CN102253225B - 一种东南亚型α地中海贫血检测试剂盒 - Google Patents
一种东南亚型α地中海贫血检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种东南亚型α地中海贫血检测试剂盒，用于检测东南亚型α地中海贫血，它公开了该试剂盒的样品处理液，该样品处理液内氯化铵含量W/V在0.83%，酪蛋白要求含量W/V在0.2%～0.8%，甘油含量V/V在4%～6%。本发明能方便、有效地检测出Zeta链蛋白，能辅助诊断东南亚型α地中海贫血。
Description
技术领域
本发明涉及检测东南亚型α地中海贫血检测试剂盒及其应用。
背景技术
地中海贫血分为α型与β型。α型中的东南亚型基因携带者在东南亚及我国南方分布最为广泛，是造成潜在危害的主要类型。虽然这种携带者大部分无明显症状，但如男女双方同为携带者，其子女就有出现巴氏水肿胎和血红蛋白H病的可能性，给家庭和社会带来沉重负担。
已知血红蛋白Zeta链存在于正常人的胎儿期，出生后3个月即不能检出，但东南亚型α地中海贫血基因携带者的血液中终生存在Zeta链。因此，Zeta链可作为辅助诊断东南亚型α-地中海贫血的标志蛋白。
同类试剂盒在国外已有上市，但未公布其样品处理液配方，本试剂盒是国内首个批准注册产品。
发明内容
本发明的目的是提供一种东南亚型α地中海贫血检测试剂盒，利用该样品处理液的试剂盒能方便、有效地检测出Zeta链，能辅助诊断东南亚型α地中海贫血的标志蛋白。
本发明的技术解决方案是它包括单抗Zeta链包被板，单抗Zeta链酶标记物，阳性对照，阴性对照，临界对照，显色液A，显色液B，浓缩洗涤液，终止液。本发明特别是有样品处理液，在所述样品处理液内氯化铵(NH4Cl)含量W/V在0.83%，酪蛋白(Casein)要求含量W/V在0.2%～0.8%，甘油(Glycerol)要求含量V/V在4%～6%。
以上所述的样品处理液中氯化铵含量W/V在0.83%，酪蛋白含量W/V在0.2%，甘油含量W/V在4%。
本发明应用于检测0.5岁以上人群东南亚型α－地中海贫血的辅助诊断。
本发明的优点
利用该样品处理液能更加充分地破碎红细胞，释放其中的Zeta链蛋白，并且减少包被板、样品与单抗Zeta链酶标记物之间的非特异反应，提高试剂盒检测的灵敏度和特异性。
具体实施方案
【试剂盒主要组成成份】
1、样品处理液的制配法：分别称取8.3g 氯化铵、2.0g 酪蛋白，加入40ml甘油，再加入纯化水至1L，搅拌至充分溶解。
2、试剂盒使用方法
采用无菌抗凝静脉血。对严重贫血患者的样本应先将样本中血浆与红细胞比例调整至1:1后，再按要求进行稀释。
2.1 试剂盒反应试剂准备
2.1.1 微孔条
将检测所需数量的微孔条固定于板架上，剩余的微孔条放入密封袋中保存。
2.1.2 洗涤液
在干净的量筒内稀释浓缩洗涤液。50ml浓缩洗涤液加入蒸馏水或去离子水定容至500ml，混匀。
2.1.3 其它液体组份
直接使用，使用前应轻轻摇动使其充分混匀。
2.2 样品准备
采用无菌抗凝静脉血。全血样本若不能立即检测，可4℃存放一周，或-20℃存放一个月，或-70℃存放3年。染菌标本请勿使用；溶血状态对实验结果无影响；对严重贫血患者的样本应先将样本中血浆与红细胞比例调整至1:1后，再按要求进行稀释。取充分混匀的待检全血样品、阳性对照、阴性对照各25μl分别加入至200μl样品处理液中，在旋涡振荡器上剧烈振荡60秒使红细胞完全裂解。
2.3. 检测过程
2.3.1 每次实验每板加入处理好的阳性对照、阴性对照各1孔，100μl /孔。设临界对照3孔，临界对照直接使用，100μl /孔。其余每孔加入裂解后样品100μl。加封板膜置37℃±1℃温育60分钟。
2.3.2 甩净孔中液体，将洗液注满每孔（约300μl/孔）后，每次停留60秒后甩净拍干，反复3次。每孔加酶标记物100μl（2滴），加封板膜置37℃±1℃温育60分钟。
2.3.3 甩净孔中液体，同上洗板3次，拍干后各孔加显色液A、显色液B各50μl，置37℃避光15分钟，每孔加入终止液50μl，轻微震荡微孔板以混合均匀。
2.3.4 双波长检测：用酶标仪读取450nm和630nm处的吸光值（A值），以A450nm－A630nm计算A值。
2.4 结果判断
样品A值≥临界对照A值平均值 判为阳性
样品A值＜临界对照A值平均值 判为阴性。
3、样品处理液配方的优越性
常见的样品处理液有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种，本试剂盒样品处理液为Ⅳ，配方见表1。此四种样品处理液以不同方式分别处理4份阳性样品和4份阴性样品，按照2的方法操作，结果见表2。
表1 不同样品处理液配方
表2 不同配方样品处理液检测阴性、阳性样品结果比较
*：P/N指阴阳差距，即阳性样品A值均值/阴性样品A值均值。
由表2中数据可知，无论以何种处理方式，与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ处理液相比，Ⅳ处理样品结果其P/N值均为最大，阴阳差距最为明显。这表明使用Ⅳ处理液裂解红细胞更快速，更彻底。
对Ⅳ处理液中不同甘油含量进行比较研究，结果见表3。
表3 不同甘油含量样品处理液检测阴性、阳性样品结果比较
由表3中数据可知，用含甘油浓度0～8%的处理液处理样品，同步检测，结果表明当甘油浓度含量在4%～6%时，其P/N值高于0.2%和8%的P/N值，检测结果最佳。
对Ⅳ处理液中不同酪蛋白含量进行比较研究，结果见表4。
表4 不同酪蛋白含量样品处理液检测阴性、阳性样品结果比较
由表4中数据可知，用含酪蛋白0～1.0%的处理液处理样品，同步检测，结果表明当酪蛋白含量在0.2%～0.8%时，其P/N值高于其它，检测结果最佳。
本试剂盒系用抗Zeta链单克隆抗体包被的微孔板和抗Zeta链单克隆抗体酶标记物及其它试剂配套组成，采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）原理检测人血液中Zeta链，适用于0.5岁以上人群的东南亚型α地中海贫血的辅助诊断。
试剂盒检验原理：双抗体夹心ELISA原理：用纯化的抗Zeta链单克隆抗体包被微孔板，加入经样品处理液裂解的待检血液，样品中存在的Zeta链可与包被抗体形成抗原抗体复合物，再加入辣根过氧化物酶标记的抗Zeta链不同表位的单克隆抗体，形成抗体－抗原－二抗酶标记物免疫复合物。洗板，除去多余的结合物，加入显色液，产生有颜色产物，用酶标仪测定显色反应，根据显色反应的强度进行结果的定性判断。
Claims (3)
1.一种东南亚型α地中海贫血检测试剂盒，它包括单抗Zeta链包被板，单抗Zeta链酶标记物，阳性对照，阴性对照，临界对照，显色液A，显色液B，浓缩洗涤液，终止液，其特征是有样品处理液，在所述处理液内氯化铵含量W/V在0.83%，酪蛋白要求含量W/V在0.2%～0.8%，甘油含量V/V在4%～6%。
2.根据权利要求1所述的一种东南亚型α地中海贫血检测试剂盒，其特征是样品处理液中氯化铵含量W/V在0.83%，酪蛋白含量W/V在0.2%，甘油含量V/V在4%。
3.一种东南亚型α地中海贫血检测试剂盒，其特征是一种东南亚型α地中海贫血检测试剂盒，它包括权利要求1或者是权利要求2所述的检测试剂。
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Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103323604B (zh) * | 2013-06-27 | 2015-12-23 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 一种结核杆菌IgG抗体酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法 |
| CN103645326B (zh) * | 2013-12-13 | 2015-09-16 | 同昕生物技术（北京）有限公司 | 检测脂蛋白相关磷脂酶a2的化学发光酶联免疫试剂盒及其制备方法 |
| CN109112206A (zh) * | 2017-06-23 | 2019-01-01 | 陈治中 | 用于基因分型检测东南亚缺失型α地中海贫血的方法及试剂盒 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4604350A (en) * | 1982-04-29 | 1986-08-05 | Matteis Maria C De | Screening test for beta-thalassemia trait and a diagnostic kit for its individualization |
| WO1992022818A1 (en) * | 1991-06-19 | 1992-12-23 | Abbott Laboratories | Rapid determination of glycated hemoglobin |
| JP2000206117A (ja) * | 1999-01-14 | 2000-07-28 | Wakamoto Pharmaceut Co Ltd | ヒトヘモグロビンの安定化方法 |
| JP2001221789A (ja) * | 2000-02-08 | 2001-08-17 | Sekisui Chem Co Ltd | ヘモグロビン類の測定方法 |
| CN101092647A (zh) * | 2007-04-25 | 2007-12-26 | 亚能生物技术（深圳）有限公司 | 诊断α－地中海贫血的核酸膜条及试剂盒 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4033534B2 (ja) * | 1997-12-03 | 2008-01-16 | アルフレッサファーマ株式会社 | ヒトヘモグロビンの安定化方法 |
-
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- 2011-04-20 CN CN 201110098786 patent/CN102253225B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4604350A (en) * | 1982-04-29 | 1986-08-05 | Matteis Maria C De | Screening test for beta-thalassemia trait and a diagnostic kit for its individualization |
| WO1992022818A1 (en) * | 1991-06-19 | 1992-12-23 | Abbott Laboratories | Rapid determination of glycated hemoglobin |
| JP2000206117A (ja) * | 1999-01-14 | 2000-07-28 | Wakamoto Pharmaceut Co Ltd | ヒトヘモグロビンの安定化方法 |
| JP2001221789A (ja) * | 2000-02-08 | 2001-08-17 | Sekisui Chem Co Ltd | ヘモグロビン類の測定方法 |
| CN101092647A (zh) * | 2007-04-25 | 2007-12-26 | 亚能生物技术（深圳）有限公司 | 诊断α－地中海贫血的核酸膜条及试剂盒 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Arakawa M,etal..Glycerol-induced hemolysis of mammalian erythrocytes and inhibition of the lysis by fructose.《Folia pharmacol.japon》.1977,第73卷(第5期),541-547. |
| Glycerol-induced hemolysis of mammalian erythrocytes and inhibition of the lysis by fructose;Arakawa M,etal.;《Folia pharmacol.japon》;19770731;第73卷(第5期);541-547 * |
| 唐磊.(--SEA)α地贫基因携带者zeta链免疫学检测体系的建立.《第一军医大学硕士学位论文》.2010, * |
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| Publication number | Publication date |
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