CN102234286A

CN102234286A - 稠合杂芳基衍生物

Info

Publication number: CN102234286A
Application number: CN201010154619XA
Authority: CN
Inventors: 匡荣仁; 张鹏; 郭建辉
Original assignee: Shanghai Allist Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Shanghai Allist Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2010-04-23
Filing date: 2010-04-23
Publication date: 2011-11-09

Abstract

本发明公开了一种稠合杂芳基衍生物、其制备方法以及应用。本发明所述衍生物是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂，具有良好的PI3K抑制作用和癌细胞增殖抑制作用，从而可用作治疗肿瘤的治疗剂。

Description

稠合杂芳基衍生物

技术领域

本发明涉及稠合杂芳基衍生物及其制备方法，以及这类衍生物作为磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂和抗癌剂的应用。

背景技术

磷酯酰肌醇(phosphotidylinositol，PI)是在细胞膜中发现的多种磷脂中的一种，在细胞内信号转导中起重要作用。磷酯酰肌醇3-激酶(Phosphoinositide3-kinases，PI3Ks)是使磷酯酰肌醇的肌醇环的3位磷酸化的酶(D.Whitman等，1988，Nature，332，664)。PI3K催化磷脂酰肌醇形成3，4-二磷酸磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol 3，4 bisphosphate，PI(3，4))P2)和3，4，5-三磷酸肌醇(phosphatidylinositol 3，4，5 trisphosphate，PI(3，4，5)P3)，引起蛋白激酶C的活化和细胞内钙动员[MJ Berridge等，Nature，312，315(1984)，Y Nishizuka，Science，225，1365(1984)]。

PI3K根据生理底物特异性可分为I及II，III型。类型I是由p110催化亚单元和p85调节亚单元组成的杂二聚体。该家族以调节伙伴和调节机理为基础进一步被分成类型Ia(p110α，p110β，p110δ)和类型Ib(p110γ)酶。类型Ia被酪氨酸激酶体系活化，类型Ib被G蛋白偶联的受体活化。类型II包括PI3KC2α、C2β和C2γ亚型，其特征为在C末端含有C2结构域，已知PI和PI(4)P为II类PI3K的底物。III类PI3K底物只有PI。PI3K亚型中研究进行得最广泛的是类型Ia。类型Ia是由110kDa的催化亚单位和85/55kDa的调节亚单位构成的。调节亚单位含有SH2结构域，可由与具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体或癌基因产物磷酸化的酪氨酸残基结合，诱导p110催化性亚单位(使其脂类底物磷酸化)的PI3K活性。现在有相当有力的证据表明，类型IaPI3K酶直接或间接地在各种人类癌症中有致肿瘤性(Vivanco and Sawyers，Nature ReviewsCancer，2002，2，489-501)。PI3K其它亚型对心血管和免疫抑制疾病发生相关。

因此，PI3K抑制剂可用作抗癌剂而倍受关注，并成为肿瘤领域一大研究热点。Wortmannin[H Yano等，J Biol Chem.，263，16178，1993]和下式表示的LY294002[CJ Vlahos等，J Biol Chem.，269，5241，1994]是两个已知的第一代广谱PI3K抑制剂。它们对PI3K各亚型选择性小，且毒性大。随后众多以PI3K为靶点的化合物纷纷进入临床研究，其中一部分为PI3K选择性抑制剂，如进入临床I期的GDC-0941(Class I PI3K inhibitor，Institute of Cancer Research UK)，XL-147(Class I PI3K inhibitor，Exelixis Inc)，和PX-866(PI3K α、δand γisoformsinhibitor，Oncothyreon)；还有部分为PI3K/mTOR双重抑制剂，如进入临床II期的BEZ235和BGT226(Novartis AG)，进入临床I期的SF-1126(SemaforePharmaceuticals Inc)和XL-765(Exelixis Inc)。

国际专利申请WO01/83456A1描述了作为PI3K抑制剂和肿瘤剂的二环或三环稠合杂芳基衍生物或其盐，结构通式如下式(a)和(b)所示。B为苯环、或含有选自O、S和N的1～2个杂原子的5-6元单环杂芳环。

国际专利申请WO2005035537A2公开了一类具有抑制IKK酶(IκB kinase)的三元杂环化合物和在自身免疫性疾病、炎症和癌症中的应用，以及它们的制备方法。结构通式如下式(e)、(f)、(g)所示，母核分别是吡啶[3’，2’：4，5]噻吩[3，2-d]嘧啶，吡啶[3’，2’：4，5]噻吩[3，2-d][1，2，3]三嗪，嘧啶[3’，2’：4，5]噻吩[3，2-d]吡啶。

国际专利申请WO2006043490公开了一种与选自二氢噻吩、二氢呋喃、环烷烃部分的非芳香环稠合的嘧啶衍生物或其可药用盐，和包括所述化合物作为活性成分的药用组合物。这些化合物表现出优异的促进胰岛素分泌活性和对抗高血糖活性。但对于PI3K抑制作用既没有披露也没有说明。结构通式如下式(c)所示。

国际专利申请WO2006/010567A1公开了一系列取代的吡啶[3’，2’：4，5]噻吩[3，2-d]嘧啶和吡啶[3’，2’：4，5]呋喃[3，2-d]嘧啶衍生物，可作为phosphodiesterase-4(PDE-4)抑制剂和TNFα释放阻断剂。结构通式如下式(h)、(i)、(j)、(k)所示。

综上所述，新颖的稠合杂芳基衍生物具有多种生物活性，比如抗高血糖作用，PI3K抑制作用，癌细胞增殖抑制作用，抗炎免疫抑制活性等。在此结构基础上有效寻求特异性PI3K抑制剂和抗癌剂成为当前PI3Ks酶研究的一大热点。

发明内容

本发明提供了一种式(I)化合物，或其药学上可接受的盐，

其中，X为O、S或NH，

R¹和R²与邻接的N原子相连成的-NR¹R²为含氮饱和杂环基，

R³为可带有1～5个选自A组的取代基的芳基、或可带有1～5个选自A组的取代基的杂芳基、或可带有1～5个选自A组的取代基的环烷基、或含氮饱和杂环基，

A组包括：-OR、-NRR′、-CO-R、-COO-R、-CONRR′、-NH-CO-R、-SO₂R、-NO₂，

R和R′可相同也可不相同，为-H、-低级烷基或-芳基。

在本发明中，术语“低级烷基”是指甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基；优选甲基、乙基、丙基、丁基。

在本发明中，术语“含氮饱和杂环基”是环原子包含1～2个N原子、还可包含有1个O或S原子、也可带有桥联的5-7元含氮饱和杂环基，可与苯环稠合。优选是吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基和吗啉基。此外，-NR¹R²形成的含氮饱和杂环基，优选是1-吡咯烷基、1-哌嗪基、哌啶基、吗啉代和硫代吗啉代，特别优选是吗啉代。

在本发明中，术语“芳基”是指芳香族烃环基，优选是碳原子数为6～14个的芳基，更优选是苯基。

在本发明中，术语“杂芳基”是指含有1-4个选自N、S、O的杂原子的5-6元单环杂芳基及其和苯环稠合而成的2环式杂芳基，它可以是部分饱和的。这里，作为单环杂芳基，优选是呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三唑基、四唑基、噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基；作为2环式杂芳基，优选是苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基。作为部分饱和的杂芳基，可例举的有1，2，3，4-四氢喹啉基等；特别优选的是5-6元单环杂芳基，其中更好的是咪唑基、噻唑基、三唑基、吡啶基和吡嗪基。

在本发明一个优选的方案中，X选自O。

在本发明另一个优选的方案中，X选自S。

在本发明另一个优选的方案中，R¹和R²与邻接的N原子相连成的-NR¹R²为-吗啉代。

在本发明另一个优选的方案中，R³为可被至少一个选自-OH、-OCH₃、-NO₂和NH₂的取代基取代的苯基。

在本发明另一个优选的方案中，R³为可被至少一个选自-OH、-OCH₃、-NO₂和NH₂的取代基取代的杂芳基。

在本发明另一个优选的方案中，R³为吡啶基。

本发明中，作为通式(I)所表示的化合物，具体优选的化合物为：

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))苯甲醚；

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))苯酚；

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]呋喃并[3，2-d](2-嘧啶基))苯甲醚；

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]呋喃并[3，2-d](2-嘧啶基))苯酚；

3-(4-硫代吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))苯甲醚；

3-(4-硫代吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))硝基苯；

3-(4-硫代吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))苯酚；

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))苯胺；

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))吡啶，

以及它们药学上可接受的盐。

本发明化合物根据取代基的种类，有时存在几何异构体和互变异构体，本发明包括经分离的这些异构体或它们的混合物；本发明化合物有时存在手性碳原子，因此存在基于手性碳原子的异构体，本发明包括这些光学异构体的混合物和它们经分离的物质。

本发明还提供了一种制备通式(I)化合物的方法，它包括以下步骤：

上述路线取代基R¹，R²，R³，X同上文所述。L表示离去基团，优选是卤素或者甲磺酰氧基，对甲苯磺酰氧基等有机磺酸残基等。

本制造方法以3-氯-4-氰基哒嗪为起始原料。3-氯-4-氰基哒嗪与通式(Ia)化合物闭环得到通式(Ib)化合物；通式(Ib)化合物在合适的条件下起反应，得到酰化产物通式(Ic)化合物；通式(Ic)化合物在合适的条件下与氨起反应，得到通式(Id)化合物；通式(Id)化合物在碱的存在下发生闭环反应，得到通式(Ie)化合物；通式(Ie)化合物通过常规方法转化成反应性通式(If)化合物；通式(If)化合物在合适的条件下与胺起反应，得到通式(I)化合物。

本发明还包含通式(I)化合物在药学上可接受的盐，术语“药学上可接受的盐”是指相对无毒的本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。所述酸加成盐为式(I)化合物与合适的无机酸或者有机酸形成的盐，这些盐可在化合物最后的分离和提纯过程中制备，或者是使纯化的化合物以其游离碱形式与适宜的有机酸或无机酸进行反应，再将形成的盐分离而制成。代表性酸加成盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等。

所述碱加成盐为式(I)化合物与合适的无机碱或者有机碱形成的盐，包括例如与碱金属、碱土金属、季铵阳离子形成的盐，如钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐、四甲基季铵盐、四乙基季铵盐等；胺盐，包括与氨(NH₃)、伯胺、仲胺或叔胺形成的盐，如：甲胺盐、二甲胺盐、三甲胺盐、三乙胺盐、乙胺盐等。

利用本发明所得的化合物或其药学上可接受的盐可给药于人，可以口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、局部给药(粉剂、软膏剂或滴剂)。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、娇味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明还提供了一种药物组合物，它含有0.05-50mg上述式I化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

本发明还提供了一种治疗疾病的方法，所述疾病可通过抑制PI3K活性而得以减轻或治疗，包括步骤：给需要治疗的病人使用0.05-30mg/kg体重/天的式I化合物或其药学上可接受的盐。在优选例中，所述的疾病是肿瘤。

本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐可以单独给药，或者与其他药学上可接受的治疗剂联合给药，特别是与其他抗肿瘤药物组合。所述治疗剂包括但不限于：作用于DNA化学结构的药物抗肿瘤药如顺铂，影响核酸合成的抗肿瘤药物如甲氨蝶呤(MTX)、5-氟尿嘧啶(5FU)等，影响核酸转录的抗肿瘤药物如阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、光辉霉素等，作用于微管蛋白合成的抗肿瘤药物如紫杉醇、长春瑞滨等，芳香化酶抑制剂如氨鲁米特、兰特隆、来曲唑、瑞宁德等，细胞信号通路抑制剂如表皮生长因子受体抑制剂伊马替尼(Imatinib)、吉非替尼(Gefitinib)、埃罗替尼(Erlotinib)等。待组合的各成分可同时或顺序地给予，以单一制剂形式或以不同制剂的形式给予。所述组合不仅包括本发明的化合物和一种其它活性剂的组合，而且包括本发明的化合物和两种或更多种其它活性剂的组合。

本发明化合物通过细胞实验证明具有癌细胞增殖抑制作用，可用于制备治疗癌症的药物。本发明化合物抑制癌细胞增殖的药效可用常规方法测定，一种优选的评价方法为磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法：SRB是一种蛋白结合染料，可与生物大分子中的碱性氨基酸结合，其在510nm的光密度(OD)读数与蛋白量呈良好的线性关系，故可用作细胞数的定量，通过测定药物作用于癌细胞后所产生的光吸收值的变化来计算药物对癌细胞增殖的抑制率。

抑制率(％)＝(OD对照-OD抑制剂-OD空白对照)/(OD对照-OD空白对照)×100％

OD对照：指没有药物作用正常生长的细胞的孔的OD值。

OD抑制剂：指加入阳性或者待筛选的化合物作用的细胞的孔的OD值。

OD空白对照：指没有接种细胞的平行对照孔的OD值。

半数抑制剂浓度(IC₅₀)值通过软件GraphPad Prism 5计算得到。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比。

具体实施方式

实施例1

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))苯甲醚

以3-氯-4-氰基哒嗪为起始原料。3-氯-4-氰基哒嗪与(Ia-1)化合物闭环得到(Ib-1)化合物。(Ib-1)化合物与间甲氧基苯甲酰氯起反应，得到酰化产物(Ic-1)化合物。(Ic-1)化合物与氨起反应，得到(Id-1)化合物。(Id-1)化合物在碱的存在下发生闭环反应，得到(Ie-1)化合物。(Ie-1)化合物通过常规方法转化成反应性(If-1)化合物。将(If-1)化合物(1.1mmol)溶于50ml无水四氢呋喃中，冰水浴下向其中滴加30ml吗啉，加热回流1.5小时。降至室温，用乙酸乙酯反复萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗3次后无水硫酸钠干燥。硅胶柱层析分离得到黄色固体(1)0.14g，，收率为35％。

H¹-NMR(DMSO)：

δ9.36(d，1H)，δ8.50(d，1H)，δ7.92-7.90(m，2H)，δ7.34(t，1H)，δ6.91(d，1H)，δ4.08(t，4H)，δ3.95(s，3H)，δ3.86(t，4H)

ESI(+)m/z：380

实施例2

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))苯酚

将上述实施例(1)化合物(0.35mmol)溶于10ml醋酸和12ml的溴化氢(40％水溶液)中，加热回流36小时。降至室温，减压浓缩后加饱和碳酸氢钠水溶液调节至弱碱性，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析分离得到黄色固体(2)0.25mg，，收率为20.1％。

H¹-NMR(DMSO)：

δ9.56(s，1H)，δ9.41(d，1H)，δ8.44(d，1H)，δ7.97-7.92(m，2H)，δ7.31(t，1H)，δ6.95(d，1H)，δ4.03(t，4H)，δ3.79(t，4H)

ESI(+)m/z：366

实施例3

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]呋喃并[3，2-d](2-嘧啶基))苯甲醚

以3-氯-4-氰基哒嗪为起始原料。3-氯-4-氰基哒嗪与与(Ia-3)化合物闭环得到(Ib-3)化合物。(Ib-3)化合物与间甲氧基苯甲酰氯起反应，得到酰化产物(Ic-3)化合物。(Ic-3)化合物与氨起反应，得到(Id-3)化合物。(Id-3)化合物在碱的存在下发生闭环反应，得到(Ie-3)化合物。(Ie-3)化合物通过常规方法转化成反应性(If-3)化合物。(If-3)化合物(1.6mmol)溶于50ml无水四氢呋喃中，冰水浴下向其中滴加30ml吗啉，加热回流1.5小时。降至室温，用乙酸乙酯反复萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗3次后无水硫酸钠干燥。硅胶柱层析分离得到产物(3)0.2g，，收率为45％。

ESI(+)m/z：364

实施例4

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]呋喃并[3，2-d](2-嘧啶基))苯酚

将上述实施例(3)化合物(0.64mmol)溶于10ml醋酸和10ml的溴化氢(40％水溶液)中，加热回流36小时。降至室温，减压浓缩后加饱和碳酸氢钠水溶液调节至弱碱性，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析分离得到产物(4)72mg，，收率为32.3％。

H¹-NMR(DMSO)：

δ9.49(s，1H)，δ9.35(d，1H)，δ8.38(d，1H)，δ7.94-7.89(m，2H)，δ7.27(t，1H)，δ6.84(d，1H)，δ4.05(t，4H)，δ3.89(t，4H)

ESI(+)m/z：350

实施例5

3-(4-硫代吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))苯甲醚

以3-氯-4-氰基哒嗪为起始原料。3-氯-4-氰基哒嗪与(Ia-1)化合物闭环得到(Ib-1)化合物。(Ib-1)化合物与间甲氧基苯甲酰氯起反应，得到酰化产物(Ic-1)化合物。(Ic-1)化合物与氨起反应，得到(Id-1)化合物。(Id-1)化合物在碱的存在下发生闭环反应，得到(Ie-1)化合物。(Ie-1)化合物通过常规方法转化成反应性(If-1)化合物。将(If-1)化合物(1.4mmol)溶于50ml无水四氢呋喃中，冰水浴下向其中滴加30ml硫代吗啉，加热回流1.5小时。降至室温，用乙酸乙酯反复萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗3次后无水硫酸钠干燥。硅胶柱层析分离得到黄色固体(5)0.16g，，收率为36％。

ESI(+)m/z：396

实施例6

3-(4-硫代吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))苯酚

将上述实施例(5)化合物(1.05mmol)溶于15ml醋酸和18ml的溴化氢(40％水溶液)中，加热回流过夜。降至室温，减压浓缩后加饱和碳酸氢钠水溶液调节至弱碱性，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析分离得到黄色固体(6)97mg，，收率为24.1％。

H¹-NMR(DMSO)：

δ9.51(s，1H)，δ9.37(d，1H)，δ8.36(d，1H)，δ7.97-7.93(m，2H)，δ7.26(t，1H)，δ6.95(d，1H)，δ4.46(t，4H)，δ2.91(t，4H)

ESI(+)m/z：396

实施例7

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))硝基苯

以3-氯-4-氰基哒嗪为起始原料。3-氯-4-氰基哒嗪与(Ia-1)化合物闭环得到(Ib-1)化合物。(Ib-1)化合物与间硝基苯甲酰氯起反应，得到酰化产物(Ic-7)化合物。(Ic-7)化合物与氨起反应，得到(Id-7)化合物。(Id-7)化合物在碱的存在下发生闭环反应，得到(Ie-7)化合物。(Ie-7)化合物通过常规方法转化成反应性(If-7)化合物。将(If-7)化合物(1.8mmol)溶于50ml无水四氢呋喃中，冰水浴下向其中滴加30ml吗啉，加热回流1.5小时。降至室温，用乙酸乙酯反复萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗3次后无水硫酸钠干燥。硅胶柱层析分离得到黄色固体(7)0.20g，，收率为39％。

ESI(+)m/z：395

实施例8

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))苯胺

将上述实施例(7)化合物(0.1mmol)溶于10ml甲醇，加入10％钯碳0.08g，通氢气3小时后过滤浓缩。硅胶柱层析分离得到产物(8)28mg，收率为79.1％。

H¹-NMR(DMSO)：

δ9.38(d，1H)，δ8.49(d，1H)，δ8.17(s，1H)，δ8.03(d，1H)，δ7.30(s，1H)，δ6.96(d，1H)，δ4.05(t，4H)，δ3.85(t，4H)

ESI(+)m/z：365

实施例9

3-(4-吗啉代哒嗪并[3′，4′：4，5]噻吩并[3，2-d](2-嘧啶基))吡啶

以3-氯-4-氰基哒嗪为起始原料。3-氯-4-氰基哒嗪与(Ia-1)化合物闭环得到(Ib-1)化合物。(Ib-1)化合物与3-吡啶甲酰氯起反应，得到酰化产物(Ic-9)化合物。(Ic-9)化合物与氨起反应，得到(Id-9)化合物。(Id-9)化合物在碱的存在下发生闭环反应，得到(Ie-9)化合物。(Ie-9)化合物通过常规方法转化成反应性(If-9)化合物。将(If-9)化合物(1mmol)溶于10ml无水四氢呋喃中，冰水浴下向其中滴加5ml吗啉，加热回流1.5小时。降至室温，用乙酸乙酯反复萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗3次后无水硫酸钠干燥。硅胶柱层析分离得到固体(9)310mg，，收率为81％。

H¹-NMR(DMSO)：

δ9.50(s，1H)，δ9.39(d，1H)，，δ8.87(d，1H)，δ8.65(d，1H)，δ8.47(d，1H)，δ8.05(m，1H)，δ4.07(t，4H)，δ3.88(t，4H)

ESI(+)m/z：351

实施例10 药物组合物

化合物2 20g

淀粉 140g

微晶纤维素 68g

按常规方法，将上述物质混合均匀后，装入普通明胶胶囊，得到1000颗胶囊。

按类似方法，分别制得含其它实施例化合物的胶囊。

测试实施例1 人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)增殖抑制作用

将处于对数生长期的人乳腺癌细胞以约5500个/孔的密度接种于96孔培养板，180μl/孔。每个浓度设三复孔。并设相应浓度的溶媒对照及无细胞调零孔。贴壁生长24hr再加实施例化合物或阳性对照药(LY294002)20μl/孔，细胞在10％Hyclone胎牛血清，37℃、5％CO2条件下培养72hr。加入50％的冷三氯乙酸(TCA)50ul，4℃放置1小时，固定细胞。倾去液体，用蒸馏水轻缓洗涤5次，空气中自然干燥。加入由1％冰醋酸配制的SRB 4mg/ml溶液100μl/孔，室温中染色15分钟。弃上清液，用1％醋酸洗涤5次，空气中干燥。每孔加入150μl的10mM的Tris溶液(pH 10.5)，溶解结合的SRB。酶标仪510nm波长下测定OD值，通过计算获得实施例化合物对于MDA-MB-231细胞的IC₅₀值：

化合物	IC₅₀(μM)
		LY294002	5.60
实施例2	2.78
		实施例4	12.50
实施例6	8.90
		实施例8	6.45

测试结果表明：本发明化合物对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)有良好的增殖抑制作用。

测试实施例2 人卵巢癌细胞(SK-OV-3)增殖抑制作用

参照测试实施例1实验方法，通过计算获得实施例化合物对于SK-OV-3细胞的IC₅₀值：

化合物	IC₅₀(μM)
		LY294002	6.00
实施例2	0.96
		实施例4	21.47
实施例6	12.36
		实施例8	8.40

测试结果表明：本发明化合物对人卵巢癌细胞(SK-OV-3)有良好的增殖抑制作用。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.如以下通式(I)表示的稠合杂芳基衍生物或其药学上可接受的盐，

式中的记号表示以下含义

X：O、S或NH，

R¹和R²：与邻接的N原子相连成的-NR¹R²为含氮饱和杂环基，

R³：可带有0～5个选自A组的取代基的芳基、或可带有0～5个选自A组的取代基的杂芳基，或可带有0～5个选自A组的取代基的环烷基、或含氮饱和杂环基，

A组包括：-OR、-NRR′、-CO-R、-COO-R、-CONRR′、-NH-CO-R、-SO₂R，-NO₂，

R和R′：可相同也可不相同，为-H、-低级烷基或-芳基。

2.如权利要求1所述的稠合杂芳基衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的X为O或S。

3.如权利要求2所述的稠合杂芳基衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的R¹和R²与邻接的N原子相连成的-NR¹R²为-吗啉代。

4.如权利要求2所述的稠合杂芳基衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的R³为可被至少一个选自-OH、-OCH₃、-NO₂和-NH₂的取代基取代的苯基。

5.如权利要求2所述的稠合杂芳基衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的R³为可被至少一个选自-OH、-OCH₃、-NO₂和-NH₂的取代基取代的杂芳基。

6.如权利要求2所述的稠合杂芳基衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的R³为吡啶基。

7.如权利要求1所述的稠合杂芳基衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，它选自：

或它们药学上可接受的盐。

8.医药组合物，它包含权利要求1所述的稠合杂芳基衍生物或其药学上可接受的盐和制药学上允许的载体。

9.权利要求1的式I化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。

10.一种制备权利要求1所述的式(I)化合物的方法，它包括步骤：

其中，X、R¹、R²、R³定义如权利要求1，L表示离去基团，

以3-氯-4-氰基哒嗪为起始原料，3-氯-4-氰基哒嗪与通式(Ia)化合物闭环得到通式(Ib)化合物；通式(Ib)化合物在合适的条件下起反应，得到酰化产物通式(Ic)化合物；通式(Ic)化合物在合适的条件下与氨起反应，得到通式(Id)化合物；通式(Id)化合物在碱的存在下发生闭环反应，得到通式(Ie)化合物；通式(Ie)化合物通过常规方法转化成反应性通式(If)化合物；通式(If)化合物在合适的条件下与胺起反应，得到通式(I)化合物。