CN102293870B - 一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，其含有以下质量份的原料药：蒲公英10~20份、金银花5~15份、紫花地丁10~20份、当归5~15份、昆布5~15份。本发明的中药组合物为外用透皮制剂，给药方便，不会对奶牛产生机械损伤；本发明为纯中药制剂，无残留、无公害、环保安全；本发明的中药组合物疗效显著，对奶牛隐性乳房炎的治愈率达88.9%，有效率97.2%。且药物对乳汁质量无影响，能增加产奶量，生产工艺简单，使用方便。

Description

一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种动物药物，特别涉及一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物及其制备方法。

背景技术

奶牛乳房炎(Bovine mastitis)是乳腺受到物理、化学、微生物刺激所发生的一种炎性变化，是奶牛的常见病和多发病。奶牛乳房炎具有发生范围广、发病率高等特点。全世界约有2.2亿头奶牛，其中约1/3患有各种类型的乳房炎。世界每年临床乳房炎发病率可达50％，芬兰、挪威、瑞典每年因乳房炎问题淘汰的奶牛分别占淘汰奶牛的35％、19％、22％。我国乳房炎的发病率高于世界平均水平，包括隐性型乳房炎在内的发病率平均为70％。我国每年因奶牛乳房炎导致的损失达30亿元。

尽管有多年的研究，但是奶牛乳房炎仍然是奶牛群中花费最多的疾病之一，且是造成早期犊牛发生胃肠道疾病和死亡的原因之一。乳房炎会造成奶牛产奶量降低、患病而使奶牛提早淘汰、乳汁被废弃、治疗花费等造成经济损失。在一个牛群中，大多数乳房炎（大约90％）是隐性型。因此，造成经济损失的主要是隐性乳房炎。奶牛患乳房炎后所产的乳汁中含有大量的炎性因子、致病菌及其产生的毒素，如果饮用了消毒不严或含有致病菌的牛奶，轻则使人感到身体不适，重者可诱发疾病。而且，现在治疗乳房炎基本选用抗生素，有些经营者为了追求经济效益，不淘汰治疗期间的患牛乳汁，造成抗生素在牛奶中残留，引起食用者产生过敏反应，尤其对老年人和婴幼儿危害更大。奶牛在患乳房炎时，奶中所含的氨基酸，特别是人体必需的颉氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸等的含量均显著降低，降低牛奶的保健作用。因为多数临床型乳房炎都是由隐性乳房炎发展而来，病程较长，乳腺深度疤痕组织形成、肿块包围、导管阻塞导致药物不易渗透，不能起到良好的治疗效果。所以乳房炎应以预防为主，早发现、早治疗，若发展成临床型乳房炎时乳腺组织已发生不可逆的变化。

目前中药防治奶牛乳房炎的剂型主要有散剂、煎剂、注射剂和透皮制剂。散剂用药剂量较大，药物在瘤胃内会有一定的损失，药物吸收后肝脏的首过效应对药效也会有一定的影响。煎剂多为水溶剂，温度较高，提取时间较长，药材中一些具有热不稳定性的有效成分在受热时易被破坏。注射剂多为灌乳给药，对乳区具有一定的刺激作用，且注射剂的质量控制很难，稳定性差。透皮制剂避免了散剂剂量较大的弊端，同时可以避免药物受胃肠道生理因素的影响，还能避免肝脏的首过效应。因此研制一种无抗生素残留、临床给药方便、疗效显著的外用透皮制剂显得十分必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物及其制备方法，本发明的中药组合物临床给药方便、疗效显著。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，含有以下质量份的原料药：蒲公英10~20份、金银花5~15份、紫花地丁10~20份、当归5~15份、昆布5~15份。

优选的，上述一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，还含有以下质量份的原料药：瓜蒌10~20份、黄芩5~15份、连翘5~15份、青皮5~15份。

优选的，上述一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，含有以下质量份的原料药：蒲公英15份、金银花10份、紫花地丁15份、当归10份、昆布8份，瓜蒌15份、黄芩10份、连翘10份、青皮7份。

优选的，上述一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，还含有药学中常用的辅料或辅助性成分。

上述用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

1）          取配方量的当归，水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，当归水提液留置待用；

2）          取配方量的金银花，用乙醇提取，浓缩至生药浓度为0.4~0.6g/ml，得到浓缩液A；

3）          按配方量取剩余的原料药，加入步骤1）得到的当归水提液，水提醇沉法提取，浓缩至生药浓度为0.4~0.6g/ml，得到浓缩液B；

4）          将当归挥发油、浓缩液A、浓缩液B混合，加冰片适量，混合均匀，灌装于容器中即得。

中药组方是在中医辨证的基础上，根据病情的需要，利用药物的七情，规定必要的药量，配伍组织成方。本发明的药物组分和用量是发明人通过长期的反复试验实践总结得出，原料由蒲公英、金银花、紫花地丁、当归、昆布，瓜蒌、黄芩、连翘、青皮组成，其中蒲公英为菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand-Mazz．、碱地蒲公英Taraxacum sinicum Kitag．或同属数种植物的干燥全草，具有清热解毒、消肿散结及催乳作用；金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb．的干燥花蕾或带初开的花，富含绿原酸类、甙类、黄酮类、挥发油类成分，具有消痈散毒、抗菌消炎作用；紫地花丁为堇菜科植物紫花地丁Viola yedoensis Makino的干燥全草，具有清热解毒消痈肿的作用；当归为伞形科植物当归Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根，具有补血活血、温中润燥、镇静镇痛、抗炎抗癌的作用；昆布为海带科植物海带Laminaria Japonica Aresch．或翅藻科植物昆布Ecklonia kurome Okam．的干燥叶状体，富含碘、钙、铁等矿物元素，具有清热利尿、抗菌消炎、消脂去肿的作用；瓜蒌为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.或双边栝楼Trichosanthes rosthornii Harms 的干燥成熟果实，具有清热散结、润肺化痰，滑肠通便、催补母乳、抗菌强身的作用；黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清热泻火、抗菌消炎的作用；连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspensa（Thnub.）Vahl的干燥果实，具有疏风散热、清热解毒、消肿散结的作用；青皮为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮，具有疏肝破气，消积化滞的作用。

本发明具有以下有益效果：本发明为外用透皮制剂，给药方便，不会对奶牛产生机械损伤；本发明为纯中药制剂，无残留、无公害、环保安全；本发明的中药组合物疗效显著，对隐性乳房炎的治愈率达88.9%，有效率97.2%。且药物对乳汁质量无影响，能增加产奶量，生产工艺简单，使用方便。

具体实施方式

一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，含有以下质量份的原料药：蒲公英10~20份、金银花5~15份、紫花地丁10~20份、当归5~15份、昆布5~15份。

优选的，上述一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，还含有以下质量份的原料药：瓜蒌10~20份、黄芩5~15份、连翘5~15份、青皮5~15份。

优选的，上述一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，含有以下质量份的原料药：蒲公英15份、金银花10份、紫花地丁15份、当归10份、昆布8份，瓜蒌15份、黄芩10份、连翘10份、青皮7份。

优选的，上述一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，还含有药学中常用的辅料或辅助性成分。

上述用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

1）          取配方量的当归，水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，当归水提液留置待用；

2）          取配方量的金银花，用乙醇提取，浓缩至生药浓度为0.4~0.6g/ml，得到浓缩液A；

3）          按配方量取剩余的原料药，加入步骤1）得到的当归水提液，水提醇沉法提取，浓缩至生药浓度为0.4~0.6g/ml，得到浓缩液B；

4）          将当归挥发油、浓缩液A、浓缩液B混合，加冰片适量，混合均匀，灌装于容器中即得。

    组方中金银花、蒲公英、连翘、紫花地丁同为君药，起清热解毒，散结消肿、去痈之功效。配合瓜蒌治乳痈初起、红肿热痛；当归、青皮活血止痛，舒肝破气，消积化滞，可增强蒲公英、金银花的散结消肿之功效；黄芩清热燥湿；昆布利水、软坚散结；诸药合用，共成清热解毒、消肿散痈之功效。本发明的中药组合物既可以灌装于喷雾容器中制成喷雾剂，亦可通过加入药学中常用的辅料或辅助性成分制成其他形态的外用透皮制剂，如软膏剂、凝胶剂、贴膏剂等，均落入本发明的保护范围内。

以下结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此，本领域技术人员在不脱离本发明的基本技术思想前提下，所作出的修改、替换、变更均落入本发明的保护范围。

实施例1

一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，含有以下质量份的原料药：蒲公英10份、金银花15份、紫花地丁10份、当归15份、昆布5份。

具体制备方法：

1）          取配方量的当归，水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，当归水提液留置待用；

2）          取配方量的金银花，用乙醇提取，浓缩至生药浓度为0.4g/ml，得到浓缩液A；

3）          取配方量的蒲公英、紫花地丁、昆布，加入步骤1）得到的当归水提液，水提醇沉法提取，浓缩至生药浓度为0.6g/ml，得到浓缩液B；

4）          将当归挥发油、浓缩液A、浓缩液B混合，加冰片适量，使冰片含量为药液重量的1%，混合均匀，灌装于喷雾容器中即得喷雾剂。

实施例2

一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，含有以下质量份的原料药：蒲公英15份、金银花10份、紫花地丁15份、当归10份、昆布8份，瓜蒌15份、黄芩10份、连翘10份、青皮7份。

具体制备方法：

1）          取配方量的当归，水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，当归水提液留置待用；

2）          取配方量的金银花，用乙醇提取，浓缩至生药浓度为0.5g/ml，得到浓缩液A；

3）          取配方量的蒲公英、紫花地丁、昆布、瓜蒌、黄芩、连翘、青皮，加入步骤1）得到的当归水提液，水提醇沉法提取，浓缩至生药浓度为0.5g/ml，得到浓缩液B；

4）          将当归挥发油、浓缩液A、浓缩液B混合，加冰片适量，使冰片含量为药液重量的1%，混合均匀，灌装于喷雾容器中即得喷雾剂。

实施例3

一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，含有以下质量份的原料药：蒲公英20份、金银花5份、紫花地丁20份、当归5份、昆布15份。

具体制备方法：

1）          取配方量的当归，水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，当归水提液留置待用；

2）          取配方量的金银花，用乙醇提取，浓缩至生药浓度为0.4g/ml，得到浓缩液A；

3）          取配方量的蒲公英、紫花地丁、昆布，加入步骤1）得到的当归水提液，水提醇沉法提取，浓缩至生药浓度为0.4g/ml，得到浓缩液B；

4）          将当归挥发油、浓缩液A、浓缩液B混合，加冰片适量，使冰片含量为药液重量的1.5%，混合均匀，灌装于容器中即得。

实施例4

一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，含有以下质量份的原料药：蒲公英20份、金银花5份、紫花地丁20份、当归5份、昆布15份，瓜蒌10份、黄芩15份、连翘5份、青皮15份。

具体制备方法：

1）          取配方量的当归，水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，当归水提液留置待用；

2）          取配方量的金银花，用乙醇提取，浓缩至生药浓度为0.6g/ml，得到浓缩液A；

3）          取配方量的蒲公英、紫花地丁、昆布、瓜蒌、黄芩、连翘、青皮，加入步骤1）得到的当归水提液，水提醇沉法提取，浓缩至生药浓度为0.6g/ml，得到浓缩液B；

4）          将当归挥发油、浓缩液A、浓缩液B混合，加冰片适量，使冰片含量为药液重量的1.5%，混合均匀，灌装于容器中即得。

本发明药物的使用方法：奶牛每次采乳后，用消毒后无菌热毛巾擦拭乳房，然后每个患病乳区均匀喷上或涂上本组合物。以整个乳区均匀喷满/涂满药液，无遗漏，无成滴滴下为准，约15～20mL。每天两次。5天为一个疗程。

对奶牛隐性乳房炎的疗效实验：

随机将33头用加州乳房炎检测法检测出的病牛分成4组，Ⅰ组10头，Ⅱ组10头，Ⅲ组8头，Ⅳ组5头。Ⅰ、Ⅱ组为实施例1、2中药组合物组：奶牛每次采乳后，用消毒后无菌热毛巾擦拭乳房，然后每个患病乳区均匀喷上中药组合物，以整个乳区均匀喷满药液，无遗漏，无成滴滴下为准。每天两次。5d为一个疗程。Ⅲ组采用乳炎康乳头注射给药方式，每个患病乳区10mL/次，1d一次，3d为一个疗程。Ⅳ组空白对照组：乳区相同处理后喷75%乙醇。乳房炎判定标准采用CMT法，具体见表1，疗效实验结果见表2。

实施例1中药组合物治疗组治疗10头牛36个阳性乳区，治愈30个，有效32个，无效4个。治愈率83.3%，有效率88.9%。实施例2中药组合物治疗组治疗10头牛36个阳性乳区，治愈32个，有效35个，无效1个。治愈率88.9%，有效率97.2%。乳炎康组8头牛23个阳性乳区，治愈13个，有效19个，无效4个。治愈率56.5%，有效率82.6%。本发明的用于防治奶牛乳房炎的中药组合物对奶牛隐性乳房炎的治愈率比对照组高。空白对照组阳性乳区数基本无变化。

安全性实验

1 急性毒性试验

试验动物准备：试验前24 h，取试验动物，用理发推子在其背部作约相当于动物体表面积10%的去毛区约50 cm²。去毛区皮肤无损伤者留作完整皮肤试验；去毛区皮肤用针头作多处“井”字形划破，且只限于划破皮肤，不伤及皮下组织，以皮肤上有出血点为度，此种皮肤有损伤的动物留作损伤皮肤试验。

取豚鼠30只，分别作完整皮肤和损伤皮肤急性毒性试验。完整皮肤者15只、损伤皮肤者15只。每部份随机均分为本发明实施例2中药组合物高剂量组、实施例2中药组合物低剂量组、生理盐水对照组，每组5只。生理盐水对照组动物在其去毛区皮肤涂生理盐水1mL，组合物高、低剂量组动物在其去毛区皮肤按临床拟给药方式给予本发明中药组合物药液1mL，湿巾敷帖加不透气胶布完全包扎，保证药液留置，重复施药，保持湿巾被药液湿润。24 h内，共施药2次，高剂量组施药4次，次日撤除湿巾，洗去残留药液。连续观察洗除残药后1，24，48，72 h及第7日、14日动物的行为活动，体征，用药部位皮肤反应，体重，进食排泄，眼和粘膜变化，呼吸和中枢神经系统变化，四肢活动及其它的中毒表现，观察动物死亡情况和中毒器官的组织病理变化情况。实验结果见表3。

完整皮肤和损伤皮肤豚鼠，皮肤短期接触中药组合物，其一般情况、眼、粘膜等无任何改变，呼吸和中枢神经系统均无中毒表现，用药部位皮肤无任何反应，用药后7天内，全部豚鼠无一死亡。豚鼠体重增长正常，用药后与对照组比较见表12。由表12可见，本发明的中药组合物对完整皮肤和损伤皮肤豚鼠的体重均无明显影响（P＞0.05）。

2 皮肤主动过敏试验

取健康的豚鼠30只，按雄雌、体重随机分成3组，每组10只，第1组为阴性对照（溶剂）组，第2组为药物组（即本发明的实施例2中药组合物组），第3组为阳性对照组（1%的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液组），于给药前24 h将各组豚鼠背脊柱两侧的毛对称剪去，每侧各3 cm×3 cm，剩余少量短毛用8%硫化钠溶液脱去，再用温蒸馏水洗涤干净。24 h后于各组动物左侧脱毛区分别涂抹相应药液0.2 mL/只作致敏试验，为使受试药物与皮肤接触能达到有效停留时间，给药后用一层塑料纸和两层纱布覆盖固定，分笼饲养，持续6 h后解开，间隔7 d、14d同样重复给药1次，在第28天（即末次给药致敏14天后）激发给药，用上述同样方法将相应药液分别涂抹于各组动物背部右侧脱毛区，同法覆盖，固定6 h后即行观察，分别于24、48、72 h再次观察皮肤过敏反应情况，记录并按附表Ⅰ、附表Ⅱ评分，计算反应平均值和致敏发生率（以4次观察出现皮肤红斑、水肿或充血动物例数最多的一次计算），同时密切观察动物是否出现哮喘、站立不稳或休克等严重全身性过敏反应。实验结果见表4、表5。

3 刺激性试验

（1）家兔皮肤准备  

给药前24小时，将家兔背部脊柱两侧毛脱去，每侧脱毛面积为50cm²左右，去毛后24小时检查去毛皮肤是否因去毛而划破，如皮肤受伤，该家兔不宜用作完好皮肤的刺激性实验；用灭菌针尖将去毛消毒皮肤划破，见有渗血为度，该家兔用作破损皮肤的刺激性实验。

（2）给药方法及观察

1）一次给药的皮肤刺激试验实验  

分为完整皮肤组与破损皮肤组，每组4只家兔，雌雄各半。采用同体自身左右对比，左侧去毛区涂复方中药组合物1mL，右侧去毛区涂溶剂75%乙醇1mL作为对照，用纱布和胶布固定，6小时后拆除。给药24小时后，用温水去除残留受试物，去除受试物后1、24、48、72小时肉眼观察，记录涂抹处有无红斑和水肿等情况，按（附表Ⅲ）对皮肤刺激反应评分标准评判。

2）多次给药的皮肤刺激试验试验方法与观察  

仍按1次给药试验进行，但每天给药1次,连续1周，去除受试物后1、24、48、72小时肉眼观察，按以上对皮肤刺激反应评分标准及对皮肤刺激强度标准判断刺激强度（附表Ⅳ）。实验结果见表6、表7a、表7b。

药效实验

1试验方法

1.1对二甲苯所致的小鼠耳壳肿胀的炎性抑制作用　

取小鼠40只,随机分为4组，每组10只，阴性对照组(乙醇)、阳性对照组(云南白药气雾剂1. 4g·kg^-1)、高、低浓度给药（本发明实施例2中药组合物）。

给药方案为：耳壳涂抹给药2次/d，连续给药3d。给药组每次0.05mL，低浓度2次/d，高浓度组4次/d。

各组动物均于末次给药后1h于动物右耳壳涂抹二甲苯(100% )0. 05mL，左耳做对照。1h后8mm打孔器取双侧耳片，称重，计算双侧耳片重量之差(肿胀程度，单位mg)。以此为评价指标，计算肿胀抑制率。

1.2大鼠足趾肿胀试验

取大鼠40只，随机分为四组。给药高、低组，阴性对照，阳性对照。连续用药4d，第5d用药30min后，各组大鼠右后足趾皮内注射鲜鸡蛋清0.05mL/只。用游标卡尺测量注射鲜鸡蛋清前后0、1、2、3、4h足趾厚度。

1.3本发明的中药组合物对小鼠的镇痛试验

电恒温水浴温度控制在(55±0.5)℃，热板接触水面并预热10 min，选择合格雌性小白鼠(痛阈值>5s)40只，分为4组：本发明实施例2中药组合物高、低剂量组；麝香祛痛喷雾剂组(阳性对照)；溶剂(75%乙醇)对照组；每组10只，室温(25±0.5)℃。

高低剂量组分别在药液中浸泡10s，5s。溶剂对照组用等量75%乙醇作对照。给药前测各鼠2次痛阈值(痛阈值：小鼠放在热板上开始出现舔后足所需时间)，取其均值为正常痛阈值。各组动物在给药后30、60、90、120 min分别测各鼠1次痛阈值(超过60 s者以60 s计)。

2试验结果

2.1对二甲苯所致的小鼠耳壳肿胀的炎性抑制作用

从表8可以看出，相对于阴性对照组，高、低剂量组都对炎症有一定的抑制效果，但相对阳性对照来说，高剂量组的抑制率要比低剂量组高得多。

2.2大鼠足趾肿胀试验

注：与阴性对照组比较， ^a P＜0.05表示差异显著， ^b P＜0.01表示差异极显著。

从表9可以看出，相对于阴性对照组，中药组合物高低剂量组都对大鼠足趾的炎症有一定的抑制作用，在致炎后一个小时高剂量组的肿胀抑制程度已与阴性对照组有差异性，低剂量组没有差异。但在随后的三个小时高剂量组对肿胀的抑制程度已与阴性对照组差异显著，且比阳性对照和低剂量组的抑制效果好。

从表10可以看出，高剂量组对蛋清所致大鼠足趾炎症的抑制效果高于阳性对照组和低剂量组，低剂量组的抑制效果和阳性对照相当，尤其在致炎后3h，两者抑制率相同。

2.3本发明的中药组合物对小鼠的镇痛试验

注：小写字母表示同行比较，大写字母为同列比较。同列肩标相同者表示差异不显著（P＜0.05），不相同者表示差异显著（P＞0.05）；同行肩标相同者表示差异不显著（P＜0.05），不相同者表示差异显著（P＞0.05）

从表11可以看出，相对于应用热板法前，各试验组小鼠在热板法之后的痛阈值都差异显著。相对于阴性对照组，在给药后30min试验组小鼠痛阈值即出现差异，在给药后60min阳性对照和高剂量组之间差异不显著，和阴性对照组、低剂量组差异显著，且痛阈值明显升高。给药后90min阴性对照组和低剂量组差异显著。且相对于60min时痛阈值开始下降。在第120min各试验组与阴性对照组差异显著，试验组之间差异不显著。

Claims (3)

1.一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，其特征在于，由以下质量份的原料药组成：蒲公英15份、金银花10份、紫花地丁15份、当归10份、昆布8份、瓜蒌15份、黄芩10份、连翘10份、青皮7份。

2.根据权利要求1所述的一种用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物，其特征在于，还含有药学中常用的辅料或辅助性成分。

3.权利要求1所述用于防治奶牛隐性乳房炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 

1）取配方量的当归，水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，当归水提液留置待用；

2）取配方量的金银花，用乙醇提取，浓缩至生药浓度为0.4~0.6g/ml，得到浓缩液A；

3）按配方量取剩余的原料药，加入步骤1）得到的当归水提液，水提醇沉法提取，浓缩至生药浓度为0.4～0.6g/ml，得到浓缩液B；

4）将当归挥发油、浓缩液A、浓缩液B混合，加冰片适量，混合均匀，灌装于容器中即得。