CN102260643B - 一种酚类物质抗性的重组克雷伯氏肺炎杆菌及其制备方法和应用 - Google Patents
一种酚类物质抗性的重组克雷伯氏肺炎杆菌及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种重组克雷伯氏肺炎杆菌及其制备方法和应用，该重组克雷伯氏肺炎杆菌中含有可以功能性表达的漆酶基因,所述的漆酶基因为细菌来源的漆酶基因。该重组克雷伯氏肺炎杆菌在其利用木质纤维素原料水解液进行2,3-丁二醇等化学品的生产时，其表达的漆酶蛋白能够氧化所述水解液中的酚类物质，即该重组菌具有一定的抗酚类物质的抗性，降低了酚类物质对其生产的抑制作用，提高了其利用木质纤维素原料进行生产化学物质的能力。
Description
技术领域
本发明属于基因工程领域，涉及一种酚类物质抗性的重组克雷伯氏肺炎杆菌及其制备方法和应用。
背景技术
克雷伯氏肺炎杆菌(K.pneumoniae)是一种革兰氏阴性细菌，是克雷伯氏菌属的模式种，属于肠杆菌科。克雷伯氏肺炎杆菌是自然界中分布广泛性仅次于大肠杆菌的一种细菌。克雷伯氏肺炎杆菌目前主要作为2，3-丁二醇和1，3-丙二醇等化学品的生产用菌，同时克雷伯氏肺炎杆菌可以代谢合成3-羟基丙醛、乙醇、乙偶姻、琥珀酸、乙酸、乳酸、氢气等化学品，克雷伯氏肺炎杆菌还可以作为宿主细胞构建3-羟基丙酸等化合物生产菌。
其中，2，3-丁二醇是重要的化工或医药中间体原料。例如，DL构型的2，3-丁二醇具有很低的熔点(-60℃)，可以作为良好的防冻剂；2，3-丁二醇的脱水产物1，3-丁二烯是合成橡胶的重要原料；2，3-丁二醇具有较高的燃烧热(2718J/g)并且具有较高的辛烷值，使其成为一种环境友好的燃料添加剂；另外2，3-丁二醇还应用于药物合成等领域。
克雷伯氏肺炎杆菌可以利用葡萄糖等多种碳源发酵生产2，3-丁二醇，使用葡萄糖可以生产高达150g/L的2，3-丁二醇，生产强度达到4.21g/L.h(Ma，C.，et al.，Enhanced 2，3-butanediol production by Klebsiella pneumoniae SDM.Applied Microbiology and Biotechnology，2009.82(1)：p.49-57)。特别是，克雷伯氏肺炎杆菌可以利用纤维素和半纤维素水解产物的几乎所有营养成分来合成2，3-丁二醇，包括葡萄糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、纤维二糖和木二糖等寡糖以及糖醛酸和乙酸等(Yu，E.and J.Saddler，Biomass conversion tobutanediol by simultaneous saccharification and fermentation.Trends in Biotechnology，1985.3(4)：p.100-104.)。
由于克雷伯氏肺炎杆菌不具有纤维素酶水解酶，因此，含有纤维素和半纤维素的生物质原料(例如木质纤维素原料)都需要进行预处理并水解成简单糖类才能被K.pneumoniae利用。例如，木材水解液、秸秆水解液都能用于2，3-丁二醇的生产。
克雷伯氏肺炎杆菌利用一种木材水解液为原料发酵生产2，3-丁二醇的水平为13.3g/L，0.28g/L.h(Grover，B.，S.Garg，and J.Verma，Production of 2，3-butanediol from woodhydrolysate by Klebsiella pneumoniae.World Journal of Microbiology and Biotechnology，1990.6(3)：p.328-332.)。克雷伯氏肺炎杆菌利用一种松水解液为原料发酵生产2，3-丁二醇的水平为7.8g/L，0.11g/L.h(Tran，A.and R.Chambers，Lignin and extractives derived inhibitors in the 2，3-butanediol fermentation of mannose-rich prehydrolysates.Applied Microbiology and Biotechnology，1986.23(3)：p.191-197.)。可以看出，克雷伯氏肺炎杆菌利用木质纤维素原料生产2，3-丁二醇的发酵水平很低。
经过研究发现，导致克雷伯氏肺炎杆菌对木质纤维素原料水解产物的利用能力很低的一个重要原因是木质纤维素原料水解产物中所含酚类物质对克雷伯氏肺炎杆菌有很强的抑制作用(Tran，A.and R.Chambers，Lignin and extractives derived inhibitors in the 2，3-butanediol fermentation of mannose-rich prehydrolysates.Applied Microbiology and Biotechnology，1986.23(3)：p.191-197.)。
目前，本领域亟需抗酚类物质的克雷伯氏肺炎杆菌基因工程菌。
发明内容
本发明提供了一种重组克雷伯氏肺炎杆菌，所述的重组克雷伯氏肺炎杆菌中含有可以功能性表达的漆酶基因，所述的漆酶基因为细菌来源的漆酶基因。
所述的漆酶，是一类含铜的氧化还原酶，属于铜蓝氧化酶家族。其能够对酚类物质进行氧化，使得酚类物质聚合或分解。
本发明的重组克雷伯氏肺炎杆菌，其中重组了细菌来源的漆酶基因，能够表达漆酶蛋白，因此，在其利用木质纤维素原料进行水解生产时，其产生的漆酶蛋白能够氧化所述木质纤维素原料水解液中的酚类物质，即该重组菌具有一定的抗酚类物质的抗性，降低了酚类物质对其的抑制作用，提高了其对木质纤维素原料水解液的利用能力，提高了其利用木质纤维素原料水解液来生产相应化学物质(诸如2，3-丁二醇、1，3-丙二醇等)的能力。
所述的漆酶基因为细菌来源的漆酶基因，其为相应的漆酶蛋白的编码序列。所述的漆酶蛋白为：与所来源的细菌漆酶基因编码的漆酶蛋白具有相同的氨基酸序列的蛋白质，或者所来源的细菌漆酶基因编码的漆酶蛋白的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加形成的且具有漆酶功能的衍生蛋白质。
在本发明的一个具体实施方案中，所述的漆酶基因来源于肠杆菌、固氮螺菌、芽孢杆菌、克雷伯氏菌等属细菌。
本发明还提供了上述的重组克雷伯氏肺炎杆菌的制备方法，该制备方法包括两个基本步骤：(1)获得细菌来源的漆酶基因；(2)将获得的漆酶基因连接到合适的表达载体上，再将所述的带有漆酶基因的表达载体转入克雷伯氏肺炎杆菌胞内，获得重组克雷伯氏肺炎杆菌，所述的合适的表达载体为在克雷伯氏肺炎杆菌中可以稳定存在的，具有高拷贝数的表达载体。
在本发明的一个具体实施方式中，步骤(1)中获得漆酶基因的方式为人工合成。在本发明的另一个具体实施方式中，步骤(1)中获得漆酶基因的方式为从细菌基因组中进行克隆。这两种方式都是本领域技术人员获取目标基因的常规手段。所述的合适的表达载体是指，能够转化到克雷伯氏肺炎杆菌内并能稳定的存在，具有较高的拷贝数，并使得所携带的漆酶基因能够在克雷伯氏肺炎杆菌内进行功能性表达的载体。
所述的高拷贝数质粒是指，在细胞分裂前一个质粒能复制成10个以上拷贝数的质粒，也称为松弛型质粒。
优选的，在本发明的一个具体实施方案中，所述的表达载体为表达质粒。
所述的表达质粒优选pDK6表达质粒、pDK7表达质粒，或者其他本领域技术人员所熟知的适宜转化到克雷伯氏肺炎杆菌且能够表达目的基因的其他质粒。
至于将表达质粒转入克雷伯氏肺炎杆菌中的方式，可以采用电转化、热击转化或者接合方法转入克雷伯氏肺炎杆菌。
本发明还提供了上述重组克雷伯氏肺炎杆菌在利用木质纤维原料的水解产物生产化学品方面的应用。例如，利用木质纤维原料水解液生产2，3-丁二醇等化学品。
在本发明的一个具体实施方式中，获得了一重组克雷伯氏肺炎杆菌，其分类命名为Klebsiella pneumoniae GMCC1.6366-pDK6-EL。所述的pDK6表示pDK6表达质粒，所述的EL表示大肠杆菌漆酶(E.coli laccase)。
在本发明的另一个具体实施方式中，获得了一重组克雷伯氏肺炎杆菌，其分类命名为Klebsiella pneumoniae GMCC1.6366-pDK6-KL。所述的KL表示克雷伯氏肺炎杆菌漆酶(K.pneumoniae laccase)。
本发明的有益效果：在克雷伯氏肺炎杆菌利用木质纤维素原料的时候，原料中的酚类物质对菌体有很强的抑制作用，本发明在克雷伯氏肺炎杆菌中引入细菌漆酶，该类漆酶可以在细胞中表达出活性，漆酶可以降解酚类物质。使得获得的克雷伯氏肺炎杆菌工程菌株具有降解酚类物质的能力，增强了菌株对酚类物质的抗性，提高了菌株利用木质纤维素原料生产2，3-丁二醇等化学品的性能。
具体实施方式
下述实施例的基本操作过程为：
1.克隆或人工合成细菌漆酶基因；
2.将获得的漆酶基因连接到一个表达载体上，连接有漆酶的表达载体转入克雷伯氏肺炎杆菌。
实施例1
(1)利用PCR方法克隆大肠杆菌W3110漆酶基因。
PCR模板：大肠杆菌W3110基因组DNA；
PCR引物：5’-GAATTC(EcoRI)ATGCAACGTCGTGATTTCTTAAAAT-3’
5’-AAGCTT(Hind III)ATACCGTAAACCCTAACATCATCCC-3’
注：括号内表示相应的酶切位点。
PCR条件：94℃50秒，52℃30秒，72℃90秒，30个循环。
(2)将PCR扩增产物进行电泳，回收1.5kb条带，连接到pGM18-T载体，形成pGM18-T-EL质粒，转化到大肠杆菌DH5α中。
对回收的1.5kb条带进行测序，通过NCBI网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)进行序列比对，表明获得的PCR产物序列正确。
获得条带的基因序列为：
atgcaacgtcgtgatttcttaaaatattccgtcgcgctgggtgtggcttcggctttgccgctgtggagccgcgcagtatttgcggcagaacgcccaacgttaccgatccctgatttgctcacgaccgatgcccgtaatcgcattcagttaactattggcgcaggccagtccacctttggcgggaaaactgcaactacctggggctataacggcaatctgctggggccggcggtgaaattacagcgcggcaaagcggtaacggttgatatctacaaccaactgacggaagagacaacgttgcactggcacgggctggaagtaccgggtgaagtcgacggcggcccgcagggaattattccgccaggtggcaagcgctcggtgacgttgaacgttgatcaacctgccgctacctgctggttccatccgcatcagcacggcaaaaccgggcgacaggtggcgatggggctggctgggctggtggtgattgaagatgacgagatcctgaaattaatgctgccaaaacagtggggtatcgatgatgttccggtgatcgttcaggataagaaatttagcgccgacgggcagattgattatcaactggatgtgatgaccgccgccgtgggctggtttggcgatacgttgctgaccaacggtgcaatctacccgcaacacgctgccccgcgtggttggctgcgcctgcgtttgctcaatggctgtaatgcccgttcgctcaatttcgccaccagcgacaatcgcccgctgtatgtgattgccagcgacggtggtctgctacctgaaccagtgaaggtgagcgaactgccggtgctgatgggcgagcgttttgaagtgctggtggaggttaacgataacaaaccctttgacctggtgacgctgccggtcagccagatggggatggcgattgcgccgtttgataagcctcatccggtaatgcggattcagccgattgctattagtgcctccggtgctttgccagacacattaagtagcctgcctgcgttaccttcgctggaagggctgacggtacgcaagctgcaactctctatggacccgatgctcgatatgatggggatgcagatgctaatggagaaatatggcgatcaggcgatggccgggatggatcacagccagatgatgggccatatggggcacggcaatatgaatcatatgaaccacggcgggaagttcgatttccaccatgccaacaaaatcaacggtcaggcgtttgatatgaacaagccgatgtttgcggcggcgaaagggcaatacgaacgttgggttatctctggcgtgggcgacatgatgctgcatccgttccatatccacggcacgcagttccgtatcttgtcagaaaatggcaaaccgccagcggctcatcgcgcgggctggaaagataccgttaaggtagaaggtaatgtcagcgaagtgctggtgaagtttaatcacgatgcaccgaaagaacatgcttatatggcgcactgccatctgctggagcatgaagatacggggatgatgttagggtttacggtataa
(3)从转化成功的大肠杆菌DH5α中提取pGM18-T-EL质粒；
(4)利用EcoRI和Hind III双酶切pGM18-T-EL质粒，回收1.5kb片段；
(5)同样，利用EcoRI和Hind III双酶切pKD6表达质粒(Kleiner D.，Paul W.，Merrick M.J.1988，Construction of multicopy expression vectors for regulatedover-production of proteins in Klebsiella pneumoniae and other enteric bacteria.J.Gen.Microbiol.134：77，1779-1784)，直接回收酶切产物；
(6)将步骤(4)回收的1.5kb片段(即细菌漆酶基因片段)与步骤(5)回收的pKD6表达质粒的酶切产物混合，加入T4DNA连接酶，16℃连接过夜；
(7)将步骤(6)的连接产物转化进大肠杆菌DH5α，挑选转化子，提取质粒，酶切验证；
(8)将步骤(7)提取的质粒通过电转化转入克雷伯氏肺炎杆菌GMCC1.6366(中国普通微生物保藏中心保藏)，获得工程菌株GMCC1.6366-pDK6-EL；
基因组DNA提取、PCR、DNA片段电泳回收、质粒提取操作选用商品试剂盒，操作过程按照试剂盒说明书进行。EcoRI、Hind III DNA连接酶和T4DNA连接酶选用商业产品，操作过程按照说明书进行。其他操作方法采用标准分子操作方法，参见J.莎姆布鲁克著，黄培堂译《分子克隆实验指南》科学出版社2005。
实施例2
(1)人工合成来源于雷伯氏肺炎杆菌NTUH-K2044的漆酶基因序列，参见NCBI公开的NTUH-K2044基因组序列，序列号AP006725.1，在合成基因上游添加EcoRI酶切位点(GAATTC)、下游添加XbaI酶切位点(CGGCCG)。
基因序列为：
atgcaacgtcgagacttcctcaaactgaccgccgcggtcggcatggccagcgcattgccgttatggagccgggcggtctttgccgccagtcgcccggctctgccgataccgtcgctgttagccgccgatgcgcgcaaccgcatcgcgctcaggatccaggcgggcaaaacgcggtttggcgccctgaatgccactacctggggctacaacgggtcgctgctgggccctgcgctacagctcacgcaggggaagaccgtcacggtggatattactaaccagctggcggaagagaccacgctgcactggcatggtctggaggtaccgggcgaggtcgacggggggccacagggggttatcgcgccgggtgccacccgcacggtaagcttcacgccaacgcagcgggcggcgacctgctggtttcatccgcatcagcatgggagcaccggccggcaggtggcgatggggctggccggcctggtgctgatcgaggatgaagagagcgggcgcctgctgctgcctaagcagtggggaatcgatgatgtgccggtgatcgtccaggataagaagttcaccgccgccggcgagatcgactatcagctggatgtgatgagcgccgccgtcggctggtttggcgatacgctactgaccaatggggccctctatcccgaacatgccgcgccgcgcggctggctgcgcctgcgcttgctgaacggctgtaatgcccgttccctcaattttgccaccagcgataagcgcccgctgtacgtagtggccagcgatggcggtctgttggccgagccggtcaaggtcgatgaattgccggtcttgatgggtgaacgctttgaggtgctggtggacaccagcgacggtaaacctttcgatctggtgaccctgccggtgagccagatgggcatggcgattgcgccttttgataaaccacagccggtactgcgcgtccagccgctggtcattcccgcctccggcaagctgctggatactctggctgctctcccggcgttaccgtccctgacggggctgacgcagcgtcagctccagctgtcgatggatccgatgctcgaccggatgggcatgcaggcgctgatggagaagtatggcgaccaggcgatggccggaatggatcacggcatgatggggcatggcgacatgagcgacatggggaatatgcatcacggcgacatgagcatgaaccacggatccggcatggagcatggcatgtcgtcaggcaagggctttgatttccataacgccaaccgcatcaacggcaaagccttcgacatgaatgagccgatgtttgccgccgccagaggccagtatgagcgctgggtgatttcaggtaagggcgacatgatgttgcatccgttccatatccacggcacccagttccgtatcctcagcgaaaacggcaagccgccagcggcgcatcgtcgcggctggaaagacaccgttcgtgtggaaggggacgtgagtgaagtattagtgaagtttgatcatccggcgccgaaggagtttgcctatatggcccactgccacctgctggaacatgaagacaccgggatgatgttggggttcacggtttaa
基因合成委托专业公司合成，获得合成基因放置于pUC18质粒中，质粒由大肠杆菌DH5α携带。
(2)培养携带合成基因的大肠杆菌DH5α，提取含有合成基因的pUC18质粒。
(3)提取质粒用EcoRI和XbaI双酶切，回收1.5b段
(3)同样利用EcoRI和XbaI双酶切pKD6表达质粒，直接回收酶切产物。
(4)将回收的含有克雷伯氏肺炎杆菌漆酶的片段与回收的pKD6片段混合，用T4DNA连接酶，转化进大肠杆菌DH5α，挑选转化子，提取质粒。
(5)将提取的质粒转入克雷伯氏肺炎杆菌GMCC1.6366，获得工程菌株GMCC1.6366-pDK6-KL。
XbaI用商业产品，操作过程按照说明书进行。其他试剂盒和内切酶和具体操作过程同实施例1。
效果验证1
对照组：未转化的空白菌株(克雷伯氏肺炎杆菌GMCC1.6366)；
试验组1：实施例1获得的工程菌株GMCC1.6366-pDK6-EL；
分别取对照组和试验组两株菌，利用250ml三角瓶(内装50ml LB液体培养基)37℃，200转每分钟摇瓶柜培养，培养6小时后，分别向两组中加入50mg/mL的IPTG(诱导漆酶表达)，培养20小时后，收获细胞，超声波破碎细胞，离心取细胞破碎清液。
利用2，6-二甲氧基酚为底物测定漆酶活力，利用考马斯亮蓝显色测定总蛋白含量。具体测定方法参见(Gregor Grass and Christopher Rensing，2001，CueO Is aMulti-copper Oxidase That Confers Copper Tolerance in Escherichia coli，Biochemicaland Biophysical Research Communications 286，902-908)。
检测结果见下表1。
表1
采用玉米秸秆水解液作为发酵底物，培养空白对照菌株GMCC1.6366和工程菌株GMCC1.6366-pDK6-EL，考察两组菌株合成2，3-丁二醇的能力。
玉米秸秆水解液水解液总糖含量50g/L，培养基配方，水解液中加入(NH4)2HPO45g/l，MgSO4 0.3g/l，KCl 1g/l，采用250ml三角瓶(内含50ml培养基)批次培养，培养温度37℃，200转每分钟摇瓶柜培养，培养24小时后结束。
测定发酵产物中2，3-丁二醇含量以及生产强度，结果见下表2。
表2
效果验证2
对照组：未转化的空白菌株(克雷伯氏肺炎杆菌GMCC1.6366)；
试验组2：实施例2获得的工程菌株GMCC1.6366-pDK6-KL；
漆酶活性测定：
试验过程以及检测同效果验证1；
检测结果见下表3。
表3
菌株合成2，3-丁二醇的能力：
试验过程以及检测同效果验证1；
检测结果见下表4。
表4
参见效果验证1的试验结果，可以看出，在克雷伯氏肺炎杆菌GMCC1.6366中高水平表达大肠杆菌W3110来源的漆酶基因，工程菌株可以检查到漆酶活性，在利用木质纤维素水解液为原料进行2，3-丁二醇生产中，2，3-丁二醇终浓度和生产强度具有一定幅度的提高。
参见效果验证2的试验结果，可以看出，在克雷伯氏肺炎杆菌GMCC1.6366中高水平表达克雷伯氏肺炎杆菌NTUH-K2044漆酶基因，工程菌株可以检查到漆酶活性，在利用木质纤维素水解液为原料进行2，3-丁二醇生产中，2，3-丁二醇终浓度和生产强度具有一定幅度的提高。
总述，在克雷伯氏肺炎杆菌中高水平表达细菌漆酶基因可以表达出漆酶活性，提高了菌株对酚类物质的抗性，在利用含有酚类物质的木质纤维素水解液为原料进行2，3-丁二醇等化学品的生产中，可以提高产物终浓度，增加生产强度。
Claims (6)
1.一种重组克雷伯氏肺炎杆菌，其特征在于：所述的重组克雷伯氏肺炎杆菌中含有可以功能性表达的漆酶基因，所述的漆酶基因为细菌来源的漆酶基因；
所述重组克雷伯氏肺炎杆菌的制备方法为：
（1）获得细菌来源的漆酶基因；该漆酶基因为相应的漆酶蛋白的编码序列，所述的漆酶蛋白为与所来源的细菌漆酶基因编码的漆酶蛋白具有相同的氨基酸序列的蛋白质或者所来源的细菌漆酶基因编码的漆酶蛋白的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加形成的且具有漆酶功能的衍生蛋白质；所述的漆酶基因来源于肠杆菌、固氮螺菌、芽孢杆菌、克雷伯氏菌；
（2）将获得的漆酶基因连接到合适的表达质粒上，再将所述的带有漆酶基因的表达质粒转入克雷伯氏肺炎杆菌胞内，获得重组克雷伯氏肺炎杆菌；
所述的合适的表达质粒是指：能够转化到克雷伯氏肺炎杆菌内并能稳定的存在，具有高拷贝数，并使得所携带的漆酶基因能够在克雷伯氏肺炎杆菌内进行功能性表达的质粒；高拷贝数的质粒是指在细胞分裂前一个质粒能复制成10个以上拷贝数的质粒。
2.根据权利要求1所述的一种重组克雷伯氏肺炎杆菌，其特征在于：所述步骤（1）中获得漆酶基因的方式包括人工合成或从细菌基因组中进行克隆。
3.根据权利要求1所述的一种重组克雷伯氏肺炎杆菌，其特征在于：所述步骤（2）中采用电转化、热击转化或接合方法将带有漆酶基因的表达质粒转入克雷伯氏肺炎杆菌。
4.根据权利要求1所述的一种重组克雷伯氏肺炎杆菌，其特征在于：所述重组克雷伯氏肺炎杆菌的分类命名为Klebsiella pneumoniae CGMCC1.6366—pDK6—EL，所述pDK6表示pDK6表达质粒，所述EL表示大肠杆菌漆酶(E.coli laccase)。
5.根据权利要求1所述的一种重组克雷伯氏肺炎杆菌，其特征在于：所述重组克雷伯氏肺炎杆菌的分类命名为Klebsiella pneumoniae CGMCC1.6366—pDK6—KL，所述pDK6表示pDK6表达质粒，所述KL表示克雷伯氏肺炎杆菌漆酶(K.pneumoniaelaccase)。
6.权利要求1所述的重组克雷伯氏肺炎杆菌在利用木质纤维原料水解液生产2,3-丁二醇中的应用。
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Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105462875B (zh) * | 2015-12-01 | 2019-04-02 | 北京中农国泰科技有限公司 | 一株木质纤维素类物质高效降解菌l252及其应用 |
| CN105385631B (zh) * | 2015-12-01 | 2018-11-30 | 北京德瑞丰农业科技有限责任公司 | 一株木质纤维素类物质高效降解菌m1及其应用 |
| CN105462876B (zh) * | 2015-12-01 | 2019-03-08 | 北京中农国泰科技有限公司 | 一株木质纤维素类物质高效降解菌l212及其应用 |
| CN106434579A (zh) * | 2016-10-17 | 2017-02-22 | 天津科技大学 | 一种来源于肺炎克雷伯氏菌的漆酶及其重组菌株与制备 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1259166A (zh) * | 1997-06-06 | 2000-07-05 | 电化学工业有限公司（国际） | Dna序列,这些dna序列的表达,这些dna序列所编码的嗜热漆酶,及其应用 |
| CN1560257A (zh) * | 2004-03-04 | 2005-01-05 | 深圳市构思生物技术有限公司 | 新漆酶的表达载体、表达微生物菌株、表达的漆酶蛋白及其应用 |
-
2011
- 2011-06-08 CN CN201110151522.8A patent/CN102260643B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1259166A (zh) * | 1997-06-06 | 2000-07-05 | 电化学工业有限公司（国际） | Dna序列,这些dna序列的表达,这些dna序列所编码的嗜热漆酶,及其应用 |
| CN1560257A (zh) * | 2004-03-04 | 2005-01-05 | 深圳市构思生物技术有限公司 | 新漆酶的表达载体、表达微生物菌株、表达的漆酶蛋白及其应用 |
Non-Patent Citations (12)
| Title |
|---|
| Detoxification of wood hydrolysates with laccase and peroxidase from the white-rot fungus Trametes versicolor;Jonsson L.等;《Appl Microbiol Biotechnol》;19981231;第49卷;第691-697页 * |
| Jonsson L.等.Detoxification of wood hydrolysates with laccase and peroxidase from the white-rot fungus Trametes versicolor.《Appl Microbiol Biotechnol》.1998,第49卷第691-697页. |
| Lignin and extractives derived inhibitors in the 2,3-butanediol fermentation of mannose-rich prehydrolysates;Tran A., Chambers R.;《Appl Microbiol Biotechnol》;19861231;第23卷;第191-197页 * |
| Scale-up of micro-aerobic 1,3-propanediol production with Klebsiella pneumonia CGMCC1.6366;Zong-ming Zheng等;《Process Biochemistry》;20091231;第44卷;第944-948页 * |
| TranA. Chambers R..Lignin and extractives derived inhibitors in the 2 |
| Zong-ming Zheng等.Scale-up of micro-aerobic 1,3-propanediol production with Klebsiella pneumonia CGMCC1.6366.《Process Biochemistry》.2009,第44卷第944-948页. |
| 共表达1, 3-丙二醇氧化还原酶与甲酸脱氢酶对Klebsiella pneumoniae生理代谢的影响;郭妮妮等;《科学通报》;20101231;第55卷(第16期);第1608-1612页 * |
| 甲酸脱氢酶在Klebsiella pneumoniae中的表达和功能分析;黄志华等;《微生物学报》;20070204;第47卷(第01期);第64-68页 * |
| 细菌漆酶的研究进展;赵敏等;《中国造纸学报》;20081231;第23卷(第3期);第107-114页 * |
| 赵敏等.细菌漆酶的研究进展.《中国造纸学报》.2008,第23卷(第3期),第107-114页. |
| 郭妮妮等.共表达1 3-丙二醇氧化还原酶与甲酸脱氢酶对Klebsiella pneumoniae生理代谢的影响.《科学通报》.2010 |
| 黄志华等.甲酸脱氢酶在Klebsiella pneumoniae中的表达和功能分析.《微生物学报》.2007,第47卷(第01期),第64-68页. |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102260643A (zh) | 2011-11-30 |
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