CN102178702B

CN102178702B - 茶树菇提取液及其制备方法与应用

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Publication number: CN102178702B
Application number: CN2011101163515A
Authority: CN
Inventors: 王宏涛; 丁慧军; 李军; 洪燕珍; 苏玉忠; 林逸仪; 江志荣; 陈国祥; 周宪宏; 刘吉昌; 徐玉泉; 黄长修
Original assignee: XIAMEN SHANGXIN DAILY-USE CHEMICAL PRODUCTS Co Ltd; Xiamen University
Current assignee: XIAMEN SHANGXIN DAILY-USE CHEMICAL PRODUCTS Co Ltd; Xiamen University
Priority date: 2011-05-06
Filing date: 2011-05-06
Publication date: 2013-01-02
Anticipated expiration: 2031-05-06
Also published as: CN102178702A

Abstract

茶树菇提取液及其制备方法与应用，涉及一种茶树菇提取液。在容器中加入茶树菇和水，所述茶树菇用滤纸包扎，提取后去除残渣，即得茶树菇提取液。茶树菇采用粉碎后的茶树菇，所述粉碎后的茶树菇的粒径可为40～60目；所述茶树菇与水的质量比可为1∶(5～50)；所述提取的温度可为20～90℃，提取的时间可为1～24h；所述茶树菇提取液的pH值最好调至4～5，然后加入所述茶树菇提取液体积1％的活性炭，在70～80℃进行脱色2～3h，即得到澄清的茶树菇提取液。由于所述茶树菇提取液对人体具有美白、保湿、清除自由基、抗氧化和抗衰老等功能，因此所述茶树菇提取液可用于制备化妆品、食品和药品等。

Description

茶树菇提取液及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种茶树菇提取液，尤其是涉及一种茶树菇提取液及其制备方法与应用。

背景技术

茶树菇(Agrocybe cylindracea)属担子菌亚门层菌纲伞菌目粪锈伞科田头菇属，是一种木生食用菌，又名柱状田头菇、杨树菇、茶薪菇、柱状环绣伞等，生长于温带至亚热带地区，其味道鲜美，气味香浓，营养丰富，为食用价值很高的食用菌。茶树菇还有很好的药用价值，具有清热、平肝、明目、利尿、健脾等功效，因而有“中华神菇”之称(王建伟，陈武强，杨海文，田光辉.茶树菇营养成分的提取与检测研究进展.[J].现代农业科技.2010年第20期)。人们对茶树菇营养成分的提取与检测研究表明，茶树菇中含有多糖、氨基酸、矿物质、脂肪、脂肪酸和抗氧化活性物质等多种成分，其中一些活性成分可应用于药品和食品，另外，还有些成分可用于化妆品起到美白、保湿及抗氧化作用。

对化妆品功能物质的美白功效评价一般采用对酪氨酸酶的抑制率来评价该物质的美白效果。决定皮肤色调的主要因素是皮肤内的黑色素，肤色的深浅主要决定于黑色素细胞合成黑色素的能力，现代分子生物学对黑色素的研究认为，黑色素的生成与酪氨酸酶、多巴醌互变异构酶和5，6-二羟基吲哚-2-羧酸氧化酶的作用有关，即“三酶理论”。酪氨酸酶是产生黑色素的关键酶，通过对该酶活力的调控抑制该酶活力，可以减少黑色素的生成，限制形成皮肤黑斑达到美白效果。茶树菇提取液美白功效的检测方法如下：应用多巴色素法测定对酪氨酸酶的抑制率，底物为L-酪氨酸，在475nm处测吸光度。

对化妆品功能物质的抗氧化作用评价一般通过其对自由基清除率的高低来评价。通过测定样品对DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)、羟基自由基、超氧阴离子自由基的清除能力来评价该物质的抗氧化能力。茶树菇提取液抗氧化功效的测定方法是测定样品对DPPH、羟基自由基及超氧阴离子自由基的清除率，清除率越大，表明抗氧化能力越强。

对化妆品功能物质的保湿功效评价是通过人体测试法测定涂敷保湿剂后皮肤的水含量值和表皮水分流失值(TEWL)的高低来评价。水含量值越高，表示保湿剂的保湿能力越强。TEWL值越低，表示保湿剂的保湿能力越强。茶树菇提取液抗氧化保湿功效的测定方法是采用德国CK公司MPA9皮肤测试系统，分别使用Corneometer CM825皮肤水分测试探头和Tewameter TM300测试探头测定水含量值和TEWL值。

发明内容

本发明的目的是提供一种茶树菇提取液及其制备方法。

本发明的另一目的在于提供茶树菇提取液的应用。

所述一种茶树菇提取液的制备方法的具体步骤为：

在容器中加入茶树菇和水，所述茶树菇用滤纸包扎，提取后去除残渣，即得茶树菇提取液。

所述茶树菇可采用粉碎后的茶树菇，所述粉碎后的茶树菇的粒径可为40～60目；所述茶树菇与水的质量比可为1∶(5～50)；所述提取的温度可为20～90℃，最好为50℃，提取的时间可为1～24h，最好为6h；所述茶树菇提取液的pH值最好调至4～5，然后加入所述茶树菇提取液体积1％的活性炭，在70～80℃进行脱色2～3h，即得到澄清的茶树菇提取液。

由于所述茶树菇提取液对人体具有美白、保湿、清除自由基、抗氧化和抗衰老等功能，因此所述茶树菇提取液可用于制备化妆品、食品和药品等。

附图说明

图1为本发明实施例茶树菇浸提-二氯乙烷反萃样品气相色谱质谱(GC-MS)图。在图1中，横坐标为停留时间time(min)，纵坐标为谱峰比(％)；从左至右，各谱峰的停留时间分别为33.79，37.51，41.05，43.41，44.42，45.67，47.65，49.84，50.74，51.82，53.70，54.68，56.53，58.55，59.26，61.89，62.47，64.42，66.86，67.24，69.21，71.49，72.60，73.69，75.83，77.89，80.19，80.84min。

具体实施方式

以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明，但实施例并不对本发明作任何形式的限定。

对所述提取方法得到的茶树菇提取液进行美白、保湿和抗氧化成分的定性分析检测，并对其在化妆品中的美白、保湿和抗氧化功效通过实验及仪器检测进行评价。茶树菇提取液经二氯乙烷反萃所得萃取物进行GC-MS定性分析，得到14种有效成分，二氯乙烷反萃茶树菇提取液GC-MS分析成分参见表1。

GC-MS分析条件：色谱柱DB-5毛细管柱，3m×250μm×0.25μm；程序升温50～300℃(10min)，3℃/min；进样温度250℃；载气He，1ml/min；进样量1μL，分流比(体积比)10∶1。接口温度250℃；电离方式为电子轰击；电离能量70eV；倍增器电压1.89kV；扫描范围35～400amu，采用全扫描工作方式。通过检索NIST98谱图库，并结合标准质谱库和有关文献确定样品成分。

表1

停留时间(min)	组分
		37.506	2，6，10，15-四甲基十七烷
43.414	二溴五十四烷
		44.423	二十烷
53.704	8-己基十五烷
		62.465	乙基异胆甾醇
64.415	11-癸基二十四烷
		66.858	四十三烷
71.705	E，E，Z-1，3，12-十九碳三烯-5，14-二醇
		72.213	Z-5-甲基-6二十一烯-11酮
73.977	2-溴十八烷
		74.39	油酸3-十八烷酮丙酯
74.556	正三十七醇
		75.305	VE
78.86	香叶基异戊酸

其中E，E，Z-1，3，12-十九碳三烯-5，14-二醇、乙基异胆甾醇、维生素E为功能性成分。E，E，Z-1，3，12-十九碳三烯-5，14-二醇具有抗炎作用，是抗肿瘤促进剂。乙基异胆甾醇属于植物甾醇，植物甾醇对皮肤具有很高的渗透性，可以保持皮肤表面水份，促进皮肤新陈代谢、抑制皮肤炎症，可防日晒红斑、皮肤老化，还有生发、养发之功效。维生素E则是常见的抗氧化剂，维生素E的抗自由基功能是由于其自身结构为一种苯骈吡喃的衍生物，在其苯环上有一个活泼的羟基，具有还原性。其次，在五碳环上有一饱和的侧链，这两点决定了维生素E具有还原性和亲脂性。当自由基进入脂相，发生链式反应时，维生素E起到捕捉自由基的作用。维生素E对抗自由基脂质过氧化作用的效率很高。

另外，茶树菇提取液采用苯酚-硫酸法分析确定其中含有多糖成分。苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。利用苯酚-硫酸法，茶树菇提取液的显色反应确定了茶树菇提取液中含有多糖成分。

针对黑色素生成的机理，多糖对皮肤美白的作用机理表现在以下两方面：其一，抑制5，6-二羟基吲哚-2-羧酸氧化酶的氧化反应，这与多糖的抗氧化机制有关，此外，某些多糖还能抑制人体内不饱和脂肪酸的过氧化作用，减少不饱和脂肪酸过氧化产物脂褐素的产生，而脂褐素含量增多会引起色素沉积，形成色斑；其二，多糖的美白作用与其吸收紫外线的特性有关。多糖的保湿作用在于：①多糖分子中的羟基、羧基和其他极性基团可与水分子形成氢键而结合大量的水分，同时，多糖分子链还相互交织成网状，加之与水的氢键结合，起到很强的保水作用，此外，在胞外基质中，多糖与皮肤中的其他多糖组分及纤维状蛋白质共同组成含大量水分的胞外胶状基质，为皮肤提供水分；②多糖具有良好的成膜性能，可在皮肤表面形成一层均匀的薄膜，减少皮肤表面的水分蒸发，使得水分从基底组织弥散到角质层，诱导角质层进一步水化，保存皮肤自身的水分，而完成润肤作用。因此，多糖的高度吸水性和良好的成膜性完美地结合，能为皮肤提供很好的保湿效果。E，E，Z-1，3，12-十九碳三烯-5，14-二醇、乙基异胆甾醇、维生素E以及多糖等功效性成分保证了茶树菇浸提液在化妆品中具有美白、保湿以及抗自由基的功效。

茶树菇提取液美白作用的测定方法是：配制好100u/ml酪氨酸酶溶液，2.0mmol/L L-酪氨酸溶液和pH＝6.8的0.2mol/LPBS(磷酸缓冲液)溶液，取四支洁净的5ml试管，分别标记为1号、2号、3号和4号。其中，在1号试管中加入0.5mlL-酪氨酸溶液和2.0mlPBS溶液，在2号试管中加入2.5mlPBS溶液，在3号试管中加入0.5mlL-酪氨酸溶液、0.5ml茶树菇提取液和1.5mlPBS溶液，在4号试管中加入0.5ml茶树菇提取液和2.0mlPBS溶液。将1、2、3、4号混合液置于30℃恒温水浴中10min，在4支试管中同时加入0.5ml酪氨酸酶溶液，1h后在波长为475nm下测定4组溶液的吸光度，分别记为A1、A2、A3、A4。酪氨酸酶的抑制率为：

该茶树菇提取液对100u/ml酪氨酸酶溶液的抑制率达到了86.92％，略低于10mmol/L熊果苷96.34％的抑制率。可以作为一种新型的天然提取物美白剂添加至化妆品中。

茶树菇提取液保湿性能的测定方法是通过人体法测试茶树菇提取液的保湿能力，并与5％甘油的保湿性能进行对比，从而对茶树菇提取液的保湿功能进行评价。本方法采用的茶树菇提取液是由实验中获得的茶树菇提取液经浓缩得到的。实验条件为测试期间要求环境的温度和湿度恒定，温度为22℃±2℃，相对湿度为40％～60％。采用德国CK公司MPA9皮肤测试系统，分别使用Corneometer CM825皮肤水分测试探头和Tewameter TM300测试探头对受试者进行测试。

1、MMV(moisture measurement value)湿度测量值法

采用Corneometer CM825皮肤水分测试探头测试皮肤的水合作用。它的作用原理是由于角质层含有大量的电解质，存在水中的电解质具有电导性，这种现象也产生在皮肤表面，通过测试探头与皮肤接触后，电导率的变化来反映皮肤的水合状态(参见文献：杜小豪，徐卫，杜雪洁.护肤产品的保湿功能评价[J].日用化学，2000，30(3)：47-52)。

测试方法为：选择健康无皮肤病的志愿受试者5名。1、确定左右前臂3块测试区域，区域面积为4cm×4cm，将其中一块区域作为空白对比区域，用CM825探头测定其水合率。2、将5％甘油保湿霜和茶树菇提取液分别涂覆于另外两块区域作为测试样品。3、涂覆30min后进行测试，每块区域测试5个点，取平均值。分别得到涂覆5％甘油保湿霜和茶树菇提取液30min后的皮肤含水量。由结果可知，茶树菇提取液的保湿效果略优于5％甘油保湿霜。30min后茶树菇提取液与5％甘油保湿霜的含水量对比的测试结果如表2所示。

表2

	受试者1	受试者2	受试者3	受试者4	受试者5
						空白	27.43	25.45	19.60	34.40	29.16
5％甘油	31.32	27.56	25.50	39.60	32.00
						茶树菇提取液	31.53	30.15	25.00	39.70	33.70

2、TEWL(transepidermal water loss)表皮水分流失法

测试原理：除了出汗外，人体表皮的水分经表皮散失(transepidermal water loss，TEWL)一直在不间断进行。角质层以外的表皮组分在组织内充满水分，呈饱和状态，但其保持水分的能力较弱。而角质层起屏障作用将生物体与外界隔开，保持住水分不流失又有通透作用。TEWL值不能直接表示角质层的水分含量，而是表示角质层水分散失的情况，说明角质层的屏障功能，是评价角质层状态的主要参数。测试原理为：使用特殊设计的两端开放的圆柱形腔体探头在皮肤表面形成相对稳定的测试环境，通过两组温度、湿度传感器测定近表皮(约1em以内)由角质层散失形成的不同两点的水蒸气压梯度，直接测出经表皮蒸发的水分量。

测得TEWL值高则表面经皮肤散失的水分多，角质层的屏障效果不好，使用样品后，随着时间的延长，TEWL增长值越小，说明样品保湿效果越好，使用样品后使角质层的屏障作用明显增强。可以进行不同化妆品保湿性能的比较，还可进行长时间皮肤水分散失情况的检测。

测试方法为：选择健康无皮肤病的志愿受试者3名。1、确定左右前臂2块测试区域，区域面积为4cm×4cm，用Tewameter TM300探头测定其TEWL值。2、将5％甘油保湿霜和茶树菇提取液分别涂覆于两块区域作为测试样品。3、涂覆30min后进行测试，将筒状探头垂直于皮肤上20s，测定值稳定后读取数据，仪器自动采集TEWL数据，并按时间顺序显示为一条TEWL时间曲线。仪器可自动显示皮肤水分流失的TEWL数值、曲线、平均值和标准偏差，可取数次不同测定时间的数据平均值为最终结果。分别得到涂覆5％甘油保湿霜和茶树菇提取液30min后的TEWL值。由结果可知，茶树菇提取液的保湿效果略优于5％甘油保湿霜。30min后茶树菇提取液与5％甘油保湿霜TEWL值对比的测试结果如表3所示。

表3

	受试者1	受试者2	受试者3
				5％甘油	10.2	6.8	9.9
茶树菇提取液	8.4	6.1	9.0

茶树菇提取液抗氧化性的测定方法是分别测定茶树菇提取液对DPPH、羟基自由基及超氧阴离子自由基的清除率。

1、对DPPH清除率的测定方法是利用DPPH^-乙醇溶液在波长517nm处有紫色团的特征吸收峰，以分光光度法测定加入抗氧化剂后，在517nm处吸光度值的下降表示抗氧化剂对DPPH-自由基的清除能力。取3支10ml具塞试管，第一支中加入2×10^-4mol/L的DPPH-乙醇溶液2ml，再加入2ml茶树菇提取液，摇匀，在黑暗中室温下反应30min，于517nm处测得吸光度值Ai；第二支中加入2ml×10^-4mol/L的DPPH-乙醇溶液与2ml无水乙醇，摇匀后测得吸光度值Ao；第三支中加入2ml茶树菇提取液与2ml无水乙醇，摇匀，测得吸光度值Aj。按下式计算茶树菇提取液对DPPH^-自由基的清除率：

DPPH自由基的清除率％＝[Ao-(Ai-Aj)]×100。

2、对羟基自由基清除率的测定方法是采用邻二氮菲-Fe²⁺氧化法。分别配制0.75m mol/L的邻二氮菲无水乙醇溶液、0.75mol/L pH为7.2的PBS液、0.75mmol/L的硫酸亚铁溶液、0.01％的H₂O₂溶液。取3支10ml具塞试管，第一支依次加入0.75mmol/L邻二氮菲无水乙醇溶液2ml，PBS液4ml和蒸馏水2ml，充分摇匀后，加入0.75mmol/L的硫酸亚铁溶液2ml，混匀，加入0.01％H₂O₂ 2ml，于37℃保温反应60min后，于536nm处测其吸光度值A1；第二支用2ml蒸馏水代替2ml H₂O₂，其他同第一支，测吸光度值为A2；第三支2ml用茶树菇提取液代替第一支中的2ml蒸馏水，测出的吸光度值A3，按下式计算氧化剂对羟自由基(HO^-)清除率：

3、对超氧阴离子自由基的清除率的测定方法是采用邻苯三酚自氧化法。邻苯三酚在碱性条件下发生自氧化反应，产生稳定浓度的超氧阴离子自由基(O₂·^-)与中间物，中间物又与超氧阴离子自由基(O₂·^-)反应，得到一种带有颜色的中间产物，此物在紫外光区域有吸收峰，引起某一波长处吸光度值的线性积累，来反应抗氧化剂的清除能力。量取pH＝8.2的Tris-HCl缓冲液5mL和4.7mL双蒸水，置于10mL比色管中混均，在25℃水浴中保温20min，取出后立即加入在25℃预热过的3mmol·L^-1邻苯三酚0.3mL，迅速摇匀后倒入比色皿中，用10mmol·L^-1HCl为空白液，在322nm波长处在反应后前10min每隔一分钟检测其波长，取前10min的吸光度值A对反应时间t作线性关系图，此斜率为邻苯三酚自氧化速率Vo。量取pH＝8.2的Tris-HCl缓冲液5mL和一定体积的茶树菇提取液，用双蒸水补充至9.7mL，置于10mL比色管中混均，在25℃水浴中保温20min，取出后立即加入在25℃预热过的3mmol·L^-1邻苯三酚0.3mL，迅速摇匀后倒入比色皿中，用10mmol·L^-1HCl为空白液，在322nm波长处，每间隔1min测吸光度值一次，共反应10min，以吸光度值A对反应时间t作线性关系图，斜率即为Vt，代入清除率公式，计算出抗氧化剂对超氧阴离子的清除率：

该茶树菇提取液对DPPH，羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别达到了88.62％、80.54％和54.29％，而20％Vc对DPPH、羟基自由基的清除率分别为90.14％和82.12％，0.04％Vc对超氧阴离子自由基的清除率为33.3％。因此该茶树菇提取液可以作为一种新型的天然清除自由基抗氧化剂应用于化妆品、药品和食品中。

以下给出具体实施例。

实施例1：祛皱美白滋润霜见表4。

实施例2：美白祛皱亚光乳液参见表5。

表5

A相	加入量(wt％)
		水	83.38
EDTA二钠	0.02
		卡波姆	0.4
B相
		鲸蜡硬脂醇聚醚-26	3
氢化聚异丁烯	2
		生育酚醋酸酯	0.1
聚二甲基硅氧烷	3
		异壬酸异壬酯	3
辛酸/癸酸甘油三酯	3.5
		C相
三乙醇胺	0.40
		D相
茶树菇提取液	1.00
		香精	0.10
防腐剂	0.10

Claims

1.茶树菇提取液在制备化妆品中的应用，所述茶树菇提取液由以下方法制备：

在容器中加入茶树菇和水，所述茶树菇用滤纸包扎，提取后去除残渣，即得茶树菇提取液；所述茶树菇采用粉碎后粒径为40～60目的茶树菇；所述茶树菇与水的质量比为1∶5～50；所述提取的温度为20～90℃，提取的时间为1～24h；所述茶树菇提取液的pH值调至4～5，然后加入所述茶树菇提取液体积1%的活性炭，在70～80℃进行脱色2～3h，即得到澄清的茶树菇提取液。