于治疗患有HCV感染的患者。这类治疗可以完全根除病毒感染或减轻其严重程度。患者优选为哺乳动物。患者更优选为人类。

本文的剂量优选体内使用。尽管如此，并无意为任何目的而限制这些VX-950量的使用。在又一个实施方案中，本发明提供对欲给予患者的生物物质进行预处理的方法，所述方法包括使所述生物物质与药学上可接受的包含本发明化合物的组合物接触的步骤。这类生物物质包括但不限于血液及其组分，例如血浆、血小板、血液细胞亚群等；器官，例如肾、肝、心脏、肺等；精子和卵；骨髓及其组分；以及输入患者的其它液体，例如盐水、葡萄糖等。

本发明还提供用于制备包含VX-950或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、辅助剂或溶媒的组合物的方法，所述方法包括将VX-950或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体、辅助剂或溶媒混合的步骤，其中组合物中VX-950的剂量与本发明的任何实施方案一致。本发明的备选实施方案提供一种方法，其中组合物包含一种或多种本文所述的其它药物。

本发明还提供一种治疗方案，其包括VX-950或其药学上可接受的盐，剂量按本文公开的剂量。在本发明的备选实施方案中，治疗方案还包括一种或多种本文所述的其它药物。

还可以处方开给患者“患者药包(patient pack)”形式的药物组合物，其包括整个疗程的单一包装形式(通常为泡罩包装)。患者药包具有优于药剂师传统配药从散装供应中分配出患者药物供应量的优势，因为患者总能获取装在患者药包中的包装说明书，这在传统配药中一般是不存在的。研究表明，装入包装说明书改进了患者对医师医嘱的依从性。

应当了解的是，通过单一患者药包或各剂型的患者药包(其中装有指导患者正确使用本发明的包装说明书)给予本发明的组合产品是本发明可取的其它特色。

本发明又一方面在于包括VX-950(以本发明的剂量)和资料插页的药包，所述资料插页包括本发明的组合产品的使用说明。本发明的任何组合物、剂型、治疗方案或其它实施方案都可以药物包的形式提供。在本发明的备选实施方案中，药物包还装有一种或多种本文所述的其它药物。可以同一药包或独立的药包提供一种或多种其它的药物。

本发明的另一个方面包括用于患者以治疗HCV感染或预防HCV感染(或用于本发明的其它方法)的成套药盒，所述成套药盒包括：每种药物组分的单一制剂或多种药物制剂；在贮存期间和在给药前存放药物制剂的容器；以及以有效治疗或预防HCV感染的方式实施用药的说明书。

因此，本发明提供用于同时或序贯给予VX-950(和任选其它药物)剂量的药盒。这类药盒通常可包括例如各种化合物和任选其它的药物与药学上可接受的载体的组合物(且以一种或多种药物制剂的形式)和用于同时或序贯给药的书面说明。

在另一个实施方案中，所提供的成套药盒装有用于自我给药的一种或多种剂型；容器，优选密封容器，用于在贮存期间和在使用前存放所述剂型；以及用于患者实施用药的说明书。说明书通常是在包装插页、标签和/或药盒的其它组件上的书面说明，而一种或多种剂型如本文所述。可将各个剂型单独存放，如金属箔-塑料叠合板，其中各剂型在单独的小室或泡罩中彼此分开，或者可将剂型存放在一个容器中，如塑料瓶中。本发明的药盒还通常包括用于各个药盒组分(即剂型、包装物和书面使用说明)的包装物。这类包装物可为硬纸板或纸盒、塑料袋或金属箔袋等形式。

本发明的药盒可包括本发明的任何方面，例如任何组合物、剂型、治疗方案或药物包。

本发明的药包和药盒任选包括多种组合物或剂型。因此，包括在本发明内的可以是装有一种或多种组合物的药包和药盒。

虽然下面描述了某些示例性实施方案，但是应当理解的是，可以按照上文中的概述方法，使用本领域普通技术人员通常可获得的合适的起始原料来制备本发明的化合物。

所有引述的文献都通过引用结合到本文中。

为了便于更充分地理解本发明，提供下列制备实施例和测试实施例。这些实施例仅供例证说明目的，不应理解为以任何方式限制本发明的范围。

VX-950一般可通过本领域技术人员已知方法制备(参见例如WO02/18369)。本领域已知的任何合适的剂型都可用于本发明。例如，可将WO 2005/123075、WO 2007/109604、WO 2007/109605和WO2008/080167中披露的剂型用于本发明。可用于本发明的一种具体剂型以实施例6为例说明。其它具体实例包括：

其中HPMC(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)、(醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯，HG级，Shin-Etsu Chemical Co.)、HPC(羟丙基纤维素)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)和SLS(十二烷基硫酸钠)可参见WO 2005/123075。在某些实施方案中，可将上述固体分散体悬浮于1％HPMC、0.002％西甲硅油溶液(1％重量HPMC，0.002％重量西甲硅油和99％重量水)中。其它实例包括1∶1 VX950∶PVPK30、1％重量SLS(Refreshed Tox.)；Niro-49％重量HPMCAS/1％重量SLS/1％重量SDBS/49％VX-950；40.5％重量PVP-VA/10％重量ETPGS/49.5％重量VX-950；40.5％重量HPMC/10％重量ETPGS/49.5％重量VX-950；49％重量VX950、49％重量HPMCAS、1％重量SLS、1％重量SDBS；以及49％重量VX950、16％重量HPPh、33％重量HPC、1％重量SLS、％重量SDBS，其中PVPK30(聚乙烯吡咯烷酮K30)、SDBS(十二烷基苯磺酸钠)、HPMCAS(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯)、维生素ETPGS、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)和SLS(十二烷基硫酸钠)，制备这些剂型的详情可参见WO 2005/123075。其它实例包括WO 2007/109604中披露的下列剂型：

一种固体分散体，所述固体分散体包含55％重量VX-950，24.4％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、19.6％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含55％重量VX-950、14.7％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、29.3％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含60％重量VX-950、24.4％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、14.6％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含65％重量VX-950、17％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、17％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含70％重量VX-950、9.7％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、19.3％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含60％重量VX-950、39％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含49.5％重量VX-950、24.5％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、24.5％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含83％重量VX-950、8％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、8％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含70％重量VX-950、14.5％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、14.5％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含65％重量VX-950、14.6％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、19.4％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含65％重量VX-950、9.7％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、24.3％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含60％重量VX-950、19.5％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、19.5％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含60％重量VX-950、14.6％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、24.4％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含70％重量VX-950、9.7％重量HPMCAS-HG (醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、19.3％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含49.5％重量VX-950、49.5％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含83％重量VX-950、16％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含82.44％重量VX-950、15.89％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，Biddle Sawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)和1.67％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含49.5％重量VX-950、24.75％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，Biddle Sawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、24.75％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)。

一种固体分散体，所述固体分散体包含60％重量VX-950、24.6％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)、14.4％重量HPMC-60SH(羟丙基甲基纤维素，60SH 50cP，Biddle Sawyer或Shin-Etsu Metolose，HPMC60SH50)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；

一种固体分散体，所述固体分散体包含60％重量VX-950、39％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)；和

一种固体分散体，所述固体分散体包含49.5％重量VX-950、49.5％重量HPMCAS-HG(醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，JPE，BiddleSawyer或Shin-Etsu HPMCAS-HG级)和1％重量十二烷基硫酸钠(SLS)。

有关制备这些固体分散体的详情可参见WO 2007/109604。其它具体实例包括含有VX-950的喷雾干燥分散体的片剂剂型，可参见WO 2007/109604：

其它具体实例包括WO2008/080167中披露的以下片剂剂型：

VX950 SD压片实验设计(效价：250mg VX950)

实验编号A剂型

注释：VX950SD Lot 02

效价：250mg VX950

实验编号C剂型

实验编号E剂型

注释：VX950SD Lot 02

效价：250mg VX950

实验编号F剂型

注释：VX950SD Lot 02

效价：250mg VX950

所有引述的文献都通过引用结合到本文中。

实施例1：HCV复制子细胞测定方案

将含有丙型肝炎病毒(HCV)复制子的细胞保持在含有10％胎牛血清(FBS)、0.25mg/mL G418与合适补充剂的DMEM(培养基A)中。

第1天，将复制子细胞单层用胰蛋白酶：EDTA混合物处理，弃去，然后将培养基A稀释成终浓度为100,000个细胞/mL。将100μL中的10,000个细胞接种到96孔组织培养板每孔中，并在组织培养箱中于37℃培养过夜。

第2天，将化合物VX-950的100％DMSO溶液连续稀释到含有2％FBS、0.5％DMSO与合适补充剂的DMEM(培养基B)中，得到含有不同VX-950浓度的溶液。在整个稀释系列中保持DMSO的终浓度为0.5％。

除去复制子细胞单层上的培养基，然后加入含有各种浓度的VX-950的培养基B。将无任何化合物的培养基B加入其它孔中作为对照。

将细胞在培养基B中与VX-950溶液或对照一起在组织培养箱中于37℃温育48小时。在48小时温育结束时，除去培养基B，将复制子细胞单层用PBS洗涤一次，在RNA提取前保存于-80℃。

使具有已处理的复制子细胞单层的培养板融化，将固定量的另一种RNA病毒(例如牛病毒性腹泻病毒(BVDV))加入各孔的细胞中。立即将RNA提取试剂(例如RNeasy试剂盒的试剂)加入细胞中以避免RNA降解。按照生产商的说明书，加以修改以改进提取效率和一致性，以此提取总RNA。最后，将细胞总RNA(包括HCV复制子RNA)洗脱，保存于-80℃以备进一步处理。

为Taqman实时RT-PCR定量测定法提供两套特异性引物和探针。一套用于HCV，另一套用于BVDV。将得自己处理的HCV复制子细胞的总RNA提取物加入PCR反应物中用于在同一PCR孔中定量测定HCV RNA和BVDV RNA两者。实验失败被标上标记，并根据各孔中的BVDV RNA水平舍弃。按照在同一PCR板运行的标准曲线计算每孔的HCV RNA水平。使用DMSO或无VX-950对照作为0％抑制，计算出由VX-950治疗引起的HCV RNA水平的抑制或减少百分比。从任何VX-950浓度的滴定曲线计算出IC50(观察到HCV RNA水平达50％抑制时浓度)。

结果表明，在复制子测定法中VX-950具有显著的抑制活性，其中IC₅₀为240ng/mL，IC₉₀为476ng/mL。

实施例2：HCV Ki测定方案

用于将5AB底物与产物分离的HPLC Microbore方法

用于本研究的底物为：

NH₂-Glu-Asp-Val-Val-(α)Abu-Cys-Ser-Met-Ser-Tyr-COOH.SEQ IDNO：1

在DMSO与0.2M DTT中制备20mM 5AB的储备液，等分保存于-20℃。制备含有50mM HEPES、100mM NaCl和20％甘油的缓冲液(pH 7.8)。

按照表1制备100μL测定溶液。

表1：

	X1(μL)	测定中的浓度
			缓冲液	86.5	见上文
5mM KK4A	0.5	25μM
			1M DTT	0.5	5mM
DMSO或VX-950	2.5	2.5％体积/体积
			50μM tNS3	0.05	25nM
250μM 5AB(起始)	20	25μM

将缓冲液、KK4A、DTT和tNS3混合；分别将78μL分配到96孔板各孔中，接着于30℃温育约5-10分钟。

将2.5μL适当浓度的VX-950溶于DMSO(仅DMSO用于对照)，并加入各孔中，接着在室温下温育15分钟。

加入20μL 250μM 5AB底物(25μM浓度等于或略小于5AB的Km)开始反应。将所得混合物于30℃温育20分钟后，加入25μL 10％TFA终止反应，将混合物(以120μL等分量)转移到HPLC小瓶中用于分析。

按照下列方法将SMSY产物从底物和KK4A中分离：

Microbore分离方法：

仪器：Agilent 1100

脱气装置G1322A

二元泵G1312A

自动进样器G1313A

柱恒温室G1316A

二极管阵列检测器G1315A

柱：

Phenomenex Jupiter；5微米C18；300埃；150x2mm；P/O00F-4053-B0

柱恒温器：40℃

注射体积：100μL

溶剂A＝HPLC级水+0.1％TFA

溶剂B＝HPLC级乙腈+0.1％TFA

表2：

时间(分钟)	％B	流速(ml/分钟)	最大压力
				0	5	0.2	400
12	60	0.2	400
				13	100	0.2	400
16	100	0.2	400
				17	5	0.2	400

停止时间：17分钟

运行后时间：10分钟。

实施例3：耐受性和药代动力学研究

在随机双盲安慰剂对照单剂量递增研究中对VX-950进行了分析。招募了25名健康男性志愿者。各受试者接受多次单剂VX-950(相隔至少7天、3剂递增剂量水平的VX-950)和1剂安慰剂。

对25mg-1250mg的剂量进行了评价。采用剂量递增方案，其结合了剂量倍增和在较低剂量范围内激进、在较高剂量范围内保守的改良Fibonacci法。

结果表明，VX-950在所有剂量水平下的耐受性都很好。在研究期间没有报告严重的不良事件，而且随着剂量水平增加，也没有出现不良事件增加。

采用统计矩法，进行了药代动力学分析。药代动力学分析表明，VX-950吸收的中位值t_max为3小时。尿液中小于2％的VX-950无变化地被清除，这就表明了该药物主要通过代谢途径清除。

实施例4：感染性病毒测定法

在感染性病毒测定法中，VX-950显示IC₅₀为196ng/ml。

实施例5：VX-950治疗的效果

在随机安慰剂对照多剂量盲法剂量递增研究中，在24名健康受试者和36名丙型肝炎阳性受试者中对VX-950进行了分析。

将健康受试者分为3组，每组8名受试者。在每组中，6名受试者接受VX-950，2名受试者接受安慰剂。以450mg、750mg或1250mg q8h连续5天给予健康受试者VX-950。健康受试者的年龄介于18-65岁之间(包括18和65)，并且是B型肝炎、丙型肝炎和HIV阴性。男性的体重指数为18.5-29.0kg/m²(包括18.5和29.0)。女性的体重指数18.5-32.5kg/m²(包括18.5和32.5)。

将丙型肝炎(基因型1)阳性受试者分成3组，每组12名受试者，分别以450mg q8h、750mg q8h或1250mg q12h连续14天接受VX-950。每组中，10名受试者接受VX-950，2名受试者接受安慰剂。在750mg组中，2名受试者在给药前退出。所有其它34名受试者都完成了本研究。

研究表明，在所有剂量水平下VX-950的耐受性均很好，在研究期间没有报告严重的不良事件；报告了轻微和中等不良事件。在接受安慰剂、450mg q8h、750mg q8h和1250mg q12h组的HCV阳性受试者中，分别有33.2％、10％、12.5％和30％的受试者为初次治疗。

对HCV阳性受试者进行了治疗后检查以监测回复到基线的HCVRNA水平。

表3.受试者基线特征

^*得自4名患者的样品归类为基因型1，因为该测定法无法确定他们是基因型1a还是1b。

缩略语：BMI(体重指数)；HCV(丙型肝炎病毒)；q8h(每8小时)；q12h(每12小时)；SD(标准差)。

HCV RNA自基线的变化，研究VX04-950-101

表4.HCV RNA按类别的最大变化

数值为n(％)；q8h，每8小时；q12h，每12小时。

实施例6：VX-950的制剂

如下制备口服剂型。将VX-950和聚维酮K29/32溶于二氯甲烷，然后加入十二烷基硫酸钠，并分散于VX-950溶液中以形成均相混悬液。采用90℃的入口温度和56℃的出口温度，将混悬液进行喷雾干燥，从旋流器收集产物。将经喷雾干燥的分散体于75℃经流化床干燥8小时。将所得粉末预称量到玻璃小瓶中，并在临给药前悬浮于水(30mL)用于给予受试者。在给药方面，每个小瓶用3份单独的水洗涤，使水的总体积为90mL。

表5：

实施例7：人血浆中的VX-950验证

通过本领域众所周知的方法，进行了测定人血浆中VX-950浓度的测定法。参见例如Wasley，A.等，Semin.Liver Dis.，20：1-16，2000；Alter，H.J.等，Semin.Liver Dis.，20：17-35，2000；Brown，R.S.Jr.等，LiverTranspl.，9：S10-S13，2003；DeFrancesco，R.等，Nature，436(7053)：953-960，2005；Bowen，D.G.等，J.Hepatol.，42：408-417，2005；Hoofnagle，J.H.，Hepatology，36：S21-S29，2002，Brown，R.S.Jr.等，Nature，436(7053)：973-978，2005；以及Chisari，F.V.，Nature，436(7053)：930-932，2005。

具体地讲，制备了下列VX-950溶液，并在加塞硼硅酸盐管(borosilicate tube)(11.5mL)中于-20℃保存：

储备液：961μg/mL VX-950的2-丙醇(10.0mL)溶液

稀释储备液1：96.1μg/mL VX-950的2-丙醇(5.00mL)溶液

稀释储备液2：9.61μg/mL VX-950的2-丙醇(10.0mL)溶液

稀释储备液3：0.961μg/mL VX-950的2-丙醇(10.0mL)溶液

制备含有1.00mg/mL化合物1(VX-950的结构相近的类似物)的5.00mL 2-丙醇溶液的内标储备液，在加塞硼硅酸盐管(11.5mL)中于-20℃保存。制备含有300ng/mL化合物1的100mL乙腈溶液的含有同一化合物1的工作液，在加塞硼硅酸盐瓶(100mL)中于-20℃保存。

样品制备：将100μL血浆和100μL内标工作液(或乙腈为空白样品)加入提取管中。涡旋混合30秒钟后，加入500μL甲苯，通过涡旋混合30秒钟进行提取。在4℃下，以3000rpm离心5分钟后，将水层在丙酮和干冰的混合物中冷冻，将有机层转移到另一个提取管中。加入50μL 2，2-二甲氧基丙烷，将样品在氮气氛下于约30℃蒸发至干。涡旋混合60秒钟，将残余物重新溶解于300μL庚烷和丙酮(90∶10，体积/体积)的混合物[或庚烷和THF(80∶20，体积/体积)的混合物]中。将样品转移到注射小瓶中，按照下列色谱条件，将等分的60μL样品注入色谱系统进行分析：

流动相：(等度洗脱)庚烷/丙酮/甲醇(80∶19∶1，体积/体积/体积)

补充溶剂：乙腈/丙酮/甲醇/甲酸(40∶60∶1∶1，体积/体积/体积/体积)

柱温：-1℃

流速：1.00mL/分钟(包括0.750mL/分钟流动相和0.250mL/分钟补充溶剂，完全转移至检测器)

注射体积：60μL

自动进样器温度：3℃

实施例8：与VX-950的联合疗法

进行了V-950联合疗法以测定VX-950的安全性及其抗病毒应答。准确地讲，本研究包括12名被基因型1HCV感染的初治患者。所有患者接受VX-950(750mg q8h)、聚乙二醇化干扰素α-2a(“PEG-IFN”，180μg/周)和利巴韦林(1000mg/天或1200mg/天)为期28天。在28天结束时，在其医生的临床护理下，患者开始聚乙二醇化干扰素α-2a和利巴韦林的研究外随访疗法。在聚乙二醇化干扰素α-2a/利巴韦林疗法期间，根据治疗医生的意见进行了额外的HCV RNA评价。这些包括在研究后治疗第4、8、14周和稍后时间点的评价。

结果表明，VX-950/聚乙二醇化干扰素/利巴韦林组合在28天研究中的耐受性均很好，无严重的不良事件。观察到的不良事件特征与在聚乙二醇化干扰素/利巴韦林联合疗法中观察到的不良事件特征一致。所有患者都对本研究药物方案有反应，这就表明了VX-950快速可观的抗病毒效果。准确地讲，自开始给药后8天内，2名患者达到血浆HCV RNA水平未检出(＜10IU/mL，Roche Taqman

Assay)，且所有患者在28天研究给药期结束时都未检出HCV RNA。在完成28天研究给药后，在12周随访治疗(用聚乙二醇化干扰素/利巴韦林)期间，11名患者的HCV RNA水平保持未检出。对所有患者继续进行聚乙二醇化干扰素/利巴韦林疗法，并按照标准规程跟踪反应。7名患者接受共48周治疗，并达到持续病毒应答(SVR)。1名患者接受聚乙二醇化干扰素/利巴韦林仅18周(共治疗22周)后停用，但是也达到了SVR。2名患者在治疗12周和24周时发生病毒突破，2名患者失访。从可获得结果的10名患者中共有8人达到SVR。在研究后给药期间观察到的副作用特征与聚乙二醇化干扰素/利巴韦林疗法的预期特征一致。

8名患者(包括1名只完成22周治疗)达到SVR的观察结果表明，与现有疗法相比，基于VX-950的方案可使SVR率升高。

基因型1慢性HCV患者的现行治疗一般由仅聚乙二醇化干扰素α-2a/2b(聚乙二醇化干扰素α-2a)和利巴韦林的48周疗法组成，这只在约50％的基因型-1HCV患者中产生SVR，而且患者对治疗的耐受性一般不佳。

实施例9：1b期研究

VX-950作为单一药物或与聚乙二醇化干扰素α-2a的组合具有快速和极大的抗病毒活性，并且有良好的耐受性持续14天。该研究被设计来提供有关在14天内给予VX-950治疗和聚乙二醇化干扰素α-2a治疗后HCV的动力学信息。

本研究将20名被慢性基因型1丙型肝炎感染的初治患者随机分3个剂量组(表6)。在完成14天研究后，20名患者中有19人选择开始聚乙二醇化干扰素α-2a/利巴韦林，在完成14天给药期5天内开始，另一人拒绝接受Peg-IRN-2a和利巴韦林的组合。在完成1周和12周研究要求的随访后，按照研究人员的意见进行了门诊随访。在完成研究给药后整个24周内，对19名患者进行了随访。在完成研究给药后的整个24周内，对19名患者进行了随访。在与主治医生商榷后，10名(4名VX-950，6名VX-950/聚乙二醇化干扰素α-2a)患者在24周停止了聚乙二醇化干扰素α-2a/RBV治疗。患者的当前处置见下表6。

表6：患者的处置

在最后的研究外研究随访日(在最后的研究内随访之后12周)，最初随机分配在仅VX-950组和VX-950/聚乙二醇化干扰素α-2a组并继续使用聚乙二醇化干扰素α-2a/利巴韦林的全部患者均未检出HCVRNA。数据见下表7。

表7：研究后治疗期内未检出HCV RNA的各组

^aCOBAS Taqman HCV RNA测定法。Roche Molecular Diagnostics

^bTaqman HCV RNA测定法(15IU/mL)和5IU/mL)：研究外

如下表8所示，在共24周治疗后，10名患者中有人停止研究后聚乙二醇化干扰素α-2a/利巴韦林治疗，最初只接受VX-950的4名患者中有2人显示在停止聚乙二醇化干扰素α-2a后12周随访期未检出血浆HCV RNA水平；最初接受VX-950/聚乙二醇化干扰素α-2a的6名患者中有5人显示在停止聚乙二醇化干扰素α-2a的12周随访期未检出血浆HCV RNA水平。

表8：在停止聚乙二醇化干扰素α-2a/利巴韦林后未检出HCV RNA的各组

一名患者拒绝聚乙二醇化干扰素α-2a/利巴韦林治疗。

在24周研究外随访后，最初随机分入VX-950组并用聚乙二醇化干扰素α-2a/利巴韦林继续治疗的全部患者均保持未检出HCV RNA。早期(12周)治疗后(聚乙二醇化干扰素α-2a/利巴韦林)随访病毒负荷数据与模型一致，表明了达到SVR需要的持续时间与早期病毒清除的动力学有关。接受14天VX-950疗法(任选与Peg-INF组合)接着用Peg-INF/利巴韦林额外治疗22周或46周的15名患者中，10人达到SVR。

在第12周，接受VX-950与聚乙二醇化干扰素初始组合的所有8名患者，以及只接受VX-950的7名患者中的5人未检出HCV RNA。在第24周，接受VX-950的全部15名患者未检出HCV RNA。在第24周，10名患者(8名VX-950与聚乙二醇化干扰素中的6人，以及7名仅VX-950中的4人)决定停止聚乙二醇化干扰素/利巴韦林，而5名患者继续聚乙二醇化干扰素/利巴韦林治疗共48周。所有组都再随访24周。在开始聚乙二醇化干扰素与利巴韦林之前接受至少14天VX-950(单独或与聚乙二醇化干扰素组合)的患者中，治疗24周的10名患者中有7人，以及治疗48周的5名患者中有3人达到SVR。

实施例10：基因型1丙型肝炎初治受试者中q8h或q12h给予替拉瑞韦与聚乙二醇化干扰素α-2a或-α-2b和利巴韦林的2期研究：第4周期中结果

背景：研究C208是一项在HCV基因型1感染初治受试者中进行的q8h或q12h给予替拉瑞韦(TVR)与聚乙二醇化干扰素α-2a(聚乙二醇化干扰素α-2a)或聚乙二醇化干扰素α-2b与利巴韦林(T/PR)组合的开放标记随机2期研究。我们报告了在治疗第12周进行的期中分析的结果。

方法：如表9所示将161名受试者随机分入4组。

表9：

	N	Peg-IFN	TVR	利巴韦林	RVR
						A	40	α-2a(180μg/周)	750mg q8h	1000-1200mg/天	82％
B	42	α-2b(1.5μg/kg/周)	750mg q8h	800-1200mg/天	71％
						C	40	α-2a(180μg/周)	1125mg q12h	1000-1200mg/天	85％
D	39	α-2b(1.5μg/kg/周)	1125mg q12h	800-1200mg/天	68％

所有组的受试者都接受T/PR治疗12周，随后根据快速病毒学应答(RVR)标准再接受12周或36周PR。符合病毒突破定义(最低点以上HCV RNA的增加≥1-log)的受试者停止TVR给药，并完成48周的PR。当所有治疗的受试者完成第4周的治疗或者在第4周之前停用时，进行了意向治疗分析。该分析还评价了全部治疗或TVR给药中止(包括4周以外直到数据截止值时停用)的受试者。报告了在第4周HCVRNA低于检测限(TaqMan测定法LOD 10IU/mL)(RVR)的受试者的比例。

结果：组间的基线特征是均衡的。尽管差异未达到统计显著性，但是与B组和D组相比，在A组和C组中观察到第4周较高的HCVRNA清除率。在第4周，A组和C组未检出HCV RNA的受试者比例分别为82％和85％；B组和D组分别为71％和68％。直到第4周，在A组和C组中病毒突破的受试者数目分别为0和2；在B组和D组分别为2和1。对于任何原因停用TVR的总比例为12％(n＝19)。在各组中观察到类似的停用率。

结论：在目前可获得的两个治疗标准方案的情况下，TVR 750mgq8h或1125mg q12h与PR的组合在第4周产生高的病毒学应答率和低的病毒突破。在接受不同PR方案的组间观察到未检出HCV RNA的受试者的比例的差异。得自第12周期中分析的未来结果可进一步评价TVR q12h给药的治疗潜力，以及TVR与聚乙二醇化干扰素α-2a或聚乙二醇化干扰素α-2b和利巴韦林组合的相关功效的可能差异。

表10.人口特征和基线特征

^*通过TRUGENE HCV 5’NC基因型分型测定法测定(Siemens MedicalSolutions Diagnostics)

表11.在任一组(不论严重程度或诱因)＞25％受试者中报告的不良事件

实施例11：基因型1丙型肝炎初治受试者中q8h或q12h给予替拉瑞韦与聚乙二醇化干扰素α-2a或-α-2b和利巴韦林的2期研究：第12 周期中结果

替拉瑞韦(TVR)是在初治患者和既往疗法失效的患者(包括聚乙二醇化干扰素(Peg-IFN)和利巴韦林(RBV)的零应答者)中具有活性的HCV NS3·4A蛋白酶的有效的选择性抑制剂。在2期研究中，在初治患者、HCV基因型1感染患者中，在目前使用聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的48周疗法期间，24周含TVR的方案对持续病毒学应答率提供显著改进：PROVE1：61％较之于41％(p＝0.02)；PROVE2：69％较之于46％(p＝0.01)。

C208研究(VX950-TiDP24-C208)的目的是探索以750mg q8h或1125mg q12h给予聚乙二醇化干扰素α-2a或聚乙二醇化干扰素α-2b加利巴韦林(T/PR)的组合中TVR的功效、安全性、耐受性和药代动力学特征。

我们报告了在12周治疗中进行的C208的期中分析结果。

C208是一项进行中的开放标记随机多中心2期探索性研究。招募了患慢性HCV基因型1感染的成年初治患者，包括桥接纤维化患者。入选标准与之前的HCV研究的标准一致。受试者接受12周的T/PR，接着根据持续快速病毒学应答(RVR)标准，再接受12周或36周的PR(图1)。要求在第4、6或8周HCV RNA＞1000IU/mL的受试者停止给予TVR，并完成48周的PR。

进行了期中意向治疗(ITT)分析，在本报告中提供了结果，其包括获得的所有在完成12周治疗或较早停药的随机分组受试者的数据。最初的功效终点是在整个头12周给药期间的不同时间点上HCV RNA低于检测限(LOD，10IU/mL)的受试者的比例。采用Taqman

HCVRNA测定法2.0版(Roche Molecular Systems Inc.，Branchburg，NJ，USA)测定了HCV RNA水平。

对病毒学突破(定义为与最低点相比HCV RNA增加＞1-log10，或者在之前所有评价时间点上未检出HCV RNA[＜10IU/mL]的受试者的HCV RNA＞100IU/mL)进行了评价。通过分别对由基线到第12周TVR和HCV RNA血浆浓度的预先确定的系列测定，对药代动力学特征和病毒动力学进行了评价。采用完整药代动力学特征数据的非区室方法，对TVR的药代动力学进行了分析。还用非结构化方差协方差矩阵在感染细胞中构建了病毒动力学模型，其包括治疗的固定效应和清除的随机效应、药效、下降和死亡率。通过监测不良事件(AE)、实验异常情况和心血管参数，评价了安全性和耐受性。

在研究的所有组间，共9名受试者(5.6％)在使用TVR的同时经历了病毒突破(vBT)，其中：4名受试者在头4周治疗内发生；在符合vBT标准前，无患者达到未检出HCV RNA(＜10IU/mL)；1名患者在q8hrα-2a组，3名在q8hrα-2b组，2名在q12hrα-2a组，3名在q12hrα-2b组；8名患者感染了HCV基因型1a。使用种群测序，无患者具有与在基线突变有关的TVR抗性。其中对突变进行了核实，所有都是之前描述的与突变(V36M，R155K)相关的TVR抗性。

在停用TVR后发生了另外2例突破，两人都是感染了基因型1a的患者。

通过种群测序，1名q8hα-2b组的基因型1a感染患者具有基线的R155K突变。该患者在第4和12周达到未检出HCV RNA(＜10IU/mL)。

在用q8h和q12h给药的含TVR的方案之间，未发现有统计显著性差异。导致永久中止治疗的严重AE主要是由于皮疹相关事件和贫血症相关事件所致。

主要的实验异常情况的严重程度为1级或2级。在＞2名受试者中报告了治疗突发3级实验异常情况，在总体研究群体中观察到低的白细胞计数(n＝32，11.4％)、尿酸(n＝14，5.0％)、血红蛋白(n＝15，9.4％)、淋巴细胞(n＝19，6.8％)和嗜中性粒细胞(n＝33，11.7％)。12名(7.5％)患者中出现3级贫血症(血红蛋白＜8.5g/天L)。按照研究人员意见，在总群体中33名(20％)受试者使用了红细胞生成素(Erythropoietin)。

在心电参数或生命体征参数中未观察到相关变化。

在所研究的4个替拉瑞韦治疗方案中，功效、安全性和PK参数无差异。

对于所有4个含有替拉瑞韦的方案，高比例的受试者达到未检出HCV RNA(＜10或＜25IU/mL)。

所有治疗组达到快速抑制HCV RNA。在第4周：87-96％的受试者达到＜25IU/mL HCV RNA；67-83％的受试者达到＜10IU/mL HCVRNA。在第12周：83-93％的受试者达到＜10IU/mL HCV RNA。在患者接受TVR/PR的同时，观察到低的vBT率(n＝9；5.6％)。

除皮疹和贫血症以外，不良事件在类型和频率上与用聚乙二醇化干扰素和利巴韦林观察到的类似，而且在替拉瑞韦q12hr和替拉瑞韦q8hr方案间相当。替拉瑞韦的总暴露(AUC_24h)在方案间类似。平均起来，与替拉瑞韦q8h给药方案相比，替拉瑞韦q12h的替拉瑞韦C_max较高，而C_min较低。

表12：

表13：治疗头12周内所有药物的治疗中止

表14.第8周TVR的平均药代动力学参数

本文引用的全部文献都通过引用结合到本文中。

其它实施方案

虽然本文描述了本发明的多个实施方案和实施例，但显而易见的是，可对这些实施方案和实施例作改动以提供利用本发明的药物制剂和药物方案的其它实施方案和实施例。因此，应当理解的是，本发明的范围由随附权利要求书限定，而不是由上述实施例所代表的具体实施方案限定。

Claims

1.一种治疗方案，所述治疗方案包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且其中以1125mg的量每天两次给予VX-950，每周一次给予聚乙二醇化干扰素，每天一次给予利巴韦林。

2.一种治疗方案，所述治疗方案包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且其中以1125mg的量每天两次给予VX-950，以180微克的量每周给予聚乙二醇化干扰素，以1000-1200mg的量每天给予利巴韦林。

3.权利要求2的治疗方案，其中至少65％的患者在第4周未检出HCV RNA水平。

4.权利要求3的治疗方案，其中至少75％的患者在第4周未检出HCV RNA水平。

5.权利要求4的治疗方案，其中至少80％的患者在第4周未检出HCV RNA水平。

6.权利要求5的治疗方案，其中至少85％的患者在第4周未检出HCV RNA水平。

7.权利要求2的治疗方案，其中至少80％的患者在第12周未检出HCV RNA水平。

8.权利要求7的治疗方案，其中至少84％的患者在第12周未检出HCV RNA水平。

9.权利要求8的治疗方案，其中至少90％的患者在第12周未检出HCV RNA水平。

10.权利要求9的治疗方案，其中至少93％的患者在第12周未检出HCV RNA水平。

11.权利要求2-10中任一项的治疗方案，其中每12小时给予VX-950。

12.权利要求2-10中任一项的治疗方案，其中在初始阶段给予聚乙二醇化干扰素，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素α2a。

13.权利要求2-12中任一项的治疗方案，其中所述初始阶段持续12周。

14.权利要求13的治疗方案，其中所述第二阶段持续12周或36周。

15.一种治疗方案，所述治疗方案包括在初始阶段给予患者聚乙二醇化干扰素和利巴韦林与VX-950，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素和利巴韦林，其中第二阶段发生在初始阶段之后，且其中以1125mg的量每天两次给予VX-950，以1.5微克/千克的量每周给予聚乙二醇化干扰素，以800-1200mg的量每天给予利巴韦林。

16.权利要求15的治疗方案，其中至少65％的患者在第4周未检出HCV RNA水平。

17.权利要求16的治疗方案，其中至少75％的患者在第4周未检出HCV RNA水平。

18.权利要求17的治疗方案，其中至少80％的患者在第4周未检出HCV RNA水平。

19.权利要求18的治疗方案，其中至少85％的患者在第4周未检出HCV RNA水平。

20.权利要求15的治疗方案，其中至少80％的患者在第12周未检出HCV RNA水平。

21.权利要求20的治疗方案，其中至少84％的患者在第12周未检出HCV RNA水平。

22.权利要求21的治疗方案，其中至少90％的患者在第12周未检出HCV RNA水平。

23.权利要求22的治疗方案，其中至少93％的患者在第12周未检出HCV RNA水平。

24.权利要求15-23中任一项的治疗方案，其中每12小时给予VX-950。

25.权利要求15-24中任一项的治疗方案，其中在初始阶段给予聚乙二醇化干扰素，在第二阶段给予聚乙二醇化干扰素α2b。

26.权利要求15-25中任一项的治疗方案，其中所述初始阶段持续12周。

27.权利要求26的治疗方案，其中所述第二阶段持续12周或36周。