CN102114076B - 肉桂提取物的制备方法、肉桂提取物、其组合物以及用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及肉桂提取物的制备方法，由此制得的肉桂提取物以及含有该提取物的组合物和该提取物在制药或制备保健品中的用途。所述制备方法包括以下步骤：a)将肉桂原料与水性溶剂混匀；b)抽提由步骤a)所得的混合物；c)分离残渣，得到肉桂提取物。所得肉桂提取物中含有肉桂醇、肉桂酸、肉桂醛、丁香酚等，外观为黄色澄明液体，pH为4.6左右。本发明还提供了含有该提取物的组合物。本发明的肉桂提取物可用于制备治疗具有降血糖和降血脂的双重功效且具有保护肝功能的药物或保健品。

Description

肉桂提取物的制备方法、肉桂提取物、其组合物以及用途

本申请是申请人于2006年10月25日提交的，申请号为“200610117512.1”，发明名称为“肉桂提取物的制备方法、肉桂提取物、其组合物以及用途”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种中药提取物、其制备方法和组合物以及在制备药物或保健品中的用途。具体地说，本发明涉及肉桂提取物的制备方法、由该方法制得的肉桂提取物、含有该提取物的组合物和该提取物在制备治疗具有降血糖和降血脂的双重功效且具有保护肝功能的药物中的用途。

背景技术

糖尿病是一种非常古老的疾病，中医称之为“消渴”，即消瘦烦渴之意。现代医学认为它是一种常见的内分泌疾病，是由于人体内胰岛素绝对或相对缺乏而引起的。

胰岛素由人体胰脏中的胰腺β细胞分泌，它能使血中的葡萄糖顺利进入人的各器官组织的细胞中，为这些细胞提供能量。因此，正常人血糖浓度虽然随进餐有所波动，但在胰岛素的调节下，能使这种波动保持在一定的范围内。而如果缺少胰岛素或是胰岛素不能正常工作时，就会使血中的葡萄糖无法进入细胞提供能量，血糖因此会升高并引起糖尿病。

糖尿病通常分为1型糖尿病和2型糖尿病两种。1型糖尿病，约占糖尿病病人总数的10%，常发生于儿童和青少年，病因是患者体内胰腺产生胰岛素的细胞已经彻底损坏，从而完全失去了产生胰岛素的功能。2型糖尿病，约占糖尿病病人总数的90%，发病年龄多数在35岁以后。起病缓慢、隐匿，部分病人是在健康检查或检查其他疾病时发现的。随着糖尿病得病时间的延长，身体内的代谢紊乱如得不到很好地控制，会进一步发展并引起全身各种严重急、慢性并发症，直接危及生命。

到目前为止，糖尿病的病因及发病机理还没有完全弄清楚，主要与遗传因素；肥胖(2型糖尿病人中约60%是体重超重或肥胖)；年龄(有一半的2型糖尿患者多在55岁以后发病)；以及现代的生活方式(吃高热量的食物和运动量的减少)有关。

随着现代人类劳动强度显著下降和饮食习惯的改变，糖尿病的发病率迅速上升。据世界卫生组织最新统计，全世界有糖尿病患者1.25亿，平均每分钟就有6人因患糖尿病死亡，糖尿病造成的死亡，已居当今世界死亡原因的第5位。世界卫生组织已将糖尿病与癌症、心血管疾病列为三大疑难病之一，并把每年的11月14日定为世界糖尿病日。在我国，糖尿病患者正在逐年增加。目前，我国已有糖尿病患者约4000万人。据世界卫生组织预测，到2025年我国糖尿病人将达5000万，同时糖尿病人群的发展正趋于低龄化。

由于糖尿病是一种长期的慢性代谢综合症，而且有很多并发症，如高血脂、高血压、冠性病等，世界各国每年用于治疗糖尿病的费用高达数千亿美元，中国目前每年用于治疗糖尿病的费用是一千七百亿人民币。糖尿病给世界各国带来了沉重的经济负担，同时也严重影响患者的生活质量，尤其是对于中国这样一个提前进入老龄化的，糖尿病高发的发展中国家来说更是不堪重负，直接影响国民经济的发展和人民生活水平的提高，延缓了加入世界发达国家的行列。所以如何找到一个经济、有效、简单、快捷的预防和治疗糖尿病的方法事关重大，迫在眉睫。

2002年5月第五届国际糖尿病联盟大会形成了纲领性决议：消除胰岛素抵抗，提高胰岛素的敏感性是世界糖尿病治疗的新方向。所谓胰岛素抵抗即靶细胞(肌肉、脂肪、肝脏)对胰岛素的敏感性下降，机体需要更多的胰岛素，才能维持正常的血糖浓度。胰岛素抵抗是糖尿病发病的前奏，增加机体对胰岛素的敏感性不仅可以降低血糖，而且可以减轻β细胞的负荷，防止β细胞过量凋亡，防止病情的恶化。

过氧化物酶增殖体激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPAR)是一组在葡萄糖代谢和脂肪细胞分化中具有重要作用的核受体转录因子。PPAR的亚型PPARα主要在肝脏表达，调控脂代谢，它的激动剂贝特类药是目前市场上的一线口服降血脂药。PPAR的另一个亚型PPARγ主要在脂肪表达，调控糖代谢，它的激动剂噻唑烷二酮类药(罗格列酮等)是目前市场上的主要口服降血糖药，通过增加胰岛素的敏感性，消除胰岛素抵抗来降血糖。但是罗格列酮有明显的副作用如水肿、体重增加、肝毒性、心力衰竭等，而且价格昂贵。

肉桂(Cinnamomum Zeylanicum)为樟树科植物，主要生长在热带地区，我国主要分布在两广、云南和福建等地区，其中以两广最多。它的树皮具有药用价值，是一种传统中药，具有补火助阳，引火归源，散寒止痛，活血通经等功效，在我国已有数千年的使用历史。

在肉桂作为中药使用的历史中，无副作用的报道，而且中国是肉桂的产地，取材广泛，加工简单，价格低廉。近年来，美国和德国的科学家发现肉桂具有治疗糖尿病的作用，在小鼠和人体身上均取得了成功，但作用机理迄今为止仍不明了。

综上所述，在糖尿病的预防和治疗中，迫切需要开发出一种能消除胰岛素抵抗，提高胰岛素的敏感性、副作用低、具有多重效果且成本低的天然药物。

发明内容

本发明的目的正是提供一种制备同时兼具低副作用、高效而多效，且制药成本低的肉桂提取物的方法。

本发明的另一目的在于提供肉桂提取物。本发明的另一目的在于提供包含本发明肉桂提取物的组合物。本发明的另一目的在于提供本发明肉桂提取物在制备药物或保健品中的用途。

在本发明的第一方面，提供了一种肉桂提取物的制备方法，其包括以下步骤：

a)将肉桂原料与水性溶剂混匀；

b)抽提由步骤a)所得的混合物；

c)分离去除残渣，得到肉桂提取物。

在本发明的一个优选实施方式中，所述方法还包括将步骤c)中所得肉桂提取物浓缩干燥的步骤。在本发明的另一优选实施方式中，所述浓缩干燥是冷冻干燥。

在上述的制备方法，所述水性溶剂选自：水；水可混溶的溶剂与水组成的混合溶剂体系；或者，有助于提取肉桂中水溶性活性成分的酸性或碱性水溶液。在本发明的一个优选实施方式中，所述水性溶剂为水，所得提取物为肉桂水提取物。所述水可混溶的溶剂包括但不限于：乙醇等。所述混合溶剂体系中水的体积为30-99.9%，优选50-95％，更优选75-90％。

在上述的制备方法中，肉桂原料与水性溶剂的混合比例为1-20g肉桂原料:50-200ml溶剂；优选5-15g肉桂原料:80-150ml溶剂；更优选10g肉桂原料:100ml溶剂。

在本发明的一个优选实施方式中，所述抽提是在旋转蒸发器中进行的。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述抽提步骤的温度低于60℃，更优选低于45℃。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述抽提步骤的时间为1-24小时，优选2-12小时，更优选3-6小时。

在本发明的第二方面提供了按照上述制备方法制得的肉桂提取物。

所述的肉桂提取物中含有肉桂醇、肉桂酸、肉桂醛、丁香酚，其水溶液为黄色澄明液体，pH为2.0-6.0，优选3.5-5.5，较优选4.0-5.0，最优选4.6左右。

在本发明的一个优选实施方式中，所述肉桂提取物在如下的高效液相色谱条件下的图谱如图1所示：色谱柱：C18Zorbax extend(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为水与甲醇的梯度混合：第0-5分钟，0%甲醇；第5-20分钟，0-100%甲醇；第20-25分钟，100%甲醇，第25-26分钟，100-0%甲醇；流速：0.5ml/分钟；柱温：25℃；检测波长：270nm。

在本发明的第三发明，提供了一种组合物，它包含上述的肉桂提取物。

在本发明的一个优选实施方式中，所述组合物为包含有效量所述肉桂提取物的药物组合物。

在本发明的另一优选实施方式中，所述组合物为包含有效量所述肉桂提取物的保健组合物。

在上述的组合物中还可包含可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

在本发明的一个优选实施方式中，所述载体为盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇或其组合。

在本发明的另一优选实施方式中，所述载体为药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述药物组合物或保健品组合物，为颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片或口服液或其它合适的形状。

在上述的组合物中，肉桂提取物的含量为组合物总重量的1-99%。

在本发明的一个优选实施方式中，所述肉桂提取物的含量为组合物总重量的2-95%，优选为5-90%，更优选10-80%。

在本发明的第四方面，提供了上述肉桂提取物在制备用于治疗或预防糖尿病且治疗或预防高血脂的药物或保健品中的用途。

在本发明的第五方面，提供了上述的肉桂提取物在制备用于治疗或预防高血脂症药物或保健品中的用途。

本发明的肉桂提取物具有增加胰岛素的敏感性，改善胰岛素抵抗，降低血糖的作用，同时还具有降低血脂和改善肝功能的作用。

附图说明

图1是按实施例1所述制备的肉桂水提取物的HPLC图谱。

图2是实施例1的CE对3T3-L1细胞分化的影响。其中A为对照；B为仅加入DM(正常分化液)诱导分化；C为加入DM+CE(0.2mg/ml)；D为加入DM+CE(0.6mg/ml)。

图3A是实施例1的CE作用后的3T3-L1细胞中PPARα、PPARγ以及它们的靶基因ap2、CD36、FAS、ACO、LPL和GLUT4的基因表达。图3B为实施例1的CE作用后的3T3-L1细胞中PPARγ蛋白水平，其中：1为对照；2为仅加入DM；3为加入DM+1μM罗格列酮；4为加入DM+0.2mg/ml的CE；5为DM+0.6mg/ml的CE。

图4是用实施例1的CE刺激24小时后的用含PPARα、PPARγ报告基因的质粒转染的293T细胞中PPARα、PPARγ报告基因的活性。图中对照是指阴性对照；Tro为PPARγ阳性对照；WY14643为PPARα阳性对照。A为转染全长的PPARγ的报告基因活性图；B为转染配体结合域的PPARγ的报告基因活性图；C为转染全长的PPARα的报告基因活性图；D为转染配体结合域的PPARα的报告基因活性图。

图5是不同浓度实施例1的CE以及CE加胰岛素对由3T3-L1细胞分化成的脂肪细胞葡萄糖吸收的影响。其中，阳性对照为胰岛素。

图6是实施例1的CE对AKT磷酸化的影响。其中，1为阴性对照；2为阳性对照胰岛素；3为0.2mg/ml的CE；4为0.6mg/ml的CE；5为1.2mg/ml的CE。

图7是实施例1的CE对饮食导致的糖尿病肥胖小鼠（DIO）的影响。其中，图7A为灌胃3周后CE对DIO小鼠空腹血糖的影响，NF对照为普通饲料喂养的正常小鼠；HF对照为DIO小鼠对照；Ros为罗格列酮阳性对照；CE为肉桂水抽提物。图7B为灌胃3周后CE对DIO小鼠葡萄糖耐量的影响。

图8是实施例1的CE对遗传导致的糖尿病小鼠db/db鼠的影响。其中，图8A为灌胃2周后CE对db/db鼠空腹血糖的影响，Ros为罗格列酮阳性对照；CE为肉桂水抽提物。图8B为灌胃2周后CE对db/db小鼠葡萄糖耐量的影响。

具体实施方式

本发明人经长期而深入的研究，研制出了肉桂提取物，并以肉桂提取物作为研究对象，以3T3-L1作为细胞模型，DIO小鼠和db/db小鼠作为动物模型，证实了本发明肉桂提取物在治疗糖尿病和高血脂中的作用及其机制：肉桂是一种天然的PPARα和PPARγ的双重激动剂，不仅具有增加胰岛素的敏感性，改善胰岛素抵抗，降低血糖的作用，同时还具有降低血脂和改善肝功能的作用。

具体而言，本发明的肉桂提取物是从中药肉桂中提取而成，具有副作用低、制备成本低廉的优点。它是一种天然的PPARs的双重激动剂，具有降血糖和降血脂的双重功效，而且具有保护肝功能的作用。

与目前国外文献上报道的类似物相比，本发明肉桂提取物的作用机制清楚，降血糖降血脂作用稳定，疗效显著，功能更多。例如，与目前市场上广泛使用的降血糖药（PPARγ的激动剂）罗格列酮相比而言，罗格列酮只能降血糖，而且副作用明显，如低血糖、水肿、体重增加、肝功能损伤等，本发明降血糖作用温和，同时还具有降血脂和保护肝功能的功效，尤其对于高脂饮食导致的肥胖而引起的2型糖尿病效果更佳。又例如，与目前市场上普遍使用的降血脂药（PPARα的激动剂）贝特类药相比而言，贝特类药只能降低血脂，本发明除了具有降低血脂的作用外，同时还能降低血糖，疗效稳定，持久。

缩写

除非另有说明，本发明所用缩写的含义如表1所示。

表1：缩写说明

肉桂提取物及其制备方法

在本发明中，术语“肉桂提取物”、“本发明的提取物”和“本发明的活性成分”可互换使用，均表示根据本发明从肉桂原料中提取出的具有降血糖和降血脂作用的活性物质。

术语“肉桂水提取物”、“CE”可互换使用，均指用本发明的方法，以水为溶剂提取而得的肉桂提取物。在本发明的实施例中，CE尤指根据实施例1所述的方法制得的肉桂水提取物。

在本发明中，所用的肉桂原料可以是市售的常规肉桂原药材，优选为粉末形式。其具体例子是由上海中药饮片厂生产的肉桂粉。

可通过如下步骤制备本发明的肉桂提取物：

a)将肉桂原料与水性溶剂混匀；

b)抽提由步骤a)所得的混合物；

c)分离去除残渣，得到肉桂提取物。

在本发明的优选实施方式中，所述方法还包括将步骤c)中所得肉桂提取物浓缩干燥的步骤。所述浓缩干燥可采用本领域已知的任何方法，例如旋转蒸发法、冷冻干燥法等，优选采用冷冻干燥法。

在本发明的实施方式中，所述肉桂原料与溶剂的混合比例为1-20g肉桂原料:50-200ml溶剂；优选5-15g肉桂原料:80-150ml溶剂；最优选10g肉桂原料:100ml溶剂。

所述水性溶剂选自水或水可混溶的溶剂与水组成的混合溶剂，优选为水。所述水可混溶的溶剂可为乙醇、丙酮等本领域常用溶剂。在本发明的优选实施方式中，所述水性溶剂为水，所得提取物为肉桂提取物。

本发明的抽提温度一般低于60℃，更优选低于45℃。本发明所用的抽提时间为1-24小时，优选2-12小时，更优选3-6小时。

在本发明的提取中可采用本领域常用的提取方法，例如(但不限于)：浸渍法、渗滤法、真空旋转蒸发法等。

应理解的是，本领域的技术人员可在根据具体的制备要求来选择上述的抽提条件和方法。

所述分离去除残渣的步骤，可采用本领域常用的技术进行，例如采用滤纸、纱布等进行过滤等。

本发明的肉桂提取物是一种含有肉桂醇、肉桂酸、肉桂醛、丁香酚等多种有机化合物的混合物，其水溶液为黄色澄明液体，pH为2.0-6.0，优选3.5-5.5，较优选4.0-5.0，最优选4.6左右，微酸，有特殊香味，味道清淡略甜。

组合物

本发明还提供了含有本发明肉桂提取物的组合物。

在本发明中，可用常规方法将本发明的肉桂提取物与可接受的载体、赋形剂或稀释剂相混合，形成本发明组合物。所述组合物可为药物组合物或保健品组合物。所述载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。

本发明的组合物可以为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液)或其他合适的形状。本发明活性成分的含量通常为组合物重量的1-99%，较佳地为2-95%，更佳地为5-90%，最佳地10-80%。

本发明的组合物，可以为单剂或多剂形式。按施用剂量计，通常含有1-1000mg/剂，较佳地约2-500mg/剂，更佳地5-100mg/剂。

本发明的合物可以通过常规形式使用，其中包括(但并不限于)：口服、肌注、皮下注射等。优选口服。本发明组合物的施用量，按活性物质计算，通常为每天约0.01-500mg/kg体重，较佳地约0.1-50mg/kg体重。

药物/保健组合物及其用途

本发明还提供了一种药物/保健组合物，它含有：(a)有效量的本发明的肉桂提取物；以及(b)药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

如本文所用，术语“本发明的组合物”包括药物/保健组合物，只要其含有本发明的肉桂提取物作为降血糖、降血脂或保护肝功能的活性成分。

本发明中，术语“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。

本发明中，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。

本文所用的术语“有效量”指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况的量，或是表现出可检测的治疗或预防效果的量。对于某一对象的精确有效量取决于该对象的体型和健康状况、病症的性质和程度、以及选择给予的治疗剂和/或治疗剂的组合。因此，预先指定准确的有效量是没用的。然而，对于某给定的状况而言，可以用常规实验来确定该有效量，临床医师是能够判断出来的。

为了本发明的目的，有效的剂量为给予个体约0.01毫克/千克至500毫克/千克，较佳地0.05毫克/千克至200毫克/千克体重的本发明活性物质。此外，本发明的活性物质还可与其他治疗剂一起使用。

药物组合物还可含有药学上可接受的载体。术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体。应理解的是，“药学上可接受的载体”也包括可用于保健品中的各种载体，它们符合如下条件：本身不诱导产生对接受该组合物的个体有害的抗体，且给药后或给予保健品后没有过分的毒性。这些载体是本领域普通技术人员所熟知的。在《雷明顿药物科学》(Remington'sPharmaceutical Sciences，Mack Pub.Co.，N.J.1991年)中可找到关于药学上可接受的载体的充分讨论。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、佐剂、及其组合。

治疗性组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。

所述化合物或其药学上可接受的盐及其组合物可通过口服以及静脉内、肌内或皮下等途径给药；优选的是口服给药。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括：无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合活性成分的特性和所需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。

本发明的组合物及其药物组合物也可储存在适宜于注射或滴注的消毒器具中。通常，在本发明的药物组合物中，肉桂提取物作为活性成分占总重量的1-99%，较佳地2-95%，较佳地5-90%，更佳为10-80%，其余为药学上可接受的载体以及其他添加剂等物质。

给药方式和剂型

本发明的药物/保健组合物可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式。

本发明所述的药物/保健组合物的剂型可以是多种多样的，只要是能耗够使活性成分有效地到达哺乳动物体内的剂型都是可以的。组合物可以制成适合所需给药方式的各种形式。例如，药物组合物可以制成片剂、丸剂、粉剂、锭剂、袋剂、扁囊剂、酏剂、悬浮剂、乳剂、溶液、糖浆、气雾剂(作为固体或在液体基质中)、油膏、软凝胶和硬凝胶胶囊、栓剂、无菌可注射液、无菌包装的粉末等。本发明的肉桂提取物较佳为存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中。

本发明的肉桂提取物组合物优选口服给药，口服形式包括但不限于：片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或悬浮液(含有如约0.05-5%悬浮剂)、糖浆(含有如约10-50%糖)、和酏剂(含有约20-50%乙醇)，或者以无菌可注射溶液或悬浮液形式(在等渗介质中含有约0.05-5%悬浮剂)进行非肠胃给药。例如，这些药物制剂可含有与载体混合的约25-90%，通常约为5-60%(重量)的活性成分。

一旦配成本发明的组合物，可将其直接给予对象。待预防或治疗的对象可以是动物；尤其是人。含本发明活性物质的药物组合物，可以经口服、皮下、皮内、静脉注射等方式应用。治疗剂量方案可以是单剂方案或多剂方案。

本发明的肉桂提取物及其组合物也可经肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂(如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性物质的溶液或悬浮液。还可在甘油、液体、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物的生长。

适应于注射的药物形式包括：无菌水溶液或分散液和无菌粉(用于临时制备无菌注射溶液或分散液)。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能防止微生物(如细菌和真菌)的污染影响。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有如水、醇(如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、它们的适当混合物和植物油。

所用的活性成分的有效剂量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。然而，通常当本发明提取物每天以约1-300mg/kg动物体重的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以1-3次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。对大部分大型哺乳动物而言，每天的总剂量约为5-1000mg，较佳地约为10-500mg。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体密切混合的约1-200mg的活性成分。可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。

本发明的组合物或药物还可与其它活性成分或抗糖尿病或抗高血脂药物联合给药。抗糖尿病药物可为例如(但不限于)：胰岛素敏感性增强剂、葡萄糖吸收抑制剂、双胍、胰岛素分泌增强剂、SGLT2抑制剂、胰岛素或胰岛素类似物、胰高血糖素受体拮抗剂、胰岛素受体激酶刺激剂等。所述抗高血脂药物可为例如(但不限于)：他汀类药物(阿托伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和氟伐他汀)、降脂宁、乐脂平等。

当两种或两种以上的药物联合给药时，一般具有优于两种药物分别单独给药的效果。优选地，联合施用的药物或其它制剂不干扰本发明肉桂提取物的治疗活性。

本发明的主要优点是：

(1)成本低：一线降糖药和降血脂药均是进口药，价格昂贵，本发明的肉桂提取物来自中药，来源广泛，加工简单，成本低廉。

(2)具有双重功效：本发明的肉桂提取物是PPARα和PPARγ的双重激动剂，既能降糖又能降脂，这对糖尿病人尤其重要，因为糖尿病人往往同时伴有高血脂，心血管疾病的发病率明显高于正常人，目前市场上的药物要么只能降血糖要么只能降血脂，还没有具有双重功能的类似药物。

(3)副作用小：目前一线口服降糖药PPARγ的激动剂噻唑烷二酮类药(罗格列酮等)副作用明显：水肿、体重增加、心力衰竭、肝功能损伤。经实验证明，本发明的肉桂提取物不仅基本无副作用，而且还具有保护肝功能的作用。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人的《分子克隆：实验室手册》(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实验材料和仪器

以下实施例中的细胞、动物、试剂等材料及其来源如表2所示。

表2：实施例中所用实验材料

^*动物饲养的条件SPF清洁级

实施例中所用的实验仪器如下：

日立7020全自动生化分析仪；TheraSense血糖仪；OLYMPUS CKX41显微镜；OLYMPUS C5060数码相机；1450MICRO BETA JET液体闪烁计数器；mq10NMR核磁共振分析仪；Tanon EPS 300电泳槽；ABI 7500实时定量PCR仪；LMAX Ⅱ荧光化学发光酶标仪。

实施例1.肉桂水提取物的制备

肉桂水提取物的工艺流程

将肉桂原料和双蒸水以一定比例混匀(10g+100ml)，用旋转蒸发器在真空条件下进行抽提，水温控制在45℃，抽提6小时后用定性滤纸过滤，将残渣滤掉，得到肉桂水提取物50ml，所得浓度为0.2g/ml。

肉桂水提取物的理化性质

肉桂水提取物是一种含有肉桂醇、肉桂酸、肉桂醛、丁香酚等多种有机化合物的混合物，外观为黄色澄明液体，pH为4.6，微酸，有特殊香味，味道清淡略甜。

HPLC图谱

本发明肉桂水提取物的HPLC图谱如图1所示。

本实施例所用的色谱条件为：

色谱仪：Agilent 1100高效液相色谱系统；

色谱柱：C18Zorbax extend(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相为水和甲醇的梯度混合：第0-5分钟，0%甲醇；第5-20分钟，0-100%甲醇；第20-25分钟，100%甲醇；第25-26分钟，100-0%甲醇；

进样量：5μl

柱温：25℃；

检测波长：270nm；

流速:0.5ml/分钟。

实施例2肉桂-乙醇/水(10:90，v/v)提取物的制备

如实施例1的工艺流程制备肉桂乙醇提取物，区别在于将双蒸水换为乙醇/水(10:90，v/v)的混合溶剂体系，抽提温度为40℃。干燥后的提取物为微黄的粉末，溶于水后得到黄色澄明的液体，pH为4.3。

以下实施例中使用了实施例1中制备的肉桂水提取物(以CE表示)。实验中分别将1μl、3μl、6μl实施例1的提取物加入24孔细胞培养板中，细胞培养液为1ml，所得浓度分别为0.2mg/ml、0.6mg/ml、1.2mg/ml。

实施例3.肉桂水提取物对3T3-L1细胞向脂肪细胞分化的诱导

将3T3-L1细胞接种在24孔板中，培养2天后用DM(10μg/ml胰岛素、1μM地塞米松、0.5mM环腺甘酸抑制剂)诱导分化，同时加入不同浓度的CE(0.2mg/ml、0.6mg/ml)。5天后用油红染色，并在显微镜下观察。观察结果如图2所示。

结果表明CE能显著促进3T3-L1细胞向脂肪细胞分化。由于PPARγ是脂肪细胞分化的充分和必要条件，推测CE有可能刺激了PPARγ的表达。

实施例4.CE诱导的由3T3-L1细胞分化的脂肪细胞中的基因表达

将3T3-L1细胞接种在24孔板中，培养2天后用DM诱导分化，同时加CE0.6mg/ml。第5天收集细胞，提取RNA，反转录成cDNA，进行实时定量PCR，检测PPARα、PPARγ以及它们的靶基因ap2、CD36、FAS、ACO、LPL和GLUT4，结果如图3A所示。还检测了PPARγ的蛋白水平，结果如图3B所示。

结果显示CE显著促进了以上基因的表达，且提高了PPARγ的蛋白水平。

实施例5.CE对用含PPARα、PPARγ报告基因质粒转染的293T细胞基因表达的影响

用含有PPARα、PPARγ报告基因的质粒转染293T细胞。24小时后加入CE(0.2mg/ml、0.6mg/ml)刺激24小时，收集细胞用酶标仪检测报告基因的活性。结果如图4所示。A为转染全长的PPARγ的报告基因活性图；B为转染配体结合域的PPARγ的报告基因活性图；C为转染全长的PPARα的报告基因活性图；D为转染配体结合域的PPARα的报告基因活性图。

结果表明CE显著增加了PPARα、PPARγ的报告基因的活性，证明CE是PPARα、PPARγ的双重激动剂。

实施例6.CE对由3T3-L1细胞分化成的脂肪细胞葡萄糖吸收及AKT磷酸化的影响

在由3T3-L1细胞分化成的脂肪细胞中加入不同浓度的CE(0.2mg/ml、0.6mg/ml、1.2mg/ml)或CE(0.2mg/ml)与100nM胰岛素的组合，进行葡萄糖吸收实验，以100nM的胰岛素作为阳性对照。结果如图5所示。

结果显示CE单独作用于脂肪细胞能促进葡萄糖吸收，且该作用呈浓度依赖性。CE和胰岛素同时作用于脂肪细胞时，对细胞吸收葡萄糖的作用超过了胰岛素单独作用与CE单独作用的效果，并超过两者效果的加合，证实了CE与胰岛素有协同作用。进一步检测了AKT的磷酸化，结果如图6所示。

结果表明CE能增强AKT的磷酸化，从而引起GLUT4的上膜对葡萄糖吸收的增加，由此起到降血糖的作用。

综上所述，本发明的肉桂提取物不仅可以通过激动PPARγ来增加对胰岛素的敏感性，还可以直接磷酸化AKT从而导致GLUT4的上膜来增加对葡萄糖的吸收，并能与胰岛素协同增加周围组织对葡萄糖的吸收，由此体现出肉桂水抽提物降糖机制的多样性。

实施例7.C57BL/6J小鼠实验

高脂饮食肥胖和糖尿病模型小鼠的建立

将20只C57BL/6J小鼠随机分成4组，每组5只，一组以普通饲料饲养，其余三组以高脂饲料饲养。饲养5个月后的体重和血糖浓度比较如表3所示。

表3：高脂饲料饲养组与普通饲料饲养组小鼠的体重及血糖比较

(饲养5个月后)

NF：普通饲料；HF：高脂饲料；^*P<0.05；^**P<0.01

结果显示，饲养5个月后，高脂饲料饲养的小鼠比普通饲料饲养的小鼠体重增加了1.5倍，并且有明显的胰岛素抵抗，可用以模拟高脂饮食导致的肥胖和糖尿病。

21天强饲实验

用200mg/kg的CE每天1次对小鼠进行灌胃，连续3周。以10mg/kg罗格列酮(rosiglitazone)为阳性对照，双蒸水作为阴性对照。分别测定强饲药物对小鼠体重、食物摄入以及脂肪/体重(BW)的影响，结果如表4所示。

表4：21天强饲对C57BL/6J小鼠体重(BW)、食物摄入(FI)以及脂肪/体重的影响

NF对照：普通饲料喂养小鼠的对照

HF对照：高脂饲料喂养小鼠的对照

表5：21天强饲对C57BL/6J小鼠空腹血清指标的影响

^*P<0.05；^**P<0.01

已有文献表明罗格列酮具有明显的肝毒性。而本实验的结果则显示：CE改善了小鼠血脂代谢，显著降低血清FFA、LDL-c、AST、ALT，证实了CE不仅能显著改善血脂，还能改善肝功能。

由图7A和图7B可以看出CE明显改善了胰岛素抵抗，其效果甚至超过了阳性对照组罗格列酮。

综上所述，本发明的CE相对于罗格列酮，具有副作用低、效果好的优势。

实施例8.db/db小鼠实验

本实施例中采用了db/db小鼠，这是一种基因缺陷鼠。11周至13周的db/db鼠的血糖和体重有显著的增加，可用来模拟遗传引起的糖尿病。

将15只db/db小鼠分成3组，每组5只。用200mg/kg的CE每天1次对小鼠进行灌胃，连续2周。将10mg/kg罗格列酮作为阳性对照，双蒸水作为阴性对照。在第15天将db/db鼠禁食6小时后进行GTT，腹腔注射2g/kg葡萄糖，在0、15、30、60、120、240分钟时测定血糖。然后心脏采血，取血清测FFA、TG、TCHO、HDL-c、LDL-c。实验结果如表6所示。

表6：15天强饲对db/db小鼠空腹血清指标的影响

^*P<0.05；^**P<0.01

结果表明在db/db小鼠模型中CE还能显著降低血清FFA、LDL，明显改善了脂代谢。

图8显示CE不仅显著降低了db/db鼠的空腹血糖(图8A)，而且明显改善了胰岛素抵抗(图8B)。

以上结果进一步证实了本发明的治疗效果，不仅对饮食导致的肥胖，糖尿病有显著疗效，而且对遗传导致的糖尿病也有显著效果。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (8)

1.肉桂提取物在制备PPARα和PPARγ双重激动剂中的用途，其中所述肉桂提取物是通过包括以下步骤的制备方法制备的：

a)将肉桂原料与水性溶剂混匀，其中所述水性溶剂为水；

b)抽提由步骤a)所得的混合物；

c)分离去除残渣，得到肉桂提取物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肉桂原料与所述水性溶剂的混合比例为1-20g肉桂原料:50-200ml溶剂。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述肉桂原料与所述水性溶剂的混合比例为5-15g肉桂原料:80-150ml溶剂。

4.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述肉桂原料与所述水性溶剂的混合比例为10g肉桂原料:100ml溶剂。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肉桂提取物中含有肉桂醇、肉桂酸、肉桂醛、丁香酚，其水溶液为黄色澄明液体，pH为4.0-5.0。

6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述激动剂中还包含可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肉桂提取物的含量为所述激动剂总重量的1-99%。

8.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述激动剂进一步用于制备用于治疗或预防糖尿病和/或高血脂症的药物或保健品。

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