CN102228483B - 一种山酮类抗肿瘤药物冻干制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种山酮类抗肿瘤药物冻干制剂及其制备方法，所述抗肿瘤药物冻干制剂中含有活性化合物AustocystinD白蛋白纳米颗粒粉末，所述纳米颗粒粉末中的AustocystinD含量为0.3～3.0%，白蛋白含量为60%～98%。本发明所述冻干制剂具有生物相容性好，毒性及刺激性低等特点，不仅使活性化合物AustocystinD具有药物靶向性而且能够显著降低其毒性，提高其抗肿瘤活性。

Description

一种山酮类抗肿瘤药物冻干制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种冻干制剂及其制备方法，尤其涉及一种山酮类抗肿瘤药物冻干制剂及其制备方法，属医药技术领域。

背景技术

Austocystin D是从真菌的固体发酵产物中分离提纯得到一种山酮类化合物，其结构如下图。

1974年Steyn PS等首先从曲霉菌发酵产物中分离提纯得化合物Austocystin D，之后关于其活性的报道极少 [Steyn PS，Vleggaar R，J Chem Soc( Perkin I)，1974，19: 2250～2256]。体外实验证明Austocystin D具有良好的抗肿瘤活性，尤其对多药耐药型肿瘤细胞株具有高度的选择性，对MIP101细胞（MDR 1过表达）的活性是SW620细胞（MDR 1不表达）的1000倍左右（IC₅₀，0.001μg/mL vs 0.9μg/mL ）[Chris M. Ireland，William Aalbersberg etal，Pharmaceutical Biology，2003，41:15～38]。作用机理研究证明Austocystin D的细胞选择性需要有细胞色素P450的活化才能实现，通过破坏DNA的结构和功能从而表现出抗肿瘤活性 [Kevin M. Marks，Eun Sun Park etal，Journal of Natural Products. 2011，74(4):567～573]。Austocystin D在体外还表现出很好的抑制血管内皮细胞增殖的活性，可将肿瘤细胞周期阻滞在G1期 [路新华，张华 等，年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集，2008]。体内的药效学研究表明给药剂量在3～5mg/kg时Austocystin D能明显抑制裸鼠结肠癌LS174T移植肿瘤的生长，同时还结果显示Austocystin D的治疗指数低，毒性较大 [Chris M. Ireland，William Aalbersberg etal，Pharmaceutical Biology，2003，41:15～38]。推测受到该情况的限制，所以目前尚未有关Austocystin D体内药效学的详细报道。以上结果表明克服毒副作用后，Austocystin D有可能成为一种能够克服多药耐药问题的肿瘤治疗药物。

白蛋白纳米粒最初作为诊断剂使用 [KRATZ F，J Control Release，2008，132(3): 171～183]，经过几十年的发展已经成为一种比较成熟的给药系统，具有生物相容性好，毒性及刺激性低等特点。作为抗肿瘤药物传递系统以提高药物靶向性或降低毒副作用，也是白蛋白纳米粒最有前途的应用之一 。制备白蛋白纳米粒常用的方法主要有去溶剂化法和乳化法。2000年，Weber等采用去溶剂化法制备了人血清白蛋白纳米粒，乙醇的手动滴加使实验的结果很不稳定；2003年Langer等采用泵控系统控制乙醇加入的速度，解决了乙醇手动递加不稳定的问题；2010年Hoang Hai Nguyen等报道了采用泵控系统间歇加入乙醇的方法 [Hoang Hai Nguyen ，Sanghoon Ko，Proceedings of the 3rd International Conference on the Development of BME in Vietnam，2010]，使实验的结果更加稳定。由于去溶剂化法中需要加入交联剂使蛋白变性，具有致敏性，用于静脉给药的白蛋白纳米粒多采用均质乳化法或超声乳化法制备，美国Abraxis BioScience Inc公司利用均质乳化法制备的紫杉醇白蛋白纳米粒注射液已经FDA批准上市，成为首个白蛋白纳米粒给药系统的上市产品。

    至今尚无关于Austocystin D的制剂方面的研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术之缺陷提供一种山酮类抗肿瘤药物冻干制剂，该制剂具有毒性低、抗肿瘤活性高等优点。

本发明还要提供这种抗肿瘤药物冻干制剂的制备方法。

本发明所述技术问题是由以下技术方案实现的。

一种山酮类抗肿瘤药物冻干制剂，所述制剂中含有活性化合物Austocystin D白蛋白纳米颗粒粉末。

上述山酮类抗肿瘤药物冻干制剂，所述纳米颗粒粉末中的Austocystin D含量为0.3～3.0%，白蛋白含量为60%～98%。

上述山酮类抗肿瘤药物冻干制剂，所述白蛋白选自人血清白蛋白、动物血清白蛋白或重组人血白蛋白。

上述山酮类抗肿瘤药物冻干制剂，所述纳米颗粒粉末用注射用水或生理盐水中复溶后的平均粒径为50～500nm，pH为5.0～8.5，Austocystin D的浓度为0.1～4.0mg/mL。

一种制备本发明所述山酮类抗肿瘤药物冻干制剂的方法，它按如下步骤进行：

a.配制Austocystin D溶液：取Austocystin D溶于无水乙醇使其浓度为0.5～5.0mg/mL，备用；

b.配制白蛋白注射用水溶液：配制白蛋白注射用水溶液浓度（w/v）为1.0%～6.0%，调pH7.5～9.5，备用；

c.配制预冻干液：搅拌下向2mL白蛋白水溶液中加入Austocystin D无水乙醇溶液，搅拌5～120min，间歇加入无水乙醇，每次加入1.0～2.0mL，加入速度0.5～5.0ml/min，间隔为3～20min，，使白蛋白析出，并持续至形成胶体混悬液,其中颗粒粒径为50～500nm,备用；

d..固化并冻干：向c所得预冻干液中加入w/v8%戊二醛适量，使上述胶体混悬液中颗粒完全固化，固化24小时，减压蒸发有机溶剂，高速离心后分离上清液，加等体积注射用水重新分散沉淀物，再离心，如此重复3～5次后冷冻干燥，得抗肿瘤药物冻干制剂。

上述制备山酮抗肿瘤药物冻干制剂的方法，所述步骤b中用强碱或缓冲盐调节pH为8.0～9.0；所述强碱为氢氧化钠或钾；所述缓冲盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、柠檬酸二钠或柠檬酸三钠。

本发明的另一种制备抗肿瘤药物冻干制剂的方法，按如下步骤进行：

a.配制有机相：取Austocystin D溶于氯仿和乙醇混合液中作为有机相，备用；所述氯仿：乙醇的V/V 比例为10：1 ；

b.配制水相：配制白蛋白注射用水溶液浓度（w/v）为1.0%～6.0%，作为水相，备用；

c.制备纳米乳并冻干：将有机相加入水相，使其中的Austocystin D与白蛋白的质量比在1/98~1/10之间，调pH5.0～7.0，无菌条件、40℃以下，均质处理，先在8000～16000psi低压下均质形成初乳，再20000～40000psi高压下反复均质得到纳米乳，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

上述制备抗肿瘤药物冻干制剂的方法，所述步骤b中用生物相容性酸或酸性缓冲盐调节pH为5.5～6.5；所述生物相容性酸选自柠檬酸、盐酸、磷酸、醋酸、乳酸、碳酸、琥珀酸中的一种或其混合物；所述酸性缓冲盐选自生物相容性酸的钠盐或钾盐。

上述制备抗肿瘤药物冻干制剂的方法，在所述纳米乳冷冻干燥前加入占纳米乳总重量1~10%的冻干保护剂，所述冻干保护剂选自蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖、甘露醇中的一种或其混合物。

本发明所述抗肿瘤药物冻干制剂，由于含有活性化合物Austocystin D白蛋白纳米粒粉末，具有生物相容性好，毒性及刺激性低等特点，采用上述两种制备方法所得Austocystin D白蛋白纳米粒粒径发布较窄，如图1、图2所示，而且所制得的纳米粒具有明显的缓释效果，如图3、图4所示，此粒径的纳米粒可携带Austocystin D靶向肿瘤部位，提高其抗肿瘤活性，从而提高疗效，降低毒副作用，对比结果列之于附表1中。 

附图说明

 图 1 为本发明制备的Austocystin D白蛋白纳米粒的扫描电镜图；

     图 2 为本发明制备的Austocystin D白蛋白纳米粒的粒径分布图；

     图 3 为本发明制备的Austocystin D白蛋白纳米粒的体外释放曲线；

     图 4 为本发明制备的Austocystin D白蛋白纳米粒处理48h时的细胞生长抑制率曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例1

a.配制Austocystin D溶液：取Austocystin D溶于无水乙醇配制成浓度为0.5mg/ml的溶液，备用；

b.配制白蛋白注射用水溶液：取重组人血白蛋白100mg溶于2mL 注射用水中，0.2mol/L NaOH溶液调节pH 7.5，备用；

c.配制预冻干液：搅拌下向2mL白蛋白水溶液中加入1ml的Austocystin D无水乙醇溶液，室温搅拌5min，间歇加入无水乙醇，每次加入1.0ml，加入速度0.5ml/min,间隔为3min，持续至形成胶体混悬液,备用；

d. 固化并冻干：向c所得预冻干液中加入%戊二醛117.5μl固化24小时，减压蒸发有机溶剂，高速离心5min后分离上清液，加等体积注射用水重新分散沉淀物，再离心，如此重复3次后得到纳米粒混悬液，迅速降至-40℃，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用生理盐水重新分散，得到Austocystin D浓度为0.2mg/ml的溶液，纳米颗粒平均粒径约161nm，pH约6.5～7.5，稳定性>24小时。

实施例2

a. 配制Austocystin D溶液：取Austocystin D溶于无水乙醇配制成浓度为5.0mg/ml的溶液，备用；

b. 配制白蛋白注射用水溶液：取动物血清白蛋白100mg溶于2mL 注射用水中，0.2mol/L KOH溶液调节pH 9.5，备用；

c.配制预冻干液：搅拌下向2mL白蛋白水溶液中加入0.5ml的Austocystin D无水乙醇溶液，室温搅拌120min，间歇加入无水乙醇，每次加入2.0mL，加入速度5.0ml/min,间隔为20min，持续至形成胶体混悬液,备用；

d. 固化并冻干：向c所得预冻干液中加入8%戊二醛117.5μl固化24小时，减压蒸发有机溶剂，高速离心后分离上清液，加等体积注射用水重新分散沉淀物，再离心，如此重复5次后，加入占总重量6%的冻干保护剂蔗糖，迅速降至-40℃，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用生理盐水重新分散，得到Austocystin D浓度为0.5mg/mL的溶液，纳米颗粒平均粒径约234nm，pH约6.5～7.5，稳定性>24小时。

实施例3

a. 配制Austocystin D溶液：取Austocystin D溶于无水乙醇配制成浓度为4.0mg/ml的溶液，备用；

b. 配制白蛋白注射用水溶液：取重组人血白蛋白60mg溶于2mL 注射用水中，0.2mol/L NaOH溶液调节pH 8.0，备用；

c. 配制预冻干液：搅拌下向2mL白蛋白水溶液中加入0.25ml的Austocystin D无水乙醇溶液，室温搅拌30min，间歇加入无水乙醇，每次加入1.5mL，加入速度1.0ml/min,间隔为10min，持续至形成胶体混悬液,备用；

d. 固化并冻干：向c所得预冻干液中加入8%戊二醛70.5μl固化24小时，减压蒸发有机溶剂，高速离心后分离上清液，加等体积注射用水重新分散沉淀物，再离心，如此重复4次后迅速降至-40℃，冷冻干燥抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用生理盐水重新分散，得到Austocystin D浓度为0.2mg/mL的溶液，纳米颗粒平均粒径约208nm，pH约6.5～7.5，稳定性>24小时。

实施例4

a. 配制Austocystin D溶液：取Austocystin D溶于无水乙醇配制成浓度为1.0mg/ml的溶液，备用；

b. 配制白蛋白注射用水溶液：取重组人血白蛋白100mg溶于2mL注射用水，磷酸氢二钠溶液调节pH 9.0，备用；

c. 配制预冻干液：搅拌下向2mL白蛋白水溶液中加入0.35ml的Austocystin D无水乙醇溶液，室温搅拌60min，间歇加入无水乙醇，每次加入1.0mL，加入速度2.0ml/min,间隔为15min，持续至形成胶体混悬液,备用；

d. 固化并冻干：向c所得预冻干液中加入8%戊二醛117.5μl固化24小时，减压蒸发有机溶剂，高速离心后分离上清液，加等体积注射用水重新分散沉淀物，再离心，如此重复3次后，加入占总重量4%的冻干保护剂乳糖，迅速降至-40℃，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用注射用水重新分散，得到Austocystin D浓度为0.1mg/mL的溶液，纳米颗粒平均粒径约183nm，pH约6.5～7.5，稳定性>24小时。

实施例5

a. 配制Austocystin D溶液：取Austocystin D溶于无水乙醇配制成浓度为3.0mg/mL的溶液，备用；

b. 配制白蛋白注射用水溶液：取人血清白蛋白90mg溶于2mL，柠檬酸二钠溶液调节pH 8.5，备用；

c. 配制预冻干液：搅拌下向2mL白蛋白水溶液中加入1.0ml的Austocystin D无水乙醇溶液，室温搅拌40min，间歇加入无水乙醇，每次加入1.0mL，加入速度1.5ml/min,间隔为10min，持续至形成胶体混悬液,备用；

d. 固化并冻干：向c所得预冻干液中加入8%戊二醛141.0μl固化24小时，减压蒸发有机溶剂，高速离心后分离上清液，加等体积注射用水重新分散沉淀物，再离心，如此重复3次后迅速降至-40℃，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用注射用水重新分散，得到Austocystin D浓度为0.2mg/mL的溶液，纳米颗粒平均粒径约254nm，pH约6.5～7.5，稳定性<24小时。

实施例6

a.配制有机相：取Austocystin D50mg溶于5ml氯仿与乙醇（氯仿:乙醇=10:1，V/V）的混合液中作为有机相，备用；

b.配制水相：配制95ml白蛋白注射用水溶液，浓度W/V%为2.0%，作为水相，备用；

c.制备纳米乳并冻干：将有机相加入水相，柠檬酸调节pH 5.0，无菌条件、40℃以下，均质处理，先在8000psi低压下均质形成初乳，再20000psi高压下反复均质得到纳米乳，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用生理盐水重新分散，得到Austocystin D浓度为1.0mg/ml的溶液，纳米颗粒平均粒径约181nm，pH约6.0～7.0，稳定性>24小时。

实施例7

a.配制有机相：取Austocystin D70mg溶于5ml氯仿与乙醇（氯仿:乙醇=10:1，V/V）的混合液中作为有机相，备用；

b.配制水相：配制95ml白蛋白注射用水溶液，浓度W/V%为5.0%，作为水相，备用；

c.制备纳米乳并冻干：将有机相加入水相，盐酸调节pH7.0，无菌条件、40℃以下，均质处理，先在16000psi低压下均质形成初乳，再40000psi高压下反复均质得到纳米乳，加入占总重量5%乳糖作为冻干保护剂，迅速冷却至-40℃，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用生理盐水重新分散，得到Austocystin D浓度为1.0mg/ml的溶液，纳米颗粒平均粒径约170nm，pH约6.0～7.0，稳定性>24小时。

实施例8

a.配制有机相：取Austocystin D20mg溶于5ml氯仿与乙醇（氯仿:乙醇=10:1，V/V）的混合液中作为有机相，备用；

b.配制水相：配制95ml白蛋白注射用水溶液，浓度W/V%为2.5%，作为水相，备用；

c.制备纳米乳并冻干：将有机相加入水相，盐酸调节pH5.5，无菌条件、40℃以下，均质处理，先在10000psi低压下均质形成初乳，再30000psi高压下反复均质得到纳米乳，迅速冷却至-40℃，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用生理盐水重新分散，得到Austocystin D浓度为0.4mg/mL的溶液，纳米颗粒平均粒径约178nm，pH约6.0～7.0，稳定性>24小时。

实施例9

a.配制有机相：取Austocystin D30mg溶于5ml氯仿与乙醇（氯仿:乙醇=10:1，V/V）的混合液中作为有机相，备用；

b.配制水相：配制95ml白蛋白注射用水溶液，浓度W/V%为2.0%，作为水相，备用；

c.制备纳米乳并冻干：将有机相加入水相，琥珀酸调节pH6.5，无菌条件、40℃以下，均质处理，先在15000psi低压下均质形成初乳，再35000psi高压下反复均质得到纳米乳，迅速冷却至-40℃，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用生理盐水重新分散，得到Austocystin D浓度为0.2mg/mL的溶液，纳米颗粒平均粒径约120nm，pH约6.0～7.0，稳定性>24小时。

实施例10

a.配制有机相：取Austocystin D100mg溶于5ml氯仿与乙醇（氯仿:乙醇=10:1，V/V）的混合液中作为有机相，备用；

b.配制水相：配制95ml白蛋白注射用水溶液，浓度W/V%为3.0%，作为水相，备用；

c.制备纳米乳并冻干：将有机相加入水相，柠檬酸调节pH5.5，无菌条件、40℃以下，均质处理，先在10000psi低压下均质形成初乳，再25000psi高压下反复均质得到纳米乳，迅速冷却至-40℃，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用生理盐水重新分散，得到Austocystin D浓度为1.2mg/mL的溶液，纳米颗粒平均粒径约150nm，pH约6.0～7.0，稳定性>24小时。

实施例11

a.配制有机相：取Austocystin D50mg溶于5ml氯仿与乙醇（氯仿:乙醇=10:1，V/V）的混合液中作为有机相，备用；

b.配制水相：配制95ml白蛋白注射用水溶液，浓度W/V%为4.0%，作为水相，备用；

c.制备纳米乳并冻干：将有机相加入水相，柠檬酸调节pH6.5，无菌条件、40℃以下，均质处理，先在12000psi低压下均质形成初乳，再40000psi高压下反复均质得到纳米乳，迅速冷却至-40℃，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用注射用水重新分散，得到Austocystin D浓度为1.0mg/mL的溶液，纳米颗粒平均粒径约226nm，pH约6.0～7.0，稳定性>24小时。

实施例12

a.配制有机相：取Austocystin D50mg溶于5ml氯仿与乙醇（氯仿:乙醇=10:1，V/V）的混合液中作为有机相，备用；

b.配制水相：配制95ml白蛋白注射用水溶液，浓度W/V%为2.5%，作为水相，备用；

c.制备纳米乳并冻干：将有机相加入水相，柠檬酸调节pH5.5，无菌条件、40℃以下，均质处理，先在16000psi低压下均质形成初乳，再40000psi高压下反复均质得到纳米乳，加入占总重量5%蔗糖作为冻干保护剂，迅速冷却至-40℃，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

结果：所得冻干制剂中纳米颗粒粉末用注射用水重新分散，得到Austocystin D浓度为0.8mg/mL的溶液，纳米颗粒平均粒径约168nm，pH约6.0～7.0，稳定性>24小时。

实施例13   外观形态观察

实施例6中得到的纳米乳采用扫描电镜观察所得纳米粒的形态，激光粒度分布仪测定粒径分布，结果显示纳米粒呈规则球状（见图1），粒径分布范围及平均粒径（见图2）。 

实施例14    体外释放

实施例6中得到的冻干制剂用注射用水重新分散，取纳米粒混悬液适量至于透析袋中，透析夹封口，置于盛有100mL磷酸缓冲液（pH7.4）释放介质的广口瓶中，恒温振荡箱中振荡（37±1℃，50±1次/min），分别于不同时间取释放介质1mL，补充等量释放介质，样品通过高效液相色谱仪测定含量，计算累计释放量。（见图3）

实施例15   体外结肠癌细胞株抑制试验

利用MTT法（四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法）检测纳米粒相对于原料药的肿瘤抑制活性是否有所改善。选用人源结肠癌细胞株SW620，设置冻干制剂组（实施例6），原料药组，空白纳米粒组及培养液组（对照组）；剂量设置0.01μM，0.1μM,1.0μM,10μM，100μM，复孔6个；设置24，48，72h三个时间点。

结果显示冻干制剂的细胞抑制作用优于原料药组，48h时效果最明显（图4），空白纳米粒组的细胞抑制作用不明显，提示本发明所述冻干制剂纳米颗粒具有良好的生物相容性。

实施例16  体内结肠癌肿瘤抑制试验

5周龄Balb/c裸鼠60只，右腋下注射SW620细胞悬液0.2mL，瘤径长至0.5cm时分组实验，使每组平均肿瘤体积相近，设置冻干制剂（实施例6），原料药组和对照组，尾静脉注射连续给药7天，两周后测量瘤径体重，计算肿瘤体积和相对肿瘤体积。

肿瘤体积 V = a × b² / 2

其中a为肿瘤长径；b为肿瘤短径

相对肿瘤体积 RTV = Vt / V0

其中V0为分组给药前测得肿瘤体积；Vt为每一次测量时的肿瘤体积。

相对肿瘤增殖率T/C（%）= TRTV / CRTV × 100%

其中TRTV为给药组RTV ；CRTV为阴性对照组RTV。

表 1  Austocystin D纳米粒对荷SW620瘤裸鼠肿瘤生长抑制结果

对求出的结果与对照组比较（t检验） * P < 0.05，** P < 0.01；本发明所述冻干制剂中纳米颗粒组与同剂量原料药组比较 △ P < 0.05。

结果表明，本发明制备的Austocystin D冻干制剂中纳米颗粒与Austocystin D原料药相比，相同剂量下体重下降更少，存活动物数量更多，对肿瘤的生长具有更为显著的抑制作用，说明Austocystin D纳米粒能够降低其毒副作用，提高Austocystin D的疗效。

Claims (8)

1.一种含有Austocystin D白蛋白纳米颗粒粉末的抗肿瘤冻干制剂的制备方法，其特征在于，它按如下步骤进行：

a.配制Austocystin D溶液：取Austocystin D溶于无水乙醇使其浓度为0.5～5.0mg/mL，备用；

b.配制白蛋白注射用水溶液：配制白蛋白注射用水溶液W/V浓度为1.0%～6.0%，调pH7.5～9.5，备用；

c.配制预冻干液：搅拌下向2mL白蛋白水溶液中加入Austocystin D无水乙醇溶液，搅拌5～120min，间歇加入无水乙醇，每次加入1.0～2.0mL，加入速度0.5～5.0ml/min，间隔为3～20min，使白蛋白析出，并持续至形成胶体混悬液,其中颗粒粒径为50～500nm,备用；

d..固化并冻干：向c所得预冻干液中加入8%戊二醛适量，使上述胶体混悬液中颗粒完全固化，固化24小时，减压蒸发有机溶剂，高速离心后分离上清液，加等体积注射用水重新分散沉淀物，再离心，如此重复3～5次后冷冻干燥，得抗肿瘤药物冻干制剂。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述步骤b中用强碱或缓冲盐调节pH为8.0～9.0；所述强碱为氢氧化钠或钾；所述缓冲盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、柠檬酸二钠或柠檬酸三钠。

3.一种含有Austocystin D白蛋白纳米颗粒粉末的抗肿瘤冻干制剂的制备方法，其特征在于，它按如下步骤进行：

a.配制有机相：取Austocystin D溶于氯仿和乙醇混合液中作为有机相，备用；所述氯仿：乙醇的V/V 比例为10：1 ；

b.配制水相：配制白蛋白注射用水溶液浓度为2.0%～65.0%W/V，作为水相，备用；

c.制备纳米乳并冻干：将上述有机相加入水相，使其中的Austocystin D与白蛋白的质量比在1：98~1：10之间，pH5.0～7.0，无菌条件、40℃以下，均质处理，先在8000～16000psi低压下均质形成初乳，再20000～40000psi高压下反复均质得到纳米乳，冷冻干燥得抗肿瘤药物冻干制剂。

4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，所述步骤b中用生物相容性酸或酸性缓冲盐调节pH为5.5～6.5；所述生物相容性酸选自柠檬酸、盐酸、磷酸、醋酸、乳酸、碳酸、琥珀酸中的一种或其混合物；所述酸性缓冲盐选自生物相容性酸的钠盐或钾盐。

5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，在所述纳米乳冷冻干燥前加入占总重量1~10%的冻干保护剂，所述冻干保护剂选自蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖、甘露醇中的一种或其混合物。

6.根据权利要求1、2、3、4或5所述的制备方法，其特征在于，所述纳米颗粒粉末中的山酮类化合物Austocystin D含量为0.3～3.0%，白蛋白含量为60%～98%。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述白蛋白选自人血清白蛋白、动物血清白蛋白或重组人血白蛋白。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述纳米颗粒粉末用注射用水或生理盐水中复溶后的平均粒径为50～500nm，pH为5.0～8.5，Austocystin D的浓度为0.1～4.0mg/mL。

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