CN102068420A

CN102068420A - 2′,4′-二羟基-6′-甲氧基-3′,5′-二甲基查耳酮在制备治疗肝病药物中的应用

Info

Publication number: CN102068420A
Application number: CN2011100339892A
Authority: CN
Inventors: 卢艳花; 玉万国; 路越
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2011-01-31
Filing date: 2011-01-31
Publication date: 2011-05-25
Anticipated expiration: 2031-01-31
Also published as: CN102068420B

Abstract

本发明涉及一种2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮在制备保肝药物、食品或保健品中的用途。还涉及一种2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮在制备治疗或预防肝脏疾病及其并发症的药物、食品或保健品中的用途。通过本发明研究发现2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对体外肝细胞损伤具有明显的保护作用，可用于制备保肝药物、食品或保健品；对体内肝脏器官损伤具有明显的修复作用，可用于制备治疗或预防肝脏疾病及其并发症的药物、食品或保健品，为肝病患者带来福音，适于大规模推广应用。

Description

2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮在制备治疗肝病药物中的应用

技术领域

本发明涉及化合物用途技术领域，特别涉及查耳酮类化合物的用途技术领域，具体是指一种2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮在制备治疗肝病药物中的应用。

背景技术

我国是肝病高发区，肝炎病人占人口总数10％以上。目前临床常用的抗肝炎药大体可分为抗病毒药、免疫调节药和保肝药三类。目前，全国有1200万人患有慢性肝脏疾病，每年有30万人被肝病夺走生命。值得关注的是，近年来脂肪肝患病率出现上升态势，经B超检查，患病率竟高达30％以上。

肝病大多为慢性疾病，需要长期服药治疗。随着现代科学技术的不断发展，陆续有化学合成的新药问世，但由于肝病病理机制复杂，临床变化多样，且易产生药物的耐受性，进而形成药物失效及药物本身的毒副作用等负面影响。中药复方疗效确切，无明显的毒副作用，但疗程短疗效快且天然加工而成的中成药品种少。现今药物市场上缺少天然单体化合物制备而成的保肝护肝药物。

而2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮(2′，4′-dihydroxy-6′-methoxy-3′，5′-dimethylchalcone，DMC)，属于查耳酮类化合物，分子式为C₁₈H₁₈O₄，相对分子量为298，分子结构如下所示。现主要从药用植物水翁的花蕾中提取分离制备。

目前尚无2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮(2′，4′-dihydroxy-6′-methoxy-3′，5′-dimethylchalcone，DMC)用于保肝护肝方面的相关报道。

发明内容

本发明的目的是克服了上述现有技术中的缺点，提供一种2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮在制备治疗肝病药物中的应用，2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对体外肝细胞损伤具有明显的保护作用，可用于制备保肝药物、食品或保健品；对体内肝脏器官损伤具有明显的修复作用，可用于制备治疗或预防肝脏疾病及其并发症的药物、食品或保健品，为肝病患者带来福音，适于大规模推广应用。

为了实现上述目的，在本发明的第一方面，提供了一种2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮在制备保肝药物、食品或保健品中的用途。

在本发明的第二方面，提供了一种2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮在制备治疗或预防肝脏疾病及其并发症的药物、食品或保健品中的用途。其中肝脏疾病可以为肝损伤、肝炎、脂肪肝或肝硬化。

本发明的有益效果具体如下：

1、本发明通过研究发现2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对体外肝细胞损伤具有明显的保护作用，能够显著降低ALT值，可用于制备保肝药物、食品或保健品；

2、本发明通过研究发现2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对体内肝脏器官损伤具有明显的修复作用，能够显著降低ALT值和AST值，并能缓解小鼠狂躁等症状，

可用于制备治疗或预防肝脏疾病及其并发症的药物、食品或保健品，为肝病患者带来福音。

附图说明

图1是2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤病理改变的影响图，其中A：正常对照组；B：模型对照组；C：阳性对照组；D：DMC高剂量组；E：DMC中剂量组；F：DMC低剂量组。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明。

实施例1 2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对CCl4诱导的急性肝细胞损伤的保护作用实验

试剂和药物：

ALT(谷丙转氨酶)检测试剂盒，南京建成生物技术有限公司；

CCl4(上海凌峰化学试剂有限公司，分析纯)、联苯双酯(BDP)(江苏鹏鹞药业有限公司)、DMSO(上海化学试剂公司，分析纯)、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾均为分析纯；

DMC，即2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮，由实验室从水翁花提取分离得到，纯度＞98％(HPLC)。

实验方法与结果：

1.肝细胞分离培养

选取新生10g左右小鼠，禁食24h后，断头放血，无菌分离肝脏，称重，置于PBS液中，灌注冲洗肝脏至灰白色，将肝脏剪成1mm3左右的组织块，并用尼龙筛网碾磨，加入PBS液，1000r/min离心5min，去上清，加入10mL培养液，用滴管轻吹打成肝细胞悬液。

2.CCl4诱导肝细胞损伤模型的建立

取50μL上述肝细胞悬液接种于96孔板中，每个孔中加入30μL培养液，并加入不同浓度的CCl4(1～16mmol/L)，以DMSO助溶，控制DMSO的终浓度为0.1％(体积分数)，分别作用1h、2h、3h、4h，收集96孔板中培养的上清液检测ALT值。依据检测结果，制作CCl4诱导肝细胞损伤的量效和时效曲线。选择最优损伤浓度和损伤时间制备肝细胞的损伤模型，同时将溶媒设置为对照组，每组设置3个平行孔。

3.DMC对CCl4诱导肝细胞损伤的作用

取上述培养的肝细胞悬液，设置正常对照组、模型对照组、阳性对照组(联苯双酯BDP)、不同DMC给药剂量组，每组设置6个平行孔。模型组和给药组加入4mmol/L CCl4，同时向给药组中加入不同浓度的药物。37℃孵育3h，2000r/min冷冻离心5min，收集肝细胞培养上清液检测ALT活性。结果如下：

表1 DMC对CCl₄诱导的小鼠急性肝细胞损伤的保护作用(n＝10)

组别	剂量(μg/mL)	ALT(U/L)
			正常对照组	-	19.3±3.9
模型对照组	-	43.2±5.8^###
			阳性对照组	20	18.3±3.9^***
DMC高剂量组	40	19.3±4.2^**
			DMC中剂量组	20	28.5±6.3^**
DMC低剂量组	10	36.3±5.1^**

与正常对照组比较：###表示P＜0.001；

与模型对照组比较：**表示P＜0.01，***表示P＜0.001。

表1结果表明，体外CCl4诱导急性肝细胞损伤后，其上清ALT活性显著升高，而同时加入DMC的实验组，上清中ALT值与模型对照组相比较，不同给药剂量均出现降低上清ALT值的现象，高剂量组降低明显。说明2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对CCl4诱导的急性肝细胞损伤具有保护作用，因此，可用于肝脏保护。

实施例2 2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对体内对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用实验

试剂和药物：

ALT(谷丙转氨酶)检测试剂盒和AST(谷草转氨酶)检测试剂盒，购自南京建成生物技术有限公司；

CCl4(上海凌峰化学试剂有限公司，分析纯)、联苯双酯(BDP)(江苏鹏鹞药业有限公司)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)(上海三浦化工有限公司，分析纯)；花生油(金龙鱼牌初榨特级花生油)；

昆明种小鼠，体重(25±2)g，雌雄兼用，上海斯莱克实验动物有限公司。

实验方法与结果：

取60只昆明种小鼠，随机分成6组，每组雌雄各半，同性别的小鼠随机取。分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(联苯双酯BDP组)、DMC高剂量组、DMC中剂量组、DMC低剂量组。药品均使用0.8％的羧甲基纤维素钠制成混悬液，各给药组按0.1mL/10g/d剂量灌胃给药，正常对照组和模型对照组给以相同体积的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，每天灌胃一次，连续7天。末次给药2h后，正常对照组腹腔注射花生油0.1ml/10g，其余5组注射0.1％CCl4(溶剂为花生油)0.1ml/10g。禁食不禁水16h后，摘眼球取血，3500rpm离心分离15～20min，测定血清谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)和谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase，AST)活性，并取肝脏左叶同一部位，固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察形态学变化。

表2DMC对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用(

n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	ALT(U/L)	AST(U/L)
				正常对照组	-	35.4±7.8	58.8±7.6
模型对照组	-	75.7±10.0^###	153.1±22.6^###
				阳性对照组	9	42.8±7.5^***	74.2±14.6^***
高剂量组	15	40.9±7.7^***	68.2±8.0^***
				中剂量组	9	52.8±11.2^**	95.9±14.1^**
低剂量组	3	57.3±4.6^**	107.8±12.9^**

与正常对照组比较：^###表示P＜0.001；

与模型对照组比较：^**表示P＜0.01，^***表示P＜0.001。

表2结果表明，小鼠腹腔注射CCl4诱导急性肝损伤后，其血清ALT和AST活性显著升高，而小鼠预先给药DMC后，血清ALT和AST值与模型对照组相比较，不同给药剂量均出现降低血清ALT和AST值的现象，高剂量组降低明显，较阳性药物联苯双酯(BDP)略好。说明2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对CCl4诱导的急性肝损伤具有保护作用。

肝脏病理组织形态学检查结果见图1，正常对照组小鼠肝脏细胞结构正常，大小均匀，排列整齐，分界清楚，细胞核完整，间质连接紧密，未见病理性变化；模型对照组小鼠肝脏体积增大，细胞呈现灶状坏死和点状坏死，排列紊乱，细胞变形，细胞核萎缩扭曲，细胞间隔增大，出现明显的空洞；阳性对照组小鼠肝脏细胞出现明显的坏死细胞与新生细胞的分界线；DMC高剂量组小鼠肝脏细胞同样出现明显的坏死细胞与新生细胞的分界线，与阳性药物效果相同；DMC中剂量组和低剂量组小鼠肝脏细胞坏死程度均有不同程度的减轻。说明2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对体内肝脏器官损伤具有明显的修复作用，可用于治疗或预防肝脏疾病及其并发症。

从以上实施例可以看出，2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮在体内和体外实验中，均表现出良好的保肝护肝方面的效果，可用于制备保肝药物、食品或保健品；对体内肝脏器官损伤具有明显的修复作用，可用于制备治疗或预防肝脏疾病及其并发症的药物、食品或保健品，为肝病患者带来福音。

本发明涉及的2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮来源于天然药用植物水瓮的花蕾，属于纯天然来源，安全可靠、毒副作用小，对多种原因引起的肝损伤均具有保护作用，对因肝损伤出现的多种并发症均具有防治作用。

综上，本发明的2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮对体外肝细胞损伤具有明显的保护作用，可用于制备保肝药物、食品或保健品；对体内肝脏器官损伤具有明显的修复作用，可用于制备治疗或预防肝脏疾病及其并发症的药物、食品或保健品，为肝病患者带来福音，适于大规模推广应用。

在此说明书中，本发明已参照其特定的实施例作了描述。但是，很显然仍可以作出各种修改和变换而不背离本发明的精神和范围。因此，说明书和附图应被认为是说明性的而非限制性的。

Claims

1.2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮在制备保肝药物、食品或保健品中的用途。

2.2′，4′-二羟基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查耳酮在制备治疗或预防肝脏疾病及其并发症的药物、食品或保健品中的用途。