CN102076222B - 包含碳水化合物和含色氨酸的肽的组合物 - Google Patents

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Abstract

包含富含色氨酸的肽的可食用组合物，所述可食用组合物还包含可快速利用的葡萄糖组合物和可缓慢利用的葡萄糖组合物。

Description

包含碳水化合物和含色氨酸的肽的组合物
发明领域
本发明涉及一种配制物，所述配制物包含含有色氨酸的肽以及可快速利用的葡萄糖和可缓慢利用的葡萄糖(即“快”和“慢”碳水化合物)。
发明背景
近期有多种报道认为，色氨酸被脑吸收时，对人的行为、心境、脑功能、脑发育的若干方面具有益处。此类报道的例子是WO 99/55174、WO00/42868、WO 2005/023017。
色氨酸是存在于许多蛋白质例如乳清蛋白中的一种氨基酸，动物蛋白也含有色氨酸。色氨酸可以在摄入含有色氨酸的蛋白质后被吸收进血中以及从血吸收进脑。然而，色氨酸不是被吸收的唯一氨基酸，事实上，当摄入平均动物蛋白组合物(average animal protein composition)时，由于其他氨基酸的竞争性吸收，被脑吸收的色氨酸水平低至通常不能观察到可归因于色氨酸的显著效应。因此，上文引用的大部分报道使用富含色氨酸的蛋白质或蛋白质级分，或者使用游离氨基酸色氨酸(后者任选地与其他游离氨基酸和/或蛋白质组合)。
色氨酸作为游离氨基酸的用途具有下述缺点：许多国家的食品立法限制在食品中使用作为游离氨基酸的色氨酸。
富含色氨酸的蛋白质对色氨酸水平及其与大的中性氨基酸的比例具有天然的限制，这与脑对色氨酸的吸收相关。
最近的观点是，富含色氨酸的肽可以是在脑中为期望的效应得到足够色氨酸的良好来源，并且与游离色氨酸相比其可以更容易地应用于食品中。优选地，富含色氨酸的此类肽中下述氨基酸含量低，所述氨基酸是被认为吸收进入脑的竞争较高的氨基酸：所谓的大的中性氨基酸(LargeNeutral Amino Acid，LNAA)，它们是：亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸(取决于LNAA的定义，也可以使用甲硫氨酸)。因此，优选地，提供含有高水平色氨酸并具有高色氨酸/LNAA比例的肽制剂。在本发明的上下文中，甲硫氨酸被认为不具有任何有益的代谢效应，因此就本发明的目的而言不被认为是LNAA之一。
EP 661004公开了包含与例如糊精组合的色氨酸的动物饲料。所述组合物用于在动物胃口较差的高环境温度下维持生长和体重增加。
WO 2004/112803公开了通过提供下述组合物来控制月经前期综合征症状的方法，所述组合物含有具有高色氨酸/LNAA比例的蛋白质与可快速消化的碳水化合物的组合。
WO 2006/130587公开了通过对受试者施用具有最小蛋白质含量的富含碳水化合物的组合物或含有色氨酸或富含色氨酸的蛋白质或肽的富含碳水化合物的组合物，来治疗季节性情感消沉(winter blues)、季节性情感障碍(seasonal affective disorder，SAD)和抑郁症；和与之相关的嗜食碳水化合物(carbohydrate craving)、体重增加和心境症状的方法。
在US2003039739中描述了适用于对胃酸过多症(gastrichyperacidity)或胃食管反流(gastroesophageal reflux)易感的个体的减轻体重的方法和组合物。所述组合物部分包括具有两种或更多可快速消化的碳水化合物的小吃，其中食品或食品与水的水性混合物具有等于或大于约6的pH，其中所述小吃基本不含蛋白质。本发明的实验/测试计划在每次进餐和小吃时差异分配蛋白质和碳水化合物的量，以确保在午饭和晚饭进餐后，血浆色氨酸与循环的大的中性氨基酸的比例不减少，从而消耗富含碳水化合物的小吃后所述比例会被显著提高。
在WO02/46210中描述了提高乳清蛋白水解产物中色氨酸水平的方法。在使用的方法中，首先在酸性pH下用一种或多种酸性蛋白酶来水解乳清，优选地用胃蛋白酶、凝乳酶(rennin)、酸性真菌蛋白酶、凝乳酶(chymosin)、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶(chymopapain)或无花果酶(ficin)。优选的孵育条件在pH 1.5和3.5之间，其被选择以用于产生具有疏水性质的肽。水解有意地以下述方式进行，所述方式使得色氨酸残基被并入大的疏水肽中。由于色氨酸存在于相对较大的肽中的事实，进入血的色氨酸吸收会被妨碍，从而限制了所述制剂作为食物或饮料成分的应用可能性，尤其是与其他蛋白质组合时。使用此类大肽的另一缺点是，此类肽可引起变应原性反应。对乳清蛋白的此类反应是公知的。
WO 2008/052995涉及含有色氨酸的肽，其还可含有碳水化合物。
胰岛素可选择性促进多种组织对LNAA的吸收，从而使得更多色氨酸能够被脑吸收利用，因为LNAA与色氨酸竞争被脑吸收。因此，可观的血浆胰岛素水平可能有益于期望的色氨酸对脑的效应。此类期望的效应与脑功能、机警、睡眠、心境、注意力集中和相关问题的领域相关。可快速消化的碳水化合物与含色氨酸的组合物一起存在可促进高血清胰岛素水平，但是这可导致例如摄入后约2小时的血糖降低和/或不能将可观的血糖水平维持例如约3-4小时以使脑具有最大的色氨酸益处和/或一般和相关领域中最适的脑功能、机警、睡眠、心境、注意力集中、认知。
发明内容
因此对下述组合物存在需要，所述组合物以允许在脑中良好吸收的形式提供色氨酸，来自工业上可广泛获得的来源，具有高色氨酸/LNAA比例、低变应原性，并且可以在可对脑功能、机警、睡眠、心境、注意力集中、认知和相关领域之一个或多个有益的(例如用于人，例如儿童的)配制物中使用。
目前这已通过包含至少两种不同的水溶性含色氨酸的肽(或肽组合物)的配制物(至少部分地)实现，并且其中所述配制物的色氨酸/LNAA比例至少为0.15，优选地在0.15和1.8之间，所述配制物还包含可快速利用的葡萄糖(RAG)组合物和可缓慢利用的葡萄糖(SAG)组合物，其中RAG组合物和SAG组合物以下述干重比例存在于可食用的组合物中：RAG组合物∶SAG组合物在1∶0.5和1∶4之间，优选地在1∶0.8和1∶3之间，更优选地在1∶1和1∶3之间。这些范围被认为对色氨酸吸收以及脑功能二者均有益，并且超过数小时。
优选地，在根据本发明的配制物中，含色氨酸的肽∶RAG组合物的重量比在1∶2和1∶20之间，优选地在1∶3和1∶15之间，更优选地在1∶3和1∶8之间。这些范围被认为对色氨酸吸收以及脑功能二者均有益，并且超过数小时。
本发明中还优选地，根据本发明的配制物包含占即时消耗制品(readyto consume product)0.5％到5％(优选地0.8％到3％)干重的含色氨酸的肽组合物，这允许容易地配制具有可接受的体积和色氨酸浓度的可消耗的制品例如饮品。
本发明的另一实施方案是包含至少两种选自二肽或三肽的不同肽的配制物，其中选自二肽或三肽的两种肽各自以所述二肽和三肽总量的至少5mol％的量存在，其中总色氨酸中多于30mol％作为与肽结合的色氨酸存在，与肽结合的色氨酸中优选地多于40mol％、更优选地多于50mol％、进一步更优选地多于60mol％、仍然更优选地多于70mol％和最优选地多于80mol％以二肽或三肽的形式存在，优选地所述配制物具有多于0.15、优选地在0.15和1.8之间的色氨酸/LNAA比例，所述配制物还包含可快速利用的葡萄糖(RAG)组合物和可缓慢利用的葡萄糖(SAG)组合物，其中所述RAG组合物和SAG组合物以下述干重比例存在于配制物中：RAG组合物∶SAG组合物在1∶0.5和1∶4之间，优选地在1∶0.8和1∶3之间，更优选地在1∶1和1∶3之间。在上文中，还可优选地，含色氨酸的肽∶RAG组合物的(干)重量百分比在1∶2和1∶20之间，优选地在1∶3和1∶15之间，更优选地在1∶3和1∶8之间。这些用量和范围被认为对色氨酸吸收以及脑功能二者均有益，并且超过数小时。
可快速利用的葡萄糖(RAG)组合物和可缓慢利用的葡萄糖(SAG)组合物在“发明详述”中定义。
本发明中还优选地，根据本发明的配制物包含占即时消耗制品干重的0.5％到5％(优选地0.8％到3％)的含色氨酸的肽组合物。
在根据本发明的配制物中，含色氨酸的肽组合物优选地包含能够通过用于生产下述组合物的方法获得的含色氨酸的肽，所述组合物包含水溶性含色氨酸的肽、优选地至少两种水溶性含色氨酸的肽，并优选地具有多于0.15、优选地在0.15和1.8之间的色氨酸/LNAA比例，所述方法包括：水解溶菌酶，优选地水解鸡卵溶菌酶，以制备具有5和45之间水解程度(DH)的水解产物，并任选地去除部分含精氨酸或赖氨酸的肽。优选地，用于本发明配制物中的此类含色氨酸的肽包含AW或GNW，更优选地包含AW和GNW。所述水解产物优选地具有10和40之间的DH。这些量和范围被认为对色氨酸吸收和脑功能二者均有益，并且超过数小时。
在根据本发明的配制物中，含色氨酸的肽组合物优选地是包含至少两种不同的水溶性肽的组合物形式，并且其中所述组合物的色氨酸/LNAA比例至少为0.15，优选地在0.15和1.8之间。优选地，所述含色氨酸的肽组合物包含AW或GNW，优选地AW和GNW，最优选地AW和GNW并且其中AW与GNW的摩尔比例在1∶2到10∶1之间，优选地在1∶2和5∶1之间。因此，在本发明的配制物中，含色氨酸的肽组合物优选地是富含色氨酸的水溶性肽的组合物。有利地，在本发明的配制物中，含色氨酸的肽组合物优选地包含至少两种不同的二肽或三肽，其中选自二肽或三肽的两种肽以％二肽和三肽总量的至少5mol的量存在，并且在含色氨酸的肽组合物中，与肽结合的色氨酸中多于30mol％，优选地多于40mol％，更优选地多于50mol％，进一步更优选地多于60mol％，仍然更优选地多于70mol％和最优选地多于80mol％以二肽或三肽的形式存在，优选地所述含色氨酸肽组合物具有多于0.15，优选地在0.15和1.8之间的色氨酸/LNAA比例。与肽结合的色氨酸表示作为肽中氨基酸存在的色氨酸。这些量和范围被认为对色氨酸吸收和脑功能二者均有益，并且超过数小时。
优选地在根据本发明的配制物中使用的含色氨酸的肽组合物优选地是溶菌酶水解产物或经纯化的溶菌酶水解产物。优选地，所述溶菌酶水解产物特别富含精氨酸残基。精氨酸不属于大的中性氨基酸(LNAA)类，但其胰岛素刺激作用是已知的。已发现本文公开的水解产物能够产生体内高血浆色氨酸/LNAA比例。发现在血浆中检测的色氨酸/LNAA比例高于水解产物的色氨酸/LNAA比例。本文所述的含色氨酸的肽组合物的又一个优点是含色氨酸的肽非常小，使得甚至与具有较不利的色氨酸/LNAA比例的富含蛋白质的制品组合时，水解产物仍可立即产生高血浆色氨酸/LNAA比例。这使得这类含色氨酸的肽组合物良好地适用于本发明的配制物。本发明配制物中使用的含色氨酸的肽组合物可还包含游离的色氨酸。优选地，含色氨酸的肽组合物的水解产物不含有多于1wt％(以干物质计)的游离色氨酸。
发明详述
关于可缓慢利用的葡萄糖(SAG)：这表示很可能在小肠中被完全消化的碳水化合物，但是比例如葡萄糖或蔗糖的速率更慢，导致维持更久时间的更低的血糖水平。另一方面，可快速利用的葡萄糖(RAG)是被快速水解的碳水化合物，其导致仅被维持相对短时间的高血糖浓度。
Englyst等(Englyst KN，Englyst HN，Hudson GJ，Cole TJ，Cummings JH.Rapidly available glucose in foods：an in vitro measurement that reflects theglycaemic response.American Journal of Clinical Nutrition(1999)69：448-54.)使用与体内葡萄糖曲线显著相关的体外测试。RAG和SAG的体外测量能够预测在人研究中测量的血糖应答(glycaemic response)。Englyst等通过在20分钟后被水解为葡萄糖的碳水化合物的量(称作G20)来定义体外情况下的RAG。还在120分钟后测量被水解的量(称作G120)。在这120分钟期间被水解的量被认为可以在小肠中被吸收。在120分钟后被水解的任何量被认为不能被吸收，并且被认为是有抗性的。在20和120分钟之间被水解的碳水化合物的量(即G120-G20)被定义为SAG。就本发明的目的而言，RAG和SAG在本文中按照与Englyst等所定义的相同方式来理解。
下文更详细地描述了Englyst等用于测量RAG和SAG级分的体外技术(本文中RAG和SAG的定义依赖的)，所述技术基于在标准条件下通过HPLC来测量用消化酶进行定时孵育期间从测试食物释放的葡萄糖。
材料RAG/SAG测定
使用的聚乙烯管(50ml)来自Falcon(Oxford，英国)。玻璃珠(直径1.5cm)来自Magnet Wholesale(Halesworth，英国)。摇动水浴为Grant Instruments Ltd model SS-40-2(Cambridge，英国)。所述水浴装有夹子，将50-mL管精确地保持水平，完全浸入水中，使每个管的长轴沿移动方向。HPLC系统来自Dionex(UK)Ltd，(Camberley，英国)并且在下文中详细描述。除非另有说明，试剂来自Sigma(Poole，英国)或Merck(Poole，英国)。
内标溶液为水中含50％饱和苯甲酸的40g阿拉伯糖/L。糖混合物储液为水中含50％饱和苯甲酸的50g葡萄糖/L和25g果糖/L。使用前在五氧化二磷上于减压下将糖干燥至恒重。
使用的酶是来自Sigma的胃蛋白酶(产品目录号P-7000；StLouis)，来自Novo Nordisk(AMG 400L型LP；Bagsvaerd，丹麦)的淀粉葡糖苷酶，来自Sigma的胰酶(产品目录号P-7545)和来自Merck的转化酶(产品目录号390203D)。使用当天制备酶混合物。对18个样品而言，向6个离心管的每一个中称重3.0g胰酶，并向每个管中添加磁性搅拌棒和20mL水。通过振荡混合悬浮胰酶，然后用磁性搅拌棒混合10分钟。将管在1500x g下搅拌10分钟；从每个管(总计90mL)中取出15mL浑浊的上清液放入烧瓶中，添加4mL淀粉葡糖苷酶和6mL转化酶并充分混合。
RAG、SAG、总葡萄糖和淀粉级分的体外测量
将食物样品(含＜0.6g的碳水化合物)称重至最接近的毫克数，放进50-mL聚丙烯离心管中。添加内标溶液(5mL 40g阿拉伯糖/L)和10mL新鲜制备的胃蛋白酶瓜尔胶溶液(0.05mol HCl/L中5g胃蛋白酶/L和5g瓜尔胶/L)。盖上管并振荡混合内容物，在37℃的水浴中放置30分钟，使胃蛋白酶水解蛋白质。向每个管中添加5毫升0.5mol乙酸钠/L(平衡至37℃)，形成pH 5.2的缓冲液。添加5个玻璃珠，盖上管并轻柔摇动使内容物分散，然后置于37℃水浴中平衡数分钟。在摇动的水浴中，玻璃珠发挥在主要孵育期间机械破碎样品物理结构的功能。瓜尔胶使得粘度标准化，保持样品为悬浮液，防止样品沉降和被玻璃珠过度破碎。
从37℃水浴中取出一个样品管，添加5mL酶混合物。将管立刻盖上，并通过倒置轻柔地混合内容物，之后在37℃摇动的水浴中使其保持水平。此时开始水浴的摇动作用，此时被采用为孵育的零时间，并且不中断，直至收集到G120部分(见下文)。以1分钟的间隔向样品管的剩余物中添加酶混合物，以帮助孵育的调速(timing)，并将其置于摇动的水浴中。精确地在添加酶20分钟后从水浴中取出每个管，将0.2mL内容物添加至4mL无水乙醇中并振荡混合以终止水解；这是G20部分。取样后立即将管放回摇动的水浴中。再过100分钟(孵育120-分钟)后，将另外0.2mL添加至4mL无水乙醇中并振荡混合；这是G120部分。
在分析的每批样品中包含马铃薯淀粉和白小麦粉作为参照材料，2个试剂空白(各含有4mL糖混合物储液)被包括在内，以校准酶制剂的糖含量。用马铃薯淀粉、白小麦粉和玉米薄片参照材料校准水解条件。(参照材料和酶可得自Englyst Carbohydrate Services Ltd，英国)。马铃薯淀粉(晾干的，来自Kartoffelmel Centralen，Heming，丹麦)具有高抗性淀粉含量，并被用于确定摇动水浴的最适速度。如果马铃薯淀粉的G120值过高，则降低摆动速度，反之亦然。
糖的HPLC测量
使用两种糖标准进行校准。标准1为1mL糖混合物储液，标准2为10mL糖混合物储液，各自用水制成20mL，向其中添加5mL内标溶液并充分混合；然后取出0.2mL该混合物，并添加至含4mL无水乙醇的管中。
在HPLC分析之前，在室温下1500x g下将所有乙醇级分离心5分钟。为了分析糖标准和G20与G120部分采取的量为70μL。将样品置于HPLC管中，添加1mL去离子水，然后振荡混合。
使用自动注射器(型号AS3500；Dionex)注射20μL经稀释的乙醇级分。通过使用梯度泵(型号GP40；Dionex)，用阴离子交换分析柱(Carbopac PA100；Dionex)和保护柱(Carbopac PA10；Dionex)实现糖分离。使用柱切换(Column switching)和阴离子交换保护柱(Aminotrap；Dionex)防止氨基酸和肽到达分析柱。对洗脱液、高纯度水和200mol NaOH/L(16mL 50％NaOH溶液/L高纯度经脱气的水)脱气。流速为0.8mL/分钟，下表展示了洗脱条件：
糖HPLC测量的洗脱条件顺序
  切换位置1   NaOH   时间
Figure BPA00001281224100091
使用以下的脉冲电势(E)和持续时间(t)，用电化学检测器(ED40型；Dionex)实现单糖检测：E1，0.05V；t1，400ms；E2，0.75V；t2，200ms；E3，0.15V；和t3，400ms。应答时间为1秒，检测器的输出被设置为300nA。使用数据操作系统(DX-500；Dionex)整合和绘制结果。
如下根据测量的G20和G120值计算RAG和SAG值：
RAG＝G20
SAG＝G120-G20
根据本发明的配制物中，优选的可缓慢利用的葡萄糖(SAG)组合物包含以下之一种或多种：数均分子量在1000和45000道尔顿(优选地5000-40000道尔顿)之间的支链淀粉(pullulan)、异麦芽酮糖(isomaltulose)、海藻糖和/或其混合物。异麦芽酮糖作为可缓慢利用的葡萄糖来源而言是优选的，因为它们是可商业获得的来源。
根据本发明的配制物中优选的可快速利用的葡萄糖(RAG)组合物包含以下之一种或多种：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖糊精、淀粉、淀粉水解产物、右旋糖(dextrose)和/或其混合物，因为这些是食品应用中公知的并且容易加工。
在根据本发明的配制物中，当其为即时消耗的最终配制物时，为了例如易于配制和终产物的品质(例如不会过甜)，优选地，可快速获得的葡萄糖和可缓慢获得的葡萄糖一起的总量为及时消耗的总配制物的5％到20％(以重量计)，优选地7％到15％。
本发明还涉及即时饮用的液体(ready-to-drink liquid)形式的制品，其包含按重量计1％-20％的根据本发明的配制物，这使得易于配制可消耗的制品例如饮品，所述制品具有可接受的体积和色氨酸浓度。
优选地，本发明的配制物中的肽包含AW或GNW，优选地包含AW和GNW。在此种情况下，AW与GNW的摩尔比优选地在1∶2和10∶1之间，更优选地在1∶2和5∶1之间。这些比例被认为对色氨酸吸收和脑功能二者均有益，并且超过数小时。
在根据本发明的配制物中，优选地能够通过水解溶菌酶(优选地鸡卵溶菌酶)获得含色氨酸的肽。
在又一个实施方案中，本发明涉及包含根据本发明的配制物的食物、宠物食物、饲料、饮品、膳食补充剂或营养药物组合物。
本发明的含色氨酸的肽部分的细节及其制造方法还公开于WO2008/052995中。
优选地用于本发明配制物中的含色氨酸的肽组合物提供了包含以肽形式存在的色氨酸的组合物，所述组合物非常适用于在非常短的时间间隔内给予血浆中色氨酸/LNAA比例的有效提高。含色氨酸的二肽和三肽有利地有助于这一提高。在本发明配制物中含色氨酸的肽组合物的一个实施方案中，在工业工艺中酶促(预)水解溶菌酶，优选地鸡卵溶菌酶，即优选地以水解产物的形式提供(鸡卵)溶菌酶。以水解产物形式提供时，含色氨酸的肽的胃肠道吸收被大幅促进。在另一实施方案中，对用于本发明配制物的含色氨酸的肽组合物而言，鸡卵溶菌酶被转化成下述水解产物，其中包含带正电的精氨酸和赖氨酸残基的肽水平被降低。后一水解产物的一个特征是分子的色氨酸/LNAA比例高于0.15。在包含优选的含色氨酸的肽组合物的本发明RTD配制物的又一个实施方案中，鸡卵溶菌酶被转化成包含下述肽的群(peptide population)的水解产物，所述肽的群中存在的多于50％、优选地多于60％、更优选地多于75％的肽具有低于500Da的分子量。这样的前提是水解产物中存在的肽的分子量分布分析如本申请的材料和方法章节中所述进行。关于优选的(至少0.15的)色氨酸/LNAA比例：水解产物的氨基酸分析如本申请的材料和方法章节中所述进行。
“蛋白质”或“多肽”在本文中被定义为包含多于30个氨基酸残基的链。
“肽”或“寡肽”在本文中被定义为通过肽键连接的至少两个(优选地2到30个)氨基酸的链。术语“肽”和“寡肽”被认为是同义的(如通常所认为的那样)，且每种术语可根据上下文的需要交换使用。
“水溶性”肽是在5.0的pH下可溶于水的肽。
本文中所有(寡)肽和多肽式根据通常的实践从左到右以氨基端到羧基端的方向书写。本文中使用的氨基酸的单字母密码是本领域通常已知的，并可见于Sambrook，et al.(Molecular Cloning：A Laboratory Manual，2nded.Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY，1989)中。
蛋白质水解产物、水解产物或经水解的蛋白质表示通过蛋白质的酶水解形成的产物，富集的水解产物是下述蛋白质水解产物级分，其例如富含选定的肽，或其中肽或多肽已从水解产物中被去除。因此，富集的水解产物优选地是肽的混合物(或肽混合物)。因此，本发明中使用的肽混合物是至少两种，优选地至少三种，更优选地至少四种含色氨酸的肽的混合物。更优选地，混合物包含肽的群，所述群的多于50％、优选地甚至多于60％、最优选地多于75％的存在的肽具有低于500Da的分子量。含色氨酸的肽表示包含至少一个L-色氨酸氨基酸残基的肽。色氨酸/LNAA比例表示色氨酸相对于其它大的中性氨基酸(LNAA；即酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸的总和)水平的摩尔比例。除了血浆色氨酸/LNAA比例外，色氨酸/LNAA比例仅涉及与肽结合的氨基酸。因此，游离的色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸不被考虑进色氨酸/LNAA比例中。
与肽结合的氨基酸是属于肽部分的氨基酸，并且不是游离的氨基酸。
Tyr/LNAA比例表示酪氨酸相对于支链氨基酸(BCAA；即亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸的总和)水平的摩尔比例。优选地，Tyr/BCAA比例高于0.1，优选地高于0.12。
本发明配制物中优选地使用的含色氨酸的肽组合物可以通过本文公开的方法生产，具有以蛋白质色氨酸为基础多于30％的色氨酸产率，并产生包含色氨酸的水溶性肽组合物。色氨酸残基的较大部分包含在二肽和三肽中这一事实暗示立即吸收进血流中。本发明配制物中优选地使用的含色氨酸的肽组合物也可以产生比实际的水解产物的色氨酸/LNAA比例更高的血浆色氨酸/LNAA比例。最后，在本发明的配制物中优选地使用的含色氨酸的肽组合物还有抗原性非常低的特征。
在本发明的配制物中优选地使用的含色氨酸的肽组合物中，鸡卵溶菌酶被优选地用作便利的底物，用于提供具有高色氨酸/LNAA比例的制剂。溶菌酶以3-4％的浓度存在于卵白中。通过利用其格外高的等电点，使用简单的阳离子色谱纯化步骤将其从卵白中工业分离。得到的产物几乎是纯的，并且该工业可获得的产物具有7.8％的分子色氨酸含量和至少0.15的分子色氨酸/LNAA比例。因此，纯溶菌酶具有比纯α-乳白蛋白和/或β-乳白蛋白更高的色氨酸/LNAA比例。因此，用于优选地在本发明配制物中使用的含色氨酸的肽组合物的溶菌酶水解产物(以及优选地用于配制物中的含色氨酸的肽组合物自身)优选地具有高于0.15的摩尔色氨酸/LNAA比例，更优选地色氨酸/LNAA比例高于0.20，进一步更优选地色氨酸/LNAA比例高于0.23，仍然更优选地色氨酸/LNAA比例高于0.25，最优选地色氨酸/LNAA比例高于0.30。通常，摩尔色氨酸/LNAA比例低于3.0。同样，这类溶菌酶代表了含色氨酸的肽或组合物的优选的起点。溶菌酶(EC3.2.1.17)是能够水解细菌细胞壁中特异肽聚糖键，导致细胞裂解的酶。这些比例被认为对色氨酸吸收和脑功能二者均有益，并且超过数小时仍然能够达到。
如果被掺入以例如乳制品为代表的含高蛋白质的食物基质中，优选地用于本发明配制物中含色氨酸的肽组合物的水解产物也是有效的。这是非常惊人的，因为含蛋白质的食物基质表现出高LNAA负荷，并因此可被期望为降低具有高色氨酸/LNAA比例制品的作用。对这种预料之外的现象的一种可能的解释是：通常的食物制品掺入了完整的而不是充分水解的蛋白质。优选的含色氨酸肽组合物中掺入色氨酸和酪氨酸的肽中的大部分具有低于500Da的分子量。考虑到色氨酸(MW＝186)和酪氨酸(MW＝163)的非常高的分子量和只存在非常低水平的游离色氨酸，意味着这些肽中大部分应该是三肽或二肽。
通过一种优选的方式，溶菌酶，优选地鸡卵溶菌酶在工业过程中被酶(预)水解，即(鸡卵)溶菌酶优选地以水解产物或富集的水解产物形式提供。以这类(富集的)水解产物形势提供时，极大地便利了含色氨酸的肽的肠吸收。在本申请的另一实施方案中，鸡卵溶菌酶被转化为包含色氨酸的水解产物或富集的水解产物，其包含下述肽的群，其中存在的肽中多于50％、优选地多于60％、更优选地多于75％的具有低于500Da的分子量。优选地，这类(富集的)水解产物不含有多于1wt％(以干物质计)的游离色氨酸。存在于水解产物中包含色氨酸的肽的分子量分析如材料和方法章节中所述进行。
还可优选地，对优选地在本发明的配制物中使用的含色氨酸的肽组合物而言，(鸡卵)溶菌酶水解产物被分级分离，从而提高水解产物级分的色氨酸含量。该级分或富集的水解产物与分级分离前的水解产物相比优选地具有提高的色氨酸/LNAA比例。水解产物或具有额外的游离色氨酸的经富集的水解产物的富集，这也形成了本发明的部分。在制备这类经富集的水解产物的一个优选的选项中，利用了下述观察结果：溶菌酶掺入罕见大量的碱性精氨酸和赖氨酸残基。惊人地，作为选择的酶孵育条件(即选择具有正确切割偏好的内切蛋白酶如枯草杆菌蛋白酶，与产生高粱二肽和三肽的孵育条件组合，所述二肽和三肽掺入色氨酸但是几乎没有精氨酸或赖氨酸残基)的结果，能够生产根据本发明的富集的溶菌酶水解产物。因此，掺入精氨酸或赖氨酸残基的含LNAA的肽能够从不具有这类碱性残基的含色氨酸的肽中分离。例如，通过将水解产物的pH调节至4和6之间、更优选地5.0和5.5之间的数值，不具有这类碱性残基的肽会不带电荷，并因而具有降低的亲水性。这些特征可例如在色谱或其它分离过程中使用，以选择性地去除大部分含精氨酸或赖氨酸的肽。因此，含色氨酸的肽的含量被显著提高，并任选地提高了该富集的水解产物的色氨酸/LNAA比例。可通过已知的技术，如离子色谱、疏水作用色谱或电渗析，来去除带电的掺入精氨酸或赖氨酸的肽。在相关肽的层析分离中使用这类特征的实践背景可见于a.o.the Protein Purification Handbook(issued by AmershamPharmacia Biotech，nowadays GE Healthcare Bio-Sciences，Diegem，Belgium)。在朝向下述制剂的进一步更先进的纯化途径中，有利地使用溶菌酶中带有酸性侧基的氨基酸如谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)残基的存在，所述制剂将高色氨酸含量与高色氨酸/LNAA比例结合。在该途径中，根据本发明的溶菌酶水解产物的pH首先被调节至3.0，然后在阳离子树脂上进行色谱。在该pH值下，掺入Glu或Asp的肽会通过柱，其它肽则会结合。随后用pH 5缓冲液的洗脱会解吸附如所述的不含赖氨酸或精氨酸残基的所有结合的肽。大部分含有色氨酸的肽会在经解吸附的该级分中。然后通过用具有甚至更高pH值的缓冲液洗脱，从柱上去除剩余的结合肽。
尽管对于优选地在本发明的配制物中使用的含色氨酸的肽组合物的制备而言，优选地使用离子交换色谱和/或疏水作用色谱，但是也可使用其它合适的色谱分离方法，包括亲和色谱和尺寸排除色谱。可通过本领域已知的方法完成从得到的水性级分中回收富含色氨酸的肽。为了获得浓缩的和保质期稳定的产物，回收优选地包括蒸发和(喷雾)干燥步骤。另外，之后是蒸发/沉淀步骤的纳米过滤和涉及有机溶剂的萃取过程代表了对期望的纯化的选项。优选地通过蒸发溶剂进行从有机溶剂中回收富含色氨酸的肽。
尽管事实上溶菌酶在生理条件(即在酸性pH下使用胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶作为蛋白酶)下显示高度抵抗蛋白水解，但是在这类较不优良的酸性条件下也可获得优选地在本发明的配制物中使用的溶菌酶水解产物。然而，在这类条件下需要相对苛刻的孵育条件，例如高得多的酶浓度、更高的温度和任选地额外的内切蛋白酶。发现通过在碱性pH下用枯草杆菌蛋白酶孵育溶菌酶获得的溶菌酶水解产物尤其富含Ala-Trp(AW)二肽。
在根据本发明的组合物中，含色氨酸的肽组合物优选地包含色氨酸与LNAA的(重量)比例至少为0.1、优选地至少为0.15、更优选地为0.15-1.8的肽组合物，并且优选地通过下述方法获得，所述方法包括：水解溶菌酶(更优选地鸡卵溶菌酶)，以制备DH在5和45之间的水解产物，以及任选地去除部分含精氨酸或赖氨酸的肽。其中，含色氨酸的肽组合物优选地包含AW或GNW，优选地包含AW和GNW(其中所述AW与GNW的摩尔比例优选地在1∶2和10∶1之间，更优选地在1∶2和5∶1之间)，并且所述组合物还包含可快速利用的葡萄糖(RAG)组合物(优选地包含数均分子量在1000和45000道尔顿(优选地5000-40000道尔顿)之间的支链淀粉、异麦芽酮糖、海藻糖和/或其混合物之一种或多种，最优选地包含异麦芽酮糖)和可缓慢利用的葡萄糖(SAG)组合物(优选地包含葡萄糖、蔗糖、麦芽糖糊精、淀粉、淀粉水解产物、右旋糖和/或其混合物之一种或多种)，其中RAG组合物和SAG组合物以下述干重比例存在于组合物中：RAG组合物∶SAG组合物在1∶0.5和1∶4之间，优选地在1∶0.8和1∶3之间，更优选地在1∶1和1∶3之间，任选地含色氨酸的肽∶RAG组合物的重量比也在1∶2和1∶20之间，优选地在1∶3和1∶15之间，更优选地在1∶3和1∶8之间。本文中，当配制物为即时消耗时，优选可快速利用的葡萄糖和可缓慢利用的葡萄糖一起的总量为即时消耗的总配制物的5％到20％(按重量计)，优选地为7％到15％。本发明中还优选地，根据本发明的配制物包含以即时消耗的制品为基础0.5％到5％(优选地0.8％到3％)干重的含色氨酸的肽组合物。这些量、比例和范围被认为对色氨酸吸收和脑功能二者有益，并且超过数小时仍然能够达到。
在根据本发明的配制物中，可优选地，含色氨酸的肽制剂包含选自二肽或三肽的至少两种不同的肽，其中选自二肽或三肽的两种肽每种以二肽和三肽总量的至少5mol％的量存在，并且其中总色氨酸的多于30mol％作为与肽结合的色氨酸存在，与肽结合的色氨酸中优选地多于40mol％、更优选地多于50mol％、甚至更优选地多于60mol％、仍然更优选地多于70mol％和最优选地多于80mol％以二肽或三肽的形式存在，优选地所述配制物具有多于0.15的、优选地在0.15和1.8之间的色氨酸/LNAA比例，所述配制物还包含可快速利用的葡萄糖(RAG)组合物(优选地包含数均分子量在1000和45000道尔顿(优选地5000-40000道尔顿)之间的支链淀粉、异麦芽酮糖、海藻糖和/或其混合物之一种或多种，最优选地包含异麦芽酮糖)和可缓慢利用的葡萄糖(SAG)组合物(优选地包含葡萄糖、蔗糖、麦芽糖糊精、淀粉、淀粉水解产物、右旋糖和/或其混合物之一种或多种)，其中所述RAG组合物和SAG组合物以下述干重比例存在于所述配制物中：RAG组合物∶SAG组合物在1∶0.5和1∶4之间，优选地在1∶0.8和1∶3之间，更优选地在1∶1和1∶3之间，任选地，所述含色氨酸的肽∶RAG组合物的重量比也在1∶2和1∶20之间，优选地在1∶3和1∶15之间，更优选地在1∶3和1∶8之间。本文中，当所述配制物用于即时消耗时，优选地，可快速利用的葡萄糖和可缓慢利用的葡萄糖一起的总量为即时消耗的总配制物的5％到20％(按重量计)，优选地为7％到15％。本发明中还优选地，根据本发明的配制物包含以即时消耗的制品为基础0.5％到5％(优选地0.8％到3％)干重的含色氨酸的肽组合物。这些量、比例和范围被认为对色氨酸吸收和脑功能二者有益，并且超过数小时仍然能够达到。
本发明还涉及一种配制物，其中优选地，其包含以即时消耗制品为基础0.5％到5％(优选地0.8％到3％)干重的含色氨酸的肽组合物。
本发明还涉及包含本文公开的配制物的食物、宠物食物、饲料、膳食补充剂或营养药物组合物。这类制品可以例如是即时饮用的液体形式。这类制品可典型地包含按重量计1％-20％、更优选地2％-15％的本发明(即包含肽、RAG和SAG)的配制物。
材料和方法
材料
商品名为“Protex 6L”的枯草杆菌蛋白酶得自Genencor(Leiden，荷兰)，胃蛋白酶来自Sigma且胰蛋白酶/糜蛋白酶(Porcine PEM)来自Novozymes(Bagsvaerd，丹麦)。溶菌酶作为Delvozyme L(22％干物质)从DSM Food Specialities(Delft，荷兰)获得。
SDS-PAGE
通过SDS-PAGE检查使用的溶菌酶制剂的纯度。用于SDS-PAGE和染色的所有材料均购自Invitrogen(Carlsbad，CA，US)。使用SDS缓冲液根据制造商的说明制备样品，并使用MES-SDS缓冲体系根据制造商的说明在12％Bis-Tris凝胶上分离。使用Simply Blue Safe Stain(CollodialCoomassie G250)进行染色。水解前，溶菌酶在凝胶上作为具有约14kDa分子量的单一条带出现。
LC/MS/MS分析
使用HPLC测定通过本发明的工艺生产的酶蛋白质水解产物中含色氨酸的肽(主要是二肽或三肽)的存在，所述HPLC使用与P4000泵(Thermo Electron，Breda，荷兰)偶联的离子阱质谱仪(Thermo Electron，Breda，荷兰)。使用Inertsil 3 ODS 3，3μm，150*2.1mm柱(VarianBelgium，Belgium)，与Milli Q水(Millipore，Bedford，MA，USA)中0.1％甲酸(溶液A)和乙腈中0.1％甲酸(溶液B)的梯度组合用于洗脱，来分离形成的肽。所述梯度从100％溶液A开始，保持10分钟，在25分钟内线性化提高至20％B，立即进入起始条件，并保持15分钟用于稳定。使用的注射体积为50微升，流速为每分钟200微升，柱温度维持在55℃。注射的样品的蛋白质浓度约为50微克/毫升。以滞留时间、质子化的分子为基础，并通过使用对感兴趣的肽专用的MS/MS，使用约30％的最适碰撞能量，鉴定感兴趣的肽。
通过使用外标法进行含色氨酸的特异肽的定量。
使用四肽VVPP(M＝410.2)调节MS模式中的最优灵敏度和MS/MS模式中的最优断裂(fragmentation)，进行5μg/ml的恒量输注，得到MS模式中的质子化分子和MS/MS模式中约30％的最优碰撞能量，产生B-离子和Y-离子系列。
在LC/MS/MS之前，在室温和13000rpm下将酶蛋白质水解产物离心10分钟，并用滤经Millipore水过滤装置的去矿物质水(MilliQ水)以1∶100稀释上清液。
水解程度
使用快速OPA测试(Nielsen，P.M.；Petersen，D.；Dambmann，C.Improved method for determining food protein degree of hydrolysis.Journal ofFood Science 2001，66，642-646)，监测用多种水解混合物孵育期间获得的水解程度(DH)。
克氏定氮(Kjeldahl Nitrogen)
通过流动注射分析(Flow Injection Analysis)测量总克氏氮。使用Tecator FIASTAR 5000流动注射体系，在590nm处定量从含蛋白质的溶液中释放的氨，所述体系装备有TKN Method Cassette 5000-040、具有SOFIA软件的Pentium 4计算机和Tecator 5027自动采样器。将对应于本发明动态范围(0.5-20mg N/l)的样品量与95-97％硫酸和Kjeltab一起置于消化管中，并进行200℃下30分钟随后360℃下90分钟的消化程序。注射进FIASTAR 5000体系中后，测量氮峰，从中可推理出被测量的蛋白质量。
水解产物中存在的肽和蛋白质的分子量分布
在自动HPLC体系上完成经蛋白酶处理的蛋白质样品的肽大小分布分析，所述体系装备有高压泵、能够注射10-100微升样品的注射设备，和能够在214nm监测柱流出物的UV检测器。
用于该分析的柱是用20mM磷酸钠/250mM氯化钠pH 7.0缓冲液平衡的Superdex Peptide HR 10/300GL(Amersham)。注射样品(典型地为50微升)后，在90分钟内以.5ml/min的流速用缓冲液从柱中洗脱多种组分。使用细胞色素C(Mw 13 500Da)、抑肽酶(Mw 6510Da)和四甘氨酸(Mw 246Da)的混合物作为分子量标记物校准该体系。
以下的实施例进一步阐述本发明。
实施例
实施例1
使用Protex水解溶菌酶并鉴定形成的肽。
使用NaOH将含10％(w/w)纯溶菌酶的溶液调节至pH 8.2，并加热至52℃。通过添加25微升Protex/g存在的蛋白质，开始水解。在连续的搅拌下和将pH维持于8.2时，将水解持续5.5小时，得到没有可见沉淀物的几乎澄清的溶液。在用于失活Protex活性的加热步骤后，取样用于DH分析。溶液的DH显示为约30％。在10kDa滤器上超滤经热处理的溶液，得到完全澄清的液体。该澄清液体被用于LC/MS分析，用于存在的肽和蛋白质的分子量分布分析，以及用于离子交换色谱。
为了得到存在的肽和蛋白质的分子量分布的印象，按照材料和方法章节中所述对澄清的液体进行分子量分析。获得的结果清楚地表明几乎所有掺入带有芳香族侧链的氨基酸(即色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸)的肽具有低于500kDa的分子量。考虑到这些氨基酸的高分子量，意味着大部分这些小肽是三肽或二肽。
根据材料和方法章节中所述步骤进行LC/MS分析。通过选择这些含有色氨酸(“W”)的肽，可以检测肽AW、GNW、WIR、NAW、WVA、VAW、AWR、SLGNW和小量WW和SRWW。孵育后水解产物中游离色氨酸的水平被确立为代表少于1％的存在的总(溶菌酶)色氨酸。
因为二肽和三肽容易被肠壁中存在的肽运载体吸收，所以在口服摄入本发明的溶菌酶水解产物后，这类肽中存在的色氨酸残基会被快速吸收并导致提高的血浆色氨酸水平几乎是没有疑问的。
实施例2
提高水解产物的色氨酸含量。
溶菌酶掺入了惊人的大量碱性精氨酸和赖氨酸残基。另外，溶菌酶分子掺入了显著量的酸性谷氨酸和天冬氨酸残基。该数据已被用于设计朝向具有高色氨酸/LNAA比例的水解产物的创新和优良的纯化途径。然而，该纯化途径的关键需求是，在还含有精氨酸或赖氨酸残基或谷氨酸或天冬氨酸残基任一的肽中，仅出现非常少的色氨酸残基。如实施例1中所示，本文使用的特异水解途径仅产生很少的含有精氨酸残基的含色氨酸的肽，并且不产生含有赖氨酸、谷氨酸或天冬氨酸残基的肽。
理论预测，在pH 3左右能够达到含和不含谷氨酸或天冬氨酸残基的肽之间的最大电荷差异。在pH 5左右能够达到含和不含精氨酸或赖氨酸残基的肽之间的最大电荷差异。
为了阐述该途径的选择能力，根据实施例1中说明的步骤制备溶菌酶水解产物。然后使用乙酸将水解产物的pH调节至pH 3.1，并将约0.5克蛋白质应用在用20mm柠檬酸钠pH 3.1平衡的SP Sepharose FF(GEHealthcare，Diegem，Belgium)柱的15ml柱床体积上。用一倍柱体积的柠檬酸钠缓冲液洗涤柱，去除掺有谷氨酸或天冬氨酸的大部分肽后，将洗脱缓冲液变更为20mm柠檬酸钠缓冲液pH 5.1。用三倍体积的后一缓冲液洗涤柱时，洗脱了一系列含有色氨酸的肽。根据LC/MS分析，二肽AW以及三肽GNW、NAW、WVA、VAW大量存在，并存在小量戊肽SLGNW。多种pH 5.1级分的氨基酸分析显示，选择性合并(selective pooling)产生具有1.75的分子色氨酸/LNAA比例的溶液和约30％的色氨酸产率。更少选择性的合并产生具有0.4的分子比例的溶液和70％的色氨酸产率。随后，用三倍体积的20mM柠檬酸钠pH 7.1洗涤柱。根据LC/MS数据，该步骤洗脱了含精氨酸的肽WIR、AWIR并惊人地洗脱了肽WW。用1MNaOH、水和1M乙酸最后洗涤柱制备了用于下一轮的柱。
实施例3
大规模溶菌酶水解。
在更大规模的溶菌酶水解步骤中，基本上遵循实施例1中所述的步骤，但有一些较小的改动。将含7.3％(w/w)纯溶菌酶的溶液加热至65℃，然后使用NaOH将pH调节至pH 8.2。通过添加25微升Protex 6L/g干物质开始水解。在连续搅拌下和将pH维持于8.2并将温度维持于53℃时，将水解持续2小时。然后将pH值提高至9.0并将孵育再继续3.5小时，得到含有一些沉淀物的溶液。然后将溶液的pH降低至4.5，并将溶液冷却至低于4℃。为了获得完全澄清的产物，将液体滤过Z 2000滤器(Pall)，随后通过纳米过滤去除过量的水和盐。然后在120℃对得到的浓缩物进行UHT处理7秒，蒸发并最终干燥，获得干燥形式的溶菌酶水解产物。由此获得的产物具有约0.19的摩尔色氨酸/LNAA比例。
实施例4
根据实施例3所述制备包含具有色氨酸的肽的肽组合物。获得的产物是具有约83％的肽水平、约5.5％的与肽结合的色氨酸含量，和具有约0.19的TRP/LNAA比例的水性液体。所述产物具有浅黄色粉末外观，并且在1％溶于水中后给出pH约为4.3的溶液。
使用上述肽制剂能够制备如下表1(水性基质中成分的干重％，其余物质可以是水)中所示组成的饮品。制备这些组合物的方法可以是：
-在水中制备所有成分的预混物，
-将其搅拌10分钟，需要时调节pH至搅拌结束，
-任选地通过高压匀化器匀化。
表1.
  实施例4a   实施例4b
  含有色氨酸的肽制剂(wt.％)   1.14   1.14
  脱脂奶粉(％)   2.1   2.1
  角叉菜胶(wt.％)   0.02   0.02
  麦芽糖糊精(wt.％)   1.0   1.0
  蔗糖(wt.％)   4.6   4.6
  异麦芽酮糖(wt.％)   6   10

Claims (29)

1.包含至少第一水溶性含色氨酸的肽和第二水溶性含色氨酸的肽的配制物，其中所述第一含色氨酸的肽是二肽或三肽，所述第二含色氨酸的肽是二肽或三肽；并且其中所述配制物的色氨酸/大的中性氨基酸(LNAA)比例至少为0.15，其中，所述大的中性氨基酸是亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸，所述配制物还包含可快速利用的葡萄糖(RAG)组合物和可缓慢利用的葡萄糖(SAG)组合物，所述可快速利用的葡萄糖(RAG)组合物包含以下之一种或多种：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖糊精、淀粉、淀粉水解产物、右旋糖和/或其混合物；所述可缓慢利用的葡萄糖(SAG)组合物包含以下之一种或多种：数均分子量在1000和45000道尔顿之间的普鲁兰多糖、异麦芽酮糖、海藻糖和/或其混合物；其中所述RAG组合物和所述SAG组合物以下述干重比例存在于所述配制物中：RAG组合物∶SAG组合物介于1∶0.5和1∶4之间。
2.根据权利要求1的配制物，其中所述含色氨酸的肽∶RAG组合物的重量比介于1∶2和1∶20之间。
3.根据权利要求1的配制物，其包含肽AW和/或GNW。
4.根据权利要求3的配制物，其中AW与GNW的比例介于1∶2到10∶1之间。
5.包含选自二肽或三肽的至少两种不同肽的配制物，其中选自二肽或三肽的两种肽每种以二肽和三肽的总量的至少5mol％的量存在，并且其中总色氨酸中多于30mol％作为与肽结合的色氨酸存在，与肽结合的色氨酸中多于40mol％以二肽或三肽的形式存在，所述配制物具有多于0.15的色氨酸/大的中性氨基酸(LNAA)比例，其中，所述大的中性氨基酸是亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸，所述配制物还包含可快速利用的葡萄糖(RAG)组合物和可缓慢利用的葡萄糖(SAG)组合物，所述可快速利用的葡萄糖(RAG)组合物包含以下之一种或多种：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖糊精、淀粉、淀粉水解产物、右旋糖和/或其混合物，所述可缓慢利用的葡萄糖(SAG)组合物包含以下之一种或多种：数均分子量在1000和45000道尔顿之间的普鲁兰多糖、异麦芽酮糖、海藻糖和/或其混合物，其中所述RAG组合物和SAG组合物以下述干重比例存在于所述配制物中：RAG组合物∶SAG组合物介于1∶0.5和1∶4之间。
6.根据权利要求5的配制物，其中所述含色氨酸的肽∶RAG组合物的重量比介于1∶2和1∶20之间。
7.根据权利要求1到6中任一项所述的配制物，其中所述含色氨酸的肽能够通过水解溶菌酶而获得。
8.根据权利要求7所述的配制物，其中所述含色氨酸的肽能够通过水解鸡卵溶菌酶而获得。
9.根据权利要求1到6中任一项所述的配制物，其中，所述配制物是即时消耗的，并且其中可快速利用的葡萄糖组合物和可缓慢利用的葡萄糖组合物一起的总量为即时消耗的总配制物的5％到20％(按重量计)。
10.根据权利要求9所述的配制物，其中，所述配制物是即时消耗的，并且其中可快速利用的葡萄糖组合物和可缓慢利用的葡萄糖组合物一起的总量为即时消耗的总配制物的7％到15％(按重量计)。
11.根据权利要求1到6中任一项的配制物，其中，所述配制物包含以即时消耗的制品为基础0.5％到5％干重的含色氨酸的肽组合物。
12.包含根据权利要求1到11中任一项所述的配制物的食物。
13.根据权利要求12所述的食物，其为即时饮用的液体形式。
14.根据权利要求12或13所述的食物，其包含按重量计1％-20％的、根据权利要求1到11中任一项所述的配制物。
15.包含根据权利要求1到11中任一项所述的配制物的宠物食物。
16.根据权利要求15所述的宠物食物，其为即时饮用的液体形式。
17.根据权利要求15或16所述的宠物食物，其包含按重量计1％-20％的、根据权利要求1到11中任一项所述的配制物。
18.包含根据权利要求1到11中任一项所述的配制物的饲料。
19.根据权利要求18所述的饲料，其为即时饮用的液体形式。
20.根据权利要求18或19所述的饲料，其包含按重量计1％-20％的、根据权利要求1到11中任一项所述的配制物。
21.包含根据权利要求1到11中任一项所述的配制物的饮品。
22.根据权利要求21所述的饮品，其为即时饮用的液体形式。
23.根据权利要求21或22所述的饮品，其包含按重量计1％-20％的、根据权利要求1到11中任一项所述的配制物。
24.包含根据权利要求1到11中任一项所述的配制物的膳食补充剂。
25.根据权利要求24所述的膳食补充剂，其为即时饮用的液体形式。
26.根据权利要求24或25所述的膳食补充剂，其包含按重量计1％-20％的、根据权利要求1到11中任一项所述的配制物。
27.包含根据权利要求1到11中任一项所述的配制物的营养药物组合物。
28.根据权利要求27所述的营养药物组合物，其为即时饮用的液体形式。
29.根据权利要求27或28所述的营养药物组合物，其包含按重量计1％-20％的、根据权利要求1到11中任一项所述的配制物。
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