CN102225089A - 治疗癌症的药物组合物、药物制剂及应用和制法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗癌症的药物组合物、药物制剂及应用和制备方法。该药物组合物及药物制剂含有人参、黄芪、刺五加及斑蝥单体成分以及根据需要添加的斑蝥单体衍生物。按重量份计算，优选含有人参皂苷类单体200-300份、黄芪单体48-72份，刺五加苷类单体60-90份，斑蝥单体4.2-6.3份。选取上述各中药药材提取物和根据需要选择的斑蝥单体衍生物，加入辅料，按照常规制剂工艺制成药物制剂。本发明的药物组合物及其制成的药物制剂应用于治疗原发性肝癌、肺癌、直肠癌、恶心淋巴瘤和妇科恶心肿瘤等各种癌症时，取得了意料不到的治疗效果，解决了既能治疗癌症、又提高免疫力同时毒性较低的技术难题。

Description

治疗癌症的药物组合物、药物制剂及应用和制法

技术领域

本发明涉及治疗癌症的药物制剂技术领域，特别是涉及一种治疗癌症的药物组合物、药物制剂及应用和制备方法。

背景技术

近年来，肺癌、原发性肝癌、结直肠癌、妇科恶性肿瘤等的发病率逐年上升，已成为严重危害人类健康的最常见的恶性肿瘤，给我们的社会、经济、生活带来诸多不变。

目前市面上有很多治疗癌症的产品，包括化学药和中成药。化学药治疗作用明显，但是其副作用也比较多，轻则恶心、呕吐，重者造成骨髓移植，白细胞减少，引起血液疾病，带来生命危险。而中成药通过对人体机能进行调节，以达到阴阳的平衡，药物内的一些成份能增强免疫力，从而达到治疗癌症的目的，占领较大的市场份额，但是由于其疗效不够迅速、有效成分作用机理不明确、服用剂量大等特点使得其在市场上应用有一定局限性，因此，研制和开发出疗效迅速、服用剂量小、有效成分明确的中药制剂已越来越受到人们的重视，有着广阔的市场前景。

现有技术中，以人参、黄芪、刺五加和斑蝥4味中药制成的艾迪注射液是本公司发明品种，具有清热解毒、消瘀散结的作用，临床上主要用于原发性肝癌、肺癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科恶性肿瘤的治疗等，收载于卫生部部颁标准20册。

现有文献报道，四种药材中分别以某一成分或某些成分起主导作用，这些成分共同协调增效，使四种组合物对治疗癌症有一定效果。

人参，五加科人参属植物人参(panax ginserg C.A.Meyer)的干燥根。人参亦称黄精、神草、地精，“人参味苦，大补元气，止渴生津，调营养卫”，是东北三宝之一。随着研究的深入，发现其含有多种化学成分，如人参皂苷、多糖、生物碱、挥发油、氨基酸、脂肪酸等，诸多的化学成分决定其生物活性和药理作用范畴。如抗肿瘤、抗衰老、提高机体的免疫力、降糖降脂、增加血管新生等作用。

黄芪，豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪A.membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌等功效。化学成分研究表明，黄芪药材主要含皂苷类、黄酮及其苷类和多糖类成分。药理作用研究表明，黄芪所含的皂苷类成分为其抗炎、提高免疫功能的有效成分，黄酮及其苷类则对心血管作用的主要有效成分，具有良好的清除氧自由基，降低细胞脂质过氧化物生成及血浆中的总胆固醇，能够升高细胞SOD活性，维持细胞正常代谢，此外还具有调节免疫、抗病毒等多方面的药理作用。研究表明，皂类成分以黄芪甲苷为主要成分，黄酮类成分以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为主。

刺五加，刺五加载于《神农本草经》，列为上品，为五加科(Araliaceae)五加属(Acanthopanax)植物刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et im.)Harms的干燥根及根茎。用于脾肾阳虚，体虚乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多梦。现代医学研究表明刺五加具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗损伤及抗疲劳作用，还可治疗心脑血管疾病、糖尿病、神经衰弱等症，是临床防治疾病常用的中药品种之一。现在研究表明，刺五加中的有效成分主要为紫丁香苷，异嗪皮啶等其它苷类成分。

斑蝥，斑蝥为芫菁科昆虫南方大斑蝥或黄黑小斑蝥的干燥体，具有攻毒蚀疮、逐瘀散结的功效，人类应用斑蝥治疗疾病已有2000多年的历史。斑蝥的主要有效成分为斑蝥素，而其衍生物有去甲斑蝥素(NCTD)、斑蝥酸钠和去氢去甲斑蝥素等，这些衍生物是在斑蝥素的基础上改变某些化学基团或是由人工合成的新型低毒抗癌药，具有抗肿瘤、增加白细胞、提高免疫力等作用。

斑蝥素(carltharidin)研究表明斑蝥素是斑蝥抗癌的有效成分，也是其毒性的主要成分。斑蝥素为无色无味发亮结晶，是斑蝥酸的内酐，其化学成分为单萜烯类，结构为外型-1，2-顺-二甲基-3，6-氧桥六氢化邻苯二甲酸酐。

去甲斑蝥素(norcantharidin，NCTD)为斑蝥素的衍生物，由呋喃与马来酐按Diels-Alder加成反应后催化氢化制得的人工全合成的一种新化合物。药理作用表现为，明显减轻对泌尿系统的刺激作用，并增强抗癌效果。

现有技术中，艾迪注射液的制备方法为，人参切片，用乙醇加热回流提取两次，合并提取液，滤过，回收乙醇，药液备用；药渣与斑蝥、黄芪、刺五加加水煎煮三次，合并煎液，滤过，滤液与人参提取液合并，以石硫法沉淀处理二次，所得上清液加乙醇静置过夜，取上清液加压回收乙醇至无醇味，加注射用水，按照常规方法制得注射液。该制备过程中，对这四种药材采用常规的醇沉、煎煮提取，得到药材的提取物，并进一步对提取物进行制剂制备。但，不论使用何种药材提取方法，得到的是四种药材的总提取物，不光含有效的成分，如皂苷类、黄酮类，还有其他无效成分，这必将导致药物的使用剂量大，并且各种成分的作用机理也不明确，这正是该类药物在市场上应用的局限性所在。而且，对去甲斑蝥素这一重要的抗癌有效成分也没有加以充分运用，各种有效成分如总苷甚至单体的用量配比也不清楚。因此，对上述药材的有效成分单体以及衍生物的研究作进一步的深入，是对艾迪产品的又一开发，也是我们研究人员的职责所在。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有治疗癌症的中药制剂中服用量大、有效成分及其作用机理不明确的缺陷，提供一种疗效迅速、安全、质量可控的治疗癌症的药物组合物及其制备方法。

为解决上述技术问题，本发明直接采用人参、黄芪、刺五加、斑蝥四味中药药材的提取物(优选用人参皂苷类单体、黄芪单体、刺五加苷类单体、斑蝥单体)以及根据需要选择的斑蝥衍生物，在治疗原发性肝癌、肺癌、结直肠癌、恶心淋巴瘤和妇科恶心肿瘤等各种癌症方面取得了意料不到的治疗效果。

具体来说，本发明提供了如下的技术方案：

(1)一种治疗癌症的药物组合物，含有人参、黄芪、刺五加及斑蝥单体成分。

(2)根据技术方案1所述的药物组合物，按重量份计算，含有人参皂苷类单体200-300份、黄芪单体48-72份，刺五加苷类单体60-90份，斑蝥单体4.2-6.3份。

(3)根据技术方案2所述的药物组合物，按重量份计算，含有人参皂苷类单体225-275份、黄芪单体54-66份，刺五加苷类单体67.5-82.5份，斑蝥单体4.7-5.8份；优选含有人参皂苷类单体250份、黄芪单体60份，刺五加苷类单体75份，斑蝥单体5.25份。

(4)根据技术方案3所述的药物组合物，前述的人参皂苷类单体为人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re，和/或它们药学上可接受的盐或水合物，或这些组分的任意组合(也就是说，本发明中人参皂苷类单体可以为人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和它们药学上可接受的盐或水合物中的任一种组分或这些组分的任意组合)；前述的黄芪单体成分为黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，和/或它们药学上可接受的盐或水合物或它们的任意组合(也就是说，本发明中黄芪单体成分可以为黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和它们药学上可接受的盐或水合物中任一种组分或这些组分的任意组合)；前述的刺五加苷类单体成分为紫丁香苷，和/或其药学上可接受的盐或水合物(也就是说，刺五加苷类单体成分可以为紫丁香苷和其药学上可接受的盐或水合物中的任一种组分或它们的任意组合)；前述的斑蝥单体成分为斑蝥素和/或其药学上可接受的盐或水合物(也就是说，斑蝥单体成分为斑蝥素和其药学上可接受的盐或水合物中的任一种组分或它们的任意组合)。

(5)根据技术方案4所述的药物组合物，按重量份计算，含有人参皂苷Rb1 80-120份、人参皂苷Rg1 40-60份、人参皂苷Re 80-120份、黄芪甲苷32-48份、毛蕊异黄酮葡萄糖苷16-24份、紫丁香苷60-90份和斑蝥素4.2-6.3份。

(6)根据技术方案5所述的药物组合物，按重量份计算，含有人参皂苷Rb1 90-110份、人参皂苷Rg1 45-55份、人参皂苷Re 90-110份、黄芪甲苷36-44份、毛蕊异黄酮葡萄糖苷18-22份、紫丁香苷67.5-82.5份和斑蝥素4.7-5.8份；优选含有人参皂苷Rb1 100份、人参皂苷Rg1 50份、人参皂苷Re 100份、黄芪甲苷40份、毛蕊异黄酮葡萄糖苷20份、紫丁香苷75份和斑蝥素5.25份。

(7)根据技术方案1-4任一项所述的药物组合物，还含有斑蝥单体衍生物。

(8)根据技术方案1-4任一项所述的药物组合物，还含有56-84份斑蝥单体衍生物，优选含有63-77份斑蝥单体衍生物，更优选含有70份斑蝥单体衍生物。

(9)根据技术方案5或6所述的药物组合物，还含有去甲斑蝥素或其药学上可接受的盐或水合物。

(10)根据技术方案5或6所述的药物组合物，还含有56-84份去甲斑蝥素，优选含有63-77份去甲斑蝥素，更优选含有70份去甲斑蝥素。

(11)一种治疗癌症的药物制剂，由技术方案1-10任一项所述的药物组合物和辅料制成。

(12)根据技术方案11所述的治疗癌症的药物制剂，其剂型为注射制剂。优选为冻干注射制剂或小容量或大容量注射液。

(13)技术方案1-10任一项所述的药物组合物或技术方案11或12所述的药物制剂在制备治疗癌症的药物中的应用，所述癌症为原发性肝癌、肺癌、结直肠癌、恶性淋巴瘤或妇科恶性肿瘤。

(14)一种治疗癌症的注射制剂的制备方法，其将技术方案5或6或10所述的药物组合物中的各原料加入到甘油或丙二醇中，水浴加热溶解后，加入吐温80或司盘混匀，再根据需要加入或不加入辅料，加注射用水溶解并定溶，调节PH值，过滤，然后冻干或灌封、灭菌，制得成品。

本发明的前述治疗癌症的药物组合物制成药物制剂的制备方法为：取药物原料中药药材提取物：人参单体优选人参皂苷类单体、黄芪单体、刺五加单体优选刺五加苷类单体、斑蝥单体和根据需要可选的斑蝥单体衍生物，加入辅料，按常规制剂工艺制成药物学意义上的各种剂型。

其中，人参、黄芪、刺五加、斑蝥四味中药药材的提取物诸如人参皂苷类单体、黄芪单体、刺五加苷类单体、斑蝥单体以及斑蝥衍生物(去甲斑蝥素)均可以从市场上商购得到。本发明所称的常规制剂工艺以及辅料等是指在教科书、国家标准、地方标准上已经公开的方法、技术及辅料。

具体来说，例如，本发明的注射制剂的制备可以采用如下方法：将上述药物组合物中各单体，加入到甘油或丙二醇中，水浴加热溶解后，加入吐温80或司盘混匀，再根据需要加入或不加入辅料，加注射用水溶解并定溶，调节PH值，过滤，然后按照注射制剂的要求，冻干或灌封、灭菌，制得成品。在本发明中，优选药物的剂型包括小容量注射剂、大容量注射剂和冻干粉针剂。

其中，上述制备中，所用的用于调节PH值的酸有：稀盐酸、稀硫酸、磷酸、醋酸、枸椽酸、酒石酸，优选稀盐酸。

本发明的药物组合物和药物制剂主要用于治疗原发性肝癌、肺癌、结直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科恶性肿瘤。

本发明的药物组合物和药物制剂通过明显的抗肿瘤活性和免疫调节双重作用，对治疗恶性肿瘤及癌症取得了良好的效果，而且直接采用药物的有效提取物及衍生物作为制剂原料，解决了采用传统提取工艺制得的药物使用剂量大、不完全等问题，并改善了单独使用任一种药物可能导致的副作用，使药物疗效更快、更强。另外，在技术方案中增加了去甲斑蝥素，使得药物的抗肿瘤作用更加明显，疗效更确切。

具体实施方式

本发明的药物组合物或药物制剂通过直接采用人参、黄芪、刺五加、斑蝥四味中药药材的提取物优选人参皂苷类单体、黄芪单体、刺五加苷类单体、斑蝥单体以及优选根据需要选择的斑蝥衍生物，在治疗原发性肝癌、肺癌、直肠癌、恶心淋巴瘤和妇科恶心肿瘤等各种癌症方面取得了意料不到的治疗效果。经过研究发现，上述各单体成分治疗癌症的机理如下：

人参皂苷Rb1能够显著提高自然杀伤(NK)细胞功能和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量，在研究人参皂苷Rb1和黄芪多糖对体外培养大鼠肠粘膜微血管内皮细胞的作用时发现，微血管内皮细胞在人参皂苷Rb1和黄芪多糖的作用下，细胞分泌白介素-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)均增多，并且随着浓度的增加内皮细胞分泌量也增加。白消安(治疗癌症的药物)诱导内皮细胞凋亡可能是造血干细胞移植中内皮损伤的重要机制之一，而人参皂苷Rb1可通过抑制白消安诱导的内皮细胞凋亡发挥对内皮细胞保护效应。人参皂苷Rg1具有抗衰老、抗氧化、提高免疫力和增强记忆力等作用。人参皂苷Re有改善学习记忆障碍，调节神经系统的作用，人参皂苷Re可促进血清蛋白质合成，可明显增加小鼠被迫行走的自发活动，在体内经水解变成Rh1和Rh2，从而发挥其抑制肿瘤作用，能抑制S180肉瘤生长。

黄芪甲苷是从黄芪中分离得到的一种重要的具有多种药理活性的皂苷类化合物，黄芪甲苷在促进M吞噬功能和溶酶体水解酶含量增加等非特异性免疫活性的基础上增强处理和传递抗原的能力，并且能够抑制腹腔巨噬细胞产生IL-1和TNF-α；能够在体内和体外促进小鼠T、B淋巴细胞的增殖和抗体生成，促进非胸腺依赖区内B细胞增生、浆细胞大量形成及促进抗体合成的作用，通过对机体免疫功能的调节作用而发挥抗肿瘤作用。另外黄芪甲苷还具有保护神经系统、对内皮屏障功能损伤的保护、保肝护肝、抗菌抗炎等作用，并且对放化疗有着增效减毒的作用。黄芪毛蕊异黄酮通过增强内皮细胞ACE2表达，抑制ACE的分泌，减轻AngTI所致的体外培养HUVECs的损伤，具有保护血管内皮细胞的作用。

紫丁香苷为B-谷甾醇葡萄糖苷，是一种较为典型的苷类化合物，具有抗疲劳、降血脂、增强免疫力和保护心肌的作用，它是刺五加的主要有效成分。另外，实验表明紫丁香苷对4种肿瘤细胞(人宫颈癌Hela细胞、乳腺癌MCF-7细胞、肺癌A540细胞和前列腺癌PC-3细胞)均有明显的抗肿瘤活性，随着其浓度的增大肿瘤抑制率升高，还可以抑制实体瘤的生长。

去甲斑蝥素是斑蝥素的衍生物，它的作用机理在于促进肿瘤细胞及感染的细胞死亡，干扰细胞分裂，特异性阻抑肿瘤于G2+M期(DNA复制完成期)，并影响其周期运行速度，使癌细胞被破坏(微丝、微管)，影响癌细胞超微结构导致线粒体、微绒毛及质膜损伤等；抑制癌细胞DNA的合成；破坏癌细胞骨架及其超微结构；提高癌细胞呼吸控制率，调节机体免疫力，在保留抗癌作用的同时，减少不良反应，同时具有升高白细胞的功能。动物体外试验表明，对肝癌BEL-7402、食管癌CaEs-17、喉癌SMMC-7721、宫颈癌Hela等细胞株的形态或增殖有破坏或抑制作用；体内试验，对小鼠艾氏腹水癌、肉瘤180及肝癌实体型有一定的抑制效力，可提高腹水肝癌H22小鼠瘤细胞微粒体的呼吸控制率及溶酶体酶活性，抑制癌细胞DNA合成，破坏癌细胞骨架及超微结构。

斑蝥素的抗肿瘤机制主要是抑制细胞的蛋白质的合成，降低癌毒激素水平及影响癌细胞的核算代谢。斑蝥素先抑制癌细胞的蛋白质的合成，继而影响RNA和DNA的生物合成，最终实现抑制癌细胞的生成和分裂。

从上述单体及衍生物的药理作用可以看出，四种药材提取物及衍生物之间的相互作用具有协同性相互作用，申请人在研究中发现，低剂量的斑蝥素、去甲斑蝥素、人参皂苷Re、黄芪甲苷、紫丁香苷即有明显的抗肿瘤作用，而低剂量的人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷通过对机体免疫功能的调节以及对内皮细胞的保护而发挥抗肿瘤作用，几种单体之间的协调性相互作用，更强于单独药物的加合效应。

采用本发明的药物组合物所制备的各药物制剂用于治疗癌症时，给药方案如下：

冻干粉制剂：一日1次，30天为一疗程；每日活性成分给药剂量约为38.4-46.2mg。具体用法是，将冻干品中注入注射用水，充分溶解，然后静脉滴注，一次50ml；以0.9％氯化钠或5～10％葡萄糖注射液450ml稀释后使用。

小容量注射剂：一日1次，30天为一疗程；每日活性成分给药剂量约为36.9-49.8mg。具体用法为，静脉滴注，一次100ml，以0.9％氯化钠或5～10％葡萄糖注射液400ml稀释后使用。

大容量注射剂：静脉滴注，一次500ml，一日1次。30天为一疗程；每日有效给药剂量约为20.84-26.00mg。

实施例

为了使本领域普通技术人员更好的理解本发明，本申请人进行了一系列药效学实验研究，以证明本发明的效果。

下面，举出实施例对本发明进一步描述，但本发明并不限于下述的实施例。

药物制备实施例：

下面制备实施例中制备各注射剂型的试剂所用的方法、仪器和操作方式均是本领域常规的方法、仪器和操作方式，其中所用的各种单体成分以及辅料来源如下表I所示：

表I

实施例1：A1冻干的制备

取人参皂苷Rb1 100mg、人参皂苷Rg1 50mg、人参皂苷Re 100mg、黄芪甲苷40mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷20mg、紫丁香苷75mg、斑蝥素5.25mg，加入到5ml甘油中，水浴加热溶解后，加入5ml司盘混匀，再加入40g甘露醇，加注射用水溶解并定溶至200ml，用稀盐酸调节PH值至3，过滤，灌装于5ml西林瓶中，每瓶2ml，冻干，扎盖，制得100支成品，每支活性成分约3.90mg。

实施例2：A2冻干的制备

取人参皂苷Rb1 100mg、人参皂苷Rg1 50mg、人参皂苷Re 100mg、黄芪甲苷40mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷20mg、紫丁香苷75mg、斑蝥素6.3mg、去甲斑蝥素70mg，加入到20ml丙二醇中，水浴加热溶解后，加入20ml吐温80混匀，再加入120g糊精，加注射用水溶解并定溶至200ml，用稀盐酸调节PH值至3，过滤，灌装于5ml西林瓶中，每瓶2ml，冻干，扎盖，制得100支成品，每支活性成分约4.61mg。

实施例3：冻干A3的制备

取人参皂苷Rb1 90mg、人参皂苷Rg1 45mg、人参皂苷Re 110mg、黄芪甲苷48mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷18mg、紫丁香苷67.5mg、斑蝥素5.8mg，加入到10ml甘油中，水浴加热溶解后，加入10ml吐温80混匀，再加入60g乳糖，加注射用水溶解并定溶至200ml，用稀盐酸调节PH值至4，过滤，灌装于5ml西林瓶中，每瓶2ml，冻干，扎盖，制得100支成品，每支活性成分约3.84mg。

实施例4：冻干A4的制备

取人参皂苷Rb1 80mg、人参皂苷Rg1 60mg、人参皂苷Re 80mg、黄芪甲苷48mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷16mg、紫丁香苷90mg、斑蝥素4.2mg、去甲斑蝥素84mg，加入到20ml甘油中，水浴加热溶解后，加入15ml吐温80混匀，再加入40g甘露醇，加注射用水溶解并定溶至200ml，用稀盐酸调节PH值至5，过滤，灌装于5ml西林瓶中，每瓶2ml，冻干，扎盖，制得100支成品，每支活性成分约4.62mg。

实施例5：小容量注射剂B1的制备

取人参皂苷Rb1 90mg、人参皂苷Rg1 55mg、人参皂苷Re 90mg、黄芪甲苷44mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷18mg、紫丁香苷67.5mg、斑蝥素4.7mg，加入到30ml丙二醇中，水浴加热溶解后，加入8ml司盘混匀，加注射用水溶解并定溶至1000ml，用稀盐酸调节PH值至5，过滤，灌装于10ml安瓿中，每瓶10ml，灌封，灭菌，制得100支成品，每支活性成分约3.69mg。

实施例6：小容量注射剂B2的制备

取人参皂苷Rb1 120mg、人参皂苷Rg1 40mg、人参皂苷Re 120mg、黄芪甲苷32mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷24mg、紫丁香苷60mg、斑蝥素6.3mg、去甲斑蝥素56mg，加入到60ml甘油中，水浴加热溶解后，加入15ml吐温80混匀，加注射用水溶解并定溶至1000ml，用稀盐酸调节PH值至4，过滤，灌装于10ml安瓿中，每瓶10ml，灌封，灭菌，制得或100支成品，每支活性成分约4.58mg。

实施例7：小容量注射剂B3的制备

取人参皂苷Rb1 110mg、人参皂苷Rg1 55mg、人参皂苷Re 110mg、黄芪甲苷36mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷22mg、紫丁香苷82.5mg、斑蝥素5.8mg、去甲斑蝥素77mg，加入到40ml甘油中，水浴加热溶解后，加入20ml吐温80混匀，加注射用水溶解并定溶至1000ml，用稀盐酸调节PH值至5，过滤，灌装于10ml安瓿中，每瓶10ml，灌封，灭菌，制得100支成品，每支活性成分约4.98mg。

实施例8：大容量注射剂C1的制备

取人参皂苷Rb1 120mg、人参皂苷Rg1 60mg、人参皂苷Re 120mg、黄芪甲苷48mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷24mg、紫丁香苷90mg、斑蝥素6.3mg，加入到60ml丙二醇中，水浴加热溶解后，加入20ml吐温80混匀，再加入81gNaCl，加注射用水溶解并定溶至9000ml，用稀盐酸调节PH值至4，过滤，灌装于500ml输液瓶(徐州大华玻璃制品有限公司制品)中，每瓶500ml，灌封，灭菌，制得18瓶成品，每瓶活性成分约26mg。

实施例9：大容量注射剂C2的制备

取人参皂苷Rb1 80mg、人参皂苷Rg1 40mg、人参皂苷Re 80mg、黄芪甲苷32mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷16mg、紫丁香苷60mg、斑蝥素4.2mg，去甲斑蝥素63mg，加入到50ml甘油中，水浴加热溶解后，加入5ml司盘混匀，再加入600g葡萄糖，加注射用水溶解并定溶至9000ml，用稀盐酸调节PH值至3，过滤，灌装于500ml输液瓶(徐州大华玻璃制品有限公司制品)中，每瓶500ml，灌封，灭菌，制得18瓶成品，每瓶活性成分约20.84mg。

实施例10低组分用量制得的冻干  药物D1

取人参皂苷Rb1 70mg、人参皂苷Rg1 30mg、人参皂苷Re 70mg、黄芪甲苷30mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷10mg、紫丁香苷50mg、斑蝥素4.0mg，加入到5ml甘油中，水浴加热溶解后，加入5ml司盘混匀，再加入40g甘露醇，加注射用水溶解并定溶至200ml，用稀盐酸调节PH值至3，过滤，灌装于5ml西林瓶中，每瓶2ml，冻干，扎盖，制得100支成品，每支活性成分约2.64mg。

实施例11低组分用量制得的冻干  药物D2

取人参皂苷Rb1 75mg、人参皂苷Rg1 35mg、人参皂苷Re 75mg、黄芪甲苷28mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷15mg、紫丁香苷55mg、斑蝥素4.0mg、去甲斑蝥素50mg，加入到20ml丙二醇中，水浴加热溶解后，加入20ml吐温80混匀，再加入120g糊精，加注射用水溶解并定溶至200ml，用稀盐酸调节PH值至3，过滤，灌装于5ml西林瓶中，每瓶2ml，冻干，扎盖，制得100支成品，每支活性成分约3.37mg。

实施例12高组分用量制得的冻干  药物E1

取人参皂苷Rb1 130mg、人参皂苷Rg1 65mg、人参皂苷Re 130mg、黄芪甲苷50mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷25mg、紫丁香苷95mg、斑蝥素6.5mg，加入到10ml甘油中，水浴加热溶解后，加入10ml吐温80混匀，再加入60g乳糖，加注射用水溶解并定溶至200ml，用稀盐酸调节PH值至4，过滤，灌装于5ml西林瓶中，每瓶2ml，冻干，扎盖，制得100支成品，每支活性成分约5.02mg。

实施例13高组分用量制得的冻干  药物E2

取人参皂苷Rb1 125mg、人参皂苷Rg1 70mg、人参皂苷Re 125mg、黄芪甲苷55mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷30mg、紫丁香苷100mg、斑蝥素6.8mg、去甲斑蝥素90mg，加入到20ml甘油中，水浴加热溶解后，加入15ml吐温80混匀，再加入40g甘露醇，加注射用水溶解并定溶至200ml，用稀盐酸调节PH值至5，过滤，灌装于5ml西林瓶中，每瓶2ml，冻干，扎盖，制得100支成品，每支活性成分约6.02mg。

药物性能评价实验

下面，对上述制备实施例1-13制备的各药物，进行抗癌疗效、免疫功能、急性毒性、稳定性的评价实验。

实验例1本发明药物组合物抗肿瘤作用试验

1、实验材料：

药物：A1-A4：实施例1-4制得的冻干；B1-B3：实施例5-7制得的小容量注射剂；C1-C2：实施例8-9制得的大容量注射剂；D1-D2：实施例10-11低组分用量制得的冻干；E1-E2：实施例12-13高组分用量制得的冻干；F：市售艾迪注射液，规格10ml/支，批号20100512，贵州益佰制药股份有限公司生产。

瘤株：小鼠肉瘤S₁₈₀和肝癌H₂₂(华中科技大学同济药学院药物研究室提供)，EAC实体瘤(艾氏腹水癌)(协和医科大学提供)。

动物：昆明种小鼠，18-24g。

2、方法与结果：对动物移植性肿瘤的抑制作用：

①对小鼠S₁₈₀的抑制作用：取传代接种S₁₈₀ 10d的瘤源动物，无菌条件下抽取腹水瘤液，每鼠右腋皮下接种0.2ml约1×10⁶瘤细胞，24h后随机分组并开始给药(A1-A4，B1-B3，C1-C2，D1-D2、E1-E2和F均给药)，每天腹腔注射或静脉滴注1次，连续9～11d。对照组腹腔注射灭菌生理盐水。停药次日处死小鼠，称体重并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率。结果见表1。

②对小鼠H₂₂的抑制作用：方法同上，每鼠接种1×10⁶H₂₂细胞，结果见下表。

③对小鼠EAC实体瘤的抑制作用：抽取EAC瘤源小鼠腹水，1∶3∶5稀释(先抽1份稀释至3倍再稀释至5倍，其为本领域技术人员常规的稀释方法)，每鼠右腋皮下接种0.2ml，次日随机分组并给药，每日腹腔注射药物1次，连续10d。对照组腹腔注射灭菌生理盐水。停药次日处死小鼠，称瘤重计算抑瘤率，结果见表3。

以上实验中，艾迪注射液F给药剂量为30ml/kg，给药方法为腹腔注射；药物A1-A4、D1-D2、E1-E2给药方法均为5ml西林瓶中注入5ml注射用水，摇匀，然后按照30ml/kg剂量给药；药物B1-B3给药剂量为30ml/kg；药物C1-C2给药剂量为1500ml/kg，给药方法为静脉滴注。

抑瘤率(％)＝[1-(治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重)]×100％

表1对小鼠S₁₈₀的抑制作用

本发明制剂组(A1、A2、A3、A4、B1、B2、B3、C1、C2)与生理盐水组比较，^*P＜0.01，具有显著差异性；与艾迪注射液比较，#P＜0.05。

结论：以上实验结果可知，在相同的药物剂量下，本发明制剂抗肿瘤作用效果较艾迪注射液好，证明本发明制剂有明显抑制S₁₈₀生长作用，并呈良好量效关系，其中，加去甲斑蝥素抑制S₁₈₀生长的效果更优；另外，采用本发明所述单体的低组分制得的冻干制剂，其治疗效果与艾迪注射液相当，高组分疗效没有明显增加，表明采用本发明所述的用量范围，抑制S₁₈₀生长的效果良好。

表2对小鼠H₂₂的抑制作用

本发明制剂组(A1、A2、A3、A4、B1、B2、B3、C1、C2)与生理盐水组比较，#P＜0.01；与艾迪注射液比较，^*P＜0.05。

结论：本发明制剂组能明显抑制H₂₂的生长，其中，加去甲斑蝥素抑制S₁₈₀生长的效果更优。另外，采用本发明所述单体的低组分制得的冻干制剂，其治疗效果与艾迪注射液相当，高组分疗效没有明显增加，表明采用本发明所述的用量范围，抑制H₂₂生长的效果良好。

表3对小鼠EAC实体瘤的抑制作用

本发明制剂组(A1、A2、A3、A4、B1、B2、B3、C1、C2)与生理盐水组比较，#P＜0.01；与艾迪注射液比较，^*P＜0.05。

结论：本发明制剂组能明显抑制H₂₂的生长，其中，加去甲斑蝥素抑制S₁₈₀生长的效果更优。另外，采用本发明所述单体的低组分制得的冻干制剂，其治疗效果与艾迪注射液相当，高组分疗效没有明显增加，表明采用本发明所述的用量范围，抑制H₂₂生长的效果良好。

3、结论：根据以上实验结果，在相同药物剂量下，本发明制剂抗肿瘤作用效果较艾迪注射液好，且加去甲斑蝥素的效果更优。另外，采用本发明所述的用量范围，抑制肿瘤的效果良好，进一步考察本发明制剂的免疫作用以及急性毒性作用。

评价实验例2本发明的药物组合物对淋巴细胞亚群的影响。

1、实验材料：

药物：A1-A4：实施例1-4制得的冻干；B1-B3：实施例5-7制得冻干；C1-C2：实施例8-9制得的大容量注射剂；D1-D2：实施例10-11低组分用量制得的冻干；E1-E2：实施例12-13高组分用量制得的冻干；F：市售艾迪注射液，规格10ml/支，批号20100512，贵州益佰制药股份有限公司生产。

瘤株：大肠癌细胞(人大肠癌细胞株L₀V₀株，购至中国科学院广州生物医药与健康研究院，第5～7代)

动物：4-5周龄SD大鼠150只，体重112.7±15.7g，雌雄兼用。

2、方法与结果：SD大鼠腹腔常规接种大肠癌L₀V₀细胞悬液(大肠癌L₀V₀细胞和该细胞的营养液1640)0.2ml(约1×10⁶瘤细胞)，一周后随机分为15组，每组10只，实验组腹腔或静脉给药，对照组腹腔注射灭菌生理盐水，每天一次，连续一周。停药后次日采外周血并处死大鼠，用流式细胞仪(美国BECTON DICKINSON(BD)公司出售，分选型流式细胞仪，型号：FACS Aria Ⅱ TM)测定外周血中CD3+、CD4+、CD8+，计算CD4+/CD8+比值。

以上实验中，艾迪注射液F给药剂量为30ml/kg，给药方法为腹腔注射；药物A1-A4、D1-D2、E1-E2给药方法均为5ml西林瓶中注入5ml注射用水，摇匀，然后按照30ml/kg剂量给药；药物B1-B3给药剂量为30ml/kg；药物C1-C2给药剂量为1500ml/kg，给药方法为静脉滴注。

结果：T淋巴细胞亚群测定结果：由下表可见，本发明制剂组T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均高于生理盐水组，CD8+均低于生理盐水组，两者比较差异有极显著性P＜0.01。

表4对T淋巴细胞亚群的影响(x±s)

本发明制剂组(A1、A2、A3、A4、B1、B2、B3、C1、C2)与生理盐水组比较，#P＜0.01；与艾迪注射液比较，^*P＜0.05。

3、结论：T淋巴细胞浸润程度直接反映机体抗肿瘤的状态。根据以上实验结果显示，本发明制剂增强机体免疫功能的作用比艾迪注射液F强。其中，加去甲斑蝥素后增强机体免疫功能的作用更强。另外，采用本发明所述单体的低组分制得的冻干制剂，其免疫作用效果与艾迪注射液相当，高组分作用没有明显增加，表明采用本发明所述的用量范围，增强机体免疫功能的作用良好，使机体细胞免疫功能失调得到调节，机体抗肿瘤免疫力增强。

评价实验例3本发明的药物组合物毒理实验研究

1、实验材料：

药物：A1-A4：实施例1-4制得的冻干；B1-B3：实施例5-7制得的小容量注射剂；C1-C2：实施例8-9制得的大容量注射剂；D1-D2：实施例10-11低组分用量制得的冻干；E1-E2：实施例12-13高组分用量制得的冻干；F：市售艾迪注射液，规格10ml/支，批号20100512，贵州益佰制药股份有限公司生产。

动物：昆明小鼠300只，体重20±2g，雌雄兼用。

2、方法：肝脏注射考察对小鼠的急性毒性：昆明小鼠300只，体重20±2g，随机分为15组，每组20只，雌雄各半。以60mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，按无菌操作打开小鼠腹腔，暴露肝叶，15组小鼠分别肝内注射药物A1-A4、药物B1-B3、药物C1-C2、药物D1-D2、药物E1-E2、艾迪注射液F和生理盐水溶液0.10ml/只，缝合。术后观察动物的一般行为活动，食量、粪便及中毒死亡情况，观察期为14d。死亡小鼠及时尸解并对部分脏器进行病理切片。

3、结果：生理盐水组手术后大部分动物逐渐苏醒并缓慢恢复正常，少部分小鼠皮毛蓬乱，出现萎靡少动等毒性反应，20只小鼠7d内死亡4只。艾迪注射液组给药后7d内多数小鼠皮毛蓬乱，出现萎靡少动等毒性反应，20只小鼠7d内死亡12只；本发明冻干、小容量及大容量注射剂组少部分小鼠皮毛蓬乱，出现萎靡少动等毒性反应，药物A1-A4组中小鼠7d内分别死亡9、8、8、8只，药物B1-B3组中小鼠7d内分别死亡9、9、8只，药物C1-C2组中小鼠7d内分别死亡10、8只，药物D1-D2组中小鼠7d内分别死亡11、12只，药物E1-E2组中小鼠7d内分别死亡15、14只，显然，艾迪注射液组小鼠死亡率高于本发明制剂组，组间死亡率的差异有显著意义(P＜0.05)。另外，采用本发明所述单体的高组分制得的冻干制剂，毒性作用较强，小鼠死亡率高。15组中存活动物逐渐恢复正常，被毛浓度而有光泽，一般行为活动、食量和粪便等均正常，一般体征良好，在第2周内均未再发生死亡。

4、结论：根据本实验结果可知，本发明制剂毒性较艾迪注射轻，另外，由于本发明所述单体的高组分用量导致小鼠死亡率高，因此，临床上不建议采用本发明单体的高组分用量。

评价实验例4本发明的药物制剂稳定性考察

加速稳定性试验：随机选取实施例1、3、5、8中制得的样品各一份，编号1-4(方案1制得的)，随机选取实施例2、4、6、7、9中制得的样品各一份(方案2制得的)，编号5-9，在温度40℃±2℃，相对湿度75％±5％的条件下放置，分别在试验期间第1个月、2个月、3个月、6个月末取样一次进行考察。

考察以溶液性状、鉴别试验、pH值、有效成分斑蝥素含量为指标，检查产品的稳定性。结果见表5、表6。

表5加速稳定性试验结果表

表6加速稳定性试验结果

备注：本实验部分考察标准参考艾迪注射液质量标准WS3-B-3809-98。

结论：本发明制备的治疗癌症的组合物在加速试验条件下贮存，从加速考察结果来看，各考察项目均不见异常，有效成分含量也未发生明显变化，均符合质量标准要求。

通过上述抗癌疗效、免疫功能、急性毒性、稳定性实验，可以看出，采用本发明组合物制备的冻干、小容量注射剂以及大容量注射剂，治疗效果优于艾迪注射液，且毒性低，同时能增强机体的免疫功能，制剂的稳定性良好，是治疗肿瘤及癌症疾病的一良好选择。另外，由上述实施例可以看出，低用量配比虽然毒性低但是治疗效果及免疫作用均不理想，而高用量配比虽然疗效和免疫力提高，但是毒性大，因此，当各组分的用量处于本发明的药物组合物的范围内时，解决了既能治疗疾病、提高免疫力同时毒性较低的技术难题。

Claims (14)

1.一种治疗癌症的药物组合物，含有人参、黄芪、刺五加及斑蝥单体成分。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，按重量份计算，含有人参皂苷类单体200-300份、黄芪单体48-72份，刺五加苷类单体60-90份，斑蝥单体4.2-6.3份。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，按重量份计算，含有人参皂苷类单体225-275份、黄芪单体54-66份，刺五加苷类单体67.5-82.5份，斑蝥单体4.7-5.8份；优选含有人参皂苷类单体250份、黄芪单体60份，刺五加苷类单体75份，斑蝥单体5.25份。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，前述的人参皂苷类单体为人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re，和/或它们药学上可接受的盐或水合物，或它们的任意组合；前述的黄芪单体成分为黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，和/或它们药学上可接受的盐或水合物，或它们的任意组合；前述的刺五加苷类单体成分为紫丁香苷，和/或其药学上可接受的盐或水合物；前述的斑蝥单体成分为斑蝥素和/或其药学上可接受的盐或水合物。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，按重量份计算，含有人参皂苷Rb1 80-120份、人参皂苷Rg1 40-60份、人参皂苷Re 80-120份、黄芪甲苷32-48份、毛蕊异黄酮葡萄糖苷16-24份、紫丁香苷60-90份和斑蝥素4.2-6.3份。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，按重量份计算，含有人参皂苷Rb1 90-110份、人参皂苷Rg1 45-55份、人参皂苷Re 90-110份、黄芪甲苷36-44份、毛蕊异黄酮葡萄糖苷18-22份、紫丁香苷67.5-82.5份和斑蝥素4.7-5.8份；优选含有人参皂苷Rb1 100份、人参皂苷Rg1 50份、人参皂苷Re 100份、黄芪甲苷40份、毛蕊异黄酮葡萄糖苷20份、紫丁香苷75份和斑蝥素5.25份。

7.根据权利要求1-4任一项所述的药物组合物，还含有斑蝥单体衍生物。

8.根据权利要求1-4任一项所述的药物组合物，还含有56-84份斑蝥单体衍生物，优选含有63-77份斑蝥单体衍生物，更优选含有70份斑蝥单体衍生物。

9.根据权利要求5或6所述的药物组合物，还含有去甲斑蝥素或其药学上可接受的盐或水合物。

10.根据权利要求5或6所述的药物组合物，还含有56-84份去甲斑蝥素，优选含有63-77份去甲斑蝥素，更优选含有70份去甲斑蝥素。

11.一种治疗癌症的药物制剂，由权利要求1-10任一项所述的药物组合物和辅料制成。

12.根据权利要求11所述的治疗癌症的药物制剂，其剂型为注射制剂。

13.权利要求1-10任一项所述的药物组合物或权利要求11或12所述的药物制剂在制备治疗癌症的药物中的应用，所述癌症为原发性肝癌、肺癌、结直肠癌、恶性淋巴瘤或妇科恶性肿瘤。

14.一种治疗癌症的注射制剂的制备方法，其将权利要求5或6或10所述的药物组合物中的各原料加入到甘油或丙二醇中，水浴加热溶解后，加入吐温80或司盘混匀，再根据需要加入或不加入辅料，加注射用水溶解并定溶，调节PH值，过滤，然后冻干或灌封、灭菌，制得成品。