CN102260239B - 胡黄连素衍生物及其制备与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种胡黄连素衍生物及其制备方法和应用。该衍生物具有如式I所示的结构，其中，R₁、R₂为烃基；R₃为具有抗氧化活性的基团。该胡黄连素衍生物能够用于制备抗氧化药物、治疗高血压药物、治疗脑中风药物以及治疗急性肺损伤药物。所述药物可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、细粒剂、粉剂、丸剂、贴剂、口服液或注射剂。

Description

胡黄连素衍生物及其制备与应用

技术领域

本发明涉及胡黄连素(Apocynin)衍生物及其制备方法，还涉及所述胡黄连素衍生物在制药中的应用。

背景技术

急性肺损伤(Acute Lung Injury，ALI)是指各种原因引起的肺泡上皮、肺微血管内皮和肺间质的急性弥漫性损伤。其病理生理改变是以肺顺应性降低，肺内分流增加及通气/血流比例失调为主；临床表现为顽固性低氧血症、呼吸频数和呼吸窘迫；胸部X线片显示肺弥漫性浸润影(Lu，et al.，J Zhejiang Univ Sci B.8：60，2007)。我国尚无有关ALI患者发病率及死亡率的报道，而2005年Rubenfeld等人报道美国每年有19万ALI患者，这个数据还将在未来10年增加到30万，每年美国有7.5万人死于ALI。最新随机调查表明，急性肺损伤患者死亡率高达35％～40％，其中28天内死亡率达25％～30％(Rubenfeld，etal.，N Engl J Med.353：1685，2005)。随着医疗水平的不断提升，ALI患者的生存率有所改善(Gordon R.Respir Crit CareMed.172：798，2005)。

ALI的病因各不相同，发病机制也较复杂。过度炎性反应和氧化应激是ALI发病机制中最主要的因素，这两个发病机制也是目前的研究热点。

过度炎性反应引起的弥漫性肺损伤被公认是ALI发病致病的主要机制。ALI本质上是炎症反应失控导致的肺泡毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤，其结果是肺水肿和透明膜形成，肺内分流增加和通气血流比例失调，最后导致顽固性低氧血症。而ALI与一般炎症的区别在于它在某些环节上存在抗炎性反应和炎性反应的失衡，因此，一般常用的消炎药甚至激素都很难起到理想的疗效(Steinberg KP，et al.，NEngl J Med.354：1671，2006)。细胞因子在此过程中有至关重要的作用，多项实验性研究结果认为TNF-α和其他细胞因子一起是早 期介导ALI的物质(Sheridan BC，et al.，J Surg Res.71：1502，1997)。

被激活的各种细胞经呼吸爆发产生大量活性氧(ROS)引起氧化应激状态，也是重要的ALI发病机制。大量的氧自由基使肺组织脂质过氧化损伤，膜的流动性减低而通透性增加，还可增加花生四烯酸代谢产物如血栓素、前列腺素E、白三烯C4等的释放量，参与炎症过程。同时促炎细胞因子如TNF-α、IL-1、IL-8也可以进一步激活而释放大量氧自由基(Baboolal HA，et al.，Anesthesiology.97：1227，2002)。氧自由基还参与细胞信号转导机制的调节过程，氧自由基可能直接激活或通过产生大量炎症因子激活相关磷酸酶，进而激活NF-κB，炎症基因进一步表达，诱发ALI。

ALI的治疗目前没有特效药，主要是根据其病理生理改变和临床表现采取对症治疗或支持性治疗(Matthay MA.Proc Am Thorac Soc.5：297，2008)。目前治疗ALI的主要药物是抗炎剂和抗氧剂。

抗炎治疗主要是加强对休克、创伤、感染、炎症的早期处理，以消除产生过度炎症反应的条件。从理论上讲，应用肾上腺糖皮质激素治疗应该是有效的。但最近的国外多个多中心临床研究显示，大剂量激素无论是对ALI/ARDS的预防还是早、晚期的治疗都没有作用，主要原因在于激素副作用过大，同时ALI炎性反应治疗与普通炎症不同，实际上是要解决好体内炎性反应和抗炎之间的平衡问题(FergusonND et al.，Crit Care Med.33：2228，2005)。因此，ALI炎性反应的治疗成了医学难点，以TNF-α为靶点的治疗在临床上取得了一定的成功，但这种方式对肺损伤的治疗效果尚未取得明确的结论(MukhopadhyaYS，et al.，Respir Res.7：125，2006)。

抗氧化剂可以清除自由基，重建体内氧化和抗氧化的平衡，从而起到治疗ALI的作用。目前，已有大量的研究证实抗氧化剂包括N-乙酰半胱氨酸、安溴索、维生素类等在肺损伤中的保护作用(Oguz K，et al.，Pulmonary Pharmacology & Therapeutics.263，2004)。但目前临床上抗氧化治疗仍只作为ALI防治的辅助措施。

因此，ALI的临床药物治疗目前缺少疗效确切的特效药，单一的抗炎免疫调节剂和抗氧化保护剂都很难起到理想的治疗效果，多靶点 治疗是公认的治疗ALI比较有价值的研究方向。

中药胡黄连为玄参科多年生草本植物胡黄连的干燥根茎，性寒味苦，有清热、除湿、明目、补肝、益胆、杀虫的效用，主治痨热咳嗽、湿热泻痢、小儿疳积、目赤等疾病。其有效成分胡黄连素(Apocynin)被证明具有抗炎和抗氧化双重活性作用，尤其对ALI具有较好的治疗作用。

胡黄连素对炎性反应具有一定的治疗作用。胡黄连素在动物关节炎模型试验中被证明具有较好的疗效。胡黄连素通过抑制NADPH氧化酶，干扰花生四烯酸代谢；增加巨噬细胞产生前列腺素E2，前列腺素E2可以提高cAMP水平，从而抑制TNF-α的产生。胡黄连素抗炎活性表现在.：(1)减少中性粒细胞氧化爆发；(2)减少对中性粒细胞趋化；(3)降低中性粒细胞介导的氧化损伤；(4)降低单核细胞对TNF-α粘附效应；(5)抑制过氧化过程。

胡黄连素对ALI的产生的氧化应激也具有一定的治疗作用。胡黄连素通过抑制NADPH氧化酶，从而抑制ROS的产生，特别是抑制超氧阴离子·O₂ ^-的产生，从而减少·O₂ ^-对肺组织的损伤。Carnesecchi S等人(Carnesecchi S，et al.，American Journal of Respiratory and CriticalCare Medicine.180：972，2009)证明NADPH氧化酶在高氧所致的急性肺损伤中起着关键作用；Doddo等人(Doddo JM，et al.，AmericanJournal of Physiology.287：927，2004)证明胡黄连素能够抑制中性粒细胞NADPH氧化酶的活性，防止ROS的产生，改善离体羊肺缺血-再灌注引起的血管通透性增加，减轻肺动脉高压，减低体内环氧化酶代谢产物的浓度，改善体外循环(CPB)后的低氧血症，对肺缺血/再灌注损伤和CPB后肺损伤有一定的保护作用。

发明内容

本发明提供了一种新的胡黄连素衍生物。

本发明还提供了所述胡黄连素衍生物的制备方法。

本发明还提供了所述胡黄连素衍生物在制备用于治疗急性肺损伤、高血压、脑中风的药物中的用途以及在治疗上述疾病中的应用。

在一方面，本发明的实施方案所提供的胡黄连素衍生物，具有如通式I所示的结构：

其中， 或-NHR₃；而R₁、R₂为烃基，R₃为具有抗氧化活性的基团。

在另一方面，本发明的实施方案所提供的胡黄连素衍生物的制备方法，从而获得如通式I所示的、当 或-NHR₃的不同结构的化合物。

例如，制备对应于通式I中 的胡黄连素衍生物的方法可以包括如Scheme 1所示的步骤：

Scheme 1：化合物1-8的合成

又如，制备对应于通式I中R＝-NHR₃的胡黄连素衍生物的方法还可包括如Scheme 2所示的步骤：

Scheme 2：化合物9的合成

在另一方面，本发明的实施方案表明所提供的胡黄连素衍生物在体内外具有很好的抑制NADPH氧化酶活性，以清除体内活性氧(ROS)，可用于与清除氧自由基抗氧化相关的疾病以及与免疫抗炎药物相关的治疗，尤其作为抗炎和抗氧化双重作用治疗急性肺损伤的药物。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

1、本发明的胡黄连素衍生物的抗氧化机制独特，一方面保持或增强了天然产物抑制NADPH氧化酶活性，同时还具有理想的直接抗氧化活性，这一点是天然产物胡黄连素所不具备的。因此，本发明的胡黄连素衍生物不仅能够通过抑制NADPH氧化酶来减少体内ROS的产生，同时其抗氧化活性部分如硝酮部分能够直接清除体内的ROS。

2、本发明的胡黄连素衍生物在抗炎抗氧化双重治疗急性肺损伤方面的作用优于天然胡黄连素。

3、本发明的胡黄连素的衍生物的制备工艺简单，原料易得，成本低廉，相比较其它化学药物或抗体更为经济有效。并且可用于制备临床使用药物并具有经济效益。

附图说明

图1为描述根据本发明的实施方案所提供的胡黄连素衍生物的化 学抗氧化活性试验结果的柱状图。

图2为描述根据本发明的一个实施方案，胡黄连素与化合物2(APO-2)抑制细胞内活性氧实验结果。

图3为描述根据本发明的一个实施方案，胡黄连素及化合物9能降低NADPH氧化酶亚基P67^Phox表达作用的柱状图。

图4为描述根据本发明的一个实施方案，胡黄连素与化合物2(APO-2)抗肺损伤的形态学和组织学实验结果。

具体实施方式

1.定义

对于本发明所涉及的一些专业术语，在下文中进行解析说明：

本文中“烷基化”是指取代或未取代的直链、支链或环状可多达15个碳原子的基团。链状烷基化包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基。支链的烷基化基团包括异丙基、异丁基、叔丁基、新戊基。环状烷基化基团包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基。烷基化基团本身可被一个或多个基团取代，如氨基、硝基、氧代烷基、亚氨代烷基、次氨代烷基、酰氨代烷基、硝酸酯、氟、氯、溴、碘、羟基、三氟甲醚、甲磺酸基、羧基、羧酸酯、氰基、杂环芳基。“烷基化”也指取代或未取代的直链、支链或环状可多达15个碳原子的至少含有一个杂原子的基团(如氮、氧、硫)。链状烷基化包括乙基甲醚、乙基、二甲胺乙基甲醚、乙基甲硫醚。支链的烷基化基团包括2-甲氧基丙基、2-二甲胺丙基。环状烷基化基团包括CH(CH₂CH₂) ₂O，H(CH₂CH₂)₂NCH₃，CH(CH₂CH₂)₂S，哌啶基、吡啶基、哌嗪基。这些烷基化基团又可一个或多个基团取代如氨基、硝基、氧代烷基、亚氨代烷基、次氨代烷基、酰氨代烷基、硝酸酯、氟、氯、溴、碘、羟基、三氟甲醚、甲磺酸基、羧基、羧酸酯、氰基、杂环芳基。而且“烷基化”也包括杂原子的氧化，如N-氧化，酮或硫酮。

“芳基”是指取代或未取代的芳香环或碳环基团。“芳基”可是单环也可是多环，如苯基就是一个单环的芳香基团。萘基就代表多个联合单环的芳香基团。芳基又可一个或多个基团取代如NH₂、NO₂、 氧代烷基、亚氨代烷基、次氨代烷基、酰氨代烷基、硝酸酯、氟、氯、溴、碘、羟基、三氟甲醚、甲磺酸基、羧基、羧酸酯、氰基、杂环芳基。

“异环芳基”是指取代或未取代的含有至少一个杂原子的单一或多个芳香环的结构，如氧、氮、硫。典型的异环芳基包括一个或多个氮原子的化合物为四唑，吡咯基、吡啶(如4-吡啶、3-吡啶、2-吡啶)；哒嗪、吲哚、喹啉(如2-喹啉、3-喹啉等)；咪唑基、异喹啉、吡唑、吡嗪、嘧啶、吡啶酮；典型的含氧异芳香基团有2-呋喃、3-呋喃和苯并呋喃；典型的含硫异芳香基团有噻吩和苯并噻吩；典型混合杂原子基团有呋喃、恶唑、噻唑基。异环芳基可进行一个或多个取代如NH₂、NO₂、氧代烷基、亚氨代烷基、次氨代烷基、酰氨代烷基、硝酸酯、氟、氯、溴、碘、羟基、三氟甲醚、甲磺酸基、羧基、羧酸酯、氰基、杂环芳基而且同时存在氧化形式，如氧化-N、酮或硫酮。

所谓的“具有生理活性”是指盐或赋型剂的毒副作用在可接受范围内。其中无机盐包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磺酸、硝酸、亚硝酸、磷酸等。有机盐包括醋酸盐、丙二酸盐、丙酮酸盐、丙酸盐，肉桂酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐等。赋型剂的描述根据E.W.Martin，in Remington′s Pharmaceutical Sciences Mack PublishingCompany(1995)，Philadelphia，PA，19th ed.

“哺乳动物细胞”指的是来源与哺乳类动物的细胞或细胞株。“哺乳动物细胞扩增疾病”指在不同于正常哺乳动物细胞生长环境或生长速度下繁殖的哺乳动物细胞。

2.化合物

本发明的不同实施方案所提供的胡黄连素衍生物，具有通式I所示的结构：

其中， 或-NHR₃；而R₁、R₂为烃基，R₃为具有抗氧化活性的基团。

在本发明的一个实施方案中，所述R₁为，例如，C1～C11链烃基或带有3～7元环的环烃基。

在本发明的又一个实施方案中，所述R₂为，例如，C1-C11烃基。

在本发明的又一个实施方案中，所述R₃为内源性的抗氧化基团或能在体内解离成内源性抗氧化剂的化合物。例如，R₃为硫辛酰基、半胱胺酰基或N-乙酰半胱胺酰基。

在本发明的一个优选的实施方案中，所述胡黄连素衍生物为：

在本发明的另一优选的实施方案中，所述胡黄连素衍生物为：

在本发明的另一优选的实施方案中，所述胡黄连素衍生物为：

3.化合物的制备方法

本发明的实施方案所提供的胡黄连素衍生物的制备方法，例如，制备对应于通式I中 的化合物的方法可以包括 如前述Scheme 1所示的步骤：

(1)将胡黄连素和三乙胺溶解在的无水乙醇中，加入50％的氢氧化钠水溶液搅拌混匀，再往反应液中滴加氯仿。在70-80℃下反应完全后，将反应液冷却至室温，并用盐酸酸化至pH＝1。有机层经水洗、干燥、浓缩后用硅胶柱分离，得到5-甲酰基-4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮。

(2)将步骤(1)所得化合物和伯胺类化合物溶解在无水乙醇中，回流至反应完全。反应液经浓缩后用硅胶柱分离，得到中间化合物3-5。

(3)将步骤(2)所得中间化合物溶解在甲醇中，并冰浴冷却至10℃以下。往反应液中加入硼氢化钠并剧烈搅拌。室温反应2小时后，往反应液中加入冰水，再用乙酸乙酯萃取。反应液经干燥、浓缩，得到目标化合物6-8。

(4)将步骤(1)所得化合物1溶解在甲醇溶液中，滴加羟胺类的甲醇溶液，反应液回流6个小时，浓缩后用硅胶柱分离，得到目标化合物2。

又如，制备对应于通式I中R＝-NHR₃的胡黄连素衍生物的方法还可包括如前述Scheme 2所示的步骤如下：

先将EDCI、HOBT和羧酸类溶解在DMF溶液中，在室温下反应2小时。往反应液中滴入5-胺基4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮的DMF溶液，继续在室温下反应20小时。反应完全后，反应液经乙酸乙酯萃取，并水洗、干燥后用硅胶柱分离，得到目标化合物9。

后述的实施例还示例地包括了根据本发明的实施方案所获得化合物的制备方法。

4.治疗方法与方案

目前用于治疗的新化合物可以通过任何适当的方法提供给个体，直接给药(局部给药，如注射、移植或者局部应用于目的组织部位等)和全身系统给药(经注射途径给药和口服给药等)。通过静脉注射、皮下注射、分子内给药、眼内给药、腹腔给药、肌肉注射、口腔含服、 直肠给药、阴道给药、眼眶内给药、皮内注射、经皮肤给药、气管内给药、大脑内给药、颅内给药、脊柱内给药、心室内给药、鞘膜内给药、脑池内给药、囊内给药、鼻内给药和气雾吸入等，化合物通过非肠胃途径给药应用到某些特定部位，这样就能较好地结合一部分水性的或者生理学上可以配伍的流质混悬液和水溶液。如此，传递体或者载体就可以被正常吸收，以至于除传送所需要的化合物给病人外，它不会对病人的电解质和/或血容量的平衡产生不良的影响。媒介物的液体培养基这样就可以由正常生理盐水(0.9％NaCl溶液等)或者一种pH3-7.4的缓冲液组成。同样地，通过微量泵连续还是冲击用药的给药方法也适用于目前新合成的治疗用化合物。

对于胃肠外给药，有效的溶液可以通过任何制药工艺的方法进行配备，如在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Gennaro，A.，et al.)，Mack Pub.，1990.中描述的。新化合物的治疗成分包含聚烯乙二醇，例如聚乙二醇，植物油，氢化萘等等。而在直接给药时，药物治疗成分特别含有丙三醇和其他高粘度的物质，用于保持治疗因素停留在所需部位。生物相容的，较好生物吸收的聚合体，例如包括有透明质酸酶，胶原质，磷酸三钙，聚丁酸盐，丙交酯，乙交酯聚合体和丙交酯/乙交酯共聚体，它们在活体内可以作为有用的辅料来控制治疗成分的释放。其他潜在的对于这些治疗因子有用的肠胃外给药的递药系统包括有乙烯-醋酸乙烯酯共聚物颗粒，渗透泵，可植入输注系统和脂质体。对于吸入给药的有效成分包含一些如乳糖的辅料，或者可能是包含有一定的含水溶液，如聚氧乙烯-9-十二烷基醚，甘氨胆酸盐和脱氧胆酸盐，油状滴鼻药液，作为鼻内用的凝胶。胃肠外给药的成分还可以包括用于口腔含化给药的甘氨胆酸盐，用于直肠给药的甲酯水杨酸，。用于直肠给药的栓剂可以通过混合有治疗疗效的新化合物(单独使用或者结合化学治疗药物因子)和一些无刺激辅料，例如可可脂，或者其他在室温下可以凝固而在体温可以变成液体的混合物。

那些通过注射给药含有新化学治疗药物的复合物，可以按照配方，通过溶解、混悬或者乳化入水溶剂或者非水溶剂。二甲亚砜，N，N-二甲乙酰胺，N，N-二甲甲酰胺，植物油或类似植物油，人工合成的 脂肪酸甘油酯，更高级的脂肪酸酯类是这类非水溶剂的例子。这种化合物是在水溶液中形成的，例如：Hank溶液，Ringer溶液，或者生理盐水缓冲液。

当新化合物通过口服服用后，能与关节里的药物载体结合而成形。这些载体能促使新化合物的成形，例如通过病人口服给于的：片剂，丸剂，混悬液，液体制剂和胶囊。口服的成形剂能从多方面获得，包括：将化合物和固体辅形剂混合，然后将它碾碎，接着加入合适的辅料，最后制成颗粒。下面这些就是用于口服制剂的辅料：糖类有：乳糖，蔗糖，甘露醇，山梨醇；纤维素：玉米淀粉，小麦淀粉，土豆淀粉，明胶，西黄奢胶，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠和PVP。

新化合物也可以通过加压喷洒器制成喷雾剂或者干粉吸入剂。可用于喷洒器的合适的抛撒剂有：氟利昂，三氯氟甲烷，双氯非那胺，和二氧化碳。剂量可以通过可通过在高压喷洒时通过活塞的正常的化合物的量来决定。

通过皮肤外局部吸收的药物(单体或者与化学治疗剂的合剂)可通过与皮肤可吸收的载体例如：洗剂，乳剂，软膏和皂液混合成形，然后在皮肤处释放吸收。当载体与化合物形成薄膜或者薄片时，可促进局部吸收，防止药物失在局部，对于增加内部组织面的吸收，选用的试剂应该在液体的组织能够释放或者选用其他能够促进组织面吸收的物质。例如：羟丙基纤维素或者纤维蛋白素原，凝血酶液。或者，选用包衣溶液，例如：胶质包衣形成的物质。

这个新化合物能用于治疗慢性阻塞性肺疾病和其它ROS介导的疾病。药物能一次性的提供或者连续的提供。新化合物可以单独的给与或者与其他试剂结合给与，例如：化合疗法的化合物。新药物含有一定量的有治疗疗效的新化合物。而新化合物的含量将依照病人的病情而定。病人的体重，病情的严重程度，给药方法以及开处方的药师都要列入考虑合适剂量的范围。尽管有效剂量将会随着所治疗的病人而有所变化，但是，该化合物常用的适合的剂量通常是介于0.0001mg/kg and 1mg/kg之间的。

在某些病例中，运用超出说明规定剂量来治疗一些个别病人是有 必要的。这些病例表明看来只是需要内科医师开处方。当有必要的时候，一个内科医生结合特定病人的反应，同样会知道怎样和何时间断、调整和终止治疗。研究也会受到以下这些事例的限制，但是这些例子并不意味着会限制目前研究发明的范围。这对于那些在许多工艺修饰过程中失败的新药，这时合成原料和方法就可以在坚持着研究目的和利益的方向下继续投入。目前新合成化合物可以在活体内测试它的效用和在实验动物肿瘤模型测试；一个有效的化合物在活体和实验动物肿瘤模型都能抑制肿瘤的生长。这些化合物大多数在实验动物肿瘤模型身上就表现出最大抗肿瘤作用的新合成物。

预期将混合物通过一系列已知的制剂工艺制备成供口服的制剂。混合物应包括甜味剂，矫味剂，着色剂和防腐剂中的一种或几种，这样能使药物更加美观和可口。药片包括了活性化合物以及一些供药用的无毒辅料，以便制造成片剂。这些辅料中包括：堕性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钠和磷酸钙。制粒剂和崩解剂如淀粉糊精、海藻酸。粘合剂如淀粉糊、明胶和阿拉伯胶。润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉等。药片有包衣和未包衣类型，为了使药片具有缓释作用，通过已有技术在其表面包上包衣以延缓其在胃肠道的崩解和吸收，如使用缓释材料单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

同样可将药物活性成分与一定的固态堕性稀释剂混合装入硬胶囊中，做成供口服的硬胶囊制剂。这些固态稀释剂包括：碳酸钙、磷酸钙、高岭土。也可将药物活性成分与水或油性介质如花生油，石蜡油，橄榄油等混合做成软胶囊供口服。

将药物活性成分与用于生产混悬剂的辅料混合制成水混悬液。辅料包括：助悬剂如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶、阿拉伯胶等。分散剂和润湿剂可用天然的磷脂类如卵磷脂，脂肪酸烯基氧化缩合产物类如聚氧乙烯硬脂酸酯，长链脂肪醇与环氧乙烷所合物类如heptadecaethyleneoxycetanol，环氧乙烷与脂肪酸、己糖醇中提取得不饱和酯类进行缩合而得到的产物如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，环氧乙烷与脂肪酸、己糖醇脱水物中提取得不饱和酯类进行缩合而得到的产物如聚乙烯去水山梨糖醇单油酸酯。 混悬剂也包含一到多种着色剂和防腐剂如乙基或正丙基羟苯酸盐。一种或多种矫味剂和甜味剂如蔗糖或糖精。

将药物活性成分混悬于植物油如花生油、橄榄油、芝麻油、椰子油或者矿物油如石蜡油中形成油混悬液。油混悬液中还包括：增稠剂如蜂蜡、固体石蜡、乙酸乙酯，上文所提甜味剂如蔗糖、糖精，以及用于改善口味的矫味剂，同时在混悬体系中加入抗氧化剂如抗坏血酸作为防腐剂。

分散的粉末或颗粒适合用于制成混悬液。通过向含有药物活性成分的液体中加入分散剂或润湿剂，助悬剂和一到两种防腐剂使之成为混悬剂。相应得分散剂、润湿剂、助悬剂、防腐剂在文章前面已经提出，需添加的辅料如甜味剂、矫味剂以及着色剂也已在前文陈述。

本发明中的药物也可做成水包油乳剂，油相可用植物油如花生油，橄榄油或矿物油如液体石蜡油以及它们的混合物来制作。乳化剂可选用天然的树胶类如阿拉伯胶、西黄蓍胶，或者天然的磷脂类如大豆卵磷脂和来源于脂肪酸、己糖醇或己糖醇脱水物的酯以及不饱和酯类如山梨糖醇单油酸酯，环氧乙烷与脂肪酸、己糖醇脱水物中提取得不饱和酯类进行缩合而得到的产物如聚乙烯去水山梨糖醇单油酸酯。同样乳剂中也包括甜味剂、矫味剂和着色剂。

糖浆剂和酏剂是将药物加甜味剂配制而成的。其中甜味剂包括：甘油、丙二醇、山梨糖醇、蔗糖。制剂中还包括润滑剂、防腐剂、矫味剂和着色剂。药物也可做成无菌的注射剂或者油状的混悬液，这种混悬液可以通过上文所述的工艺，选择恰当的分散剂、润湿剂、助悬剂。无菌注射剂主要是无菌的可注射透明溶液或混悬的双亲和性的无毒稀释剂或溶剂入作为溶剂的1，3-丁二醇，在可用的载体或溶剂中常选用水、林格试剂、等渗生理盐水。此外，无菌的难挥发性油脂也常作为溶剂或混悬媒介使用。为了达到这些目的，任何对人体刺激性小的难挥发的油脂如人工合成的甘油二酯也可作为溶媒，以及一些脂肪酸如十八烯酸也被用于制造注射剂。

药物活性成分同样可制作成拴剂，供直肠给药。将药物与无刺激性的赋形剂混合制成所需组分。这些组分需要在常温下保持固体形 状，再肛温下溶化，在直肠内溶化后才能释放药物产生疗效。聚乙二醇、可可脂可用来作为赋形剂。

药物活性物质可以存在于无菌介质中通过非口服途径使用。药物通过载体集中分布发挥作用。药物可以分散或溶解在载体中，同样有有益的局麻药、防腐剂、缓冲剂也可溶解在载体介质中。

本发明(即白蛋白结合物)中的成分，可以通过适合药物分子的任何途径连续或者间断给药。因此，口服给药，肠外给药包括皮下包埋、静脉注射、吸入给药、鼻腔给药和腹腔给药都可以做为给药的合适途径。此外，间歇给药应周期循环的注射大剂量药物，一天一次，两天一次，三天一次，一周一次，一周两次，两周一次，一月两次或者一月一次的有规律注射。

5.实施例

以下通过不同的实施例对本发明的内容作进一步的描述，但不意味对本发明范围的限制。

实施例1.胡黄连素衍生物1(5-甲酰基-4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮)的合成

将胡黄连素(5g，30.1mmol)和3ml三乙胺溶解在20ml的无水乙醇中，50％的氢氧化钠水溶液50ml滴入搅拌混均。往反应液中滴加氯仿(39g，300mmol)，70-80℃下反应2个小时。将反应液冷却至室温，并用盐酸酸化至pH＝1。收集有机层，水层用二氯甲烷萃取3次(20mlx3)。合并有机层并用水洗3次(10mlx3)，经无水硫酸钠干燥后浓缩，并用乙酸乙酯/石油醚(3∶2)柱分离得到淡黄色粉末2.2g，35％产率。Mp：156-157℃.¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：11.47(s，1H，OH)，10.00(s，1H，CHO)，7.83(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，7.74-7.73(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，3.98(s，3H，OCH₃)，2.62(s，3H，CH₃CO).MS(ESI)m/z 193[M-H]⁺，195[M+H]⁺。

实施例2.胡黄连素衍生物2(5-特丁基硝硐-4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮)的合成

向实施例1产物(11.6g，60mmol)300ml甲醇溶液中，滴加50ml的N-特丁基羟胺(8g，90mmol)甲醇溶液，反应液回流6个小时，浓 缩并用乙酸乙酯/石油醚(2∶1)柱分离，得到淡黄色产物11.8g，74％产率。Mp：183-184℃.¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：7.76(s，1H，CHNO)，7.53(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，7.43-7.42(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，3.93(s，3H，OCH₃)，2.55(s，3H，CH₃CO)，1.65(s，9H，(CH₃)₃C).MS(ESI)m/z264[M-H]⁺，266[M+H]⁺。

实施例3.胡黄连素衍生物3(5-(5’-亚胺甲基-4’-羟基-3’-甲氧基-苯乙酮)-4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮的)合成

将实施例1产物(200mg，1.03mmol)和5-胺基-胡黄连素(190mg，1.03mmol)溶解在10ml的无水乙醇中，回流过夜。反应液浓缩并用乙酸乙酯/甲醇(10∶1)柱分离，得到朱红色粉末210mg，60％产率。Mp：195-196℃.¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：8.96(s，1H，ArCHN)，7.74(s，1H，ArH)，7.62(s，1H，ArH)，7.60(s，1H，ArH)，7.49(s，1H，ArH)，4.03(s，3H，OCH₃)，4.01(s，3H，OCH₃)，2.63(s，3H，CH₃CO)，2.63(s，3H，CH₃CO).MS(ESI)m/z 356[M-H]⁺。

实施例4.胡黄连素衍生物4(5-(N-丁基亚胺甲基)-4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮)的合成

将实施例1产物(200mg，1.03mmol)和正丁基胺(150mg，2.06mmol)溶解在20ml的甲醇中，反应液在室温下反应1h。反应液浓缩并用乙酸乙酯/石油醚(1∶1)柱分离，得到淡黄色粉末172mg，67％产率。MS(ESI)m/z 251[M+H]⁺。

实施例5.胡黄连素衍生物5(5-(N-特丁基亚胺甲基)-4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮)的合成

将实施例1产物(200mg，1.03mmol)和特丁基胺(150mg，2.06mmol)溶解在20ml的甲醇中，反应液在室温下反应1h。反应液浓缩并用乙酸乙酯/石油醚(1∶1)柱分离，得到淡黄色粉末175mg，68％产率。MS(ESI)m/z 251[M+H]⁺。

实施例6.胡黄连素衍生物6(5-(5’-胺甲基-4’-羟基-3’-甲氧基-苯乙酮)-4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮)的合成

将实施例3所得化合物(200mg 0.56mmol)溶于20ml的甲醇中，冰浴冷却至10℃以下。往反应液中加入硼氢化钠(7mg，0.18 mmol)并剧烈搅拌。室温反应2小时后，往反应液中加入10ml冰水，再用乙酸乙酯萃取。反应液经干燥真空旋干后得到110mg灰色固体，58％产率。Mp：200-203℃.¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：7.64-7.63(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，7.50(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，7.13-7.12(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，7.08-7.07(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，4.54(s，2H，ArCHN)，3.99(s，3H，OCH₃)，3.96(s，3H，OCH₃)，2.57(s，3H，CH₃CO)，2.53(s，3H，CH₃CO).MS(ESI)m/z 360[M+H]⁺。

实施例7.胡黄连素衍生物7(5-(N-丁基胺甲基)-4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮)的合成

将实施例4产物(172mg，0.69mmol)溶解在10ml的甲醇中，将反应液冷却至0℃，加入硼氢化钠(13mg，0.34mmol)并不断搅拌，在室温下继续反应2h。加入冰水(10ml)洗涤过量的硼氢化钠，用二氯甲烷(10mlx3)萃取3次。有机层经干燥真空旋干后得到131mg棕色固体，75％产率。Mp：161-163℃.¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：7.44(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，7.29(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，4.07(s，2H，ArCH₂N)，3.93(s，3H，OCH₃)，2.70-2.68(t，2H，J＝7.1Hz，NCH₂)，2.53(s，3H，CH₃CO)，1.56-1.51(m，2H，CH₃CH₂CH₂CH₂)，1.41-1.33(m，2H，CH₃CH₂CH₂CH₂)，0.93-0.90(t，3H，J＝7.3Hz，CH₃CH₂).MS(ESI)m/z250[M-H]⁺，252[M+H]⁺。

实施例8.胡黄连素衍生物8(5-(N-特丁基胺甲基)-4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮)的合成

将实施例5产物(175mg，0.70mmol)溶解在10ml的甲醇中，将反应液冷却至0℃，加入硼氢化钠(13mg，0.34mmol)并不断搅拌，在室温下继续反应2h。加入冰水(10ml)洗涤过量的硼氢化钠，用二氯甲烷(10mlx3)萃取3次。有机层经干燥真空旋干后得到128mg棕色固体，72％产率。Mp：161-163℃.¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：7.44(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，7.29(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，4.07(s，2H，ArCH₂N)，3.93(s，3H，OCH₃)，2.70-2.68(t，2H，J＝7.1Hz，NCH₂)，2.53(s，3H，CH₃CO)，1.56-1.51(m，2H，CH₃CH₂CH₂CH₂)，1.41-1.33(m，2H，CH₃CH₂CH₂CH₂)，0.93-0.90(t，3H，J＝7.3Hz，CH₃CH₂).MS(ESI)m/z 250[M-H]⁺，252[M+H]⁺。

实施例9.胡黄连素衍生物9(5-硫辛酸酰胺基-4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮)的合成

向20mlα-硫辛酸(1.58g，7.68mmol)DMF溶液中加入EDCI(1.46g，7.68mmol)和HOBT(1.03g，7.68mmol)，反应液在室温下反应2小时。往反应液中滴入10ml 5-胺基4-羟基-3-甲氧基-苯乙酮(463mg，2.56mmol)DMF溶液，继续在室温下反应20小时。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，并水洗3次(50ml×3)，有机层干燥浓缩后用乙酸乙酯/石油醚(3∶2)柱分离，得到淡黄色粉末330mg，35％产率。Mp：115-116℃.¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：8.50(s，1H，NH)，7.63(s，1H，ArH)，7.37(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，3.96(s，3H，OCH₃)，3.64-3.58(m，1H，SCH)，3.23-3.10(m，2H，SCH₂)，2.59(s，3H，COCH₃)，2.49-2.46(t，2H，J＝6.7Hz，CH₂CO)，1.98-1.89(m，2H，SCH₂CH₂)，1.86-1.78(m，2H，CH₂CH₂O)，1.77-1.72(m，2H，CH₂CH₂CH)，1.61-1.53(m，2H，CH₂CH₂CH₂).MS(ESI)m/z 392[M+Na]⁺。

实施例10.胡黄连素衍生物化学抗氧化活性试验

邻苯三酚在自氧化过程产生超氧阴离子自由基O₂ ^-，O₂ ^-与某些化合物的作用，产生具有特定吸收的有色物质，利用分光光度计测定O₂ ^-的浓度来测定受试化合物的化学抗氧化活性。结果显示，新的胡黄连素衍生物在高浓度下表现出比胡黄连素更强的化学抗氧化作用，见图1。

实施例11.清除RAW264.7细胞活性氧试验

胡黄连素与实施例2所得化合物(APO-2)用于考察清除活性氧试验，用DCFH-DA(2′，7′-dichlorofluorescein diacetate)标识RAW264.7细胞，其DCFH部分能与活性氧(ROS)结合结合并发出荧光，用H₂O₂诱导产生ROS，观察各受试药物对ROS的抑抑制作用。结果显示胡黄连素在低剂量下能有效地清除活性氧，高剂量却促进活性氧的产生。APO-2在高剂量下能显著清除活性氧，与阳性对照半胱胺酸相符，其活性优于胡黄连素。见图2。

实施例12.胡黄连素与化合物9(AP-LA)抑制NADPH氧化酶活性

选用RAW 264.7细胞，用不同浓度衍生物AP-LA(0.1，1，10μM)以及胡黄连素(0.1，1，10μM)处理1h，然后用200μM t-BHP(叔丁基过氧化氢处理)12h后，加入预冷的RIPA裂解液于冰上裂解10min，收集细胞裂解物于离心管中，离心10min，吸取上清，用BCA蛋白定量试剂盒测各个样品浓度。用凝胶图像分析软件Image J对gp67phox蛋白表达进行相对定量分析，以gp67phox条带的积分光密度与β-actin的比值代表gp67phox的相对表达量。图3结果显示，AP-LA对NADPH氧化酶亚基gp67表达降低明显，且优于阳性对照药胡黄连素组。

实施例13.胡黄连素与化合物2(APO-2)抗肺损伤实验

大鼠经LPS(200μL/200μg)诱导建立COPD模型，通过灌胃给药胡黄连素或APO-2(实施例2所得化合物)两个星期。将老鼠处死，对肺进行形态学和组织学研究。结果如图4所示，胡黄连素和APO-2均能缓解COPD症状，减小肺肿大的体积，改善炎症情况。且APO-2的活性明显忧于胡黄连素。本实施例还可以证明胡黄连素及其衍生物对其他可以通过清除自由基治疗的疾病如高血压和脑中风也有很好的治疗作用。

在上文中，结合一些具体的实施方案针对本发明的化合物及其制备方法和应用进行了描述。但应当理解，本发明的保护范围不应受到这些具体实施方案的过度限制。事实上，对本文所提供的实施方案的修改或调整对于本领域技术人员来说并不偏离本发明的主旨和范围，因而包涵在本发明之中。

Claims (8)

1.一种新的胡黄连素(Apocynin)衍生物，其具有如下通式I的结构：

其中，或而且

R₁为-CH₂CH₂CH₂CH₃，-C(CH₃)₃或2’-羟基-3’-甲氧基-5’-乙酰基苯基，

R₂为-C(CH₃)₃，

R₃为具有抗氧化活性的硫辛酰基。

2.根据权利要求1所述的胡黄连素衍生物，其中所述R＝而所述R₁为2’-羟基-3’-甲氧基-5’-乙酰基苯基，即从而所述胡黄连素衍生物具有式II所示的结构

3.根据权利要求1所述的胡黄连素衍生物，其中所述R＝而所述R₂为-C(CH₃)₃，即所述胡黄连素衍生物具有式III所示的结构

4.根据权利要求1所述的胡黄连素衍生物，其中所述而所述R₃为即所述胡黄连素衍生物具有式IV所示的结构

5.一种药物组合物，其包含权利要求1至4中任一项所述的胡黄连素衍生物以及药学上可接受的载体。

6.根据权利要求1所述的胡黄连素衍生物在制备抗氧化药物中的用途。

7.根据权利要求1所述的一种胡黄连素衍生物在制备治疗急性肺损伤药物中的用途。

8.根据权利要求6或7所述的用途，其中所述药物制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、丸剂、贴剂、口服液或注射剂。