CN102210742B - 薄荷素油在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了薄荷素油在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用。

Description

薄荷素油在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用

技术领域

本发明涉及薄荷素油的用途，特别是涉及薄荷素油在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用。

背景技术

胆汁淤积性肝病主要由胆汁分泌或排泄障碍所致，可由肝细胞或胆管上皮的胆汁分泌障碍或胆汁流的阻断所致。但无论何种原因引起的胆汁淤积均可导致胆汁酸等毒性物质的潴留，引起肝细胞损伤和胆汁淤积性肝病。胆汁淤积性肝病包括原发性胆汁性肝硬化，原发性硬化性胆管炎，药物所致的胆汁淤积，妊娠性肝内胆汁淤积，婴儿慢性肝内胆汁淤积，纤维淤胆性肝炎等多种疾病[陆伦根、曾民德主编，胆汁淤积性肝病，人民卫生出版社，2007：162-163]，在临床上常表现为黄疸，瘙痒，尿色深，疲劳，骨病，黄斑瘤，血清胆红素、胆汁酸、碱性磷酸酶、5-核苷酸酶、γ-谷氨酰转氨酶ALT、AST升高，肝细胞损伤，胆道梗阻或封闭等。

该类疾病有较高的发病率。据不完全统计[俞华芳，胆汁淤积性肝病并发骨质疏松的研究进展，国外医学·消化系统分册，2003，23(6)：349-351]，全球胆汁淤积性肝病总发病率约900/百万，原发性胆汁性肝硬化(PBC)发病率约200/百万，药物诱导性胆汁淤积发病率约170/百万，妊娠肝内胆汁淤积(AIH)发病率约为140/百万。近年来，国内不完全调查显示，我国胆汁淤积性肝病报道也逐渐增多，1994-2002年有3万多例患者，2002-2008年猛增长至9万多例。特别是近期研究显示[李海霞，肝病对胆囊疾病影响的探讨(附131例分析)，中国实验诊断学，2008，12(11)：1436-1437；孙海涛等，“肝病及胆”临床分析，吉林中医学，2008，28(3)：182]，胆囊结石和胆囊息肉囊肿是诱发胆汁淤积肝病的重要因素，此外酒精肝、黄疸、内毒素血症以及代谢综合症也与胆汁淤积肝病发病有关，该病对人类健康已构成严重威胁，并且随着社会压力的增加，各种诱因致使胆汁淤积性肝病的发病率会持续增加。因此，胆汁淤积性肝病的治疗将成为医学界关注的重点。

目前针对胆汁淤积性肝病的治疗药物非常有限，较为有效的药物主要为熊去氧胆酸，但其疗程较长，在临床应用中，熊去氧胆酸也表现出一些不良反应，如腹泻、瘙痒、结石钙化等，少数研究现实具有毒性。而其它药物尽管在临床应用多年，但是均无肯定的疗效，如抗组胺药苯海拉明，非那根及阿片受体拮抗剂纳络酮仅能治疗疾病引起的瘙痒症状，依替磷酸盐仅能改善胆汁淤积、骨质疏松，S-腺苷蛋氨酸对慢性胆汁淤积性肝病是对症和暂时的[陆伦根，胆汁淤积性肝病的合理用药，实用临床医药杂志，2007，11(3)：1-3]。因此，研究和开发治疗胆汁淤积性肝病的药物是非常重要的。

薄荷广泛分布于我国各地，如云南、江苏、浙江、江西等都有出产。中国是薄荷油、薄荷脑的主要输出国之一。薄荷素油(Oleum Menthae Dementholatum)是薄荷中的主要化学成分，是一种传统的中药，具有清凉止痒、抗炎镇痛、祛痰、利胆、溶石排石等药效[刘红杰等，薄荷油研究进展，山东中医药大学学报2006，30(6)：502-505]，临床上主要用来治疗慢性胆囊炎[韩捷等，胆舒胶囊治疗慢性胆囊炎25例临床观察，中成药，2007，29(1)：附8-9]、胆结石[黄欣等，胆舒胶囊治疗胆石症的疗效观察，中国全科医学，2005，8(1)：55-56]、慢性结石性胆囊炎、肠易激综合症[闫峻等，薄荷油治疗肠易激综合症的药理和临床研究，国外医药·植物药分册，2006，21(2)：50-62]、产后腹胀[张文，薄荷油湿布热敷治疗产后腹胀，J.huaihua Med.，2001，19(3)：264-265]、老年术后肠功能恢复[江桂林，薄荷油湿热敷对老年术后肠功能恢复的临床观察，实用临床医药杂志(护理版)，2006，2(4)：42-43]、胆源性消化不良[黄宁新，胆舒治疗胆源性消化不良临床意义的探讨，中国基层医药，2005，12(8)：1099]等病症，但是将薄荷素油用于制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的用途，至今未见报道。

发明内容

本发明一方面提供了薄荷素油在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的用途。

本发明再一方面提供了薄荷素油在制备治疗原发性胆汁性肝硬化的药物中的用途。

本发明另一方面提供了薄荷素油在制备治疗由药物性胆汁淤积性肝病的药物中的用途。

本发明还提供了薄荷素油在制备治疗由化学性胆汁淤型肝病的药物中的用途。

本发明又一方面还提供了薄荷素油在制备治疗由体内雌激素过高引起的胆汁淤积性肝病的药物中的应用，优选妊娠肝内胆汁淤积症、由乙炔雌二醇引起的胆汁淤积性肝病。

本发明相对于现有技术的优点在于：薄荷素油在制备治疗胆汁淤积性肝病的应用，将为胆汁淤积性肝病的患者提供了一种新的用药选择，同时更能充分利用廉价易得的薄荷素油。

具体实施方式

实施例一薄荷素油对ANIT诱导的大鼠胆汁淤积性肝病的治疗作用

动物

SD大鼠，SPF级，6～8周龄，体重180～250g，雄性；合格证号均为：SCXK(川)2008-24，由四川省医学科学院实验动物研究所提供。

药品与试剂

薄荷素油，淡黄色油状液体，南通薄荷厂有限公司，批号20090414，薄荷酮含量19.4％，薄荷脑含量37.2％，成人以60kg计临床日用量2.7g/60kg，即0.045g/kg。

实验时将薄荷素油设为高、中、低三个剂量组：大鼠高、中、低剂量组的给药剂量分别为人用量的14、7、3.5倍，实际给药量为630mg/kg、315mg/kg、157.5mg/kg，给药容积为10ml/kg·d。

熊去氧胆酸胶囊，Dr.falk Pharma GmbH公司，批号09012683L，规格：250mg。成人以60kg计临床日用量60mg/60kg，即10mg/kg。本研究大鼠给药剂量为人用量的7倍，实际给药量为70mg/kg，给药容积为10ml/kg·d。

a-萘异硫氰酸酯(ANIT)，sigma公司，货号：N4525，批号：551-06-4；

TBA(血清总胆汁酸)测定试剂盒，德国HUMAN公司，批号H101A；

TBIL(总胆红素)试剂盒、DBIL(直接胆红素)试剂盒、AST(天门冬氨酸氨基转移酶)试剂盒和ALT(丙氨酸氨基转移酶)试剂盒，均为北京北化康泰临床试剂有限公司生产，批号：20090522。

主要仪器

Spectra Max M5全功能微孔板检测仪，USA Molecular Devices公司；

电热恒温培养箱，上海精宏实验设备有限公司；

Anke TDL-40B离心机，上海安亨科学仪器有限公司。

实验方法[徐小微、李兰娟、吕芳芳等，熊去氧胆酸治疗大鼠肝内淤胆的实验研究，中华肝病学杂志，2003，11(4)：244-245]

SD大鼠，SPF级，体重180～250g，雄性。除正常组外，各组大鼠灌胃3％的ANIT香油溶液，首剂量为150mg/kg，24h后再给予50mg/kg，造模48h后各鼠随机分为：模型对照组、熊去氧胆酸组、薄荷素油高、中、低剂量组，每组12只，另取12只作为正常对照组。各组按10mL/kg灌胃连续给药5天，正常对照组和模型对照组给予等容积蒸馏水，末次给药前大鼠禁食16h后，每组取6只股动脉采血，37℃保温30min，3000转/min离心10min，分离血清，测定血清生化指标中TBA、TBIL、DBIL、ALT、AST含量。每组余下6只给药1h后以乌来糖1g/kg腹腔注射麻醉，仰位固定，打开腹腔，在十二指肠降部肠系膜中找到胆管，做胆汁分流术，收集3h胆汁量，并进行统计。

实验结果

表1薄荷素油对ANIT诱导胆汁淤积性肝病大鼠胆汁流量、流速的影响

模型对照与正常对照相比：^△△P＜0.01；治疗组与模型对照相比：^*P＜0.05，^**P＜0.01；

表1结果显示：薄荷素油在630mg/kg、315mg/kg和157.5mg/kg剂量下能明显增加大鼠ANIT诱导性胆汁淤积性肝病的胆汁流量和胆汁流速(P＜0.01～0.05)。

表2薄荷素油对ANIT诱导胆汁淤积性肝病大鼠血清TBIL、DBIL、TBA的影响

模型对照与正常对照相比：^△△P＜0.01；治疗组与模型对照相比：^*P＜0.05，^**P＜0.01；

表3薄荷素油对ANIT诱导胆汁淤积性肝病大鼠血清ALT、AST的影响

模型对照与正常对照相比：^△△P＜0.01；治疗组与模型对照相比：^*P＜0.05，^**P＜0.01；

表2和表3结果表明：薄荷素油在630mg/kg和315mg/kg剂量下对ANIT诱导胆汁淤积性肝病大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA均有明显降低作用(P＜0.01～0.05)。

由表1、2和3结果可知，薄荷素油能够抑制ANIT诱导肝内胆汁淤积性肝病大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA等生化指标，促进胆汁分泌与排泄，对ANIT诱导大鼠肝内胆汁淤积性肝病有明显治疗作用。

实施例二薄荷素油对乙炔雌二醇诱导的大鼠胆汁淤积性肝病治疗作用

动物Wister大鼠，SPF级，6-8周龄，体重180-220g，雄性；合格证号均为：SCXK(川)2008-24；由四川省医学科学院实验动物研究所提供。

药品与试剂

薄荷素油，淡黄色油状液体，南通薄荷厂有限公司提供，批号20090414，薄荷酮含量19.4％，薄荷脑含量37.2％，成人以60kg计临床日用量2.7g/60kg，即0.045g/kg，实验时将薄荷素油设为高、中、低3个剂量组，大鼠高、中、低剂量组的给药剂量分别为人用量的14、7、3.5倍，实际给药量为630mg/kg、315mg/kg、157.5mg/kg，给药容积为10ml/kg；熊去氧胆酸胶囊，Dr.falkPharma GmbH公司，批号：09012683L，规格：250mg；吐温-80，天津市博迪化学有限公司，批号：20060508；17a-乙炔雌二醇，sigma公司，货号：46263，批号：551-06-4；总胆汁酸(TBA)测定试剂盒，德国HUMAN公司，批号H119A；总胆红素(TBIL)试剂盒，北京北化康泰临床试剂有限公司，批号：20091014；总胆固醇(CHO)测定试剂盒，批号：20091201；丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒，北京北化康泰临床试剂有限公司，批号：20090513；碱性磷酸酶(ALP)测定试剂盒，北京北化康泰临床试剂有限公司，批号：20091117；丙二醇，成都天华科技股份有限公司，批号：20010918；乌来糖，成都科龙化工试剂厂，批号：20060727。

主要仪器

Spectra Max M5全功能微孔板检测仪，USA Molecular Devices公司，编号：0201010；电热恒温培养箱，上海精宏实验设备有限公司，编号：0201040；德国eppendorf微量可调移液器，上海富众仪器有限公司，编号：Anke TDL-40B离心机，上海安亨科学仪器有限公司，编号：020147。

方法与结果

选取健康SPF级雄性Wister大鼠，随机分为：空白对照组、模型对照组、熊去氧胆酸组、薄荷素油高、中、低剂量组。除空白对照组外，各组按文献[María L.Ruiz，et al.Drug Metabolismand Disposition，2007，35(11)：2060-2066]方法：每日5.0mg/kg颈后部皮下注射乙炔雌二醇进行造模(乙炔雌二醇用丙二醇溶解，注射容积1.0ml/kg)，空白对照组注射等容积丙二醇溶液，初次造模后给药，造模与给药连续5天。第6天，大鼠末次给药前禁食禁水16h，给药1h后大鼠以乌来糖1g/kg腹腔注射麻醉，仰位固定，打开腹腔，在十二指肠降部肠系膜中找到胆管，做胆汁分流术，收集1h胆汁量，并进行股动脉采血，37℃保温30min，3000转/min离心10min分离血清，测定胆汁和血清生化指标中TBA、TBIL、ALP、ALT、AST含量，同时根据1h内胆汁流量和胆汁中TBA含量，计算出TBA排出量，并进行统计学处理。

实验结果

1、薄荷素油对乙炔雌二醇诱导的胆汁淤积性肝病大鼠胆汁流量和流速的影响

表4薄荷素油对乙炔雌二醇诱导胆汁淤积性肝病大鼠胆汁流量、流速的影响

模型对照组与空白对照组相比：^△P＜0.05；治疗组与模型对照组相比：^**P＜0.01；

表4结果显示，薄荷素油在630mg/kg、315mg/kg、157.5mg/kg三个剂量下均能明显增加乙炔雌二醇诱导的胆汁淤积性肝病大鼠的胆汁流量与流速(P＜0.01)，表明薄荷素油有较强的利胆作用。

2、对乙炔雌二醇诱导的胆汁淤积性肝病大鼠血清TBIL、ALP、ALT、AST、TBA的影响

表5薄荷素油对乙炔雌二醇诱导胆汁淤积性肝病大鼠血清TBIL、ALP、TBA的影响

模型对照组与空白对照相比：^△P＜0.05，^△△P＜0.01；治疗组与模型对照组相比：P＞0.05；

表6薄荷素油对乙炔雌二醇诱导胆汁淤积性肝病大鼠血清ALT、AST的影响

模型对照组与空白对照相比：^△P＜0.05；治疗组与模型对照组相比：^*P＜0.05；

由表5和表6结果显示：大鼠造模后血清ALP、AST、TBA明显升高(P＜0.05～0.01)。薄荷素油对大鼠乙炔雌二醇诱导胆汁淤积性肝病血清ALP、AST、TBA、ALT和TBIL有降低作用。

3、对乙炔雌二醇诱导的胆汁淤积性肝病大鼠胆汁TBIL、ALP、TBA、的影响

表7薄荷素油对乙炔雌二醇诱导胆汁淤积性肝病大鼠胆汁TBIL、ALP、TBA的影响

模型对照组与空白对照相比：^△△P＜0.01；治疗组与模型对照组相比：^*P＜0.05；

由表7的结果显示，大鼠造模后胆汁中ALP明显升高(P＜0.01)，TBA排出量明显降低(P＜0.01)，也能降低胆汁中的TBIL。薄荷素油在315mg/kg、157.5mg/kg剂量下能降胆汁中ALP含量(P＜0.05)；在630mg/kg、157.5mg/kg剂量下能增加TBA的肝内排出。

综上，薄荷素油能增加乙炔雌二醇诱导的胆汁淤积性肝病大鼠胆汁流量与流速，促进胆汁中TBA的排出，并降低血清TBA含量；降低胆汁中ALP的含量，并能降低血清ALP含量；同时也能降低血清和胆汁中TBIL，降低血清中的ALT、AST。

实施例三对CCL4诱导的小鼠肝损伤的影响

动物

昆明种小鼠，普通级，6～8周龄，18～22g，雌雄各半；小鼠的合格证号为：SCXK(川)2008-24，由四川省医学科学院实验动物研究所提供。

药品与试剂

薄荷素油，淡黄色油状液体，南通薄荷厂有限公司，批号20090414，薄荷酮含量19.4％，薄荷脑含量37.2％，成人以60kg计临床日用量2.7g/60kg，即0.045g/kg。

实验时将薄荷素油设为高、中、低三个剂量组：小鼠高、中、低剂量组的给药剂量分别为人用量的20、10、5倍，实际给药量为0.90g/kg、0.45g/kg、0.225g/kg，给药容积为20ml/kg·d。

联苯双酯滴丸，规格：1.5mg/250丸，浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：080201。成人以60kg计临床日用量45mg/60kg，即0.75mg/kg。本研究小鼠给药剂量为人用量的10倍，实际给药量为7.5mg/kg，给药容积为20ml/kg·d。

四氯化碳溶液，分析纯，天津市化学六厂三分厂，批号：20070501；

橄榄油，上海嘉里食品工业有限公司，许可证号：QS310002012787；

AST试剂盒和ALT试剂盒，均购自北京北化康泰临床试剂有限公司，批号：20090522。

主要仪器

SpectraMax M5全功能微孔板检测仪，USAMolecularDevices公司，编号：0201010；

电热恒温培养箱，上海精宏实验设备有限公司，编号：0201040；

Anke TDL-40B离心机，上海安亨科学仪器有限公司，编号：020147。

实验方法

健康昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，随机分为正常对照组、模型对照组、联苯双酯组、薄荷素油高、中、低剂量组。各组小鼠按20mL/kg灌胃给药连续5天，正常对照组、模型对照组给予等容积蒸馏水，于第5天末次给药1h后按10mL/kg腹腔注射浓度0.2％CC L4(浓度0.2％CCL4溶于橄榄油中)，禁食禁水16h后小鼠摘眼球取血，37℃保温30min，3000转/min离心10min，分离血清，测定血清ALT、AST含量，记录并进行统计。

实验结果

表8薄荷素油对CCL4诱导的肝损伤小鼠血清ALT、AST的影响

模型对照与正常对照相比：^△△P＜0.01；治疗组与模型对照相比：^*P＜0.05，^**P＜0.01；

由表8结果显示：薄荷素油在900mg/kg、450mg/kg、225mg/kg剂量下对CCL4肝损伤小鼠血清ALT均有明显降低作用(P＜0.01～0.05)；在225mg/kg剂量下对小鼠血清AST也有降作用(P＜0.05)。表明薄荷素油对小鼠CCL4肝损伤有明显保护作用。

Claims (7)

1.一种药物组合物在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中用途，其中所述药物组合物的活性成分为薄荷素油。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的胆汁淤积性肝病为原发性胆汁性肝硬化。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的胆汁淤积性肝病为药物性胆汁淤积性肝病。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的胆汁淤积性肝病为化学性胆汁淤积性肝病。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的胆汁淤积性肝病是由体内雌激素过高引起的。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述的胆汁淤积性肝病为妊娠肝内胆汁淤积症。

7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述的胆汁淤积性肝病是由乙炔雌二醇引起的。