CN102256977B - 嘌呤化合物 - Google Patents

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Abstract

本本发明提供式(I)化合物以及用于治疗疼痛的药用组合物。

Description

嘌呤化合物
由于存在与现有口服药物有关的副作用，故此，仍然需要开发治疗疼痛的备选疗法。
大麻素受体CB1和CB2属于G-蛋白偶联受体(GPCR)类。CB1受体在中枢和外周表达，而CB2受体主要在外周表达，主要在免疫细胞和组织中表达。
近来，有人对CB2受体的药理和治疗潜力进行了综述(Br.J.Pharmacol.(2008)153，319-334)，确认CB2为治疗疼痛、尤其是炎性和神经疼痛的治疗靶标。
CB2激动剂、尤其是CB2选择性激动剂提供治疗疼痛的目标，而其在中枢系统介导的副作用有限。
WO 2004/037823涉及嘌呤化合物及其作为大麻素受体配体、尤其是作为CB1受体拮抗剂的用途。
本发明提供下式化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0000068781020000011
其中；
R1选自H、F、Cl、C1-C2烷基、CF3、环丙基、OCH3、OCF3和CN；
R2选自四氢呋喃基、四氢吡喃基、氮杂环丁烷-1-甲酸甲酯和四氢噻吩-1，1-二氧化物；
R3为H，或与R4结合形成稠合的吡咯烷-2-酮；
R4选自C1-C2烷基、C1-C2氟烷基、环丙基和COCH3；
R5选自H、CH3和CF3；
n为0或1；
X1和X3独立选自N、CH和CR6；
X2选自CH和CR6；
前提是X1、X2和X3中仅一个可不为CH；
R6选自F、Cl、CF3、OCH3和OCF3。
发明人发现，本发明化合物为体外CB2受体激动剂。优选的本发明化合物的效力显示比现有CB2激动剂强。更优选的本发明化合物为CB2选择性激动剂。最优选的本发明化合物对CB2的选择性大于现有CB2激动剂。
本发明提供药用组合物，该组合物含有本发明化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的稀释剂或载体。
本发明提供用于治疗的式I化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供式I化合物或其药学上可接受的盐，该化合物用于治疗疼痛，尤其是骨关节炎性疼痛。在本发明的另一个方面，提供式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗疼痛、尤其是骨关节炎性疼痛的药物中的用途。
本发明提供治疗疼痛的方法，该方法包括给予有需要的人或动物有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供治疗骨关节炎性疼痛的方法，该方法包括给予有需要的人类或动物有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明提供用于治疗的药用组合物，该组合物含有本发明化合物或其药学上可接受的盐。本发明提供用于疼痛、尤其是骨关节炎性疼痛的药用组合物，该组合物含有本发明化合物或其药学上可接受的盐。
优选，本发明化合物可用于治疗疼痛，尤其是炎性疼痛，更尤其是关节疼痛，最尤其是骨关节炎性疼痛。
优选的本发明化合物为下式化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0000068781020000031
其中R1、R2、R4、X1、X2和X3定义同本文。
优选的本发明化合物为下式化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0000068781020000032
其中R1、R2和R4定义同本文。
优选某些种类的式I、II或III化合物。以下列举的选项描述此类优选的种类：
1)R1为Cl、C1-C2烷基、CF3、环丙基或OCF3；
2)R1为Cl、甲基或乙基；
3)R1为Cl；
4)R2为四氢呋喃基或四氢吡喃基；
5)R2为四氢呋喃基；
6)R2为四氢吡喃基；
7)R3为H；
8)R4为C1-C2烷基、C1-C2氟烷基或环丙基；
9)R4为甲基、乙基、2-氟乙基或环丙基；
10)R4为甲基或乙基；
11)R5为CH3；
12)X1、X2和X3独立选自CH和CR6，其中R6选自Cl、CF3、OCH3或OCF3；
13)X1、X2和X3为CH；
14)n为0；
15)R3为H，R5为CH3；
16)R1为Cl、甲基或乙基；R4为甲基、乙基、2-氟乙基或环丙基；
17)R1为Cl、甲基或乙基；R2为四氢呋喃基或四氢吡喃基；且R4为甲基、乙基、2-氟乙基或环丙基；
18)R1为Cl；R2为四氢呋喃基或四氢吡喃基；且R4为甲基、乙基、2-氟乙基或环丙基；
19)R1为Cl；R2为四氢呋喃基或四氢吡喃基；且R4为甲基或乙基；
20)R1为Cl；R2为四氢呋喃基或四氢吡喃基；且R4为甲基或乙基；
X1、X2和X3独立选自CH和CR6，其中R6选自Cl、CF3、OCH3或OCF3。
各个本发明化合物的药学上可接受的盐也在本申请的范围内。
优选的本发明化合物包括
8-(2-氯-吡啶-3-基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤；
2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基)-8-(2-三氟甲基-苯基)-9H-嘌呤；
2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-8-(2-三氟甲基-苯基)-9H-嘌呤；
2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-8-邻-甲苯基-9H-嘌呤；
8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(S)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤；
8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤；
8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基)-9H-嘌呤；和
8-(2-氯-苯基)-6-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-甲基-9-(四氢-吡喃-4-基甲基)-9H-嘌呤；
或其药学上可接受的盐。
可以理解，在本说明书的全文中，当基团定义为“如本文中所定义”时，所述基团包括该基团首次出现的最广泛的定义以及该基团的各个及所有具体的定义。
除另有说明外，在以上和本发明说明书全文中使用的以下术语具有以下含义：
本文中使用的术语C1-C2烷基是指甲基或乙基；
本文中使用的术语C1-C2氟烷基是指本文中定义的C1-C2烷基，其中一个或多个氢被氟取代，它们包括三氟甲基、2-氟乙基、2，2-二氟乙基和2，2，2三氟乙基。优选的C1-C2氟烷基为2-氟乙基。
本文中使用的术语“药学上可接受的盐”是指对活生物体基本上无毒性的本发明化合物的盐。此类盐和制备它们的常用方法在本领域中已知。参见例如P.Stahl等Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties Selectionand Use(药用盐手册：性质、选择和使用)，(VCHA/Wiley-VCH，2002)；和J.Pharm.Sci.66，2-19(1977)。优选的药学上可接受的盐为盐酸盐和磷酸盐。
本发明实施方案包括本文中提供的示例，尽管提供的示例可为一个手性或构象式或其盐的实例，但另外的本发明实施方案包括所有其它所述实例的所有其它立体异构体和或构象式以及其药学上可接受的盐。
本文中使用的术语“CB2选择性激动剂”或“CB2选择性”是指化合物在CB2中的效力大于CB1。优选的本发明化合物显示对CB2选择性≥100倍。更优选的本发明化合物显示对CB2选择性≥500倍。最优选的本发明化合物显示对CB2选择性≥1000倍。
优选将本发明化合物配制为通过多种途径给药的药用组合物。优选，此类组合物用于口服给药。此类药用组合物和制备它们的方法在本领域中熟知。参见例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy(Remington：药剂科学和实践)(A，Gennaro，等编辑，第19版，MackPublishing Co.，1995)。
提供以下流程、方法和实施例以更好地说明本发明的实施。用于这些流程、方法和实施例的步骤的合适的反应条件在本领域中熟知，包括替代溶剂和助溶剂在内的适当的反应条件的改进在技术人员的能力范围内。
另外，技术人员还会意识到，在某些情况下，引入部分的顺序并不重要。如化学技术人员足以意识到的那样，制备式I化合物所需步骤的特定顺序取决于合成的具体化合物、原料和取代的基团的相对不稳定。技术人员会意识到，并非所有取代基均符合所有反应条件。可通过本领域熟知的方法，在合成的便利点将这些化合物保护或修饰。
合适的保护基包括在T.W.Greene，“Protective Groups in OrganicSynthesis”(有机合成中的保护基)，John Wiley和Sons，纽约，N.Y.，1991下文中称为“Greene”中所述的那些基团。Greene列出了技术人员使用的合适保护基的“保护”和“脱保护”的合适条件。
可酌情，通过普通技术例如重结晶或经固体载体例如硅胶或氧化铝层析将本发明的中间体和终产物进一步纯化。
本发明化合物名称用AutoNom 2000生成。
本文中使用的缩写定义如下：
“盐水”是指饱和氯化钠水溶液；“BSA”是指牛血清白蛋白，“DDQ”是指2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌；“DMEA”是指N-乙基二甲胺；“EDTA”是指乙二胺四乙酸；“EtOH”表示乙醇；“GCMS”表示气相色谱-质谱；“GDP”是指二磷酸鸟苷；“HEPES”是指4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸；“IPA”是指2-丙醇；“IPAm”是指2-丙胺；“L.R.”是指限制剂(limitingreagent)；“MeOH”是指甲醇；“PTSA”是指对-甲苯磺酸；“SCX”是指二氧化硅基强阳离子交换树脂柱、一次性短柱或等同物；“SFC”是指超临界流体色谱。
流程A
Figure BDA0000068781020000071
在升高的温度下，在合适的溶剂例如异丙醇中，使原料嘧啶(a)与适当取代的胺和合适的碱例如二异丙基乙胺或三乙胺反应，得到化合物(b)。
流程B
Figure BDA0000068781020000072
在降低的温度下，在合适的溶剂例如无水乙醚中，使原料溴化物(c-i)与强碱例如正丁基锂和N，N-二甲基甲酰胺反应，得到化合物(c)。
在升高的温度下，在合适的催化剂例如二氯·(1，1′-二(二苯基膦)二茂铁)合钯(II)或Pd(OAc)2和合适的碱例如氟化铯的存在下，在合适的溶剂例如1，4-二
Figure BDA0000068781020000073
烷或甲苯中，用Suzuki偶联条件，使原料醛(c-ii)与R1硼酸衍生物反应，得到化合物(c)。
流程C
Figure BDA0000068781020000074
在升高的温度下，在合适的酸例如对-甲苯磺酸或披15％三氯化铁硅胶的存在下，在合适的溶剂例如1，4-二
Figure BDA0000068781020000075
烷或甲苯中，使原料嘧啶(b)与醛(c)(其中X1-X4独立选自CH和CR6)反应。将反应混合物过滤，浓缩，然后在降低的温度下，在合适的溶剂例如二氯甲烷中，使浓缩物与DDQ反应，得到嘌呤(d)。
在升高的温度下，在合适的酸例如对-甲苯磺酸的存在下，在合适的溶剂例如甲苯中，使原料嘧啶(b)与醛(c)(其中X1-X4中的一个为N)反应。将反应混合物过滤，浓缩，然后在升高的温度下，使浓缩物与亚硫酰氯反应，得到嘌呤(d)。
通用方法2-1：
将嘧啶(b)(1.0当量，L.R.)、醛(c)(2.0当量)和披15％氯化铁硅胶(200％(重量)，按L.R.计)在1，4-二
Figure BDA0000068781020000081
烷中的混合物加热至100℃，保持16小时。冷却，将硅胶通过硅藻土滤除，将滤液减压过滤，得到残渣。在0℃下，将残渣溶于无水二氯甲烷，加入DDQ(1.0当量)。搅拌下，使反应温度升至室温。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用15％氢氧化钠水溶液、水和盐水洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到残渣。残渣经硅胶闪层析纯化，得到嘌呤(d)。
通用方法2-2：
将嘧啶(b)(1.0当量，L.R.)、醛(c)(2当量)、对-甲苯磺酸(10％(重量)，按L.R.计)和分子筛(200％(重量)，按L.R.计)的甲苯溶液加热回流16小时。冷却，将分子筛通过硅藻土滤除，将滤液减压浓缩，得到残渣。将残渣溶于无水二氯甲烷，在0℃下，加入DDQ(1.0当量)。搅拌下，使反应温度升至室温。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用1N氢氧化钠、水和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到残渣。残渣经硅胶闪层析纯化，得到嘌呤(d)。
通用方法2-3：
将嘧啶(b)(1.0当量，L.R.)、醛(c)(1.1当量)、甲苯和对-甲苯磺酸一水合物(0.05当量)加入反应容器。在氮气下，在100℃下搅拌1小时。冷却至室温，经硅藻土过滤，减压浓缩。然后，在氮气下，在室温下，向粗油状物(亚胺)中缓慢加入亚硫酰氯(纯净/溶剂)。回流下搅拌30分钟。冷却至室温，减压浓缩。加入甲苯，减压除去，再重复一次。将浓缩物溶于二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠水溶液缓慢碱化。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。经硅胶闪层析纯化，得到嘌呤(d)。
流程D
Figure BDA0000068781020000091
在升高的温度下，在合适的碱例如三乙胺的存在下，在合适的溶剂例如乙醇中，使原料嘌呤(d)与适当取代的哌嗪反应，得到化合物(e)。
流程E
在升高的温度下，在合适的溶剂例如乙醇中，使原料嘌呤(d-i)与适当取代的哌嗪和合适的碱例如三乙胺反应，得到化合物(e-i)。
在升高的温度下，在合适的催化剂例如Pd(PPh3)4的存在下，在合适的溶剂例如N,N-二甲基甲酰胺中，使嘌呤(e-i)与氰化锌反应，得到化合物(e-ii)。
流程F
Figure BDA0000068781020000101
在升高的温度下，在合适的溶剂例如甲氧基苯或二甲基亚砜中，使原料嘧啶(b)与醛(c)、适当取代的哌嗪和合适的氧化剂例如硝基苯或乙酸反应，得到化合物(e)。
流程G
Figure BDA0000068781020000102
在降低的温度下，使溶于合适的溶剂例如二甲基乙酰胺的原料嘧啶(b)溶液与适当取代的酰氯(f)反应，得到化合物(g)。
在合适的溶剂例如异丙醇中，在升高的温度和压力下，在适当取代的哌嗪和合适的碱例如二乙丙基乙胺的存在下，使嘧啶(g)反应，得到化合物(e)。
制备1：
6-氯-2-甲基-N＊4＊-(四氢-吡喃-4-基)-嘧啶-4，5-二胺
Figure BDA0000068781020000111
在密闭试管中，将4，6-二氯-2-甲基-嘧啶-5-基胺(0.008mol，1.5g，1.0当量)、4-氨基四氢吡喃(0.012mol，1.27g，1.5当量)和N，N-二异丙基乙胺(0.0092mol，1.1g，1.1当量)的2-丙醇(80mL)溶液在150℃下加热16小时。将反应化合物冷却至室温，将2-丙醇减压除去，得到残渣。将残渣溶于二氯甲烷，用水和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到残渣。残渣经硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷∶甲醇96∶4洗脱，得到标题化合物。MS(m/z)：243.41(M+1).
可基本上按制备1所述，根据流程A用合适的胺制备表1中的制备2-12的化合物。
表1
Figure BDA0000068781020000112
Figure BDA0000068781020000121
制备13：
2-环丙基-苯甲醛
Figure BDA0000068781020000132
向60mL反应瓶中加入2-溴-苯甲醛(10.810mmol，1.264mL)、环丙基硼酸(14.053mmol，1.207g)、磷酸三钾N-水合物(tribasic N-hydrate)(37.834mmol，8.031g)、三环己基膦(1.081mmol，303.139mg)、甲苯(283.654mmol，30.000mL)和水(83.263mmol，1.500mL)。然后将混合物充分脱气。然后，加入Pd(OAc)2(540.482μmol，121.343mg)，将混合物置于氮气下，加热至100℃。2小时后，冷却至室温，用乙酸乙酯(50mL)和盐水(50mL)稀释。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。经硅胶层析纯化，用己烷∶二氯甲烷20-50％洗脱，得到标题化合物。1H NMR(400.31MHz，cdcl3)：10.57(s，1H)，7.78(dd，J＝1.3，7.9Hz，1H)，7.45(td，J＝7.5，1.3Hz，1H)，7.28(t，J＝7.5Hz，1H)，7.09(d，J＝7.9Hz，1H)，2.63-2.56(m，1H)，1.07-1.02(m，2H)，0.77-0.73(m，2H).
制备14：
2-环丙基-吡啶-3-甲醛
向40mL反应瓶中加入3mL 1，4-二
Figure BDA0000068781020000142
烷和搅拌棒。用氮气脱气5分钟。然后，向瓶中加入2-溴烟碱醛(645.134μmol，120.000mg)、环丙基硼酸(1.290mmol，110.831mg)和氟化铯(1.935mmol，293.995mg)。然后将瓶再用氮气脱气。然后，加入二氯·(1，1′-二(二苯基膦)二茂铁)合钯(II)(32.257μmol，26.342mg)，在氮气下，将反应混合物加热至100℃。反应完成后，将混合物冷却至室温，经硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物。GCMS(m/z)：146(M).
用表2中列示的通用方法2-1至2-3，根据流程C用适当取代的嘧啶制备表2中的制备15-47的化合物。
表2
Figure BDA0000068781020000151
Figure BDA0000068781020000161
Figure BDA0000068781020000171
Figure BDA0000068781020000191
制备48：
6-氯-8-(2-氯-吡啶-3-基)-2-甲基-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤
向反应瓶中加入R-6-氯-2-甲基-N4-(四氢-呋喃-3-基)-嘧啶-4，5-二胺(2.186mmol，500.000mg)、2-溴烟碱醛(3.280mmol，610.046mg)、甲苯(94.551mmol，10.000mL)和PTSA一水合物(109.323μmol，20.795mg)。在氮气下，在100℃下加热1小时。冷却至室温，过滤，减压浓缩。然后，在室温、氮气下，向粗油状物(亚胺)中缓慢加入亚硫酰氯(68.630mmol，5.000mL)。加热至80℃，保持30分钟。减压浓缩。加入甲苯(～10mL)，减压除去，再重复一次。将残渣溶于二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠水溶液缓慢碱化。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。经硅胶层析纯化，用己烷∶丙酮洗脱，得到标题化合物(648mg)。MS(m/z)：350(M+1).
制备49：
1-(2-氟-乙基)-哌嗪盐酸盐
Figure BDA0000068781020000201
步骤1：
向反应容器中加入N-叔-丁氧基羰基哌嗪(8.590mmol，1.600g)、碳酸钾(25.771mmol，3.562g)、碘化钠(cat.)(66.714μmol，10.000mg)、1，4-二
Figure BDA0000068781020000202
烷(234.262mmol，20.000mL)、1-溴-2-氟乙烷(9.449mmol，704.029μL)和搅拌棒。搅拌下，加热回流过夜。反应完成后，冷却至室温，减压浓缩。用乙酸乙酯和水分配。将有机相分离，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到纯4-(2-氟-乙基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯。GCMS(m/z)：232(M).
步骤2：
在氮气、室温、搅拌下，将4N HCl的二
Figure BDA0000068781020000203
烷(86.096mmol，21.524mL)溶液加入4-(2-氟-乙基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(8.610mmol，2.000g)的无水二氯甲烷(60mL)溶液。在氮气下搅拌过夜。减压浓缩，得到标题化合物(8.679mmol，1.780g)。MS(m/z)：133(M+1).
实施例1：
8-(2-氯-苯基)-6-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-甲基-9-(四氢-吡喃-4-基)-9H-嘌呤盐酸盐
Figure BDA0000068781020000211
将6-氯-8-(2-氯苯基)-2-甲基-9-(四氢-2H-吡喃-4-基)-9H-嘌呤(0.0005mol，0.2g)、N-乙基哌嗪(0.0006mol，0.069g，1.1当量)和三乙胺(0.0006mol，0.061g，1.1当量)的乙醇(5.0mL)溶液加热回流20小时。或者，在微波辐照下，加热反应物。反应完成后，将反应混合物减压浓缩。将残渣溶于无水二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到残渣。经硅胶层析纯化，用己烷∶丙酮90∶10洗脱，得到游离碱。在0℃下，将HCl(2M的乙醇溶液)(1.0当量)加入游离碱(0.23g，0.500mmol)的乙醚(5mL)溶液，在室温下搅拌2小时。过滤，将沉淀用乙醚洗涤。将沉淀真空干燥，得到标题化合物(0.2g)。MS(m/z)：441.28(M+1).
或者，通过将游离碱溶于丙酮、1∶1乙腈∶水，或另一种合适的有机溶剂，然后在搅拌下加入HCl水溶液或醚溶液，制备HCl盐。然后冷冻干燥得到盐酸盐。
可基本上按实施例1中所述，根据流程D，用适当取代的嘌呤和适当取代的哌嗪制备表3中实施例2-72的化合物。
表3
Figure BDA0000068781020000212
Figure BDA0000068781020000231
Figure BDA0000068781020000251
Figure BDA0000068781020000271
Figure BDA0000068781020000291
Figure BDA0000068781020000301
Figure BDA0000068781020000311
Figure BDA0000068781020000321
Figure BDA0000068781020000331
Figure BDA0000068781020000341
Figure BDA0000068781020000351
Figure BDA0000068781020000371
上标a-r代表手性分离条件：异构体1先从分析手性柱上洗脱，然后异构体2从手性柱上洗脱。
a.RegisPack SFC，洗脱液：10％EtOH(0.2％IPAm)/CO2
b.Chiralpak AS-H，洗脱液：100％MeOH(0.2％DMEA)
c.Chiralpak AD-H，洗脱液40∶60IPA∶庚烷(0.2％DMEA)
d.Chiralpak AD-H SFC，洗脱液：20％IPA(0.2％IPAm)/CO2
e.Chiralpak AD-H SFC，洗脱液：7％MeOH (0.2％IPAm)/CO2
f.Chiralpak AS-H，洗脱液：100％EtOH
g.Chiralpak AD-H，洗脱液：30∶70IPA∶庚烷(0.2％DMEA)
h.Chiralpak AD-H SFC，洗脱液：10％EtOH(0.2％IPAm)/CO2
I.Chiralcel OJ-H SFC，洗脱液：10％MeOH(0.2％IPAm)/CO2
J.Chiralpak AD-H SFC，洗脱液：10％EtOH(0.2％IPAm)/CO2
k.Chiralpak AD-H，洗脱液：15∶85IPA∶庚烷(0.2DMEA)
l.Chiralpak AD-H SFC，洗脱液：20％MeOH(0.2％IPAm)/CO2
m.Chiralpak AD-H SFC，洗脱液：10％EtOH (0.2％IPAm)CO2
n.Chiralpak AD-H SFC，洗脱液：10％EtOH(0.2％IPAm)CO2
o.Chiralpak AS-H SFC，洗脱液：10％MeOH(0.2％IPAm)/CO2
p.Chiralpak AD-H，洗脱液：5∶95EtOH∶庚烷(0.2％DMEA)
q.Chiralpak AS-H，洗脱液：100％MeOH(0.2％DMEA)
r.Chiralpak AS-H，洗脱液：100％MeOH(0.2％DMEA)
实施例77：
8-(4-甲氧基-2-甲基-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤
Figure BDA0000068781020000401
将6-氯-2-甲基-N＊4＊-(R)-四氢-呋喃-3-基-嘧啶-4，5-二胺(0.100g，0.402mmol)、4-甲氧基-2-甲基苯甲醛(0.091g，0.603mmol)、N-甲基哌嗪(0.044g，0.443mmol)和硝基苯(0.050g，0.402mmol)溶于甲氧基苯(1.2mL)，加热至140℃，保持2天。然后，在室温下搅拌3天。然后，减压浓缩，在2NHCl水溶液和二氯甲烷之间分配，用二氯甲烷洗涤。将水相碱化至pH 12，用二氯甲烷萃取。将有机相加载在5g SCX-2 柱上，用甲醇洗涤，然后用2N氨水的甲醇溶液洗脱产物。经制备高效液相色谱纯化，在水/乙腈中冻干，得到标题化合物，为游离碱。MS(m/z)：423(M+1).
实施例78
2-[2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-苄腈盐酸盐
Figure BDA0000068781020000411
步骤1：
将8-(2-溴苯基)-6-氯-2-甲基-9-(四氢-2H-吡喃-4-基)-9H-嘌呤(0.0023mol，1.0g)、1-甲基哌嗪(0.0025mol，0.25g，1.1当量)和三乙胺(0.0025mol，0.25g，1.1当量)的乙醇(10.0mL)溶液在90℃下加热16h。将反应混合物减压浓缩。将残渣溶于无水二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到残渣。残渣经硅胶层析纯化，用二氯甲烷∶甲醇97∶3洗脱，得到8-(2-溴-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基)-9H-嘌呤(0.71g)。直接用于下一步。
步骤2：
向微波反应容器中加入8-(2-溴-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基)-9H-嘌呤(0.0015mol，0.7g)、氰化锌(0.0022mol，0.256g，1.5当量)和无水N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)。用氮气脱气三次。加入Pd(PPh3)4(0.0001mol，0.17g，0.1当量)，再用氮气脱气三次。将反应容器封闭，在微波中，在150℃下辐照1小时。将反应混合物冷却至室温，将反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到残渣。残渣经硅胶柱纯化，用二氯甲烷∶甲醇99∶1洗脱，得到游离碱。在0℃下，将HCl(2M的乙醚溶液)(0.026g，0.0007mol，1.0当量)加入2-(2-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)-9-(四氢-2H-吡喃-4-基)-9H-嘌呤-8-基)苄腈(0.3g，0.0007mol)在乙醚(5mL)中的混合物，在室温下搅拌2小时。将沉淀过滤，用乙醚洗涤，真空干燥，得到标题化合物。MS(m/z)：418.29(M+1).
可基本上按与实施例78中两个步骤相同的方法，根据流程E，用适当取代的嘌呤制备表4中实施例79-80的化合物。
表4
Figure BDA0000068781020000421
实施例81：
2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基)-8-邻-甲苯基-9H-嘌呤盐酸盐
Figure BDA0000068781020000422
向6-氯-2-甲基-N＊4＊-(四氢-吡喃-4-基)-嘧啶-4，5-二胺(1g，4.12mmoles)的二甲亚砜(5mL)溶液中依次加入邻甲苯甲醛4.12mmol)、N-甲基哌嗪(4.12mmol)、乙酸(9.89mmol，566.635μL)。在常压下，将该反应物在90℃加热8小时。将物质填入预老化的SCX柱上，用7N氨水的甲醇洗脱，将溶剂蒸发，粗产物经反相色谱纯化。向得到的物质中加入由1当量HCl制成的4M HCl的1，4-二
Figure BDA0000068781020000431
烷溶液。将过量溶剂蒸发，得到标题化合物。MS(m/z)：407(M+1).
可基本上按实施例81中所述，根据流程F，用合适的嘧啶、醛和哌嗪制备表5中实施例82-83的化合物。
表5
Figure BDA0000068781020000432
实施例84：
3-[8-(2-氯-苯基)-6-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-甲基-嘌呤-9-基]-氮杂环丁烷-1-甲酸甲酯
Figure BDA0000068781020000433
步骤1：
将3-(6-氯-8-(2-氯苯基)-2-甲基-9H-嘌呤-9-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.012mol，5.5g)、N-乙基哌嗪(0.013mol，1.59g，1.1当量)和三乙胺(0.013mol，1.41g，1.1当量)的乙醇(25.0mL)溶液在90℃下加热16小时。将反应混合物减压浓缩。将残渣溶于无水二氯甲烷。用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到残渣。残渣经硅胶层析纯化，用二氯甲烷∶甲醇98∶2洗脱，得到3-(8-(2-氯苯基)-6-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-甲基-9H-嘌呤-9-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(3.0g)。MS(m/z)：512.31(M+1).
步骤2：
在0℃下，将三氟乙酸(15mL)加入3-(8-(2-氯苯基)-6-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-甲基-9H-嘌呤-9-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.005mol，3.0g)的二氯甲烷(15mL)溶液，在室温下搅拌2小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，用二氯甲烷萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到9-(氮杂环丁烷-3-基)-8-(2-氯苯基)-6-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-甲基-9H-嘌呤(2.4g)。MS(m/z)：412.22(M+1).
步骤3：
在0℃下，将氯甲酸甲酯(0.0024mol，0.22g，2.5当量)加入9-(氮杂环丁烷-3-基)-8-(2-氯苯基)-6-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-甲基-9H-嘌呤(0.0009mol，0.4g)和吡啶(2mL)的无水二氯甲烷(2mL)溶液，在室温下搅拌2小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，然后用二氯甲烷萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到残渣。残渣经硅胶层析纯化，用二氯甲烷∶甲醇98∶2洗脱，得到标题化合物，为游离碱(0.155g)。MS(m/z)：470.63(M+1).
实施例85：
8-(2-氯-苯基)-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基甲基)-9H-嘌呤盐酸盐
步骤1：
向反应瓶中加入4，6-二氯-嘧啶-5-基胺(12.20mmol，2.00g)、异丙醇(5mL)、C-(四氢-吡喃-4-基)-甲胺(14.63mmol，1.69g)和N，N-二异丙基乙胺(15.85mmol，2.76mL)。在微波中，用高吸收模式，在140℃下振动辐照2小时。将溶剂蒸发，将残渣用二氯甲烷研磨，得到6-氯-N＊4＊-(四氢-吡喃-4-基甲基)-嘧啶-4，5-二胺。
步骤2：
按通用方法2-1，用6-氯-N＊4＊-(四氢-吡喃-4-基甲基)-嘧啶-4，5-二胺制备6-氯-8-(2-氯-苯基)-9-(四氢-吡喃-4-基甲基)-9H-嘌呤。
步骤3：
用N-甲基哌嗪代替6-氯-8-(2-氯-苯基)-9-(四氢-吡喃-4-基甲基)-9H-嘌呤，用与实施例1相同的方法制备盐酸盐，得到标题化合物。MS(m/z)：427(M+1)
实施例86：
8-(2-氯-苯基)-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-2-三氟甲基-9H-嘌呤盐酸盐
Figure BDA0000068781020000452
步骤1：
向微波反应容器中加入4，6-二氯-2-三氟甲基-嘧啶-5-基胺(4.31mmol，1.00g)、异丙醇(3mL)、(R)-(四氢-呋喃-3-基)胺(5.17mmol，639.24mg)、二异丙基乙胺(12.93mmol，2.26mL)。在微波中，用高吸收模式，在140℃下振动辐照2小时。减压浓缩，溶于二氯甲烷，用水(2×150mL)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，蒸发，得到褐色油状物。经硅胶层析纯化，用己烷∶乙酸乙酯0-100％洗脱，得到6-氯-N＊4＊-(R)-四氢-呋喃-3-基-2-三氟甲基-嘧啶-4，5-二胺。
步骤2：
将6-氯-N＊4＊-(R)-四氢-呋喃-3-基-2-三氟甲基-嘧啶-4，5-二胺(2.67mmol，0.756g)和2-氯-苯甲醛(2.94mmol，331.39μL)的无水1，4-二
Figure BDA0000068781020000461
烷(10mL)溶液用披15％氯化铁硅胶(8.56mmol，1.39g)处理，在100℃下加热过夜。通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤。将滤液蒸发，得到6-氯-8-(2-氯-苯基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-2-三氟甲基-9H-嘌呤。
步骤3：
用N-甲基哌嗪代替6-氯-8-(2-氯-苯基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-2-三氟甲基-9H-嘌呤，用与实施例1相同的方法制备盐酸盐，得到标题化合物。MS(m/z)：467(M+1).
实施例87：
8-(2-氯-苯基)-6-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-甲基-9-(四氢-吡喃-4-基甲基)-9H-嘌呤盐酸盐
Figure BDA0000068781020000462
步骤1：
在安装回流冷凝管、氮气插管和搅拌棒的1L圆底烧瓶(rbf)中，将5-氨基-4，6-二氯-2-甲基嘧啶(25g，140mmol)、4-氨基甲基四氢吡喃盐酸盐(36.2g，239mmol)、三乙胺(57mL，407.3mmol)溶于异丙醇(280mL)，加热回流。42小时后，冷却至室温。将溶剂减压除去，将得到的残渣溶于二氯甲烷(300mL)。将有机层用水(2×150mL)和盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到6-氯-2-甲基-N-4-(四氢-吡喃-4-基甲基)-嘧啶-4，5-二胺(38g)。MS(m/z)：257/259(M+1).
步骤2：
在室温下，在安装温度计、冷凝管和垂熔空气插管的1L 3颈圆底烧瓶中，将6-氯-2-甲基-N-4-(四氢-吡喃-4-基甲基)-嘧啶-4，5-二胺(37.6g，146.4mmol)和三氟甲磺酸酮(II)(26.5g，73.2mmol)溶于二甲基甲酰胺(585mL)。然后加入三乙胺(41mL，293mmol)、N-乙基哌嗪(20.6mL，161.1mmol)和2-氯苯甲醛(24.7mL，219.7mmol)，在搅拌、空气搅动(air sparging)下，将混合物加热至100℃至沸腾。
5.5小时后，停止加热，冷却至室温。用乙酸乙酯(1L)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(1×200mL)和氢氧化铵(1×200mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到褐色油状物，经硅胶层析(4％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到8-(2-氯-苯基)-6-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-甲基-9-(四氢-吡喃-4-基甲基)-9H-嘌呤(17.6g)。MS(m/z)：455/457(M+1).
步骤3：
在室温下，搅拌8-(2-氯-苯基)-6-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-甲基-9-(四氢-吡喃-4-基甲基)-9H-嘌呤(5.23g，11.5mmol)的乙醚(45mL)溶液，加入氯化氢(4N的二烷溶液，2.9mL，11.5mmol)。2小时后，将通过过滤得到的固体收集，用乙醚洗涤。真空干燥，得到标题化合物(5.4g)MS(m/z)：455/457(M+1-HCl).
实施例88：
8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤盐酸盐
Figure BDA0000068781020000481
步骤1：
在安装回流冷凝管、搅拌棒和氮气导管的1L圆底烧瓶中，在磁搅拌下，将5-氨基-4，6-二氯-2-甲基嘧啶(20g，112.3mmol)、(R)-(四氢-呋喃-3-基)胺盐酸盐(20.8g，168.5mmol)、三乙胺(45mL，325.81mmol)和异丙醇(225mL)混合，加热至回流。4天后，停止加热，任其冷却至室温。将溶剂减压除去，将得到的残渣溶于二氯甲烷(300mL)，用水(2×150mL)和盐水(150mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到6-氯-2-甲基-N＊4＊-(R)-四氢-呋喃-3-基-嘧啶-4，5-二胺(23.1g)。MS(m/z)：229/231(M+1)
步骤2：
将6-氯-2-甲基-N＊4＊-(R)-四氢-呋喃-3-基-嘧啶-4，5-二胺(23.1g，101mmol)、2-氯苯甲醛(17.0mL.151.5mmol)、N-甲基哌嗪(12.3mL，111.12mmol)和硝基苯(10.3mL，101.01mmol)溶于甲氧基苯(300mL)，在空气中，加热至130℃(内部温度)。36小时后，将混合物冷却至室温，倾入SCX-2树脂(80g)垫上，依次用甲醇(500mL)、3.5N氨的甲醇溶液(500mL)洗脱。将甲醇流分中的氨除去，得到褐色油状物，经硅胶层析纯化，用二氯甲烷∶甲醇3-20％洗脱，得到8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤，为深色油状物(10.1g)。MS(m/z)：413/415(M+1).
步骤3：
将8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤(8.62g，20.9mmol)溶于乙醚(105mL)，用氯化氢(4N的二
Figure BDA0000068781020000482
烷溶液，5.2mL，20.88mmol)处理。将混合物搅拌15小时，将通过过滤形成的固体收集。由此得到自由流动的黄色固体。然后，将大多数该物质转移至圆底烧瓶中，置于真空下，得到标题化合物(7.33g)。MS(m/z)：413/415(M+1-HCl)，[α]D 20＝+27°(c＝0.256，在二氯甲烷中).
实施例89：
8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基)-9H-嘌呤磷酸盐
Figure BDA0000068781020000491
步骤1：
在300mL玻璃压力反应器中，将5-氨基-4，6-二氯-2-甲基嘧啶(20.0g，97％，109.0mmol)、4-氨基四氢吡喃盐酸盐(21.0g，152.6mmol)、二异丙基乙胺(57.0mL，326.9mmol)和异丙醇(100mL)混合。将压力容器紧密封闭，开始搅拌，将热控制旋纽调至100℃。将混合物在100℃下搅拌24小时。将反应器内容物冷却至60℃，将容器中压力释放，加入4-氨基四氢吡喃盐酸盐(2.25g，16.3mmol)。将容器再封闭，将内容物加热至内部温度达100℃，再搅拌24小时。将反应混合物冷却至环境温度，将容器中压力释放，将内容物转移至回收烧瓶中。将混合物减压浓缩至约其原体积1/3。加入水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，将得到的混合物转移至分液漏斗。将不同液层分离，将水层用乙酸乙酯(100mL)再萃取，将所有有机液合并。用水(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后，有机层经无水硫酸钠干燥。减压浓缩，得到6-氯-2-甲基-N＊4＊-(四氢-2H-吡喃-4-基)-嘧啶-4，5-二胺，为灰白色固体(25.0g)。MS(m/z)：243/245(M+1).
步骤2：
在500mL 3颈烧瓶中，在氮气氛下，将6-氯-2-甲基-N＊4＊-(四氢-2H-吡喃-4-基)-嘧啶-4，5-二胺(24.4g，100.4mmol)溶于二甲基乙酰胺(175mL)。将得到的溶液冷却至0-5℃。通过加料漏斗，用20分钟加入2-氯苯甲酰氯(15.5mL，122.4mmol)，将内部温度维持低于10℃。将加料漏斗用二甲基乙酰胺(1.0mL)冲洗。将得到的混合物搅拌过夜，混合物同时自动升温至环境温度。将冰冷去离子水(250mL)加入另一个500mL烧瓶中，然后将反应混合物转移至冷水中，保持20分钟。将得到的淤浆搅拌2小时。将固体过滤，用冷水(120mL))洗涤，在50℃下，真空干燥过夜，得到2-氯-N-(4-氯-2-甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-嘧啶-5-基)苯甲酰胺，为灰白色固体(33.1g)。MS(m/z)：381/382(M+1).
步骤3：
将2-氯-N-(4-氯-2-甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-嘧啶-5-基)苯甲酰胺(45.0g，118.0mmol)、1-甲基哌嗪(23.0mL，207.0mmol)、二异丙基乙胺(23.0mL，131.9mmol)和异丙醇(225mL)在1L帕尔反应器中混合。将反应器封闭，开始搅拌，将热控制旋纽调至160℃。当内部温度达到160℃后，将混合物搅拌24小时。将反应器内容物冷却至60℃，将容器压力释放，将内容物转移至安装塔顶搅拌器的2L烧瓶中。将反应烧瓶用异丙醇(25.0mL)冲洗净，将冲洗液与主溶液合并。用30分钟，将冷去离子水(780mL)加入混合物，将得到的沉淀搅拌30分钟。将混合物过滤，将固体用去离子水(2×270mL)洗涤，在漏斗上抽干。将产物在45℃下进一步干燥，得到8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢吡喃-4-基)-9H-嘌呤，为灰白色固体(44.8g)MS(m/z)：427/429(M+1).
步骤4：
将8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢吡喃-4-基)-9H-嘌呤(3.0g，7.1mmol)和无水乙醇(24mL)在50mL 3颈烧瓶中混合，开始回流。将得到的悬浮液加热至70℃，用25分钟加入85％磷酸(0.49mL，7.2mmol)的无水乙醇(6.0mL)溶液。将混合物在70℃下搅拌45分钟，缓慢冷却至环境温度，再搅拌2小时。将混合物过滤，将产物滤饼用无水乙醇(6mL)冲洗，抽干。将产物在55℃下进一步干燥过夜，得到标题化合物，为白色结晶固体(3.6g)。MS(m/z)：427/429(M+1).
CB1和CB2体外功能测定
按激动剂模式，用SPA基GTP-γ-35S结合测定测试举例说明的化合物。在由20mM HEPES，100mM NaCl，5mM MgCl2，(pH 7.4，在室温下)制备的测定缓冲液中制备所有测定组分。在含BSA(终浓度0.125％)的测定缓冲液中制备稀释化合物的半对数浓度。按96孔方式，用测定CB1的全膜捕获技术(whole membrane capture technique)和前述测定CB2的抗体捕获技术的改良方法(DeLapp等J Pharmacol Exp Ther 289：946-955，1999)测量GTP-γ35-S结合。所有温育均在室温下进行。
CB1：
将hCB1-CHO膜、GDP(1μM终浓度)和皂苷(10μg/mL终浓度)加入测定缓冲液，均化。将稀释的化合物、GTP-γ-35S(500nM终浓度)和膜加入测定板，温育30分钟。然后加入1mg/孔Wheatgerm Agglutinin SPA珠，封板，旋转，再温育1小时。将板按700×g速度离心10分钟，用闪烁计数器按1分钟/孔计数。
CB2-Sf9：
将hCB2-Sf9膜和GDP(1μM终浓度)加入测定缓冲液，均化。将稀释的化合物和膜加入测定板，预温育15分钟。然后加入GTP-γ-35S(500nM终浓度)，再温育35分钟。然后，加入含Nonidet P40清洁剂(0.2％终浓度)、抗Gi抗体(最终稀释度1∶362)和1.25mg抗兔抗体闪烁亲近测定珠的混合物。然后，封板，旋转，再温育2小时，然后离心，按测定CB1的方法计数。
为分析数据，先将所有孔的背景减去。通过将激动剂/反向激动剂剂量反应数据归一化为完全激动剂(甲酰胺)应答确定激动剂效力百分率。用具有Activity Base和XLFit3的4-参数对数换算拟合(4-parameter logisticreduced fit with Activity Base and XLFit3)分析数据。
基本上按上述方法测试所有举例说明的化合物，发明人发现，各化合物对CB2的相对EC50值≤100nM。实施例61化合物对CB2的相对EC50值为18nM，对CB1的相对EC50值为1950nM。
因此，本发明化合物体外显示对CB2有活性。另外，本发明化合物还显示对CB2的选择性大于CB1，所以出现中枢介导的副作用的潜力有限。
从人和大鼠CB2受体中置换3H-CP55940
使用经过略微修改的Felder等的方法(Mol.Pharmaocol.48：443-450，1995)。具体地说，通过离心将稳定或瞬时表达人或大鼠CB2受体的细胞的膜匀浆洗涤，用50mM Tris HCl(pH 7.4)，5mM MgCl2，2.5mM EDTA和0.1％BSA缓冲液稀释。用1μM CP55940定义3H-CP55940特异性结合。通过在室温中温育90分钟，在Tris，MgCl2，EDTA，BSA缓冲液中，在1％二甲亚砜的存在下，测定系列浓度的300μl化合物置换特异性3H-CP55940结合的能力。将含0.5％聚乙烯吡咯烷酮、0.1％聚山梨酯20水溶液的Unifilter 96孔微量培养板用冷Tris缓冲液洗涤三次。然后，立即将反应混合物转移至过滤板，再通过迅速过滤和用冷Tris缓冲液洗涤三次，每次200μl，终止温育。过滤板干燥后，将microscint 20加入各孔，封板，计数，以测定蜕变/分钟。绘制置换曲线，用Graphpad Prism确定得到的Ki值。
实施例76对人受体的Ki值为33.9nM，对大鼠受体的Ki值为31.3nM。
由此，证明本发明化合物体外与人和大鼠CB2受体结合。
一碘乙酸盐(酯)(MIA)模型
在所有研究中，用注射MIA时约8周龄的雄性Lewis大鼠测量MIA模型中的疼痛。按每笼2或3只为一组饲养大鼠，保持恒温和12小时光照/12小时黑暗周期。除在数据采集期间外，动物可随意进食和饮水。
在标准MIA模型中，将0.3mg MIA的50μl盐水溶液注射到各大鼠的右膝，将50μl盐水注射到左膝。注射MIA后，用双足平衡测定实验(incapacitance testing)，在不同时间测量疼痛(一般不在MIA注射后的前10天)。该试验测量与注射MIA和盐水的膝连接的后爪重量差，各测量值为3次单独测量的均值，每次测量1秒钟。
在给予CB2激动剂的研究中，将大鼠随机分在给药组中(n＝5或6)，然后给予试验化合物一次。每隔15分钟，分别给予各大鼠化合物，在给药后规定时间(通常2小时)，用双足平衡测定实验，测量疼痛。按惯例，用4组进行研究：溶媒(1％羧甲基纤维素水混悬液+0.25％吐温80)和3组化合物，化合物组可为单次剂量的单个不同化合物，或3次剂量的相同化合物。按与注射MIA和盐水的膝连接的后爪重量差报道结果，用溶媒处理和化合物处理动物进行统计学比较，以评价化合物对该模型中膝疼痛的作用。
基本上按上述方法测试实施例88，发明人发现，按口服剂量0.3和1mg/kg给药，相对于溶媒，实施例88显著减少疼痛。
因此，证明本发明化合物可用于治疗疼痛，尤其是关节疼痛。

Claims (17)

1.下式化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0000392246220000011
其中；
R1选自H、F、Cl、C1-C2烷基、CF3、环丙基、OCH3、OCF3和CN；
R2选自四氢呋喃基、四氢吡喃基、氮杂环丁烷-1-甲酸甲酯和四氢噻吩-1,1-二氧化物；
R3为H，或与R4结合形成稠合的吡咯烷-2-酮；
R4选自C1-C2烷基、2-氟乙基、环丙基和COCH3；
R5选自H、CH3和CF3；
n为0或1；
X1和X3独立选自N、CH和CR6；
X2选自CH和CR6；
前提是X1、X2和X3中仅一个可不为CH；
R6选自F、Cl、CF3、OCH3和OCF3。
2.权利要求1的化合物或药学上可接受的盐，其中R1选自Cl、C1-C2烷基、CF3、环丙基和OCF3。
3.权利要求1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为Cl。
4.权利要求1－3中任一项化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自四氢呋喃基和四氢吡喃基。
5.权利要求1－4中任一项化合物或其药学上可接受的盐，其中n为0。
6.权利要求1－5中任一项化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为H。
7.权利要求1－6中任一项化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自C1-C2烷基、C1-C2氟烷基或环丙基。
8.权利要求1－7中任一项化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为C1-C2烷基。
9.权利要求1－8中任一项化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为CH3。
10.权利要求1－9中任一项化合物或其药学上可接受的盐，其中X1、X2和X3独立选自CH和CR6，其中R6选自Cl、CF3、OCH3和OCF3。
11.权利要求1－10中任一项化合物或其药学上可接受的盐，其中X1、X2和X3各自为CH。
12.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自
8-(2-氯-吡啶-3-基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤；
2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基)-8-(2-三氟甲基-苯基)-9H-嘌呤；
2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-8-(2-三氟甲基-苯基)-9H-嘌呤；
2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-8-邻-甲苯基-9H-嘌呤；
8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(S)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤；
8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(R)-四氢-呋喃-3-基-9H-嘌呤；
8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基)-9H-嘌呤；和
8-(2-氯-苯基)-6-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-甲基-9-(四氢-吡喃-4-基甲基)-9H-嘌呤。
13.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物为8-(2-氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9-(四氢-吡喃-4-基)-9H-嘌呤。
14.药用组合物，所述组合物含有权利要求1－13中任一项化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
15.权利要求14的药用组合物，其中所述载体为稀释剂。
16.权利要求1－13中任一项化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗疼痛的药物中的用途。
17.权利要求16的用途，所述疼痛为骨关节炎性疼痛。
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