CN102225094B - 一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂，所述的复合免疫增强剂由以下重量百分比的各组分组成：小檗提取物20-40%，苦楝叶提取物5-15%，氯化钠25-40%，柠檬酸6-17%，氨基磺酸5-20%，椰油酰胺丙基甜菜碱2-10%。本发明还提供了一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的应用及其制备方法。本发明优点在于：本发明原料简单易得，制备成本较低；本发明配制简单，使用方便，可以直接添加到黄颡鱼饲料中，口服投喂，也可以在水体中泼洒使用，便于黄颡鱼服用；本发明无毒副残留性、无抗药性、环保，对饲料适口性无任何不良影响。
Description
技术领域
本发明涉及一种复合免疫增强剂，具体地说，是一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂及其制备方法。
背景技术
黄颡鱼在分类上隶属于鲶形目、黄颡鱼属，有黄颡鱼、江黄颡鱼（瓦氏黄颡鱼）、岔尾黄颡鱼、光泽黄颡鱼等4 种，目前用于人工养殖的主要是黄颡鱼和江黄颡鱼。黄颡鱼虽然个体较小，但其肉味鲜美，营养丰富，很受消费者欢迎。目前，黄颡鱼的池塘集约式养殖在广东、四川、湖北、浙江等省都得到了较快的发展（刘兴旺和张海涛，2010）。但是，黄颡鱼养殖业在快速发展的同时也面临着相当严重病害危机。其中危害最为严重的是黄颡鱼出血性水肿病。据初步研究，病原系细菌性，主要症状为病鱼体表泛黄，黏液增多；咽部皮肤破损充血呈圆形孔洞；腹部膨大、肛门红肿、外翻；头部充血；背鳍肿大，胸鳍与腹鳍基部充血，鳍条溃烂，甚至腹部自胸鳍到腹鳍纵裂，胆汁外渗；腹腔淤积大量血水或黄色冻胶状物，胃、肠内无食，胃苍白，肠内充满黄色脓液，肝脏上有黄色斑块，脾坏死，肾脏上有霉黑点（李晓凤等，2003）。该病在苗种培育期间最易发生，死亡率高达80％。目前，关于此病的防治的方法多为水体泼洒强氯精等化学消毒剂或口服恩诺沙星等抗生素药物（郑夫跃，2008），存在药物残留的风险及对养殖鱼的次生损害。
到目前为止，在黄颡鱼的研究中有人用芽孢杆菌、低聚糖复合制剂及中草药制剂作为饲料免疫增强剂，发现能够提高黄颡鱼的免疫水平并促进生长（朱浩等，2008），但专门针对黄颡鱼出血性水肿病的一种绿色环保的免疫类物质还没有见到。因此，研制一种复合免疫增强剂来提高黄颡鱼自身的免疫力，同时能够有效抑制黄颡鱼出血性水肿病病菌，从而提高黄颡鱼养殖过程出血性水肿病发病几率以提高养殖成活率具有十分重要的意义。
中国专利文献CN 101390925A，公开日2009年3月25日，发明名称为一种淡水鱼苗用复合免疫增强剂，该发明公开了一种淡水鱼苗用复合免疫增强剂，其特征是由β-葡聚糖、壳聚糖、枯草芽孢杆菌、维生素C、柴胡、黄芪和杜仲所组成，它们的质量百分数范围分别为25-35、20-30、15-25、10-15、8-13、7-11和5-8。该发明可以对淡水鱼苗起到一定的作用，提高鱼苗的免疫力，但是对于能够防治黄颡鱼的出血性水肿病的复合免疫增强剂，目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的空缺，提供一种能够防治黄颡鱼出血性水肿病的免疫增强剂。
本发明的再一的目的是，提供一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的应用。
本发明的另一的目的是，提供一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂，所述的复合免疫增强剂由以下重量百分比的各组分组成：小檗提取物20-40%，苦楝叶提取物5-15%，氯化钠25-40%，柠檬酸6-17%，氨基磺酸5-20%，椰油酰胺丙基甜菜碱2-10%。
所述的复合免疫增强剂由以下重量百分比的各组分组成：小檗提取物40%，苦楝叶提取物10%，氯化钠25%，柠檬酸6%，氨基磺酸10%，椰油酰胺丙基甜菜碱9%。
所述的小檗提取物的制备方法为：取小檗果实在80~90℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎后即为小檗提取物。
所述的苦楝叶提取物的制备方法为：取新鲜苦楝叶，捣碎后放入容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在50~60℃条件下烘干即成苦楝叶提取物。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：所述的复合免疫增强剂在制备防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂药物中应用。
为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
（a） 小檗提取物的制备：取小檗果实在80~90℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎；
（b）苦楝叶提取物的制备：取新鲜苦楝叶，捣碎后放入容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在50~60℃条件下烘干；
（c） 将各组分混合均匀，完成制备。
本发明优点在于：
1、本发明原料简单易得，制备成本较低；
2、本发明配制简单，使用方便，可以直接添加到黄颡鱼饲料中，口服投喂，也可以在水体中泼洒使用，便于黄颡鱼服用；
3、本发明无毒副残留性、无抗药性、环保，对饲料适口性无任何不良影响。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备（一）
取小檗提取物40kg，苦楝叶提取物10kg，氯化钠25kg，柠檬酸6kg，氨基磺酸10kg，椰油酰胺丙基甜菜碱9kg，混合均匀即可完成制备。其中所述小檗提取物的制备方法为：取小檗果实在80℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎后即得；所述苦楝叶提取物的制备方法为：取新鲜苦楝叶10kg，捣碎后放入20L容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在50℃条件下烘干即得。
实施例2
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备（二）
取小檗提取物20kg，苦楝叶提取物6kg，氯化钠27kg，柠檬酸17kg，氨基磺酸20kg，椰油酰胺丙基甜菜碱10kg，混合均匀即可完成制备。其中所述小檗提取物的制备方法为：取小檗果实在90℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎后即得；所述苦楝叶提取物的制备方法为：取新鲜苦楝叶6kg，捣碎后放入20L容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在50℃条件下烘干即得。
实施例3
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备（三）
取小檗提取物30kg，苦楝叶提取物10kg，氯化钠30kg，柠檬酸6kg，氨基磺酸20kg，椰油酰胺丙基甜菜碱4kg，混合均匀即可完成制备。其中所述小檗提取物的制备方法为：取小檗果实在85℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎后即得；所述苦楝叶提取物的制备方法为：取新鲜苦楝叶10kg，捣碎后放入20L容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在50℃条件下烘干即得。
实施例4
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备（四）
取小檗提取物20kg，苦楝叶提取物15kg，氯化钠25kg，柠檬酸10kg，氨基磺酸20kg，椰油酰胺丙基甜菜碱10kg，混合均匀即可完成制备。其中所述小檗提取物的制备方法为：取小檗果实在90℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎后即得；所述苦楝叶提取物的制备方法为：取新鲜苦楝叶15kg，捣碎后放入20L容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在55℃条件下烘干即得。
实施例5
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备（五）
取小檗提取物30kg，苦楝叶提取物5kg，氯化钠26kg，柠檬酸17kg，氨基磺酸20kg，椰油酰胺丙基甜菜碱2kg，混合均匀即可完成制备。其中所述小檗提取物的制备方法为：取小檗果实在80℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎后即得；所述苦楝叶提取物的制备方法为：取新鲜苦楝叶5kg，捣碎后放入20L容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在60℃条件下烘干即得。
实施例6
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备（六）
取小檗提取物20kg，苦楝叶提取物10kg，氯化钠30kg，柠檬酸10kg，氨基磺酸20kg，椰油酰胺丙基甜菜碱10kg，混合均匀即可完成制备。其中所述小檗提取物的制备方法为：取小檗果实在85℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎后即得；所述苦楝叶提取物的制备方法为：取新鲜苦楝叶10kg，捣碎后放入20L容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在55℃条件下烘干即得。
实施例7
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备（七）
取小檗提取物20kg，苦楝叶提取物15kg，氯化钠40kg，柠檬酸10kg，氨基磺酸5kg，椰油酰胺丙基甜菜碱10kg，混合均匀即可完成制备。其中所述小檗提取物的制备方法为：取小檗果实在85℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎后即得；所述苦楝叶提取物的制备方法为：取新鲜苦楝叶15kg，捣碎后放入20L容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在60℃条件下烘干即得。
实施例8
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备（八）
取小檗提取物20kg，苦楝叶提取物15kg，氯化钠25kg，柠檬酸15kg，氨基磺酸15kg，椰油酰胺丙基甜菜碱10kg，混合均匀即可完成制备。其中所述小檗提取物的制备方法为：取小檗果实在90℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎后即得；所述苦楝叶提取物的制备方法为：取新鲜苦楝叶15kg，捣碎后放入20L容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在50℃条件下烘干即得。
实施例9
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的生长实验
1、实验材料
材料选择：一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂A（按实施例1制备所得），黄颡鱼膨化饲料（浙江恒兴饲料有限公司生产）。
动物选择：选择浙江湖州菱湖6口黄颡鱼养殖池塘作为实验对象，随机选择3口池塘作为实验组，另外三组作为对照组。
2、给药方法
将本发明一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂按照1.5kg/吨的量添加到黄颡鱼膨化饲料中，作为实验组喂养饲料，对照组投喂等量的未添加本发明的黄颡鱼膨化饲料。投喂时间为5个月。
3、观察方法
投喂饲料2个月后，在6个池塘中分别取样10尾黄颡鱼，分别测定其肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性，养殖5个月后，将6口池塘清塘抓鱼计算亩产量。
4、实验结果
黄颡鱼生长实验结果参见表1，由表1可以看出：
普通膨化饲料中添加本发明一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂，黄颡鱼肝脏SOD活性提高了约38%，平均体重提高了21%，平均亩产提高了23%。该试验结果说明：使用本发明的免疫增强剂能够有效提高黄颡鱼的免疫水平，并促进黄颡鱼的生长速度。
表1. 本发明对黄颡鱼免疫活性及体重和亩产的影响
| 肝脏SOD（U/mg） | 平均体重（g） | 亩产（kg） | |
| 对照组 | 57.65 | 53 | 1832 |
| 实验组 | 85.23 | 64 | 2245 |
实施例10
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的出血性水肿实验
1、实验材料
材料选择：一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂A（按实施例1制备所得）。
动物选择：选择浙江湖州菱湖一口爆发黄颡鱼出血性水肿病的池塘作为实验对象。
2、给药方法
实验初期阶段，在池塘中按照0.3ppm的浓度连续泼洒本发明一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂3天，3天之后的后续养殖中，每15天使用该免疫增强剂一次，均按照0.3ppm浓度泼洒，泼洒时间至黄颡鱼清塘。
3、观察方法
在黄颡鱼清塘时，根据清塘所得黄颡鱼数量和鱼苗总量计算池塘总体养殖成活率。
4、实验结果
根据清塘之后所得鱼苗数量计算，该池塘总体养殖成活率86%，未因黄颡鱼出血性水肿病造成大规模死亡。该实验结果说明使用本发明的免疫增强剂在水体中泼洒能够有效治疗黄颡鱼出血性水肿病，降低因该病发生造成的黄颡鱼死亡。
实施例11
一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的感染实验
1、实验材料
材料选择：一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂A（按实施例1制备所得），发生出血性水肿病的黄颡鱼作为感染源。
动物选择：选择水族箱中养殖的初始体重约为1.6g的黄颡鱼作为实验对象。
2、实验方法
按照质量比为0.2%的添加量在黄颡鱼饲料中添加本发明一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂，在水族箱中养殖初始体重约为1.6g的黄颡鱼40天，然后用发生出血性水肿病的黄颡鱼作为感染源，将病死的黄颡鱼粉碎后投喂给养殖40天的黄颡鱼，投喂时间为6天。
3、观察方法
观察水族箱中的黄颡鱼是否被感染。
4、实验结果
在投喂6天之后，水族箱中黄颡鱼未发现感染症状，结果表明本发明所述的免疫增强剂能够有效提高黄颡鱼抗出血性水肿病的能力。
综上所述，可见本发明一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂不仅能够有效提高黄颡鱼的免疫水平，促进黄颡鱼的生长速度，还能够有效治疗黄颡鱼出血性水肿病，降低因该病发生造成的黄颡鱼死亡率，并且有效提高黄颡鱼抗出血性水肿病的能力，另外，本发明原料简单易得，制备成本较低，且配制简单，使用方便，可以直接添加到黄颡鱼饲料中，口服投喂，也可以在水体中泼洒使用，无毒副残留性、无抗药性、环保，对饲料适口性无任何不良影响，适合推广使用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂，其特征在于，所述的复合免疫增强剂由以下重量百分比的各组分组成：小檗提取物40%，苦楝叶提取物10%，氯化钠25%，柠檬酸6%，氨基磺酸10%，椰油酰胺丙基甜菜碱9%；所述的小檗提取物的制备方法为：取小檗果实在80~90℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎后即为小檗提取物；所述的苦楝叶提取物的制备方法为：取新鲜苦楝叶，捣碎后放入容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在50~60℃条件下烘干即成苦楝叶提取物。
2.如权利要求1所述的复合免疫增强剂在制备防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂药物中的应用。
3.一种防治黄颡鱼出血性水肿病的复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：
（a）小檗提取物的制备：取小檗果实在80~90℃条件下烘干，将烘干后的小檗果实粉碎；
（b）苦楝叶提取物的制备：取新鲜苦楝叶，捣碎后放入容器中，注满清水后搅拌均匀，阴凉处发酵7天，然后将残渣用20目筛网过滤，剩余液体在50~60℃条件下烘干；
（c）将各组分混合均匀，完成制备，所述的各组分是如下重量百分比的物质：小檗提取物40%，苦楝叶提取物10%，氯化钠25%，柠檬酸6%，氨基磺酸10%，椰油酰胺丙基甜菜碱9%。
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