CN102294025B

CN102294025B - 前列腺干细胞抗原多肽与核酸的复合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102294025B
Application number: CN 201110228380
Authority: CN
Inventors: 张克勤; 李蜀婧; 刘勇
Original assignee: Third Affiliated Hospital of TMMU
Current assignee: Third Military Medical University TMMU; Third Affiliated Hospital of TMMU
Priority date: 2011-08-10
Filing date: 2011-08-10
Publication date: 2013-06-05
Anticipated expiration: 2031-08-10
Also published as: CN102294025A

Abstract

本发明公开了一种前列腺干细胞抗原（PSCA）多肽与核酸的复合物，是由阳离子肽类DNA转运载体与HLA-A2限制性CTL表位肽PSCA_14-22形成的融合肽通过正负电荷相吸作用包装PSCA基因重组真核表达载体而得到的颗粒状复合物；其制备方法是在pH为7.2~7.6的缓冲盐溶液中，按照一定的正负电荷比加入融合肽和PSCA基因重组真核表达载体，混匀，室温放置0.5~1.5小时，即得；该复合物不但结合了DNA疫苗与表位肽疫苗的优势，而且可以模拟天然病毒直接“感染”APC等免疫细胞，在体内能够激发强有力的CTL应答，有望打破肿瘤抗原的自身耐受现象，可用于制备适用于我国50%以上人群的前列腺癌治疗性疫苗，在前列腺癌免疫治疗领域有着潜在、良好的开发应用前景。

Description

前列腺干细胞抗原多肽与核酸的复合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种多肽与核酸的复合物，还涉及该复合物的制备方法和应用。

背景技术

前列腺癌是严重威胁中老年男性健康的恶性肿瘤之一，而且发病率逐年上升，死亡率高，仅次于肺癌，位居第二。50多年以来，雄激素阻断治疗一直是前列腺癌的标准疗法，然而，大多数患者最终会发展为激素抵抗性前列腺癌（hormone refractory prostate cancer, HRPC）。对于HRPC，目前尚无有效的疗法，而现有治疗手段包括放射治疗、化学治疗等均不能延长患者生命达一年以上。因此探索新型有效的前列腺癌治疗方法，一直是泌尿外科临床所面临的重要课题之一。

前列腺癌的免疫治疗是近年来倍受关注的研究热点。随着分子免疫学和肿瘤疫苗学的快速发展，细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL）在机体杀伤肿瘤过程中的重要作用得到深刻认识，利用CTL的特异性杀伤作用对肿瘤进行治疗已经成为颇具前景的肿瘤疗法。目前，已经有包括前列腺特异抗原（prostate-specific antigen, PSA），前列腺特异性膜抗原（prostate-specific membrane antigen, PSMA）和前列腺酸性磷酸酶（prostatic acid phosphatase, PAP）在内的数种前列腺癌相关抗原被鉴定，以这些抗原为靶标的疫苗被用于前列腺癌治疗研究，但临床试验显示，仅有约30%的患者有部分或完全的应答。树突状细胞（DC）疫苗一直被认为是最具前景的疫苗形式，但最近研究发现，一种负载PSA的DC疫苗虽然可诱发机体产生免疫应答，但参与临床实验的31例病人中只有3例PSA水平可降低至50%以上。因此，能用于特异性免疫治疗前列腺癌的新抗原一直处在积极的探索中。

前列腺干细胞抗原（prostate stem cell antigen, PSCA）是近来鉴定的一种前列腺癌相关抗原。与PSA、PSMA、PAP等前列腺癌相关抗原相比，PSCA具有以下明显优势：①PSCA仅表达于正常前列腺组织和前列腺癌细胞，在局部和发生骨转移的前列腺癌中呈过度表达，且表达密度随肿瘤分级和分期增高而增强，因此，对局部和发生骨转移的前列腺癌患者是一个良好靶标；②PSCA的表达具有前列腺特异性，PSCA特异性的CTL只杀伤前列腺正常细胞和癌细胞，不会伤害其他器官，而前列腺非生命必需的器官，因此，不会对患者生命造成威胁；③PSCA属GPI蛋白，其表达于前列腺癌细胞表面，且不会从细胞表面脱落，是潜在的抗体治疗靶标。

但如何提高这些潜在靶标的免疫原性来打破肿瘤抗原的自身耐受现象，是肿瘤疫苗设计中的一大难题。根据新近的疫苗学研究结果，某种疫苗接种机体后能否有效激发CTL应答的关键在于：疫苗抗原能否有效地被抗原递呈细胞（antigen presenting cell, APC）捕获，并进入MHC-I类抗原递呈途径，最终以“多肽-MHC-I类分子复合物”的形式呈现于细胞表面供初始型CD8⁺ T细胞识别。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种PSCA多肽与核酸的复合物，能够高效诱导PSCA特异性的CTL应答，有望打破肿瘤抗原的自身耐受现象。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

PSCA多肽与核酸的复合物，是由阳离子肽类DNA转运载体与PSCA表位肽PSCA_14-22形成的融合肽通过正负电荷相吸作用包装PSCA基因重组真核表达载体而得到的颗粒状复合物；所述阳离子肽类DNA转运载体位于融合肽的N端，PSCA表位肽PSCA_14-22位于融合肽的C端；所述PSCA表位肽PSCA_14-22的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述PSCA基因重组真核表达载体含有核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的人PSCA编码基因。

优选的，所述阳离子肽类DNA转运载体为由18个L-赖氨酸连接而成的多聚赖氨酸，在本发明中用K₁₈表示。K₁₈为生物可降解分子，不存在蓄积危害性。在本发明中，由K₁₈与PSCA_14-22形成的融合肽用K₁₈-PSCA_14-22表示。

优选的，所述PSCA基因重组真核表达载体以真核表达载体pcDNA3.1(+)为骨架。在本发明中，以pcDNA3.1(+)为骨架构建的PSCA基因重组真核表达载体用pcDNA3.1(+)-PSCA表示。

在采用上述优选技术方案：阳离子肽类DNA转运载体为K₁₈、PSCA基因重组真核表达载体为pcDNA3.1(+)-PSCA的情况下，所述融合肽与PSCA基因重组真核表达载体的正负电荷比优选为≥8，更优选为64。当正负电荷比≥2时，PSCA基因重组真核表达载体被融合肽完全包裹，所得复合物可以抵抗脱氧核糖核酸酶I（DNase I）的消化作用。当正负电荷比≥8时，所得复合物可以有效地转染Hela细胞，至正负电荷比为64时达到最高值，随后逐渐下降。在本发明中，由K₁₈-PSCA_14-22包装pcDNA3.1(+)-PSCA而得到的颗粒状复合物用K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA表示。

本发明的目的之二在于提供所述PSCA多肽与核酸的复合物的制备方法，操作简便、快速，产品质量、性能稳定。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

PSCA多肽与核酸的复合物的制备方法，是在pH为7.2~7.6的缓冲盐溶液中，按照一定的正负电荷比加入由阳离子肽类DNA转运载体与PSCA表位肽PSCA_14-22形成的融合肽与PSCA基因重组真核表达载体，混匀，室温放置0.5~1.5小时，即得。

优选的，所述缓冲盐溶液为HBS缓冲液，由20mM HEPES和150mM的NaCl组成。

在采用上述优选技术方案：阳离子肽类DNA转运载体为K₁₈、PSCA基因重组真核表达载体为pcDNA3.1(+)-PSCA的情况下，上述方法中所述的正负电荷比优选为≥8，更优选为64。

本发明的目的之三在于提供所述PSCA多肽与核酸的复合物在制药领域中的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

PSCA多肽与核酸的复合物在制备前列腺癌治疗性疫苗中的应用。

本发明的有益效果在于：① 阳离子肽类DNA转运载体富含正电荷，可通过正负电荷相吸作用与富含负电荷的PSCA基因重组真核表达载体发生聚合，进而将直径约数百纳米的松散DNA分子压缩成直径约几十纳米的致密颗粒，与松散的DNA分子相比，这些致密颗粒更易于被DC等APC捕获并保护DNA免于核酸酶的降解，从而提高了DNA疫苗的免疫原性，同时，由于这些致密颗粒在体内大部分被DC等APC捕获，对体细胞影响小，也确保了DNA疫苗的安全性。② CTL 活化时必须识别来自抗原的CTL 表位，而DC是体内加工递呈CTL 表位、激活CTL 反应最有效的细胞，将PSCA的优势CTL表位肽PSCA_14-22与阳离子肽类DNA转运载体制成融合肽再包装PSCA基因重组真核表达载体制得致密颗粒，可使CTL表位肽PSCA_14-22暴露于致密颗粒的表面，而暴露在致密颗粒表面的CTL表位肽较单独的CTL表位肽更易于被DC等APC捕获递呈进入MHC-I类抗原递呈途径，从而提高了表位肽疫苗的免疫原性，可以有效激发特异性的CTL应答。③ 本发明的复合物不但结合了DNA疫苗与表位肽疫苗的优势，而且该颗粒状复合物的大小与天然病毒接近，可以模拟天然病毒被APC捕获的过程，甚至模拟天然病毒的转染活性直接“感染”APC等免疫细胞，进而在体内激发类似的免疫应答。综合上述几个方面，本发明的复合物有望打破肿瘤抗原的自身耐受现象，可用于制备高效、安全的前列腺癌治疗性疫苗。由于PSCA_14-22是HLA-A2限制性CTL表位，而HLA-A2 阳性人群占到我国总人群的53%，因此，用本发明复合物制得的前列腺癌治疗性疫苗适用于我国50%以上的人群，适用范围广，在前列腺癌免疫治疗领域有着潜在、良好的开发应用前景。

附图说明

图1为K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA的构建示意图。

图2为K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA的DNA条带阻滞实验结果，其中M表示DNA Marker，0、0.5、1、2、4、8和16分别表示K₁₈-PSCA_14-22与pcDNA3.1(+)-PSCA的正负电荷比。

图3为K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA的DNase保护实验结果，其中M表示DNA Marker，0、0.5、1、2、4、8和16分别表示K₁₈-PSCA_14-22与pcDNA3.1(+)-PSCA的正负电荷比。

图4为RT-PCR检测K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA转染人宫颈癌HeLa细胞24小时后的PSCA mRNA水平，其中M表示DNA Marker，0、1、2、4、8、16、32、64和128分别表示K₁₈-PSCA_14-22与pcDNA3.1(+)-PSCA的正负电荷比，Lipo表示Lipo2000阳性对照。

图5为RT-QPCR检测K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA转染Hela细胞24小时后的PSCA mRNA水平。

图6为流式细胞（FACS）法测定K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA激发CTL分泌干扰素g（IFN-g）的能力。

图7为免疫脾细胞对人前列腺癌LNCaP细胞的特异性杀伤效果。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的优选实施例进行详细的描述。优选实施例仅用于说明本发明，而非限制本发明，本领域技术人员可以对优选实施例的技术方案进行各种等同变换。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第三版，J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译，科学出版社，2002年)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件进行。

一、K ₁₈ -PSCA _14-22 /pcDNA3.1(+)-PSCA的制备

K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA的构建示意图如图1所示。

、K ₁₈ -PSCA _14-22 的制备

K₁₈-PSCA_14-22的氨基酸序列为(K)₁₈ALQPGTALL，委托上海生工生物工程技术服务有限公司采用固相合成法合成并纯化，用HBS缓冲液（由20mM HEPES和150mM的NaCl组成， pH7.4）溶解制成浓度为1mg/mL的溶液，-70℃贮存备用。

、pcDNA3.1(+)-PSCA的制备

1）总RNA的提取和逆转录：将复苏的LNCaP细胞用含有质量分数为10%的胎牛血清（FBS）的F12培养基于温度为37℃、CO₂体积分数为5%的孵箱中培养48小时，离心收集细胞，采用TRIzol试剂（GIBCOBRL公司）提取总RNA。取所得总RNA 2g，按照逆转录试剂盒操作说明将其逆转录为cDNA。

2）PCR引物的设计、合成：根据人PSCA编码基因序列（SEQ ID No.2），设计一对PCR扩增引物，并在上、下游引物的5’端分别添加KpnⅠ和XbaⅠ限制性内切酶识别位点。上游引物序列为：5'-cc ggtacc atgaaggctgtgctgcttgccctgt-3'（SEQ ID No.3），下划线部分为KpnⅠ酶切位点；下游引物序列为：5'-cc tctaga cgagctggccgggtccccagagc-3'（SEQ ID No.4），下划线部分为XbaⅠ酶切位点。设计的引物委托上海生工生物工程技术服务有限公司进行合成。

3）PSCA基因的扩增与纯化：以1）所得cDNA为模板，采用2）所得上、下游引物进行PCR扩增。扩增条件为：94℃预变性2分钟；然后94℃变性30秒，66.5℃退火30秒，72℃延伸45秒，共35个循环；最后72℃延伸10分钟。扩增产物进行12g/L琼脂糖凝胶电泳，用凝胶回收试剂盒切胶回收纯化目的基因。

4）pcDNA3.1(+)-PSCA的构建：将纯化的PSCA基因用KpnⅠ和XbaⅠ进行双酶切，双酶切产物经凝胶回收试剂盒切胶回收纯化后，与同样经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)在T4 DNA连接酶的作用下进行连接，连接产物转化感受态DH5α细菌，用含有氨苄青霉素的LB平板筛选阳性克隆，提取阳性克隆质粒，用KpnⅠ和XbaⅠ进行双酶切鉴定，并委托上海生工生物工程技术服务有限公司测定质粒序列，含有PSCA编码基因的重组质粒即为pcDNA3.1(+)-PSCA。

、K ₁₈ -PSCA _14-22 /pcDNA3.1(+)-PSCA的制备及鉴定

1）复合物的制备：按照多肽与DNA的正负电荷比（Mp为多肽质量，Md为DNA质量，K为0.54），将1μg pcDNA3.1(+)-PSCA分别与0、0.27、0.54、1.08、2.16、4.32、8.64μg的K₁₈-PSCA_14-22混合于20μL HBS缓冲液（由20mM HEPES和150mM的NaCl组成，pH7.4）中，轻柔吹打混匀，室温放置1小时，即得正负电荷比分别为0、0.5、1、2、4、8和16的K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA。

2）DNA条带阻滞实验：将1）制得的不同正负电荷比的K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA进行8g/L琼脂糖凝胶电泳，分析DNA条带情况。结果如图2所示，当正负电荷比N≥2时，pcDNA3.1(+)-PSCA已被K₁₈-PSCA_14-22完全包裹。

3）DNase保护实验：将1）制得的不同正负电荷比的K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA加入2μL DNase I进行消化，再用苯酚20μL 与氯仿20μL的混合液进行抽提，所得抽提物进行8g/L琼脂糖凝胶电泳，分析DNA条带情况。结果如图3所示，当正负电荷比N≥2时，所得K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA可以抵抗DNase I的消化作用。

二、K ₁₈ -PSCA _14-22 /pcDNA3.1(+)-PSCA的体外转染效率

按照前述复合物的制备方法制备正负电荷比分别为0、1、2、4、8、16、32、64和128的K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA，瞬时转染Hela细胞，转染24小时后提取RNA，分别采用RT-PCR和RT-QPCR法检测转染细胞的PSCA mRNA水平。结果分别如图4和图5所示，当正负电荷比N≥8时，所得K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA可以有效转染Hela细胞；当正负电荷比N=64时，所得K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA转染的Hela细胞中PSCA mRNA水平达到最高值，之后随着正负电荷比的增加，转染Hela细胞中的PSCA mRNA水平又逐渐下降。

三、K ₁₈ -PSCA _14-22 /pcDNA3.1(+)-PSCA的抗前列腺癌活性

1、免疫脾细胞的制备

将9只HLA-A2.1/Kb转基因小鼠随机分为3组：pcDNA3.1(+)组、pcDNA3.1(+)-PSCA组和K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA组，每组3只。pcDNA3.1(+)组以5.79μg pcDNA3.1(+)溶于100μL HBS缓冲液制得的溶液为免疫原；pcDNA3.1(+)-PSCA组以5.79μg pcDNA3.1(+)- PSCA溶于100μL HBS缓冲液制得的溶液为免疫原；K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA组以200μg K₁₈-PSCA_14-22与5.79μg pcDNA3.1(+)-PSCA混合于100μL HBS缓冲液制得的正负电荷比为64的K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA为免疫原；各组小鼠尾根部皮内注射免疫原，每只100μL，之后每间隔2周，以同样方法加强免疫1次，共免疫3次；末次免疫后1周，断颈处死小鼠，在无菌条件下取脾脏，用100目筛网碾磨，收集细胞悬液，用聚蔗糖-泛影葡胺分层液密度梯度离心分离脾脏淋巴细胞，用含有质量分数为10%的FBS的RPMI 1640培养基调节细胞密度为1×10⁶个/mL，备用。

、FACS法检测K ₁₈ -PSCA _14-22 /pcDNA3.1(+)-PSCA激发CTL分泌IFN-g的能力

取三组免疫脾细胞悬液各500μL，加入K₁₈-PSCA_14-22至10μg/mL以及BREFELDIN A（阻止细胞因子分泌到胞外）至10μg/mL，体外刺激4~6小时，用2mL PBS（137mM NaCl，2.7mM KCl，4.3mM Na₂HPO₄，1.4 mM KH₂PO₄；pH7.4）洗涤细胞2次（1500rpm×5min离心），再加入1μL CD16/CD32单抗，冰上孵育10分钟，再加入1μL PE标记的大鼠抗小鼠CD8单抗（IgG1），冰上孵育20分钟，用2mL PBS洗涤2次，再加入500μL 4%多聚甲醛，冰上固定15分钟，用2mL PBS洗涤2次，再加入500μL 0.1%皂素（用PBS配制），冰上孵育10分钟，1500rpm×5min离心，弃去，再加入1μL APC标记的大鼠抗小鼠IFN-g单抗（IgG2a），冰上孵育30分钟，用0.1%皂素洗涤1次，PBS洗涤1次，最后用100μL PBS重悬细胞，流式细胞仪检测CTL分泌IFN-g的水平。同时设置阴性对照管（即用PE标记的大鼠同种型IgG1和APC标记的大鼠同种型IgG2a染色管）。结果如图6所示，K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA组CTL的IFN-g产生频率为0.42，明显高于pcDNA3.1(+)组（0.16）和pcDNA3.1(+)-PSCA组（0.20），说明K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA具有良好的免疫原性，能够有效激发CTL分泌IFN-g。

、LDH法检测K ₁₈ -PSCA _14-22 /pcDNA3.1(+)-PSCA激发CTL对靶细胞的特异性杀伤效应

取三组免疫脾细胞悬液各500μL，加入K₁₈-PSCA_14-22至1μg/mL以及重组人白细胞介素2（rIL-2）至20ng/mL，体外刺激5~8天，离心收集细胞，用含有质量分数为10%的FBS的RPMI 1640培养基冲洗并重悬细胞至1×10⁶个/mL，作为效应细胞。将PSCA阳性的LNCaP细胞用含有质量分数为10%的FBS的RPMI 1640培养基调节细胞密度为1×10⁶个/mL，作为靶细胞。在96孔V型板中，每孔加入1×10⁴个靶细胞，再按照效靶比（E/T）分别为50、25、12.5加入效应细胞，每种效靶比设3个复孔；将接种好细胞的96孔板250g×5min离心使效靶细胞充分接触，再置CO₂孵箱中孵育4小时。同时设置效应细胞自发释放孔（不加靶细胞）、靶细胞自发释放孔（不加效应细胞）以及靶细胞最大释放孔（不加效应细胞，于孵育结束之前45分钟加入10μL 体积分数为9%的TritonX-100溶液）。孵育完毕后，取各孔上清50μL，加入50μL底物溶液，室温避光放置30分钟，再加入50μL终止液终止反应，用酶标仪于波长490nm处测定OD值，计算特异性杀伤率：特异性杀伤率(%)=(实验孔OD值-效应细胞自发释放孔OD值-靶细胞自发释放孔OD值)/(靶细胞最大释放孔OD值-靶细胞自发释放孔OD值)×100%。结果如图7所示，K₁₈-PSCA_14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA组激发的CTL对PSCA阳性的LNCaP细胞的特异性杀伤效果优于pcDNA3.1(+)组和pcDNA3.1(+)-PSCA组。

<110> 中国人民解放军第三军医大学第三附属医院

<120> 前列腺干细胞抗原多肽与核酸的复合物及其制备方法和应用

<160> 4

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> 智人（homo sapiens）

<220>

<223> 前列腺干细胞抗原表位肽PSCA_14-22

<400> 1

Ala Leu Gln Pro Gly Thr Ala Leu Leu

1 5

<210> 2

<211> 372

<212> DNA

<213> 智人（homo sapiens）

<220>

<223> 前列腺干细胞抗原编码基因

<400> 1

atgaaggctg tgctgcttgc cctgttgatg gcaggcttgg ccctgcagcc aggcactgcc 60

ctgctgtgct actcctgcaa agcccaggtg agcaacgagg actgcctgca ggtggagaac 120

tgcacccagc tgggggagca gtgctggacc gcgcgcatcc gcgcagttgg cctcctgacc 180

gtcatcagca aaggctgcag cttgaactgc gtggatgact cacaggacta ctacgtgggc 240

aagaagaaca tcacgtgctg tgacaccgac ttgtgcaacg ccagcggggc ccatgccctg 300

cagccggctg ctgccatcct tgcgctgctc cctgcactcg gcctgctgct ctggggaccc 360

ggccagctct ag 372

<210> 3

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PCR扩增人PSCA编码基因序列的上游引物

<400> 3

ccggtaccat gaaggctgtg ctgcttgccc tgt 33

<210> 4

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PCR扩增人PSCA编码基因序列的下游引物

<400> 4

cctctagacg agctggccgg gtccccagag c 31

Claims

1.前列腺干细胞抗原多肽与核酸的复合物，其特征在于：是由阳离子肽类DNA转运载体与前列腺干细胞抗原表位肽PSCA_14-22形成的融合肽通过正负电荷相吸作用包装前列腺干细胞抗原基因重组真核表达载体而得到的颗粒状复合物；所述阳离子肽类DNA转运载体位于融合肽的N端，前列腺干细胞抗原表位肽PSCA_14-22位于融合肽的C端；所述阳离子肽类DNA转运载体是由18个L-赖氨酸连接而成的多聚赖氨酸，所述前列腺干细胞抗原表位肽PSCA_14-22的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述前列腺干细胞抗原基因重组真核表达载体含有核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的人前列腺干细胞抗原编码基因，以真核表达载体pcDNA3.1(+)为骨架；所述融合肽与前列腺干细胞抗原基因重组真核表达载体的正负电荷比为64。

2.权利要求1所述的前列腺干细胞抗原多肽与核酸的复合物的制备方法，其特征在于：是在pH为7.2~7.6的缓冲液中，按照一定的正负电荷比加入由阳离子肽类DNA转运载体与前列腺干细胞抗原表位肽PSCA_14-22形成的融合肽以及前列腺干细胞抗原基因重组真核表达载体，混匀，室温放置0.5~1.5小时，即得前列腺干细胞抗原多肽与核酸的复合物；所述缓冲盐溶液为HBS缓冲液，由20mM HEPES和150mM的NaCl组成。

3.权利要求1所述的前列腺干细胞抗原多肽与核酸的复合物在制备前列腺癌治疗性疫苗中的应用。