CN102191283B - 利用廉价氮源发酵制备丁二酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种利用廉价氮源发酵制备丁二酸的方法，属于发酵工程领域。本发明的技术要点在于所述的发酵培养基中的廉价氮源为豆饼粉、棉籽粉、花生饼粉、鱼粉、麸皮、豆粕、玉米蛋白粉、豆粕水解液或者玉米蛋白粉水解液，且其总氮含量等于发酵时微生物所需的的总氮含量。按照本发明配置的培养基与常规培养基发酵能力相当。通过本发明提供的利用廉价氮源发酵制备丁二酸的方法，减少了酵母粉用量，降低了丁二酸生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用廉价氮源发酵制备丁二酸的方法，属于发酵工程领域。
背景技术
丁二酸（俗名琥珀酸）是生物炼制产品工程中优秀的碳四平台化合物，微生物法生产丁二酸具有高效率、环保性以及原料的可再生性等优点。微生物法制备丁二酸所用的菌种主要有Mannheimia succiniciproducens， Actinobacillus succinogenes， Anaerobiospirillum succiniciproducens 以及 Escherichia coli等，而这些微生物利用葡萄糖等可再生资源高效生产丁二酸的同时需要富含氨基酸、维生素、无机盐以及微量元素等营养成分来维持菌体正常生长代谢，而酵母粉、蛋白胨、牛肉膏等氮源就是因为富含多种上述营养成分而被广泛利用，但这些氮源价格昂贵，限制了微生物法制备丁二酸的工业化。
本申请人的一个在先中国专利申请CN101748162A公开了一种利用微生物发酵废弃细胞实现氮源循环利用的方法。该方法利用发酵工业中微生物发酵生产结束后的菌体细胞破壁后的上清液作为氮源，实现了发酵工业中发酵结束后部分氮源的回收，既降低了产品生产成本，又减轻了废弃物处理的负担。
发明内容
本发明的技术目的是提供一种利用廉价氮源发酵制备丁二酸的方法，使得该方法可以以廉价氮源替代或减少酵母粉等昂贵氮源的用量，以降低丁二酸生产成本。
在了解目前氮源使用情况以及成本后，本发明的技术方案为：
一种利用廉价氮源发酵制备丁二酸的方法，包括利用廉价氮源配制发酵培养基、接入种子液发酵培养制备丁二酸，其特征在于所述的发酵培养基中的廉价氮源为豆饼粉、棉籽粉、花生饼粉、鱼粉、麸皮、豆粕、玉米蛋白粉、豆粕水解液或者玉米蛋白粉水解液，且其总氮含量等于发酵时微生物所需的的总氮含量。
其中，本发明所述的发酵制备丁二酸的方法应理解为现有技术中任何利用产丁二酸微生物发酵生产丁二酸的方法，例如，所述的产丁二酸微生物通常包括Mannheimia succiniciproducens， Actinobacillus succinogenes， Anaerobiospirillum succiniciproducens 以及 Escherichia coli；所述的发酵方法通常是指常规的发酵方法，即首先培养产丁二酸微生物的种子液，再将种子液接种于发酵培养基中进行发酵，发酵结束后的发酵液再进行下游分离处理得到丁二酸产品。
本发明的技术要点即在于选择了廉价的氮源来代替现有技术的丁二酸发酵常规培养基中的氮源。而常规的氮源通常是酵母粉、蛋白胨、牛肉膏等价格昂贵的氮源。而本发明通过直接利用豆饼粉、棉籽粉、花生饼粉、鱼粉、麸皮、豆粕、玉米蛋白粉，或者对豆粕、玉米蛋白粉进行预处理、水解得到其水解液，并考察各种廉价氮源对发酵的影响，廉价氮源与酵母粉的联用对发酵的影响。根据各种廉价氮源的特性分别进行预处理和水解，然后根据微生物生长所需的总氮含量加入与之总氮含量相等的氮源或者氮源水解液，或者加入氮源与酵母粉的混合物，替代了传统的高价氮源，实现了同样产率的丁二酸的发酵生产。
利用本发明的方法，碳源及其他无机盐等营养成分与常规培养基完全相同，并且在相同的发酵条件下进行微生物发酵，实验结果证明按照本发明配制的培养基与常规培养基发酵能力相当。通过本发明提供的利用廉价氮源发酵制备丁二酸的方法，减少了酵母粉用量，降低了丁二酸生产成本。
其中，本发明所述的豆粕水解液的制备方法为：
（1） 磷酸预处理；
（2） 酶水解处理后，离心得到的上清液。
其中所述的磷酸预处理方法是指：将豆粕粉按固液质量比1:10制成豆粕粉水溶液，在豆粕粉水溶液中按33.3μL/g干物料加入85%的磷酸于90℃下预处理10 min。
所述的酶水解处理是指：用2 mol/L NaOH溶液将磷酸预处理之后的豆粕粉溶液的pH调至8.0，按4.17g/kg干物料加入碱性蛋白酶（诺维信公司生产），于55℃下水解24h。
本发明所述的玉米蛋白粉水解液的制备方法为所述的玉米蛋白水解液的制备方法为酶水解处理后，离心得到的上清液：将玉米蛋白粉制成质量浓度为10%的水溶液，并用2 mol/L NaOH溶液将溶液pH调至8.5，按5.3 g/kg干物料加入碱性蛋白酶（诺维信公司生产），于60℃下水解10h，水解结束后留上清液即为玉米蛋白粉水解液。
本发明所述廉价氮源还可以是上述豆饼粉、棉籽粉、花生饼粉、鱼粉、麸皮、豆粕、玉米蛋白粉、豆粕水解液或者玉米蛋白粉水解液与酵母粉联用的氮源；即当单独使用廉价氮源时丁二酸生产能力达到极限，可以选择与酵母粉联合使用，使得丁二酸生产能力进一步提高。
本发明的另一个有益效果在于，豆饼粉、棉籽粉、花生饼粉、鱼粉、麸皮、豆粕以及玉米蛋白粉是食品行业主要的副产物，含有丰富的蛋白、氨基酸以及B族维生素等微生物生长所需的营养成分，可以减少酵母粉、蛋白胨等昂贵氮源的用量，并且价格低廉，来源广泛，能有效地降低丁二酸的生产成本。
具体实施方式
以下实施例对本发明做了详细说明，但对本发明的应用并无限制。
实施例1
本实施例为Actinobacillus succinogenes NJ113(CGMCC 1716)利用豆饼粉为氮源厌氧发酵制备丁二酸，总氮含量测定方法为凯氏定氮法。
表1 豆饼粉总氮含量以及发酵培养基中豆饼粉用量
由表1可见，Actinobacillus succinogenes NJ113以豆饼粉为氮源厌氧发酵制备丁二酸时豆饼粉用量为15.53 g/L。
种子培养基：酵母膏 5 g/L，玉米浆干粉 2.5 g/L，NaHCO3 10 g/L，NaH2PO4·2H2O 9.6 g/L，K2HPO4·3H2O 15.5 g/L。
种子培养方法：在250mL血清瓶中加入上述培养基96mL，121℃灭菌15 min，加入已灭菌的浓度为500 g/L的葡萄糖2mL，菌液2mL，于37℃，200rpm摇床中培养10h。
发酵培养基：豆饼粉 15.53 g/L，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L。
在3L发酵罐中加入上述发酵培养基1.25 L，121℃灭菌15 min，加入已灭菌的浓度为500 g/L的葡萄糖150 mL，种子液100 mL。此时培养基中总氮含量为1.25 g/L，相当于常规培养基中10 g/L酵母粉的总氮含量，葡萄糖浓度为50g/L。
实验条件：按接种量7 %接入Actinobacillus succinogenes NJ113种子液100mL，发酵温度37 ℃，搅拌转速200 r/min，CO2通气量0.2 vvm，以25% Na2CO3为pH调节剂维持pH在6.8。
将本实施例发酵培养基和常规发酵培养基在上述相同条件下进行发酵实验，48h后检测发酵液中丁二酸以及甲酸、乙酸、乳酸的含量，结果见表2。
表2 以豆饼粉为氮源的发酵结果
实施例2
本实施例为Actinobacillus succinogenes NJ113(CGMCC 1716)利用棉籽粉为氮源厌氧发酵制备丁二酸。
表3 棉籽粉总氮含量以及发酵培养基中棉籽粉用量
由表3可见，Actinobacillus succinogenes NJ113以棉籽粉为氮源厌氧发酵制备丁二酸时棉籽粉用量为13 g/L。
种子培养基及种子培养方法同实施例1。
发酵培养基：棉籽粉 13g/L，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L。
在3L发酵罐中加入上述发酵培养基1.25 L，121℃灭菌15 min，加入已灭菌的浓度为500 g/L的葡萄糖150 mL，种子液100 mL。此时培养基中总氮含量为1.25 g/L，相当于常规培养基中10 g/L酵母粉的总氮含量，葡萄糖浓度为50g/L。
实验条件：按接种量7 %接入Actinobacillus succinogenes NJ113种子液100mL，发酵温度37 ℃， 搅拌转速200 r/min， CO2通气量0.2 vvm， 以25% Na2CO3为pH调节剂维持pH在6.8。
将本实施例发酵培养基和常规发酵培养基在上述相同条件下进行发酵实验，50h后检测发酵液中丁二酸以及甲酸、乙酸、乳酸的含量，结果见表4。
表4 以棉籽粉为氮源的发酵结果
实施例3
本实施例为Actinobacillus succinogenes NJ113(CGMCC 1716)利用花生饼粉为氮源厌氧发酵制备丁二酸。
表5 花生饼粉总氮含量以及发酵培养基中用量
由表5可见，Actinobacillus succinogenes NJ113以花生饼粉为氮源厌氧发酵制备丁二酸时花生饼粉用量为21.93 g/L。
种子培养基及种子培养方法同实施例1。
发酵培养基：花生饼粉 21.93 g/L，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L。
在3L发酵罐中加入上述发酵培养基1.25 L，121℃灭菌15 min，加入已灭菌的浓度为500 g/L的葡萄糖150 mL，种子液100 mL。此时培养基中总氮含量为1.25 g/L，相当于常规培养基中10 g/L酵母粉的总氮含量，葡萄糖浓度为50g/L。
实验条件：按接种量7 %接入Actinobacillus succinogenes NJ113种子液100mL，发酵温度37 ℃， 搅拌转速200 r/min， CO2通气量0.2 vvm， 以25% Na2CO3为pH调节剂维持pH在6.8。
将本实施例发酵培养基和常规发酵培养基在上述相同条件下进行发酵实验，50h后检测发酵液中丁二酸以及甲酸、乙酸、乳酸的含量，结果见表6。
表6 以花生饼粉为氮源的发酵结果
实施例4
本实施例为Actinobacillus succinogenes NJ113(CGMCC 1716)利用鱼粉为氮源厌氧发酵制备丁二酸。
表7 鱼粉总氮含量以及发酵培养基中用量
由表7可见，Actinobacillus succinogenes NJ113以鱼粉为氮源厌氧发酵制备丁二酸时鱼粉用量为12 g/L。
种子培养基及种子培养方法同实施例1。
发酵培养基：鱼粉 12 g/L，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L。
在3L发酵罐中加入上述发酵培养基1.25 L，121℃灭菌15 min，加入已灭菌的浓度为500 g/L的葡萄糖150 mL，种子液100 mL。此时培养基中总氮含量为1.25 g/L，相当于常规培养基中10 g/L酵母粉的总氮含量，葡萄糖浓度为50g/L。
实验条件：按接种量7 %接入Actinobacillus succinogenes NJ113种子液100mL，发酵温度37 ℃， 搅拌转速200 r/min， CO2通气量0.2 vvm， 以25% Na2CO3为pH调节剂维持pH在6.8。
将本实施例发酵培养基和常规发酵培养基在上述相同条件下进行发酵实验，50h后检测发酵液中丁二酸以及甲酸、乙酸、乳酸的含量，结果见表8。
表8 以鱼粉为氮源的发酵结果
实施例5
本实施例为Actinobacillus succinogenes NJ113(CGMCC 1716)利用麸皮为氮源厌氧发酵制备丁二酸。
表9 麸皮总氮含量以及发酵培养基中用量
由表9可见，Actinobacillus succinogenes NJ113以麸皮为氮源厌氧发酵制备丁二酸时麸皮用量为12.75 g/L。
种子培养基及种子培养方法同实施例1。
发酵培养基：麸皮 12.75 g/L，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L。
在3L发酵罐中加入上述发酵培养基1.25 L，121℃灭菌15 min，加入已灭菌的浓度为500 g/L的葡萄糖150 mL，种子液100 mL。此时培养基中总氮含量为1.25 g/L，相当于常规培养基中10 g/L酵母粉的总氮含量，葡萄糖浓度为50g/L。
实验条件：按接种量7 %接入Actinobacillus succinogenes NJ113种子液100mL，发酵温度37 ℃， 搅拌转速200 r/min， CO2通气量0.2 vvm， 以25% Na2CO3为pH调节剂维持pH在6.8。
将本实施例发酵培养基和常规发酵培养基在上述相同条件下进行发酵实验，50h后检测发酵液中丁二酸以及甲酸、乙酸、乳酸的含量，结果见表10。
表10 以麸皮为氮源的发酵结果
实施例6
本实施例为Actinobacillus succinogenes NJ113(CGMCC 1716)利用豆粕粉和豆粕水解液为氮源厌氧发酵制备丁二酸。
表11 豆粕粉和豆粕水解液总氮含量以及在发酵培养基中的用量
对豆粕粉和豆粕水解液用于发酵的可行性进行验证。
将豆粕进行水解，水解条件如下：将豆粕粉按固液质量比1:10制成豆粕粉水溶液，在豆粕粉水溶液中按33.3μL/g干物料加入85%的磷酸于90℃下预处理10 min，用2mol/L NaOH溶液将pH调至8.0，按4.17g/kg干物料加入碱性蛋白酶（诺维信公司生产），于55℃下水解24h。水解结束后留上清备用。
种子培养及种子培养方法同实施例1。
发酵培养基：豆粕粉 19.41 g/L或者豆粕水解液533.3 mL/L，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L。
在3L发酵罐中加入上述发酵培养基1.25 L，121℃灭菌15 min，加入已灭菌的浓度为500 g/L的葡萄糖150 mL，种子液100 mL。保证培养基中总氮含量为1.25 g/L，相当于常规培养基中10 g/L酵母粉的总氮含量，葡萄糖浓度为50g/L。
实验条件：按接种量7%接入Actinobacillus succinogenes NJ113种子液100mL，发酵温度37 ℃， 搅拌转速200 r/min， CO2通气量0.2 vvm， 以25% Na2CO3为pH调节剂维持pH在6.8。
将本实施例发酵培养基和常规发酵培养基在上述相同条件下进行发酵实验，50h后检测发酵液中丁二酸以及甲酸、乙酸的含量，结果见表12。
表12 以豆粕粉和豆粕水解液分别为氮源的发酵结果
实施例7
本实施例为Actinobacillus succinogenes NJ113(CGMCC 1716)利用玉米蛋白粉以及玉米蛋白水解液为氮源厌氧发酵制备丁二酸。
表13 玉米蛋白粉和玉米蛋白水解液总氮含量以及在发酵培养基中的用量
对玉米蛋白粉和玉米蛋白水解液用于发酵的可行性进行验证。
将玉米蛋白粉进行水解，水解条件如下：将玉米蛋白粉制成质量浓度为10%的水溶液，并用2 mol/L NaOH溶液将溶液pH调至8.5，按5.3g/kg干物料加入碱性蛋白酶（诺维信公司生产），于60℃下水解10h。水解结束后留上清备用。
种子培养基及种子培养方法见实施例1。
发酵培养基：玉米蛋白粉 14.7 g/L或玉米蛋白水解液410 mL/L，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L。
在3L发酵罐中加入上述发酵培养基1.25 L，121℃灭菌15 min，加入已灭菌的浓度为500 g/L的葡萄糖150 mL，种子液100 mL。此时培养基中总氮含量为1.25 g/L，相当于常规培养基中10 g/L酵母粉的总氮含量，葡萄糖浓度为50g/L。
实验条件：按接种量7 %接入Actinobacillus succinogenes NJ113种子液100mL，发酵温度37 ℃，搅拌转速200 r/min，CO2通气量0.2 vvm，以25% Na2CO3为pH调节剂维持pH在6.8。
将本实施例发酵培养基和常规发酵培养基在上述相同条件下进行发酵实验，50h后检测发酵液中丁二酸以及甲酸、乙酸的含量，结果见表14。
表14 以玉米蛋白粉和玉米蛋白水解液分别为氮源的发酵结果
实施例8
生物法制备丁二酸过程中存在氮源用量过剩的情况，本实施例在Actinobacillus succinogenes NJ113(CGMCC 1716)发酵过程中以豆饼粉为例，对氮源浓度进行优化，以降低丁二酸生产成本。
种子培养基及种子培养方法同实施例1。
发酵培养基：豆饼粉3~15.53g/L，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L。
在100mL血清瓶中分别加入上述培养基26 mL，碱式碳酸镁1.5 g， 121℃灭菌15 min，分别加入已灭菌的浓度为500 g/L的葡萄糖3 mL，种子液1 mL。此时培养基中总氮含量为1.25 g/L，葡萄糖浓度为50g/L，通无菌CO2两分钟。
将本实施例发酵培养基在上述实验条件下进行发酵实验，结果见表15。
表15 降低豆饼粉用量的发酵结果
实施例9
当豆饼粉完全替代酵母粉作氮源时，Actinobacillus succinogenes NJ113(CGMCC 1716)耗糖能力较低，最多仅能消耗50g/L初糖，丁二酸产量较低，本实施例将豆饼粉与酵母粉按不同比例联用，提高初糖浓度，考察Actinobacillus succinogenes NJ113产酸能力。
种子培养基及种子培养方法同实施例1。
发酵培养基一：豆饼粉与酵母粉按不同比例联用，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L。
发酵培养基二：豆饼粉6 g/L，酵母粉4g/L，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L。
实验一：在100mL血清瓶中分别加入培养基一26 mL，碱式碳酸镁1.8 g， 121℃灭菌15 min，分别加入已灭菌的浓度为600 g/L的葡萄糖3 mL，种子液1 mL，此时葡萄糖浓度为60g/L，通无菌CO2两分钟。
实验二：在100mL血清瓶中分别加入培养基二26.75 mL，26.325 mL，26 mL，25.625 mL，25.25 mL，24.875 mL，121℃灭菌15 min，碱式碳酸镁与初糖质量比1:1，种子液1 mL，分别加入已灭菌的浓度为800 g/L的葡萄糖2.25 mL，2.625 mL，3 mL，3.375 mL，3.75 mL，4.125 mL，此时葡萄糖浓度分别为60 g/L，70 g/L，80 g/L，90 g/L，100 g/L，110 g/L，通无菌CO2两分钟。
将实施例培养基一在实验一条件下进行发酵实验，结果见表16。
表16 酵母粉与豆饼粉联用对Actinobacillus succinogenes NJ113产酸的影响
| 豆饼粉(g/L) | 酵母粉(g/L) | 残糖(g/L) | 丁二酸(g/L) | 甲酸(g/L) | 乙酸(g/L) | 乳酸(g/L) |
| 0 | 10 | 0.25 | 43.25 | 5.89 | 11.73 | - |
| 2 | 8 | 0.25 | 44.23 | 4.74 | 9.97 | 1.45 |
| 4 | 6 | 0.25 | 44.85 | 4.25 | 9.49 | 3.63 |
| 6 | 4 | 0.25 | 45.60 | 3.83 | 9.09 | 5.17 |
| 8 | 2 | 4.51 | 41.91 | 3.14 | 6.43 | 2.86 |
| 9 | 1 | 10.01 | 38.06 | 2.20 | 5.25 | 2.36 |
将常规发酵培养基与实施例培养基二，在实验二条件下进行发酵实验，结果见表17。
表17 豆饼粉与酵母粉联用对Actinobacillus succinogenes NJ113耗糖能力的影响
| 初糖浓度(g/L) | 残糖(g/L) | 丁二酸(g/L) | 甲酸(g/L) | 乙酸(g/L) | 乳酸(g/L) |
| 60 | 0.25 | 45.43 | 3.78 | 9.38 | 5.17 |
| 70 | 0.375 | 49.01 | 5.39 | 9.25 | 6.38 |
| 80 | 0.5 | 57.28 | 6.57 | 9.37 | 7.29 |
| 90 | 0.5 | 63.53 | 6.88 | 10.36 | 8.57 |
| 100 | 1.25 | 71.30 | 8.69 | 10.85 | 9.63 |
| 110 | 12.5 | 70.38 | 7.77 | 10.65 | 7.92 |
Claims (1)
1.一种利用廉价氮源发酵制备丁二酸的方法，包括利用廉价氮源配制发酵培养基、接入种子液发酵培养制备丁二酸，其特征在于所述的发酵培养基中的廉价氮源为豆粕水解液或者玉米蛋白粉水解液，且其总氮含量等于发酵时微生物所需的总氮含量；
所述的发酵培养基是：发酵培养基总氮含量1.25 g/L，玉米浆干粉 7.5 g/L，乙酸钠 1.36 g/L，K2HPO4 3 g/L，NaCl 1 g/L，CaCl2 0.2 g/L，NaH2PO4·2H2O 1.6 g/L，Na2HPO4·3H2O 0.31 g/L；
所述的豆粕水解液的制备方法为：
（1）磷酸预处理；
（2） 酶水解处理后，离心得到的上清液；所述的步骤（1）的磷酸预处理方法是指：将豆粕粉按固液质量比1:10制成豆粕粉水溶液，在豆粕粉水溶液中按33.3μL/g豆粕粉干物料加入85%的磷酸于90℃下预处理10 min；所述的步骤（2）的酶水解处理方法是：用2mol/L NaOH溶液将磷酸预处理之后的豆粕粉溶液的pH调至8.0，按4.17g/kg豆粕粉干物料加入碱性蛋白酶，于55℃下水解24h；
所述的玉米蛋白水解液的制备方法为酶水解处理后，离心得到的上清液；所述的玉米蛋白水解液酶水解处理方法是：将玉米蛋白粉制成质量浓度为10%的水溶液，并用2 mol/L NaOH溶液将溶液pH调至8.5，按5.3g/kg玉米蛋白粉干物料加入碱性蛋白酶，于60℃下水解10h。
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