CN102258637A - 裸花紫珠提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种裸花紫珠提取物、制备方法及其应用，具体提供了一种裸花紫珠提取物和制备方法，以及该提取物在制备抑菌、止血、镇痛、收敛的药物的应用，同时还提供以该提取物为在口腔清洁产品中的应用。

Description

裸花紫珠提取物及其制备方法和应用

  

技术领域

[0001] 本发明涉及指裸花紫珠提取物及其制备方法和用途，更具体的说，裸花紫珠提取物在制备抑菌、止血、镇痛、收敛的药物的应用以及在制备牙膏、口胶、漱口水、口香喷雾剂、含片等口腔清洁用品中的应用。 

背景技术

裸花紫珠(CallicarpanudifloraHook.exArn.)为马鞭草科(Verbenaceae)紫珠属植物，主产于我国海南，是一种海南地道药材，我国广东、广西也有分布。国外主要分布于印度、越南和马来西亚。其根、叶可入药，有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消肿，驱风祛湿等功效，主治化脓性炎症、急性传染性肝炎、呼吸道及消化道出血、创伤出血等症，外用治烧、烫伤及外伤出血等。 

裸花紫珠近年来广泛应用于医药、化妆品等领域中，如： 

CN200910142774.7，该发明提供了一种本发明提供了一种有抗菌、抗炎及止血作用的黎药裸花紫珠提取物及其制备方法以及含有该活性提取物的药物组合物。用它可以制备成用来治疗细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，子宫、阴道、呼吸道及消化道等腔道出血的口服制剂。

JP20060035045，该发明提供一种含有裸花紫珠提取物的抗老化剂、减肥制剂和化妆品。 

目前已有的裸花紫珠提取工艺主要为水提或者有机溶剂提取，且一般使用的原料为裸花紫珠采收后干燥的原料。但发明人发现裸花紫珠干品的有效成分含量不高，影响提取物及下游终端产品的有效成分含量和组成，进而影响其作用效果。 

因此，本发明所要解决的技术问题在于对裸花紫珠的工艺进行进一步的深入研究，从而提供一种活性成分含量更高，更有效的裸花紫珠提取物及其以及以该提取物在制备抑菌、止血、镇痛、收敛等作用的药物的应用，同时还提供以该提取物在口腔清洁产品中的应用。 

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种裸花紫珠提取物，该提取物以裸花紫珠鲜药材为原料，新鲜原料经提取，浓缩得到裸花紫珠提取物。 

裸花紫珠提取物的原料采用新鲜状态的裸花紫珠地上部分，优选夏季和秋季的裸花紫珠叶和/或嫩枝。 

所述的提取物的制备方法包括以下几种： 

方法一：采用裸花紫珠新鲜原料，加入水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。

方法二：采用裸花紫珠新鲜原料，加入水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。 

方法三：新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。 

方法四：新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。 

方法五：新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。 

方法六，新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。 

方法七：新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。 

方法八：新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。 

方法三至八中所述的压榨是采用重量比为1~3：1的水或稀醇或稀酮与新鲜裸花紫珠混合。 

本发明实现了最大程度地从裸花紫珠中提取有效活性成分，发明人对裸花紫珠的提取方式（榨取、加热）、采收时间（春季、夏季、秋季、冬季）和不同干燥状态（新鲜、干品）进行了系统研究，结果如下表： 

注意：以上指标均按鲜品计。

在常规的提取工艺中，一般所用的为晒干的裸花紫珠，研究结果说明裸花紫珠的提取得率、总黄酮和木犀草素、总鞣质含量与采收季节、提取方式和药材干燥状态有关。 

1）新鲜的状态的裸花紫珠加热提取的提取得率、总黄酮和木犀草素、总鞣质含量均比相同时期的干品高。以秋季采收的裸花紫珠为例，新鲜裸花紫珠中的提取得率、总黄酮含量、木犀草素、总鞣质含量分别是干品的1.20、1.59、1.52、1.05倍，说明原料在干燥过程中有效成分的丧失了大部分。 

2）与加热提取相比，榨取明显提高了裸花紫珠的得率、总黄酮和木犀草素、总鞣质含量。以秋季采收的裸花紫珠为例，新鲜裸花紫珠榨取的得率、总黄酮含量、木犀草素、总鞣质含量分别是干品的1.13、1.23、1.20、1.14倍。 

3）不同采收季节的裸花紫珠的得率、总黄酮和木犀草素含量有一定差异，研究表明夏季和秋季时期的提取得率、总黄酮和木犀草素含量优于春季和冬季。 

发明的第二个目的是提供上述提取物在制备抑菌、止血、镇痛、收敛的药物的应用。 

发明的第三个目的是提供上述提取物在制备牙膏、口胶、漱口水、口香喷雾剂、含片等口腔清洁用品中的应用，由裸花紫珠提取物与常规原料按常规工艺制成，裸花紫珠提取物为上述口腔清洁用品重量的1-20%。 

  

本发明相对于现有技术，具有如下优点和技术效果：

本发明以裸花紫珠鲜药材为原料，其活性成分总黄酮和木犀草素、总鞣质含量较干品高，提取率大大提高，有利于节约成本，提高资源利用率。另一方面直接以裸花紫珠鲜品为原料，减少有效物质的损失，有利于提高有效物质成分群的作用，提高产品的作用效果。

  

具体实施例

实施例一 

取8月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加热提取两次，每次加水8kg，提取2小时，合并滤液，滤过，浓缩，干燥得90.6g提取物，裸花紫珠提取得率为9.06%，测得总黄酮含量为48.2mg/g，木犀草素含量为0.65mg/g，总鞣质含量15.61%（按新鲜药材计）。

实施例二 

取8月采收的新鲜裸花紫珠叶和嫩枝各0.5kg，加热提取两次，每次加水8kg，提取2小时，合并滤液，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用80％的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得74.3g提取物，裸花紫珠提取得率为7.43%，测得总黄酮含量为53.1mg/g，木犀草素含量为0.50mg/g（按新鲜药材计）。

实施例三 

取10月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成匀浆，压榨，滤过，浓缩，干燥得109.3g提取物，裸花紫珠提取得率为10.93%，测得总黄酮含量为59.4mg/g，木犀草素含量为0.75mg/g，总鞣质含量17.95%（按新鲜药材计）。

实施例四 

取10月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成匀浆，压榨，压榨渣加3kg水加热提取，提取液滤过，浓缩，干燥得12.1g提取物，裸花紫珠提取得率为1.21%，测得总黄酮含量为10.2mg/g，木犀草素含量为0.06mg/g，总鞣质含量2.11%（按新鲜药材计）。

实施例五 

取8月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成匀浆，压榨，压榨液滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用70%的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得83.4g提取物，裸花紫珠提取得率为8.34%，测得总黄酮含量为58.6mg/g，木犀草素含量为0.75mg/g（按新鲜药材计）。

实施例六 

取8月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成匀浆，压榨，压榨渣加3kg水加热提取，提取液滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用70%的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得9.5g提取物，裸花紫珠提取得率为0.95%，测得总黄酮含量为8.7mg/g，木犀草素含量为0.04mg/g（按新鲜药材计）。

实施例七 

取10月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成匀浆，压榨，压榨渣加3kg水加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，浓缩，干燥得122.1g提取物，裸花紫珠提取得率为12.21%，测得总黄酮含量为64.7mg/g，木犀草素含量为0.82mg/g，总鞣质含量19.22%（按新鲜药材计）。

实施例八 

取8月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成匀浆，压榨，压榨渣加3kg水加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用70%的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得94.2g提取物，裸花紫珠提取得率为9.42%，测得总黄酮含量为67.4mg/g，木犀草素含量为0.79mg/g（按新鲜药材计）。

实施例九

本发明裸花紫珠提取物的有关药效试验如下：

1、抑菌作用

通过体外抑菌实验，以最低抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）指标评价本发明制备的裸花紫珠提取物对常见菌株的抗菌作用。

菌液制备：挑取斜面菌种接种于20%牛浸汁培养基中，37℃培养过夜，再用20%牛浸汁培养基将菌液稀释至10cfu/ml，立即接种。 

MIC测定：采用液体试管连续稀释法，用20%牛浸汁培养基将样品作连续对倍稀释。将1.0 ml加入灭菌试管中，每管加入0.05 ml标准新鲜菌液，并设菌株对照及溶媒对照组，37℃培养18～24小时，观察细菌生长情况，以无菌生长的最高稀释度为MIC。 

MBC测定：采用平板划线接种法，从被判为MIC及MIC相邻两管的培养基中挑取培养液接种至10%血清MH肉汤琼脂平板上，37℃培养18～24小时，以生长菌落数≤5个的最高稀释度为MBC。 

试验结果见表一。 

表一 裸花紫珠提取物体外抗菌试验结果 

本发明制备的裸花紫珠提取物与裸花紫珠干药材提取物均具有对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、肺炎球菌、绿脓杆菌、乙型链球菌、丙型链球菌和幽门螺旋杆菌均有不同程度的抑制和杀灭作用，但本发明制备的裸花紫珠提取物效果更好。

、止血作用

用本发明制备的裸花紫珠提取物300、600mg/kg2个剂量组，空白对照组，裸花紫珠干药材提取物组，云南白药组。将50只健康昆明小白鼠随机分5组（每组10只，雌雄各半）。连续给药7天，最后一天给药45min后，用剪尾法测定小鼠出血时间（BT），用毛细玻管法测凝血时间（CT），评价药物止血效果。血液放出后测定凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）含量。

实验数据见下表二和三。 

表二  本发明裸花紫珠提取物对小鼠止血作用的试验结果 

（均数±标准差， N =10）

 *P < 0.05，**P < 0.01与空白对照组比较。

表三  本发明裸花紫珠提取物对小鼠止血作用的试验结果 

（均数±标准差， N =10）

*P < 0.05，**P < 0.01与裸花紫珠干药材提取物组比较。

以上表二和三的数据分析，表明本发明制备的裸花紫珠提取物能缩短BT、CT和PT、APTT及降低FIB含量，具有明显的止血作用。 

、镇痛作用

醋酸所致小鼠扭体反应（扭体实验）

将健康昆明小鼠随机分成5组（每组10只），即用本发明制备的裸花紫珠提取物300、600mg/kg两个剂量组，空白对照组，裸花紫珠干药材提取物组，云南白药组。每日灌胃给予相应药物，连续7天。末次给药后1小时，各组分别腹腔注射 0.6％醋酸溶液0.2 ml/只， 5分钟后观察10分钟内扭体次数，与对照组比较计算扭体抑制率，评价药物的镇痛效果。

实验结果见表四。 

表四  本发明裸花紫珠提取物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 

（均数±标准差，N = 10）

*P < 0.05, **P < 0.01与空白对照组比较。

上述实验表明，本发明制备的裸花紫珠提取物在小鼠扭体试验中均能延长扭体反应出现时间及减少扭体次数。 

、收敛作用

选健康家兔50只，随机分为5组（每组10只，雌雄各半），即用本发明制备的裸花紫珠提取物300、600mg/kg两个剂量组，生理盐水组，裸花紫珠干药材提取物组，云南白药组。实验前将所选家兔均在背部擦伤，形状呈圆形，面积直径约3cm，致局部出现显著的糜烂渗液表现。每天观察一次局部的反应情况，并测量伤口面积。结果见表五。

表五  裸花紫珠提取物对家兔伤口愈合面积的影响 

（均数±标准差，N = 10）

*P < 0.05, **P < 0.01与裸花紫珠干药材组比较。

本实验所有组别与生理盐水组均有显著差异，与裸花紫珠干药材提取物组比，高剂量组和云南白药组有极显著差异，表明本发明制备的裸花紫珠提取物均能显著增加伤口愈合面积，从而提高伤口愈合率。 

  

实施例九

以裸花紫珠提取物为主要成分的药物，裸花紫珠提取物与药学上可接受的辅料制备而成的制剂。制剂剂型包括但不限于喷雾剂、片剂、胶囊、口服液或颗粒剂、栓剂。

、片剂制备

将本发明裸花紫珠提取物100g(实施例一方法制得)，淀粉50g，乳糖100g，羧甲基淀粉钠5g混合均匀，30%乙醇制软材，用18目筛网制粒，60～70℃通风干燥，18目筛整粒，加硬脂酸镁2.5g混匀，压制成1000片，包衣即得。

、胶囊制备

将本发明裸花紫珠提取物100g(实施例二方法制得)，淀粉90g，乳糖60g，30%乙醇制软材，30%乙醇制软材，用18目筛网制粒，干燥，整粒，加硬脂酸镁2g混匀，填充成1000粒，即得。

将本发明裸花紫珠提取物100g(实施例六方法制得)，淀粉90g，乳糖60g，30%乙醇制软材，30%乙醇制软材，用18目筛网制粒，干燥，整粒，加硬脂酸镁2g混匀，填充成1000粒，即得。 

、口服液制备

将本发明裸花紫珠提取物10g(实施例三方法制得)，蔗糖100g、苯甲酸钠1g及蒸馏水500ml混合，溶解，加水稀释至1000ml，滤过，灌装（每支10毫升），灭菌即得。

、颗粒剂制备

取本发明裸花紫珠提取物10g(实施例四方法制得)、糊精80g、蔗糖160g及水适量，混匀，过12目筛制粒，干燥，整粒，分装即得，每包重5 g。

、喷雾剂制备

取本发明裸花紫珠提取物2g(实施例五方法制得)，尼泊金0.3g，加蒸馏水适量溶解，滤过，再加蒸馏水至1000ml，灌装，灭菌即得。

取本发明裸花紫珠提取物2g(实施例八方法制得)，尼泊金0.3g，加蒸馏水适量溶解，滤过，再加蒸馏水至1000ml，灌装，灭菌即得。 

、栓剂制备

将本发明裸花紫珠提取物100g(实施例七方法制得)，取混合脂肪酸甘油酯98g，于45℃以下溶化，加入裸花紫珠提取物粉末，混合均匀，浇模，冷却，制成100粒。直肠给药，一次1粒，一日1~2次。

实施例十

以裸花紫珠提取物为主要成成分，按常规制作工艺制得相应的口腔清洁用品，本发明产品具有清新口气、抑制牙菌斑、缓解口腔炎症（牙龈炎、口腔溃疡）的作用。

、裸花紫珠牙膏

以实施例七制得的裸花紫珠提取物为主要成分，按常规牙膏制作工艺而得的裸花紫珠牙膏。

按如下成分配比： 

裸花紫珠提取物9%

香精       0.5%

二氧化硅   10%

磷酸氢钙    43%

山梨醇      35%

海藻酸钠    1.5%

糖精钠      0.2%

三氯新      0.15%

磷酸二氢钠  1%

甘油        1.5%

水          3.15%

2、裸花紫珠漱口水

以实施例八制得的裸花紫珠提取物为主要成分，按常规漱口水制作工艺而得的裸花紫珠漱口水。

按如下成分配比： 

裸花紫珠提取物20%

精油       0.5%

95%乙醇（食品级）   12%

磷酸二氢钠  0.1%

吐温—80    0.4%

水         83%

3、裸花紫珠口胶

以实施例五制得的裸花紫珠提取物为主要成分，按常规口胶制作工艺而得的裸花紫珠口胶。

按如下成分配比： 

裸花紫珠提取物6%

木糖醇        36%

二氧化钛      15%

柠檬酸        1%

麦芽糖醇      6%

山梨糖醇      3%

阿拉伯胶      2%

D-甘露糖醇    2%

紫胶          2%

菊粉          2%

食用香料      2%

阿斯巴甜      2%

巴西棕榈蜡    2%

安赛蜜        2%

二丁基羟基甲苯1%

胶基           15%

磷脂（大豆磷脂）3%

4、裸花紫珠含片

以实施例三制得的裸花紫珠提取物为主要成分，按常规口胶制作工艺而得的裸花紫珠含片。

按如下成分配比： 

裸花紫珠提取物1%

三氯蔗糖      45%

柠檬酸        1%

麦芽糖醇      3%

山梨糖醇      3%

食用香料      3%

安赛蜜        3%

5、口香喷雾剂

以实施例一制得的裸花紫珠提取物为主要成分，按常规口胶制作工艺而得的裸花紫珠口香喷雾剂。

裸花紫珠提取物  4% 

三氯蔗糖        45%

柠檬酸          1%

麦芽糖醇        3%

山梨糖醇        3%

食用香料        3%

安赛蜜          3%

乙醇            10%

水              余量

实施例十一

1、口气清新功效实验

通过大蒜榨汁液漱口造模，使用本发明产品和阴性对照品后，用口气测量仪测量口腔硫化物含量，采用配对t检验分析实验效果。

表六  本发明裸花紫珠口腔清洁用品的口气清新功效实验结果（N = 40） 

*P < 0.05，**P < 0.01与阴性对照组比较。

通过上表统计分析，将使用本发明产品与阴性对照品进行口气测试值比较，p值＜0.01，具有极显著差异，表明本发明产品具有一定的口气清新功效。 

、对牙龈肿痛、口腔溃疡、牙菌斑、牙龈出血的功效实验

对牙龈肿痛、口腔溃疡、牙菌斑、牙龈出血4个症状各选80名患者，分两组，每组40名，分别使用本发明产品和阴性对照品30天后，观察对牙龈肿痛、口腔溃疡、牙菌斑、牙龈出血的实验效果。根据有效情况分4级，具体如下： 0分：症状、体征消失，一年未复发； 1分：症状、体征有明显改善； 2分：症状、体征均有改善； 3分：症状、体征无改善。

表七  本发明裸花紫珠口腔清洁用品的对牙龈肿痛、牙龈出血的实验结果（X±SD，N = 40） 

*P < 0.05，**P < 0.01与阴性对照组比较。

表八  本发明裸花紫珠口腔清洁用品的对口腔溃疡、牙菌斑的实验结果（X±SD，N = 40） 

*P < 0.05，**P < 0.01与阴性对照组比较。

通过表七和八的统计分析，将使用本发明产品与阴性对照品的实验结果比较，p值＜0.01，具有极显著差异，表明本发明产品在牙龈肿痛、口腔溃疡、牙菌斑、牙龈出血方面具有一定的功效。 

Claims (13)

1.一种裸花紫珠提取物，其特征在于其原料采用新鲜状态的裸花紫珠地上部分，其制备方法为：新鲜原料经提取，浓缩得到裸花紫珠提取物。

2.根据权利要求1所述的裸花紫珠提取物，其特征在于其原料采用新鲜状态的裸花紫珠的叶和/或嫩枝，其制备方法为：新鲜原料经提取，浓缩得到裸花紫珠提取物。

3.根据权利要求1或2所述的提取物的制备方法，其特征在于： 采用裸花紫珠新鲜原料，加入水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。

4.根据权利要求1或2所述的提取物的制备方法，其特征在于： 采用裸花紫珠新鲜原料，加入水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。

5.根据权利要求1或2所述的提取物的制备方法，其特征在于，新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。

6.根据权利要求5所述的提取物的制备方法，其特征在于，所述的压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。

7.根据权利要求5所述的提取物的制备方法，其特征在于所述的压榨液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。

8.根据权利要求6所述的提取物的制备方法，其特征在于所述的滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。

9.根据权利要求5所述的提取物的制备方法，其特征在于：新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。

10.根据权利要求5所述的提取物的制备方法，其特征在于：新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。

11.根据权利要求5所述的提取物的制备方法，其特征在于，所述的压榨是采用重量比为1~3：1的水或稀醇与新鲜裸花紫珠混合。

12.权利要求1或2所述的提取物在制备抑菌、止血、镇痛、收敛的药物的应用。

13.权利要求1或2所述的提取物在制备牙膏、口胶、漱口水、口香喷雾剂、含片等口腔清洁用品中的应用，裸花紫珠提取物为上述口腔清洁用品重量的1-20%。