CN102292430A

CN102292430A - 单胃动物饲料

Info

Publication number: CN102292430A
Application number: CN2009801475715A
Authority: CN
Inventors: 罗德淳; 方惠玲
Original assignee: Universiti Putra Malaysia (UPM)
Current assignee: Universiti Putra Malaysia (UPM)
Priority date: 2009-04-09
Filing date: 2009-04-09
Publication date: 2011-12-21
Anticipated expiration: 2029-04-09
Also published as: US9271518B2; CN102292430B; AU2009344224B2; US20130243908A1; US20120034199A1; AU2009344224A1; WO2010117255A1; EP2417245A1; BRPI0918470A2

Abstract

本发明涉及从一种以上乳酸菌株中获取的改进的饲料添加剂或食物补充剂配方。所述饲料添加剂或食品补充剂用于饲养禽鸟、家禽等单胃动物。此外，该饲料可以为单胃动物提供更高的生长率和饲料利用率，而且，动物饲料还可以用于控制动物的食物摄入量。

Description

单胃动物饲料

技术领域

本发明涉及一种微生物饲料添加剂，其用于家禽、猪和火鸡等单胃动物饲料中，尤其涉及一种由微生物(优选乳酸菌)生产的动物饲料。

背景技术

近年来，有人提出使用各种饲料添加剂来实现家畜快速生长。在此方面，抗生素添加剂最引人注目。生长促进抗生素是这些饲料添加剂中最常见的一种，主要是对动物生长和饲料转化率提高具有积极影响，并能降低某些疾病的发病率。然而，广泛使用抗生素可能会导致动物对一些致病菌种产生耐药性(Mikkelsen和Jensen，2000年)。这些添加剂已经获得了相对较好的效果。最新调查表明，这类添加剂会导致家畜体内产生抗性菌株，而且抗生素物质会少量转移到人体内。研究还发现，接触这种饲料的人可能会存在过敏反应的风险。在现代畜牧业中，人们已经探索了各种方法来改善动物的健康状况，促进动物的生长。这些方法包括加强畜牧管理，加强营养及提高饲料添加剂的利用率。常用的饲料添加剂有抗生素、益生菌、酶和有机酸(Bernardeau等人，2002年)。同样地，属于同一类药物的治疗性抗生素可能会产生交叉耐药性，特别是那些和人类抗菌疗法具有密切关系的药物。近年来，人们已提出采用各种饲料添加剂来实现家畜的快速生长，并且在此方面，抗生素添加剂最引人注目。目前发现，使用根据本发明的饲料添加剂，可以消除上述缺点，并且在畜牧生产方面能获得至少和使用抗生素饲料添加剂同样的效果。因而，本发明可以获得理想的效果，同时消除原有的缺陷。

一些国家已经开始限制或禁止使用抗生素作为生长促进剂，这使得人们关注可能的替代品(Wierup，2000年)。在过去几年里，研究主要集中于一些有价值的乳酸菌株(LAB)以及其作为益生菌剂的潜在用途。益生菌被认为是可用的微生物制剂，它们可以通过保持肠道内的自然微生物群落来促进哺乳动物的健康。益生菌附着在肠粘膜上，并在肠道内繁殖，从而防止有害微生物附着在肠道上。益生菌起作用的先决条件在于它们要以适当可行的方式到达肠粘膜，而且不会受胃内pH值低的影响而遭到破坏。特别是，猫和狗的消化道生理机能不同于人体消化道。例如，狗和猫胃内的平均pH值分别为3.4和4.2。作为益生菌的乳酸菌经常用作添加剂来替代抗生素。乳酸菌广泛用作肉和肉类产品的起子培养物，在通过细菌素等代谢物生产来确保不同食品的安全性等方面具有重要作用。细菌素为具有抗菌性能，并能抑制多种不同细菌菌种，尤其是致病菌(De Vuyst和Vandamme，1994年)的蛋白质化合物。由于这些化合物是由对人体健康有益的细菌生产并且经常用作天然食品防腐剂，因而广受关注。现已证实，使用细菌素能影响胃肠道内的细菌生态环境，并能降低胃肠道内不同部位的致病菌水平(van Winsen等人，2001年)。Gaenzale等人于1999年证实由抑制大肠杆菌和利斯塔氏菌的弯曲乳杆菌生产的细菌素curvacin能在胃内接种，同时证实了由乳酸乳球菌亚菌生产的细菌素具有抗菌性能(Mishra和Lambert，1996年)。美国专利号5,968,569的专利公开了用于宠物食品谷物中的益生菌微生物的包含物，但是该专利和其他现有技术都没有提供专门针对宠物健康的菌株信息。因此，有必要提供一种新型的特别适合于宠物的细菌菌株，因其具有有益于动物健康的高益生素性能而被选择加入到宠物食品成分中。

据先前了解，借助于乳酸菌，人们可以将脱脂牛奶、白脱牛奶和乳清用作动物饲料。产品中还包括乳酸、维生素、糖和其它碳水化合物，但是不含可存活的微生物。本发明涉及一种促生长饲料添加剂，其包含由乳杆菌(Lactobacillus sp)生产的天然来源的代谢物，本发明还涉及由乳杆菌获得的有效量代谢物的应用，并提供了作为饲料添加剂的最有效代谢物的最佳用量，以提高生长性能及家禽整体健康水平。该动物饲料添加剂与营养物质相结合得到一种动物饲料。对动物的科学控制实验表明，由于动物产品的质量和价值都有所提高，以掺有本发明添加剂的动物饲料喂养动物，所获得的经济效益也有所提高。

发明内容

本发明的一个优选实施例涉及一种益生菌菌株的生物纯化培养物，其中该菌株是选自包含植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)群的乳酸菌(优选RI11、RG14、RS5和RG11菌株)。据说乳酸菌能够产生含有细菌素的代谢物。本发明公开了一种可作为添加剂和/或补充剂添加到动物饲料中的代谢物。所述动物饲料包括有效量占其干重0.1％至0.5％的代谢物。

因此，该动物饲料包括营养物质、细菌素、维生素(优选维生素B)、有机酸(最好是甲酸、乙酸和乳酸)和/或其组合物。此外，该动物饲料包括细菌素和有机酸的组合物，或者细菌素、维生素B和有机酸的组合物。用于该动物专用饲料的细菌素比例优选为介于0.05％到0.8％之间。

而且，本发明涉及一种动物饲料配方，其包括含玉米、粕、米糠、小麦细糠、糖浆、棕桐油、椰子油原油、石灰石、单磷酸二钙、磷酸氢钙、盐、赖氨酸、氯化胆碱、维生素、矿物质、苏氨酸、防霉化合物、硫酸铜、DL-蛋氨酸和抗氧化剂。

优选地，该玉米为黄玉米；粕包括豆粕和椰子粕；采用的棕榈油包括精炼棕榈油和棕榈油原油。此外，该配方还包括选自黄玉米、豆粕、椰子粕、米糠、糖浆、椰子油原油、石灰石、盐、赖氨酸、氯化胆碱、维生素、矿物质、苏氨酸、防霉化合物、硫酸铜、DL-蛋氨酸和抗氧化剂的任意组合物。

特别是，该动物饲料配方进一步包括与维生素B和有机酸相结合的细菌素等代谢物。建议所述代谢物加入量在总动物饲料配重中占0.5-8kg。

更特别地是，所述动物饲料配方提供了一种将总体饲料摄入量增加3％至10％的方法，该配方使动物增长率增加5％至7％。相应地，该动物饲料配方可使饲料转化率提高3％至8％。

本发明优选实施例涉及一种动物饲料配方，该配方具有降低单胃动物或者反刍动物体内的粪便肠道杆菌数量，并增加其粪便乳酸菌数量的能力。相应的，该配方还具有降低单胃动物或者反刍动物体内血浆和肉胆固醇，以及增加其体内小肠绒毛高度的能力。

相应地，本发明涉及一种用于促进单胃动物或者反刍动物生长和/或提高其体内饲料转化率的工艺，其中，该工艺包括给动物喂食有效量的混有维生素B和有机酸的细菌素。

本发明的另一个实施例涉及一种动物饲料，其包含由植物乳杆菌(优选RI11、RG14、RS5和RG11菌株)生产的代谢物。

同时，本发明的另一个实施例涉及单胃动物(特别是禽鸟、兔子、水貂、灰鼠、狗、啮齿动物、猪、牛犊或羊羔)饲料的使用。

附图说明

附图构成说明书的一部分，并且包括本发明的范例或优选实施例，可以用多种形式来表现。然而，应该理解的是，所公开的优选实施例仅仅是本发明的范例。因此，以下公开的附图并非用于限制权利要求书，而仅仅是作为权利要求书的基础，用于指导本领域的技术人员。

附图1表示菌株RG14、RG11、RI11和RS5和基因库登记号分别为D9210、EF536363、NC004567和AB11208四个可用序列的16S rDNA部分序列比对。

附图2是选自植物乳杆菌菌株的细菌素结构基因的放大图。A)基因植物乳杆菌素EF(-450碱基对)放大图；B)基因植物乳杆菌素W(-200碱基对)放大图。

具体实施方式

本发明优选实施例的详细说明如下。然而，应该理解的是，所公开的优选实施例仅仅是本发明的范例，可以通过多种形式体现。因此，以下公开的内容并非用于限制权利要求书，而仅仅是作为权利要求书的基础，用于指导本领域的技术人员。

本发明的一个优选实施例提供了改善动物养殖的方法，特别是提高家畜的产肉量，如家禽。提供饲料策略的方法可以改善如下方面：生长性能、胴体成分、外观和整体动物健康。例如，本发明方法对如下任意一方面或其组合具有改善作用：动物产品外观(包括生长性能、粪便微生物群落、挥发性脂肪酸和小肠绒毛高度)、血浆胆固醇以及饮食营养物质的使用。

本发明的目的还涉及乳酸杆菌生产的代谢物在肉用仔鸡的生长性能、粪便微生物数量、小肠绒毛高度和粪便挥发性脂肪酸(VFA)方面所起的作用。

本发明的另一个目的是提供一种手段，用于识别作为单胃动物饲料添加剂或补充剂的乳杆菌代谢物的最佳组合物。相应地，在单胃动物饲料中动物饲料添加剂或补充剂中代谢物组合物应优选最佳用量。

本发明还提供了一种使代谢物具有益生菌特性的手段，能提高动物的整体健康状况，这也是本发明的另一个目的。动物饲料添加剂能帮助动物进一步消化食物。相应地，该动物饲料具有能降低动物肥料的臭味，以及为农田提供一种优质的肥料的优点。

最佳实施例

对于给出的一系列数值，除非本发明另有明确规定，则至下限单元的十分之一处，每个处于该范围上限及下限之间的中间值，以及该范围内的其他所述值或中间值，都应涵盖在本发明之内。那些小范围的上下限值可以单独地包括在小范围之中，同时也包含在本发明之中，隶属于本发明指定排除的上下限。当规定的范围包括上下限之一或者上下限都包括时，在本发明中，排除一个或者两个上下限的范围仍然包含在本发明中。

除非另有规定，本发明提到的技术和科技术语都指本发明所属技术领域的技术人员所公知的含义。尽管任何和本发明相似或相同的方法和材料都可以用于实施或者试验，下面将描述优选的方法和原料。应引用本文提及的所有出版物，以公开并描述与所引用的出版物有关的方法和/或材料。必须指出的是，当单数形式a、an、the在文中或者附加权利要求中使用时，除非本发明明确指出，否则这些单数形式均可指代复数意义。

人们大量饲养猪、家禽、小牛和鱼类等单胃动物来生产肉、鱼和蛋，给这些动物喂食含有各种动物和/或植物原料的饲料，从而为人类提供能量和蛋白质。所用的饲料大多是商业化生产，但也有相当一部分在农场生产，并直接喂给动物。这些饲料通常补充有维生素和矿物质，从而满足动物的营养需求。

本发明提供了用作家禽饲料添加剂或生长促进剂的新型代谢物，其具有益生菌特性，特别提供了一种包含有效量乳杆菌代谢物的天然来源的动物饲料添加剂。此外，本发明涉及一种植物乳杆菌RS5、R11、RG14和RG11(Comb 3456)的生物纯化培养物或者由微生物获得的该生物纯化培养物的突变体。该微生物保藏在国家基因工程和生物技术中心培养物收藏中心(BCC)、泰国(国家科学技术发展机构成员之一)基因工程和生物技术中心的中央研究室，也可以从马来西亚普特拉大学生物加工技术院生物加工技术系获得。优选地，乳杆菌RS5、R11、RG14和RG11的生物纯化培养物或者其突变体能够用来生产有效量的代谢物，将其用于动物饲料中。

优选地，该动物饲料添加剂包括至少约占其干重0.2％(w/v)的代谢物组合物。这种动物饲料添加剂可与营养物质结合，从而形成一种动物饲料，这是本发明的另一个方面。本发明进一步包括使用该动物饲料喂养动物的方法。本发明主题提供了一种改善家禽健康状况的方法。在具体实施例中，本发明提供了用于加速和/或增加家禽生长、提高家禽的免疫力和整体健康状况的方法。为实现上述目标，本发明针对家禽提供了使用乳杆菌代谢物的原料和方法。该乳杆菌代谢物是从马来西亚食物中分离得到的。

用由植物乳杆菌生产的四种代谢物组合物来研究肉用仔鸡的性能。将432只雄性肉仔鸡在厚褥草鸡舍中(每圏养12只鸡)从1日龄饲养到42日龄。这些鸡被分成6组，并喂食不同的饲料：(一)标准的玉米、大豆基础饲料(阴性对照组)；(二)标准玉米、大豆基础饲料加上新霉素和土霉素(阳性对照组)；(三)标准玉米、大豆基础饲料加上0.3％的植物乳杆菌RS5、RI11、RG14和RG11菌株的代谢物组合物(com3456)；(四)标准玉米、大豆基础饲料加上0.3％的植物乳杆菌TL1、RG11和RG11菌株的代谢物组合物(Com246)；(五)标准玉米、大豆基础饲料加上0.3％的植物乳杆菌TL1、RG14和RG11菌株的代谢物组合物(Com256)；(六)标准玉米、大豆基础饲料加上0.3％的植物乳杆菌TL1、RS5、RG14和RG11菌株的代谢物组合物(Com2356)。研究发现，四个治疗组的最终体重、增重和平均日增重明显增加，饲料转化率明显降低(P＜0.05)。代谢物组合物补充剂增加了粪便乳酸菌数量、小肠绒毛高度和粪便挥发性脂肪酸，同时降低了胆固醇和粪便肠杆菌数量。对采用不同的植物乳杆菌RS5、RI11、RG14和RG11菌株(Com3456)的代谢物组合物对肉用仔鸡产生的效果也进行了研究。504只雄性公鸡被分成7个治疗组，并用不同的饲料喂养：(一)标准玉米、大豆基础饲料(阴性对照组)；(二)标准玉米、大豆基础饲料加上100ppm的新霉素和土霉素(阳性对照组)；(三)标准玉米、大豆基础饲料加上0.1％的植物乳杆菌RS5、RI11、RG14和RG11菌株的代谢物组合物(Com3456)；(四)标准玉米、大豆基础饲料加上0.2％的Com3456；(五)标准玉米、大豆基础饲料加上0.3％的Com3456；(六)标准玉米、大豆基础饲料加上0.4％的Com3456；(七)标准玉米、大豆基础饲料加上0.5％的Com3456。不同剂量的Com3456补充剂改善了生长性能，降低了肠杆菌数量，增加了乳酸菌数量、小肠绒毛高度以及粪便挥发性脂肪酸的浓度。0.4％和0.2％的Com3456的治疗组具有最好的效果，特别是和其他剂量相比，对生长性能、饲料转化率和绒毛高度效果更佳。然而，由于0.2％剂量与0.4％剂量的效果类似，但0.2％剂量的浓度更低，因此推荐使用0.2％的剂量。这些结果显示，代谢物组合物取代抗菌素生长促进剂应用于肉仔鸡饮食中时，0.2％为最佳剂量。

实施例

肉仔鸡和实验设计

将来自当地公司的432只雄性肉仔鸡在厚褥草鸡舍中从1日龄饲养到42日龄。每个圈包括12只，并且随意分配到带有木刨花屑的敞开房间中。到达后，人工给这些肉仔鸡接种抗鸡感染性支气管炎疫苗(IB)以及抗新城病疫苗(ND)(美国IB-DN Fort Dodge生产)。在饲养到14日龄的时候，给鸡接种抗传染性囊病IBD疫苗(马来西亚MyVac，UPM93生产)。接种疫苗后，将鸡翅膀绑起来以检测个体体重，水和饲料自由供应。开始时饲料和结束时饲料分别用于喂食0-21日龄和22-42日龄的肉仔鸡。饮食治疗包括：(一)无抗生素的玉米、大豆基础饲料(-ve对照组)，(二)含有100ppm新霉素和土霉素的基础饲料(+ve对照组)，(三)补充有0.1％的植物乳杆菌RS5、RI11、RG14和RG11菌株(Com3456)代谢物组合物的基础饲料，(四)补充有0.2％的Com3456代谢物组合物的基础饲料，(五)补充有0.3％的Com3456代谢物组合物的基础饲料，(六)补充有0.4％的Com3456代谢物组合物的基础饲料，(七)补充有0.5％的Com3456代谢物组合物的基础饲料。这些饲料按规划能够满足肉仔鸡对全部营养物质的需求。开始时饲料和结束时饲料的百分比组成分别如表1和表2所示：

表1：开始时饲料的百分比组成

¹Com3456是4种菌株RS5、RI11、RG11和RG14的组合物，Com246是菌株TL1、RI11和RG11的组合物，Com256是菌株TL1、RI14和RG11的组合物，Com2456是菌株TL1、RI11、RG14和RG11的组合物。

²每公斤饲料中所提供的矿物混合物包括：100毫克铁、110毫克锰、20毫克铜、100毫克锌、2毫克碘、0.2毫克硒、0.6毫克钴。

³每公斤饲料中所提供的维生素混合物包括：6667IU维生素A、1000IU维生素D、23IU维生素E、1.33毫克维生素K3、0.03毫克钴胺素、0.83毫克硫胺素、2毫克核黄素、0.33毫克叶酸、0.03毫克生物素、3.75毫克泛酸、23.3毫克尼克酸、1.33毫克吡哆醇。

⁴土霉素和新霉素组合物浓度为100ppm(w/w)。

表2：结束时饲料的百分比组成

²每公斤饲料所提供的矿物混合物包括：100毫克铁、110毫克锰、20毫克铜、100毫克锌、2毫克碘、0.2毫克硒、0.6毫克钴。

³每公斤饲料所提供的维生素混合物包括：6667IU维生素A、1000IU维生素D、23IU维生素E、1.33毫克维生素K3、0.03毫克钴胺素、0.83毫克硫胺素、2毫克核黄素、0.33毫克叶酸、0.03毫克生物素、3.75毫克泛酸、23.3毫克尼克酸、1.33毫克吡哆醇。

⁴土霉素和新霉素组合物浓度为100ppm(w/w)。

数据和样品采集

每周对个体体重(BW)和圈饲料摄入量(FI)进行记录，并且对增重量(WG)、饲料转化率(FCR)和平均日增重(ADG)进行计算。饲养6周后，随机公平地从每个治疗组中挑选12只鸡，并进行屠宰用于采样，粪便和小肠用来作进一步分析。上述过程已获得了马来西亚普特拉大学研究咨询委员会的批准。

生长性能

生长性能见表3。在所有治疗组中，-ve对照组中的42日龄肉仔鸡的个体体重、总增重量和平均日增重为最低(P＜0.05)。补充有由4种植物乳杆菌菌株组成的0.4％的Com3456治疗组中肉仔鸡在6周龄时具有最高的(P＜0.05)个体体重、增重量和平均日增重，其次是+ve对照组，位居第三位的是补充有0.2％的Com3456治疗组。然而，+ve对照组和补充有Com3456治疗组的肉仔鸡在个体体重和增重量方面没有明显的差别(P＞0.05)，除了补充有0.5％的Com3456治疗组，该组的结果是所有治疗组中最低的。这些治疗组的饲料摄入量平均值没有显著差异(P＞0.05)。补充有0.4％的Com3456治疗组相较于其他治疗组的饲料转化率(FCR)最低(P＜0.05)。数据表明，+ve对照组和补充有不同剂量的Com3456的5个治疗组在个体体重、总增重和平均增重方面超过-ve对照组中用玉米、大豆基础饲料喂养的肉仔鸡。不同剂量水平的四种植物乳杆菌(Com3456)的代谢物组合物能够部分取代抗生素促生长剂。依据生长性能，其最佳剂量为0.4％的Com3456，此时生长性能最佳，其次为0.2％的Com3456。相较于-ve对照组，依据性能改进百分比，补充有不同剂量代谢物组合物的肉仔鸡在6周时，体重比-ve对照组的肉仔鸡高4-12％。

这些代谢物组合物具有抗菌效果，能用作抗生素促生长剂(AGP)的潜在替代品。抗生素具有抑菌和杀菌效果，因此能够抑制和杀灭存在于肠道微生物群落的致病菌，其主要作用在于提高生长率。抗生素促生长剂的抗菌活性已在无菌动物身上得到证实。

表3：补充有不同代谢物组合物的治疗组6周时的生长性能

^a，b平均值±SEM行中具有相同上标的不存在明显差异。

粪便乳酸菌和肠杆菌(ENT)数量

粪便乳酸菌和肠杆菌菌群通过Foo等人(2003b)描述的方法来检测。在无菌蛋白胨水中稀释10％(w/v)的粪便样本，在室温下放置一个小时，然后进一步连续稀释至10倍量(v/v)。对MRS-琼脂(乳酸杆菌琼脂培养基，ROGOSA和SHAPE)(达姆施塔特，默克公司生产)进行乳酸菌计数。将盘放在30℃的厌氧罐中温育48小时。分散肠杆菌并根据EMB-琼脂(曙红亚甲基兰琼脂乳糖蔗糖琼脂)(达姆施塔特，默克公司生产)进行计数，随后在37℃环境中有氧温育24小时。菌落形成单位的数量用logCFU/g来表示。对所有样本重复三次上述操作。粪便乳酸菌和肠杆菌数量如表4所示。-ve对照组的粪便乳酸菌数量最低(p＜0.05)，而在其他治疗组则没有发现明显差异。6周时的肠杆菌数量在-ve对照组和+ve对照组的肉仔鸡体内最高(p＜0.05)。相较而言，对于补充有0.2％Com3456和0.5％Com3456的治疗组，肠杆菌数量最低(p＜0.05)。对于补充有0.1％Com3456、0.3％Com3456和0.4％Com3456的治疗组，其肠杆菌数量也明显低于(p＜0.05)-ve对照组和+ve对照组。

数据显示了代谢物组合物对于降低胃肠肠杆菌数量的效果。此外，代谢物组合物增加了胃肠乳酸菌的数量。虽然增加的程度有所不同，但是代谢物组合物的所有剂量水平均能够增加胃肠乳酸菌的数量。所有补充有Com3456的治疗组对降低肠杆菌数量都有积极效果。代谢物组合物能降低胃肠肠杆菌，使得乳酸菌可以更好地通过菌群排斥来增加其在小肠微生物群落的菌群数量。

表4：补充有不同代谢物组合物的治疗组中粪便乳酸菌和肠杆菌以及挥发性脂肪酸数量

^a-cMeans±SEM行中具有相同上标的不存在明显差异。

¹Com3456是菌株RS5、RI11、RG11和RG14的组合物，Com246是菌株TL1、RI11和RG11的组合物，Com256是菌株TL1、RI14和RG11的组合物，Com2456是菌株TL1、RI11、RG14和RG11的组合物。

小肠形态

该过程是一种由Hair-Bejo(1990年)提出的改进方法。从十二指肠、空肠和回肠中按照如下方式移除5-6厘米长的片段：(1)十二指肠袢的中间部分；(2)位于十二指肠袢端点和梅克尔憩室之间的中段；以及(3)梅克尔憩室和回肠盲肠交界处(回肠)之间的中段。将肠段用10％的中性缓冲福尔马林溶液冲洗，用于之后的形态分析。进行形态分析时，将肠段在10％的中性缓冲福尔马林溶液中固定一夜，切除肠样本，在组织处理机(日本，徕卡公司生产)中脱水，以及镶嵌在石蜡中。从每份样本中切除4微米的切片，固定在载玻片上，然后用苏木精和曙红着色，将载玻片安装在显微镜下进行观测。形态变化观测包括：小肠绒毛高度(从绒毛顶端到绒毛隐窝连接处的高度)，以及隐窝深度(定义为相邻的绒毛内陷的深度)。绒毛高度和隐窝深度利用图像分析仪进行测定。这些值是最好的20根绒毛的平均值，每个载玻片的隐窝都进行了测定。

挥发性脂肪酸(VFA)的测定

粪便中的挥发性脂肪酸浓度通过Jin等人(1998年)的改进方法进行测定。从每份样本中称量1克粪便样本(在-20℃下保存)放入采样管中。1毫升24％的偏磷酸在1.5M硫酸(英国普尔BHD实验室生产)中稀释，然后加入采样管中。将混合物在室温下放置一夜，并且在4℃下以10,000转/分的速度离心20分钟，将收集的上清液保存在2毫升的螺旋帽样品瓶(美国肯堡玻璃有限公司生产)中。将内标准20mM的4-甲基戊酸(美国密苏里州圣路易斯Sigma公司生产)加入上清液中，在组合物中达到10mM，以及在-20℃下保存直到气液色谱(GLC)分析。用Quadrex007系列(美国康涅狄格州06525纽黑文市Quadrex公司生产)键合项熔融石英毛细管柱(15m，0.32mm编号，膜厚0.25微米)将挥发性脂肪酸在安装有火焰粒子探测器的6890N(宾夕法尼亚州阿冯达尔惠普公司生产)中进行分离。纯化氮被用作载体气体，气流速度为60毫升/分钟。注射器和检测器的温度为230℃，柱温恒定地设定为200℃。20mM乙酸和来自西格玛(美国密苏里州圣路易斯西格玛化学有限公司)的10mM丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸的商业标准被用作识别峰值的外部标准。表5中提及了粪便挥发性脂肪酸。挥发性脂肪酸主要是乙酸，其次为浓度较低的丙酸和丁酸。补充有0.4％和0.3％Com3456的治疗组具有最高的(p＜0.05)乙酸和整体挥发性脂肪酸水平。相比之下，-ve对照组的鸡水平最低(p＜0.05)。然而，在其他治疗组中，乙酸和总体挥发性脂肪酸浓度不存在明显差异(p＞0.05)。在全部治疗组中，丙酸和其他挥发性酸浓度没有明显差别(p＞0.05)。在补充有0.1％的Com3456的肉仔鸡饲料中，其酪酸水平和补充有0.3％、0.4％和0.5％Com3456的治疗组有明显差异(p＜0.05)。然而其他六个治疗组不存在明显差异(p＞0.05)。代谢物组合物的补充提高了粪便挥发性脂肪酸的水平。通过混有一定剂量的Com3456，挥发性脂肪酸含量有所提高，尤其是在第3周时补充有0.3％和0.5％的Com3456以及在第6周时补充有0.4％Com3456。挥发性脂肪酸含量在接受治疗的肉仔鸡体内有所提高的一个主要原因在于，增加了乳酸菌在补充有代谢物组合物的治疗组中的含量，乳酸菌和其他体内微生物将各种基材如乳糖、生物胺和其他过敏性物质发酵成短链脂肪酸以及其它有机酸和气体(Gibson和Fuller，2000年)。

表5：补充有不同代谢物组合物的治疗组的小肠内绒毛高度和隐窝深度

^a，b平均值±SEM行中具有相同上标的不存在明显差异。

¹Com3456是菌株RS5、RI11、RG11和RG14的组合物；Com246是菌株TL1、RI11和RG11的组合物；Com256是菌株TL1、RI14和RG11的组合物；Com2456是菌株TL1、RI11、RG14和RG11的组合物。

数据分析

采用统计分析系统(SAS，1998年)的一般线性模型程序对完整的随机设计数据进行分析。邓肯多范围试验被用来比较这些治疗手段。数据以平均值±标准均值误差(SEM)的形式提交。试点单位将饲养有肉仔鸡的鸡舍作为实验对象。统计模型如下：

Yijk＝μ+τi+εij+δijk

μ＝平均效应

τi＝第i组的治疗效果

εij＝随机误差

δijk＝抽样误差

Claims

1.一种益生菌菌种生物纯化培养物，其中该菌株是选自包含植物乳杆菌群的乳酸菌。

2.根据权利要求1所述的生物纯化培养物，其中植物乳杆菌包括RI11、RG14、RS5和RG11菌株。

3.根据权利要求1所述的生物纯化培养物，所述乳酸菌的乳酸能够生成代谢物。

4.根据权利要求3所述的生物纯化培养物，其中所述代谢物包括细菌素。

5.根据权利要求3所述的生物纯化培养物，其中所述代谢物作为添加剂和/或补充剂添加到动物饲料中。

6.根据权利要求5所述的生物纯化培养物，其中所述动物饲料包括有效量占其干重0.1％至0.5％的代谢物。

7.根据权利要求6所述的动物饲料，其中动物饲料包括：

a)营养物质；

b)细菌素；

c)维生素；

d)有机酸；

或者其组合物。

8.根据权利要求7(c)所述的动物饲料，其中所述维生素为维生素B。

9.根据权利要求7(d)所述的动物饲料，其中，所述有机酸包括甲酸、乙酸和乳酸。

10.根据权利要求7所述的动物饲料，其中所述动物饲料包括细菌素、维生素和有机酸的组合物。

11.根据权利要求7所述的动物饲料，其中所述动物饲料包括细菌素和有机酸的组合物。

12.根据权利要求11所述的动物饲料，其中所述细菌素介于0.05％到0.8％之间。

13.一种动物饲料配方，其中，所述配方包括玉米、粕、米糠、小麦细糠、糖浆、棕榈油、椰子油原油、石灰石、单磷酸二钙、磷酸氢钙、食盐、赖氨酸、氯化胆碱、维生素、矿物质、苏氨酸、防霉化合物、硫酸铜、DL-蛋氨酸、抗氧化剂。

14.根据权利要求13所述的动物饲料配方，其中所述玉米为黄玉米；所述粕为豆粕和椰子粕；所述棕榈油为精炼棕榈油和棕榈油原油。

15.根据权利要求13所述的动物饲料配方，其中所述配方进一步包括选自黄玉米、豆粕、椰子粕、米糠、糖浆、椰子油原油、石灰石、食盐、赖氨酸、氯化胆碱、维生素、矿物质、苏氨酸、防霉化合物、硫酸铜、DL-蛋氨酸和抗氧化剂的任意组合物。

16.根据权利要求13-15所述的动物饲料配方，其中所述动物饲料进一步包括代谢物，如细菌素、维生素B及有机酸的组合物。

17.根据权利要求16所述的动物饲料配方，其中所述代谢物加入量在总动物饲料配额中占0.5-8kg。

18.根据权利要求13所述的动物饲料配方，其中所述动物饲料可以将整体饲料摄入量提高3％到10％。

19.根据权利要求13所述的动物饲料配方，其中所述动物饲料可以将动物生长率提高5％-7％。

20.根据权利要求13所述的动物饲料配方，其中所述动物饲料转化率在3％-8％之间。

21.根据权利要求13所述的动物饲料配方，其中该配方具有降低单胃动物或者反刍动物体内的粪便肠道杆菌数量，并增加其粪便乳酸菌数量的能力。

22.根据权利要求13所述的动物饲料配方，其中所述配方具有降低单胃动物或者反刍动物体内血浆和肉胆固醇的能力。

23.根据权利要求13所述的动物饲料配方，其中所述配方具有增加单胃动物或者反刍动物体内小肠绒毛高度的能力。

24.一种用于促进单胃动物或者反刍动物生长和/或提高其体内饲料转化率的方法，其中所述方法包括给动物喂食有效量的细菌素，该细菌素混有权利要求1-23任意一条所定义的维生素B和有机酸。

25.根据权利要求1-24任意一项所述的动物饲料，其包含采用植物乳杆菌所生产的代谢物。

26.根据前述权利要求1-25任意一项所述的动物饲料的应用，其中所述动物饲料用于单胃动物。

27.根据权利要求26所述的应用，其中所述单胃动物为禽鸟。

28.根据权利要求26所述的应用，其中所述单胃动物为兔子、水貂、灰鼠、狗、啮齿动物、猪、牛犊或羊羔。