CN102133300B - 一种具有免疫增强作用的中药组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有免疫增强作用的中药组合物及其应用,该中药组合物包含以下重量份的中药:黄芪200~400份,当归100~300份,淫羊藿100~300份,枸杞子100~200份,苍术100~200份、山楂100~200份。动物试验证明,该中药组合物能显著提高畜禽的细胞免疫和体液免疫功能,促进生长,在体外能显著促进淋巴细胞增殖,无毒,临床应用安全。本发明组合物具有高效、安全、质量可控等优点。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,涉及一种具有免疫增强作用的中药组合物及其应用。本发明的中药组合物具有增强免疫作用,由该中药组合物制成的中药口服液定名为归芪饮口服液,属于增强畜禽免疫功能的新型免疫增强剂。
背景技术
畜禽传染病一直是危害畜牧业发展的首要问题,尤其是当前流行的重大病毒性传染病,迄今尚无有效的治疗药物与方案,给养殖业造成巨大的经济损失。我国每年由于动物疫病造成的直接经济损失260~300亿元,因疫病引起的生产性能下降、饲料和人工浪费、药物消耗等间接损失达800亿元。而疫苗预防仍是最主要的措施。但由于免疫失败和抗体滴度低暴发疫病的情况时有发生。采用大剂量化学药物治疗,又造成药物残留和严重的环境污染,使出口贸易屡遭绿色壁垒。更重要的是给人类健康和安全造成威胁。所以人们的观念逐渐发生转变,由直接杀伤外源性病原体转向增强动物机体自身抵抗力。在有效预防疾病方面下功夫。于是,为满足市场需求,解决临床的实际问题,研究一种高效、低毒、无残留的免疫增强剂刻不容缓。
发明内容
本发明针对当前动物疫病防治现有技术中急需高效、低毒免疫增强剂的问题,本发明的目的在于提供一种中药组合物;本发明的另一目的在于提供一种具有免疫增强作用的中药合剂;本发明的又一目的在于提供一种中药组合物在提高动物动物免疫中的应用。本发明所提供的中药合剂为一种新型复方中药免疫增强剂,具备安全、高效、质量可控等优点。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现:
一种中药组合物,其在于包含以下重量份的中药:黄芪200~400份,当归100~300份,淫羊藿100~300份,枸杞子100~200份,苍术100~200份、山楂100~200份,所述组分的来源可以是中药材或相当于中药材生药量的中药提取物。优选为黄芪300份,当归200份,淫羊藿200份,枸杞子100份,苍术100份、山楂100份。
一种具有免疫增强作用的药物,其在于由上述的中药组合物和药学可接受的辅料制成。
上述的具有免疫增强作用的药物,其在于所述的药物为口服剂型,其为片剂、散剂、颗粒剂或口服液。优选为口服液。由上述中药组合物制成的口服液定名为归芪饮口服液,属于增强畜禽免疫功能的新型免疫增强剂。
上述的具有免疫增强作用的药物,其所述的口服液通过以下方法制备:将所述的6味中药组份,加水煎煮3次,离心取上清液,将上清液混合并浓缩,按1g/L的用量加入苯甲酸钠,混匀、无菌灌装。
上述的中药组合物在增强动物免疫力中的应用。
本发明的有益效果:
本发明首先以我国物种丰富的中药为基础,从具有免疫增强作用的中药中筛选出十几味中药作为组分药,以黄芪为主药,按君臣佐使的原则组成六个方剂,通过与疫苗同时给药后检测特异性细胞免疫和体液免疫水平的变化,筛选出免疫增强效果最佳的方剂;结果表明,本发明所筛选的中药组合物免疫增强效果较好。
进一步研究了本发明组合物增强免疫的机理,测定该方对雏鸡外周血T淋巴细胞增殖的影响,结果表明,本发明组合物体内体外均有促进淋巴细胞增殖的作用。
通过药效学试验进一步验证其免疫增强效果,并筛选了本发明组合物所制备的药物的最佳剂量,结果表明,本发明组合物所制备的药物能显著提高血清抗体效价、体重和攻毒保护率。
同时测定了该组合物的安全性,试验证明该组合物用量LD50大于5000mg/kg,实际无毒。
与现有技术相比,本发明优点如下:
1、与同类免疫增强剂相比,本发明组合物不仅效果可靠,而且来源于天然中药,无毒副作用,无药残隐患,符合绿色药品要求,保障动物源性食品安全;生产无三废,对环境无污染,符合绿色环保的要求。
2、由本发明组合物制备的口服溶液,给药剂量小,用药成本低,通过饮水给药方便。
3、本发明组合物能显著提高畜禽机体细胞免疫与体液免疫,预防疾病,促进生长,在某些时间点抗体高于市售的芪蓝抗毒饮。
具体实施方式
1归芪饮组方的确立
从具有免疫增强作用的中药中筛选出十几味中药作为组分药,以黄芪为主药,按君臣佐使的原则组成六个方剂:。
方1:黄芪,党参,天门冬,板蓝根,甘草
方2:黄芪,党参,丹参,枸杞,五味子
方3:黄芪,党参,白术,茯苓,甘草
方4:黄芪,党参,熟地,当归,甘草
方5:黄芪,当归,淫羊藿,枸杞,苍术,山楂
方6:黄芪,板蓝根,大青叶,生地,赤芍(为市售芪蓝抗毒饮配方)将以上每个复方组成分别按以下用量配比(单位:g)后,
方剂1、黄芪300g,党参200g,天门冬200g,板蓝根200g,甘草100g;
方剂2、黄芪300g,党参200g,丹参200g,枸杞200g,五味子100g;
方剂3、黄芪300g,党参200g,白术200g,茯苓200g,甘草100g;
方剂4、黄芪300g,党参200g,熟地200g,当归200g,甘草100g;
方剂5、黄芪300g,当归200g,淫羊藿200g,枸杞子100g,苍术100g,山楂100g;
方剂6、黄芪300g,板蓝根200g,大青叶200g,生地200g,赤芍100g。
各方剂按常规方法制成生药含量为1g/ml的中药口服液。
用新城疫IV系苗免疫16日龄雏鸡,38日龄二免。在首次免疫和二免的同时,6个中药组分别饮水添加相应中药0.5ml/只,连续3d。分别于首免后第7、14、21、28、35、42天采血,分别用MTT法和微量法测定外周血T淋巴细胞增殖和血清ND-HI抗体效价的变化。结果表明,方剂2、方剂5和方剂6的作用均较好,方剂5的效果最好,作为新型免疫增强剂的方剂(表1-2)。将方剂5的中药组合物配方制备的中药口服液定名为归芪饮。
表1各组抗体效价的动态变化(log2)
注:同列数据标注不含相同字母者差异显著(P<0.05),以下表同。
表2各组T淋巴细胞增殖的变化(A570值)
2归芪饮的制备
每1000ml药液的处方药材为:黄芪300g,当归200g,淫羊藿200g,枸杞子100g,苍术100g、山楂100g。
以上六味,加入10倍量水煎煮3次(考虑药材吸水率,第一次可多加2倍量水),每次1.0h,滤过,16000r/min转速离心15min,上清液混合,浓缩至生药含量为1g/ml,按1g/L的用量加入苯甲酸钠,搅匀,无菌灌装。
3归芪饮的药效药理研究
3.1归芪饮对新城疫疫苗免疫雏鸡血清抗体效价的影响
归芪饮分别设定0.25g/羽、0.5g/羽、0.75g/羽、1.0g/羽、1.25g/羽、1.5g/羽6个剂量,雏鸡免疫新城疫疫苗同时给药,每天1次连用3d,分别于首次免疫后第7、14、21、28、35、42天采血,用微量法测定血清ND-HI抗体效价的动态变化。结果归芪饮各剂量组在绝大多数时间点的抗体效价均高于免疫对照组。0.5g/羽和0.75g/羽两个剂量能显著提高雏鸡血清抗体效价(表3)。
表3各组血清ND-HI抗体效价的变化(log2)
3.2归芪饮对新城疫疫苗免疫雏鸡生长性能的影响试验同上。于免疫后第2、4、6周各组随机抽取20只称取体重,每个重复5只。自由采食饮水,计算各组平均日增重和料肉比。结果0.5~1g/羽剂量组在不同时间点都能显著提高雏鸡体重。其中0.5g/羽、0.75g/羽剂量提高鸡体重、降低料重比的效果最佳(表4)。
表4各组生长性能变化(g)
3.3归芪饮对新城疫疫苗免疫雏鸡免疫保护效果的影响用新城疫强毒对首免8周后的试验鸡进行人工感染。试验共设8个组:0.25g/羽、0.5g/羽、0.75g/羽、1.0g/羽4个剂量组(50羽/组),1个疫苗攻毒对照组(50羽/组),1个空白攻毒对照组(50羽/组),1个疫苗对照组(30羽/组)和1个空白对照组(30羽/组)。攻毒后观察临床症状和病理变化,记录发病数、存活数。待鸡群死亡率稳定后结束观察。结果0.75g/羽组的死亡率最低(12%),保护率最高(76%),其次为0.5g/羽组,1.0g/羽组,说明方剂5在高、中剂量时能提高机体对新城疫病毒的抵抗力。(表5)
表5攻毒保护试验各组死亡数和死亡率
3.4归芪饮在体外对鸡淋巴细胞增殖的影响将125~1000μg/ml的归芪饮加入到分离的鸡外周血淋巴细胞中共同培养48h,用MTT法测定归芪饮的最大安全浓度为62.5μg/ml,取安全浓度范围内5个浓度的归芪饮分别单独或与PHA加入到培养的鸡的淋巴细胞中,培养48h后,同法测定淋巴细胞增殖的变化。结果,单独作用时,归芪饮在3.91~31.25μg/ml时的A570值显著高于细胞对照组(P<0.05),说明归芪饮在这些浓度单独能显著促进淋巴细胞增殖。与PHA协同作用时,归芪饮在7.81~62.5μg/ml时的A570值显著高于PHA对照组(P<0.05),说明归芪饮在这些浓度能协同PHA显著促进淋巴细胞增殖(表6)。
表6归芪饮在体外对淋巴细胞的增殖的影响(A570值)
4归芪饮的安全性研究
4.1急性毒性试验
根据兽药急性毒性试验(LD50测定)指导原则采用ICR小鼠灌胃测定归芪饮的急性毒性。结果,方剂5LD50大于5000mg/kg,属实际无毒。其最大耐受量为120g/kg。
4.2亚慢性毒性试验
选用健康SD大鼠80只,雌雄各半,随机分为高中低3个剂量组和1个对照组,以最大耐受量的1/3、1/6和1/12剂量给SD大鼠灌胃,对照组灌胃等量生理盐水,连灌2周,对大鼠进行日常观察并测定给药2周后和停药2周后的血常规、血清生化指标和脏器指数,观察肝肾等重要器官的外观和组织病理学变化。结果表明归芪饮无亚慢性毒性或低毒,临床应用对动物安全。
实施例1口服液的制备
每1000ml药液的处方药材为:黄芪300g,当归200g,淫羊藿200g,枸杞子100g,苍术100g、山楂100g。
将上述六味药,加入为中药材重量10倍的水量(考虑药材吸水率,第一次可多加2倍量水),煎煮3次,每次煎煮1.0h,16000r/min转速离心15min,上清液混合并浓缩至生药含量为1g/ml,按1g/L的用量加入苯甲酸钠,搅匀,无菌灌装。
实施例2口服液的制备
每1000ml药液的处方药材为:黄芪400g,当归300g,淫羊藿300g,枸杞子200g,苍术200g、山楂200g。
将上述六味药,加入为中药材重量10倍的水量10倍的水量(考虑药材吸水率,第一次多加2倍量水),煎煮3次,每次煎煮1.0h,16000r/min转速离心15min,上清液浓缩至生药含量为1g/ml,按1g/L的用量加入苯甲酸钠,搅匀,无菌灌装。
实施例3口服液制备
每1000ml药液的处方药材为:黄芪200g,当归100g,淫羊藿100g,枸杞子100g,苍术100g、山楂100g。
将上述六味药,加入为中药材重量10倍的水量(考虑药材吸水率,第一次多加2倍量水),煎煮3次,每次煎煮1.0h,16000r/min转速离心15min,上清液浓缩至生药含量为1g/ml,按1g/L的用量加入苯甲酸钠,搅匀,无菌灌装。
Claims (6)
1.一种具有免疫增强作用的中药组合物,其特征在于由以下重量份的中药组成:黄芪200~400份,当归100~300份,淫羊藿100~300份,枸杞子100~200份,苍术100~200份、山楂100~200份,所述组分的来源是中药材或相当于中药材生药量的中药提取物。
2.根据权利要求1所述的具有免疫增强作用的中药组合物,其特征在于各组分的重量份为黄芪300份,当归200份,淫羊藿200份,枸杞子100份,苍术100份、山楂100份。
3.一种具有免疫增强作用的药物,其特征在于由权利要求1或2中任意一项所述的中药组合物和药学可接受的辅料制成。
4.根据权利要求3所述的具有免疫增强作用的药物,其特征在于所述的药物为口服剂型,其为片剂、散剂、颗粒剂或口服液。
5.根据权利要求4所述的具有免疫增强作用的药物,其特征在于所述的剂型为口服液。
6.根据权利要求5所述的具有免疫增强作用的药物,其特征在于所述的口服液通过以下方法制备:将所述的6味中药组份,加水煎煮3次,离心取上清液,将上清液混合并浓缩,按1g/L的用量加入苯甲酸钠,混匀、无菌灌装。
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