CN102137925B - 同时诱导CTL和γδT细胞的方法 - Google Patents
同时诱导CTL和γδT细胞的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102137925B CN102137925B CN200980133423.8A CN200980133423A CN102137925B CN 102137925 B CN102137925 B CN 102137925B CN 200980133423 A CN200980133423 A CN 200980133423A CN 102137925 B CN102137925 B CN 102137925B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- cells
- antigen
- ctl
- gamma delta
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 56
- 230000006698 induction Effects 0.000 title description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 97
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 97
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 97
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 76
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 75
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 65
- JJJOZVFVARQUJV-UHFFFAOYSA-N 2-ethylhexylphosphonic acid Chemical compound CCCCC(CC)CP(O)(O)=O JJJOZVFVARQUJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 24
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 21
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 18
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 17
- XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N zoledronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CN1C=CN=C1 XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- OGSPWJRAVKPPFI-UHFFFAOYSA-N Alendronic Acid Chemical compound NCCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O OGSPWJRAVKPPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N pamidronate Chemical compound NCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003978 pamidronic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 229960004276 zoledronic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 229940062527 alendronate Drugs 0.000 claims description 4
- MPBVHIBUJCELCL-UHFFFAOYSA-N Ibandronate Chemical compound CCCCCN(C)CCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O MPBVHIBUJCELCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- IIDJRNMFWXDHID-UHFFFAOYSA-N Risedronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CC1=CC=CN=C1 IIDJRNMFWXDHID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005236 ibandronic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000759 risedronic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 claims 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 56
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 27
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 abstract description 20
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 abstract description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 abstract 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 abstract 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 abstract 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 12
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 10
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 5
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- POVNCJSPYFCWJR-USZUGGBUSA-N (4s)-4-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-[(2s)-2-[[2-[(2s)-2-[[(2s)-1-[[(2s,3r)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-methylpropyl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1- Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 POVNCJSPYFCWJR-USZUGGBUSA-N 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 108010069196 Neural Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 2
- 102100023616 Neural cell adhesion molecule L1-like protein Human genes 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 210000003677 hemocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940000351 hemocyte Drugs 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 229940002005 zometa Drugs 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 208000010362 Protozoan Infections Diseases 0.000 description 1
- 229910004856 P—O—P Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 229960004343 alendronic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- LWRDQHOZTAOILO-UHFFFAOYSA-N incadronic acid Chemical compound OP(O)(=O)C(P(O)(O)=O)NC1CCCCCC1 LWRDQHOZTAOILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950006971 incadronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 230000004987 nonapoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001009 osteoporotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 208000037922 refractory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464466—Adhesion molecules, e.g. NRCAM, EpCAM or cadherins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本申请公开了简便且有效地在一个培养步骤中培养疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法；以及使用通过所述方法产生的细胞的医药品和治疗/预防方法。收集血液并且自该血液分离外周血单个核细胞。在培养开始时向外周血单个核细胞添加氨基二膦酸和疾病抗原，通过进行预定期间的细胞培养来同时增殖/诱导疾病抗原特异的CTL和γδT细胞直至细胞数达到对于疾病治疗有效的值。由此产生的CTL和γδT细胞用于治疗。
Description
技术领域
本发明涉及在癌治疗中同时且有效地培养抗原特异的CTL和γδT细胞的技术。更具体地，本发明涉及使用该培养技术培养的细胞的医药用途。
背景技术
近来，免疫细胞疗法作为包括癌症在内的难治性疾病的新疗法而受到关注。免疫细胞疗法是收集并活化患者自身的免疫细胞，特别是白细胞，然后再将它们返回患者体内来人工地增强免疫力。与常规的抗癌剂治疗等比较，这种疗法具有减少的副作用的优点。
作为免疫细胞疗法，活化自体淋巴细胞的疗法已经普及，所述疗法涉及体外用淋巴因子实施抗原非特异地活化淋巴细胞，然后将它们返回身体；但是，需要获得利用细胞毒性T淋巴细胞(下文中称为CTL)的疗法，其中所述细胞毒性T淋巴细胞具有更强的细胞毒活性并特异地识别和破坏病变。
这里，作为当前尝试的利用CTL的治疗法，例如采用直接将癌抗原肽等施与患者的方法；但是，在这种情况下，由于患者通常具有低下的免疫力，其诱导CTL的能力需要提高。因此，有树状细胞疫苗疗法等，所述疗法涉及将抗原与抗原呈递细胞如树状细胞(下文中也称为DC)等接触，并因此强烈地引起细胞呈递抗原，由DC在体内诱导疾病抗原特异的CTL。
下面显示的是一些目前诱导疾病抗原特异的CTL的典型方法。
例如，在非专利文献1和2中，将9-mer肽如特定疾病抗原的表位添加至外周血单个核细胞来尝试由其诱导CTL。此外，在非专利文献3和4中，从外周血单个核细胞获得DC并向其添加抗原肽，来赋予抗原呈递功能；将自外周血淋巴细胞分离的CD8阳性T细胞与所获得的DC一同培养来诱导疾病抗原特异的CTL。
进一步地，在非专利文献5中，使用获自造血前体细胞的DC和抗原肽进行DC接种，然后将向其添加了抗原的单核细胞来源的DC与分离自外周血单个核细胞的CD8阳性T细胞共培养以诱导抗原特异的CTL。
从上述例子中它们的用途可以获知，在其它抗原呈递细胞中，树状细胞具有高的抗原呈递能力并且能够诱导疾病抗原特异的CTL，因此，正在进行获得它们的技术开发。
但是，为了获得用于树状细胞接种的树状细胞，通常需要收集人外周血，从外周血分离称为单核细胞的细胞，并在添加IL-4、GM-CSF等后培养它们。该方法繁琐并且目前存在这样的问题，取决于细胞培养技术人员的水平，所培养细胞的数量和功能是变化的。
γδT细胞是非肽抗原活化的细胞，是负责天然免疫的细胞；近来发现这些细胞对癌细胞具有MHC非限制性细胞毒活性(非特异的活性)。因此，研究了使用这些γδT细胞的强抗癌活性的免疫疗法。
由于γδT细胞通过识别非肽抗原而活化，它们可以被例如烷基胺或二膦酸作为非肽抗原刺激，从而活化和/或增殖；已经在体外引起分离自外周血的γδT细胞识别非肽抗原来研究其活化和/或增殖(例如，非专利文献6)。
但是，问题是γδT细胞通常在外周血中以仅1至5％的量存在，收集少量的血液然后从其活化和/或增殖γδT细胞不能确保γδT细胞的纯度和数量足够用于治疗。增加自患者收集的血液量来确保γδT细胞的纯度和数量足够用于治疗也有对患者是一个很大的负担的问题。
专利文献1也公开了通过添加二膦酸至外周血单个核细胞来活化和/或增殖γδT细胞的方法。
因此更有效的细胞培养和利用对免疫细胞疗法是重要的；现在正在进行多种多样的方法和技术的研发。
此外，在免疫细胞疗法中现在是主要培养一种类型的细胞并用于治疗；但是，考虑到如上所述的例如疾病抗原特异的CTL以MHC限制性方式，例如，特异地针对MHCI类呈递的抗原，攻击目标细胞或组织；和γδT细胞以MHC非限制性方式攻击细胞或组织，可以混合多种细胞并用于治疗。
但是，在实践中，对于培养多种类型的免疫细胞用于治疗，不得不对多种细胞类型同时平行地实施培养步骤。适用于每一类型细胞的培养条件相互间不相同；如果使用常规的适用于一种类型细胞的培养方法，它将非常难于例如同时且有效地培养足够数量的疾病抗原特异的CTL和γδT细胞来发挥治疗效果；目前还没有这样的有效培养方法和诱导方法。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：WO 2006/006720
非专利文献
非专利文献1：δugiyama H.等人，Cancer Immunol.Immunother.，2002年12月；51(11-12)：614-20.Epub，2002年10月18日。
非专利文献2：Appella E.等人，J.Immun0l.，1995年3月1日；154(5)：2257-65
非专利文献3：Fujita S.等人，Blood，2000年1月1日；95(1)：286-93。
非专利文献4：Yasukawa M.等人，Clin.Cancer Res.，2002年8月；8(8)：2626-31。
非专利文献5：Palucka AK.等人，J.Exp.Med.，2004年6月7日；199(11)：1503-11，Epub，2004年6月1日.
非专利文献6：Fumi Miyagawa等人，The Journal of Immunology，2001；166(9)：5508-5514。
发明概述
技术问题
鉴于上述情形，本发明的课题是在一步培养中同时且有效地诱导和培养足够数量的疾病抗原特异的CTL和γδT细胞用于发挥治疗效果。
解决问题的手段
本发明人为了解决这些问题进行了多种研究，并发明了本发明。本发明如下。
(1)同时诱导疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法，特征在于，包括以下步骤：添加疾病抗原和氨基二膦酸至外周血并培养所得到的外周血；(2)根据项(1)的同时诱导疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法，其中添加疾病抗原和氨基二膦酸的步骤在培养开始第1日实施；(3)根据项(1)或(2)的同时诱导疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法，其中氨基二膦酸是帕米膦酸(pamidronic acid)、阿仑膦酸(alendronic acid)、唑来膦酸(zoledronic acid)、利塞膦酸(risedronic acid)、伊班膦酸(ibandronic acid)、英卡膦酸(incadronic acid)、其盐和/或其水合物；(4)根据项(1)至(3)任一项的同时诱导疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法，其中疾病抗原是癌抗原；(5)根据项(1)至(4)任一项的同时诱导疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法，其中同时添加疾病抗原和氨基二膦酸；(6)医药品，其包含通过项(1)至(5)任一项的方法获得的疾病抗原特异的CTL和γδT细胞；和(7)治疗/预防方法，其包括施与通过项(1)至(5)任一项的方法获得的疾病抗原特异的CTL和γδT细胞。
作为研究结果，本发明人发现在外周血中通过氨基二膦酸活化的γδT细胞增殖并且这些活化和增殖的γδT细胞显示发挥APC(抗原呈递细胞)的功能，其呈递疾病抗原并也促进疾病抗原特异的CTL的诱导，从而完成了本发明。
发明的效果
在用于疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的培养和诱导的常规方法中，通过多个步骤获得所希望的细胞和然后开始培养；但是，本发明在一步培养中能够同时且有效地提供疾病抗原特异的CTL和γδT细胞，无需自外周血分离细胞；并且甚至能够获得含有大量治疗效果极好的细胞的细胞群体。通过这种诱导方法获得的疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的混合细胞群体能够提供较施与单一种免疫细胞作为医药品的常规治疗而言更高效的治疗。
特别地，至今为止CTL的诱导需要以下步骤：(1)从血液分离单个核细胞；(2)添加细胞因子来诱导树状细胞；(3)用抗原脉冲树状细胞；和(4)共培养抗原脉冲的树状细胞和淋巴细胞来诱导CTL。但是，使用本发明能够省略诱导树状细胞的步骤，这能减轻工作量，也能减少污染风险，并能进一步地将树状细胞诱导期间(约7天)缩短。
实施发明的最佳方案
以下对本发明的实施方案进行说明。
<第一实施方案：本发明的同时诱导疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法>
本发明的同时诱导疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法(下文中也简称为“本发明的诱导方法”)的特征在于包括以下步骤，添加疾病抗原和氨基二膦酸至外周血并培养所得到的外周血。
虽然一直以来在相同培养步骤中获得治疗有效量的疾病抗原特异的CTL和γδT细胞是非常困难的，但是本发明的诱导方法使得这些类型的细胞通过上述步骤简单高效地获得。
根据本发明的诱导方法，将外周血中的γδT细胞用氨基二膦酸活化和增殖，并且这些活化且增殖的γδT细胞也显示发挥APC的功能，其呈递疾病抗原并诱导疾病抗原特异的CTL。此外，具有APC功能的γδT细胞不仅只是作为APC发挥作用，而且甚至在疾病抗原特异的CTL增殖后γδT细胞仍继续增殖，从而使得能获得发挥治疗效果的足够量的这两种类型的细胞。
以下描述本发明的诱导方法的具体操作。
1)收集血液来提供外周血。所需要的量是15至25mL。这个量使得能够合适地培养血液。但是，不将培养开始时的外周血的足够量限制在此范围，并且由于较大量的血液收集增加了收集的疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的数量，优选地收集较大量的血液，条件是对所收集血液的供体的负担小。
2)通过例如密度梯度离心获得外周血单个核细胞。能够获得的外周血单个核细胞数量是从15至25mL外周血获得约1至2x107个外周血单个核细胞。
3)将2)中获得的外周血单个核细胞悬浮在培养基AIM-V(Invitrogen)中。本文中将悬浮了外周血单个核细胞的溶液称为细胞悬液。除了上述培养基之外，也可以使用市售的用于细胞培养的培养基如RPMI-1640培养基(Invitrogen)、Dulbecco改良的Eagle培养基(Invitrogen；下文中称为DMEM)、或Iscove培养基(Invitrogen；下文中称为IMEM)。
4)将3)中获得的细胞悬液接种在烧瓶、袋或板中。
5)将氨基二膦酸以浓度0.05至100μM，优选地0.1至30μM添加至接种在烧瓶、袋或板中的外周血单个核细胞。
本文中，二膦酸是焦磷酸的类似物，并且是焦磷酸骨架P-O-P的O(氧原子)被C(碳原子)替换后的化合物(P-C-P)。二膦酸通常用作骨质疏松的治疗药。氨基二膦酸是指二膦酸中具有N(氮原子)的化合物。例如，不特别限制在本发明中使用的氨基二膦酸；可以使用在WO 2006/006720和WO2007/029689中公开的氨基二膦酸等。其具体例子包括帕米膦酸、其盐和/或它们的水合物；阿仑膦酸、其盐和/或它们的水合物；和唑来膦酸、其盐和/或它们的水合物。氨基二膦酸的浓度，对帕米膦酸、其盐和/或它们的水合物优选地是1至30μM，对阿仑膦酸、其盐和/或它们的水合物优选地是1至30μM，和对唑来膦酸、其盐和/或它们的水合物优选地是0.1至10M。在本文中，以添加5μM唑来膦酸作为例子。
6)在添加5)中的氨基二膦酸时，一同添加疾病抗原。在本文中，“疾病”是例如癌症或感染症。不特别地限制癌症，包括任意癌症；例如难治性癌症。感染症的例子包括病毒感染症如AIDS或者乙型或丙型肝炎、细胞感染、细菌感染、真菌感染或原虫感染。
作为抗原的形式，根据需要可以使用肽、蛋白质等。也可以使用癌细胞或感染细胞的细胞裂解物、凋亡细胞、坏死细胞和它们的热处理产物等。
抗原可以是来自患者(例如，通过外科手术从患者分离出的肿瘤组织等)的、或者是合成的。与使用自患者自身癌组织等收获癌抗原相比较，使用合成肽能够减轻患者的负担。
添加的量，如果是肽的话，添加0.02至2μg/ml左右。例如，添加2μg/ml。
不特别地限制氨基二膦酸和疾病抗原的添加顺序，它们可以同时添加，或者先添加任一者；但是，优选同时添加。
6)此外，向上述培养基中添加IL-2至浓度为50至2000U/mL，更优选地400至1000U/mL。
7)添加IL-2后，在34至38℃，更优选地在37℃，在2至10％，更优选地5％CO2存在下培养。此时，根据所培养细胞的数量，适当地添加培养基。此外，随着培养基的增加，适当地添加IL-2至浓度为50至2000U/mL，更优选地400至1000U/mL。
8)进一步地，向上述培养液添加0.1至20％量的血清。作为血清，可以使用例如胎牛血清(下文中称为FCS)、AB血清或者自体血浆。
以这种方式，当培养期间是7天或7天以上时，能够以高纯度获得包含疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的细胞群体；但是，培养优选地进行约14天，以进一步地增加细胞数。
在上述培养步骤期间优选地将血浆添加至培养液。添加时间大概是在培养开始后0至100小时，使得能够满意地进行培养。
<第二实施方案：包含疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的医药品>
本发明的医药品是包含疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的医药品，是在培养开始时通过添加疾病抗原和氨基二膦酸至外周血而进行培养获得的医药品。
现有的免疫细胞疗法使用单一类型的细胞，或者通过在施用时混合分别培养的细胞后或同时地添加分别培养的细胞而使用多种类型的细胞。
相反，本发明的医药品是通过本发明的诱导方法同时培养疾病抗原特异的CTL和γδT细胞，这使得能够非常简单地获得较多的细胞数。使用此类医药品具有这样的优点，它比常规使用的单一类型的免疫细胞具有更高的治疗功效，因为疾病抗原特异的CTL和γδT细胞之间的协同作用。
下面具体描述本发明的医药品。
1)通过本发明的培养方法获得的细胞通过离心法等回收。
2)将回收的细胞用洗净液洗净。洗净液优选地是与细胞渗透压相等的等渗液，并且更优选地是能够用于医药品的液体。在本文中，考虑到它施用至患者，优选使用例如生理盐水或PBS(磷酸盐缓冲的生理盐水)。
3)洗净后获得的主要含有疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的淋巴细胞群体通过离心法等回收，并悬浮于用作医药品的液体例如生理盐水中，以制备本发明的医药品。在本文中，用于悬浮的液体的用量根据施用的细胞数和施用方法进行适当的调整。
本发明的医药品中所使用的主要含有疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的淋巴细胞群体的细胞数根据施用方法、疾病的类型、患者的症状等合适地选择；但是，它通常优选地是108至1012个/人，更优选地109个/人或以上。
4)随后，将它们悬浮在生理盐水中以提供本发明的医药品。本发明的医药品能够用作癌症或感染症的治疗剂/预防剂。
此处，在用作癌症的治疗剂/预防剂的情形，也可以将本发明的医药品与细胞因子如IL-2或IL-12组合。
另外，在作为病毒感染症的治疗剂/预防剂的情形，也可以将本发明的医药品与干扰素-γ(IFN-γ)等组合。
5)施用方法可以是例如静脉内、皮内、皮下等的注射；直接注射入病变部位；或者通过点滴而全身施用。此外，也可以通过病变部位附近的动脉注入。
<第三实施方案：施与疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的治疗/预防方法>
本发明的治疗/预防方法是涉及施与疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的治疗/预防方法，其中所述疾病抗原特异的CTL和γδT细胞是通过在培养开始时添加疾病抗原和氨基二膦酸至外周血来培养而获得的。
本发明的治疗/预防方法具体说明如下。
1)通过本发明的培养方法获得的细胞通过离心法等收集。
2)用洗净液洗收集的细胞。洗净液优选地是与细胞渗透压相等的等渗液，并且更优选地是能够用于医药品的液体。在本文中，考虑到它施用至患者，优选使用例如生理盐水或PBS(磷酸盐缓冲的生理盐水)。
3)洗净后获得的主要含有疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的淋巴细胞群体通过离心法等回收，并悬浮于用作医药品的液体例如生理盐水中，以制备用于本发明的治疗/预防方法中的细胞悬液。此时，用于悬浮的液体的用量根据施用的细胞数和施用方法进行适当的调整。
用于本发明的治疗/预防方法中的主要含有疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的淋巴细胞群体的细胞数根据施用方法、疾病的类型、患者的症状等合适地选择；但是，它通常优选地是108至1012个/人，更优选地109个/人或以上。
4)随后，将它们悬浮在生理盐水中以提供细胞悬液。
此处，在用于治疗或预防癌症的情形，也可以将本发明的医药品与细胞因子如IL-2或IL-12组合。
另外，在用于治疗或预防病毒感染症的情形，也可以将本发明的医药品与干扰素-γ(IFN-γ)等组合。
5)施用方法可以是例如静脉内、皮内、皮下等的注射；直接注射入病变部位；或者通过点滴而全身施用。此外，也可以通过病变部位附近的动脉注入。
以下参考实施例详细地描述本发明。但是，应理解本发明并不限于此。
实施例1
本发明的培养/诱导方法
1)自健康人供体收集外周血(42ml)并使用用于血细胞分离的密度梯度溶液从其分离外周血单个核细胞。
2)将所得的外周血单个核细胞悬浮在AIM-V中。
3)将这些外周血单个核细胞(8x 106个/4mL)接种在6孔板(SUMILON)中。向其添加1000U/mL IL-2，再向其添加5μM唑来膦酸(ZOMETA(商标名))和2μg/ml Mart-1(A27L，序列：ELAGIGILTV)作为肽，然后在37℃和5％CO2浓度条件下开始培养。
4)进一步地，在培养开始后添加10％量的AB血清。
5)根据细胞的增殖，添加含有1000U/mL IL-2的AIM-V和AB血清，然后培养14天。
6)如上所述培养7天或14天后获得的细胞群体中，疾病抗原特异的CD8阳性T细胞的百分数和表达TCRVγ9的细胞的百分数使用抗CD8抗体(BD Pharmingen)、T-Select HLA-A＊0201Mart-1TetramerELAGIGILTV(MBL)、抗TCRVγ9抗体(Beckman Coulter)和抗CD3抗体(Beckman Coulter)通过荧光活化的细胞分选仪(下文中称为FACS；EpicsXL-MCL ADC，Beckman Coulter)测定。通过测定获得的值如下所示。
[表1]
培养第7天和第14天时单个核细胞中含有的疾病抗原特异的CD8阳性T细胞的百分数(％)
[表2]
培养第7天和第14天时单个核细胞中含有的γδT细胞的百分数(％)
[表3]
培养第7天和第14天时单个核细胞中含有的疾病抗原特异的CD8阳性T细胞的增加率(倍数)
[表4]
培养第7天和第14天时单个核细胞中含有的γδT细胞的增加率(倍数)
上述结果证实，通过同时添加疾病抗原和氨基二膦酸进行培养获得了主要含有疾病抗原特异的CD8阳性T细胞(CTL)和γδT细胞的淋巴细胞群体。
实施例2
<研究添加疾病抗原对CD56在γδT细胞上的表达率的影响>
通过以下步骤研究了添加疾病抗原是否影响CD56在γδT细胞上的表达率。CD56是神经细胞黏着分子(N-CAM)的同工型，已知是作为NK细胞的标记物的黏着分子。它是提供γδT细胞的细胞毒活性的指标的标记物之一。
1)从健康人供体收集外周血(8ml)，使用用于血细胞分离的密度梯度溶液从其分离外周血单个核细胞。
2)将所获得的外周血单个核细胞悬浮在AIM-V中。
3)将这些外周血单个核细胞(1.8x106个/2.5mL)接种在12孔板(SUMILON)中。向其添加1000U/mL IL-2，进一步添加5μM唑来膦酸(ZOMETA)和2μg/ml Mart-1(A27L)作为肽，然后在37℃和5％CO2浓度条件下开始培养。
4)进一步地，在培养开始后添加10％量的AB血清。
5)根据细胞的增殖，添加含有1000U/mL IL-2的AIM-V和AB血清，然后最长培养14天。
6)如上所述最长培养14天后获得的细胞群体中，表达TCRVγ9的细胞的百分数或表达CD56的细胞的百分数使用抗TCRVγ9抗体(BeckmanCoulter)、抗CD56抗体(Beckman Coulter)和抗CD3抗体(BeckmanCoulter)通过FACS(Epics XL-MCL ADC，Beckman Coulter)测定。通过测定获得的值示于表5。
[表5]
培养第13天时单个核细胞中含有的γδT细胞的表面抗原表达率(％)
如表5中所示，在不添加疾病抗原的情形(-)和添加疾病抗原的情形(+)之间没有观察到γδT细胞上表面抗原的表达率差异，这证实了添加疾病抗原没有对γδT细胞上CD56的表达率产生大的影响。
工业实用性
如上所述，本发明的同时诱导疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法使得能够通过一次采血而增殖和诱导这两种类型的细胞至允许每一类型的细胞发挥治疗效果的数量，而在常规方法中，疾病抗原特异的CTL和γδT细胞是分别培养的。这使得疾病特异的和非特异的免疫细胞能够同时和简单地用于治疗，提高其治疗效果并减轻患者负担。此外，由于培养步骤能够统一为一步，在经济方面如培养成本上也能享受到其优势。
Claims (6)
1.同时增殖疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法，其中所述方法由以下步骤组成：添加疾病抗原和氨基二膦酸至外周血单个核细胞和培养所得到的包含所述疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的外周血单个核细胞。
2.根据权利要求1的同时增殖疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法，其中添加疾病抗原和氨基二膦酸的步骤在培养的第1日实施。
3.根据权利要求1的同时增殖疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法，其中氨基二膦酸是帕米膦酸、阿仑膦酸、唑来膦酸、利塞膦酸、伊班膦酸、英卡膦酸、其盐和/或其水合物。
4.根据权利要求1的同时增殖疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法，其中疾病抗原是癌抗原。
5.根据权利要求1至4任一项的同时增殖疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的方法，其中同时添加疾病抗原和氨基二膦酸。
6.制备医药品的方法，其包括通过权利要求1至5任一项的方法制备疾病抗原特异的CTL和γδT细胞的步骤；和将所述疾病抗原特异的CTL和γδT细胞悬浮于用于医药品的液体中的步骤。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2008-172797 | 2008-07-01 | ||
| JP2008172797 | 2008-07-01 | ||
| PCT/JP2009/003039 WO2010001599A1 (ja) | 2008-07-01 | 2009-06-30 | ＣＴＬとγδＴ細胞の同時誘導方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102137925A CN102137925A (zh) | 2011-07-27 |
| CN102137925B true CN102137925B (zh) | 2014-12-10 |
Family
ID=41465706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200980133423.8A Expired - Fee Related CN102137925B (zh) | 2008-07-01 | 2009-06-30 | 同时诱导CTL和γδT细胞的方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8962313B2 (zh) |
| EP (1) | EP2311470B1 (zh) |
| JP (1) | JP5524056B2 (zh) |
| CN (1) | CN102137925B (zh) |
| DK (1) | DK2311470T3 (zh) |
| ES (1) | ES2538817T3 (zh) |
| HU (1) | HUE027084T2 (zh) |
| PT (1) | PT2311470E (zh) |
| WO (1) | WO2010001599A1 (zh) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006006638A1 (ja) * | 2004-07-08 | 2006-01-19 | Medinet Co., Ltd | 樹状細胞、該樹状細胞を含む医薬、該樹状細胞を用いた治療方法およびγδＴ細胞の培養方法 |
| WO2011152795A1 (en) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | Opulent Electronics International Pte Ltd | Device and method for driving leds |
| EP2666466A4 (en) * | 2011-01-21 | 2014-11-05 | Biotherapy Inst Of Japan | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF BLOOD PREPARATION ENRICHED IN NK CELLS |
| JP5825966B2 (ja) * | 2011-10-11 | 2015-12-02 | 株式会社日本バイオセラピー研究所 | Ｃｄ５６陽性ｔ細胞増強方法 |
| EP3060059A4 (en) * | 2013-10-25 | 2017-11-01 | Board of Regents, The University of Texas System | Polyclonal gamma delta t cells for immunotherapy |
| CN103768595B (zh) * | 2014-01-27 | 2016-03-02 | 中国医学科学院医学生物学研究所 | 唑来膦酸佐剂及含唑来膦酸佐剂的疫苗 |
| WO2016023491A1 (en) * | 2014-08-12 | 2016-02-18 | The University Of Hong Kong | Biophosphonate compounds and gamma delta t cell-mediated therapy for treating epstein-barr virus-associated disorders |
| WO2016055996A1 (en) * | 2014-10-06 | 2016-04-14 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Expanding t cell populations using biphosphonates, anti cd 3 antibody and il-2 |
| GB201421716D0 (en) * | 2014-12-05 | 2015-01-21 | King S College London | Cell expansion procedure |
| DE102017127984B4 (de) | 2017-11-27 | 2019-12-05 | Immatics US, Inc. | Verfahren für die Vermehrung und Aktivierung von γδ-T-Zellen |
| CN108949685B (zh) * | 2018-08-02 | 2022-03-29 | 吉林大学第一医院 | 一种体外诱导扩增高杀伤活性γδT细胞的方法 |
| SG11202103025PA (en) | 2018-09-27 | 2021-04-29 | Phosphogam Inc | Methods and compositions for the expansion and use of allogeneic gamma/delta-t cells |
| CN109517793B (zh) * | 2018-11-30 | 2022-05-10 | 广州长峰生物技术有限公司 | 一种NK细胞和γδT细胞共培养的建立方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1462456A1 (en) * | 2001-12-10 | 2004-09-29 | Kyogo Itoh | Tumor antigens |
| WO2006006720A1 (ja) * | 2004-07-13 | 2006-01-19 | Medinet., Co.Ltd | γδＴ細胞の培養方法、γδＴ細胞及び治療・予防剤 |
| WO2007029689A1 (ja) * | 2005-09-08 | 2007-03-15 | Medinet Co., Ltd. | 抗原提示細胞の活性化処理方法 |
| CN101031641A (zh) * | 2004-08-19 | 2007-09-05 | 伯哈德·莫瑟 | 呈递抗原的人γδT细胞的制备和在免疫治疗中的用途 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050048646A1 (en) | 2003-08-25 | 2005-03-03 | Medinet Co., Ltd. | Method for inducing cytotoxic T lymphocyte |
| WO2006006638A1 (ja) | 2004-07-08 | 2006-01-19 | Medinet Co., Ltd | 樹状細胞、該樹状細胞を含む医薬、該樹状細胞を用いた治療方法およびγδＴ細胞の培養方法 |
-
2009
- 2009-06-30 DK DK09773177.2T patent/DK2311470T3/en active
- 2009-06-30 US US13/001,581 patent/US8962313B2/en active Active
- 2009-06-30 WO PCT/JP2009/003039 patent/WO2010001599A1/ja active Application Filing
- 2009-06-30 PT PT97731772T patent/PT2311470E/pt unknown
- 2009-06-30 CN CN200980133423.8A patent/CN102137925B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-06-30 EP EP09773177.2A patent/EP2311470B1/en active Active
- 2009-06-30 ES ES09773177.2T patent/ES2538817T3/es active Active
- 2009-06-30 JP JP2010518923A patent/JP5524056B2/ja active Active
- 2009-06-30 HU HUE09773177A patent/HUE027084T2/en unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1462456A1 (en) * | 2001-12-10 | 2004-09-29 | Kyogo Itoh | Tumor antigens |
| WO2006006720A1 (ja) * | 2004-07-13 | 2006-01-19 | Medinet., Co.Ltd | γδＴ細胞の培養方法、γδＴ細胞及び治療・予防剤 |
| CN101031641A (zh) * | 2004-08-19 | 2007-09-05 | 伯哈德·莫瑟 | 呈递抗原的人γδT细胞的制备和在免疫治疗中的用途 |
| WO2007029689A1 (ja) * | 2005-09-08 | 2007-03-15 | Medinet Co., Ltd. | 抗原提示細胞の活性化処理方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Takahara M.."Copulsing tumor antigen-pulsed dendritic cells with zoledronate efficiently enhance the expansion of tumor antigen-specific CD8+ T cells via Vγ9γδ T cell activation".《J. Leukoc. Biol.》.2008,第83卷(第3期), * |
| 戴玮."唑来膦酸刺激人PBMCs体外扩增γδT细胞及其在肝癌非特异性免疫中的作用".《中国优秀硕士学位论文全文数据库（医药卫生科技辑）》.2008,(第3期), * |
| 戴玮."唑来膦酸刺激人PBMCs体外扩增γδT细胞及其在肝癌非特异性免疫中的作用".《中国优秀硕士学位论文全文数据库(医药卫生科技辑)》.2008,(第3期), * |
| 赵温利."γδT细胞与肿瘤免疫".《国外医学.肿瘤学分册》.1997,第24卷(第3期), * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20120107292A1 (en) | 2012-05-03 |
| DK2311470T3 (en) | 2015-08-17 |
| CN102137925A (zh) | 2011-07-27 |
| WO2010001599A1 (ja) | 2010-01-07 |
| PT2311470E (pt) | 2015-07-09 |
| ES2538817T3 (es) | 2015-06-24 |
| HUE027084T2 (en) | 2016-08-29 |
| EP2311470B1 (en) | 2015-05-27 |
| JP5524056B2 (ja) | 2014-06-18 |
| JPWO2010001599A1 (ja) | 2011-12-15 |
| US8962313B2 (en) | 2015-02-24 |
| EP2311470A4 (en) | 2013-05-08 |
| EP2311470A1 (en) | 2011-04-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102137925B (zh) | 同时诱导CTL和γδT细胞的方法 | |
| JP6010136B2 (ja) | ナチュラルキラー細胞の製造方法、その方法により製造されたナチュラルキラー細胞、並びにそれを含む腫瘍及び感染性疾患治療用組成物 | |
| US8609410B2 (en) | Method for activation treatment of antigen-presenting cell | |
| US10577586B2 (en) | Compositions and methods for modulating an immune response | |
| ES2379088T3 (es) | Fármaco de células dendríticas que contienen células dendríticas, procedimiento terapéutico usando la célula dendrítica y procedimiento de cultivar células T gamma delta | |
| JPWO2006006720A1 (ja) | γδＴ細胞の培養方法、γδＴ細胞及び治療・予防剤 | |
| US11723921B2 (en) | Modulated immunodominance therapy | |
| TW201741330A (zh) | Ｔ細胞增生技術 | |
| WO2015014291A1 (zh) | 通过无血清培养扩增活化淋巴细胞的方法 | |
| CN103002915A (zh) | 抑制Treg细胞的方法和组合物 | |
| MX2009001269A (es) | Metodo de proliferacion de celulas asesinas activadas por linfocina. | |
| TW200536940A (en) | Preparing method of cytokine induced killer cell cultivated from hydrothorax of cancer patient and its application |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20141210 Termination date: 20180630 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |