CN102066339A - 作为syk或jak蛋白激酶抑制剂的2,6-二氨基-嘧啶-5-基甲酰胺类化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式I-V化合物、其互变异构体或其药学上可接受的盐、酯和前药，它们为syk激酶抑制剂。本发明还涉及用于制备这种化合物的中间体、制备这些化合物的方法、含这些化合物的药用组合物、抑制syk激酶活性的方法、抑制血小板凝集的方法，以及预防或治疗至少部分由syk激酶活性介导的多种疾病，例如心血管疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病以及细胞增长性疾病的方法。在式(I)中，Y1选自：(a)和(b)；Z为O或S；D1选自：(a)被基团R5取代的苯基；(b)萘基；(c)C3-8环烷基；(d)杂芳基；(e)杂环基。

Description

作为SYK或JAK蛋白激酶抑制剂的2，6-二氨基-嘧啶-5-基甲酰胺类化合物
相关申请的交叉参考
本申请要求于2008年12月5日提交的美国临时专利申请号61/120,348、于2008年12月5日提交的美国临时专利申请号61/120,346、于2008年4月16日提交的美国临时专利申请号61/045,406和2008年4月16日提交的美国临时专利申请号61/045,499的权益，其全部内容引入本文作为参考。
技术领域
本发明涉及用作脾酪氨酸激酶(syk)和/或JAK激酶抑制剂的嘧啶-5-甲酰胺化合物。本发明还涉及含嘧啶-5-甲酰胺化合物的药用组合物，以及用该化合物或组合物治疗特征在于其它适应症的病症的方法。本发明还涉及制备本文中所述化合物的方法。
背景技术
蛋白激酶组成结构相关酶的大家族，这些酶负责调控细胞内多种信号转导过程(参见例如Hardie和Hanks，The Protein Kinase Facts Book，I and II，Academic Press，San Diego，Calif.，1995)。由于它们的结构和催化功能的保守性，蛋白激酶被认为是共有祖基因的进化产物。几乎所有激酶都含相似的250-300氨基酸催化域。可通过被它们磷酸化的底物将激酶划分为不同家族(例如蛋白-酪氨酸、蛋白-丝氨酸/苏氨酸、脂质等)。已鉴定出通常对应于这些家族中各家族的序列基元(参见例如Hanks & Hunter，(1995)，FASEB J.9：576-596；Knighton等，(1991)，Science 253：407-414；Hiles等，(1992)，Cell 70：419-429；Kunz等，(1993)，Cell 73：585-596；Garcia-Bustos等，(1994)，EMBO J.13：2352-2361)。
许多疾病与由蛋白激酶介导的事件触发的异常细胞反应有关。这些疾病包括自身免疫病、炎性疫病、骨病、代谢疾病、神经和神经变性疾病、癌症、心血管病、过敏、哮喘、早老性痴呆和激素相关疾病。因此，在药物化学领域，已对寻找用作治疗药物的蛋白激酶抑制剂做了大量工作。
免疫受体酪氨酸激活基元(ITAM)介导的信号为信号通路中与人类疾病有关的主要事件。ITAM介导的信号事件是使免疫细胞中传统免疫受体例如T细胞受体、B细胞受体、Fc受体和血小板中GPVI和FcγRIIa被引发的激活信号传递至下游细胞内分子例如syk和ZAP-70的关键因素(Underhill，D.M and Goodridge，H.S.，Trends Immunol.，28：66-73，2007)。
配体与含ITAM的受体结合触发信号事件，这导致从称为Src家族的非受体酪氨酸激酶家族中募集蛋白。这些激酶将ITAM序列中酪氨酸残基磷酸化，ITAM序列是与syk或ZAP-70上SH2域串联的区域。
Syk与Zap-70一起为蛋白酪氨酸激酶syk家族的一员。syk或ZAP-70与二磷酸化ITAM序列相互作用诱发激酶构象改变，该改变使激酶自身的酪氨酸磷酸化。磷酸化的Syk家族成员将众多下游信号通路蛋白激活，此类蛋白包含含有Src同源2(SH2)域的76kDa(SLP-76)的白细胞特异性磷蛋白、激活的T细胞(LAT)和PLC(磷酸酯酶C)γ2的接头。
归因于功能异常的ITAM介导的信号事件的人疾病包括自身免疫病，例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、溶血性贫血、免疫性血小板减少性紫癫、肝素引起的血小板减少症和动脉粥样硬化。有意义的是，据认为，通过抗体使Fc受体交联能够导致发生上述疾病中的很多疾病，所述抗体通过syk在肥大细胞、嗜碱性粒细胞和其它免疫细胞中激活信号级联，导致负责炎性反应的细胞介质释放。在依赖IgE刺激的过敏和炎性反应中，可通过抑制syk的酪氨酸激酶活性控制肥大细胞和嗜碱细胞中的介质释放和细胞因子产生(Rossi，A.B等，J Allergy Clin Immunol.，118：749-755，2006)。在免疫血小板减少症中，脾通过Fc受体/ITAM/syk介导的过程清除与血小板结合的抗体(Crow，A.R等，Blood，106：摘要2165，2005)。由肝素-血小板因子4免疫复合物造成的药物引起的血小板减少症还涉及受体参与(engagement)的syk信号事件下游，肝素-血小板因子4免疫复合物激活血小板FcγRIIa(Reilly，M.P.，Blood，98：2442-2447，2001)。
血小板激动剂诱导内向外(inside-out)整联蛋白信号，导致纤维蛋白原结合和血小板聚集。由此启动外向内(outside-in)信号，该信号进一步刺激血小板。syk在整联蛋白信号的两个期间均被激活，表明syk的抑制可以抑制血小板与固定化蛋白的粘着(Law，D.A等，Blood，93：2645-2652，1999)。由胶原引起的花生四烯酸和5-羟色胺释放以及syk缺乏小鼠的血小板中的血小板聚集显著抑制(Poole，A等，EMBO J.，16：2333-2341，1997)。因此，syk抑制剂也具有抗凝作用。
由于syk在Ig引起的血小板激活中所起的作用，所以，它可能在动脉粥样硬化和再狭窄中很重要。动脉粥样硬化是特征在于血管动脉壁增厚和硬化的一类疾病。尽管所有血管均对该严重变性疾病敏感，但服务于心脏的主动脉和冠状动脉通常受影响最大。因为动脉粥样硬化可增加心脏病发作、心肌梗塞、中风和主动脉瘤的风险，所以它具有深远的临床重要性。
对动脉粥样硬化的传统治疗包括用于将阻滞不很严重的血管再通的方法和用于将较重阻滞的冠脉搭桥术。血管内方法的严重缺点是，在大量的治疗个体中某些或所有治疗的血管发生再狭窄(即再缩窄)。例如，在10-50％的接受该方法的患者中出现PTCA后的动脉粥样硬化的冠状动脉再狭窄，随后需要再次血管成形术或冠状动脉分流移植。另外，植入支架后，在10-20％的接受该方法的患者中出现动脉粥样硬化的冠状动脉再狭窄，随后需要重复治疗，以维持适当血流通过受影响的动脉。再狭窄通常发生在治疗后的相对短暂时间期，例如约小于6个月。
虽然尚未测定到促进再狭窄的确切的激素和细胞过程，但据认为，再狭窄的原因部分源于气囊导管或其它血管内装置对血管壁造成的机械性损伤。例如，除打通阻塞的动脉外，PTCA过程还损伤冠状动脉平滑肌细胞(SMC)。作为对于该损伤的响应，粘连血小板、浸润巨噬细胞、白细胞或平滑肌细胞自身释放细胞衍生(cell-derived)的生长因子，例如血小板衍生生长因子(PDGF)，随后中膜SMC增殖并通过内弹性层迁移到血管内膜的区域。内膜SMC进一步增殖和增生，而最重要的是，在3-6月期间产生大量细胞外基质从而导致血管空间填充和收窄至足以显著阻塞血流。
syk除在Ig引起的血小板激活中起作用外，syk还在胶原介导的信号中起极重要的作用。负责血小板粘着和激活的主要粘连蛋白是胶原。胶原为包含在粉瘤的纤维变性罩内的丝状蛋白，在噬斑破裂期间，丝状蛋白暴露于血液。胶原最初通过与von Willebrand因子结合起作用，该因子通过与血小板膜GPIb结合束缚血小板。然后，胶原通过连结血小板上的两个胶原受体GPVI和整联蛋白α2β1起作用。
GPVI以与FcRγ的复合物形式存在于血小板膜中，与FcRγ复合是GPVI表达所需要的相互作用。激活血小板上的FcγRIIa导致血小板形状改变、分泌和血栓形成。通过FcRγ的ITAM域的酪氨酸磷酸化，然后募集syk，启动GPVI/FcRγ复合物发出信号。GPVI激活导致诱发多种血小板功能，它们包括：激活整联蛋白α2β1从而加固血小板粘着，激活能够介导血小板聚集和血栓生长的GP IIb-IIIa；分泌血小板，以使炎性蛋白例如CD40L、RANTES和TGFβ传递到血管壁；表达P-选择蛋白，以募集白细胞。因此，人们认为syk抑制剂可抑制由血小板粘连、激活和聚集介导的血栓形成事件。
据报道，通过刺激IgG抗体的受体FcγR而诱发的细胞内蛋白的酪氨酸磷酸化(激活)和由FcγR介导的吞噬在源自syk缺乏小鼠的巨噬细胞中均被显著抑制(Crowley，M.T.等，J.Exp.Med.，186：1027-1039，1997)。该结果说明，syk在FcγR介导的巨噬细胞吞噬中具有显著重要作用。
又据报道，syk的反义寡核苷酸能够抑制由GM-CSF诱发的对嗜酸性粒细胞的凋亡抑制(Yousefi，S.等，J.E.Med.，183：1407-1414，1996)，这说明syk对由GM-CSF等造成的嗜酸性粒细胞的生命延长信号至关重要。因为嗜酸性粒细胞的生命延长与过敏性疾病(例如哮喘)中疾病转变为慢性疾病紧密相关，所以syk抑制剂也可作为慢性嗜酸性炎症的治疗药物。
Syk对通过B细胞抗原受体来激活B细胞而言很重要，它涉及磷脂酰肌醇代谢和由抗原受体刺激造成的细胞内钙浓度增加(Hutchcroft，J E.等，J.Biol.Chem.，267：8613-8619，1992；和Takata，M.等，EMBO J.，13：1341-1349，1994)。因此，syk抑制剂可用于调节B细胞的功能，因此预计可用作与抗体相关的疾病的治疗药物。
Syk与T细胞抗原受体结合，通过受体交联而迅速经历酪氨酸磷酸化，对由Src酪氨酸激酶例如Lck介导的细胞内信号起协同作用(Couture，C.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，91：5301-5305，1994；和Couture，C.等，Mol.Cell.Biol.，14：5249-5258，1994)。syk存在于成熟T细胞群例如表皮内γδT细胞和原初αβT细胞，据报道，它可使TCR信号级联放大的若干组分磷酸化(Latour，S.等，Mol Cell Biol.，17：4434-4441，1997)。因此，syk抑制剂可用作抑制由T细胞抗原受体介导的细胞免疫的药物。
近期比较基因组杂交研究发现，syk是在套细胞淋巴瘤(MCL)的发病机理中起作用的另一种重要基因(Chen，R.等Journal of Clinical Oncology，2007 ASCO Annual Meeting Proceedings(Post-Meeting Edition).第25卷，No 18S(June 20 Supplement)，2007：8056)。MCL占所有非霍奇金淋巴瘤的5-10％，它是一种难以治疗的淋巴瘤形式。在具有3年存活率中值的B细胞淋巴瘤中，它的预后最差。据报道，Syk在MCL中过度表达(Rinaldi，A，等，Br.J.Haematol.，2006；132：303-316)，且Syk在滤泡细胞、套细胞、伯基特细胞和弥散性大B细胞非霍奇金淋巴瘤中介导mTOR(雷帕霉素的哺乳动物靶标)存活信号(Leseux，L.等，Blood，2006；108：4156-4162)。
若干条证据显示，多种B细胞淋巴瘤依赖于B细胞受体(BCR)介导的存活信号。通过SRC家族激酶，BCR信号诱发Igα和β免疫受体基于酪氨酸的激活基元的受体寡聚和磷酸化。ITAM磷酸化导致syk的募集和激活，从而启动下游事件并放大原始BCR信号。鉴于紧张性BCR信号在正常B细胞中的作用和体外非霍奇金淋巴瘤细胞系依赖于syk的存活(Chen，L.等，Blood，2006；108：3428-3433)，有人报道，对于某些B细胞淋巴瘤和慢性淋巴白血病(CLL)而言，抑制syk是有前途的合理的治疗靶标(Stefania Gobessi，Luca Laurenti，Pablo Longo，Laura Carsetti，Giuseppe Leone，Dimitar G.Efremov，慢性淋巴白血病B细胞中的蛋白酪氨酸激酶Syk的组成型激活(Constitutive activation of the protein tyrosine kinase Syk in Chronic Lymphocytic Leukemia B-cells)，Blood，2007，110，Abstract 1123)。近期发表的数据说明，在CLL患者中给予抑制syk的多激酶(multikinase)抑制剂可能具有显著临床活性(Friedberg JW等，Blood 2008；112(11)，摘要3)。
已有关于脾酪氨酸激酶(Syk)在多个不同环境中的致癌潜力的描述。据报道，在临床上，Syk在套细胞淋巴瘤中过度表达(Rinaldi，A等，Br.J.Haematol.，2006；132：303-316)，通过染色体易位(t(9；12)(q22；p12))产生的TEL-Syk融合蛋白(易位ETS白血病)导致Syk活性增加，且与骨髓增生异常综合征有关(Kuno，Y.等，Blood，2001；97：1050-1055)。在小鼠中，通过过继转移表达人TEL-Syk的骨髓细胞能够诱发白血病(Wossning，T.，JEM，2006；203：2829-2840)。另外，在小鼠初级骨髓细胞中，Syk的过度表达导致IL-7在培养基中独立生长(Wossning，T.等，JEM，2006；203：2829-2840)。
有意义的是，在人和小鼠中，B细胞发育和存活似乎需要Syk信号。B细胞受体(Lam，K.等，Cell，1997；90：1073-1083)或Igα(Kraus，M.等，Cell，2004；117：787-800)的诱发性损失(inducible loss)导致小鼠中外周B细胞损失。已知蛋白酪氨酸磷酸酶PTP-RO的过度表达能够负向调节Syk活性，这种表达在源自非霍奇金氏淋巴瘤的细胞系中抑制增殖并诱导凋亡(Chen，L.等，Blood，2006；108：3428-3433)。因此，B细胞淋巴瘤很少出现BCR表达缺失，抗个体遗传型疗法(idiotype therapy)很少导致耐药(Kuppers，R.Nat Rev Cancer，2005；5：251-262)。
抗原特异性B细胞受体(BCR)的参与(engagement)能够激活多个信号通路，这些通路最终调节细胞激活状态、促进存活和克隆扩充。BCR与免疫球蛋白超家族的两个其它成员Igα和Igβ的结合使得通过BCR发出信号成为可能，Igα和Igβ各自携有基于免疫-酪氨酸的激活基元(ITAM)(Jumaa，Hendriks等，Annu Rev Immunol 23：415-45(2005))。ITAM域被响应于BCR参与的Src家族激酶直接磷酸化。脾酪氨酸激酶(Syk)与ITAM对接并将其磷酸化，这是增强其激酶活性的过程，导致Syk自磷酸化以及多个下游底物的酪氨酸磷酸化(Rolli，Gallwitz等.Mol Cell 10(5)：1057-69(2002))。当表达新形成的前BCR时，该信号通路对处于从原B细胞开始到转变为前B细胞的发育阶段中的B细胞有活性。事实上，在敲除Syk的小鼠中，B细胞发育停止在原B细胞阶段(Cheng，Rowley等，1995；Turner，Mee等，Nature 378(6554)：303-6(1995))。在小鼠中，B细胞受体(Lam，Kuhn等，Cell 90(6)：1073-83(1997))或Igα(Kraus，Alimzhanov等.Cell 117(6)：787-800(2004))的诱发性损失导致外周B细胞损失。人B细胞的增殖和存活似乎也需要Syk。过度表达的蛋白酪氨酸磷酸酶PTP-RO为Syk活性的负性调节剂，它在源自非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的细胞系中抑制增殖并诱导凋亡(Chen，Juszczynski等，Blood 108(10)：3428-33(2006))。通过NHL系SUDHL-4中的siRNA敲除Syk导致细胞周期的G1/S转变阻断(Gururajan，Dasu等，J Immunol 178(1)：111-21(2007))。这些数据结合表明人和小鼠B细胞发育、增殖、甚至存活需要Syk信号。
相反，已经有关于Syk在多个不同环境中致癌潜力的描述。据报道，在临床上，Syk在套细胞淋巴瘤中过度表达(Rinaldi，Kwee等，Br J Haematol 132(3)：303-16(2006))，通过染色体易位(t(9；12)(q22；p12))产生的TEL-Syk融合蛋白(易位ETS白血病)导致Syk活性增加，且与骨髓增生异常综合征有关(Kuno，Abe等，Blood 97(4)：1050-5(2001))。在小鼠中，通过表达人TEL-Syk的骨髓细胞的过继转移能够诱发白血病(Wossning，Herzog等，J Exp Med 203(13)：2829-40(2006))。另外，在小鼠初级骨髓细胞中，Syk的过度表达导致IL-7在培养基中独立生长(Wossning，Herzog等，2006)。同样，据报道，Syk在滤泡细胞、套细胞、伯基特细胞和弥散性大B细胞NHL中介导mTOR(雷帕霉素的哺乳动物靶标)存活信号(Leseux，Hamdi等，Blood 108(13)：4156-62(2006))。其它近期研究也显示，依赖Syk的存活信号可能在B细胞恶性肿瘤中起作用，B细胞恶性肿瘤包括DLBCL、套细胞淋巴瘤和滤泡淋巴瘤(Gururajan，Jennings等，2006；Irish，Czerwinski等，J Immunol 176(10)：5715-9(2006))。鉴于紧张性BCR信号在正常B细胞中的作用和体外NHL细胞系依赖syk的存活，对于某些B细胞淋巴瘤的治疗而言，特异性抑制Syk是有前途的。
据近期报道，R406(Rigel Pharmaceuticals)能够抑制响应于各种刺激(包括FcεR1和BCR诱发的Syk激活)的ITAM信号(Braselmann，Taylor等，JPharmacol Exp Ther 319(3)：998-1008(2006))。有意义的是，Syk的该ATP竞争性抑制剂对Flt3、cKit和JAK激酶也有活性，但对Src激酶无活性(Braselmann，Taylor等，2006)。Flt3的激活突变与AML有关，对该激酶的抑制目前正在进行临床开发研究(Burnett and Knapper Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2007：429-34(2007))。酪氨酸激酶cKit的过度激活还与血液恶性肿瘤有关，为癌症治疗的靶标(Heinrich，Griffith等，Blood 96(3)：925-32(2000))。同样，JAK3信号与白血病和淋巴瘤有关，目前用作潜在治疗靶标(Heinrich，Griffith等，2000)。重要的是，R406的多激酶抑制活性能够减弱在淋巴瘤细胞系和原发人淋巴瘤样品中的BCR信号，导致前者凋亡(Chen，Monti等，Blood 111(4)：2230-7(2008))。另外，II期临床试验报道了该化合物在顽固性NHL和慢性淋巴细胞白血病中的有利结果(Friedberg JW等，Blood 2008；112(11)，摘要3)。尽管不清楚R406作用的精确机理，但数据显示，对在淋巴细胞中介导存活信号的激酶进行抑制在临床上有益。
另外一些近期研究还提示，依赖syk的存活信号可能在B细胞恶性肿瘤中起作用，B细胞恶性肿瘤包括DLBCL、套细胞淋巴瘤和滤泡淋巴瘤(参见例如S.Linfengshen等，Blood，Feb.2008；111：2230-2237；J.M.Irish等，Blood，2006；108：3135-3142；A.Renaldi等，Brit J.Haematology，2006；132：303-316；M.Guruoajan等，J.Immunol，2006；176：5715-5719；L.Laseux等，Blood，2006；108：4156-4162)。
关于取代的嘧啶二胺化合物的专利和专利申请包括：2003年1月31日提交的美国专利申请序列号10/355,543(US2004/0029902A1)、2003年1月31日提交的国际专利申请序列号PCT/US03/03022(WO 03/063794)、2003年7月29日提交的美国专利申请序列号10/631,029、国际专利申请序列号PCT/US03/24087(WO 04/014382)、2004年7月30日提交的美国专利申请序列号10/903,263和国际专利申请序列号PCT/US2004/24716(WO 05/016893)，以上公开引入本文作为参考。关于取代的嘧啶二胺化合物的论述还可参见国际专利申请公开号：WO 02/059110、WO 03/074515、WO 03/106416、WO 03/066601、WO 03/063794、WO 04/046118、WO 05/016894、WO 05/122294、WO 05/066156、WO 03/002542、WO 03/030909、WO 00/39101、WO 05/037800和美国专利公布号2003/0149064。
虽然在本领域中已经取得了进展，但本领域中仍存在对抑制syk激酶的化合物的需求，也存在对可从这种抑制中受益的患者中治疗疾病例如再狭窄、血栓和/或炎症的方法的需求。另外，还需要相对于其它激酶而言能够选择性抑制这些激酶中的一种的化合物。本发明满足了该需求和其它需求。
发明内容
本发明提供具有作为syk活性抑制剂(又称为“syk抑制剂”)、JAK激酶活性抑制剂(在本文中又称为“JAK抑制剂”)的新化合物；它们的制备和使用方法以及含所述化合物的药用组合物。此类化合物或其药学上可接受的盐具有以下结构(I)：
Figure BPA00001277505200091
其中D1、E1和Y1定义如下。
本发明还提供药用组合物，该组合物含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体和/或稀释剂。
本发明化合物具有多种治疗用途，通常而言，可用于在男人和妇女以及哺乳动物(在本文中又称为“患者”)中治疗多种至少部分由syk活性介导的病症。例如，此类病症包括但不限于与心血管疾病、炎性疾病或自身免疫疾病有关的那些病症。更具体地说，本发明化合物可以用于治疗疾病或病症，这些疾病或病症包括但不限于：再狭窄、血栓形成、炎症、肝素引起的血小板减少症、扩张型心肌炎、镰状细胞病、动脉粥样硬化症、心肌梗塞、血管炎、不稳定心绞痛、急性冠状动脉综合征、过敏、哮喘、类风湿性关节炎、B细胞介导的疾病例如非霍奇金氏淋巴瘤、抗磷脂综合征、红斑狼疮、银屑病、多发性硬化、晚期肾病、溶血性贫血、免疫血小板减少性紫癜和慢性淋巴细胞白血病。因此，在一个实施方案中公开方法，该方法包括通常以药用组合物的形式将有效量的式(I)化合物给予有需要的患者。
与心血管病相关的病症选自急性冠状动脉综合征、心肌梗塞、不稳定心绞痛、顽固性心绞痛、在血栓溶解治疗后或冠状动脉血管成形术后发生的闭塞性冠状动脉血栓形成、血栓形成介导的脑血管综合征、栓塞中风、血栓形成中风、一过性局部缺血发作、静脉血栓形成、深静脉血栓形成、肺栓塞、凝血病、弥散性血管内凝血、血栓形成性血小板减少性紫癜、血栓闭塞性脉管炎、与肝素引起的血小板减少症有关的血栓形成疾病、与体外循环有关的血栓形成并发症、与器械操作法例如心脏或其它血管内导管插入、主动脉内气囊泵、冠状动脉支架或人造心脏瓣膜有关的血栓形成并发症和需要安装假肢装置的病症。
本发明还提供抑制血液样品中的syk激酶活性的方法，该方法包括使所述样品与本发明化合物接触。
本发明还提供纯化形式的化合物和化学中间体。
通过参考以下详述和附图，本发明的这些和其它方面、目的和优点显而易见。为此，在本文中列出各种参考文献，它们更详细地描述了一些背景信息、方法、化合物和/或组合物，各自通过引用全文结合到本文中。
附图说明
图1显示Syk如何在细胞生物学和多种疾病中作为Fc受体介导的信号的关键介质。
图2显示如何对Syk进行基因靶向证明了Syk是动脉血小板生物学中的关键介质和治疗动脉血栓形成的选择性靶标。
图3显示本发明化合物的通用合成方法。
图4A、B和C提供说明本发明化合物及其syk IC50的表2A、B和C。
图5提供说明本发明化合物及其syk IC50的表3。
图6提供说明本发明化合物及其syk IC50的表4。
图7A和7B提供说明本发明化合物及其syk IC50的表5A和B。
图8显示在纯化激酶测定中发现选择性抑制Syk的一系列化合物。图8A)在300nM浓度中，筛选抗Millipore纯化激酶系列(用10μM ATP测试的270种激酶的化合物(实施例596和实施例87和P420-89)，以测定对Syk的效力和选择性。将数据描绘为在底部定义的热图(heat-map)。图8B)被3种化合物中任一化合物抑制的纯化激酶的抑制率＞80％的部分。实施例596仅抑制Syk和MLK1。50nM(大于其Syk IC50～10x)的实施例87化合物仅抑制Syk。P420-89抑制包括Syk、JAK2和JAK3在内的多种激酶。在热图的左边，报道各化合物对Syk的抑制IC50。在该热图内的各方框中给出激酶抑制百分率。
图9显示对非霍奇金氏淋巴瘤细胞系中Syk的选择性抑制。在标示浓度的Syk特异性抑制剂实施例596和实施例87化合物(图9A和图10B)或Syk/JAK双重抑制剂P420-89(图9C)的存在下，用抗BCR抗体刺激B细胞。然后，对全细胞溶胞物进行蛋白质印迹分析，以评价Syk激酶活性(pBLNKY84和总BLNK；上部两条凝胶)和Src激酶活性(pSyk Y352和总Syk；下部两条凝胶)。对每种溶胞物进行2-3次实验，柱状图代表pBLNK Y84的均值±S.D.。在这些图之上列出计算出的抑制Syk激酶的IC50。
图11显示在NHL细胞系中Syk特异性抑制与Syk/JAK双重抑制的对比。在所述各种浓度的各抑制剂的存在下，用抗BCR(图11A)或IL-4(图11B)刺激B细胞15min。然后，通过磷酸-流式细胞仪评价细胞中信号通路的抑制。图11A)代表在各种处理条件下经BCR刺激后Src活性(pSyk Y352 MFI)和Syk活性(pERK Y204 MFI)的柱状图(均值±S.D.，n＝3)。图11B)描绘在所述各种浓度的各抑制剂的存在下用IL-4刺激后pSTAT-6Y641MFI (均值±S.D.，n＝3)的柱状图。
图12显示Syk特异性抑制剂如何干扰NHL细胞系增殖和存活以及诱发NHL细胞系凋亡。已有关于依赖Syk的“BCR型”和不依赖Syk的“非BCR型”NHL细胞系的描述(Polo，Juszczynski等.Proc Natl Acad Sci USA 104(9)：3207-12(2007)。图12A)将细胞用1和3μM实施例87Syk特异性抑制剂处理72h。通过对活性半胱酸天冬氨酸酶3进行FACS分析测定凋亡；数据用柱状图表示。图12B)测试其它细胞系对Syk特异性抑制(实施例596和实施例87)和Syk/JAK(P420-89)双重抑制的相对敏感性。柱状图表示经各种条件处理后半胱酸天冬氨酸酶3阳性细胞百分率均值±S.D.(n＝3)。
图13显示选择性抑制Syk如何阻止BCR诱发小鼠初级B细胞激活。图13提供在NHL细胞系对Syk特异性抑制和Syk/JAK双重抑制的对比。在所述各种浓度的各抑制剂的存在下，用抗BCR刺激B细胞(图13C)15min。然后，通过磷酸-流细胞计量术评价细胞中信号事件通路的抑制。图13C)代表在各种处理条件下，经BCR刺激后，Src活性(pSyk Y352 MFI)和Syk活性(pERK Y204 MFI)的流式细胞计图(均值±S.D.，n＝3)。
图14显示在小鼠关节炎模型中特异性抑制Syk的效能。
图15显示小鼠模型中组织病理学如何确认Syk特异性抑制剂的临床分数。
图16显示小鼠关节炎模型中Syk/JAK抑制的剂量依赖型作用。
图17提供小鼠免疫血小板减少症模型。
图18显示Syk抑制如何在异种移植NHL细胞系的小鼠模型阻止NHL肿瘤形成。选择性Syk抑制剂实施例87阻止肿瘤形成。Syk抑制在异种移植小鼠中阻止NHL肿瘤形成。从肿瘤细胞接种日起，开始给予小鼠10、15或20mg/kg实施例87化合物或溶媒对照，每日两次。A)在接种4周后，测定用各处理条件处理后的肿瘤重量。在图中，以P值表示相对于溶媒对照的统计学差异。B)柱状图描绘用各浓度的实施例87化合物或溶媒对照处理的小鼠的正常血细胞计数(均值±S.D.，n＝13-15)。
发明详述
除另有说明外，本文中所述以下术语具有以下含义：
1.缩写和定义
除另有定义外，本文中使用的缩写为常规术语。使用以下缩写：
AcOH＝        乙酸
AIBN＝        偶氮双异丁腈
aq.＝         含水的
Boc＝         叔丁基羧基
Bz＝          苄基
BOP＝         苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)-磷鎓六氟磷酸盐
BPO＝         过氧化苯甲酰
nBuOH＝       正丁醇
CBr4＝        四溴甲烷
mCPBA＝       间-氯过氧苯甲酸
CH2Cl2或DCM＝ 二氯甲烷
Cs2CO3＝      碳酸铯
CuCl2＝       氯化亚铜
DPPA＝        叠氮磷酸二苯酯
DIBAL＝       氢化二异丁基铝
DIEA＝        Hunig’s碱或二异丙基乙胺
DME＝         二甲醚
DMF＝         二甲基甲酰胺
DMSO＝        二甲亚砜
Et3N＝        三乙胺
EtOAc＝       乙酸乙酯
g＝           克
HATU＝        2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六
              氟磷酸盐
H2＝          氢气
H2O＝         水
HBr＝         溴化氢
HCl＝         氯化氢
HIV＝         人免疫缺陷病毒
HPLC＝        高效液相色谱
h＝           小时
IgE＝         免疫球蛋白E
IC50＝        体外抑制50％酶需要的抑制剂的浓度
IPA＝         异丙醇
kg＝          千克
KCN＝         氰化钾
KOH＝         氢氧化钾
K2PO4＝       磷酸钾
LDA＝         二异丙胺基锂(lithium diisopropylamine)
LiAlH4＝      氢化铝锂
LiOH＝        氢氧化锂
MeCN＝        乙腈
MS＝          质谱
m/z＝         质量与电荷的比例
MHz＝         兆赫
MeOH＝        甲醇
μM＝         微摩尔
μL＝         微升
mg＝          毫克
mm＝          毫升
mM＝          毫摩尔
mmol＝        毫摩尔
mL＝          毫升
mOD/min＝     毫光密度单位/分钟
min＝         分钟
M＝           摩尔
Na2CO3＝      碳酸钠
ng＝          纳克
NaHCO3＝      碳酸氢钠
NaNO2＝       亚硝酸钠
NaOH＝        氢氧化钠
Na2S2O3＝     硫代亚硫酸钠
Na2SO4＝      硫酸钠
NBS＝         N-溴代琥珀酰胺
NH4Cl＝       氯化铵
NH4OAc＝      乙酸铵
NaSMe＝       甲硫醇钠
NBS＝         N-溴代琥珀酰胺
n-BuLi＝      正丁基锂
nm＝          纳米
nM＝          纳摩尔
N＝           当量(Normal)
NMP＝         N-甲基吡咯烷
NMR＝         核磁共振
Pd/C＝        披钯炭
Pd(PPh3)4＝   四(三苯基膦)合钯
pM            皮摩尔
Pin＝         戊酰(pinacolato)
PEG＝         聚乙二醇
PPh3或Ph3P＝  三苯基膦
RLV＝         劳贝尔白血病病毒
Ra-Ni＝       Rainey镍
SOCl2＝       亚硫酰氯
RT＝          室温
TEA＝         三乙胺
THF＝         四氢呋喃
TFA＝         三氟乙酸
TLC＝         薄层层析
TMS＝         三甲基甲硅烷基
Tf＝          三氟甲磺酰基
TSC＝         柠檬酸三钠
在本文中应注意，除上下文中另有明确说明外，在本说明书及其权利要求中使用的单数形式“一”和“该”包括复数指代物。
除另有说明外，单独或作为另一个取代基的一部分的“烷基”表示具有指定数目的碳原子的直链或支链全饱和脂族烃基。例如，“C1-8烷基”是指含1-8个碳原子的通过除去母体烷的单个碳原子上的一个氢原子衍生的直链或支链烃基。短语“未取代的烷基”是指不含全饱和脂族烃基之外的基团的烷基。因此，该短语包括直链烷基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。该短语还包括支链烷基异构体，例如异丙基、叔丁基、异丁基、仲丁基等。代表性烷基包括具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个碳原子的直链和支链烷基。其它代表性烷基包括具有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子的直链和支链烷基。
单独或作为另一个取代基的一部分的“烯基”是指具有指定数目的碳原子的可为单或多不饱和度的直链或支链。例如，“C2-C8烯基”表示具有2、3、4、5、6、7或8个原子的通过除去母体烷的单个碳原子上的一个氢原子衍生的烯基。实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基即-CH＝C(H)(CH3)、-CH＝C(CH3)2、-C(CH3)＝C(H)2、-C(CH3)＝C(H)(CH3)、-C(CH2CH3)＝CH2、丁二烯基例如2-(丁二烯基)、戊二烯基例如2，4-戊二烯基和3-(1，4-戊二烯基)，和己二烯基等，及其高级同系物和立体异构体。“取代的”烯基包括其中非碳或非氢原子与具有碳-碳双键的碳结合的烯基以及其中非碳或非氢原子中的一个与不与碳-碳双键连接的碳结合的那些烯基。各不饱和位点可为环绕双键的顺或反式构型。
单独或作为另一个取代基的一部分的术语“炔基”表示具有标示数目的碳原子的可为单或多不饱和度的直链或支链烃基。例如“C2-C8炔基”表示具有2-8个碳原子的通过除去母体烷的单个碳原子上的一个氢原子衍生的炔基。“未取代的炔基”是指直链和支链基团，例如所述以上定义的未取代的烷基但在两个碳原子之间存在至少一个三键的那些基团。实例包括但不限于乙炔基例如-C≡C(H)、1-丙炔基例如-C≡C(CH3)、-C≡C(CH2CH3)、-C(H2)C≡C(H)、-C(H)2C≡C(CH3)和-C(H)2C≡C(CH2CH3)等，及其高级同系物和立体异构体。“取代的”炔基包括其中非碳或非氢原子与具有碳-碳三键的碳结合的炔基以及其中非碳或非氢原子中的一个与不与碳-碳三键连接的碳结合的那些炔基。
单独或作为另一个取代基的一部分的“亚烷基”表示由烷衍生的二价基团，例如-CH2CH2CH2CH2-。通常，亚烷基具有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子，通过除去母体烷的单个碳原子上的一个氢原子衍生得到。
除另有说明外，单独或与其它术语联合的“环烷基”或“碳环”代表环状形式的“烷基”、“烯基”和“炔基”，其中所有环原子为碳。“环烷基”或“碳环”是指单环或多环基团。当与环烷基取代基联用时，术语“多环”在本文中是指稠合和非稠合的烷基环结构。“环烷基”或“碳环”可形成桥接环或螺环。环烷基可具有一个或多个双键或三键。术语“环烯基”是指在环顶点之间具有至少一个烯基不饱和位点的环烷基。术语“环炔基”是指在环顶点之间具有至少一个炔基不饱和位点的环烷基。当“环烷基”与“烷基”联用时，例如在C3-8环烷基C3-8亚烷基-中，环烷基部分具有所述数目的碳原子(例如3-8个碳原子)，而亚烷基部分具有1-8个碳原子。典型的环烷基取代基具有3-8个环原子。环烷基的实例包括环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。
单独或作为另一个取代基的一部分的“芳基”是指含6-14个碳原子的多不饱和芳族烃基，该基团可为单环或稠合在一起或共价连接的多环(高达3环)。因此，该短语包括但不限于基团例如苯基、联苯基、蒽基、萘基。未取代的芳基的非限制性实例包括苯基、1-萘基、2-萘基和4-联苯基。“取代的芳基”包括例如-CH2OH(一个碳原子和一个置换碳原子的杂原子)和-CH2SH。单独或作为另一个取代基的一部分的术语“亚杂烷基”表示由杂烷基衍生的二价基团，例如-CH2-CH2-S-CH2CH2--和-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-。对于亚杂烷基而言，杂原子也可占据链的任一或两个末端(例如亚烷氧基(alkyleneoxy)、亚烷基二氧基(alkylene dioxy)、亚烷基氨基、亚烷基二氨基等)。再者，对于亚烷基和亚杂烷基连接基团而言，不指定连接基团的取向。
术语“杂环”、“杂环基”或“杂环状”是指含至少一个杂原子的饱和或不饱和非芳族环基团。本文中使用的术语“杂原子”包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。可在任何可利用的环碳或杂原子上使杂环连接。各杂环可具有一个或多个环。当存在多环时，它们可稠合在一起或共价连接。各杂环通常含1、2、3、4或5个独立选择的杂原子。优选，这些基团含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子；0、1、2、3、4或5个氮原子；0、1或2个硫原子和0、1或2个氧原子。更优选，这些基团含1、2或3个氮原子；0-1个硫原子和0-1个氧原子。杂环基团的非限制性实例包括吗啉-3-酮、哌嗪-2-酮、哌嗪-1-氧化物、吡啶-2-酮、哌啶、吗啉、哌嗪、异
Figure BPA00001277505200181
唑啉(isoxazoline)、吡唑啉、咪唑啉、吡唑-5-酮、吡咯烷-2，5-二酮、咪唑烷-2，4-二酮、吡咯烷、四氢喹啉基、十氢喹啉基、四氢苯并氧氮杂
Figure BPA00001277505200182
基(tetrahydrobenzooxazepinyl)、二氢二苯并氧杂
Figure BPA00001277505200183
(dihydrodibenzooxepin)。
“杂芳基”是指含选自N、O和S的1-5个杂原子的环状或多环状芳族基团，其中氮和硫原子任选被氧化，氮原子任选被季铵化。杂芳基可通过杂原子或碳原子与分子的其余部分连接，并可含5-10个碳原子。杂芳基的非限制性实例包括1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、1-吡唑基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-
Figure BPA00001277505200184
唑基、4-
Figure BPA00001277505200185
唑基、5-
Figure BPA00001277505200186
唑基、3-异
Figure BPA00001277505200187
唑基、4-异
Figure BPA00001277505200188
唑基、5-异
Figure BPA00001277505200189
唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基和4-嘧啶基。若未具体说明，各上述芳基和杂芳基环系统的取代基选自本文中所述的可接受的取代基。“取代的杂芳基”是指以上定义的未取代的杂芳基，其中一个或多个环原子与例如以上对取代的烷基和取代的芳基描述的非氢原子结合。代表性取代基包括直链和支链烷基-CH3、-C2H5、-CH2OH、-OH、-OCH3、-OC2H5、-OCF3、-OC(＝O)CH3、-OC(＝O)NH2、-OC(＝O)N(CH3)2、-CN、-NO2、-C(＝O)CH3、-CO2H、-CO2CH3、-CONH2、-NH2、-N(CH3)2、-NHSO2CH3、-NHCOCH3、-NHC(＝O)OCH3、-NHSO2CH3、-SO2CH3、-SO2NH2和卤代。
“双环杂芳基”是指含选自N、O和S的1-5个杂原子的双环芳族基团，其中氮和硫原子任选被氧化，氮原子任选被季铵化。双环杂芳基可通过杂原子或碳原子与分子的其余部分连接，并可含5-10个碳原子。双环杂芳基的非限制性实例包括5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、苯并吡唑基、5-吲哚基、吖吲哚(azaindole)、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。若未具体说明，各上述芳基和杂芳基环系统的取代基选自本文中所述的可接受的取代基。
“芳基杂芳基”或“亚芳基杂芳基”是指其中杂芳基部分按非稠合方式与芳基部分连接的基团。芳基通过碳原子与分子的其余部分连接并可含5-10个碳原子。以上描述了芳基和杂芳基的非限制性实例。术语“苯基杂芳基”或“亚苯基杂芳基”是指连接苯基部分的杂芳基部分，苯基与分子的其余部分连接。
“芳基杂环基”或“亚芳基杂环基”是指其中杂环基部分按非稠合方式与芳基部分连接的基团。芳基通过碳原子与分子的其余部分连接并可含5-10个碳原子。以上描述了芳基和杂芳基的非限制性实例。术语“苯基杂环基”或“亚苯基杂环基”是指连接苯基部分的杂芳基部分，苯基与分子的其余部分连接。
在标示原子数目例如“C1-8”的以上各实施方案中，包括具有少一个(one fewer)原子的所有可能的实施方案。非限制性实例包括C1-7、C2-8、C2-7、C3-8、C3-7等。
除另有说明外，本文中各术语(例如“烷基”、“杂烷基”、“芳基”和“杂芳基”)包括“未取代”和任选“取代”形式的所述基团。除另有说明外，通常，各基团被0、1、2、3、4或5个取代基取代。以下提供各类型基团的取代基的实例。
“取代的”是指本文中定义的基团，其中连接碳或氢的一个或多个键被连接非氢和非碳原子“取代基”的键置换，非氢和非碳原子为例如但不限于卤素原子，例如F、Cl、Br和I；基团例如羟基、烷氧基、芳氧基和酰氧基中的氧原子；基团例如硫醇基、烷基和芳基硫醚基团、砜基团、磺酰基和亚砜基团中的硫原子；基团例如氨基、烷基胺、二烷基胺、芳基胺、烷基芳基胺、二芳基胺、烷氧基氨基、羟基氨基、酰基氨基、磺酰基氨基、N-氧化物、二酰亚胺和烯胺中的氮原子；和各种其它基团中的其它杂原子。“取代基”还包括基团，其中连接碳或氢的一个或多个键被连接杂原子的高位阶键(higher-order)(例如双键或三键)置换，杂原子为例如氧代、酰基、酰氨基、烷氧基羰基、氨基羰基、羧基和酯基中的氧；基团例如亚胺、肟、腙和腈中的氮。“取代基”还包括基团，其中连接碳或氢的一个或多个键被连接环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的键置换。代表性“取代基”包括但不限于基团，其中连接碳或氢的一个或多个键被连接氟、氯或溴基团的键置换。另一个代表性“取代基”是三氟甲基和含三氟甲基的其它基团。其它代表性“取代基”包括那些取代基，其中连接碳或氢的一个或多个键被连接氧原子的键置换，以使取代的烷基含羟基、烷氧基或芳氧基。其它代表性“取代基”包括烷基，此类烷基具有胺，或取代或未取代的烷基胺、二烷基胺、芳基胺、(烷基)(芳基)胺、二芳基胺、杂环基胺、二杂环基胺、(烷基)(杂环基)胺或(芳基)(杂环基)胺基团。再其它代表性“取代基”包括那些取代基，其中连接碳或氢的一个或多个键被连接烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基的键置换。
本文中定义的基团可包括本领域中常用的前缀和/或后缀，以形成其它公认的取代基。例如，“烷基氨基”是指式-NRaRb基团。除另有说明外，对于含Ra、Rb、Rc、Rd和Re的基团而言，Ra和Rb各自独立选自H、烷基、烷氧基、硫代烷氧基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，或任选与它们所连接的原子连接在一起形成环状基团。当Ra和Rb与同一个氮原子连接时，它们可与该氮原子结合形成5元、6元或7元环。例如，-NRaRb包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
Rc、Rd、Re和Rf各自独立选自本文中定义的烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基或亚烷基芳基。
通常，特定基团具有0、1、2或3个取代基，在本发明中，优选具有2个或更少取代基的那些基团。更优选，基团未被取代或一取代。最优选，基团未被取代。
烷基和杂烷基(以及称为亚烷基、烯基、亚杂烷基、杂烯基、炔基、环烷基、杂环基的那些基团)的“取代基”可为选自以下的多种基团：-ORa、＝O、＝NRa、＝N-ORa、-NRaRb、-SRa、卤素、-SiRaRbRc、-OC(O)Ra、-C(O)Ra、-CO2Ra、-CONRaRb、-OC(O)NRaRb  -NRbC(O)Ra、-NRa-C(O)NRbRc、-NRa-SO2NRbRc、-NRbCO2Ra、-NH-C(NH2)＝NH、-NRaC(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、-NRbSO2R、-CN和-NO2，取代基的数目为0-3，尤其优选具有0、1和2个取代基的基团。
在某些实施方案中，烷基和杂烷基的“取代基”选自：-ORa、＝O、-NRaRb、-SRa、卤素、-SiRaRbRc、-OC(O)Ra、-C(O)Ra、-CO2Ra、-CONRaRb、-OC(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-NRbCO2Ra 、-NRa-SO2NRbRc、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、-NRcSO2R、-CN和-NO2，其中Ra和Rb定义同上。在某些实施方案中，取代基选自：-ORa、＝O、-NRaRb、卤素、-OC(O)Ra、-CO2Ra、-CONRaRb、-OC(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-NRbCO2Ra、-NRa-SO2NRbRc、-SO2Ra、-SO2NRaRb、-NR″SO2R、-CN和-NO2。
取代的烷基的实例为：-(CH2)3NH2、-(CH2)3NH(CH3)、-(CH2)3NH(CH3)2、-CH2C(＝CH2)CH2NH2、-CH2C(＝O)CH2NH2、-CH2S(＝O)2CH3、-CH2OCH2NH2、-CO2H。取代的烷基的取代基的实例为：CH2OH、-OH、-OCH3、-OC2H5、-OCF3、-OC(＝O)CH3、-OC(＝O)NH2、-OC(＝O)N(CH3)2、-CN、-NO2、-C(＝O)CH3、-CO2H、-CO2CH3、-CONH2、-NH2、-N(CH3)2、-NHSO2CH3、-NHCOCH3、-NHC(＝O)OCH3、-NHSO2CH3、-SO2CH3、-SO2NH2和卤代。
同样，芳基和杂芳基的“取代基”有多种，选自：-卤素、-ORa、-OC(O)Ra、-NRaRb、-SRa、-Ra、-CN、-NO2、-CO2Ra、-CONRaRb、-C(O)Ra、-OC(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-NRbC(O)2Ra、-NRa-C(O)NRbRc、-NH-C(NH2)＝NH、-NRaC(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NRa、-S(O)Ra、-S(O)2Ra、-S(O)2NRa′Rb、-N3、-CH(Ph)2、全氟代C1-8烷氧基和全氟代C1-8烷基、取代基的数目为0至芳环系统上的开放价键总数；其中Ra、Rb和Rc独立选自氢、C1-6烷基和杂烷基、未取代的芳基和杂芳基、(未取代的芳基)-C1-8烷基和(未取代的芳基)氧基-C1-8烷基。
芳基或杂芳基环的相邻原子上的2个“取代基”可任选被式-T-C(O)-(CH2)q-U-的取代基置换，其中T和U独立为-NH-、-O-、-CH2-或单键，q为0、1或2。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的2个取代基任选被式-A-(CH2)r-B-的取代基置换，其中A和B独立为-CH2-、-O-、-NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NRa-或单键，r为1、2或3。由此形成的新环的单键中的一个任选被双键代替。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的2个取代基任选被式-(CH2)s-X-(CH2)t--的取代基置换，其中s和t独立为0-3的整数，X为-O-、-NRa-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)2NRa-。-NRa-和-S(O)2NRa-中的取代基Ra选自氢或未取代的C1-6烷基。另外，R′定义同上。
除另有说明外，通过依次命名官能团的末端部分和与连接点相邻的官能团对本文中未明确定义的取代基命名。例如，取代基“芳基烷基氧基羰基”是指基团(芳基)-(烷基)-O-C(O)-。
术语“酰基”是指基团-C(＝O)Rc，其中Rc为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基或杂环基。酰基包括“乙酰基”-C(＝O)CH3。
“酰基氨基-”是指基团-NRaC(＝O)Rc，其中Rc为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基或杂环基。
“酰氧基”是指-OC(＝O)-Rc，其中Rc为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基或杂环基。
“烷氧基”是指-ORd，其中Rd为本文中定义的烷基。烷氧基的代表实例包括甲氧基、乙氧基、叔丁氧基、三氟甲氧基等。
“烷氧基氨基”是指基团-NHORd，其中Rd为烷基。
“烷氧基羰基”是指-C(＝O)ORd，其中Rd为烷基。代表性烷氧基羰基包括例如下示那些基团。
Figure BPA00001277505200221
结合本文中的公开内容，这些烷氧基羰基可被进一步取代对具有有机和药物化学技能的技术人员而言是显而易见的。
“烷氧基羰基氨基”是指-NRaC(＝O)ORd，其中Rd为烷基。
“烷氧基磺酰基氨基”是指基团-NRaS(＝O)2-ORd，其中Rd为烷基。
“烷基羰基”是指基团-C(＝O)Rc，其中Rc为烷基。
“烷基羰基氧基”是指-OC(＝O)-Rc，其中Rc为烷基。
“烷基羰基氨基”是指-NRaC(＝O)Rc，其中Rc为烷基。代表性烷基羰基氨基包括例如-NHC(＝O)CH3、-NHC(＝O)CH2CH3、-NHC(＝O)CH2NH(CH3)、-NHC(＝O)CH2N(CH3)2或-NHC(＝O)(CH2)3OH。
“烷基硫烷基”、“烷硫基”或“硫代烷氧基”是指基团S-Rd，其中Rd为烷基。
“烷基磺酰基”是指-S(＝O)2Re，其中Re为烷基。用于本发明化合物的烷基磺酰基通常为C1-6烷基磺酰基。
“烷基磺酰基氨基”是指-NRaS(＝O)2-Re，其中Re为烷基。
“炔氧基”是指-O-炔基，其中炔基定义同本文。炔氧基包括例如乙炔氧基、丙炔氧基等。
“脒基”是指基团-C(＝NRa)NRbRc，其中Rb和Rc独立选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂芳基、杂环，其中Rb和Rc任选与连接它们的氮连接在一起形成杂环或取代的杂环。Ra选自氢、烷基、烯基、炔基、环炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂芳基、杂环、取代的杂环、硝基、亚硝基、羟基、烷氧基、氰基、-N＝N-N-烷基、-N(烷基)SO2-烷基、--N＝N＝N-烷基、酰基和-SO2-烷基。
“氨基”是指一价基团-NRaRb或二价基团-NRa-。术语“烷基氨基”是指基团-NRaRb，其中Ra为烷基，Rb为H或烷基。术语“芳基氨基”是指基团-NRaRb，其中Ra或Rb中的至少一个为芳基。术语“(烷基)(芳基)氨基”是指基团-NRaRb，其中Ra为烷基，Rb为芳基。另外，对于二烷基氨基，烷基部分可相同或不同，且也可和与它们各自连接的氮原子结合形成3-7元环。因此，以-NRaRb代表的基团包括哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、氮杂环丁烷基等。
“氨基羰基”或“氨基酰基”是指酰胺-C(＝O)-NRaRb。术语“烷基氨基羰基”在本文中是指基团-C(＝O)-NRaRb，其中Ra为烷基，Rb为H或烷基。术语“芳基氨基羰基”在本文中是指基团-C(＝O)-NRaRb，其中Ra或Rb为芳基。代表性氨基羰基包括例如下示那些基团。结合本文中的公开内容，这些烷氧基羰基可被进一步取代对具有有机和药物化学技能的技术人员而言是显而易见的。
Figure BPA00001277505200241
“氨基羰基氨基”是指基团-NRaC(O)NRaRb，其中Ra为氢或烷基，Ra和Rb独立选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂芳基、杂环，且其中Ra和Rb任选和结合它们的氮连接在一起形成杂环或取代的杂环基。
“氨基磺酰基”是指-S(O)2NRaRb，其中R独立选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环、取代的杂环，且其中Ra和Rb任选和结合它们的氮连接在一起形成杂环或取代的杂环基，烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环定义同本文。
“氨基磺酰氧基”是指基团-O-SO2NRaRb，其中Ra和Rb独立选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂芳基和杂环；Ra和Rb任选和结合它们的氮连接在一起形成杂环或取代的杂环基。
“氨基磺酰基氨基”是指基团-NRa-SO2NRbRc，其中Ra为氢或烷基，Rb和Rc独立选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环，且其中Rb和Rc任选和结合它们的氮连接在一起形成杂环或取代的杂环基，且其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环定义同本文。
“氨基硫代羰基”是指基团-C(S)NRaRb，其中Ra和Rb独立选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环，且其中Ra和Rb任选和结合它们的氮连接在一起形成杂环或取代的杂环，且其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环定义同本文。
“氨基硫代羰基氨基”是指基团-NRaC(S)NRaRb，其中Ra为氢或烷基，Rb和Rc任选和结合它们的氮连接在一起形成杂环或取代的杂环。
“芳基羰基”是指基团-C(＝O)Rc，其中Rc为芳基。
“芳基羰基氨基”是指-NRaC(＝O)Rc，其中Rc为芳基。
“芳基羰基氧基”是指-OC(＝O)-Rc，其中Rc为芳基。
“芳氧基”是指-ORd，其中Rd为芳基。芳氧基的代表实例包括苯氧基、萘氧基等。
“芳氧基羰基”是指-C(＝O)ORd，其中Rd为芳基。
“芳氧基羰基氨基”是指-NRaC(＝O)ORd，其中Rd为芳基。
“芳基硫烷基”、“芳硫基”或“硫代芳氧基”是指基团S-Rd，其中Rd为芳基。
“芳基磺酰基”是指-S(＝O)2Re，其中Re为芳基。
“芳基磺酰基氨基”是指-NRaS(＝O)2-Re，其中Re为芳基。
“芳硫基”是指基团-S-芳基，其中芳基定义同本文。在其它实施方案中，硫可氧化为-S(O)-或-SO2-部分。亚砜可以一种或多种立体异构体形式存在。
“叠氮基”是指-N3。
当在Markush组(group)中作为一个元素使用时，“键”表示相应的基团不存在，位于两端的基团直接连接。
“羰基”是指二价基团-C(＝O)-。
“羧基”是指基团-CO2H。
“羧基酯”是指基团-C(＝O)ORc。
“(羧基酯)氨基”是指基团-NRa-C(O)ORc，其中Ra为烷基或氢。
“(羧基酯)氧基”或“碳酸酯”是指基团-O-C(＝O)ORc。
“氰基”是指-CN。
“环烷氧基”是指-ORd，其中Rd为环烷基。
“环烷氧基羰基”是指-C(＝O)ORd，其中Rd为环烷基。
“环烷氧基羰基氨基”是指-NRaC(＝O)ORd，其中Rd为环烷基。
“环烷基亚烷基”是指基团-RxRy，其中Rx为亚烷基，Ry为本文定义的环烷基，例如环丙基甲基、环己烯基丙基、3-环己基-2-甲基丙基等。
“环烷基羰基”是指基团-C(＝O)Rc，其中Rc为环烷基。
“环烷基羰基氨基”是指-NRaC(＝O)Rc，其中Rc为环烷基。
“环烷基羰基氧基”是指-OC(＝O)-Rc，其中Rc为环烷基。
“环烷基磺酰基氨基”是指-NRaS(＝O)2-Re，其中Re为环烷基。
“环烷硫基”是指-S-环烷基。在其它实施方案中，硫可氧化为-S(O)-或-SO2-部分。亚砜可以一种或多种立体异构体形式存在。
“环烯氧基”是指-O-环烯基。
“环烯硫基”是指-S-环烯基。在其它实施方案中，硫可氧化为亚硫酰基或磺酰基部分。亚砜可以一种或多种立体异构体形式存在。
“酯”是指-C(＝O)ORd，其中Rd为烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基。
“胍基”是指基团-NHC(＝NH)NH2。
除另有说明外，单独或作为另一个取代基的一部分的“卤代”或“卤素”表示氟、氯、溴或碘原子。另外，术语例如“卤代烷基”包括其中一个或多个氢被可相同或不同的卤素原子取代的烷基，卤素原子的数目为1至高达允许的卤素的最大数目，例如，对于烷基而言，数目为(2m′+1)，其中m′为烷基中碳原子的总数。例如，术语“卤代C1-8烷基”包括三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。除另有说明外，术语“全卤代烷基”表示被(2m′+1)卤素原子取代的烷基，其中m′为烷基中碳原子的总数。例如，术语“全卤代C1-8烷基”包括三氟甲基、五氯乙基、1，1，1-三氟-2-溴-2-氯乙基等。另外，术语“卤代烷氧基”是指被一个或多个卤素原子取代的烷氧基。
“杂烷基”表示含1、2或3个取代基的本文中定义的烷基，所述取代基独立选自氰基、-ORw、-NRxRy和-S(O)nRz(其中n为0-2的整数)，须理解，杂烷基的连接点通过杂烷基的碳原子。Rw为氢、烷基、环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳烷基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、甲酰氨基或一或二烷基氨基甲酰基。Rx为氢、烷基、环烷基、环烷基-烷基、芳基或芳烷基。Ry为氢、烷基、环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳烷基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、甲酰氨基、一或二烷基氨基甲酰基或烷基磺酰基。Rz为氢(前提是n为0)、烷基、环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳烷基、氨基、一烷基氨基、二烷基氨基或羟基烷基。代表性实例包括例如2-羟基乙基、2，3-二羟基丙基、2-甲氧基乙基、苄氧基甲基、2-氰基乙基和2-甲基磺酰基-乙基。对于以上各基团，Rw、Rx、Ry和Rz可被以下基团进一步取代：氨基、氟、烷基氨基、二烷基氨基、OH或烷氧基。另外，标示碳原子数目的前缀(例如C1-C10)是指除氰基、-ORw、-NRxRy或-S(O)nRz部分外的杂烷基部分中的碳原子总数。
“杂芳基羰基”是指基团-C(＝O)Rc，其中Rc为杂芳基。
“杂芳基羰基氨基”是指-NRaC(＝O)Rc，其中Rc为杂芳基。
“杂芳基羰基氧基”是指-OC(＝O)-Rc，其中Rc为杂芳基。
“杂芳氧基”是指-ORd，其中Rd为杂芳基。
“杂芳氧基羰基”是指-C(＝O)ORd，其中Rd为杂芳基。
“杂芳氧基羰基氨基”是指-NRaC(＝O)ORd，其中Rd为杂芳基。
“杂芳基磺酰基氨基”是指-NRaS(＝O)2-Re，其中Re为杂芳基。
“杂芳硫基”是指-S-杂芳基。在其它实施方案中，硫可氧化为-S(O)-或-SO2-部分。亚砜可以一种或多种立体异构体形式存在。
“杂环基烷基”或“环杂烷基-烷基”表示基团-RxRy，其中Rx为本文定义的亚烷基，Ry为本文定义的杂环基，例如四氢吡喃-2-基甲基、4-(4-取代的-苯基)哌嗪-1-基甲基、3-哌啶基乙基等。
“杂环氧基羰基氨基”是指-NRaC(＝O)ORd，其中Rd为杂环基。
“杂环基羰基”是指-C(＝O)Rc，其中Rc为杂环基。
“杂环基羰基氨基”是指-NRaC(＝O)Rc，其中Rc为杂环基。
“杂环基羰基氧基”是指-OC(＝O)-Rc，其中Rc为杂环基。
“杂环基氧基”是指-ORd，其中Rd为杂环基。
“杂环基氧基羰基”是指-C(＝O)ORd，其中Rd为杂环基。
“杂环基磺酰基”是指-S(＝O)2Re，其中Re为杂环基。
“杂环基磺酰基氨基”是指-NRaS(＝O)2-Re，其中Re为杂环基。
“杂环硫基”是指基团-S-杂环基。在其它实施方案中，硫可氧化为-S(O)-或-SO2-部分。亚砜可以一种或多种立体异构体形式存在。
“羟基”是指基团-OH。
“羟基氨基”是指基团-NHOH。
“硝基”是指-NO2。
“亚硝基”是指基团-NO。
在本说明书全文中使用的术语“任选的”或“任选”表示随后描述的事件或环境可发生但不一定发生，该表述包括其中事件或环境发生的情况和其中事件或环境不发生的情况。例如，“任选被烷基一或二取代的杂环基表示烷基可以存在，但不一定存在，且该表述包括其中杂环基被烷基一或二取代的情况和其中杂环基未被烷基取代的情况。
“任选取代的”表示任选独立被取代基取代的环。未取代的基团的位点可被氢取代。
“氧代”是指二价基团＝O。
“硫烷基”是指基团-SRf，其中Rf定义同本文。
“亚磺酰基”是指基团-S(＝O)-Re，其中Re定义同本文。
“磺酸”是指基团-S(O)2-OH。
“磺酰基”是指基团-S(O)2-Re，其中Re定义同本文。
“磺酰基氨基”是指-NRaS(＝O)2-Re，其中Ra选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂芳基和杂环基，Re定义同本文。
“磺酰氧基”是指基团-OSO2-Rc。
具有相同分子式但它们的性质或原子结合顺序或它们的原子在空间的排列不同的化合物称为“异构体”。它们的原子在空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。“立体异构体”是指如果它们具有一个或多个不对称中心或不对称取代的双键从而可产生单个立体异构体或混合物，以不同立体异构式存在的化合物。立体异构体包括对映体和非对映体。互不为镜像的立体异构体称为“非对映体”，彼此镜像不叠加的那些立体异构体称为“对映体”。当化合物具有不对称中心时，例如，与4个不同基团结合时，可存在对映体对。可通过其不对称中心的绝对构型表征对映体，通过Cahn和Prelog的R-和S-定序规则或通过分子使偏振光平面旋转的方式描述对映体，以右旋或左旋表示(即分别为(+)或(-)-异构体)。手性化合物可按单个对映体或其混合物的形式存在。含相等比例对映体的混合物称为“外消旋混合物”。除另有说明外，该表述包括单个立体异构体和混合物。测定立体化学和分离立体异构体的方法在本领域中熟知(参见在ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY的第4章中的论述，第4版，J.March，John Wiley and Sons，New York，1992)，所述立体异构体在一个或多个立体中心上的手性不同。
“硫酰基”是指基团Ra-C(S)-。
“硫醇”是指基团-SH。
“互变异构体”是指质子位置不同的分子的变化形式例如烯醇-酮和亚胺-烯胺互变异构体，或含-N＝C(H)-NH-环原子排列的杂芳基的互变异构形式，例如吡咯、咪唑、苯并咪唑、三唑和四唑。本领域普通技术人员会认识到，可存在其它互变异构的环原子排列。
可以理解，在以上定义的所有取代的基团中，通过对取代基的取代基进行定义获得的聚合形式(例如具有取代的芳基取代基的取代的芳基，该取代基本身被取代的芳基取代，取代的芳基又被取代的芳基等取代)不包括在本文中。在此类情况中，此类取代的最大数目为3。例如，取代的芳基的系列取代限于-取代的芳基-(取代的芳基)-取代的芳基。
“保护基团”是指当与分子中的反应性官能团连接时能够掩盖、减少或阻止官能团的反应性的原子基团。通常，在合成期间，可根据需要将保护基团选择性除去。保护基的实例可参见Greene和Wuts的《有机化学中的保护基团(Protective Groups in Organic Chemistry)》，第3版.，1999，John Wiley & Sons，NY and Harrison等，《有机合成方法概览(Compendium of Synthetic Organic Methods)》，Vols.第1-8卷，1971-1996，John Wiley & Sons，NY中找到。代表性氨基保护基包括但不限于甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苄基、苄氧基羰基(“CBZ”)、叔丁氧基羰基(“Boe”)、三甲基甲硅烷基(“TMS”)、2-三甲基甲硅烷基-乙磺酰基(“TES”)、三苯甲基和取代的三苯甲基、烯丙氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基(″FMOC″)、硝基-藜芦基氧基羰基(“NVOC”)。代表性羟基保护基包括但不限于其中羟基被酰化或烷化的那些基团，例如苄基和三苯甲基醚以及烷基醚、四氢吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚(例如TMS或TIPPS基团)和烯丙基醚。
术语“药学上可接受的盐”包括根据本文中所述化合物上存在的特定取代基采用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐。当本发明化合物含相对酸性的官能团时，可通过使中性形式的这种化合物与足量的需要的碱单独或在合适的惰性溶剂中接触得到碱加成盐。由药学上可接受的无机碱衍生的盐的实例包括铝、铵、钙、铜、三价铁、亚铁、锂、镁、锰、二价锰、钾、钠、锌等。由药学上可接受的有机碱衍生的盐包括伯、仲和叔胺的盐，它们包括取代的胺、环胺、天然胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡萄糖胺、葡糖胺、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。当本发明化合物含相对碱性的官能团时，可通过使中性形式的这种化合物与足量的需要的酸单独或在合适的惰性溶剂中接触得到酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括由无机酸衍生的那些盐，无机酸盐例如盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、硫酸盐、硫酸氢盐、氢碘酸盐或亚磷酸盐等；由相对无毒的有机酸衍生的盐，所述有机酸为例如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括氨基酸例如精氨酸等的盐以及有机酸例如葡糖醛酸或半乳糖酸等的盐(参见例如Berge，S.M等，药用盐(“Pharmaceutical Salts，”)Journal of Pharmaceutical Science，66：1-19，1977)。本发明某些特殊化合物含碱性和酸性官能团，这使得化合物可以转化为碱或酸加成盐。
可通过使盐与碱或酸接触再按常规方式分离母体化合物，重新得到中性形式的化合物。化合物的母体形式的某些物理性质例如在极性溶剂中的溶解度与各种盐形式的不同，但对于本发明目的，盐等同于母体形式的化合物。
除盐形式外，本发明提供前药酯形式的化合物。本文中所述化合物的“前药”是在生理环境下容易发生化学变化得到本发明化合物的那些化合物。另外，可通过在离体环境中用化学或生物化学方法将前药转化为本发明化合物。例如，当置于含合适的酶或化学试剂的透皮贴剂储库时，可将前药缓慢转化为本发明化合物。前药经常在转化为活性药物前是药理学惰性化合物，但这种情况并非必须。通常通过将药物中可能是活性所部分需要的官能团用“前体基团(progroup)”(以下定义的)掩盖，形成可以经过转化(例如在特定使用条件下裂解)释放官能团从而得到活性药物的“前体部分(promoiety)”，获得前药。可对前体部分例如通过水解反应，或通过另一种作用物(例如酶、光、酸或碱)或物理或环境参数改变(例如温度改变)或暴露于物理或环境参数将其催化或诱导，进行自发性裂解。作用物相对于使用环境可以是内源性的，例如存在于给予前药的细胞内的酶或胃的酸性环境，或可由外源提供。
“前体基团”是指当用于掩盖活性药物中的官能团形成“前体部分”时能够将药物转化为前药的一类保护基团。前体基团通常通过键与药物的官能团连接，所述键在特定使用条件下可裂解。因此，前体基团为前体部分的一部分，该前体部分在特定使用条件下裂解，释放官能团。作为特定实例，式-NH-C(O)CH3的酰胺前体部分包含前体基团-C(O)CH3。
适合掩盖活性syk选择性抑制化合物中官能团以得到前药的很多种前体基团和得到的前体部分在本领域中熟知。例如，可将羟基官能团掩盖变为磺酸酯、酯(例如乙酸酯或马来酸酯)或碳酸酯前体部分，该前体部分可在体内水解，得到羟基。可将氨基官能团掩盖变为酰胺、氨基甲酸酯、亚胺、脲、苯膦基、磷酰基或氧硫基前体部分，它们可在体内水解，得到氨基。可将羧基掩盖成为酯(包括甲基、乙基、新戊酰氧基甲基、甲硅烷基酯和硫代酸酯)、酰胺或酰肼前体部分，它们可在体内水解得到羧基。本发明包括本领域中已知的用于改变溶解度或水解特性的那些酯和酰基，以用作缓释或前药制剂。合适的前体基团和它们的相应前体部分的特定实例对本领域技术人员而言是显而易见的。
本发明某些化合物可以非溶剂化形式和包括水合形式在内的溶剂化形式存在。“溶剂化物”是指由溶剂分子与溶质的分子或离子结合形成的复合物。溶剂可为有机化合物、无机化合物或二者的混合物。溶剂的某些实例包括但不限于甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二甲亚砜和水。一般而言，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，并包括在本发明范围内。本发明某些化合物可以多晶形或无定形形式存在。一般而言，对于本发明设想的用途，所有物理形式均相同并在本发明范围内。
本发明某些化合物具有不对称碳原子(旋光中心)或双键；外消旋体、非对映体、几何异构体、区域异构体和单个异构体(例如分离的对映体)均包括在本发明范围内。可用常规方法将这些异构体拆分或不对称合成，以使异构体“旋光纯”，即基本上不含它的其它异构体。例如，如果需要本发明化合物的特定对映体，可通过不对称合成制备，或通过用手性助剂衍生化，其中将得到的非对映异构的混合物分离，再将助剂基团裂解得到纯的需要的对映体。或者，当分子含碱性官能团例如氨基或酸性官能团例如羧基时，用适当的旋光活性酸或碱形成不对称异构的盐，然后通过本领域中熟知的分级结晶或色谱方法将由此形成的非对映体拆分，然后回收纯对映体。
本发明化合物也可在构成该化合物的一个或多个原子中含非正常比例的原子同位素。例如，可将化合物用放射性同位素例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)标记。无论是否具有放射性，本发明化合物的所有同位素形式均包括在本发明范围内。
术语“给予”是指口服给药；以栓剂、局部接触、静脉内、腹膜内、肌内、病变内(intralesional)、鼻内方式给药或皮下给药，或向患者体内植入缓释装置例如微型渗透泵。可以通过任何通路给药，所述通路包括肠胃外和透粘膜(例如含服、舌下、腭、龈、鼻、阴道、直肠或透皮)。肠胃外给药包括例如静脉内、肌内、动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内和颅内给药。递药的其它模式包括但不限于使用脂质体制剂、静脉内输注、透皮贴剂等。
“激动剂”或“活化剂”是指能够与本发明的受体结合的作用物或分子，能够刺激、增加、开通、激活、促进、增强酶的激活或活性，使本发明受体的活性致敏或上调的作用物或分子。
“拮抗剂”或“抑制剂”是指能够抑制本发明受体或与本发明受体结合的作用物或分子，能够部分或完全阻断刺激或活性，减少、封闭、阻止、延缓激活或酶活性，使本发明受体的活性失活、脱敏或下调。本文中使用的“拮抗剂”还包括反向或逆向激动剂。
本文中使用的术语“响应调节syk的疾病或病症”和相关术语和短语是指与不适当的(例如小于或大于正常)syk活性有关的和至少部分响应于syk和/或JAK的调节或受syk调节影响(例如syk拮抗剂或激动剂在至少一些患者的预后中产生一些改善)的疾病或病症。不适当的syk的功能活性可因下列情况而产生：在通常不表达该受体的细胞中表达syk、大于syk的正常生产或慢于syk或其活性代谢物的正常代谢失活或消除、syk的表达或细胞内激活的程度增加(导致例如炎性和免疫相关病症和疾病)或syk表达减少。与syk有关的疾病或病症可包括“syk介导的疾病或病症”。
本文中使用的短语“至少部分由syk激酶活性介导的疾病或病症”是指特征在于不适当的例如大于正常syk活性的疾病或病症。不适当的syk的功能活性可因在通常不表达该受体的细胞中表达syk或表达syk或细胞内激活的程度增加(导致例如炎性和免疫相关病症和疾病)而产生。不适当的syk功能活性可完全或部分介导至少部分由syk激酶活性介导的疾病或病症。但是，至少部分由syk激酶活性介导的疾病或病症是其中调节syk导致对潜在疾病或病症产生某些作用(例如syk拮抗剂在患者中的至少某些患者中导致某些改善)的病症。
本文中使用的术语“炎症”是指白血细胞(例如白细胞、单核细胞等)浸润到因为再狭窄而治疗的区域。
术语“介入”是指产生治疗效果或改变疾病过程进程的作用。例如，“血管介入”是指用血管内方法例如血管成形术或支架使阻塞的血管开通。
术语“血管内装置”是指可用于血管再通使血流重新通过阻塞的血管的装置。血管内装置的实例包括但不限于支架、充气囊导管、自身静脉/动脉移植物、假体静脉/动脉移植物、血管导管和血管支架。
本文中使用的术语“JAK”是指可在体外或体内介导基因表达的Janus激酶(RefSeq登录号P-43408)或其变种。JAK变种包括基本上与天然JAK同源的蛋白，即具有一种或多种天然或非天然存在的氨基酸缺失、插入或取代的蛋白(例如JAK衍生物、同系物和片段)。JAK变种的氨基酸序列优选为与天然JAK至少约80％相同，更优选至少约90％相同，最优选至少约95％相同。
术语“白细胞”是指当将全血离心时分离到薄白色层的具有核和细胞质的各种血细胞中的任何细胞，这些细胞协助阻止感染和疾病影响身体。白细胞的实例包括但不限于嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。
术语“哺乳动物”包括但不限于人、家畜(例如狗或猫)、农场动物(母牛、马或猪)、猴子、兔子、小鼠和实验室动物。
术语“调节”等是指化合物增加或减少syk功能和/或表达的能力，其中这种功能可包括转录调节性活性和/或蛋白结合。调节可在体外或体内发生。本文中所述调节包括与syk有关的直接或间接被抑制、拮抗、部分拮抗、激活、激动或部分激动的功能或特性，和/或直接或间接上调或下调syk的表达。在优选的实施方案中，调节为直接调节。抑制剂或拮抗剂为例如结合、部分或完全阻断刺激；减少、阻止、抑制、延缓激活；使信号转导失活、脱敏或下调的化合物。激动剂或活化剂是例如结合、刺激、增加、开通、激活、促进、增强激活；或使信号转导激活、致敏或上调的化合物。可在生物化学测定例如结合测定或基于细胞的测定例如瞬时转染测定中，证明化合物抑制syk功能的能力。
活性的“调节剂”是指用体外和体内活性测定鉴定出的“配体”、“拮抗剂”和“激动剂”和它们的同源物和模拟物。调节剂包括天然和合成配体、拮抗剂、激动剂、分子等。鉴定拮抗剂和激动剂的测定方法包括例如在本发明受体的存在或不存在下，在细胞上施用公认的调节剂化合物，然后测定本发明活性的受体的功能作用。将含有用潜在活化剂、抑制剂或调节剂处理的本发明受体的样品或测定与不含抑制剂、活化剂或调节剂的对照样品对比，以检验作用的程度。将对照样品(未用调节剂处理)的相对活性值设为100％。当相对于对照的本发明受体的活性值为约80％，任选50％或25-1％时，实现抑制。当相对于对照的本发明受体的活性值为110％，任选150％，任选200-500％，或1000-3000％更高时，实现激活。
“患者”是指人和非人动物，尤其是哺乳动物。患者的实例包括但不限于人、母牛、狗、猫、山羊、绵羊、猪和兔。
就本发明组合物而言，术语“药学上可接受的载体或赋形剂”表示可用于制备药用组合物的载体或赋形剂，它们通常是安全、无毒和无生物活性及无害，包括兽医用和人药用的载体或赋形剂。用于本说明书和权利要求的“药学上可接受的载体或赋形剂”包括一种和大于一种的此类载体或赋形剂。
术语“药学有效量”、“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指研究人员、兽医、医师或其它临床技师正在寻找的引起组织、系统、动物或人的生物或医学反应的主题化合物的量。术语“治疗有效量”包括给予后足以阻止正在治疗的疾病或病症的一种或多种症状发展或缓解至某种程度的化合物的量。治疗有效量须随化合物、病症或状态及其严重性以及所治疗的哺乳动物的年龄、体重等而变。
术语“血小板”是指存在于哺乳动物血浆中的微小无核碟状细胞，其作用为促使血液凝固。
本文中使用的术语“阻止”、“预防”及其其它语法形式是指部分或完全延缓或排除病症或疾病和/或其一个或多个附带症状的发作或复发，或阻止患者获得或再获得病症或疾病或减少患者获得或再获得病症或疾病或其一个或多个附带症状风险的方法。
术语“再通”是指恢复流动到破坏的身体渠道或使破坏的身体渠道例如血管再结合的方法。
术语“再狭窄”是指在治疗例如进行血管成形术或支架植入的相同位置上动脉再缩窄或阻滞。
当涉及与受体结合时，短语“选择性”或“特异性”是指通常在受体和其它生物体的异源种群中可检测到受体存在结合反应。因此，在设定条件下，化合物与特定受体的结合力至少为背景的2倍，更通常大于背景10-100倍。在此类条件下，化合物的特异性结合需要选择对特定受体具有特异性的化合物。例如，可筛选小有机分子，以仅得到特异性或选择性结合选择的受体且不与其它受体或蛋白结合的那些化合物。可用多种测定模式选择对特定受体有选择性的化合物。例如，按惯例，用高通量筛选测定法选择对特定受体有选择性的化合物。
本文中使用的术语“镰状细胞贫血病”是指红血细胞遗传病，其中两个血红蛋白等位基因均编码镰状血红蛋白(S)蛋白，即S/S基因型。异常血红蛋白的存在导致产生异常形状的细胞，这种细胞在血液循环中的存活时间不能达到通常时间长度。因此，导致贫血病。“贫血病”是指血液中红血细胞和/或血红蛋白的数目减少。
术语“镰状细胞病”是指红血细胞遗传病，其中一个血红蛋白等位基因编码镰状血红蛋白(S)蛋白，另一个等位基因编码另一种异常血红蛋白，例如血红蛋白(S)、(C)、(D)、(E)和(βThal)。镰状细胞病基因型的实例包括但不限于S/S、S/C、S/D、S/E和S/βThal基因型。最普通类型的镰状细胞病包括镰状细胞贫血病、镰状细胞血红蛋白C病、镰状细胞β+(plus)地中海贫血和镰状细胞β0(zero)地中海贫血。
本文中定义的“患者”包括动物，例如哺乳动物，哺乳动物包括但不限于灵长类(例如人)、母牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在优选的实施方案中，患者为人。
本文中使用的术语“syk”是指可在体外或体内调节对T细胞受体的细胞反应的脾酪氨酸激酶(RefSeq目录号P-043405)或其变种。syk变种包括基本上与天然syk同源的蛋白，即具有一种或多种天然或非天然存在的氨基酸缺失、插入或取代的蛋白(例如syk衍生物、同系物和片段)。syk变种的氨基酸序列优选为与天然syk至少约80％相同，更优选至少约90％相同，最优选至少约95％相同。
术语“syk抑制剂”是指抑制脾酪氨酸激酶的催化活性的任何物质。
术语“血栓形成”是指由细胞结块造成的血管阻滞或阻塞，导致血流阻塞。术语“血栓形成”是指在血管中形成的凝块。
本文中使用的术语“治疗”及其其它语法形式包括部分或完全延缓、缓解、减轻或减少病症或疾病的一种或多种附带症状和/或缓解、减轻或阻挡病症或疾病的一种或多种起因。本发明的治疗可以为防止性治疗、预防性治疗、缓解(pallatively)性治疗或改善性治疗。
术语“导管”是指传送流体的任何通道，例如动脉或静脉。例如，“血管”是指任何导管，通过其血液在身体中循环。血管内腔是指血管的内开放空间或腔室。
2.本发明的实施方案
a.化合物
在一组实施方案中，本发明提供具有式(I)的化合物、其互变异构体或药学上可接受的盐：
Figure BPA00001277505200371
其中：
Y1选自：
Figure BPA00001277505200381
Z为O或S；
D1选自：
(a)被基团R5取代的苯基，其中苯基还任选被1-2个取代基R7a取代，R7a独立选自C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代、C1-8烷基磺酰基和杂环基；
R5选自：
(i)杂芳基；
(ii)杂环基；
(iii)C1-8烷基杂环基；
(iv)亚苯基杂芳基
(v)亚苯基杂环基
(vi)-L-苯基；
(vii)-L-杂环基；和
(viii)酰氧基；
L选自-CO-、-O-、-SO2-、-CONH-和-CONHCH2-；
各R5还任选进一步被1-2个取代基取代，所述取代基独立选自C1-8烷基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基氨基、C1-8烷基羰基、氨基羰基、氰基、羟基、氧代、卤代、卤代C1-8烷基、氨基磺酰基、C3-8环烷基和芳基；
(b)被取代基R7b取代的萘基，R7b独立选自卤素、C1-8烷基羰基、C1-8烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基羰基和氨基羰基；
(c)任选被1-2个取代基R7c取代的C3-8环烷基，R7c独立选自C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代、C1-8烷基磺酰基和杂环基；
(d)任选被1-2个取代基R7d取代的杂芳基；R7d独立选自：C1-8烷基、氨基、羟基、氧代、卤代、C1-8烷氧基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基羰基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8氨基环烷基、氨基C1-8亚烷基羰基、氨基羰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基羰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8烷氧基羰基、C1-8烷氧基羰基氨基、芳基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基、C1-8烷基磺酰基、氨基C1-8亚烷基磺酰基、氨基磺酰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基磺酰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8烷氧基磺酰基、氨基磺酰基和C1-8烷基杂环基；和
(e)任选被1-2个取代基R7e取代的杂环基；R7e独立选自C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代、C1-8烷基磺酰基和杂环基；
各E1独立选自C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、氨基羰基、C1-8烷氧基羰基C1-8亚烷基、C1-8烷氧基羰基C1-8C1-8烷氧基、C1-8烷氧基羰基氨基、氧代、卤代、氰基、卤代C1-8烷基、卤代C1-8烷氧基、氨基磺酰基、杂芳基亚磺酰基；氨基、羟基、C1-8芳基亚烷基、苯基、氨基C1-8烷基、氨基C3-8环烷基、杂环基、杂芳基和杂环基C1-8亚烷基；
各R1a、R1b和R1c独立选自：H、C1-8烷基、羟基C1-8烷基、C1-8卤代烷基、氨基、C1-8烷基氨基、C1-8烷氧基羰基氨基C1-8亚烷基、C3-8环烷基、杂芳基、C1-8烷基C3-8环烷基、C1-8烷硫基C1-8烷基、C1-8烷基磺酰基C1-8亚烷基、氨基羰基、C1-8烷氧基C1-8烷基、卤代C1-8烷基、芳基和杂环基；其中所述芳基任选被以下基团取代：羟基、C1-8烷氧基、卤代或卤代C1-8烷基；或与R3和它们连接的原子一起形成C3-8环烷基或杂环烷基环；
R2选自H、氨基、C1-8烷基氨基、羟基羰基氨基C1-8烷氧基羰基氨基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基和羟基；
R3选自H、C1-8烷基、C1-8烷基氨基、氨基氨基C1-8烷基、羧基、C1-8烷基氨基C1-8烷基、C1-8烷氧基C1-8烷基、羟基C1-8烷基；羧基C1-8烷基、C3-8环烷基C1-8烷基、芳氧基C1-8烷基、芳基C1-8烷基、杂芳基C1-8烷基、羟基C1-8烷氧基和羟基C1-8烷氧基；或可与R1c或R4和它们连接的原子结合形成C3-8环烷基或杂环基环；
R4为H或烷基，或可与R3和它们连接的原子结合形成C3-8环烷基或杂环基环；
下标n为0、1、2、3或4；和
下标m为1、2或3的整数；
波纹线表示与分子其余部分连接的连接点。
在一组实施方案中，Y1为：
Figure BPA00001277505200401
在一组实施方案中，Y1为：
Figure BPA00001277505200402
在一组实施方案中，Z为O。在另一组实施方案中，Z为S。
在一组实施方案中，D1为苯基。
在一组实施方案中，R5为杂芳基。在另一组实施方案中，R5为杂环基。在另一组实施方案中，R5为C1-8烷基杂环基。在另一组实施方案中，R5为亚苯基杂芳基。在另一组实施方案中，R5为亚苯基杂环基。在另一组实施方案中，R5为-L-苯基。在另一组实施方案中，R5为-L-杂环基。在另一组实施方案中，R5为酰氧基。
在另一组实施方案中，D1为萘基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D1-选自：
Figure BPA00001277505200404
其中X为卤素。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D1-选自：
Figure BPA00001277505200405
在另一组实施方案中，D1为C3-8环烷基。在另一组实施方案中，D1为杂芳基。在另一组实施方案中，D1为杂环基。
在另一个实施方案中，本发明提供具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001277505200411
其中：
Y1选自：
Figure BPA00001277505200412
D1选自：
(a)被杂芳基R5取代的苯基，其中苯基还任选被1-2个取代基R7a取代，R7a独立选自C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代、C1-8烷基磺酰基和杂环基；杂芳基还任选被1-2个取代基取代，所述取代基独立选自C1-8烷基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基羰基、氨基羰基、羟基、氧代、卤代、卤代C1-8烷基、氨基磺酰基和C3-8环烷基；
(b)被取代基R7b取代的萘基，R7b选自C1-8烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基羰基和氨基羰基；
(c)任选被1-2个取代基R7c取代的C3-8环烷基，R7c独立选自C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代、C1-8烷基磺酰基和杂环基；
(d)任选被1-2个取代基R7d取代的双环杂芳基；R7d独立选自：C1-8烷基、C1-8烷基羰基、氨基C1-8亚烷基羰基、氨基羰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基羰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8烷氧基羰基、氨基羰基、氨基、C1-8烷氧基羰基氨基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基、羟基、C1-8烷氧基、C1-8烷基磺酰基、氨基C1-8亚烷基磺酰基、氨基磺酰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基磺酰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8烷氧基磺酰基、氨基磺酰基、氧代、卤代、苯基杂环基和C1-8烷基杂环基；和
(e)被1-2个取代基R7e取代的杂环基；R7e独立选自C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代、C1-8烷基磺酰基和杂环基；
各E1独立选自C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、氨基羰基、C1-8烷氧基羰基C1-8亚烷基、C1-8烷氧基羰基C1-8C1-8烷氧基、C1-8烷氧基羰基氨基、氧代、卤代、氰基、卤代C1-8烷基、卤代C1-8烷氧基、氨基磺酰基、杂芳基亚磺酰基；氨基、羟基、C1-8芳基亚烷基、苯基、氨基C1-8烷基、氨基C3-8环烷基、杂环基、杂芳基和杂环基C1-8亚烷基；
各R1a、R1b和R1c独立选自：H、C1-8烷基、羟基C1-8烷基、氨基、C1-8烷基氨基、C1-8烷氧基羰基氨基C1-8亚烷基、C3-8环烷基、杂芳基、C1-8烷基C3-8环烷基、C1-8烷硫基C1-8烷基、C1-8烷基磺酰基C1-8亚烷基、氨基羰基、芳基和杂环基；其中所述芳基被以下基团任选取代：羟基、C1-8烷氧基、卤代或卤代C1-8烷基；或与R3和它们所连接的原子一起形成C3-8环烷基或杂环烷基环；
R2选自H、氨基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基和羟基；
R3选自H、C1-8烷基、C1-8烷基氨基、氨基C1-8烷基氨基C1-8烷基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基、羟基C1-8烷基和羟基C1-8烷氧基；或可与R1c或R4和它们所连接的原子结合形成C3-8环烷基或杂环基环；
R4为H或烷基，或可与R3和它们所连接的原子结合形成C3-8环烷基或杂环基环；
下标n为0、1、2、3或4；和
下标m为1、2或3的整数；和
波纹线表示与分子其余部分连接的连接点。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D1为C3-8环烷基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D1选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D1为杂环基。
在另一组实施方案中，本发明提供化合物，其中式I的任何杂环基选自：
Figure BPA00001277505200431
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中所述杂环基选自：
在另一组实施方案，本发明提供化合物，其中式I化合物的杂芳基选自：
Figure BPA00001277505200433
它们各自任选被1-2个取代基取代，所述取代基独立选自：C1-8烷基、氨基、羟基、氧代、卤代、C1-8烷氧基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基羰基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8氨基环烷基、氨基C1-8亚烷基羰基、氨基羰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基羰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8烷氧基羰基、C1-8烷氧基羰基氨基、芳基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基、C1-8烷基磺酰基、氨基C1-8亚烷基磺酰基、氨基磺酰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基磺酰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8烷氧基磺酰基、氨基磺酰基和C1-8烷基杂环基。
在另一组实施方案，本发明提供化合物，其中式I化合物的杂芳基为选自以下的多环杂芳基：
Figure BPA00001277505200434
它们任选被1-3个R7d取代基取代，所述取代基独立选自：C1-8烷基、C1-8烷基羰基、C1-8氨基环烷基、氨基C1-8亚烷基羰基、氨基羰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基羰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8烷氧基羰基、氨基羰基、氨基、C1-8烷氧基羰基氨基、芳基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基、羟基、C1-8烷氧基、C1-8烷基磺酰基、氨基C1-8亚烷基磺酰基、氨基磺酰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基磺酰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8烷氧基磺酰基、氨基磺酰基、氧代、卤代、苯基和C1-8烷基杂环基；波纹线表示与分子其余部分连接的连接点。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中：D1为双环杂芳基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D1选自：
Figure BPA00001277505200442
它们任选被1-3个R7d取代基取代，所述取代基独立选自：C1-8烷基、C1-8烷基羰基、氨基C1-8亚烷基羰基、氨基羰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基羰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8烷氧基羰基、氨基羰基、氨基、C1-8烷氧基羰基氨基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基、羟基、C1-8烷氧基、C1-8烷基磺酰基、氨基C1-8亚烷基磺酰基、氨基磺酰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基磺酰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8烷氧基磺酰基、氨基磺酰基、氧代、卤代、苯基和C1-8烷基杂环基；波纹线表示与分子其余部分连接的连接点。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D1选自：
Figure BPA00001277505200451
Figure BPA00001277505200452
波纹线表示与分子其余部分连接的连接点。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D1选自：
Figure BPA00001277505200453
Figure BPA00001277505200454
波纹线表示与分子其余部分连接的连接点。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D1选自：
Figure BPA00001277505200461
Figure BPA00001277505200462
波纹线表示与分子其余部分连接的连接点。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中R5选自
Figure BPA00001277505200463
它们各自任选被1-2个取代基取代，所述取代基独立选自C1-8烷基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基羰基、氨基羰基、羟基、氧代、卤代、卤代C1-8烷基、氨基磺酰基和C3-8环烷基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中R5选自
Figure BPA00001277505200471
它们各自任选被1-2个取代基取代，所述取代基选自C1-8烷基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基羰基、氨基羰基、羟基、氧代、卤代、卤代C1-8烷基、氨基磺酰基和C3-8环烷基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中R5选自
Figure BPA00001277505200472
Figure BPA00001277505200481
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中各E1独立选自C1-8烷基、杂芳基、杂环基、卤代、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、C1-8酰基、氨基C1-8烷基、氨基磺酰基、C1-8烷基磺酰基和酰基氨基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中各E1独立选自
Figure BPA00001277505200482
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中各E1独立选自
Figure BPA00001277505200483
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中R2为氨基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中部分：
Figure BPA00001277505200484
为
其中X和Y各自独立选自：CH2、NH、NCOCH3和S。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中部分：
选自：
其中R8a和R8b各自独立为H、羟基、卤代，或如果在相邻碳原子上可与它们所连接的原子结合形成稠合的苯环；和
R9a和R9b各自独立为H、羟基、卤代，或如果在相邻碳原子上可与它们所连接的原子结合形成稠合的苯环；波纹线表示与分子其余部分连接的连接点。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中部分：
为
其中R8a和R8b各自独立为H，或可与它们所连接的原子结合形成稠合的苯环；R9a和R9b各自独立为H，或可与它们所连接的原子结合形成稠合的苯环；波纹线表示与分子其余部分连接的连接点。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中：
部分
为
其中R8a和R8b各自独立为H，或可与它们所连接的原子结合形成稠合的苯环；波纹线表示与分子其余部分连接的连接点。
在另一组实施方案中，本发明提供化合物，其中部分：
Figure BPA00001277505200503
为
Figure BPA00001277505200504
在另一组实施方案中，本发明提供化合物，其中部分：
Figure BPA00001277505200505
为
Figure BPA00001277505200506
在另一组实施方案中，本发明提供化合物，其中R1c选自：C1-8烷基、羟基C1-8烷基、C1-8烷氧基C1-8烷基和卤代C1-8烷基；
R2选自H、氨基和C1-8烷基氨基；
R3选自H、C1-8烷基、C1-8烷基氨基、氨基C1-8烷基、羧基、氨基C1-8烷基氨基C1-8烷基、C1-8烷氧基C1-8烷基、羟基C1-8烷基、羧基C1-8烷基、C3-8环烷基C1-8烷基、芳氧基C1-8烷基、芳基C1-8烷基、杂芳基C1-8烷基和羟基C1-8烷氧基；或可与R1c或R4和它们所连接的原子结合形成C3-8环烷基或杂环基环；
R4为H或烷基或可与R3和它们所连接的原子结合形成C3-8环烷基或杂环基环。
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
其中X和Y各自独立选自：CH2、NH、NCOCH3和S。
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200513
其中X和Y各自独立选自：CH2、NH、NCOCH3和S。
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200522
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200523
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200524
其中X和Y各自独立选自：CH2、NH、NCOCH3和S。
在另一个实施方案中，本发明提供选自以下的化合物：
Figure BPA00001277505200531
在另一个实施方案中，本发明提供选自以下的化合物：
Figure BPA00001277505200532
Figure BPA00001277505200541
Figure BPA00001277505200551
在另一个实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
在另一个实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200553
在另一个实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200561
在另一个实施方案中，本发明提供选自以下的化合物：
Figure BPA00001277505200562
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中部分：
为
Figure BPA00001277505200564
波纹线表示与分子其余部分的连接点。
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200565
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200571
在另一组实施方案中，本发明提供选自下式的化合物：
Figure BPA00001277505200572
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200573
在另一组实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200574
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中R1a选自C1-8烷基、羟基C1-8烷基、C3-8环烷基、芳基、杂芳基和杂环基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中R1a选自C1-8烷基、C3-8环烷基、芳基、杂芳基和杂环基。
在另一组实施方案中，本发明提供化合物，其中部分：
Figure BPA00001277505200581
选自：
Figure BPA00001277505200582
在另一个实施方案中，本发明提供具有选自式IIa-c结构的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001277505200583
IIa    IIb    IIc
其中：
E2a选自C1-8烷氧基、C1-8烷基C3-8环烷基羰基氨基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基氨基-、C1-8烷氧基羰基氨基和C1-8烷基羰基氨基；
R3选自H、卤代、C1-8烷基和C1-8烷氧基；和
R4选自H、C1-8烷基和C1-8烷氧基C1-8亚烷基。
在另一个实施方案中，本发明提供具有式(IId)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001277505200591
其中R3为H或C1-8烷基。
在另一个实施方案中，本发明提供具有下式的化合物：
Figure BPA00001277505200592
在另一个实施方案中，本发明提供具有式(IIe)的化合物：
Figure BPA00001277505200593
其中：D2为双环芳基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中：D2为任选被1-2个取代基E2b取代的萘基，E2b独立选自卤代、C1-8烷氧基和C1-8烷基氨基羰基。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D2为
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D2为
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，其中D2选自：
Figure BPA00001277505200603
Figure BPA00001277505200604
波纹线表示与分子其余部分的连接点。
在另一个实施方案中，本发明提供具有下式的化合物
Figure BPA00001277505200605
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，所述化合物具有实施例中所示结构。
在另一个实施方案中，本发明提供化合物，所述化合物具有表中所示结构。
可以理解，在另一组实施方案中，任一以上实施方案也可与本文中列举的其它实施方案结合，形成本发明其它实施方案。
b.合成方法
可按已知的有机合成技术制备本发明化合物，此类合成技术包括在实施例中更详细描述的方法。一般而言，可按以下图3制备以上结构(I)化合物，其中除另有说明外，所有取代基定义同上。
可按图3制备具有式I的化合物。用类似于下述条件，通过一步法，通过氯化剂例如亚硫酰氯处理，将羧酸1.1转化为酰氯1.2，用醇例如乙醇酯化，形成化合物1.3。用氯化剂例如磷酰氯将酯1.3二氯化。通过合适的胺例如E1-D1-NH2(有市售或用本领域技术人员已知的方法合成)，在碱性条件下例如用二异丙胺(DIA)，将2，4-二氯嘧啶的4-氯基团选择性置换，得到式1.5化合物。然后将该酯水解，将第二个氯基团用EDC置换，用氨水处理，得到化合物1.7。也可通过线性通路制备苯并三唑醚化合物1.7。将苯并三唑醚基团用合适的胺例如Y1-NH2(有市售或用本领域技术人员已知的方法合成)置换，得到需要的产物I，其中E1-D1和Y1定义同前。
本领域技术人员会认识到，在结构(I)的一些实施方案中，当E1-D1或Y1含端基杂原子时，使用保护基策略可能比较好。可将保护基用本领域技术人员已知的方法除去，得到结构(1)化合物。
通常，可使用作为游离碱的本发明化合物。或者，可使用下述酸加成盐形式的本发明化合物。
c.syk激酶抑制
可在体外或体内评价作为syk激酶抑制剂的给定化合物的活性。在某些实施方案中，可通过细胞测定法测试给定化合物的活性。也可通过生物化学测定法，用分离的激酶确定选择性。
可用相似类型的测定方法评价相对于syk激酶的JAK激酶抑制活性并测定具体的化合物的选择性程度。测定这种抑制的方法之一为测定本发明化合物对下游基因产物上调的作用。在Ramos/IL4测定法中，用细胞因子白介素-4(IL-4)刺激B细胞，导致通过JAK家族激酶JAK1和JAK3磷酸化的JAK/Stat通路激活，激活JAK/Stat通路又将转录因子Stat-6磷酸化并激活。被激活的Stat-6上调的基因之一为低亲和力IgE受体，CD23。为研究抑制剂(例如本文中所述2，4-取代的嘧啶二胺化合物)对JAK1和JAK3激酶的作用，用人IL-4刺激人Ramos B细胞。刺激后10’，将细胞置于细胞内流式细胞计，测定STAT-6磷酸化的程度。刺激后20-24小时，为测定CD23上调，将细胞染色，用流式细胞计分析。与对照相比，减少的磷酸化的STAT-6和/或存在的细胞表面CD23的量证明试验化合物有效抑制JAK激酶通路。
另外，Ramos B细胞的IL-6刺激还诱导JAK 1、2和Tyk2，导致Stat-3和Erk磷酸化。刺激后10’，将细胞置于细胞内流式细胞计，测定化合物抑制这些磷酸化事件的能力。为具体测定JAK2的活性，需使用由Stat5控制的表达β-内酰胺酶报告基因的CellSensor irf1-bla HEL细胞系(Invitrogen，Carlsbad，CA)。这些细胞表达组成型活性JAK2突变体(JAK2V617F)，该突变体自然存在于骨髓增生瘤中(Constantinescu，S.等，Trends Biochem.Sci.，2008；33：122-31)。用减少的β-内酰胺酶报告基因表达量测定化合物的JAK2抑制活性。
还可通过测定本文中所述本发明化合物对A549肺上皮细胞和U937细胞的作用表征本发明化合物的活性。A549肺上皮细胞和U937细胞上调ICAM-1(CD54)表面表达，以响应多种不同刺激。因此，用ICAM-1表达作为示值读数，可在相同细胞类型中评价试验化合物对不同信号事件通路的作用。用通过IL-1β受体的IL-1β刺激，可激活TRAF6//NFκB通路，导致ICAM-1上调。IFNγ通过激活JAK1/JAK2通路诱导ICAM-1上调。可通过流式细胞计得出的化合物剂量曲线定量ICAM-1，并计算EC50值。
还可通过测定本文中所述本发明化合物对A549肺上皮细胞和U937细胞的作用表征本发明化合物的活性。A549肺上皮细胞和U937细胞上调ICAM-1(CD54)表面表达，以响应多种不同刺激。因此，用ICAM-1表达作为示值读数，可在相同细胞类型中评价试验化合物对不同信号事件通路的作用。用通过IL-1β受体的IL-1β刺激，激活TRAF6/NFκB通路，导致ICAM-1上调。IFN.γ.通过激活JAK1/JAK2通路诱导ICAM-1上调。可通过流式细胞计得出的化合物剂量曲线定量ICAM-1，并计算EC50值。该类型测定方法的举例在实施例中有更详细的描述。
按本文中所述测定方法测定，本文中所述活性化合物通常抑制JAK激酶通路，它们的IC50为约1mM或更小。当然，有经验的技师会意识到，显示较小IC50(在例如100μM、75μM、50μM、40μM、30μM、20μM、15μM、10μM、5μM、1μM、500nM、100nM、10nM、1nM或更小数量级)的化合物尤其可用于治疗用途。在其中需要对特定细胞类型具有特异性活性的情况下，测定化合物对需要的细胞类型的活性，对其它细胞类型缺乏活性的化合物进行逆筛选(counter-screened)。在此类逆筛选中，对于不同情况，需要的“无活性”的程度或需要的活性与非活性的比例可不同，可由使用者选择。
活性化合物通常也可抑制IL-4刺激的在B-细胞中的CD23的表达，它们的IC50为约20μM或更小，通常为约10μM、1μM、500nM、100nM、10nM、1nM或更小。可使用的合适的测定方法为在实施例“用于用IL-4刺激的Ramos B细胞系的测定方法”中描述的测定方法。在一些实施方案中，按实施例中所述测定方法，本发明活性化合物的IC50小于或等于5μM、大于5μM但小于20μM、大于20μM，或大于20μM但小于50μM。
活性化合物通常还可抑制由U937或A549细胞暴露于IFNγ诱导的ICAM1(CD54)表达，活性化合物的IC50为20μM或更小，通常为约10μM、1μM、500nM、100nM、10nM、1nM或更小。可通过功能细胞测定方法，用分离的A549或U937细胞系测定抗在IFNγ刺激的细胞中表达ICAM(CD54)的IC50。可使用的合适的测定法为实施例中所述测定方法，分别为“用IFNγ刺激的A549表皮细胞系”和“U937 IFNγICAM1 FACS测定”。在一些实施方案中，按实施例中所述测定方法，本发明活性化合物的IC50小于或等于20μM、大于20μM或大于20μM但小于50μM。
d.组合物和给予方法
本发明还提供组合物，该组合物含一种或多种式(I)化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药，以及药学上可接受的载体或稀释剂。可以意识到，在本发明中，可使式(I))化合物中的官能团衍生，得到前药衍生物，该衍生物可在体内再转化为母体化合物。此类前药的实例包括生理学上可接受的和代谢易变酯衍生物，例如由该化合物的羟基衍生的甲氧基甲酯、甲硫基甲酯或新戊酰氧基甲酯，或由该化合物的氨基衍生的氨基甲酰基部分。另外，可在体内产生母体式(I)化合物的类似于代谢易变酯或氨基甲酰基的式(I)化合物的任何生理上可接受的等价物也在本发明范围内。
本文中使用的术语“药学上可接受的盐”是指任何酸或碱加成盐，在药学剂量的盐中，它们的相反离子对患者无毒。许多药学上可接受的盐在药学领域中熟知。如果本发明化合物的药学上可接受的盐用于这些组合物，则优选那些由无机或有机酸和碱衍生的盐。此类酸式盐包括以下：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、lucoheptanoate、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基-丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐、氢卤酸盐(例如盐酸盐和氢溴酸盐)、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、氨基磺酸盐、丙二酸盐、水杨酸盐、亚甲基-双-b-羟基萘甲酸盐、2，5二羟苯甲酸盐(gentisate)、羟乙磺酸盐、二-对甲苯酰酒石酸盐、乙磺酸盐、环己基氨基磺酸盐、奎尼酸盐等。药学上可接受的碱加成盐包括但不限于由碱或碱土金属碱或常用有机碱例如三乙胺、吡啶、哌啶、吗啉、N-甲基吗啉衍生的那些盐；铵盐；碱金属盐例如钠和钾盐；碱土金属盐例如钙和镁盐；由有机碱形成的盐例如二环己基胺盐、N-甲基-D-葡糖胺，以及由氨基酸例如精氨酸、赖氨酸等形成的盐。
另外，还可用试剂如低级烷基卤例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯例如硫酸二甲基、二乙基、二丁基和二戊基酯；长链烷基卤例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤例如苄基溴和苯乙基溴等将含碱性氮的基团季铵化。由此得到水或油溶性或可分散产物。
也可通过引入合适的官能团修饰用于本发明组合物和方法的化合物以增加选择性生物性质。此类修饰在本领域中已知，包括使增加进入给定生物系统(例如血液、淋巴系统、中枢神经系统等)的生物渗透、增加口服利用度、增加溶解度以便通过注射给药、改变代谢和改变排泄速度的那些修饰。
可通过本领域熟知的方法例如常规制粒、混合、溶解、包囊、冻干或乳化方法等制备本发明药用组合物。可以包括颗粒、沉淀或粒子、粉末在内的各种形式制备组合物，包括冻干、旋转干燥或喷雾干燥粉末、无定形粉末、片剂、胶囊剂、糖浆、栓剂、注射剂、乳剂、酏剂、混悬液或溶液。制剂可任选含稳定剂、pH调节剂、表面活性剂、生物利用度改性剂和这些的组合。
术语“单位剂量形式”是指适合人患者和其它哺乳动物用的单一剂量的物理上分离的单元，各单元含计算的产生需要的起效、耐受性和/或疗效的预定量的药物和药用赋形剂(例如安瓿)。另外，可制备较浓组合物，然后可由该浓组合物制备较稀的单位剂量组合物。因此，较浓组合物须基本上含大于一种或多种syk抑制剂的量，例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多倍。
本领域技术人员已知制备此类剂型的方法(参见例如REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES，第18版，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1990))。另外，还可用合成有机化学领域中的技术人员已知的标准方法，例如按照J.March，高等有机化学：反应、机制和结构(Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms and Structure)，第4版(纽约：Wiley-Interscience，1992)制备本发明syk抑制剂的药学上可接受的盐(例如酸加成盐)并加入组合物中。
组合物通常含常规药物载体或赋形剂，还可含其它药用物质、载体、辅料、稀释剂、组织渗透促进剂、稳定剂等。优选，组合物含约0.01％-约90％，优选约0.1％-约75％，更优选约0.1％-50％，还更优选约0.1％-10％(重量)的一种或多种syk抑制剂，其余部分由合适的药物载体和/或赋形剂组成。可通过本领域中熟知的方法例如REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES(同上)，使合适的赋形剂与具体组合物和给药通路相匹配。
可用于这些组合物的药学上可接受的载体包括离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂；血清蛋白例如人血清白蛋白；缓冲物质例如磷酸盐；甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐；胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素类物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛酯。
合适的赋形剂的实例包括但不限于乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄芪胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、盐水、糖浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和聚丙烯酸，例如卡波普。组合物还可含润滑剂例如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂；悬浮剂；防腐剂例如甲基-、乙基-和丙基-羟基-苯甲酸酯；pH调节剂例如无机和有机酸和碱；甜味剂；和矫味剂。
有利的是，可通过任何可接受的给药模式给予含一种或多种syk抑制剂和一种或多种合适的药物赋形剂的组合物。因此，给药可以是例如口服、局部、静脉内、皮下、经皮、透皮、肌内、关节内、肠胃外、动脉内、皮内、心室内、颅内、腹膜内、损害内、鼻内、直肠、阴道、吸入或通过植入储库。本文中使用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内、肝内、损害内和颅内注射或输注技术。优选，通过口服或静脉内给予组合物。可将本发明制剂设计为速效、速释或长效。再另外，可通过局部而非全身方式给予化合物，例如给予(例如注射)缓释制剂。按照代表性实施方案，本发明组合物可配制为给予哺乳动物，优选人的药物。
可重复给予含一种或多种syk抑制剂的本发明组合物，例如至少2、3、4、5、6、7、8或更多次，或可通过连续输注给予组合物。给药的合适部位包括但不限于皮肤、支气管、肠胃、肛门、阴道、眼睛和耳朵。制剂可采用固体、半固体、冻干粉末形式或液体剂型，例如片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、溶液、混悬液、乳液、栓剂、滞留型灌肠剂、霜剂、软膏剂、洗剂、凝胶剂、气雾剂等，优选适合简单给予准确剂量的单位剂型。
本发明药用组合物可以为任何口服可接受的剂型，它们包括片剂、胶囊剂、扁囊剂、乳液、混悬液、溶液、糖浆、酏剂、喷雾剂、大丸剂(boluses)、锭剂、散剂、颗粒剂和缓释制剂。用于口服给药的合适的赋形剂包括药用级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、明胶、蔗糖、碳酸镁等。在用于口服的片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂例如硬脂酸镁。对于胶囊剂，有用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。当口服用药需要水混悬液时，将活性成分与乳化和悬浮剂混合。也可酌情加入一些甜味剂、矫味剂或着色剂。
在某些实施方案中，组合物采用丸剂、片剂或胶囊剂形式，因此，组合物可含与一种或多种syk抑制剂联合一起的稀释剂，例如乳糖、蔗糖、磷酸氢二钙等；崩解剂，例如淀粉或其衍生物；润滑剂，例如硬脂酸镁等；和/或粘合剂，例如淀粉、阿拉伯胶、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、纤维素及其衍生物。可通过本领域技术人员已知的任何压制或模塑方法制备片剂。可通过在合适的机器中压制任选与辅助成分(例如粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂或分散剂)混合的自由流动形式(例如粉末或颗粒)的syk抑制剂，制备压制片剂。可通过在合适的机器中塑造syk抑制剂与任何合适的载体的粉末混合物制备模塑片剂。
或者，本发明药用组合物可以为用于直肠给药的栓剂形式。可通过使药物与合适的在室温下为固体但在直肠温度下为液体并从而在直肠中释放药物的合适的非刺激性赋形剂混合，制备这些栓剂。此类材料包括可可豆脂、蜂蜡、聚乙二醇(PEG)、硬脂肪和/或氢化椰油甘油酯。适合直肠给药的组合物也可含直肠灌肠剂单位，该单位含一种或多种syk抑制剂和药学上可接受的溶媒(例如50％乙醇水溶液或盐水溶液)，此类溶媒与直肠和/或结肠在生理上相容。直肠灌肠剂单位含被惰性盖(inert cover)保护的涂药器尖端，该尖端优选由聚乙烯组成，用润滑剂例如白凡士林润滑，优选由单向阀保护，以阻止发出的药物回流。直肠灌肠剂单位还具有足够长度，优选2英寸，将其通过肛门插入结肠。
可通过将一种或多种syk抑制剂和任选一种或多种药学上可接受的辅料溶于或分散在载体例如盐水溶液、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等中，形成例如用于口服、局部或静脉内给药的溶液或混悬液，制备液体组合物。可用无菌液体例如油、水、乙醇及其组合制备液体混悬液或溶液形式的药物制剂。对于口服或肠胃外给药，可加入药剂上合适的表面活性剂、悬浮剂或乳化剂。混悬液可含油，例如花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油和橄榄油。混悬液制剂也可含脂肪酸的酯，例如油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯；脂肪酸甘油酯和乙酰脂肪酸甘油酯。混悬液制剂可包含醇，例如乙醇、异丙醇、十六醇、甘油和丙二醇。醚例如聚(乙二醇)；石油烃例如矿物油和凡士林，水也可用于混悬液制剂。
本发明药用组合物也可为局部给药形式，尤其是当治疗靶标包括通过局部施用容易进入的区域或器官时，这些器官的疾病包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病。容易制备用于这些区域或器官中各区域或器官的合适的局部制剂。对于局部给药，含一种或多种syk抑制剂的组合物可为乳液、洗剂、凝胶剂、泡沫、霜剂、胶冻、溶液、混悬液、软膏剂和透皮贴剂形式。
可通过直肠栓剂制剂(参见以上)或合适的灌肠剂制剂实现在下肠道局部施用。也可使用局部透皮贴剂。对于局部施用，可配制合适的软膏剂形式的药用组合物，该软膏剂含悬浮于或溶于一种或多种载体的活性成分。用于局部给予本发明化合物的载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，可配制合适的洗剂或霜剂形式的药用组合物，这些洗剂或霜剂含悬浮于或溶于一种或多种药学上可接受的载体的活性成分。合适的载体包括矿物油、司盘-60、吐温-60、鲸蜡酯、蜡、鲸蜡醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。
也可通过鼻气雾剂或吸入给予本发明药用组合物。对于通过吸入递药，可通过喷雾器递送干燥粉末或液体形式的组合物。按照药物制剂领域中已知技术制备此类组合物，且可在盐水中，用苯甲醇或其它合适的防腐剂、加强生物利用度的吸收促进剂、氟碳化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂制备溶液形式的组合物。
对于眼用，可在等渗调pH的无菌盐水中，配制微粉化混悬液形式的药用组合物，或优选在等渗调pH的无菌盐水中，用或不用防腐剂例如苯扎氯铵配制溶液形式的药用组合物。
对于肠胃外给药，组合物可为无菌注射液和无菌包装粉末形式。优选，在pH约4.5-约7.5中配制注射液。
无菌注射形式的本发明组合物为水或油混悬液。可按本领域中已知技术，用合适的分散或湿润剂和悬浮剂配制这些混悬液。无菌注射制剂也可为溶于或悬浮于无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂的无菌注射溶液或混悬液，例如溶于1，3-丁二醇的溶液。可使用的可接受的溶媒和溶剂包括水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌非挥发油通常还用作溶剂或悬浮基质。为此，可使用包括合成的甘油单酯或二酯在内的任何品牌的非挥发油。与天然药学上可接受的油例如橄榄油或蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙基化形式相同，脂肪酸例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射制剂。这些油溶液或混悬液也可含长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或通常用于包括乳液和混悬液在内的药学上可接受的剂型的制剂中的类似分散剂。其它常用的表面活性剂例如吐温、司盘和通常用于制备药学上可接受的固体、液体或其它剂型的其它乳化剂或生物利用度促进剂也可用于制剂目的。可配制通过注射例如大剂量注射或连续输注用于肠胃外给药的化合物。注射用单位剂型可以在安瓿或多剂量容器中。
也可提供冻干形式的本发明组合物。此类组合物可包含给药前用于复溶的缓冲剂例如碳酸氢盐，或冻干组合物中可包含缓冲剂，用于用例如水复溶。冻干组合物还可含合适的血管收缩药，例如肾上腺素。可通过注射器提供冻干组合物，任选与用于复溶的缓冲剂包装在一起，以便可立即给予患者该复溶组合物。
任何含有效量的化合物的以上剂型均在常规实验范围和本发明范围内。可根据给药通路和剂型调整治疗有效剂量。本发明代表性化合物为显示高治疗指数的制剂。治疗指数是毒性与疗效的剂量比例，可按LD50与ED50的比例表示该指数。LD50为使50％种群致死的剂量，ED50为在50％种群中达到治疗有效的剂量。通过标准药学方法，在动物细胞培养基或实验动物中测定LD50和ED50。
除上述那些代表性剂型外，本领域技术人员通常还已知其他的药学上可接受的赋形剂和载体和剂型，且包括在本发明中。应理解，任何具体患者的特定剂量和治疗方案要取决于多种因素，它们包括使用的具体化合物的活性、患者的年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食状况、给药时间、排泄速度、联合药物、治疗医师的判断和所治疗的具体疾病的严重性。活性成分的量还取决于具体化合物和(如果存在的话)组合物中的其它治疗药物。
e.使用方法
本发明提供在有需要的患者(例如人或非人)中抑制或减少syk活性和治疗或缓解syk相关状态、症状、状况、病症或疾病的方法。在一个实施方案中，syk相关状态、症状、状况、病症或疾病至少部分由syk激酶活性介导。在更具体的实施方案中，本发明提供治疗至少部分由syk激酶活性介导的疾病或病症的方法，所述疾病或病症为心血管病、炎性疾病或自身免疫疾病。
在一个实施方案中，本发明提供在哺乳动物中预防或治疗特征在于不需要的血栓形成的疾病的方法，该方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的本发明化合物的步骤。此类疾病包括但不限于再狭窄、急性冠状动脉综合征、心肌梗塞、不稳定心绞痛、顽固性心绞痛、血栓溶解治疗后或冠状动脉血管成形术后发生的闭塞性冠状动脉血栓形成、血栓形成介导的脑血管综合征、栓塞性中风、血栓形成中风、一过性局部缺血发作、静脉血栓形成、深静脉血栓形成、肺栓塞、凝血病、弥散性血管内凝血、血栓形成性血小板减少性紫癜、血栓闭塞性脉管炎、与肝素引起的血小板减少症有关的血栓形成疾病、与体外循环有关的血栓形成并发症、与器械操作法(例如心脏或其它血管内导管插入)有关的血栓形成并发症、主动脉内气囊泵、冠状动脉支架或人造心脏瓣膜、需要安装假体装置的情况等。
在再一个实施方案中，本发明提供治疗以下疾病的方法：血栓形成、免疫性血小板减少性紫癜、肝素引起的血小板减少症、扩张型心肌病、镰状细胞病、动脉粥样硬化症、心肌梗塞、血管炎、不稳定心绞痛或急性冠状动脉综合征。
在另一个实施方案中，本发明还提供治疗以下疾病的方法：过敏、哮喘、风湿性关节炎、B细胞介导的疾病(例如非霍奇金氏淋巴瘤)、抗磷脂综合征、红斑狼疮、银屑病、多发性硬化、晚期肾病或慢性淋巴细胞白血病。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗溶血性贫血或免疫血小板减少性紫癜的方法。
本文中所述化合物还是JAK激酶的有效和/或选择性抑制剂。因为该活性，化合物可用于多种体外、体内和离体环境，以调节或抑制JAK激酶活性、其中JAK激酶起作用的信号事件级联以及受此类信号事件级联影响的生物反应。例如，在一个实施方案中，可用化合物在体外或体内、在基本上表达JAK激酶的任何细胞类型(例如，其中例如主要表达JAK3的造血细胞)中抑制JAK激酶。也可用它们调节其中JAK激酶，尤其是JAK3起作用的信号转导级联。此类依赖JAK的信号转导级联包括但不限于细胞因子受体的信号事件级联，细胞因子受体的信号事件级联涉及共有γ链，例如IL-4、IL-7、IL-5、IL-9、IL-15和IL-21，或IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21受体信号事件级联。也可在体外或体内使用化合物，以调节，尤其是抑制受此类依赖JAK的信号转导级联影响的细胞或生物反应。此类细胞或生物反应包括但不限于IL-4/ramos CD23上调和IL-2介导的T细胞增殖。重要的是，可用所述化合物在体内抑制JAK激酶作为用于治疗或预防全部或部分由JAK激酶活性介导的疾病(本文中称为“JAK激酶介导的疾病”)的治疗方法。可用所述化合物治疗或预防的JAK激酶介导的疾病的非限制性实例包括但不限于以下：过敏；哮喘；自身免疫病例如移植排斥(例如肾、心脏、肺、肝脏、胰腺、皮肤、小肠、大肠、移植物抗宿主病(HVGR)和移植物抗宿主反应(GVHR))、类风湿性关节炎和肌萎缩性侧索硬化；T细胞介导的自身免疫病，例如多发性硬化、银屑病和斯耶格伦综合征；II型炎性疫病，例如血管炎症(包括脉管炎、动脉炎、动脉粥样硬化症和冠状动脉病)；中枢神经系统疾病，例如中风；肺病例如闭塞性支气管炎和原发性肺动脉高血压；实体瘤、迟发型IV过敏反应；以及血液系统恶性疾病例如，白血病和淋巴瘤。
可按所述方法治疗或预防的至少部分由JAK激酶介导的疾病的实例包括但不限于过敏、哮喘、自身免疫病例如移植排斥(例如肾、心脏、肺、肝脏、胰腺、皮肤、移植物抗宿主病(HVGR)等)、类风湿性关节炎和肌萎缩性侧索硬化、多发性硬化、银屑病和斯耶格伦综合征、II型炎性疾病例如血管炎(包括脉管炎、动脉炎(ateritis)、动脉粥样硬化症和冠状动脉病)或其它炎性疫病，例如骨关节炎、炎性肠疾病、溃疡性结肠炎、局限性回肠炎、自发性炎性肠疾病、过敏性肠综合征、痉挛性结肠、低度伤疤(例如硬皮病、增加的纤维变性、疤痕疙瘩、手术后疤痕、肺纤维变性、血管痉挛、偏头痛、再灌注损伤和后心肌梗塞)，以及干燥复征或综合征；中枢神经系统疾病例如中风；肺病例如闭塞性支气管炎和原发性肺动脉高血压、迟发性或细胞介导的IV型过敏和实体癌，以及血液系统恶性疾病，例如白血病和淋巴瘤。
在另一个实施方案中，本发明提供抑制JAK激酶活性的方法，该方法包括使JAK激酶与有效抑制JAK激酶活性的量的化合物接触，其中所述化合物选自本发明化合物。在本文中所述方法的一些实施方案中，在体内实施所述方法。
在另一个实施方案中，本发明提供抑制JAK激酶活性的方法，该方法包括在体外使JAK3激酶与有效抑制JAK激酶活性的量的化合物接触，其中化合物选自本发明化合物。
在特定实施方案中，可用所述化合物在接受者中治疗和/或预防器官和/或移植排斥(即治疗和/或防止同种异体排斥)。可通过接受者的细胞介导的或体液免疫反应对存在于供体细胞膜上的移植物(组织相容性)抗原排斥同种异体移植物。最强的抗原受称为人A类白细胞(HLA)抗原的遗传loci的复合物的支配。与ABO血液类抗原一起，它们是可在人中可检测到的主要移植抗原。
移植后排斥通常可分为3类：超急性，发生在移植后数小时-数天；急性，发生在移植后数天-数月；和慢性，发生在移植后数月-数年。
超急性排斥主要通过攻击移植组织的宿主抗体产生造成。在超急性排斥反应中，移植后，很快在移植血管中观察到抗体。随即，发生血管凝块，导致局部缺血，最后坏死和死亡。移植梗塞对已知的免疫抑制疗法不产生应答。因为HLA抗原可在体外鉴定，用移植前筛选显著减少超急性排斥。因为该筛选，超急性排斥目前相对少见。
据认为，急性排斥由在移植组织中蓄积的抗原特异性细胞介导。由T细胞介导的对抗原的免疫反应(即HVGR或GVHR)是急性排斥的主要机制。这些细胞蓄积导致对移植组织的损害。据信，CD4+辅助T-细胞和CD8+细胞毒T-细胞参与了该过程，由供体和宿主树状细胞提供抗原。CD4+辅助T-细胞帮助使其它效应细胞例如巨噬细胞和嗜酸性粒细胞募集到移植物。还涉及接入(accessing)T细胞激活信号转导级联(例如CD28、CD40L和CD2级联)。
在多种情况下，细胞介导的急性排斥可通过强化免疫疗法反转。成功反转后，严重损害的移植物的元件通过纤维化愈合，移植物的其余部分似乎正常。急性排斥处理后，免疫抑制药物的剂量可减至极低水平。
慢性排斥是在肾移植中存在的特殊问题，通常隐性进行，尽管增加免疫抑制治疗。据认为，其大部分由于细胞介导的IV型超敏所致。该病理特性不同于急性排斥的病理特性。动脉内皮主要涉及广泛增生，该增生可逐渐使血管腔闭塞，导致局部缺血、纤维化、内膜增厚和动脉粥样硬化改变。慢性排斥主要由于移植血管系统的进行性消失所致，象缓慢的血管炎过程。
在IV型超敏中，当抗原分别与I类或II类MHC分子复合时，CD8细胞毒T-细胞和CD4辅助T细胞识别细胞内或细胞外合成的抗原。巨噬细胞与提供抗原的细胞具有相同的功能并释放IL-1，IL-1促进辅助T-细胞增殖。辅助T-细胞释放干扰素γ和IL-2，干扰素γ和IL-2一起调节由巨噬细胞激活介导的迟发型活性过强反应(hyperactivity)和由T细胞介导的免疫。在器官移植的情况下，当接触时，细胞毒T-细胞摧毁移植物细胞。
因为JAK激酶在T细胞激活中起关键作用，所以可用本文中所述化合物治疗和/或预防移植排斥的多个方面，尤其可用于治疗和/或预防至少部分由T细胞介导的排斥反应，例如HVGR或GVHR。也可用所述化合物在移植物接受者，尤其是在肾移植物接受者中治疗和/或预防移植慢性排斥。也可在将组织或器官移植到接受移植者前，给予组织或器官所述化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗T细胞介导的自身免疫疾病的方法，该方法包括给予患这种自身免疫疾病的患者有效治疗自身免疫疾病的量的化合物，其中所述化合物选自本发明化合物。在一些方法实施方案中，自身免疫疾病为多发性硬化(MS)、银屑病或斯耶格伦综合征。此类自身免疫疾病包括但不限于通常指定为单器官或单细胞型自身免疫病的那些自身免疫病和通常称为涉及全身自身免疫疾病的那些自身免疫疾病。通常称为单器官或单细胞型自身免疫病的疾病的非限制性实例包括：桥本甲状腺炎、自身免疫溶血性贫血、恶性贫血病的自身免疫萎缩性胃炎、自身免疫脑脊髓炎、自身免疫睾丸炎、古德帕斯彻病、自身免疫血小板减少症、交感性眼炎、重症肌无力、格雷夫斯病、原发性胆汁性肝硬变、慢性活动性肝炎、溃疡性结肠炎和膜性肾小球肾炎。通常称为涉及全身性自身免疫病的疾病的非限制性实例包括：系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、斯耶格伦综合征、赖特综合征、多肌炎-皮肌炎、全身性硬皮病、结节性多动脉炎、多发性硬化和大疱性类天疱疮。可为β-细胞(体液)类或T细胞类的其它自身免疫病包括科根综合征、关节强硬性脊髓炎、韦格纳肉芽肿病、自身免疫脱发、I型或青少年糖尿病和甲状腺炎。
可用此类前药治疗或预防的自身免疫病的类型包括涉及因对免疫原或对内源性和/或外源性来源的抗原的体液和/或细胞介导的反应发生组织损伤的那些病症。此类疾病通常称为与非致敏性(即II型、III型和/或IV型)过敏反应有关的疾病。
I型过敏反应通常是因与特异性外源性抗原接触后药理活性物质释放例如从肥大和/或嗜碱性细胞中释放组织胺所致。如上所述，此类I型反应在多种疾病中起作用，这些疾病包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎等。
当免疫球蛋白与细胞或组织的抗原成分或与细胞或组织紧密共轭的抗原或半抗原反应时，产生II型过敏反应(又称为细胞毒、依赖溶细胞补体或细胞刺激性过敏反应)。通常与II型过敏反应有关的疾病包括但不限于自身免疫溶血性贫血、新生儿溶血病和古德帕斯彻疾病。
III型过敏反应(又称为毒性综合、可溶性综合或免疫综合过敏反应)是由在血管或组织中的可溶性循环抗原-免疫球蛋白复合物的沉淀所致，伴随在免疫复合物沉淀的位置发生急性炎症反应。原型III型反应疾病的非限制性实例包括阿图斯反应、类风湿性关节炎、血清病、系统性红斑狼疮、某些类型的肾小球性肾病、多发性硬化和大疱性类天疱疮。
IV型过敏反应(通常称为细胞、细胞介导的、迟发型或结核菌素型过敏反应)通过与特定抗原接触导致的敏化的T淋巴细胞造成。与IV型反应有关的疾病的非限制性实例为接触性皮炎和同种异体移植排斥。
可用结构式(I)和(Ia)前药治疗或预防与任何以上非致敏性过敏反应相关的自身免疫病。具体地说，可用所述方法治疗或预防通常表征为单器官或单细胞型自身免疫病的那些自身免疫病，它们包括但不限于：桥本甲状腺炎、自身免疫溶血性贫血、自身免疫萎缩性胃炎、恶性贫血病、自身免疫脑脊髓炎、自身免疫睾丸炎、古德帕斯彻疾病、自身免疫血小板减少症、交感性眼炎、重症肌无力、格雷夫斯疾病、原发性胆汁性肝硬变、慢性活动性肝炎、溃疡性结肠炎和膜性肾小球肾炎，以及通常表征为与全身性自身免疫病有关的那些自身免疫病，它们包括但不限于：系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、斯耶格伦综合征、赖特综合征、多肌炎-皮肌炎、全身性硬皮病、结节性多动脉炎、多发性硬化和大疱性类天疱疮。
本领域技术人员会意识到，许多上列自身免疫病与严重症状有关，甚至在其中所述自身免疫疾病未缓解的情况下，症状的缓解可提供重要的治疗利益。
可单独应用使用本文中所述化合物的疗法，或可联合其它普通免疫抑制疗法，例如联合以下药物或方法：巯嘌呤；皮质类固醇，例如泼尼松；甲基泼尼松龙和泼尼松龙；烷化剂，例如环磷酰胺；神经钙蛋白抑制剂，例如环胞菌素、西罗莫司和他克莫司；肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)的抑制剂，例如麦考酚酸、麦考酚酸莫酯和硫唑嘌呤；和设计的抑制细胞免疫但保留接受者体液免疫反应完整的物质，它们包括各种抗体(例如抗淋巴细胞球蛋白(ALG)、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、单克隆抗T细胞抗体(OKT3))和放射。可按它们的标准或常用剂量，按市售形式的药物附带的处方信息(也可参见：2006版The Physician′s Desk Reference中的处方信息)说明使用这些物质，文献中的内容通过引用结合到本文中。目前可从Salix Pharmaceuticals，Inc.得到商标名为AZASAN的硫唑嘌呤；目前可从Gate Pharmaceuticals，Inc.，得到商标名为PURINETHOL的巯嘌呤；目前可从Roxane Laboratories，Inc.得到泼尼松和泼尼松龙；目前可从Pfizer得到甲基泼尼松龙；目前可从Wyeth-Ayerst得到商标名为RAPAMUNE的西罗莫司(雷帕霉素)；目前可从Fujisawa得到商标名为PROGRAF的他克莫司；目前可从Novartis得到商标名为SANDIMMUNE和可从Abbott得到商标名为GENGRAF的环胞菌素；目前可从Roche得到商标名为CELLCEPT和从Novartis得到商标名为MYFORTIC的IMPDH抑制剂，例如麦考酚酸莫酯和麦考酚酸；目前可从Glaxo Smith Kline得到商标名为IMURAN的硫唑嘌呤；和目前可从Ortho Biotech得到商标名为ORTHOCLONE、从Novartis得到商标名为SIMULECT(巴利昔单抗)和从Roche得到商标名为ZENAPAX(达珠单抗)的抗体。
在另一个实施方案中，可将所述化合物与syk激酶抑制剂联合给予。syk激酶为已知在Fcy受体信号事件和其它信号事件级联例如涉及B细胞受体信号事件的那些中起关键作用的酪氨酸激酶(Turner等，(2000)，Immunology Today 21：148-154)和中性粒细胞中的整联蛋白β(1)、β(2)和β(3)(Mocsai等，(2002)，Immunity 16：547-558)。例如，syk激酶在肥大细胞中的高亲和力IgE受体信号事件中起关键作用，该信号事件导致引发过敏性攻击的多种化学介质激活并随后释放。但是，与协助调节涉及迟发型或细胞介导的IV型过敏反应的通路的JAK激酶不同，syk激酶协助调节涉及速发型IgE介导的I型过敏反应的通路。影响syk通路的一些化合物可能影响也可能不影响JAK通路。
有关合适的syk抑制性化合物的描述参见例如2003年1月31日提交的专利申请序列号10/355,543(公布号2004/0029902)；WO 03/063794；2003年7月29日提交的专利申请序列号10/631,029；WO 2004/014382；2004年7月30日提交的专利申请序列号10/903,263；2004年7月30日提交的PCT/US2004/24716(WO005/016893)；2004年7月30日提交的专利申请序列号10/903,870；2004年7月30日提交的PCT/US2004/24920；2004年11月24日提交的专利申请序列号60/630,808；2005年1月19日提交的专利申请序列号60/645,424；和2005年2月18日提交的专利申请序列号60/654,620，这些文献公开的内容通过引用结合到本文中。可单独使用本文中所述和syk抑制性化合物，或与一种或多种上述常规移植排斥治疗联用。
在一个特定实施方案中，可用所述化合物在患者中治疗或预防这些疾病，这些患者对syk抑制性化合物治疗或目前对特定疾病进行的其它治疗方法之一初期不产生应答(耐药)或变为不应答。所述化合物也可与syk抑制性化合物联合用于对syk-化合物耐药或不应答的患者。在下文中提供与所述化合物联合给予的合适的syk-抑制化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗T细胞介导的自身免疫疾病的方法，该方法包括给予患这种自身免疫疾病的患者有效治疗自身免疫疾病的量的化合物，其中所述化合物选自本发明化合物，且将该化合物与抑制syk激酶的化合物联合给予，抑制syk激酶的化合物的IC50为至少10μM。
在另一个实施方案中，本发明提供在接受移植者中治疗或预防同种异体移植排斥的方法，该方法包括给予接受移植者有效治疗或预防排斥的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。在再一个实施方案中，在将组织或器官移植给接受移植者前，给予组织或器官所述化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供在接受移植者中治疗或预防同种异体移植排斥的方法，其中排斥为急性排斥，该方法包括给予接受移植者有效治疗或预防排斥的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供在接受移植者中治疗或预防同种异体移植排斥的方法，其中排斥为慢性排斥，该方法包括给予接受移植者有效治疗或预防排斥的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供在接受移植者中治疗或预防同种异体移植排斥的方法，其中排斥由HVGR或GVHR介导，该方法包括给予接受移植者有效治疗或预防排斥的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供在接受移植者中治疗或预防同种异体移植排斥的方法，其中所述同种异体移植物选自肾、心脏、肝脏和肺，该方法包括给予接受移植者有效治疗或预防排斥的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供在接受移植者中治疗或预防同种异体移植排斥的方法，其中所述同种异体移植物选自肾、心脏、肝脏和肺，该方法包括给予接受移植者有效治疗或预防排斥的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物，其中将该化合物与另一种免疫抑制剂联合给予。
在另一个实施方案中，本发明提供在接受移植者中治疗或预防同种异体移植排斥的方法，其中所述同种异体移植物选自肾、心脏、肝脏和肺，该方法包括给予接受移植者有效治疗或预防排斥的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物，其中将该化合物与另一种免疫抑制剂联合给予，其中所述免疫抑制剂选自环胞菌素、他克莫司、西罗莫司、IMPDH抑制剂、麦考酚酸、麦考酚酸莫酯、抗T细胞抗体和OKT3。
本文中所述化合物为IL-4信号事件的细胞因子调节剂。因此，所述化合物可延缓I型过敏反应的发生。因此，在一个特定实施方案中，可用化合物治疗此类反应，因此，可预防与这种过敏反应有关的、由这种过敏反应介导或造成的疾病(例如过敏)。例如，在预计暴露于抗原前，过敏患者可服用一种或多种本文中所述JAK选择性化合物，以延迟过敏反应发作或恶化或消除所有可能发生的过敏反应。
当用于治疗或预防此类疾病时，可以一种或多种化合物的混合物形式单独，或以与可用于治疗此类疾病和/或与此类疾病有关的症状的其它药物形成的混合物或联合药物形式，给予所述化合物。也可按与可用于治疗其它病症或疾病的药物形成的混合物或联合药物的形式给予所述化合物，所述其它药物为例如甾体类、膜稳定剂、5-脂氧化酶(5LO)抑制剂、白三烯合成和受体抑制剂、IgE同工型开关或IgE合成的抑制剂、IgG同工型开关或IgG合成的抑制剂，β-激动剂、类胰蛋白酶抑制剂、阿司匹林、环氧合酶(COX)抑制剂、甲氨蝶呤、抗TNF药物、抗CD20抗体、PD4抑制剂、p38抑制剂、PDE4抑制剂和抗组织胺药物等，这些仅是示例的一小部分。可按前药或含活性化合物或前药的药用组合物的形式给予所述化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗或预防IV型过敏反应的方法，该方法包括给予患者有效治疗或预防过敏反应的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗或预防IV型过敏反应的方法，该方法实际上为预防性方法，该方法包括给予患者有效治疗或预防过敏反应的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物，且在暴露于过敏原前给予。
在另一个实施方案中，本发明提供抑制其中JAK3激酶起作用的信号转导级联事件的方法，该方法包括使表达与这种信号级联事件有关的受体的细胞与化合物接触，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗或预防JAK激酶介导的疾病的方法，该方法包括给予患者有效治疗或预防JAK激酶介导的疾病的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗或预防JAK激酶介导的疾病的方法，其中所述JAK介导的疾病为HVGR或GVHR，该方法包括给予患者有效治疗或预防JAK激酶介导的疾病的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗或预防JAK激酶介导的疾病的方法，其中所述JAK介导的疾病为急性同种异体移植物排斥，该方法包括给予患者有效治疗或预防JAK激酶介导的疾病的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗或预防syk激酶介导的疾病的方法，其中所述JAK介导的疾病为慢性同种异体移植物排斥，该方法包括给予患者有效治疗或预防JAK激酶介导的疾病的量的化合物，其中所述化合物选自本文中所述本发明化合物。
本发明活性化合物通常抑制syk通路。可在体外或体内，评价所述化合物作为syk激酶抑制剂的活性。在某些实施方案中，可按细胞测定法测试所述化合物的活性。
“细胞增殖病症”是指特征在于细胞异常增殖的病症。增殖病不表示对细胞生长速度的任何限制，而是仅表示丧失对影响生长和细胞分裂的正常控制。因此，在某些实施方案中，增殖病的细胞可具有与正常细胞相同的细胞分裂速度，但不响应限制这种生长的信号。“细胞增殖病”在赘生物或肿瘤范围内，赘生物或肿瘤为组织的异常生长。癌症是指特征在于细胞增殖的各种恶性肿瘤中任意一种，这些肿瘤具有侵入周围组织和/或转移到新的定居部位的能力。
通常而言，可用本文中公开的化合物治疗的细胞增殖病涉及特征在于异常细胞增殖的任何病症。这些包括各种良性或恶性、转移或非转移的肿瘤和癌症。可用本文中所述方法对抗癌症的特殊性质，例如组织侵袭性或转移性。细胞增殖病包括多种癌症，它们包括但不限于卵巢癌、肾癌、肠胃癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、肺鳞状细胞癌和腺癌。
在某些实施方案中，所治疗的细胞增殖病是血液肿瘤，该肿瘤为造血系统的细胞畸形生长。造血系统恶性肿瘤的起源可位于与造血作用有关的多能性干细胞、多能性始祖细胞、低能定向始祖细胞、前体细胞和终末分化细胞。据信，某些造血系统恶性肿瘤疾病起源于具有自我更新能力的造血干细胞。例如，移植后可发展为特殊亚型的急性骨髓粒细胞白血病(AML)的细胞(Cynthia K.Hahn，Kenneth N.Ross，Rose M.Kakoza，Steven Karr，Jinyan Du，Shao-E Ong，Todd R.Golub，Kimberly Stegmaier，Sky是AML分化的新靶标(Syk is a new target for AML differentiation)，Blood，2007，110，摘要209)出现造血干细胞的细胞表面标记，表明造血干细胞是白血病细胞的来源。没有造血干细胞的细胞标记特性的母细胞似乎在移植后不能产生肿瘤(Blaire等，1997，Blood 89：3104-3112)。也能在一些造血系统恶性肿瘤疾病的干细胞起源中找到支持证据，该证据是可在造血细胞谱系的正常细胞和白血病母细胞中观察到与特定类型白血病有关的特殊染色体异常。例如，与约95％慢性髓细胞白血病有关的相互易位t(9q34；22q11)似乎存在于髓细胞、类红细胞和淋巴谱系细胞中，表明染色体异常起源于造血干细胞。在一些类型的CML中的细胞亚型显示造血干细胞的细胞标记表型。
尽管血液肿瘤通常起源于干细胞，但发育谱系的定向始祖细胞或更终末分化的细胞也可为某些白血病的来源。例如，在普通骨髓始祖细胞或粒细胞/巨噬细胞始祖细胞中强迫表达融合蛋Bcr/Abl(与慢性骨髓粒细胞白血病有关)产生白血病样病症。另外，未在具有标记表型的造血干细胞的细胞群中发现与白血病亚型有关的某些染色体异常，但在显示造血细胞通路的更分化状态的标记表型的细胞群中发现所述异常(Turhan等，1995，Blood 85：2154-2161)。因此，在模拟造血干细胞的自我更新的特性的某些情况下，尽管定向始祖细胞和其它分化的细胞可能对细胞分裂仅具有有限的潜力，但是白血病细胞可能已获得不受调控生长的能力(Passegue等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2003，100：11842-9)。
在某些实施方案中，所治疗的血液肿瘤为淋巴细胞瘤，其中异常细胞源自淋巴样细胞谱系细胞和/或显示淋巴样细胞谱系细胞的特征表型。淋巴样细胞瘤可细分为B细胞瘤、T和NK细胞瘤，以及霍奇金淋巴瘤。B细胞瘤可再细分为始祖B细胞瘤和成熟/外周B细胞瘤。举例说明的B细胞瘤为前体B淋巴性白血病/淋巴瘤(前体B细胞急性淋巴性白血病)，而举例说明的成熟/外周B细胞瘤为B细胞慢性淋巴性白血病/小淋巴性淋巴瘤、B细胞幼淋巴性白血病、淋巴浆性淋巴瘤、脾缘区B细胞淋巴瘤、多毛细胞白血病、血浆细胞骨髓瘤/浆细胞瘤、MALT型的泛域缘区B细胞淋巴瘤、节缘区B细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、原发性渗透性淋巴瘤和伯基特淋巴瘤/伯基特细胞白血病。T细胞和Nk细胞瘤再细分为前体T细胞癌和成熟(外周)T细胞瘤。举例说明性前体T细胞瘤为前体T-淋巴细胞淋巴瘤/白血病(前体T细胞急性淋巴细胞白血病)，而举例说明性成熟(外周)T细胞瘤为T细胞幼淋巴细胞白血病T细胞颗粒淋巴细胞白血病、攻击性NK细胞白血病、成人T细胞淋巴瘤/白血病(HTLV-1)、结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤；鼻型、致病型T细胞淋巴瘤、肝脾γ-δT细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、早样肉芽肿(Mycosis fungoides)/赛塞利综合征、退行性大细胞淋巴瘤；T/无效细胞，初级皮肤型外周T细胞淋巴瘤、未另外表征的(not otherwise characterized)血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、退行性大细胞淋巴瘤、T/无效细胞，初级全身型。淋巴样细胞瘤中的第三种是霍奇金淋巴瘤，又称为霍奇金病。可用所述化合物治疗的该类疾病的举例说明性诊断包括但不限于节状淋巴细胞超优势霍奇金淋巴瘤以及各种经典形式的霍奇金病，其中举例说明性疾病是节状硬化霍奇金淋巴瘤(1级和2级)、富集淋巴细胞的经典霍奇金淋巴瘤、混合型细胞构成霍奇金淋巴瘤和淋巴细胞耗竭霍奇金淋巴瘤。在各种实施方案中，可用syk抑制性化合物治疗与异常JAK活性有关的任何淋巴样细胞瘤。
在某些实施方案中，所治疗的血液肿瘤为髓细胞瘤。该类瘤包括涉及或显示髓细胞谱系细胞的特征表型的一大类细胞增殖病。髓细胞瘤可细分为骨髓增生病、骨髓增生异常/骨髓增生疾病、骨髓增生异常综合征和急性髓细胞白血病。举例说明性骨髓增生疾病为慢性骨髓粒细胞白血病(例如Philadelphia染色体阳性(t(9；22)(qq34；q11))、慢性嗜中性粒细胞白血病、慢性嗜酸性粒细胞白血病/嗜酸细胞增多综合征、慢性自发性骨髓纤维变性、红细胞增多症和原发性血小板增多症。举例说明性骨髓增生异常/骨髓增生疾病为慢性单核髓细胞白血病、非典型性慢性骨髓粒细胞白血病和青少年单核髓细胞白血病。举例说明性骨髓增生异常综合征为有环纹成高铁红细胞和无环纹成高铁红细胞的顽固性贫血病、伴多系发育不良的顽固性血细胞减少症(骨髓增生异常综合征)、伴过量胚细胞的顽固性贫血病(骨髓增生异常综合征)、5q-综合征和骨髓增生异常综合征。在各种实施方案中，可用所述syk抑制性化合物治疗与异常syk活性有关的任何髓细胞瘤。
在某些实施方案中，可用所述化合物治疗急性髓细胞白血病(AML)，该白血病代表具有可再细分病症的一大类髓细胞瘤。这些分支包括但不限于伴复发性细胞遗传易位的AML、伴多系发育不良的AML和其它未分类的AML。举例说明性伴轮回细胞遗传易位的AML包括但不限于具有t(8；21)(q22；q22)的AML，AML1(CBF-α)/ETO、急性早幼粒细胞白血病(具有t(15；17)(q22；q11-12)的AML和变型，PML/RAR-α)、伴异常骨髓嗜酸性粒细胞(inv(16)(p13q22)或t(16；16)(p13；q11)、CBFb/MYH11X)的AML以及和11q23(MLL)异常的AML。举例说明性伴多系发育不良的AML是与前骨髓增生异常综合征有关或无关的那些AML。未划分在任何可定义类的其它急性髓细胞白血病包括最小分化的AML、未成熟的AML、成熟AML、急性单核髓细胞白血病、急性单核型白血病、急性类红细胞型白血病、急性巨核细胞型白血病、急性嗜碱细胞白血病以及和伴骨髓纤维变性的急性全髓白血病。
本发明文中的“治疗”表示缓解与病症或疾病有关的症状，或终止那些症状进一步发展或恶化，或阻止或预防疾病或病症。
术语“哺乳动物”包括表达syk的生物体。哺乳动物的实例包括小鼠、大鼠、母牛、绵羊、猪、山羊、马、熊、猴、狗、猫，优选人。表达syk的转基因生物体也包括在该定义中。
本发明方法包括给予哺乳动物或非人动物有效量的本文中所述化合物或组合物。本文中使用的本发明化合物或组合物的“有效量”包括拮抗或抑制syk的那些量。可通过例如可测定syk活性的任何测定方法检测拮抗或抑制syk的量，所述方法包括作为说明性试验方法的下述方法之一。有效量也可包括使与可通过抑制syk治疗的病症有关的症状缓解的那些量。因此，“syk拮抗剂”包括与syk相互作用并调节例如抑制或减少第二种化合物例如另一种syk配体与syk相互作用的能力的化合物。结合syk的化合物优选为syk拮抗剂。术语“结合syk的化合物”(例如显示与受体结合的结合亲和力)包括与syk相互作用从而调节syk活性的那些化合物。可用体外(例如细胞和非细胞类)或体内方法鉴定结合Syk的化合物。以下提供体外方法说明。
用于本文中所述方法的化合物和组合物的量应在病症的严重程度中足以造成可按实施例中所述任何测定方法测定的减少值。需要的syk调节剂的量取决于调节剂对给定细胞型的有效性和治疗该病症需要的时间长度。在一些实施方案中，本发明组合物还可含另一种治疗药物。当使用第二种药物时，可以独立的剂型或作为单一剂型的一部分的形式给予第二种药物和本发明化合物或组合物。虽然一种或多种本发明化合物可作为单一疗法治疗病症、疾病或症状，但它们也可用于联合疗法，其中使用本发明化合物或组合物(治疗药物)与使用一种或多种治疗相同和/或其它类型病症、症状和疾病的其它治疗药物相结合。联合疗法包括同时或顺序给予两种或多种治疗药物。可按任何顺序给予药物。或者，可将多种治疗药物结合到可给予患者的单一组合物中。例如，单一药用组合物可含式I化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药；另一种治疗药物(例如甲氨蝶呤)或其互变异构体、其药学上可接受的盐、酯或其前药；以及药学上可接受的赋形剂或载体。
本发明包括具有式I的化合物、制备本发明化合物的方法、由至少一种本发明化合物和至少一种药学上可接受的载体或赋形剂制备药用组合物的方法，和用一种或多种本发明化合物治疗多种病症、症状和疾病(例如炎性、自身免疫性、神经、神经变性、肿瘤和心血管)的方法，此类疾病为例如RA、骨关节炎、过敏性肠疾病IBD、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病COPD和MS。可将本发明化合物和它们的药学上可接受的盐和/或中性组合物与药学上可接受的赋形剂或载体配制在一起，得到的组合物可体内给予哺乳动物，例如男人、妇女和动物，治疗病症、症状和疾病。另外，可用本发明化合物制备可用治疗多种病症、症状和疾病的药物。
所有本发明化合物为有效的syk激酶抑制剂，它们的IC50在相应测定中显示小于5μM数量级，其中多数化合物的IC50为纳摩尔数量级，若干化合物的IC50为亚纳摩尔数量级。在某些实施方案中，本发明化合物可为syk/JAK“双重”抑制剂，也就是说它们在一定程度上既抑制syk激酶，又抑制JAK激酶。在其它实施方案中，本发明化合物可选择性抑制syk激酶，但不显著抑制一种或多种JAK激酶。在其它实施方案中，本发明化合物可选择性抑制JAK激酶，但不显著抑制一种或多种syk激酶。
f.药盒
本发明的另一个方面是提供单一包装形式的药盒，该药盒包含独立的容器，其中本发明药用化合物、其组合物和/或盐与药学上可接受的载体联用，用于治疗其中syk起作用的状态、病症、症状和疾病。
实施例
提供以下实施例，用于说明但不限制要求保护的本发明。
用于制备这些化合物的原料和试剂通常可从产品供应商例如Aldrich Chemical Co.购得，或通过本领域技术人员已知方法，按照参考文献例如Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis；Wiley & Sons：纽约，1967-2004，第1-22卷；Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds，Elsevier Science Publishers，1989，第1-5卷和增补版；和Organic Reactions，Wiley & Sons：纽约，2005，第1-65卷中列举的方法制备。
如有需要，可用常规技术将原料和本合成反应流程的中间体分离，也可纯化，这些技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱等。可用常规方法鉴定此类材料，这些方法包括物理常数和光谱数据。
除有不同说明外，优选在惰性环境下，在常压下，在约-78℃-约150℃下，更优选约0℃-约125℃下，最优选且方便在约室温(环境)温度例如约20℃-约75℃下进行本文中所述反应。
参考以下实施例，用本文中所述方法或本领域中熟知的其它方法合成本发明化合物。
可用配备2695 Separation Module的Waters Alliance色谱系统(Milford，Mass.)，通过高效液相色谱(HPLC)鉴定化合物和/或中间体。分析柱可以是Merck KGaA(Darmstadt，德国)的C-18 SpeedROD RP-18E柱。或者，可用配备Waters Acquity UPLC BEH C-18 2.1mm×15mm柱的Waters Unity(UPLC)系统鉴定。可用梯度洗脱，通常从5％乙腈/95％水开始至95％乙腈为止，对于Alliance系统，该梯度变化时间5分钟；对于Acquity系统，该梯度变化时间1分钟。所有溶剂可含0.1％三氟乙酸(TFA)。可通过在220或254nm的紫外线(UV)吸收检测化合物。HPLC溶剂可从EMD Chemicals，Inc.(Gibbstown，NJ)得到。在某些情况下，可通过使用玻璃载体硅胶板例如EMD Silica Gel 60 2.5cm×7.5cm板的薄层层析(TLC)评价纯度。可在紫外线下，或通过使用熟知的碘蒸汽和其它各种显色技术容易目检TLC结果。
可在两种Agilent 1100系列LCMS仪器中的一种仪器上进行质谱分析，使用Acquity系统，以乙腈/水作流动相。一个系统可用TFA作为调节剂，按正离子模式测定[按MH+，(M+1)或(M+H)+报告]，另一个系统可使用甲酸或乙酸铵盐，按正离子模式[按MH+，(M+1)或(M+H)+报告]和负离子模式[按M-，(M-1)或(M-H)-报告]测定。
可在Varian 400MHz NMR(Palo Alto，Calif.)上，对某些化合物进行核磁共振(NMR)分析。波谱对照可为TMS或已知化学位移的溶剂。
可通过元素分析(Robertson Microlit，Madison NJ.)评价某些本发明化合物的纯度。
可在Laboratory Devices Mel-Temp仪(Holliston，Mass.)上测定熔点。
可根据需要，用均购自Teledyne Isco，(Lincoln，NE)的Sq16x或Sg100c色谱系统和预装硅胶柱进行制备型分离。或者，可通过使用硅胶(230-400目)填充材料的闪柱层析或通过使用C-18反相柱的HPLC，纯化化合物和中间体。用于Isco系统和闪柱层析的典型溶剂可为二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、己烷、丙酮、羟胺水溶液和三乙胺。用于反相HPLC的典型溶剂可为各种浓度的含0.1％三氟乙酸的乙腈和水。
通用方法
以下合成反应流程仅为某些方法的说明，可通过这些方法合成本发明化合物，在参考本申请公开的内容后，本领域技术人员可对这些反应流程进行各种改进，并建议他们进行此类改进。
实施例1：4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200861
步骤1：搅拌下，向羧酸72.1(85g，540mmol)的亚硫酰氯(425mL)的溶液中缓慢加入吡啶(8.5mL，0.11mmol)。将反应物在75℃下搅拌过夜，然后浓缩，真空干燥至浅黄色粉末。将该黄色固体用750mL乙醇缓慢稀释，回流过夜。次日，通过HPLC测定反应完全，然后在冰浴中冷却，将固体过滤，用乙醚洗涤，得到乙酯72.2，为灰白色粉末(91g，两步合计87％)。C7H8N2O4的MS实测值为(M+H)+185.0。
步骤2：将酯72.2(22g，120mmol)溶于磷酰氯(60mL，600mmol)，将混合物用N，N-二乙基苯胺(27mL，167mmol)处理，将混合物加热至105℃直至通过HPLC测定反应完全。然后将其冷却至室温，缓慢加入到1L冰渣中，导致形成浅褐色沉淀，过滤，收集该沉淀，在真空下干燥，得到二氯化物72.3a，为浅黄色粉末(22.5g，85％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.13(s，1H)，4.37(q，2H)，1.32(t，3H).
步骤3：将二氯嘧啶72.3(500mg，2.3mmol)溶于NMP(10mL)，在冰浴中搅拌。用加料漏斗，向其中滴加苯胺72.4(540mg，2.5mmol)和乙基二异丙胺(DIEA，0.82mL，4.6mmol)的10mL NMP溶液。将混合物搅拌1小时，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，浓缩，通过闪柱，分离到化合物72.5，为白色固体(905mg，97％)。C19H22ClN5O3的MS实测值为(M+H)+ 404.1。
步骤4：将乙酯72.5(5mg，2.2mmol)溶于100mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(190mg，4.4mmol)和10mL水。将混合物搅拌1小时，向其中小心加入1N HCl溶液直至达到pH 3。将混合物真空浓缩，除去THF。将白色固体击碎，用布氏漏斗分离。将其用水洗涤，真空干燥，得到化合物72.6(900mg，99％)，为白色固体。C17H18ClN5O3的MS实测值为(M+H)+ 376.1。
步骤5：将羧酸72.6(900mg，2.2mmol)溶于30mL NMP。向其中加入EDC盐酸盐(690mg，3.6mmol)和HOBt水合物(490mg，3.6mmol)。将混合物在室温下搅拌90分钟。然后向其中加入氨水(市售0.5N的二
Figure BPA00001277505200871
烷(dioxane)溶液，24mL，12mmol)。将混合物搅拌过夜。然后将其真空浓缩，加入水和氯仿。将氯仿相分离，用盐水洗涤4次。然后氯仿相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到化合物72.7，为浅黄色固体(720mg，63％)。C23H23N9O3的MS实测值为(M+H)+ 474.2。
步骤6：将苯并三唑基醚(Benzotriazolyl ether)72.7(100mg，0.21mmol)溶于3mL DMSO。向其中加入顺式-1，2-二氨基环己烷(124μL，1.05mmol)。在120℃浴中，将混合物在密闭烧瓶中搅拌1小时。然后混合物经制备型HPLC处理，分离到外消旋标题化合物72。C23H32N8O2的MS实测值为(M+H)+ 453.2。UVλ＝240，297nm。
实施例2：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(1，1-二氧代)硫代吗啉苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200881
用实施例1中所示相同合成流程，用4-(1，1-二氧代)硫代吗啉苯胺代替苯胺72.4，制备以上外消旋化合物。C21H29N7O3S的MS实测值为(M+H)+ 460.2。UVλ＝236，312nm。
实施例3：4-(4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200882
步骤1：将二氯嘧啶72.3(1.12g，5.05mmol)溶于60mL DMF，在室温下搅拌。用注射器，向其中一次性滴加4-(1H-吡唑-1-基)苯胺74.1(0.96g，6.1mmol)和乙基二异丙胺(DIEA，1.58mL，9.1mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后向其中加入甲硫醇钠(885mg，12.6mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤3次，经MgSO4干燥，真空浓缩，通过闪柱处理，得到化合物50.2，为白色固体。C17H17N5O2S的MS实测值为(M+H)+ 356.1。
步骤2：将步骤1中的乙酯74.2溶于200mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(424mg，10.1mmol)和20mL水。将混合物在室温搅拌2天。将其真空浓缩，除去THF，用1N HCl小心处理直至达到pH 3。将溶液中的白色固体击碎。用布氏漏斗将其分离，用冷水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物74.3(1.12g，2次步骤2合计68％)。C15H13N5O2S的MS实测值为(M+H)+ 328.1。
步骤3：将羧酸74.3(1.12g，3.4mmol)溶于60mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(0.98g，5.1mmol)和HOBt水合物(0.69g，5.1mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。然后向其中加入氨水(市售0.5N的二烷溶液，34mL，17mmol)。将混合物搅拌2小时。然后将其真空浓缩，除去二
Figure BPA00001277505200892
烷。向其中加入300mL水。将浅黄色固体击碎。用布氏漏斗将其分离，用冷水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物74.4(1.12g，99％)。C15H14N6OS的MS实测值为(M+H)+ 327.1。
步骤4：将化合物74.4(50mg，0.15mmol)溶于4mL NMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，45mg，0.17mmol)。将其在室温下搅拌30分钟。然后向其中加入顺式-1，2-二氨基环己烷(53μL，0.45mmol)和DIEA(78μL，0.45mmol)。将混合物在90℃浴中搅拌50分钟。然后该混合物经制备型HPLC处理，分离到外消旋标题化合物74。C20H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 393.2。UV λ＝239,304nm.NMR(CD3OD)：δ8.41(s，1H)，8.12(m，1H)，7.70(d，J＝8.4Hz，2H)，7.63(d，J＝7.2Hz，2H)，7.62(s，1H)，6.43(dd，J＝2.4，2.0Hz，1H)，4.27(m，1H)，3.60(m，1H)，1.83-1.45(m，8H)ppm。
实施例4：4-(4-(1，2，3-噻二唑-4-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200893
用4-(1，2，3-噻二唑-4-基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例3中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C19H22N8OS的MS实测值为(M+H)+ 411.2。UV λ＝231,311nm.NMR(CD3OD)：δ9.24(s，1H)，8.56(s，1H)，8.15(d，J＝5.6Hz，2H)，7.84(m，2H)，4.43(m，1H)，3.76(m，1H)，1.91-1.60(m，8H)ppm。
实施例5：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(吡啶-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200901
步骤1：将二氯嘧啶72.3(3.02g，13.6mmol)溶于100mL DMF，在室温下搅拌。用注射器，向其中一次性滴加4-碘苯胺77.1(3.59g，16.3mmol)和乙基二异丙胺(DIEA，4.25mL，24.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2.5小时。然后向其中加入甲硫醇钠(2.38g，34mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5h，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤三次，经MgSO4干燥，用活性碳处理，真空浓缩，得到粗化合物77.2，为浅棕色固体(4.50g，79％)。C14H14IN3O2S的MS实测值为(M+H)+ 416.1。
步骤2：将碘苯77.2(620mg，1.5mmol)溶于20mL二
Figure BPA00001277505200902
烷和10mL水。向其中加入硼酸77.3(406mg，3.3mmol)、Na2CO3(480mg，4.5mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(211mg，0.3mmol)。用氩气流将混合物脱气3分钟，在氩气中，在85℃浴中搅拌1小时。将混合物浓缩，用氯仿稀释。将其用盐水洗涤，经MgSO4干燥，浓缩，通过闪柱处理，分离到化合物77.4(300mg，55％)。C19H18N4O2S的MS实测值为(M+H)+ 367.1。
步骤3：将乙酯77.4(300mg，0.82mmol)溶于30mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(104mg，2.46mmol)和10mL水。将混合物在室温下搅拌2小时。将其真空浓缩，除去THF，用1N HCl小心处理直至达到pH 3。将溶液中的浅黄色固体击碎。用布氏漏斗将其分离，用冷水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物77.5(250mg，90％)。C17H14N4O2S的MS实测值为(M+H)+ 339.1。
步骤4：将羧酸77.5(250mg，0.74mmol)溶于10mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(213mg，1.1mmol)和HOBt水合物(150mg，1.1mmol)。将混合物在室温下搅拌90分钟。然后向其中加入氨水(市售0.5N的二
Figure BPA00001277505200911
烷溶液，7.4mL，3.7mmol)。将混合物搅拌过夜。然后将其真空浓缩，除去二
Figure BPA00001277505200912
烷。向其中加入水100mL。将浅黄色固体击碎。用布氏漏斗将其分离，用冷水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物77.6(230mg，92％)。C17H15N5OS的MS实测值为(M+H)+ 338.1。
步骤5：将化合物77.6(25mg，0.074mmol)溶于3mL NMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，22mg，0.081mmol)。将其在室温下搅拌30分钟。然后向其中加入顺式-1，2-二氨基环己烷(70μL，0.60mmol)。将混合物在90℃浴中搅拌30分钟。然后该混合物经制备型HPLC处理，分离到外消旋标题化合物77。C22H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 404.2。UV λ＝238,337nm。
实施例6：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(吡啶-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200913
用吡啶-3-硼酸代替吡啶-4-硼酸77.3，用实施例5中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C22H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 404.2。UV λ＝239,311nm。
实施例7：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(吡啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200921
用4-(吡啶-2-基)苯胺代替苯胺72.4，用实施例1中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C22H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 404.2。UV λ＝241,330nm。
实施例8：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(嘧啶-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用嘧啶-5-硼酸代替吡啶-4-硼酸77.3，用实施例5中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C21H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 405.2。UV λ＝243,308nm.NMR(CD3OD)：δ9.13(s，1H)，9.08(s，2H)，8.55(s，1H)，7.82(m，4H)，4.44(m，1H)，3.74(m，1H)，1.94-1.60(m，8H)ppm。
实施例9：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200923
步骤1：用4-(噻唑-4-基)苯胺代替苯胺77.1，用实施例5中77.3所示相同合成流程制备化合物81.1。C15H13N5OS2的MS实测值为(M+H)+ 344.1。
步骤2：将化合物81.1(100mg，0.29mmol)溶于4mL NMP。向其中加入MCPBA(纯度65％ 93mg，0.35mmol)。将其在室温下搅拌45分钟。然后向其中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯81.2(0.3M，2mL，0.60mmol)和DIEA(156μL，0.90mmol)溶液。将混合物在90℃浴中搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤两次，用水洗涤。有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到粗化合物81.3。C25H31N7O3S的MS实测值为(M+H)+ 510.2。
步骤3：在室温下，将化合物81.3在1∶1的TFA和二氯甲烷的混合物中搅拌10分钟。将其真空浓缩，经反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物。C20H23N7OS的MS实测值为(M+H)+410.2。UV λ＝239,313nm.NMR(CD3OD)：δ9.07(d，J＝2.0Hz，1H)，8.53(s，1H)，8.01(d，J＝8.8Hz，2H)，7.91(s，1H)，7.71(d，J＝7.2Hz，2H)，4.40(m，1H)，3.74(m，1H)，1.94-1.59(m，8H)ppm。
实施例10：4-(4-(1，2，3-噻二唑-4-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200931
用4-(1，2，3-噻二唑-4-基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例1和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H22N8OS的MS实测值为(M+H)+ 411.2。UV λ＝233,308nm.NMR(CD3OD)：δ9.24(s，1H)，8.56(s，1H)，8.15(d，J＝5.6Hz，2H)，7.84(m，2H)，4.43(m，1H)，3.76(m，1H)，1.91-1.60(m，8H)ppm。
实施例11：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(吡啶-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200941
用吡啶-3-硼酸代替吡啶-4-硼酸77.3，用实施例5中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 404.2。UV λ＝240,311nm.NMR(CD3OD)δ9.05(d，J＝2.0Hz，1H)，8.70(dd，J＝5.6，1.2Hz，1H)，8.61(d，J＝6.8Hz，1H)，8.56(s，1H)，7.93-7.81(m，5H)，4.45(m，1H)，3.75(m，1H)，1.92-1.59(m，8H)ppm。
实施例12：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(嘧啶-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤1：用3-(嘧啶-5-基)苯胺代替苯胺72.4，用实施例1中72.7所示相同合成流程制备化合物83.1。C21H15N9O2的MS实测值为(M+H)+ 426.1。
步骤2：将化合物83.1(150mg，0.35mmol)溶于5mL NMP。向其中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯81.2(0.3M，2.3mL，0.70mmol)和DIEA(185μL，1.06mmol)溶液。将混合物在90℃浴中搅拌40分钟。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤三次。有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到粗化合物83.2。C26H32N8O3的MS实测值为(M+H)+ 505.2。
步骤3：在室温下，将化合物83.2在1∶1的TFA和二氯甲烷的混合物中搅拌15分钟。将其真空浓缩，经反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物。C21H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 405.2。UV λ＝245nm.NMR(CD3OD)：δ9.17(s，1H)，9.10(s，2H)，8.55(s，1H)，8.11(m，1H)，7.70(m，1H)，7.58(m，2H)，4.37(m，1H)，3.61(m，1H)，1.91-1.50(m，8H)ppm。
实施例13：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(吡啶-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200951
用吡啶-3-硼酸代替吡啶-4-硼酸77.3，用实施例5和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 404.2。UV λ＝240,312nm。
实施例14：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(噻唑-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200952
步骤1：将碘苯77.2(400mg，0.96mmol)溶于10mL甲苯。向其中加入5-三丁锡烷基噻唑(430mg，1.15mmol)和Pd(PPh3)4(115mg，0.1mmol)。将混合物用氩气流脱气3分钟，在氩环境下，回流1小时。将其真空浓缩，通过硅胶闪柱处理，分离到化合物85.2(160mg，45％)。C17H16N4O2S2的MS实测值为(M+H)+ 373.1。
步骤2：将乙酯85.2(160mg，0.43mmol)溶于30mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(55mg，1.3mmol)和5mL水。将混合物在室温下搅拌2小时。将其真空浓缩，除去THF，用1N HCl小心处理直至达到pH 3。将溶液中的浅黄色固体击碎。用布氏漏斗将其分离，用冷水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物85.3(120mg，81％)。C15H12N4O2S2的MS实测值为(M+H)+ 345.1。
步骤3：将羧酸85.3(100mg，0.29mmol)溶于10mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(86mg，0.45mmol)和HOBt水合物(61mg，0.45mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后向其中加入氨水(市售0.5N的二
Figure BPA00001277505200961
烷溶液，3mL，1.5mmol)。将混合物搅拌过夜。然后将其真空浓缩，除去二
Figure BPA00001277505200962
烷。向其中加入水100mL。将浅黄色固体击碎。然后用布氏漏斗将其分离，用冷水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物85.4(75mg，76％)。C15H13N5OS2的MS实测值为(M+H)+ 344.1。
步骤4：将化合物85.4(75mg，0.22mmol)溶于5mL NMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，64mg，0.24mmol)。将其在室温下搅拌30分钟。然后向其中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯81.2(0.3M，1.5mL，0.45mmol)和DIEA(115μL，0.66mmol)。将混合物在90℃浴中搅拌90分钟。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤两次，用水洗涤。有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到粗化合物85.5。C25H31N7O3S的MS实测值为(M+H)+ 510.2。
步骤5：在室温下，将化合物85.5在1∶1的TFA和二氯甲烷的混合物中搅拌30分钟。将其真空浓缩，经反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物。C20H23N7OS的MS实测值为(M+H)+410.2。UV λ＝240,318nm。
实施例15：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(噻唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200963
用2-三丁基锡烷基噻唑代替5-三丁锡烷基噻唑85.1，用实施例14中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H23N7OS的MS实测值为(M+H)+ 410.2。UV λ＝243,332nm.NMR(CD3OD)：δ8.53(s，1H)，8.00(d，J＝8.0Hz，2H)，7.86(d，J＝3.2Hz，1H)，7.77(d，J＝8.0Hz，2H)，7.61(d，J＝3.2Hz，1H)，4.42(m，1H)，3.74(m，1H)，1.92-1.60(m，8H)ppm。
实施例16：4-(4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200971
用实施例1和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 393.2。UV λ＝240,302nm.NMR(CD3OD)：δ8.41(s，1H)，8.12(m，1H)，7.70(d，J＝8.4Hz，2H)，7.63(d，J＝7.2Hz，2H)，7.62(s，1H)，6.43(dd，J＝2.4，2.0Hz，1H)，4.27(m，1H)，3.60(m，1H)，1.83-1.45(m，8H)ppm。
实施例17：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(吡啶-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200972
用3-(吡啶-3-基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例1和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 404.2。UV λ＝248nm.NMR(CD3OD)：δ9.05(s，1H)，8.73(m，1H)，8.59(m，1H)，8.54(s，1H)，8.00(宽峰，1H)，7.92(m，1H)，7.80(m，1H)，7.63-7.61(m，2H)，4.33(m，1H)，3.62(m，1H)，1.91-1.47(m，8H)ppm。
实施例18：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-吗啉代苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200981
用4-吗啉代苯胺代替苯胺74.1，用实施例5和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H29N7O2的MS实测值为(M+H)+ 412.2。UV λ＝243，294nm.NMR(CD3OD)：δ8.45(s，1H)，7.49(d，J＝8.4Hz，2H)，7.04(d，J＝9.2Hz，2H)，4.30(m，1H)，3.85(m，4H)，3.71(m，1H)，3.19(m，4H)，1.88-1.56(m，8H)ppm。
实施例19：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(嘧啶-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200982
用嘧啶-5-硼酸代替吡啶-4-硼酸77.3，用实施例5和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 405.2。UV λ＝242,307nm.NMR(CD3OD)：δ9.13(s，1H)，9.08(s，2H)，8.55(s，1H)，7.82(m，4H)，4.44(m，1H)，3.74(m，1H)，1.95-1.58(m，8H)ppm。
实施例20：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(吗啉代甲基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200983
用4-(吗啉代甲基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例1和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H31N7O2的MS实测值为(M+H)+ 426.3。UV ＝244,293nm。
实施例21：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(哒嗪-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200991
用4-三丁锡烷基哒嗪代替5-三丁锡烷基噻唑85.1，用实施例14中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 405.3。UV λ＝239,327nm.NMR(CD3OD)：δ9.59(m，1H)，9.21(d，J＝9.2Hz，1H)，8.58(s，1H)，8.08(m，1H)，7.96-7.85(m，5H)，4.47(m，1H)，3.77(m，1H)，1.93-1.59(m，8H)ppm。
实施例22：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(吡嗪-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505200992
用2-三丁锡烷基吡嗪代替5-三丁锡烷基噻唑85.1，用实施例14中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 405.3。UV λ＝235,319nm.NMR(CD3OD)：δ9.11(s，1H)，8.66(宽峰s，1H)，8.56(s，1H)，8.51(宽峰，1H)，8.14(m，2H)，7.85(m，2H)，4.44(m，1H)，3.77(m，1H)，1.92-1.58(m，8H)ppm。
实施例23：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(吡啶-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201001
用实施例5和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H25N7O的MS实测值为(M+H)+404.2。UV λ＝239，334nm.NMR(CD3OD)：δ8.76(d，J＝6.8Hz，2H)，8.60(s，1H)，8.29(d，J＝6.4Hz，2H)，8.05-7.96(m，4H)，4.49(m，1H)，3.76(m，1H)，1.93-1.60(m，8H)ppm。
实施例24：4-(4-(1H-1，2，3-三唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201002
步骤1：将化合物72.3(1.18g，5.3mmol)溶于40mL NMP，在室温下搅拌。用注射器，向其中依次滴加4-叠氮苯胺盐酸盐95.1(1.00g，5.9mmol)和DIEA(2.21mL，12.7mmol)。将混合物搅拌1小时，用乙酸乙酯稀释。将其用盐水洗涤4次，干燥，真空浓缩，得到化合物95.2(1.59g，94％)。C13H11ClN6O2的MS实测值为(M+H)+ 319.2。
步骤2：将乙酯95.2(1.59g，5.0mmol)溶于50mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(420mg，10mmol)和5mL水。将混合物搅拌4小时，向其中小心加入3N HCl溶液直至达到pH 3。将混合物真空浓缩，除去THF。将残余物加入乙酸乙酯，用盐水洗涤两次。将其干燥，真空浓缩，得到化合物95.3(1.58g，99％)，为固体。C11H7CIN6O2的MS实测值为(M+H)+ 291.2。
步骤3：将羧酸95.3(1.58g，5.0mmol)溶于40mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(1.44g，7.5mmol)和HOBt水合物(1.02g，7.5mmol)。将混合物在室温下搅拌50分钟。然后向其中加入氨水(市售0.5N的二烷溶液，50mL，25mmol)。将混合物搅拌7小时。然后将其真空浓缩，将固体击碎。收集，洗涤，在真空干燥箱中干燥，得到化合物95.4(1.30g，67％)。C17H12N10O2的MS实测值为(M+H)+ 389.3。
步骤4：将化合物95.4(300mg，0.77mmol)溶于20mL NMP。向其中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯81.2(0.3M，5.1mL，1.5mmol)和DIEA(400μL，2.3mmol)。将混合物在90℃浴中搅拌90分钟。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤三次。有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，通过闪柱，得到化合物95.5(420mg，90％)。C22H29N9O3的MS实测值为(M+H)+ 467.3。
步骤5：将化合物95.5(420mg，0.70mmol)在10mL甲醇中搅拌。向其中加入三甲代甲硅烷基乙炔(200mg，1.4mmol)、CuI(400mg，2.1mmol)和DBU(313μL，2.1mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时。将其用乙酸乙酯稀释，用饱和氯化铵水溶液和盐水洗涤两次。将有机相干燥，过滤，真空浓缩，得到粗化合物95.6。C24H31N9O3的MS实测值为(M+H)+ 494.4。
步骤6：在室温下，将粗化合物95.6在1∶1的TFA和二氯甲烷的混合物中搅拌90分钟。将其真空浓缩，经反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4。UV λ＝242，300nm。
实施例25：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201012
用1-甲基-2-三丁锡烷基咪唑代替5-三丁锡烷基噻唑85.1，用实施例14中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 407.4。UV λ＝241,300nm.NMR(CD3OD)：δ8.97(s，1H)，8.59(s，1H)，7.90(m，2H)，7.64(m，3H)，4.46(m，1H)，3.91(s，3H)，3.73(m，1H)，1.92-1.58(m，8H)ppm。
实施例26：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201021
步骤1：将碘苯77.2(440mg，1.06mmol)溶于10mL DMSO。向其中加入2-羟基吡啶97.1(202mg，2.12mmol)、K2CO3(293mg，2.12mmol)、CuI(61mg，0.32mmol)和8-羟基喹啉(46mg，0.32mmol)。将混合物在120℃浴中搅拌5小时。向混合物中加入氢氧化锂水合物(126mg，3mmol)和10mL水。将混合物搅拌过夜。向其中小心加入1N HCl直至达到pH 3。使混合物通过硅藻土过滤，经反相制备型HPLC处理，分离到化合物97.2(75mg，20％)。C17H14N4O3S的MS实测值为(M+H)+ 354.3。
步骤2：将羧酸97.2(75mg，0.21mmol)溶于10mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(61mg，0.32mmol)和HOBt水合物(44mg，0.32mmol)。将混合物在室温下搅拌90分钟。然后向其中加入氨水(市售0.5N的二
Figure BPA00001277505201022
烷溶液，2mL，1mmol)。将混合物搅拌2小时。然后真空浓缩，经反相制备型HPLC处理，分离到化合物97.3(40mg，53％)。C17H15N5O2S的MS实测值为(M+H)+ 355.3。
步骤3：将化合物97.3(40mg，0.11mmol)溶于5mL NMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，37mg，0.14mmol)。将其在室温下搅拌1小时。然后向其中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯81.2(0.3M，0.73mL，0.22mmol)和DIEA(115μL，0.66mmol)。将混合物在90℃浴中搅拌1小时。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤两次，用水洗涤。有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到粗化合物97.3。C27H33N7O4的MS实测值为(M+H)+ 520.4。
步骤4：在50°下，将化合物97.4在4∶1的TFA和二氯甲烷混合物中搅拌1小时。将其真空浓缩，经反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物。C22H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 420.4。UV ＝241,296nm。
实施例27：4-(4-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201031
用4-(1H-咪唑-1-基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例3和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 393.4。UV λ＝246,292nm.NMR(CD3OD)：δ9.41(s，1H)，8.59(s，1H)，8.05-7.95(m，3H)，7.79-7.76(m，3H)，4.46(m，1H)，3.71(m，1H)，1.93-1.59(m，8H)ppm。
实施例28：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(哌啶-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201032
用4-(哌啶-1-基)苯胺代替苯胺72.4，用实施例1和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H31N7O的MS实测值为(M+H)+ 410.4.UV λ＝246,287nm.NMR(CD3OD)：δ8.55(s，1H)，7.81(m，2H)，7.59(m，2H)，4.41(m，1H)，3.71(m，1H)，3.58(m，4H)，2.02(m，4H)，1.90-1.80(m，8H)，1.60(m，2H)ppm。
实施例29：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氟-4-吗啉代苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201041
用3-氟-4-吗啉代苯胺代替苯胺72.4，用实施例1和实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H28FN7O2的MS实测值为(M+H)+ 430.4。UV λ＝239,309nm.NMR(CD3OD)：δ8.49(s，1H)，7.63(m，1H)，7.22(m，1H)，7.08(dd，J＝9.6，8.8Hz，1H)，4.34(m，1H)，3.85(m，4H)，3.76(m，1H)，3.08(m，4H)，1.92-1.58(m，8H)ppm。
实施例30：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201042
用4-(3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例3和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H23F3N8O的MS实测值为(M+H)+ 461.4。UV λ＝241,236nm.NMR(CD3OD)：δ8.54(s，1H)，8.38(宽峰，1H)，7.85-7.80(m，4H)，6.84(d，J＝2.0Hz，1H)，4.41(m，1H)，3.71(m，1H)，1.91-1.59(m，8H)ppm。
实施例31：4-(3-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201051
用3-(1H-吡唑-1-基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例3和实施例9中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 393.4。UV λ＝247nm。
实施例32：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201052
将3，4-二氟硝基苯(1.00mL，9.03mmol)、吡唑(0.615g，9.04mmol)和K2CO3(2.50g，18.1mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。加入水(30mL)，引发沉淀。将沉淀收集，真空干燥，得到1-(2-氟-4-硝基苯基)-1H-吡唑，为固体(1.80g)。MS 208.3(M+H)
在H2环境(balloon)下，将1-(2-氟-4-硝基苯基)-1H-吡唑(1.80g，8.70mmol)和Pd-C(10％，0.200g)的MeOH(20mL)(含10滴6N HCl)悬浮液氢化过夜。使混合物通过硅藻土过滤。将滤液真空浓缩。将残渣真空干燥，得到3-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯胺，为固体(1.55g)。MS 178.3(M+H)
在室温下，向2，4-二氯嘧啶-5-甲酸乙酯(280mg，1.27mmol)和3-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯胺(230mg，1.30mmol)的CH3CN(8mL)溶液中加入DIEA(0.442mL，2.54mmol)。将混合物在室温下搅拌48h。加入水(15mL)，引发沉淀。将沉淀收集，真空干燥，得到2-氯-4-(3-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯，为固体(275mg)。MS 362.3和364.3(M+H，Cl形式)
向2-氯-4-(3-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯(275mg，0.761mmol)的THF(4mL)溶液中加入1N LiOH(1.25mL，1.25mmol)水溶液。将混合物在室温下搅拌过夜。用1N HCl将混合物酸化后，形成白色固体沉淀，将该沉淀收集，真空干燥，得到2-氯-4-(3-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸(230mg)。MS 334.3和336.3(M+H，Cl形式)
向2-氯-4-(3-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸(230mg，0.690mmol)和HOBt(158mg，1.03mmol)的DMF(4mL)溶液加入EDC(200mg，1.04mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5h。加入氨水(0.5M的二烷溶液，6.00mL，3.00mmol)。将其在室温下搅拌过夜。加入水和EtOAc。将有机相分离，依次用1N HCl、5％ NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(3-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(184mg)。MS 432.4(M+H)
将(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(0.30M的NMP溶液，2.00mL，0.600mmol)的NMP(2mL)溶液加入2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(3-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(184mg，0.427mmol)。再加入DIEA(0.150mL，0.863mmol)。将混合物在90℃下搅拌过夜。冷却至室温后，加入水，引发沉淀。将沉淀收集，然后溶于CH2Cl2(5mL)和TFA(4mL)。将溶液在室温下搅拌30分钟。将其真空浓缩。残渣经HPLC纯化，得到标题化合物(103mg)。MS 411.5(M+H).UV λ＝238.8，304.8nm。
实施例33：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氟-4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201071
将2，5-二碘氟苯(1.36g，3.90mmol)、氨基甲酸叔丁酯(0.454g，3.88mmol)、xantphos(0.233g，0.40mmol)和Cs2CO3(干燥粉末，2.48g，7.61mmol)在THF(12mL)中的混合物用Ar脱气，然后加入Pd2(dba)3(0.071g，0.078mmol)。将其在75℃下搅拌过夜。冷却至室温后，加入水和EtOAc。将有机相分离，经Na2SO4干燥，真空浓缩。将残渣加载在闪柱上，用0-10％EtOAc/己烷洗脱，得到3-氟-4-碘苯氨基甲酸叔丁酯(716mg)。
将3-氟-4-碘苯氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.48mmol)和4-(三丁锡烷基)噻唑(0.578mL，1.80mmol)的二
Figure BPA00001277505201072
烷(6mL)溶液用Ar脱气，然后加入Pd(Ph3P)4(170mg，0.147mmol)。将其在100℃下搅拌34h，然后真空浓缩。将残渣加载在闪柱上，用0-25％ EtOAc/己烷洗脱，得到3-氟-4-(噻唑-4-基)苯氨基甲酸叔丁酯(270mg)。MS 295.3(M+H)
将3-氟-4-(噻唑-4-基)苯氨基甲酸叔丁酯(270mg，0.92mmol)的CH2Cl2(2mL)和TFA(4mL)溶液在室温下搅拌60分钟。将其真空浓缩。将残余物溶于CH2Cl2(20mL)，用5％ NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到3-氟-4-(噻唑-4-基)苯胺(145mg)，为游离碱。MS 195.2(M+H)
在室温下，向2，4-二氯嘧啶-5-甲酸乙酯(165mg，0.746mmol)和3-氟-4-(噻唑-4-基)苯胺(145mg，0.747mmol)的CH3CN(5mL)溶液中加入DIEA(0.260mL，1.49mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，在此期间生成固体沉淀。将沉淀收集，真空干燥，得到2-氯-4-(3-氟-4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯，为固体(186mg)。MS 379.3和381.3(M+H，Cl形式)
向2-氯-4-(3-氟-4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯(186mg，0.491mmol)的THF(4mL)悬浮液中加入1N LiOH水溶液(1.00mL，1.00mmol)。搅拌下，悬浮液变澄清。然后将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用1N HCl酸化后，生成白色固体沉淀，将该沉淀收集，真空干燥，得到2-氯-4-(3-氟-4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸(158mg)。MS 351.2和353.3(M+H，Cl形式)
向2-氯-4-(3-氟-4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸(158mg，0.450mmol)和HOBt(103mg，0.673mmol)的DMF(4mL)溶液中加入EDC(130mg，0.678mmol)。将混合物在室温下搅拌1h。加入氨水(0.5M的二
Figure BPA00001277505201081
烷溶液，4.50mL，2.25mmol)。将其在室温下搅拌过夜。加入水和EtOAc。将有机相分离，用5％ NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。将残渣溶于H2O和CH3CN(50∶50)。将不溶物收集，真空干燥，得到2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(3-氟-4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺，为固体(36mg).MS 449.4(M+H)
将(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(0.30M的NMP溶液，1.00mL，0.300mmol)的NMP(1mL)溶液加入2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(3-氟-4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(12mg，0.027mmol)。再加入DIEA(0.050mL，0.29mmol)。将混合物在90℃下搅拌1h。冷却至室温后，加入TFA(1mL)。将溶液在室温下搅拌60分钟。混合物经HPLC纯化，得到标题化合物(5mg)。MS 428.4(M+H).UV λ＝229.8，313.8nm。
实施例34：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201091
将3，4-二氟硝基苯(1.00mL，9.03mmol)、咪唑(0.615g，9.04mmol)和K2CO3(2.50g，18.1mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。加入水(20mL)，引发沉淀。将沉淀收集，真空干燥，得到1-(2-氟-4-硝基苯基)-1H-咪唑，为固体(1.81g)。MS 208.2(M+H)
在H2环境下，将1-(2-氟-4-硝基苯基)-1H-咪唑(1.81g，8.74mmol)和Pd-C(10％，0.200g)在MeOH(20mL)(含10滴6N HCl)中的混合物氢化过夜。使混合物通过硅藻土过滤。将滤液真空浓缩。将残渣真空浓缩，得到3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)苯胺，为固体(1.37g)。MS 178.3(M+H)
向2，4-二氯嘧啶-5-甲酸乙酯(280mg，1.27mmol)和3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)苯胺(230mg，1.30mmol)的CH3CN(8mL)溶液中加入DIEA(0.442mL，2.54mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。加入水和EtOAc。将有机相分离，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到2-氯-4-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯，为固体(383mg)。MS 362.4和364.3(M+H，Cl形式)
向2-氯-4-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯(383mg，1.06mmol)的THF(5mL)溶液中加入1N LiOH水溶液(2.00mL，2.00mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将THF在真空中除去。用1N HCl酸化后，混合物经HPLC纯化，得到2-氯-4-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸(68mg)。MS 334.1和336.1(M+H，Cl形式)
向2-氯-4-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酸(68mg，0.20mmol)和HOBt(63mg，0.41mmol)的DMF(2mL)溶液中加入EDC(60mg，0.31mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5h。加入氨水(0.5M的二
Figure BPA00001277505201101
烷溶液，0.800mL，0.40mmol)。将其在室温下搅拌过夜。再加入EDC(100mg，0.52mmol)。将其再搅拌24h。加入水和EtOAc。将有机相分离，用5％ NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(57mg)。MS 432.2(M+H)
将(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(0.30M的NMP溶液，1.00mL，0.300mmol)的NMP(1mL)溶液加入2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(57mg，0.13mmol)。加入DIEA(0.100mL，0.57mmol)。将混合物在90℃下搅拌1h。冷却至室温后，加入水和EtOAc。将有机相分离，用5％ NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。将残渣溶于CH2Cl2(1mL)和TFA(1mL)。将溶液在室温下搅拌60分钟。将其真空浓缩。残渣经HPLC纯化，得到标题化合物(23mg)。MS 411.3(M+H).UV λ＝247.8，299.8nm..
实施例35：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氟-4-(4-甲基-1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
按类似于实施例34中所述方法制备标题化合物。MS 425.3(M+H).UV λ＝247.8，311.8nm。
实施例36：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201111
用2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯胺代替72.4，按实施例1中合成72.7的示范方法合成化合物107.1。
向107.1(0.054g，0.125mmol)中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯81.2(0.3M，0.6mL，0.18mmol)和DIEA(33μL，0.18mmol)溶液。在65℃浴中搅拌2h后，将混合物用水稀释，过滤，将生成的沉淀收集，得到107.2。向107.2在DCM中的混合物(0.5mL)中加入TFA(0.5mL)，在室温下搅拌10分钟后，将溶液浓缩，残渣经制备HPLC纯化，得到标题化合物107。C20H23FN8O的MS实测值为(M+H)+ 411.1。UV：λ＝201.6，240.4，289.0.
实施例37：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤1：向碘苯108.1(200mg，0.46mmol)在甲苯(2mL)中的混合物中加入5-三丁锡烷基噻唑108.2(173mg，0.46mmol)和Pd(PPh3)4(53mg，0.046mmol)。用氩气流将混合物脱气3分钟，在氩环境下回流2小时。将其真空浓缩，通过硅胶闪柱，分离到化合物108.3(100mg)。
步骤2：向乙酯108.3(84mg，0.22mmol)在THF(0.8mL)中的混合物加入氢氧化锂水合物(8mg，0.35mmol)的水(0.5mL)溶液。在室温搅拌2小时后，将其真空浓缩，除去THF，用1N HCl小心处理直至pH达到3。过滤，将得到的沉淀收集，得到化合物108.4(74mg)。
步骤3：向羧酸108.4(74mg)在DMF(1mL)中的混合物加入EDC盐酸盐(60mg)和HOBt水合物(48mg)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后向其中加入氨水(市售0.5N的二
Figure BPA00001277505201121
烷溶液，1mL)。将混合物在室温下搅拌1h。然后将其真空浓缩，除去二
Figure BPA00001277505201122
烷。向其中加入水，过滤，将沉淀收集，得到化合物108.5。
步骤4：将化合物108.5(55mg，0.16mmol)溶于0.3mL NMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，47mg，0.18mmol)。将其在室温下搅拌30分钟。然后向其中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯57.2(0.3M，0.8mL，0.24mmol)和DIEA(57μL，0.32mmol)。将混合物在80℃浴中搅拌60分钟。将该混合物用水稀释，过滤，将得到的沉淀收集，滤出five 108.6，在室温下，将其在1∶1的TFA和二氯甲烷的混合物搅拌30分钟。将其真空浓缩，经反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物。C20H23N7OS的MS实测值为(M+H)+ 410.2。UV：λ＝202.8，245.2.
实施例38：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-氟-4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
按实施例14中示范方法合成标题化合物。C20H22FN7OS的MS实测值为(M+H)+ 428.5。UV：λ＝240.4，312.8
实施例39：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(噻唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201131
用2-三丁锡烷基噻唑代替5-三丁锡烷基噻唑108.2，按实施例37中示范方法合成标题化合物。C20H23N7OS的MS实测值为(M+H)+ 410.2 UV：λ＝206.3，242.8，291.4
实施例40：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(噻唑-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201132
用4-三丁锡烷基噻唑代替5-三丁锡烷基噻唑108.2，按实施例37中示范方法合成标题化合物111。C20H23N7OS的MS实测值为(M+H)+ 410.5 UV：λ＝201.6，244.0，277.1
实施例41：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(吡啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201133
用2-三丁锡烷基吡啶代替5-三丁锡烷基噻唑108.2，按实施例37中示范方法合成标题化合物。C22H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 404.2；UV：λ＝242.8，292.6
实施例42：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(吡嗪-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201141
用2-三丁锡烷基吡嗪代替5-三丁锡烷基噻唑108.2，按实施例37中示范方法合成标题化合物。C21H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 405.3 UV：λ＝244.0，289.0
实施例43：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(哒嗪-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201142
用4-三丁锡烷基哒嗪代替5-三丁锡烷基噻唑108.2，按实施例37中示范方法合成标题化合物。C21H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 405.2 UV：λ＝246.3
实施例44：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201151
用1-甲基-2-三丁锡烷基-1H-咪唑代替5-三丁锡烷基噻唑108.2，按实施例37中示范方法合成标题化合物。C21H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 407.2。UV：λ＝242.8
实施例45：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(6-甲氧基吡啶-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201152
步骤1：向碘苯108.1(300mg，0.72mmol)在对-二氧杂环己烷(5mL)中的混合物加入6-甲氧基吡啶-3-基硼酸116.1(121mg，0.80mmol)和1MNa2CO3(21.mL)、然后加入PdCl2(PPh3)2(51mg，0.07mmol)。将混合物用氩气流脱气3分钟，在氩环境下，在85℃下加热2小时。将其用DCM稀释，将有机层用饱和NaHCO3、盐水洗涤，干燥，浓缩，得到粗残渣，该残渣经柱层析纯化，得到116.2(160mg)。
步骤2：向乙酯116.2(160mg)在THF(1.6mL)中的混合物加入氢氧化锂水合物(20mg)的水(1mL)溶液。在室温下搅拌24小时后，将其真空浓缩，除去THF，用1N HCl小心处理直至达到pH 3。过滤，将得到的沉淀收集，得到化合物116.3。
步骤3：向羧酸116.3在DMF(1.8mL)中的混合物加入EDC盐酸盐(193mg)和HOBt水合物(153mg)。将混合物在室温下搅拌10分钟。然后向其中加入氨水(市售0.5N的二
Figure BPA00001277505201161
烷溶液，2mL)。将混合物在室温下搅拌1h。然后将其真空浓缩，除去二烷。向其中加入水，过滤，将沉淀收集，得到化合物116.4。
步骤4：将化合物116.4(80mg，0.22mmol)溶于0.5mL NMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，64mg，0.24mmol)。将其在室温下搅拌30分钟。然后向其中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯81.2(0.3M，1.2mL，0.3mmol)和DIEA(78μL，0.44mmol)溶液。将混合物在85℃浴中搅拌60分钟。将该混合物用水稀释，过滤，将生成的沉淀收集，得到116.5，在室温下，将其在1∶1的TFA和二氯甲烷的混合物中搅拌30分钟。将其真空浓缩，经反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物。C23H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 434.3 UV：λ＝247.5。
实施例46：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(6-甲氧基吡啶-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201163
用4-(4-碘苯氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯代替108.1，按实施例45中示范方法合成标题化合物。C23H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 434.3.UV：λ＝240.4，306.8
实施例47：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-甲基-4-吗啉代苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用3-甲基-4-吗啉代苯胺代替苯胺72.4，按实施例1和实施例9中示范方法合成标题化合物。C22H31N7O2的MS实测值为(M+H)+ 426.3。UV：λ＝240.4，296.1
实施例48：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(2-氨基吡啶-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201172
步骤1：将4-硝基-苯基-硼酸(159mgs，0.95mmol)、N，N-二(叔丁氧基羰基)氨基-4-碘吡啶(US6831175)(200mg，0.47mmol)、碳酸钾(329mg，2.38mmol)、四(三苯基膦)合钯(0)(220mgs，0.19mmol)、DME(5mL)、水(0.6mL)的混合物在微波(Emry’s Optimizer)中，在120℃下加热15分钟。将该反应再重复4次。将合并的反应物倾入乙酸乙酯，用水(2x)、盐水(1x)洗涤，浓缩。然后浓缩物经硅胶闪柱(3∶7乙酸乙酯/己烷)处理，得到N，N-二(叔丁氧基羰基)氨基-(4-硝基苯基)吡啶119.1。C21H25N3O6的MS实测值为(M+H)+ 416.0.
步骤2：将化合物119.1(955mgs，2.3mmol)溶于含几滴乙酸的乙醇(40mL)，在1大气压下，在10％Pd/C(潮湿)的存在下氢化5h。将反应物过滤，浓缩，得到119.2(782mg，88％)，为深棕色固体。C21H27N3O4的MS实测值为(M+H)+ 386.0.
步骤3：在0℃下，向二氯嘧啶119.3(180mg，0.816mmol)的乙腈(3mL)溶液中加入119.2(314mgs，0.816mmol)、二异丙胺(0.16mL，0.897mmol)的乙腈(8mL)悬浮液。然后使反应混合物缓慢升温至室温，搅拌过夜。然后将反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取(2×)。将合并的乙酸乙酯层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩，得到119.4。C28H32ClN5O6的MS实测值为(M+H)+ 570.0.
步骤4：将粗乙酯119.4(460mgs，0.81mmol)依次用1，4-二氧杂环己烷(5mL)、氢氧化锂水溶液(1.0M，0.8mL，0.8mmol)稀释，在室温下搅拌直至所有原料转化为羧酸。然后将反应物用水(30mL)稀释，用1N HCl(1.0mL)酸化。然后将得到的悬浮液过滤，用水洗涤，干燥，得到385mg羧酸119.5(88％)。C26H28ClN5O6的MS实测值为(M+H)+ 542.0.
步骤5：向羧酸119.5(385mg，0.71mmol)、EDC(204mg，1.06mmol)、HOBt(163mgs，1.06mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(3.6mL)溶液中加入氨水(0.5M的1，4-二氧杂环己烷溶液，3.6mL，1.8mmol)，搅拌过夜。然后将反应混合物用水稀释，过滤，收集沉淀，得到需要的产物119.6(394mg，87％)。C32H33N9O6的MS实测值为(M+H-Boc)+ 540.0。
步骤6和步骤7：在微波中(Emry’s Optimizer)，将苯并三唑基醚119.6(90mg，0.140mmol)、(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(36mgs，0.170mmol)、DIPEA(0.07mL，0.420mmol)在异丙醇(2mL)中的混合物在130℃下加热20分钟。将反应混合物浓缩，然后在室温下用4.0M HCl的二
Figure BPA00001277505201191
烷(6.0mL)溶液处理1h，将反应混合物浓缩，用水和乙腈稀释，经制备型HPLC直接纯化，得到需要的产物119(43.6mg，75％)，冻干后，为棕褐色固体。C22H26F2N8O的MS实测值为(M+H)+ 419.5。
实施例49：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(4-(氨基甲基)哌啶-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201192
用类似于实施例48中所述方法，用(1-(4-氨基苯基)哌啶-4-基)甲基氨基甲酸叔丁酯(由4-氟硝基苯制备)制备以上化合物。C23H34N8O的MS实测值为(M+H)+ 439.6。
实施例50：4-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基-氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201193
4-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯121.1：
向2，4-二氯嘧啶-5-甲酸乙酯(1.4)(600mg，2.714mmol)的CH3CN(12mL)溶液中依次加入DIEA(0.750mL，4.313mmol，1.589当量)、4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯胺(465mg，2.902mmol，1.07当量)。将混合物在室温下搅拌20h，然后用水(6×)稀释，得到沉淀ii。过滤。将固体产物收集，用水(100mL)冲洗，晾干；收率850mg(91％)。
4-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酸121.2：
向4-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(ii)(870mg，2.523mmol)的THF(12mL)溶液中加入1M LiOH(3.30mL，3.30mmol，1.30当量)，将混合物在室温下搅拌3h。然后将THF旋转蒸发，将混合物水溶液用2N HCl酸化至pH 2。过滤，将沉淀固体产物收集，用水冲洗，晾干；收率712mg(89％)。
4-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氨基)-2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)嘧啶-5-甲酰胺121.3：
在室温下，向4-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酸(iii)(730mg，2.305mmol)的DMF(15mL)溶液中加入HOBt(470mg，3.478mmol，1.508当量)和EDC.HCl(690mg，3.599mmol，1.561当量)，将混合物搅拌45分钟。然后将其冷却至0℃，用0.5M NH3的二烷(14.0ml，7.0mmol，3.0当量)溶液处理，在室温下将混合物搅拌18h。然后用水(7×)稀释，得到沉淀iv。过滤，收集，用水冲洗，晾干；收率841mg(88％)。MS：415.1(M+H)和437.1(M+Na)。
4-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-嘧啶-5-甲酰胺121：
向顺式-环己烷-1，2-二胺(100mg，0.876mmol，6.08当量)的CH3CN(1.50mL)溶液中加入4-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氨基)-2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)嘧啶-5-甲酰胺(iv)(60mg，0.144mmol)，将混合物搅拌19h。然后将其用水(8×)稀释，过滤，将固体产物收集，用水冲洗，晾干。经RPHPLC纯化，得到产物，为其TFA盐；收率59mg(81％)。MS：394.1(M+H)和416.1(M+Na)。
实施例51：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(异
Figure BPA00001277505201202
唑-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(4-(异
Figure BPA00001277505201212
唑-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺122.1：
用所述121.3合成方法，由2，4-二氯嘧啶-5-甲酸乙酯(1.4)和4-(异
Figure BPA00001277505201213
唑-5-基)苯胺制备该化合物。
(1S，2R)-2-(5-氨基甲酰基-4-(4-(异
Figure BPA00001277505201214
唑-5-基)苯氨基)嘧啶-2-基氨基)环己基氨基甲酸叔丁酯122.2：
将化合物210.1(100mg，0.241mmol)的N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液与(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(0.3mmol，1.244当量)和DIEA(0.120mL，0.690mmol，2.83当量)混合，加热至50℃，保持4h。然后使其在EtOAc和水之间分配。合并的EtOAc萃取液经无水Na2SO4干燥，浓缩，得到210.2，该产物按原样用于后续反应。
2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(异
Figure BPA00001277505201215
唑-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺122：
将粗122.2用CH2Cl2(5mL)稀释，依次加入茴香醚(0.700mL，过量)、CF3COOH(5mL)。将混合物在室温下搅拌5h，然后浓缩至干。经RP-HPLC纯化，得到纯210，为无色蓬松状物，101mg(83％)。MS：394.3(M+H).
实施例52：4-(4-(1H-四唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201221
用所述122合成流程，在步骤1中用4-(1H-四唑-1-基)苯胺制备该化合物。MS：395.28(M+H).
实施例53：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(唑-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201223
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用4-(
Figure BPA00001277505201224
唑-5-基)苯胺合成该化合物。
实施例54：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(
Figure BPA00001277505201225
唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201226
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(
Figure BPA00001277505201227
唑-4-基)苯胺合成该化合物。MS：394.28(M+H).
实施例55：4-(3-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶5-甲酰胺：
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯胺合成该化合物。MS：394.2(M+H).
实施例56：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(5-甲基-1，2，4-
Figure BPA00001277505201231
二唑-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201232
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(5-甲基-1，2，4-
Figure BPA00001277505201233
二唑-3-基)苯胺合成该化合物。MS：409.28(M+H).
实施例57：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2-甲基噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201234
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(2-甲基噻唑-4-基)苯胺合成该化合物。MS：424.37(M+H).
实施例58：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(5-甲基-1，2，4-
Figure BPA00001277505201235
二唑-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201236
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用4-(5-甲基-1，2，4-
Figure BPA00001277505201237
二唑-3-基)苯胺合成该化合物。MS：409.5(M+H).
实施例59：4-(3-(1H-吡唑-5-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201241
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(1H-吡唑-5-基)苯胺合成该化合物。MS：393.0(M+H).
实施例60：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(噻吩-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201242
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用4-(噻吩-2-基)苯胺合成该化合物。MS：410.0(M+H).
实施例61：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-甲氧基-4-(
Figure BPA00001277505201243
唑-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201244
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-甲氧基-4-(唑-5-基)苯胺合成该化合物。MS：424.5(M+H).
实施例62：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201251
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用4-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯胺合成该化合物。MS：407.5(M+H).
实施例63：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201252
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用1-(3-氨基苯基)吡咯烷-2-酮合成该化合物。MS：410.5(M+H).
实施例64：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(3，5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201253
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用4-(3，5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯胺合成该化合物。MS：421.5(M+H).
实施例65：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-甲氧基-5-(1H-四唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201261
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-甲氧基-5-(1H-四唑-1-基)苯胺合成该化合物。MS：425.4(M+H).
实施例66：4-(3-(1H-四唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(1H-四唑-1-基)苯胺合成该化合物。MS：395.5(M+H).
实施例67：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201263
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯胺合成该化合物。MS：409.5(M+H).
实施例68：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201271
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯胺合成该化合物。MS：409.5(M+H).
实施例69：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(5-甲基-1，2，4-
Figure BPA00001277505201272
二唑-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201273
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用4-(5-甲基-1，2，4-
Figure BPA00001277505201274
二唑-3-基)苯胺合成该化合物。MS：409.5(M+H).
实施例70：4-(3-(1H-吡咯-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(1H-吡咯-1-基)苯胺合成该化合物。MS：392.5(M+H).
实施例71：4-(4-(1H-吡咯-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201281
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用4-(1H-吡咯-1-基)苯胺合成该化合物。MS：392.4(M+H).
实施例72：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(5-甲基呋喃-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201282
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(5-甲基呋喃-2-基)苯胺合成该化合物。MS：407.5(M+H).
实施例73：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(吡咯烷-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201283
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-(吡咯烷-1-基)苯胺合成该化合物。MS：396.6(M+H).
实施例74：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-吗啉代苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201291
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用3-吗啉代苯胺合成该化合物。MS：412.5(M+H).
实施例75：4-(4-(1，3，4-
Figure BPA00001277505201292
二唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201293
用所述化合物122合成流程，在步骤1中用4-(1，3，4-
Figure BPA00001277505201294
二唑-2-基)苯胺合成该化合物。MS：395.3(M+H).
实施例76：4-(3-(2H-四唑-5-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201301
化合物147.4：
用所述实施例77合成方法合成2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氰基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺。MS：352.2(M+H).
化合物147：
通过将化合物147.4(75mg，0.213mmol)、叠氮化钠(90mg，1.384mmol，6.5当量)和溴化锌(53mg，0.235mmol)在异丙醇/水(1∶1)(4mL)中加热回流14h合成4-(3-(2H-四唑-5-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺，此时HPLC分析显示反应完全。然后将反应混合物冷却至0℃，用3N HCl酸化至pH 1，通过硅藻土过滤，浓缩至干，得到标题化合物179，通过RP-HPLC将其纯化。MS：395.1(M+H)，417.2(M+Na).
实施例78：4-(4-(2H-四唑-5-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺：
Figure BPA00001277505201311
用所述实施例5合成流程，在步骤1中用4-氰基苯胺合成该化合物。MS：395.1(M+H)，417.2(M+Na).
实施例79：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氟-4-(3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201312
将三氟甲基吡唑149.1(1.00g，7.35mmol)、3，4-二氟-1-硝基苯149.2(0.68mL，6.13mmoL)和碳酸铯(3.00g，9.2mmol)在20mL无水DMF中的混合物在50℃浴中搅拌4小时。将其用300mL乙酸乙酯稀释，用水洗涤4次。有机相经MgSO4干燥，过滤，得到粗产物149.3溶液。向该溶液中加入催化量的10％ Pd/C。搅拌下，向该悬浮液中充入氢气过夜。将混合物过滤，真空浓缩，得到粗苯胺149.4。C10H7F4N3的MS实测值为(M+H)+ 246.3。用闪柱将其纯化。
用苯胺149.4代替苯胺74.1，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H22F4N8O的MS实测值为(M+H)+479.3.UV λ＝243，302nm.NMR(CD3OD)：δ8.47(s，1H)，8.07(宽峰，1H)，7.84(m，1H)，7.72(m，1H)，7.39(m，1H)，6.74(d，J＝2.0Hz，1H)，4.33(m，1H)，3.66(m，1H)，1.83-1.49(m，8H)ppm。
实施例80：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3，4-二(3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201321
将三氟甲基吡唑150.1(2.00g，14.7mmol)、3，4-二氟-1-硝基苯150.2(1.17g，7.3mmoL)和碳酸铯(5.5g，17mmol)在30mL无水DMF中的混合物在50℃浴中搅拌过夜。将其用300mL乙酸乙酯稀释，用水洗涤4次。有机相经MgSO4干燥，过滤，得到粗产物150.3的溶液。向该溶液中加入催化量的10％ Pd/C。搅拌下，向该悬浮液中充入氢气过夜。将混合物过滤，真空浓缩，得到粗苯胺150.4。C14H9F6N5的MS实测值为(M+H)+ 362.2。将其用闪柱纯化。
用所述实施例3中相同的合成流程，用苯胺150.4代替苯胺74.1制备标题化合物。C25H24F6N10O的MS实测值为(M+H)+ 595.3。UV ＝246，301nm.NMR(CD3OD)：δ8.61(s，1H)，8.45(宽峰，1H)，7.78-7.65(m，4H)，6.75(d，J＝2.0Hz，1H)，6.72(d，J＝2.4Hz，1H)，4.41(m，1H)，3.59(m，1H)，1.86-1.48(m，8H)ppm。
实施例81：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-吗啉代-4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
在80℃浴中，将吡唑151.1(0.50g，7.4mmol)、3，4-二氟-1-硝基苯151.2(0.68mL，6.1mmoL)和碳酸铯(3.0g，9.2mmol)在15mL无水NMP中的混合物在密闭的试管中搅拌3小时，得到化合物151.3。然后向该反应密闭试管中加入吗啉(1.6mL，18.4mmol)。将混合物在120℃浴中搅拌24小时。将其用300mL乙酸乙酯稀释，用水洗涤4次。有机相经MgSO4干燥，过滤，得到粗产物151.4的溶液。向该溶液中加入催化量的10％ Pd/C。搅拌下，向该悬浮液中充入氢气过夜。将混合物过滤，真空浓缩，得到粗苯胺151.5。C13H16N4O的MS实测值为(M+H)+ 245.2。将其用闪柱纯化。
用实施例1中所示相同合成流程，用苯胺151.5代替苯胺74.1制备标题化合物。C24H31N9O2的MS实测值为(M+H)+478.3.UV λ＝247nm。
实施例82：4-(3-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201332
Figure BPA00001277505201341
在120℃浴中，将咪唑152.1(0.64g，9.4mmol)、3-氟-1-硝基苯152.2(0.50mL，4.7mmoL)和碳酸铯(3.1g，9.4mmol)在15mL无水NMP中的混合物在密闭的试管中搅拌3小时。将其用300mL乙酸乙酯稀释，用水洗涤4次。有机相经MgSO4干燥，过滤，得到粗产物152.3的溶液。向该溶液中加入催化量的10％ Pd/C。搅拌下，向该悬浮液中充入氢气过夜。将混合物过滤，真空浓缩，得到粗苯胺152.4。C9H9N3的MS实测值为(M+H)+ 160.1.
用实施例3中所示相同合成流程，用苯胺152.4代替苯胺74.1制备标题化合物。C24H31N9O2的MS实测值为(M+H)+ 478.3.UV λ＝241nm。
实施例83：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201342
步骤1：在密闭试管中，将碘苯77.2(500mg，1.2mmol)溶于12mL二
Figure BPA00001277505201351
烷。向其中加入溴代噻二唑153.1(240mg，1.3mmol)、六甲基二锡(0.25mL，1.2mmol)和Pd(PPh3)4(280mg，0.24mmol)。将混合物用氩气流脱气3分钟，在110℃浴中搅拌90分钟。将其真空浓缩，通过硅胶闪柱，分离到化合物153.2(130mg，28％)。C17H17N5O2S2的MS实测值为(M+H)+ 388.1。
步骤2：将乙酯153.2(130mg，0.34mmol)溶于20mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(42mg，1.0mmol)和3mL水。将混合物在室温下搅拌2小时。将其真空浓缩，除去THF，用1N HCl小心处理直至达到pH 3。将溶液中的黄色固体击碎。用布氏漏斗将其分离，用冷水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物153.3。C15H13N5O2S2的MS实测值(M+H)+ 360.1。
步骤3：将羧酸153.3(0.34mmol)溶于10mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(100mg，0.51mmol)和HOBt水合物(70mg，0.51mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后向其中加入氨水(市售0.5N的二
Figure BPA00001277505201352
烷溶液，3.4mL，1.7mmol)。将混合物搅拌过夜。然后将其真空浓缩，除去二
Figure BPA00001277505201353
烷。然后混合物经反相制备型HPLC处理，分离到化合物153.4(22mg，2步合计18％)。C15H14N6OS2的MS实测值为(M+H)+ 359.1.
步骤4：将化合物153.4(22mg，0.06mmol)溶于5mL NMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，21mg，0.072mmol)。将其在室温下搅拌2小时。然后向其中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯81.2(0.3M，0.4mL，0.12mmol)和DIEA(31μL，0.18mmol)。将混合物在90℃浴中搅拌80分钟。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和Na2CO3水溶液洗涤两次，用水洗涤。有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到粗化合物153.5。C25H32N8O3S的MS实测值为(M+H)+ 525.3。
步骤5：在室温下，将化合物153.5在1∶1的TFA和二氯甲烷的混合物中搅拌1小时。将其真空浓缩，经反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物。C20H24N8OS的MS实测值为(M+H)+ 425.3.UV λ＝241，319nm。
实施例84：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201361
在100℃浴中，将2-甲基咪唑154.1(1.52g，18.6mmol)、4-氟-1-硝基苯154.2(1.0mL，9.4mmoL)和碳酸钾(1.30g，9.4mmol)在20mL无水DMF中的混合物搅拌过夜。将其用300mL乙酸乙酯稀释，用水洗涤4次。有机相经MgSO4干燥，过滤，得到粗产物154.3的溶液。向其中加入催化量的10％Pd/C。搅拌下，向该悬浮液中充入氢气过夜。将混合物过滤，真空浓缩，得到粗苯胺154.4。C10H11N3的MS实测值为(M+H)+ 174.1。将其用闪柱纯化。
用苯胺154.4代替苯胺74.1，用实施例3中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H26N8O的MS实测值为(M+H)+407.3.UV λ＝246，293nm.NMR(CD3OD)：δ8.60(s，1H)，7.96(m，2H)，7.70(d，J＝8.4Hz，2H)，7.66-7.61(m，4H)，4.47(m，1H)，3.73(m，1H)，2.60(s，3H)，1.92-1.59(m，8H)ppm。
实施例85：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201362
在120℃浴中，将2-甲基咪唑155.1(0.77g，9.4mmol)、3-氟-1-硝基苯155.2(0.50mL，4.7mmoL)和碳酸铯(3.07g，9.4mmol)在15mL无水NMP中的混合物搅拌6小时。将其用300mL乙酸乙酯稀释，用水洗涤4次。有机相经MgSO4干燥，过滤，得到粗产物155.3的溶液。向该溶液中加入催化量的10％ Pd/C。搅拌下，向该悬浮液中充入氢气过夜。将混合物过滤，真空浓缩，得到粗苯胺155.4。C10H11N3的MS实测值为(M+H)+174.1。将气用闪柱纯化。
用实施例3中所示相同合成流程，用苯胺155.4代替苯胺74.1制备标题化合物。C21H26N8O的实测为(M+H)+407.3.UV λ＝243，285nm.NMR(CD3OD)：δ8.58(s，1H)，8.06(m，1H)，7.83(m，1H)，7.73-7.71(m，2H)，7.64(m，1H)，7.44(m，1H)，4.41(m，1H)，3.66(m，1H)，2.62(s，3H)，1.89-1.55(m，8H)ppm。
实施例86：4-(3-(1H-1，2，3-三唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201371
在120℃浴中，将1H-1，2，3-三唑156.1(0.55mL 9.4mmol)、3-氟-1-硝基苯156.2(0.50mL，4.7mmoL)和碳酸铯(3.07g，9.4mmol)在15mL无水NMP中的混合物搅拌17小时。将其用300mL乙酸乙酯稀释，用水洗涤4次。有机相经MgSO4干燥，过滤，得到约1∶1的粗产物156.3和156.4。向该溶液中加入催化量的10％ Pd/C。搅拌下，向该悬浮液中充入氢气过夜。将混合物过滤，真空浓缩，得到粗苯胺156.5和156.6。C8H8N4的MS实测值为(M+H)+ 161.1。用闪柱将两种苯胺纯化。
用实施例3中所示相同合成流程，用苯胺156.5代替苯胺74.1制备标题化合物。C19H23N9O的MS实测值(M+H)+ 394.3.UV λ＝244nm.NMR(CD3OD)：δ8.90(s，1H)，8.63(d，J＝1.2Hz，1H)，8.57(s，1H)，7.95(d，J＝1.2Hz，1H)，7.62-7.58(m，2H)，7.43(m，1H)，4.68(m，1H)，3.73(m，1H)，1.91-1.53(m，8H)ppm。
实施例87：4-(3-(1H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201381
用实施例3中所示相同合成流程，用苯胺156.6(实施例1中所示)代替苯胺74.1制备标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.3。UV λ＝250nm.NMR(CD3OD)：δ8.77(s，1H)，8.46(s，1H)，7.88(s，2H)，7.83(d，J＝7.6Hz，1H)，7.45(dd，J＝8.4，8.0Hz，1H)，7.23(d，J＝8.0Hz，1H)，4.52(m，1H)，3.58(m，1H)，1.82-1.43(m，8H)ppm。
实施例88：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(4-(羟基甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201382
用炔丙醇代替三甲代甲硅烷基乙炔，用流程(实施例45)中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N9O2的MS实测值为(M+H)+ 424.3.UV λ＝242，300nm。
实施例89：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(4-(氨基甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201391
用丙炔胺代替三甲代甲硅烷基乙炔，用流程(实施例45)中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H26N10O的MS实测值为(M+H)+ 423.3.UV λ＝242，301nm。
实施例90：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(4-氨基甲酰基-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201392
用丙炔酰胺代替三甲代甲硅烷基乙炔，用流程(实施例45)中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H24N10O2的MS实测值为(M+H)+ 437.3.UV λ＝242，300nm。
实施例91：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(甲基磺酰基)-3-吗啉代苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201393
将甲硫醇钠(2.85g，40.6mmol)和3，4-二氟-1-硝基苯161.1(3.0mL，27.1mmoL)在20mL无水NMP中的混合物在室温下搅拌3小时。将其用300mL乙酸乙酯稀释，用水洗涤4次。有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，溶于270mL DCM。向其中分批加入MCPBA(65％，14.3g，54mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，再用DCM稀释，用0.1N NaOH洗涤3次，用盐水洗涤。该溶液经MgSO4干燥，真空浓缩，得到粗161.2。
将粗161.2(490mg，2.2mmol)溶于10mL无水NMP。向其中加入吗啉(1.2mL，6.6mmol)。将混合物在60℃浴中搅拌1小时。将其用乙酸乙酯300mL稀释，用盐水洗涤3次，经MgSO4干燥，过滤，得到粗产物161.3的溶液。向该溶液中加入催化量的10％ Pd/C。搅拌下，向该悬浮液中充入氢气过夜。将混合物过滤，真空浓缩，得到粗苯胺161.4。C11H16N2O3S的MS实测值为(M+H)+ 257.1。将气用闪柱纯化。
用苯胺161.4代替苯胺74.1，用实施例3中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H31N7O4S的MS实测值为(M+H)+ 490.3。UV λ＝249，301nm。
实施例92：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-氟-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201411
步骤1：在120℃下，将3-溴-4-氟苯胺(860mg，4.53mmol)、1，2，3-三唑(1.05mL，18.1mmol)、K3PO4(1.92g，9.06mmol)、CuI(430mg，2.27mmol)、N，N’-二甲基乙二胺(0.29mL，2.72mmol)在10mL二
Figure BPA00001277505201412
烷和5mLDMSO中的混合物在密闭试管中搅拌5天。得到243.1和243.2(1.5∶1)的混合物和残存原料。向混合物中倾入EtOAc 250mL。将其剧烈搅拌，用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，通过闪柱。用70％ EtOAc/己烷洗脱出化合物243.1，而用90％ EtOAc/己烷洗脱出化合物243.2。
步骤2：向苯胺243.1(255mg，1.44mmol)和4-氯-2-甲硫基-5-嘧啶甲酸乙酯(243.3，CAS 5909-24-0，336mg，1.44mmol)在15mL DMF中的混合物加入DIEA(0.5mL，2.88mmol)。将混合物在85℃下搅拌5小时。向其中加入250mL EtOAc，用盐水洗涤×3，干燥，过滤，真空浓缩，得到定量收率的化合物243.4。C16H15FN6O2S的MS实测值为(M+H)+ 375.1。
步骤3：将以上制备的化合物(1.44mmol)溶于80mL THF和10mL水。向其中加入LiOH水合物(302mg，7.2mmol)。将混合物搅拌过夜。将其真空浓缩，除去THF。向残余物加入1N HCl直至pH达到2。过滤，将固体产物分离。将其用冷水充分洗涤，在真空箱中干燥，得到定量收率的化合物243.5，为棕褐色固体。C14H11FN6O2S的MS实测值为(M+H)+ 347.1。
步骤4：将以上制备的化合物243.5(468mg，1.35mmol)在25mL DMF中搅拌。向其中加入EDC.HCl(390mg，2.03mmol)和HOBt水合物(311mg，2.03mmol)。将混合物搅拌1h，HPLC表明所有原料243.5耗尽。然后向该混合物加入铵(0.5N的二
Figure BPA00001277505201421
烷溶液，8.1mL，4.05mmol)。将混合物搅拌3h，真空浓缩，除去二烷。将水加入残余物，将固体击碎。过滤，将该固体分离，用冷水充分洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物243.6，为棕褐色固体。C14H12FN7OS的MS实测值为(M+H)+ 346.1.
步骤5：将以上制备的化合物243.6(100mg，0.29mmol)溶于5mLNMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，92mg，0.35mmol)。将其在室温下搅拌30分钟，得到相应亚砜和砜的混合物。然后向其中依次加入DIEA(160μL，0.90mmol)和(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(81.2，94mg，0.45mmol)。将混合物在90℃浴中搅拌3小时。然后将其用150mL EtOAc稀释，用饱和Na2CO3洗涤，用盐水洗涤×2，经MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。然后将残渣暴露于1∶1的TFA和DCM混合物，保持1h。将其浓缩，经反相HPLC处理，分离到标题化合物243。C19H22FN9O的MS实测值为(M+H)+ 412.3。UV λ＝247nm.NMR(CD3OD)：δ8.58(m，1H)，8.55(s，1H)，8.05(s，2H)，7.45-7.43(m，2H)，4.53(m，1H)，3.64(m，1H)，1.86-1.54(m，8H)ppm。
实施例93：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-氰基-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
流程：
Figure BPA00001277505201431
步骤1：将2-氟-4-硝基苄腈(2.98g，18mmol)溶于40mL NMP。向其中加入1，2，3-三唑(1.1mL，18.8mmol)和K2CO3(2.98g，21.6mmol)。将混合物在室温下搅拌20h，得到比例为1.3∶1的化合物230.1和230.2(极性较小)。将混合物溶于乙酸乙酯，用水洗涤。用盐水洗涤×3。将其干燥，通过硅胶闪柱，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，分离到需要的化合物230.2。
步骤2：将步骤1中的化合物230.2溶于300mL乙酸乙酯。向其中加入500mg 10％ Pd/C。在45psi氢气压下，将混合物置于Parr摇荡器上过夜。使混合物通过硅藻土过滤，将硅藻土用甲醇充分洗涤。将滤液浓缩，通过硅胶闪柱，分离到苯胺230.3(0.59g，2步合计18％)。
步骤3：将化合物230.4(0.66g，3.0mmol)溶于20mL NMP。向其中依次加入化合物230.3(0.55g，3.0mmol)和DIEA(0.78mL，4.5mmol)。将混合物在75℃下搅拌24h。然后向其中加入NaSMe(0.42g，6.0mmol)。将混合物在70℃下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤×4，干燥，真空浓缩。然后将残渣溶于50mL THF。向其中加入LiOH.H2O(1.26g，30mmol)和50mL水。将混合物在室温下搅拌90分钟。将其用6N HCl酸化直至pH达到2。过滤，将固体沉淀收集。将其用水洗涤，在真空箱中干燥。其为粗化合物230.5。
用类似于实施例93中所示化学流程，用化合物230.5制备标题化合物。C20H22N10O的MS实测值为(M+H)+ 419.4.UV λ＝259，314nm。
实施例94：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氰基-5-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201441
用类似于实施例92中所示化学流程制备标题化合物。C20H22N10O的MS实测值为(M+H)+ 419.3.UV λ＝252nm.NMR(CD3OD)：δ9.03(s，1H)，8.61(s，1H)，8.16(m，1H)，8.02(s，2H)，7.91(m，1H)，4.62(m，1H)，3.69(m，1H)，1.94-1.58(m，8H)ppm。
实施例95：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氰基-5-(1H-1，2，3-三唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201442
用类似于实施例93中所示化学流程制备标题化合物。C20H22N10O的MS实测值为(M+H)+ 419.4.UV λ＝244，288nm.NMR(CD3OD)：δ9.15(s，1H)，8.71(s，1H)，8.63(s，1H)，7.99-7.97(m，3H)，4.67(m，1H)，3.72(m，1H)，1.90-1.58(m，8H)ppm。
实施例96：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(6-甲氧基吡啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201443
流程：
Figure BPA00001277505201451
将市售化合物233.1(2.3g，12.2mmol)和硼酸233.2(1.68g，12.2mmol)加入40mL二
Figure BPA00001277505201452
烷和20mL水。向其中加入K2CO3(5.05g，36.6mmol)和Pd(Ph3P)2Cl2(0.86g，1.22mmol)。用氩气流向混合物中鼓泡3分钟，在氩气下放入85℃浴。将混合物搅拌90分钟。将其真空浓缩，除去二
Figure BPA00001277505201453
烷。然后将混合物用氯仿萃取x4。将有机萃取液干燥，真空浓缩，得到粗苯胺233.3。
然后用类似于实施例86中所示化学流程，用苯胺233.3制备标题化合物。C23H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 434.4.UV λ＝245，296nm。
实施例97：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-甲氧基嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201454
用类似于实施例96中所示化学流程制备标题化合物。C22H26N8O2的MS实测值为(M+H)+ 435.4.UV λ＝250nm.NMR(CD3OD)：δ8.53(s，1H)，8.42(s，1H)，7.92(m，1H)，7.77(m，1H)，7.54-7.50(m，3H)，6.79(d，J＝8.0Hz，1H)，4.30(m，1H)，4.01(s，3H)，3.64(m，1H)，1.85-1.36(m，8H)ppm。
实施例98：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(5-氟嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201455
用类似于实施例96中所示化学流程制备标题化合物。C21H23FN8O的MS实测值为(M+H)+ 423.3.UV λ＝249nm.
实施例99：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201461
用实施例86中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 408.4.UV λ＝245nm。
实施例100：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-甲基-2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201462
用实施例87中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 408.4.UV λ＝251nm。
实施例101a：4-(3-(2H-四唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
流程：
Figure BPA00001277505201471
在105℃下，将3-碘苯胺(0.5mL，4.2mmol)、四唑(0.88g，12.6mmol)、K3PO4(2.67g，12.6mmol)、CuI(400mg，2.1mmol)、DMEDA(0.27mL，2.5mmol)在6mL二
Figure BPA00001277505201472
烷和6mL DMSO中的混合物在密闭烧瓶中搅拌3天，得到苯胺238.1(极性较小)和238.2的17∶1的混合物(通过HPLC测定)。将其用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，用盐水洗涤×2。将其干燥，浓缩，通过硅胶闪柱，用40％乙酸乙酯/己烷洗脱，分离到苯胺238.1。
用实施例86中所示相同的合成流程制备标题化合物。C18H22N10O的MS实测值为(M+H)+ 395.4.UV λ＝250nm.NMR(CD3CN)：δ9.02(s，1H)，8.87(s，1H)，7.98(d，J＝8.0Hz，1H)，7.67-7.53(m，3H)，4.83(m，1H)，3.67(m，1H)，1.8-1.4(m，8H)ppm。
实施例101b：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-甲基-5-(2H-四唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201473
流程：
Figure BPA00001277505201474
在105℃下，将3-溴-5-甲基苯胺.HCl(0.94g，4.2mmol)、四唑(0.88g，12.6mmol)、K3PO4(4.45g，21mmol)、CuI(400mg，2.1mmol)、DMEDA(0.27mL，2.5mmol)在6mL二
Figure BPA00001277505201475
烷和6mL DMSO中的混合物在密闭烧瓶中搅拌3天，得到纯苯胺239.1。通过HPLC/LCMS未发现苯胺239.2。将其用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，用盐水洗涤×2。将其干燥，浓缩，通过硅胶闪柱，用40％乙酸乙酯/己烷洗脱，分离到苯胺239.1。
用实施例86中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H24N10O的MS实测值为(M+H)+ 409.4.UV λ＝250nm.NMR(CD3CN)：δ8.85(s，1H)，8.80(s，1H)，8.58(s，1H)，7.83(s，1H)，4.83(m，1H)，3.68(m，1H)，2.50(s，3H)，1.8-1.4(m，8H)ppm。
实施例102：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(4-甲基-4H-1，2，4-三唑-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例86中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 408.4.UV λ＝246，304nm。
实施例103：4-(3-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201482
流程：
Figure BPA00001277505201483
在120℃下，将3-碘苯胺(0.5mL，4.2mmol)、苯并咪唑(1.5g，12.6mmol)、K3PO4(2.67g，12.6mmol)、CuI(400mg，2.1mmol)、DMEDA(0.27mL，2.5mmol)在6mL二
Figure BPA00001277505201491
烷和6mL DMSO中的混合物在密闭烧瓶中搅拌2天，得到苯胺241.1。将混合物用300mL乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，干燥，过滤，浓缩，通过硅胶闪柱，用70％乙酸乙酯/己烷洗脱，分离到苯胺241.1(730mg，83％)，为白色固体。
用实施例89中所示相同合成流程，用苯胺制备标题化合物。C24H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 443.4.UV λ＝249nm.NMR(CD3OD)：δ9.07(s，1H)，8.56(s，1H)，8.29(s，1H)，7.87(m，1H)，7.74(m，3H)，7.56(m，3H)，4.14(m，1H)，3.50(m，1H)，1.72-1.11(m，8H)ppm。
实施例104：4-(3-(1H-吲唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(242.A)和4-(3-(2H-吲唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(242.B)
Figure BPA00001277505201492
流程：
Figure BPA00001277505201493
在120℃下，将3-碘苯胺(0.5mL，4.2mmol)、吲唑(1.5g，12.6mmol)、K3PO4(2.67g，12.6mmol)、CuI(400mg，2.1mmol)、DMEDA(0.27mL，2.5mmol)在6mL-二烷和6mL DMSO中的混合物在密闭烧瓶中搅拌17h，得到6.9∶1的苯胺242.1(极性较小)和苯胺242.2(通过HPLC测定)。将混合物用300mL乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，干燥，过滤，浓缩，通过硅胶闪柱，分离到两种苯胺。
用实施例86中所示相同合成流程，用相应的苯胺制备两个标题化合物。用苯胺242.1制备化合物242.A：C24H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 443.4.UV λ＝247，301nm。用苯胺242.2制备化合物242.B：C24H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 443.4.UV λ＝240，295nm。
化合物104A：NMR(CD3OD)：δ8.57(m，1H)，8.56(s，1H)，8.31(s，1H)，7.87(m，1H)，7.83(m，3H)，7.59(m，2H)，7.51(m，1H)，7.33(m，1H)，7.28(m，1H)，4.34(m，1H)，3.60(m，1H)，1.80-1.22(m，8H)ppm.化合物104B：NMR(CD3OD)：δ8.84(s，1H)，8.78(m，1H)，8.55(s，1H)，7.78-7.76(m，2H)，7.68(d，J＝9.2Hz，1H)，7.57(m，1H)，7.42-7.34(m，2H)，7.13(m，1H)，4.46(m，1H)，3.63(m，1H)，1.85-1.19(m，8H)ppm。
实施例105：4-(3-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(243.A)和4-(3-(2H-苯并[d][1，2，3]三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(243.B)
流程：
在120℃下，将3-碘苯胺(0.5mL，4.2mmol)、吲唑(1.5g，12.6mmol)、K3PO4(2.67g，12.6mmol)、CuI(400mg，2.1mmol)、DMEDA(0.27mL，2.5mmol)在6mL二烷和6mL DMSO中的混合物在密闭烧瓶中搅拌17h，得到7.5∶1的苯胺243.1和苯胺243.2(极性较小)(通过HPLC测定)。将混合物用300mL乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，干燥，过滤，浓缩，通过硅胶闪柱，分离到两种苯胺。
用实施例86中所示相同合成流程，用相应的苯胺制备两个标题化合物。用苯胺243.1制备化合物2432.A：C23H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 444.4.UV λ＝246，291nm。用苯胺243.2制备化合物243.B：C23H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 444.4.UV λ＝234，303nm。化合物105A：NMR(CD3OD)：δ8.78(m，1H)，8.56(s，1H)，8.12(d，J＝8.4Hz，1H)，7.95(d，J＝8.4Hz，1H)，7.68(m，3H)，7.54(m，1H)，7.47(m，1H)，4.57(m，1H)，3.68(m，1H)，1.90-1.44(m，8H)ppm.化合物105B：NMR(CD3OD)：δ9.07(s，1H)，8.55(s，1H)，8.16(d，J＝7.6Hz，1H)，7.92(m，2H)，7.59(m，1H)，7.49(m，2H)，7.42(m，1H)，4.61(m，1H)，3.67(m，1H)，1.93-1.59(m，8H)ppm。
实施例106：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例86中所示相同合成流程，用联芳基苯胺(市售)制备标题化合物。C24H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 443.4.UV λ＝240，292nm。
实施例107：4-(3-(2H-苯并[b][1，4]
Figure BPA00001277505201512
嗪-4(3H)-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201513
流程：
Figure BPA00001277505201521
在氩气下，将市售化合物245.1(600mg，4.44mmol)、3-碘-1-硝基苯(245.2，1.11g，4.44mmol)、Pd(dba)2(128mg，0.22mmol)、Ph5FcP(tBu)2(313mg，0.44mmol)和NaOtBu(640mg，0.66mmol)在8mL甲苯中的混合物在50℃下搅拌过夜(21h)。化合物245.2完全形成。将混合物用300mL乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤×3，干燥，通过细硅胶短柱过滤。在Parr振动器上，在50psi H2下，滤液经200mg 10％ Pd/C处理过夜。使混合物通过硅藻土过滤，将硅藻土用甲醇充分洗涤。将滤液真空浓缩，得到粗苯胺245.4(870mg，2步合计87％)。
用实施例12中所示相同合成流程，用以上制备的苯胺制备标题化合物。C25H29N7O2的MS实测值为(M+H)+ 460.4.UV λ＝243，290nm。
实施例108：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-苯基哌嗪-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
流程：
Figure BPA00001277505201523
将3-氟-1-硝基苯(1.0mL，9.4mmol)、N-苯基哌嗪(2.87mL，18.8mmol)和碳酸铯(6.13g，l8.8mmol)在NMP中的混合物在128℃下搅拌3夜。将其用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤×2，干燥，浓缩，用硅胶闪柱纯化，得到化合物245.1(1.19g，45％)。将其溶于200mL乙酸乙酯，在Parr振动器上，在50psi氢气压下，用500mg 10％ Pd/C处理过夜。使混合物通过硅藻土过滤，将硅藻土用甲醇充分洗涤。将滤液真空浓缩，得到苯胺245.2。
用实施例12中所示相同合成流程，用以上制备的苯胺制备标题化合物。C27H34N8O的MS实测值为(M+H)+ 487.5.UV λ＝245nm。
实施例109：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(喹啉-6-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201531
流程：
用氩气流将6-溴喹啉(870mg，4.2mmol)、硼酸(580mg，4.2mmol)、Pd(Ph3P)2Cl2(590mg，0.84mmol)、K2CO3(1.74g，12.6mmol)在20mL二
Figure BPA00001277505201533
烷和10mL水中的混合物脱气3分钟，在氩气下，在85℃下搅拌90分钟。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，干燥，浓缩，通过硅胶闪柱，用60％乙酸乙酯/己烷洗脱，分离到特征苯胺。
用实施例86中所示相同合成流程，用以上制备的苯胺制备标题化合物。C26H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 454.4.UV λ＝263nm。
实施例110：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(喹啉-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201541
用实施例109中所示相同合成流程制备标题化合物。C26H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 454.4.UV λ＝249nm。
实施例112：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201542
用3-碘-1-甲基吡唑代替2-溴-5-甲基-1，3，4-噻二唑153.1，用实施例83中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 407.3.UV λ＝240，311nm。
实施例113：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201543
用实施例83中所示相同合成流程，用4-碘-1-甲基吡唑代替2-溴-5-甲基-1，3，4-噻二唑153.1，制备标题化合物。C21H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 407.3.UV λ＝239，314nm。
实施例114：4-(4-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201551
用实施例87中所示相同合成流程，用4-氟-1-硝基苯代替3-氟-1-硝基苯，制备标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.3.UV λ＝239，310nm.NMR(CD3OD)：δ8.54(s，1H)，8.12(m，2H)，7.93(s，2H)，7.81(m，2H)，4.40(m，1H)，3.73(m，1H)，1.94-1.58(m，8H)ppm。
实施例115：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氟-5-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例92中所示相同合成流程，用3-氟-5-碘苯胺制备以上化合物。C19H22FN9O的实测(M+H)+ 412.3.UV λ＝250nm。
实施例116：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-甲氧基-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201553
用实施例92中所述相同的合成方法，用3-碘-4-甲氧基苯胺制备以上化合物。通过在5％披硫化Pt碳的EtOAc悬浮液中氢化，由市售3-碘-4-甲氧基-1-硝基苯制备3-碘-4-甲氧基苯胺。C20H25N9O2的MS实测值为(M+H)+ 424.3.UV λ＝244，295nm。
实施例117：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-甲氧基-5-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201561
用与实施例92中所述相同的方法，用3-溴-5-甲氧基苯胺制备以上化合物。通过在5％披硫化Pt碳的EtOAc悬浮液中氢化，由市售3-溴-5-甲氧基-1-硝基苯制备3-溴-5-甲氧基苯胺。C20H25N9O2的MS实测值为(M+H)+ 424.3.UV λ＝249nm。
实施例118：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-甲基-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201562
用与实施例87中所述相同的方法，用4-甲基-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯胺制备以上化合物。按实施例106中所示，通过在10％披Pt碳的EtOAc悬浮液中氢化，由市售3-氟-4-甲基-1-硝基苯和1，2，3-三唑制备制备4-甲基-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯胺。C20H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 408.3.UV λ＝243，281nm.δ1.5-1.9(m，8H)，2.36(s，3H)，3.60-3.70(m，1H)，4.40-4.50(m，1H)，7.35-7.43(m，2H)，8.00(s，2H)，8.28-8.33(m，1H)，8.53(s，1H)
实施例119：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-甲基-5-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用与实施例92中所述相同合成流程，用市售3-溴-5-甲基苯胺制备以上化合物。C20H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 408.3.UV λ＝248nm.δ1.5-1.9(m，8H)，2.45(s，3H)，3.65-3.75(m，1H)，4.6-4.7(s，1H)，7.12-7.18(m，1H)，7.72(s，1H)，7.98(s，2H)，8.56(s，1H)，8.72-8.78(m，1H)
实施例120：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201572
步骤1：将3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺(670mg，3.06mmol)、2-溴嘧啶(486mg，3.06mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(430mg，0.61mmol)、K2CO3(1.27g，9.18mmol)在20mL二
Figure BPA00001277505201582
烷和10mL水中的混合物用Ar流通气5分钟，在Ar下，在85℃下搅拌2小时。将其用300mL EtOAc稀释，用水和盐水洗涤×2。然后将有机相干燥，真空浓缩，通过闪柱处理，得到化合物249.1(白色固体，440mg，84％收率，用60％ EtOAc/己烷洗脱)。C10H9N3的MS实测值为(M+H)+ 172.1。
步骤2：向苯胺249.1(440mg，2.57mmol)和4-氯-2-甲硫基-5-嘧啶甲酸乙酯(243.3，CAS 5909-24-0，600mg，2.57mmol)在20mL DMF中的混合物中加入DIEA(0.90mL，5.14mmol)。将混合物在80℃下搅拌10小时。向其中加入350mL EtOAc，用盐水洗涤×2，干燥，过滤，真空浓缩，得到定量收率的化合物249.2。C18H17N5O2S的MS实测值为(M+H)+ 368.1.
步骤3：将以上制备的化合物(2.57mmol)溶于50mL THF和5mL水。向其中加入LiOH水合物(540mg，12.9mmol)。将混合物搅拌过夜。将其真空浓缩，除去THF。向残渣中加入1N HCl直至达到pH 2。过滤，将固体产物分离。将其用冷水充分洗涤，在真空箱中干燥，得到定量收率的化合物249.3，为棕褐色固体。C16H13N5O2S的MS实测值为(M+H)+ 340.1.
步骤4：将以上制备的化合物249.3(2.57mmol)在20mL DMF中搅拌。向其中加入EDC.HCl(740mg，3.86mmol)和HOBt水合物(590mg，3.86mmol)。将混合物搅拌1h，HPLC表明所有原料249.3耗尽。然后向该混合物中加入铵(0.5N的二
Figure BPA00001277505201591
烷溶液，15mL，7.5mmol)。将混合物搅拌2h，真空浓缩，除去二烷。将水加入残余物，将固体击碎。将该固体过滤分离，用冷水充分洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物249.4，为棕褐色固体。C16H14N6OS的MS实测值为(M+H)+ 339.1。
步骤5：将以上制备的化合物249.4(150mg，0.44mmol)溶于6mLNMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，140mg，0.53mmol)。将其在室温下搅拌45分钟，得到相应亚砜和砜的混合物。然后向其中依次加入DIEA(230μL，1.32mmol)和(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(81.2，142mg，0.66mmol)。将混合物在90℃浴中搅拌2小时。然后将其用150mL EtOAc稀释，用饱和Na2CO3洗涤，用盐水洗涤×2，经MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。然后将残渣暴露于1∶1的TFA和DCM的混合物，保持1h。将其浓缩，通过反相HPLC处理，分离到标题化合物249。C21H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 405.3.UV λ＝249nm.NMR(CD3OD)：δ8.63(s，1H)，8.59(s，1H)，8.57(s，1H)，8.24(s，1H)，8.01(m，1H)，7.27(m，2H)，7.12(dd，J＝4.8，4.8Hz，1H)，4.24(m，1H)，3.37(m，1H)，1.64-1.21(m，8H)ppm。
实施例121：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201593
用与实施例120中所述相同方法，用市售4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺制备以上化合物。C21H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 405.3.UV λ＝231，314nm.NMR(CD3OD)：δ8.83(d，J＝4.8Hz，2H)，8.56(s，1H)，8.45(m，2H)，7.81(m，2H)，7.35(dd，J＝5.2，4.8Hz，1H)，4.44(m，1H)，3.78(m，1H)，1.82-1.62(m，8H)ppm。
实施例122：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201601
用与实施例120中所述相同方法，用市售3-碘-1-甲基吡唑制备以上化合物。C21H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 407.3.UV λ＝249nm。
实施例123：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201602
用与实施例120中所述相同方法，用市售4-碘-1-甲基吡唑制备以上化合物。C21H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 407.3.UV λ＝247nm。
实施例124：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201603
用与实施例120中所述相同方法，用市售6-溴咪唑并[1，2-a]吡啶制备以上化合物。C24H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 443.3.UV λ＝247nm.
NMR(CD3OD)：δ9.17(s，1H)，8.57(s，1H)，8.31(dd，J＝9.6，1.6Hz，1H)，8.30(d，J＝1.6Hz，1H)，8.09(d，J＝2.4Hz，1H)，8.03(d，J＝9.2Hz，1H)，7.95(宽峰，1H)，7.87(s，1H)，7.63(宽峰，2H)，4.35(m，1H)，3.66(m，1H)，1.90-1.48(m，8H)ppm。
实施例125：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201611
用与实施例120中所述相同方法，用市售6-溴咪唑并[1，2-a]吡啶和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺制备以上化合物。C24H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 443.3.UV λ＝245，303nm。
实施例126：4-(1H-吲唑-6-基氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201612
步骤1：搅拌下，向羧酸202.1(85g，540mmol)的亚硫酰氯(425mL)溶液中缓慢加入吡啶(8.5mL，0.11mmol)。将反应物在75℃下搅拌过夜，然后将其浓缩，在真空下干燥至浅黄色粉末。将该黄色固体用750mL乙醇缓慢稀释，回流过夜。次日，通过HPLC确定反应完全，然后在冰浴中冷却，将固体过滤，用乙醚洗涤，得到乙酯202.2，为灰白色粉末(91g，两步合计87％)。C7H8N2O4的MS实测值为(M+H)+ 185.0.
步骤2：将酯202.2(22g，120mmol)溶于磷酰氯(60mL，600mmol)，将混合物用N，N-二乙基苯胺(27mL，167mmol)处理，将混合物加热至105℃直至通过HPLC测定反应完全。然后将其冷却至室温，缓慢加入到1L碎冰中，导致形成浅褐色沉淀，过滤，收集沉淀，真空下干燥，得到二氯化物202.3，为浅黄色粉末(22.5g，85％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.13(s，1H)，4.37(q，2H)，1.32(t，3H).
步骤3：将二氯嘧啶202.3(1.04g，4.7mmol)溶于NMP(30mL)，在冰浴中搅拌。向其中加入6-氨基吲唑202.4(690mg，5.2mmol)，然后滴加乙基二异丙胺(DIEA，1.64mL，9.4mmol)。将混合物搅拌40分钟，向其中加入甲硫醇钠(660mg，9.4mmol)。将混合物搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤3次，真空干燥，得到粗化合物202.5，为定量收率的浅棕色固体。C15H15N5O2S的MS实测值为(M+H)+ 330.1。
步骤4：将乙酯202.5(4.7mmol)溶于60mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(236mg，5.6mmol)和20mL水。将混合物搅拌过夜，向其中小心加入1N HCl溶液直至pH达到2。将混合物真空浓缩，除去THF。将白色固体击碎，用布氏漏斗将其分离。将其用水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物202.6(1.14g，81％)，为白色固体。C13H11N5O2S的MS实测值为(M+H)+ 302.1。
步骤5：将羧酸202.6(1.14g，3.8mmol)溶于30mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(1.09g，5.7mmol)和HOBt水合物(770mg，5.7mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后向其中加入氨水(市售0.5N二
Figure BPA00001277505201621
烷的溶液，22mL，11.4mmol)。将混合物搅拌2小时。然后将其真空浓缩，将其溶于水和乙酸乙酯。将有机相分离，用盐水洗涤4次。然后有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到化合物202.7，为浅黄色固体(820mg，72％)。C13H12N6OS的MS实测值为(M+H)+ 301.1。
步骤6：将化合物202.7(36mg，0.12mmol)溶于3mL NMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，48mg，0.18mmol)。将其在室温下搅拌30分钟。向其中加入顺式-1，2-二氨基环己烷(71μL，0.60mmol)。将混合物在90℃浴中搅拌90分钟。然后使该混合物通过HPLC处理，分离到外消旋标题化合物202。C18H22N8O的MS实测值为(M+H)+ 367.2。UV λ＝245，300nm。
实施例127：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用6-氨基苯并噻唑代替6-氨基吲唑202.4，用与实施例126中所示例的相同合成流程制备以上外消旋化合物。C18H21N7OS的MS实测值为(M+H)+ 384.2.UV λ＝241，298nm。
实施例128：4-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-6-基氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201632
用5/6-氨基苯并三唑代替6-氨基吲唑202.4，用与实施例126中所示例的相同合成流程制备以上外消旋化合物。C17H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 368.2.UV λ＝246，295nm。
实施例129：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-甲基苯并[d]噻唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺3
Figure BPA00001277505201641
用5-氨基-2-甲基苯并噻唑代替6-氨基吲唑202.4，用与实施例126中所示例的相同合成流程制备以上外消旋化合物。C19H23N7OS的MS实测值为(M+H)+ 398.2.UV λ＝246，295nm。
实施例130：4-(1H-吲哚-6-基氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺6
Figure BPA00001277505201642
用6-氨基吲哚代替6-氨基吲唑202.4，用实施例126中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C19H23N7O的MS实测值为(M+H)+ 366.2.UV λ＝239，309nm。
实施例131：4-(1H-吲唑-5-基氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201643
用5-氨基吲唑代替6-氨基吲唑202.4，用实施例126中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C18H22N8O的MS实测值为(M+H)+ 367.2.UV λ＝245，294nm。
实施例132：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(喹啉-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201651
步骤1：将二氯嘧啶202.3(500mg，2.3mmol)溶于NMP(20mL)，在冰浴中搅拌。向其中加入6-氨基喹啉208.1(390mg，2.7mmol)，然后滴加乙基二异丙胺(DIEA，0.72mL，4.1mmol)。将混合物搅拌2小时，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤3次，真空浓缩，得到定量收率的粗化合物208.2，为浅棕色固体。C16H13ClN4O2的MS实测值为(M+H)+ 329.1。
步骤2：将乙酯208.2(2.3mmol)溶于30mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(193mg，4.6mmol)和6mL水。将混合物搅拌7小时，向其中小心加入1N HCl溶液直至pH达到5。将混合物真空浓缩，除去THF，用乙酸乙酯萃取5次。将有机相合并，干燥，真空浓缩，得到粗酸208.3。C14H9ClN4O2的MS实测值为(M+H)+ 301.1。
步骤3：将羧酸208.3(220mg，0.73mmol)溶于18mL NMP。向其中加入EDC盐酸盐(210mg，1.1mmol)和HOBt水合物(150mg，1.1mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后向其中加入氨水(市售0.5N二烷的溶液，7.3mL，3.65mmol)。将混合物搅拌2.5小时。然后将其真空浓缩，使其溶于水和乙酸乙酯。将有机相分离，用盐水洗涤3次。然后有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到化合物208.4，为固体(180mg，62％)。C20H14N8O2的MS实测值为(M+H)+ 399.1。
步骤6：将化合物208.4(72mg，0.18mmol)溶于3mL NMP。向其中加入顺式-1，2-二氨基环己烷(100μL，0.90mmol)。将混合物在90℃浴中搅拌90分钟。然后使该混合物通过制备型HPLC处理，分离到外消旋标题化合物208。C20H23N7O的MS实测值为(M+H)+ 378.2.UV λ＝241，283nm。
实施例133：4-(1H-苯并[d]咪唑-6-基氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201661
用6-氨基-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯代替6-氨基喹啉208.1，用实施例132中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C18H22N8O的MS实测值为(M+H)+ 367.2.UV λ＝243，294nm。
实施例134：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(苯并[d]噻唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用5-氨基苯并噻唑代替6-氨基吲唑202.4，用实施例126中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C18H21N7OS的MS实测值为(M+H)+ 384.2.UV λ＝246，292nm。
实施例135：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用咪唑并[1，2-a]吡啶-6-胺代替6-氨基吲唑202.4，用实施例126中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C18H22N8O的MS实测值为(M+H)+ 367.2.UV λ＝250nm。
实施例136：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧芑-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201672
用2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧芑-6-胺代替6-氨基喹啉208.1，用实施例132中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C20H23N7O的MS实测值的(M+H)+ 385.2.UV λ＝240，294n m.NMR(CD3OD)：δ8.45(s，1H)，7.31(d，J＝2.4Hz，1H)，6.91(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，6.85(d，J＝8.8Hz，1H)，4.27(m，5H)，3.79(m，1H)，1.94-1.58(m，8H)ppm。
实施例137：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(喹喔啉-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201673
用6-氨基喹喔啉代替6-氨基吲唑202.4，用实施例126中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C19H22N8O的MS实测值为(M+H)+ 379.2.UV λ＝242nm.NMR(CD3OD)：δ8.87(s，1H)，8.82(s，1H)，8.74(m，1H)，8.61(s，1H)，8.10(d，J＝8.8Hz，1H)，7.87(d，J＝8.4Hz，1H)，4.54(m，1H)，3.82(m，1H)，1.99-1.62(m，8H)ppm。
实施例138：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(苯并[c][1，2，5]噻二唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201681
用2，1，3-苯并噻二唑-5-胺代替6-氨基喹啉208.1，用实施例132中所示相同合成流程制备以上外消旋化合物。C17H20N8OS的MS实测值为(M+H)+ 385.2.UV λ＝243nm.NMR(CD3OD)：δ8.73(m，1H)，8.60(s，1H)，7.96(m，1H)，7.63(dd，J＝9.6，2.0Hz，1H)，4.48(m，1H)，3.87(m，1H)，1.98-1.63(m，8H)ppm。
实施例139：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-甲基喹啉-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201682
步骤1：在0℃下，向二氯嘧啶215.1(700mg，3.16mmol)的乙腈(8mL)溶液中加入6-氨基-2-甲基喹啉(500mg，3.16mmol)、二异丙胺(0.61mL，3.5mmol)的乙腈(10mL)悬浮液。然后使反应混合物升温至升温，搅拌过夜。然后将反应混合物用水稀释，过滤，收集沉淀，得到需要的产物215.2(964mg，89％)。C17H15ClN4O2的MS实测值为(M+H)+ 343.1.
步骤2：将乙酯215.2(960mgs，2.81mmol)用1，4-二氧杂环己烷(7.5mL)和乙醇(2mL)稀释，然后用氢氧化锂水溶液(1.0M，2.8mL，2.8mmol)稀释，在室温下搅拌直至所有原料转化为羧酸。然后用1N HCl(3.0mL)将反应物酸化。然后将得到的悬浮液过滤，用水洗涤，干燥，得到870mg羧酸215.3(98％)。C15H11ClN4O2的MS实测值为(M+H)+ 316.1。
步骤3：向羧酸215.3(870mg，2.76mmol)、EDC(792mg，4.14mmol)、HOBt(560mg，4.14mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(14mL)溶液中加入氨水(0.5M的1，4-二氧杂环己烷溶液，14mL，6.9mmol)，搅拌过夜。然后将反应混合物用水(100mL)稀释，过滤，收集沉淀，得到需要的产物215.4(1.10g，97％)。C21H16N8O2的MS实测值为(M+H)+ 413.1。
步骤4：在微波(Emry’s Optimizer)中，将苯并三唑基醚215.4(75mg，0.182mmol)、顺式-1，2-二氨基环己烷(25mg，0.218mmol)、DIPEA(0.1mL，0.546mmol)在异丙醇(3mL)中的混合物在130℃下加热20分钟。
然后将反应混合物用水和乙腈稀释，经制备型HPLC直接纯化，冻干后，得到需要的产物215。C21H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 392.2。
实施例140：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(喹啉-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201691
用类似于实施例129中所述方法，用5-氨基喹啉制备以上化合物。C20H23N7O的MS实测值为(M+H)+ 378.3。
实施例141：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-甲基喹啉-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201701
用类似于实施例140中所述方法，用8-氨基-2-甲基喹啉制备以上化合物。C21H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 392.3。
实施例142：2-((1S，2R)-2-氨基环己基氨基)-4-(喹啉-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用类似于实施例139中所述方法，用8-氨基喹啉制备以上化合物。C20H23N7O的MS实测值为(M+H)+ 378.3。
实施例143：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-(吗啉代甲基)喹啉-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201703
用类似于实施例139中所述方法，用2-(吗啉代甲基)喹啉-6-胺(J.Med.Chem 2006，49，7095)制备以上化合物。C25H32N8O2的MS实测值为(M+H)+ 477.4。
实施例144：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二
Figure BPA00001277505201704
唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201711
步骤1：在0℃下，向二氯嘧啶220.1(700mg，3.16mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入2，2-二氟-5-氨基苯并间二氧杂环戊烯(549mg，3.16mmol)、二异丙胺(0.61mL，3.5mmol)的乙腈(5mL)悬浮液。然后使反应混合物升温至室温，搅拌过夜。然后将反应混合物用水(50mL)稀释，过滤，收集沉淀，得到需要的产物220.2(1.03g，91％)。C14H10Cl F2N3O4的MS实测值为(M+H)+ 358.1。
步骤2：将乙酯220.2(1.03g，2.9mmol)依次用1，4-二氧杂环己烷(7.5mL)、氢氧化锂水溶液(1.0M，2.9mL，2.9mmol)稀释，在室温下搅拌直至所有原料转化为羧酸。然后将反应物用水(20mL)稀释，用1N HCl(3.6mL)酸化。然后将得到的悬浮液过滤，用水洗涤，干燥，得到950mg羧酸220.3(99％)。C12H6Cl F2N3O4的MS实测值为(M+H)+ 330.0。
步骤3：向羧酸220.3(950mg，2.89mmol)、EDC(828mg，4.33mmol)、HOBt(663mg，4.33mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(14mL)溶液中加入氨水(0.5M的1，4-二氧杂环己烷溶液，14mL，6.9mmol)，搅拌过夜。然后将反应混合物用水(60mL)稀释，过滤，收集沉淀，得到需要的产物220.4(1.26g，99％)。C18H11F2N7O4的MS实测值为(M+H)+ 428.2。
步骤4和步骤5：在微波(Emry’sOptimizer)中，将苯并三唑基醚220.4(75mg，0.176mmol)、(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(45mg，0.211mmol)、DIPEA(0.1mL，0.530mmol)在异丙醇(3mL)中的混合物在130℃下加热20分钟。将反应混合物浓缩，然后用4.0M HCl的二
Figure BPA00001277505201712
烷溶液(5.0mL)处理。在室温下保持1h后，将反应混合物浓缩，用水和乙腈稀释，经制备型HPLC直接纯化，冻干后，得到需要的产物220。C18H20F2N6O3的MS实测值为(M+H)+ 407.28。
实施例145：用类似于实施例143中所述方法制备以下化合物。
表1
Figure BPA00001277505201721
Figure BPA00001277505201751
实施例167：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4′-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)联苯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201761
用实施例120中所示相同合成流程制备标题化合物。C28H29N7O2的MS实测值为(M+H)+ 496.5.UV λ＝245nm.NMR(CD3OD)：δ8.51(s，1H)，8.12(s，1H)，7.79(d，J＝8.8Hz，2H)，7.63(m，2H)，7.55-7.49(m，5H)，6.65(m，1H)，6.50(m，1H)，4.25(m，1H)，3.58(m，1H)，2.54(t，2H)，1.84-1.40(m，8H)ppm。
实施例168：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4′-(2-氧代哌啶-1-基)联苯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201762
用实施例120中所示相同合成流程制备标题化合物。C28H33N7O2的MS实测值为(M+H)+ 500.5.UV λ＝249nm.NMR(CD3OD)：δ8.50(s，1H)，8.09(s，1H)，7.68(d，J＝8.8Hz，2H)，7.49-7.43(m，3H)，7.36(d，J＝8.4Hz，2H)，4.21(m，1H)，3.71(t，2H)，3.57(m，1H)，2.54(t，2H)，1.98(m，4H)，1.83-1.36(m，8H)ppm。
实施例169：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3′-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)联苯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例120中所示相同合成流程制备标题化合物。C28H29N7O2的MS实测值为(M+H)+ 496.5.UV λ＝244nm。
实施例1702：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3′-(2-氧代哌啶-1-基)联苯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201772
用实施例120中所示相同合成流程制备标题化合物。C28H33N7O2的MS实测值为(M+H)+ 500.5.UV λ＝246nm。
实施例171：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4′-吗啉代联苯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201773
用实施例120中所示相同合成流程制备标题化合物。C27H33N7O2的MS实测值为(M+H)+ 488.4.UV λ＝247nm。
实施例172：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3′-吗啉代联苯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201781
用实施例120中所示相同合成流程制备标题化合物。C27H33N7O2的MS实测值为(M+H)+ 488.4.UV λ＝246nm。
实施例173：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3′-吗啉代联苯-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201782
用实施例120中所示相同合成流程制备标题化合物。C27H33N7O2的MS实测值为(M+H)+ 488.4.UV λ＝238，309nm。
实施例174：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4′-吗啉代联苯-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201783
用实施例120中所示相同合成流程制备标题化合物。C27H33N7O2的MS实测值为(M+H)+ 488.4.UV λ＝241，314nm。
实施例175：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201791
流程：
Figure BPA00001277505201792
将二异丙胺(1.63mL，11.68mmol)溶于10mL无水THF，在冰浴中搅拌。向其中滴加正丁基锂(2.5M的己烷溶液，4.67mL，11.68mmol)。将混合物搅拌20分钟，置于-78℃浴中。向其中滴加酮257.1(0.92mL，10mmol)的10mL THF溶液。将混合物搅拌30分钟。向其中加入N-苯基二(三氟甲磺酰胺)(PhNTf2，4.17g，11.68mmol)的10mL THF溶液。将混合物移入冰浴，搅拌过夜。将其真空浓缩，通过硅胶闪柱分离，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到化合物257.2。
将化合物257.2(920mg，4.0mmol)与硼酸257.3(550mg，4.0mmol)、Pd(Ph3P)2Cl2(562mg，0.8mmol)、K2CO3(1.1g，8.0mmol)在30mL二
Figure BPA00001277505201793
烷和15mL水中混合。将混合物用氩气流脱气3分钟，在氩气下，在85℃下搅拌3.5h。将混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤×2，干燥，浓缩，经闪柱分离，得到苯胺257.4(300mg)，为白色固体。
用实施例120中所示相同合成流程，用苯胺257.4制备标题化合物。C22H28N6O2的MS实测值为(M+H)+ 409.4.UV λ＝246nm。
实施例176：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201801
由实施例175，在H2环境下，在10％ Pd/C的存在下，用标准催化氢化处理实施例175的甲醇溶液过夜，制备标题化合物。C22H30N6O2的MS实测值为(M+H)+ 411.4.UV λ＝241，290nm。
实施例177：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201802
用类似于实施例175中所示化学制备标题化合物。C22H28N6O2的MS实测值为(M+H)+ 409.4.UV λ＝239，309nm.NMR(CD3OD)：δ8.51(s，1H)，7.60(d，J＝7.2Hz，2H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，6.23(s，1H)，4.36-4.30(m，3H)，3.94(t，2H)，3.72(m，1H)，2.53(m，2H)，1.90-1.58(m，8H)ppm。
实施例178：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201803
由实施例175，在H2环境下，在10％ Pd/C的存在下，用标准催化氢化处理实施例175的甲醇溶液过夜，制备标题化合物。C22H30N6O2的MS实测值为(M+H)+ 411.4.UV λ＝243，296nm。
实施例179：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(苯基磺酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201811
用实施例120中所示相同合成流程，用相应市售苯胺制备标题化合物。C23H26N6O3S的MS实测值为(M+H)+ 467.3.UV λ＝232，306nm。
实施例180：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-苯氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201812
用实施例120中所示相同合成流程，用相应市售苯胺制备标题化合物。C23H26N6O2的MS实测值为(M+H)+ 419.3.UV λ＝238，290nm。
实施例181a：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基氧基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201813
用实施例120中所示相同合成流程，用相应市售苯胺制备标题化合物。C22H30N6O3的MS实测值为(M+H)+ 427.3.UV λ＝241，291nm。
实施例181b：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基磺酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201821
流程：
Figure BPA00001277505201822
将4-硝基苯硫酚(400mg，2.55mmol)溶于10mL DMF。向其中加入碳酸铯(1.67g，5.1mmol)和4-溴四氢吡喃(0.84g，5.1mmol)。将混合物在50℃下搅拌90分钟。将其在乙酸乙酯中稀释，用盐水洗涤×3。将有机相干燥，真空浓缩，得到粗化合物266.1。将其溶于100mL DCM。向其中分批加入MCPBA(1.98g，7.5mmol)。将混合物搅拌30分钟，用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸钠溶液和盐水洗涤。将有机相干燥，浓缩，通过硅胶闪柱，用1∶1的乙酸乙酯/己烷洗脱，分离化合物266.2(320mg，2步合计47％)。
将化合物266.2(320mg，1.18mmol)溶于150mL乙酸乙酯。向其中加入200mg 10％ Pd/C。将混合物在H2环境下搅拌过夜。使混合物通过硅藻土过滤。将硅藻土充分洗涤。将滤液真空浓缩，得到苯胺266.3(260mg，91％)，为白色固体。
用实施例120中所示相同合成流程，用相应苯胺266.3制备标题化合物。C22H30N6O4S的MS实测值为(M+H)+ 475.3.UV λ＝250，301nm。
实施例182：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(吗啉代磺酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201823
用实施例120中所示相同合成流程，用相应市售苯胺制备标题化合物。C21H29N7O4S的MS实测值为(M+H)+ 476.4.UV λ＝249，300nm。
实施例183：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(吗啉-4-羰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201831
用实施例120中所示相同合成流程，用相应市售苯胺制备标题化合物。C22H29N7O3的MS实测值为(M+H)+ 400.4.UV λ＝244，297nm。
实施例184：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(四氢-2H-吡喃-4-基氧基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201832
流程：
Figure BPA00001277505201833
将3-硝基苯酚(500mg，3.6mmol)溶于15mL DMF。向其中依次加入碳酸铯(2.35g，7.2mmol)、4-溴四氢吡喃(2.4g，14.4mmol)。将混合物在70℃下搅拌过夜。反应仅完成30％。将其用乙酸乙酯稀释，用水、饱和碳酸钠和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤。向含粗化合物269.1的滤液中加入10％Pd/C 1.0g。将混合物在H2环境下搅拌过夜。将混合物过滤，浓缩，用硅胶闪柱纯化，得到苯胺269.2(102mg，总收率15％)，为固体。
用实施例120中所示相同合成流程，用苯胺269.2制备标题化合物。C22H30N6O3的MS实测值为(M+H)+ 427.4.UV λ＝244，287nm。
实施例185：2-(4-(2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基氨基)苯氧基)乙酸叔丁酯(外消旋体)
Figure BPA00001277505201841
向4-硝基苯酚(3.00g，21.6mmol)和K2CO3(6.00g，43.4mmol)的DMF(50mL)溶液中加入溴乙酸叔丁酯(2.90mL，19.6mmol)。将混合物在室温下搅拌5h。加入水和EtOAc。将有机相分离，依次用水、1N NaOH水溶液和盐水洗涤。经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到2-(4-硝基苯氧基)乙酸叔丁酯，为固体。
向该固体的MeOH(40mL)溶液中加入Pd-C(10％，410mg)。将混合物在氢环境下氢化20h。然后使其通过硅藻土过滤。将滤液真空浓缩，得到2-(4-氨基苯氧基)乙酸叔丁酯。
用2-(4-氨基苯氧基)乙酸叔丁酯和顺式-1，2-二氨基环己烷按相似方法合成标题化合物。MS 457.2(M+H)；UV 243.8，290.0.
实施例186：2-(4-(2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基氨基)苯氧基)乙酸(外消旋体)
Figure BPA00001277505201842
将2-(4-(2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基氨基)苯氧基)乙酸叔丁酯外消旋体(180mg，0.395mmol)的TFA(4mL)溶液在室温下搅拌2h。然后将其真空浓缩。残渣经HPLC纯化，得到标题化合物(60mg)。MS 401.2(M+H)。
实施例187：2-(3-(2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基氨基)苯氧基)乙酸叔丁酯(外消旋体)
Figure BPA00001277505201851
用3-硝基苯酚代替4-硝基苯酚，按类似于合成化合物2-(4-(2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基氨基)苯氧基)乙酸叔丁酯(外消旋体)的方法合成标题化合物。MS 457.2(M+H)；UV 242.6，290.0.
实施例188：2-(3-(2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基氨基)苯氧基)乙酸(外消旋体)
按类似于合成化合物2-(4-(2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基氨基)苯氧基)乙酸(外消旋体)的方法合成标题化合物。MS 401.2(M+H)；UV 242.6，290nm。
实施例189：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201853
按相似方法，用1-甲基-1H-吡唑-4-胺合成标题化合物。MS 331.4(M+H).UV 241.2，292.1nm
实施例190：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(1-甲基-1H-吡咯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201861
将氢化钠用己烷洗涤两次，向含该氢化钠(300mg，60％的矿物油悬浮液，7.50mmol)的烧瓶中加入3-硝基吡咯(500mg，4.46mmol)和碘代甲烷(0.560mL，8.97mmol)的DMF(4mL)溶液。产生氢气。然后将混合物在室温下搅拌20h。加入水和EtOAc。将有机相分离，用水洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到1-甲基-3-硝基-1H-吡咯(494mg)。
在氢环境下，将1-甲基-3-硝基-1H-吡咯(488mg，3.87mmol)和Pd-C(10％，110mg)在MeOH(15mL)(含8滴6N HCl)中的混合物氢化20h。使混合物通过硅藻土过滤。向滤液加入4N HCl的二
Figure BPA00001277505201862
烷溶液(2mL)。将溶液真空浓缩，得到1-甲基-1H-吡咯-3-胺盐酸盐，为固体(514mg)。
按相似方法，用1-甲基-1H-吡咯-3-胺盐酸盐合成标题化合物。MS 330.3(M+H)；UV 237.6，313.1nm。
实施例191：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(1-苯基-1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201863
用氩气将4-硝基吡唑(270mg，2.38mmol)、碘苯(485mg，2.38mmol)、8-羟基喹啉(60mg，0.41mmol)和K2CO3(600mg，4.34mmol)在DMSO(3mL)中的混合物脱气，然后加入CuI(45mg，0.23mmol)。在密闭试管中，将混合物在130℃下加热20h。加入水，引发沉淀。收集沉淀，得到4-硝基-1-苯基-1H-吡唑(454mg)。
将4-硝基-1-苯基-1H-吡唑(440mg，2.32mmol)和SnCl2二水合物(2.18g，9.66mmol)在EtOAc(15mL)中的混合物在80℃下搅拌3h。加入1N NaOH水溶液，使pH至12。使混合物通过硅藻土过滤。将有机相分离，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残渣经HPLC纯化，得到1-苯基-1H-吡唑-4-胺，为固体(173mg)。
按相似方法，用1-苯基-1H-吡唑-4-胺合成标题化合物。MS 393.4(M+H)；UV 240.0，303.2.
实施例192：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-甲基噻吩-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201871
将4-甲基噻吩-2-甲酸(1.42g，10.0mmol)、三乙胺(1.50mL，10.8mmol)和叠氮磷酸二苯酯(2.15mL，10.0mmol)的tBuOH(20mL)溶液搅拌回流5h。将tBuOH真空除去。加入Et2O和水。将有机相用5％ NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残渣经硅胶柱纯化，将柱用0-10％ EtOAc/己烷洗脱，得到4-甲基噻吩-2-基氨基甲酸叔丁酯，为固体(0.880g)。
将4-甲基噻吩-2-基氨基甲酸叔丁酯(0.880g，4.13mmol)的CH2Cl2(8mL)和TFA(6mL)溶液在室温下搅拌3h。将溶剂真空除去，得到4-甲基噻吩-2-胺，为三氟乙酸盐(0.920g)。
按相似方法，用4-甲基噻吩-2-胺合成标题化合物。MS 347.3(M+H)；UV 244.9，326.1nm。
实施例193：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(5-甲基噻吩-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201881
将5-甲基噻吩-2-甲酸(1.42g，10.0mmol)、三乙胺(1.50mL，10.8mmol)和叠氮磷酸二苯酯(2.15mL，10.0mmol)的tBuOH(20mL)溶液搅拌回流5h。将tBuOH真空除去。加入Et2O和水。将有机相依次用5％ NaHCO3、1N NaOH洗涤，过滤。滤液经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到5-甲基噻吩-2-基氨基甲酸叔丁酯，为固体(0.825g)。
将5-甲基噻吩-2-基氨基甲酸叔丁酯(0.825g，3.87mmol)的CH2Cl2(10mL)和TFA(6mL)溶液在室温下搅拌20h。将溶剂在真空中除去，得到5-甲基噻吩-2-胺，为三氟乙酸盐(0.870g)。
按相似方法，用5-甲基噻吩-2-胺合成标题化合物。MS 347.3(M+H)；UV 247.3，325.6nm。
实施例194：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(1-苯基-1H-吡咯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201891
将3-硝基吡咯(270mg，2.41mmol)、碘苯(0.267mL，2.39mmol)、8-羟基喹啉(60mg，0.41mmol)和K2CO3(600mg，4.34mmol)在DMSO(3mL)中的混合物用氩气脱气，然后加入CuI(45mg，0.23mmol)。在密闭试管中，将混合物在130℃下加热20h。加入水和EtOAc。将有机相分离，依次用1N HCl、5％ NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到3-硝基-1-苯基-1H-吡咯(410mg)。
将3-硝基-1-苯基-1H-吡咯(410mg，2.18mmol)和SnCl2二水合物(2.00g，8.86mmol)在EtOAc(15mL)中的混合物在80℃下搅拌3h。加入1N NaOH水溶液，使pH至12。使混合物通过硅藻土过滤。将有机相分离，用5％NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到1-苯基-1H-吡咯-3-胺，为固体(323mg)。
按相似方法，用1-苯基-1H-吡咯-3-胺合成标题化合物。MS 392.4(M+H)；UV 240.0，314.3nm。
实施例195：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(6-(二甲基氨基)吡啶-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201892
用6-(二甲基氨基)吡啶-3-基硼酸 代替硼酸116.1，用实施例45中所示相同合成流程制备标题化合物。C24H30N8O的MS实测值为(M+H)+ 447.3.UV：λ＝244.0，316.4
实施例196：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3，5-二氟-4-吗啉代苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用3，5-二氟-4-吗啉代苯胺代替苯胺72.4，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H27F2N7O2的MS实测值为(M+H)+ 448.1.UV：λ＝240.4，304.5.
实施例197：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(联苯-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201902
用联苯-4-胺代替苯胺72.4，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C23H26N6O的MS实测值为(M+H)+ 403.4.UV：λ＝239.3，308.7.
实施例198：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(异
Figure BPA00001277505201903
唑-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201904
用3-(异
Figure BPA00001277505201905
唑-3-基)苯胺代替苯胺72.4，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV：λ＝243.6，286.5.
实施例199：4-(4-(4H-1，2，4-三唑-4-基苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201911
用4-(4H-1，2，4-三唑-4-基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV：λ＝245.2，293.8.
实施例200：4-(3-(4H-1，2，4-三唑-4-基苯氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201912
用3-(4H-1，2，4-三唑-4-基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例3中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV：λ＝239.9.
实施例201：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(异
Figure BPA00001277505201913
唑-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201914
用4-(异
Figure BPA00001277505201921
唑-3-基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV：λ＝244.0，303.3
实施例202：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(5-甲基异
Figure BPA00001277505201922
唑-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201923
用3-(5-甲基异
Figure BPA00001277505201924
唑-3-基)苯胺代替苯胺74.1，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 408.4.UV：λ＝243.6，287.1.
实施例203：2-((1S，2R)-2-(5-氨基甲酰基-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-2-基氨基)环己基氨基)乙酸甲酯
Figure BPA00001277505201925
C21H28N6O3的MS实测值为(M+H)+ 413.1.UV：λ＝241.4，288.8.
实施例204：2-((1S，2R)-2-(5-氨基甲酰基-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-2-基氨基)环己基氨基)乙酸
Figure BPA00001277505201926
C20H26N6O3的MS实测值为(M+H)+ 399.2.UV：λ＝240.5，287.8.
实施例205：2-((1S，2R)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-甲氧基-3-甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用4-甲氧基-3-甲基苯胺代替苯胺72.4，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H26N6O2的MS实测值为(M+H)+ 371.2.UV：λ＝238.1，292.6.
实施例206：2-((1S，2R)-2-氨基环己基氨基)-4-(3，4-二甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201932
用3，4-二甲氧基苯胺代替苯胺72.4，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H26N6O3的MS实测值为(M+H)+ 387.1.UV：λ＝236.9，286.6.
实施例207：2-((1S，2R)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-苯氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201933
用3-苯氧基苯胺代替苯胺72.4，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C23H26N6O2的MS实测值为(M+H)+ 419.3.UV：λ＝240.4，292.6.
实施例208：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(联苯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201941
用联苯-3-胺代替苯胺72.4，用实施例1中所示相同合成流程制备标题化合物。C23H26N6O的MS实测值为(M+H)+ 403.4.UV：λ＝246.3
实施例209：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(萘-1-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201942
用萘-1-胺代替苯胺208.1，用实施例152中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H24N6O的MS实测值为(M+H)+ 377.1.
实施例210：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(6-甲氧基萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201943
用6-甲氧基萘-2-胺代替苯胺208.1，用实施例152中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H26N6O2的MS实测值为(M+H)+ 407.2.UV：λ＝227.5，319.9.
实施例211a：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(6-氟萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201951
用6-氟萘-2-胺代替苯胺208.1，用实施例152中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H23FN6O的MS实测值为(M+H)+ 395.1.UV：λ＝212.2，244.0，306.8.
实施例211b：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(6-氨基甲酰基萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用6-氨基甲酰基萘-2-胺代替苯胺208.1，用实施例152中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 420.2.UV：λ＝223.9，318.8.
实施例212：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(6-(甲基氨基甲酰基)萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201953
用6-(甲基氨基甲酰基)萘-2-胺代替苯胺208.1，用实施例152中所示相同合成流程制备标题化合物。C23H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 434.3.UV：λ＝219.2，235.7，318.8.
实施例213：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(6-(二甲基氨基甲酰基)萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201961
用6-(二甲基氨基甲酰基)萘-2-胺代替苯胺208.1，用实施例152中所示相同合成流程制备标题化合物。C24H29N7O2的MS实测值为(M+H)+ 448.2.UV：λ＝218.0，314.0.
实施例214：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-氯萘-1-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201962
用4-氯萘基-1-胺代替苯胺208.1，用实施例152中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H23ClN6O的MS为(M+H)+ 411.2，413.1(Cl形式).UV：λ＝223.9，293.8.
实施例215：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(6-溴萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201963
用4-溴萘基-2-胺代替苯胺208.1，用实施例152中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H23BrN6O的MS实测值为(M+H)+ 455.1，457.1(Br形式).
实施例217：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(6-(吗啉-4-羰基)萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201971
用6-(吗啉-4-羰基)萘基-2-胺代替苯胺208.1，用实施例152中所示相同合成流程制备标题化合物。C26H31N7O3的MS实测值为(M+H)+ 490.4.UV：λ＝220.4，315.2.
实施例218：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201972
步骤1：在室温下，向2，4-二氯嘧啶-5-甲酸乙酯(328mg，1.48mmol)和1-甲基-1H-吲哚-4-胺(260mg，1.78mmol)的CH3CN(6mL)溶液中加入DIEA(0.4mL，2.22mmol)。将混合物在室温下搅拌24h。加入水(15mL)，导致沉淀。将沉淀收集，真空干燥，得到2-氯-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯，为固体。
步骤2：向2-氯-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯(步骤1中的粗产物)的THF(4mL)溶波中加入1N LiOH水溶液(2.25mL，2.25mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用1N HCl酸化，生成白色固体，将其收集，真空干燥，得到2-氯-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酸(325mg)。MS 303.3，305.3(M+H，Cl形式)
步骤3：向2-氯-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酸(325mg，1.08mmol)和HOBt(198mg，1.29mmol)的DMF(4mL)溶液中加入EDC(248mg，1.29mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5h。加入氨水(0.5M的二
Figure BPA00001277505201981
烷溶液，8.00mL，4.00mmol)。将其在室温下搅拌过夜。加入水和EtOAc。将有机相分离，依次用1N HCl、5％ NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(378mg).MS 401.4(M+H)
步骤4：向含2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺固体(100mg，0.25mmol)的小瓶中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(0.3M的NMP溶液，1.25mL，0.375mmol)和DIPEA(0.09mL，0.5mmol)。将其在80℃下加热2h，冷却，经制备型HPLC纯化，得到2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(21mg)。C20H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 380.4.UV：λ＝219.2，241.6，336.7.
实施例219a：4-(1H-吲哚-4-基氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201982
用1H-吲哚-4-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H23N7O的MS实测值为(M+H)+ 366.3.UV：λ＝216.7，239.9，330.3.
实施例219b：4-(1H-吲唑-4-基氨基)-2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201991
用1H-吲唑-4-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H22N8O的MS实测值为(M+H)+ 367.4.UV：λ＝205.8，240.5，314.3
实施例219c：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505201992
用1-甲基-1H-吲唑-4-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 381.4.UV：λ＝.
实施例220：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-甲基-2H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用2-甲基-2H-吲唑-4-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 381.5.UV：λ＝210.6，243.0，329.1.
实施例221：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-甲基苯并[d]
Figure BPA00001277505202001
唑-7-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用2-甲基苯并[d]
Figure BPA00001277505202003
唑-7-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 382.4.UV：λ＝238.1.
实施例222：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(苯并[c][1，2，5]噻二唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202004
用苯并[c][1，2，5]噻二唑-4-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H20N8OS的MS实测值为(M+H)+ 385.3.UV：λ＝234.5，298.5，315.2.
实施例223：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(喹喔啉-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202005
用喹喔啉基-5-胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H22N8OS的MS实测值为(M+H)+ 379.3.UV：λ＝203.4，245.4.
实施例224：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(苯并[d]噻唑-7-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202011
用苯并[d]噻唑-7-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H21N7OS的MS实测值为(M+H)+ 384.3.UV：λ＝205.1，242.8，290.2.
实施例225：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202012
用1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 381.4.UV：λ＝202.8，239.3.
实施例226：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用2-甲基-1H-吲哚-4-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 380.4.UV：λ＝220.4，239.3，336.7.
实施例227：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-苯基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202021
用2-苯基-1H-吲哚-4-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C25H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 442.5.UV：λ＝241.6，293.8.
实施例228：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(1，2-二甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202022
用1，2-甲基-1H-吲哚-4-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV：λ＝222.8，242.8.
实施例229：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2，3-二氢-1H-吡咯并[1，2-a]吲哚-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202031
用2，3-二氢-1H-吡咯并[1，2-a]吲哚-8-胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例120中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 406.5.UV：λ＝222.8，241.6.
实施例230：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(苯并-[d]异
Figure BPA00001277505202032
唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202033
用苯并-[d]异
Figure BPA00001277505202034
唑-5-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H21N7O2的MS实测值为(M+H)+ 368.4.UV：λ＝203.9，236.9，294.9.
实施例231：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(1-乙基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202035
用1-乙基-1H-吲哚-4-基胺代替1-甲基-1H-吲哚-4-基胺，用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV：λ＝220.2，242.6.
实施例232：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(3，4-二甲氧基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
流程：
将碳酸钾(1.81g，13.1mmol)溶于2∶1的二
Figure BPA00001277505202043
烷/水混合物(45mL)。将该溶液加入到3，4-二甲氧基苯基硼酸(300.1；799mg，4.39mmol)[CAS122775-35-3]和3-溴苯胺(300.2；756mg，4.39mmol)[CAS 591-19-5]。将得到的溶液用氩气脱气5分钟。加入二(三苯基膦)二氯合钯(II)(598mg，0.85mmol)[CAS 13965-03-2]，在85℃下，将反应物在密闭试管中搅拌3h。将反应物冷却，用EtOAc(300mL)稀释，用盐水(3x100mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩。得到的沉淀通过闪层析(20％ -70％ EtOAc/己烷梯度)处理，得到360mg 300.3(36％)。
向300.3(360mg，1.57mmol)的DMF(15mL)溶液中加入4-氯-2-(甲硫基)-5-嘧啶甲酸乙酯(365mg，1.57mmol)[CAS 5909-24-0]和DIEA(562μL，3.14mmol)。在80℃下，将反应混合物在密闭试管中搅拌3h。将反应物冷却，加入水，形成沉淀。将沉淀过滤，用冷水洗涤，干燥，得到300.4，定量收率。
将得到的固体(667mg，1.57mmol)溶于THF(10mL)。向该溶液中加入LiOH(188mg，7.85mmol)的H2O(5mL)溶液。将反应物搅拌30分钟，用1M HCl酸化至pH～3。将THF真空除去，将冰-冷水加入反应混合物。将得到的固体过滤，用水洗涤，干燥，得到497mg(88％)300.5。
将羧酸300.5(460mg，1.15mmol)溶于10mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(328mg，1.72mmol)和HOBt水合物(232mg，1.72mmol)。将混合物在室温下搅拌2h。加入氨水(市售0.5N二
Figure BPA00001277505202051
烷的溶液，7mL，3.5mmol)，将混合物搅拌1h。将二
Figure BPA00001277505202052
烷通过真空除去，将冰-冷水加入反应混合物。将得到的固体过滤，用水洗涤，干燥，得到445mg(97％)300.6。
将化合物300.6(70mg，0.18mmol)溶于4mL NMP。向其中加入mCPBA(70％最低纯度，50mg，0.21mmol)，将混合物在室温下搅拌30分钟。
向其中加入(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(0.3M，0.9mL，0.27mmol)和DIEA(94μL，0.54mmol)溶液。在90℃下，将混合物在密闭试管中搅拌3h。将混合物冷却，用EtOAc稀释，用饱和Na2CO3水溶液、水和盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，浓缩，得到粗中间体，在室温下，将其在1∶1的TFA和DCM的混合物中搅拌30分钟。将反应混合物真空浓缩，通过反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物。C25H30N6O3的MS实测值为(M+H)+ 463.3.UV λ＝210，243nm.δ1.40-1.83(m，8H)，3.60-3.68(m，1H)，3.88(s，3H)，3.92(s，3H)，4.43-4.51(m，1H)，7.60-7.66(m，1H)，7.90(d，1H)，8.04(s，2H)，8.52-8.58(m，1H)，8.62(s，1H).
实施例233：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-甲氧基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202053
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用4-甲氧基苯基硼酸[CAS 5720-07-0]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C24H28N6O2的MS实测值为(M+H)+ 433.4.UV λ＝248nm.δ1.25-1.80(m，8H)，3.58-3.64(m，1H)，3.83(s，3H)，4.20-4.28(m，1H)，7.02(d，2H)，7.36-7.48(m，3H)，7.59(d，2H)，8.03(br s，1H)，8.55(s，1H)
实施例234：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2，3，4-三甲氧基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202061
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用3，4，5-三甲氧基苯基硼酸[CAS 182163-96-8]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C26H32N6O4的MS实测值为(M+H)+ 493.4.UV λ＝245nm.δ1.20-1.80(m，8H)，3.61-3.68(m，1H)，3.80(s，3H)，3.92(s，6H)，4.15-4.22(m，1H)，6.92(s，2H)，7.45(br s，3H)，8.05(br s，1H)，8.55(s，1H).
实施例235：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(3-甲氧基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202062
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用3-甲氧基苯基硼酸[CAS 10365-98-7]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C24H28N6O2的MS实测值为(M+H)+ 433.3.UV λ＝241nm。
实施例236：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202071
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用(2，3-二氢苯并[b]呋喃-5-基)硼酸[CAS 227305-69-3]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C25H28N6O2的MS实测值为(M+H)+ 445.3.UV λ＝245，276nm。
实施例237：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2-甲氧基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202072
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用2-甲氧基苯基硼酸[CAS 5720-06-9]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C24H28N6O2的MS实测值为(M+H)+ 433.3.UV λ＝244，288nm。
实施例238：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-氟苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用4-氟苯基硼酸[CAS 1765-93-1]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C23H25FN6O的MS实测值为(M+H)+ 421.3.UV λ＝245nm.δ1.35-1.85(m，8H)，3.58-3.65(m，1H)，4.25-4.31(m，1H)，7.09-7.18(m，1H)，7.40-7.54(m，6H)，8.11(br s，1H)，8.53(s，1H).
实施例239：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(3-氟苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202081
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用3-氟苯基硼酸[CAS 768-35-4]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C23H25FN6O的MS实测值为(M+H)+ 421.3.UV λ＝242nm。
实施例240：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2，5-二甲氧基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202082
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用2，5-二甲氧基苯基硼酸[CAS 107099-99-0]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C25H30N6O3的MS实测值为(M+H)+ 463.3.UV λ＝246nm。
实施例241：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2，4-二甲氧基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202083
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用2，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 133730-34-4]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C25H30N6O3的MS实测值为(M+H)+ 463.3.UV λ＝245，288nm。
实施例242：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(3，4-二氟苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用3，4-二氟苯基硼酸[CAS 168267-41-2]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C23H24F2N6O的MS实测值为(M+H)+ 439.3.UV λ＝245nm。
实施例243：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2，3-二甲氧基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202092
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用2，3-二甲氧基苯基硼酸[CAS 40972-86-9]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C25H30N6O3的MS实测值为(M+H)+ 463.3.UV λ＝244，288nm。
实施例244：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(苯并[d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺[CAS 210907-84-9]和4-溴-1，3-苯并间二氧杂环戊烯[CAS 6698-13-1]作为偶联试剂对。C24H26N6O3的MS实测值为(M+H)+ 447.4.UV λ＝242nm。
实施例245：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧芑-6-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺[CAS 210907-84-9]和6-碘苯并二烷[CAS 57744-67-9]作为偶联试剂对。C25H28N6O3的MS实测值为(M+H)+ 461.4.UV λ＝211，243nm.δ1.35-1.85(m，8H)，3.58-3.65(m，1H)，4.30-4.38(m，5H)，6.95(d，1H)，7.10-7.18(m，2H)，7.30-7.36(m，1H)，7.38-7.45(m，2H)，8.14(br s，1H)，8.50(s，1H)
实施例246：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧芑-6-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202104
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺[CAS 214360-73-3]和6-碘苯并间二氧杂环戊烯[CAS 57744-67-9]作为偶联试剂对。C25H28N6O3的MS实测值为(M+H)+ 461.4.UV λ＝242，316nm.δ1.50-1.95(m，8H)，3.70-3.78(m，1H)，4.25(s，4H)，4.34-4.41(m，1H)，6.90(d，1H)，7.08-7.15(m，2H)，7.58-7.68(m，4H)，8.50(s，1H).
实施例247：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-甲基-3，4-二氢-2H-苯并[b][1，4]
Figure BPA00001277505202111
嗪-7-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202112
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺[CAS 210907-84-9]和7-溴-4-甲基-3，4-二氢-2H-苯并[1，4]
Figure BPA00001277505202113
嗪[CAS 154264-95-6]作为偶联试剂对。C26H31N7O2的MS实测值(M+H)+ 474.4.UV λ＝216，238，303nm。
实施例248：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-哌啶基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺.
Figure BPA00001277505202114
用与实施例232中所示相同的化学流程制备初始联芳基苯胺。用3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺[CAS 210907-84-9]和N-(4-溴苯基)哌啶[CAS 22148-20-5]作为偶联试剂对。使得到的苯胺与72.3反应，然后通过实施例13中所示化学流程处理，得到标题化合物。C28H35N7O的MS实测值为(M+H)+ 486.5.UV λ＝252nm。
实施例249：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(3-哌啶基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202121
用与实施例232中所示相同的化学流程制备初始联芳基苯胺。用3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺[CAS 210907-84-9]和N-(3-溴苯基)哌啶[CAS 84964-24-9]作为偶联试剂对。使得到的苯胺与72.3反应，然后通过实施例13中所示化学流程处理，得到标题化合物。C28H35N7O的MS实测值为(M+H)+ 486.5.UV λ＝247nm。
实施例250：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-吡咯烷基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202122
用与实施例232中所示相同的化学流程制备初始联芳基苯胺。用3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺[CAS 210907-84-9]和N-(4-溴苯基)吡咯烷[CAS 22090-26-2]作为偶联试剂对。使得到的苯胺与72.3反应，然后通过实施例13中所示化学流程处理，得到标题化合物。C27H33N7O的MS实测值为(M+H)+ 472.5.UV λ＝246nm。
实施例251：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-吡咯烷-2-氧代-基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202131
该实施例化合物为实施例250中的副产物。C27H31N7O2的MS实测值为(M+H)+ 486.5.UV λ＝248，282nm。
实施例252：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(3-吡咯烷-2-氧代-基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202132
用与实施例232中所示相同的化学流程制备初始联芳基苯胺。用3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺[CAS 210907-84-9]和N-(3-溴苯基)吡咯烷[CAS 219928-13-9]作为偶联试剂对。使得到的苯胺与72.3反应，然后通过实施例13中所示化学流程处理，得到标题化合物。C27H31N7O2的MS实测值为(M+H)+ 486.5.UV λ＝245nm。
实施例253：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(苯并[d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202133
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-硼酸[CAS 94839-07-3]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C24H26N6O3的MS实测值为(M+H)+ 447.3.UV λ＝239，274，296nm.δ1.35-1.85(m，8H)，3.58-3.65(m，1H)，4.25-4.31(m，1H)，6.00(s，2H)6.93(d，1H)，7.10-7.18(m，2H)，7.37-7.50(m，3H)，8.08(br s，1H)，8.53(s，1H)
实施例254：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2-甲基磺酰基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺.
Figure BPA00001277505202141
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用2-甲基磺酰基苯基硼酸[CAS 330804-03-0]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C24H28N6O3S的MS实测值为(M+H)+ 481.4.UV λ＝240，285nm。
实施例255：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(3-甲基磺酰基苯基)苯氨基)嘧啶5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202142
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用3-甲基磺酰基苯基硼酸[373384-18-0]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C24H28N6O3S的MS实测值为(M+H)+ 481.4.UV λ＝246nm。
实施例256：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(4-甲基磺酰基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202151
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用4-甲基磺酰基苯基硼酸[149104-88-1]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。C24H28N6O3S的MS实测值为(M+H)+ 481.4.UV λ＝250nm.δ1.25-1.85(m，8H)，3.18(s，3H)，3.58-3.65(m，1H)，4.21-4.28(m，1H)，7.52-7.62(m，3H)7.93(d，2H)，8.07(d，2H)，8.17(br s，1H)，8.57(s，1H)
实施例257：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(3-甲基磺酰基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202152
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用3-甲基磺酰基苯基硼酸[373384-18-0]和4-碘苯胺[CAS 540-37-4]作为偶联试剂对。C24H28N6O3S的MS实测值为(M+H)+ 481.4.UV λ＝235，308nm。
实施例259：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-(4-甲基磺酰基苯基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用与实施例232中所示相同的化学流程制备该化合物。但用4-甲基磺酰基苯基硼酸[149104-88-1]和4-碘苯胺[CAS 540-37-4]作为偶联试剂对。C24H28N6O3S的MS实测值为(M+H)+ 481.3.UV λ＝239，313nm。
实施例260：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(喹啉-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用与实施例232中所示相同的化学流程制备初始联芳基苯胺。用3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺[CAS 210907-84-9]和4-溴喹啉[CAS 3964-04-3]作为偶联试剂对。使得到的苯胺与72.3反应，然后通过实施例13中所示化学流程处理，得到标题化合物。C26H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 454.4.UV λ＝239，302nm。
实施例261：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(喹啉-8-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202162
用与实施例232中所示相同的化学流程制备初始联芳基苯胺。用3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯胺[CAS 210907-84-9]和8-溴喹啉[CAS 16567-18-3]作为偶联试剂对。使得到的苯胺与72.3反应，然后通过实施例13中所示化学流程处理，得到标题化合物。C26H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 454.4.UV λ＝240，301nm。
实施例262：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(喹啉-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202163
用与实施例232中所示相同的化学流程制备初始联芳基苯胺。但用5-喹啉基硼酸[CAS 355386-94-6]代替3，4-二甲氧基苯基硼酸[CAS 122775-35-3]。使得到的苯胺与72.3反应，然后通过实施例13中所示化学流程处理，得到标题化合物。C26H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 454.5.UV λ＝241，302nm。
实施例264：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-二苯并呋喃氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202171
使市售3-氨基二苯并呋喃[CAS 4106-66-5]与300.4和DIEA反应制备该化合物。然后用实施例232中所示化学反应，得到标题化合物。C23H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 417.4.UV λ＝212，236，322nm。
实施例265：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(2-二苯并呋喃氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202172
将2-溴二苯并呋喃(331.1；942mg，3.81mmol)[CAS 86-76-0]、氨基甲酸叔丁酯(670mg，5.72mmol)[CAS 4248-19-5]和Cs2CO3加入脱气的二
Figure BPA00001277505202173
烷中。然后加入Xantphos(330mg，0.51mmol)[CAS 161265-03-8]和Pd2(dba)3(175mg，0.19mmol)[CAS 51364-51-3]。在氩气下，将反应物在85℃下加热18h。将反应物冷却，通过闪层析处理，得到331.2，将其溶于4N HCl/二
Figure BPA00001277505202174
烷。将反应物搅拌12h，然后真空浓缩，得到331.3(200mg)。使该苯胺与72.3反应，通过实施例120中所示化学流程处理，得到标题化合物。C23H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 417.4.UV λ＝210，244，289nm。
实施例266：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(9-甲基-9H-咔唑-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202181
在0℃下，向3-溴咔唑(332.1)(530mg，2.15mmol)[CAS 1592-95-6]的DMF溶液(～20mL)中加入NaH的DMF悬浮液(～5mL)。使反应物升温至室温，然后在60℃下加热1h。等待溶液冷却至室温，滴加碘代甲烷。在60℃下，将反应物在密闭试管中加热12h。将反应混合物冷却，用EtOAc稀释，用水洗涤(4次)，盐水洗涤，经MgSO4干燥，浓缩，得到332.2(550mg)。
中间体332.2通过实施例265中所示化学流程处理，得到332.3。使该苯胺与72.3反应，然后通过实施例13中所示化学流程处理，得到标题化合物。C23H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 430.4.UV λ＝238，296nm。
实施例267：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2R)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例87中所示相同化学流程，用市售(1R，2R)-环己烷-1，2-二胺和DIEA制备标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV λ＝250nm。
实施例268：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1S，2S)-2-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202191
用实施例87中所示相同化学流程，用市售(1S，2S)-环己烷-1，2-二胺和DIEA制备标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV λ＝250nm。
实施例269：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，3S)-3-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体)
Figure BPA00001277505202192
用实施例87中所示相同化学流程，用市售顺式-环己烷-1，3-二胺和DIEA制备标题外消旋化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV λ＝252nm.
实施例270：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，3R)-3-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体)
Figure BPA00001277505202193
用实施例87中所示相同化学流程，用市售反式-环己烷-1，3-二胺和DIEA制备标题外消旋化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV λ＝252nm。
实施例271：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1S，4S)-4-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例87中所示相同化学流程，用市售顺式-环己烷-1，4-二胺和DIEA制备标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV λ＝252nm。
实施例272：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，4R)-4-氨基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202202
用实施例417中所示相同化学流程，用市售反式-环己烷-1，4-二胺和DIEA制备标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV λ＝252nm。
实施例273：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1S，2S)-2-氨基环戊基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体)
Figure BPA00001277505202203
用实施例417中所示相同化学流程，用市售反式-环戊烷-1，2-二胺和DIEA制备标题外消旋化合物。C18H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 380.4.UV λ＝251nm.
实施例274：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202211
在120℃下，将3-溴-5-(三氟甲基)苯胺335.1(1.08g，4.50mmol)[CAS 54962-75-3]、1H-1，2，3-三唑335.2(1.04mL，18.0mmol)、K3PO4(1.91g，9.00mmol)、CuI(428mg，2.25mmol)、N，N’-二甲基乙二胺(0.29mL，2.70mmol)在12mL二
Figure BPA00001277505202212
烷和3mL DMSO中的混合物在密闭试管中搅拌5天。得到335.3和335.4(～1.4∶1比例)的混合物。将混合物用EtOAc(250mL)稀释，用水、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。粗混合物通过闪层析处理，分离到335.3。
按实施例232中概述的反应条件，使苯胺335.3与300.4反应。将该化学流程完成，得到标题化合物。C20H22F3N9O的MS实测值为(M+H)+ 462.3.UV λ＝259nm.δ1.50-2.00(m，8H)，3.61-3.68(m，1H)，4.80-4.88(m，1H)，7.80(s，1H)，8.05(s，2H)，8.15(s，1H)，8.60(s，1H)，9.05(s，1H)
实施例275：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-甲基-4-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202221
在120℃下，将4-氟-3-甲基硝基苯337.1(819mg，5.28mmoL)[CAS 455-88-9]、1H-1，2，3-三唑335.2(1.23mL 21.1mmol)[CAS 288-36-8]和碳酸铯(3.44g，10.6mmol)在25mL无水NMP中的混合物在密闭试管中搅拌24h。将其冷却，用400mL乙酸乙酯稀释，用水洗涤。将水相再用EtOAc(2x200mL)萃取。将合并的有机相用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，得到～1∶1的粗产物337.2和337.3的溶液。将该溶液浓缩至100mL，加入催化量的10％ Pd/C。向该悬浮液中充入氢气，搅拌过夜。使混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩，得到粗苯胺337.4和337.5。C9H10N4的MS实测值为(M+H)+ 175.1。用闪柱将两种苯胺纯化。
使苯胺337.4与300.4反应，通过实施例232中所示化学流程处理，得到标题化合物。C20H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 408.4.UV λ＝239，296nm.δ1.5-2.0(m，8H)，2.38(s，3H)，3.65-3.75(m，1H)，4.35-4.45(m，1H)，7.52-7.62(m，1H)，7.65-7.75(m，2H)，7.95(s，2H)，8.55(s，1H).
实施例276：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-甲基-4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202222
用实施例275中所示化学流程制备该化合物。具体地说，使吡唑[CAS 288-13-1]和337.1反应，形成3-甲基-4-(1H-吡唑-1-基)苯胺。然后按实施例232中概述的条件，使该苯胺与300.4反应。将该化学流程完成，得到标题化合物。C21H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 407.5.UV λ＝238，296nm.δ1.5-2.0(m，8H)，2.25(s，3H)，3.60-3.70(m，1H)，4.35-4.45(m，1H)，6.55(s，1H)，7.40(d，1H)，7.60-7.68(m，2H)，7.75(br s，1H)，7.82(br s，1H)，8.55(s，1H).
实施例277：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)-4-(三氟甲基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202231
用改进的实施例275方法制备该化合物。尤其是，用2-氟-4-硝基-1-三氟甲基苯[CAS 69411-67-2]代替2-氟-1-甲基-4-硝基苯[CAS 1427-07-2]，将初始置换反应物在45℃下搅拌3h。氢化后，按实施例232中概述的条件，使得到的苯胺与300.4反应。将该化学流程完成，得到标题化合物。C17H18F3N9O的MS实测值为(M+H)+ 462.3.UV λ＝245，295nm.δ1.50-1.95(m，8H)，3.58-3.64(m，1H)，4.43-4.51(m，1H)，7.60-7.66(m，1H)，7.90(d，1H)，8.04(s，2H)，8.52-8.58(m，1H)，8.62(s，1H).
实施例278：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-(1H-1，2，3-三唑-1-基)-4-(三氟甲基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202232
在实施例277中所述反应中形成该标题化合物的1-取代的三唑前体。氢化后，按实施例232中概述的条件，使得到的苯胺与300.4反应。将化学流程完成，得到标题化合物。C17H18F3N9O的MS实测值为(M+H)+ 462.3.UV λ＝245，295nm.δ1.45-1.85(m，8H)，3.58-3.64(m，1H)，4.38-4.46(m，1H)，7.63-7.71(m，1H)，7.89-7.97(m，2H)，8.34(br s，1H)，8.49-8.56(m，1H)，8.62(s，1H).
实施例279：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-乙烯基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202241
使市售3-乙烯基苯胺与72.3反应，然后通过实施例87中所示化学流程处理，得到标题化合物。C19H24N6O的MS实测值为(M+H)+ 353.4.UV λ＝244nm。
实施例280：2-(顺式-2-氨基环己基氨基)-4-(4-乙烯基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例11中化学流程合成标题化合物。但用4-乙烯基苯胺[CAS 1520-21-4]代替苯胺72.4。C19H24N6O的MS实测值为(M+H)+ 353.4.UV λ＝236，310nm。
实施例281：2-(顺式-2-氨基-顺式-3-甲基环己基氨基)-4-(3-甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202243
用实施例302中所示相同化学流程合成该化合物。C19H26N6O的MS实测值为(M+H)+ 355.4.UV λ＝242，289nm.δ1.00(d，3H)，1.20-1.95(m，7H)，2.40(s，3H)，3.18(s，3H)，3.72-3.80(m，1H)，4.02-4.10(m，1H)，7.07-7.14(m，1H)7.25-7.35(m，2H)，7.41-7.48(m，1H)，8.54(s，1H).
实施例282：2-(顺式-2-氨基-顺式-3-甲基环己基氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202251
用实施例303中所示相同化学流程合成该化合物。C20H28N6O的MS实测值为(M+H)+ 369.4.UV λ＝240，290nm.δ1.00(d，3H)，1.20-1.95(m，7H)，2.38(s，6H)，3.70-3.78(m，1H)，4.04-4.12(m，1H)，6.95(s，1H)，7.19-7.25(m，2H)，8.50(s，1H).
实施例283：2-(顺式-2-氨基-顺式-3-甲基环己基氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例298中所示相同化学流程合成该化合物。C20H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 408.4.UV λ＝250nm.δ0.75-0.85(m，3H)，1.20-1.95(m，7H)，3.62-3.70(m，1H)，4.20-4.26(m，1H)，7.38-7.42(m，1H)，7.55(t，1H)，7.89-7.94(m，1H)，7.97(s，2H)，8.56(s，1H)，8.66-8.70(m，1H).
实施例284：2-(顺式-6-氨基环己-3-烯基氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例298中所示相同化学流程合成该化合物。C19H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 392.3.UV λ＝250nm。
实施例285：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氟-4-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202261
按实施例92，通过使1H-1，2，3-三唑与4-溴-3-氟苯胺[CAS 656-65-5]反应制备3-氟-4-(2H-1，2，3-三唑)苯胺中间体。然后按实施例232中概述的反应条件，使该中间体与300.4反应。将化学流程完成，得到标题化合物。C19H22FN9O的MS实测值为(M+H)+ 412.4.UV λ＝242，305nm.δ1.5-2.0(m，8H)，3.75-3.85(m，1H)，4.40-4.50(m，1H)，7.45(d，1H)，7.75-7.85(m，1H)，7.95-8.1(m，3H)，8.60(s，1H).
实施例286：2-((1SR，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(苯乙氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202262
用实施例9中所示相同合成流程合成标题化合物。C19H26N6O的MS实测值为(M+H)+ 355.4.UV：λ＝232.2.
实施例287：2-((1S，2R)-1-氨基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-4-(环丙基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202263
用类似于所述方法制备以上化合物。C18H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 339.2.
实施例288：2-((1R，2S)-2-氨基-1，2，3，4-四氢萘-1-基氨基)-4-(环丙基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202271
用类似于所述方法制备以上化合物。C18H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 339.2。
实施例289：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202272
步骤1：在0℃下，向二氯嘧啶215.1(700mgs，3.16mmol)的乙腈(8mL)溶液加入6-氨基-萘(3.16mmol)、二异丙胺(0.61mL，3.5mmol)的乙腈(10mL)悬浮液。然后将反应混合物缓慢升温至室温，搅拌过夜。然后将反应混合物用水稀释，过滤，收集沉淀，得到需要的产物215.2。
步骤2：将乙酯215.2(960mg，2.81mmol)用1，4-二氧杂环己烷(7.5mL)和乙醇(2mL)稀释，然后用氢氧化锂水溶液(1.0M，2.8mL，2.8mmol)稀释，在室温下搅拌直至所有原料转化为羧酸。然后将反应物用1N HCl(3.0mL)酸化。然后将得到的悬浮液过滤，用水洗涤，干燥，得到870mg羧酸215.3。
步骤3：向羧酸215.3(870mg，2.76mmol)、EDC(792mg，4.14mmol)、HOBt(560mg，4.14mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(14mL)溶液中加入氨水(0.5M的1，4-二氧杂环己烷溶液，14mL，6.9mmol)，搅拌过夜。然后将反应混合物用水(100mL)稀释，过滤，收集沉淀，得到需要的产物215.4。
步骤4：在130℃下，将苯并三唑醚215.4(75mg，0.182mmol)、顺式-1，2-二氨基环己烷(25mg，0.218mmol)、DIPEA(0.1mL，0.546mmol)在异丙醇(3mL)中的混合物在微波(Emry’s Optimizer)中加热20分钟。
然后将反应混合物用水和乙腈稀释，经制备型HPLC直接纯化，冻干后，得到需要的产物215。C21H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 377.3。
实施例290：2-((1S，2R)-1-氨基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-4-(环丙基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202281
用类似于本文中所述方法制备以上化合物。C18H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 339.2。
实施例291：2-((1R，2S)-2-氨基-1，2，3，4-四氢萘-1-基氨基)-4-(环丙基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202282
用类似于所述方法制备以上化合物。C18H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 339.2.
实施例293：2-((1S，2R)-2-(5-氨基甲酰基-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-2-基氨基)环己基氨基)乙酸
Figure BPA00001277505202283
用类似于本文中所述方法制备以上化合物。C20H26N6O3的MS实测值为(M+H)+ 399.2.UV：λ＝240.5，212.2，287.8.
实施例294：2-(顺式-4-氨基环己基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202291
用实施例271中示范的同一合成制备标题化合物。C20H25N7O的MS实测值(M+H)+ 380.4.UV：λ＝245.4.
实施例295：2-(顺式-2-氨基环戊基氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202292
用实施例87中所示相同化学流程合成该化合物。C18H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 380.4.UV λ＝249nm。
实施例296：2-(顺式-2-氨基环戊基氨基)-4-(3-甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202293
用类似于实施例1中所示的化学流程合成化合物344。使含前体344.1的苯并三唑与顺式-二胺343.4反应，得到标题化合物。C17H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 327.4.UV λ＝240，287nm。
实施例297：2-(顺式-2-氨基环戊基氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用类似于实施例1中所示的化学流程合成化合物345。使含前体345.1的苯并三唑与顺式-二胺343.4反应，得到标题化合物。C18H24N6O的MS实测值为(M+H)+ 341.4.UV λ＝217，239，290nm。
实施例298：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((3R，4R)-3-氨基四氢-2H-吡喃-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202302
流程：
Figure BPA00001277505202303
步骤1：通过标准文献方法或购买市售化学试剂制备3，4-二-O-乙酰基-D-阿醛[CAS 3945-17-3](179.1)。将其(5.0g，25mmol)溶于100mL甲醇。向其中加入1.0克10％ Pd/C，在氢环境下，将混合物搅拌过夜，得到化合物179.2。将混合物过滤，除去Pd/C。将滤液用甲醇钠(5.4g，100mmol)在室温下处理过夜。将其在冰浴中用6N HCl(20mL)淬灭。将混合物真空浓缩至干。将残渣用500mL乙酸乙酯处理，在45℃下剧烈搅拌30分钟。用微孔级布氏漏斗将浆状物过滤。将滤液真空浓缩，抽真空过夜，得到二醇179.3(2.82g，95％)。
步骤2：将该二醇179.3(205mg，1.74mmol)溶于10mL无水DCM。向其中加入吡啶(0.35mL，4.34mmol)，再在冰浴中加入Tf2O(0.63mL，3.74mmol)。通过TLC(显色剂：钼酸铵(12.5g)、硫酸Ce(IV)(5g)、10％ H2SO4500mL；喷洒显色剂后用电吹风机的强热风加热)监测反应。使反应进行15分钟。向该混合物中加入24mL DMF和3mL HMPA。然后加入叠氮化钠(2.28g，35mmol)。然后将混合物在50℃下搅拌3h(通过TLC检测证实反应在1.5h后完成)。将混合物用乙酸乙酯稀释，过滤，用盐水洗涤。将有机相干燥，浓缩，通过闪柱处理，分离到二叠氮化物179.4(220mg，75％)。
步骤3：将二叠氮化物179.4(220mg，1.3mmol)溶于40mL乙酸乙酯。在H2环境下，将其用10％ Pd/C处理过夜。使混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩，得到粗二胺179.5。
步骤4：用实施例1中所示相同化学流程，用苯胺156.6(实施例66)制备中间体179.6。C14H13N7OS的MS实测值为(M+H)+ 328.2。
步骤5：将甲硫基嘧啶179.6(105mg，0.32mmol)溶于2mL NMP，在室温下，用MCPBA(102mg，0.38mmol)处理45分钟。向其中加入DIEA(226μL，1.3mmol)和步骤3中制备的二胺179.5。将混合物搅拌2h，在90℃下搅拌2h。通过反相分析型HPLC(5分钟测定)测定，在1.58分钟和1.55分钟发现两个主要产物179和179.7，它们的比例为1.7∶1，179占多数。用反相制备型HPLC将混合物中的化合物179分离。C18H21N9O2的MS实测值为(M+H)+ 396.3.UV λ＝249nm.NMR(CD3OD)：δ8.66(s，1H)，8.52(s，1H)，7.93(s，2H)，7.82(m，1H)，7.47(m，1H)，7.27(m，1H)，4.40(m，1H)，4.00(m，1H)，3.78(m，1H)，3.72(m，1H)，3.55(m，1H)，3.42(m，1H)，2.00(m，1H)，1.86(m，1H)ppm。
实施例299：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((3S，4S)-4-氨基四氢-2H-吡喃-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202321
用市售3，4-二-O-乙酰基-L-阿醛[CAS 3945-18-4]代替3，4-二-O-乙酰基-D-阿醛[CAS 3945-17-3]，用实施例298中所示相同化学流程制备该化合物。标题化合物为从最后步骤的反应混合物中分离的次要产物。C18H21N9O2的MS实测值为(M+H)+ 396.3。UV λ＝250nm.NMR(CD3OD)：δ8.73(s，1H)，8.58(s，1H)，8.09(s，2H)，7.90(m，1H)，7.54(m，1H)，7.34(m，1H)，4.50(m，1H)，4.06(m，1H)，3.83(m，1H)，3.76(m，1H)，3.63(m，1H)，3.60(m，1H)，3.43(m，1H)，2.08(m，1H)，1.92(m，1H)ppm。
实施例300：4-(3-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)-2-((3R，4R)-3-氨基四氢-2H-吡喃-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202322
用实施例298中所示相同化学流程制备该化合物。C19H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 395.4.UV λ＝246nm。
实施例301：2-((3R，4R)-3-氨基四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-(3-(嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202331
用实施例298中所示相同化学流程制备该化合物。C20H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 407.4.UV λ＝249nm。
实施例302：2-((3R，4R)-3-氨基四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例298中所示相同化学流程制备该化合物。C17H22N6O2的MS实测值为(M+H)+ 343.3.UV λ＝240，288nm。
实施例303：2-((3R，4R)-3-氨基四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202333
用实施例298中所示相同化学流程制备该化合物。C18H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 357.4.UV λ＝240，290nm。
实施例304：2-((3R，4R)-3-氨基四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-(3-甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例298中所示相同化学流程制备该化合物。C17H22N6O3的MS实测值为(M+H)+ 359.4.UV λ＝240，283nm.NMR(CD3OD)：δ8.46(s，1H)，7.29(m，1H)，7.26(m，1H)，6.99(m，1H)，6.74(m，1H)，4.25(m，1H)，4.03(m，1H)，3.89(m，1H)，3.79(m，1H)，3.77(s，3H)，3.62(m，1H)，3.55(m，1H)，2.02(m，1H)，1.82(m，1H)ppm。
实施例305：2-((3S，4S)-4-氨基四氢-2H-吡喃-3-基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202342
用实施例299中所示相同化学流程制备该化合物。C17H22N6O2的MS实测值为(M+H)+ 343.3.UV λ＝241，287nm.NMR(CD3OD)：δ8.53(s，1H)，7.47(m，1H)，7.37(m，1H)，7.28(m，1H)，7.02(m，1H)，4.50(m，1H)，4.05(m，1H)，4.01(m，1H)，3.73-3.68(m，2H)，3.57(m，1H)，2.38(s，3H)，2.05(m，1H)，1.87(m，1H)ppm。
实施例306：2-((1R，2R)-2-氨基-3，3-二氟环己基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体)
Figure BPA00001277505202343
流程：
Figure BPA00001277505202351
步骤1：将2-环己烯-1-醇(5.0mL，50mmol)溶于100mL DCM。向其中加入吡啶(12.2mL，150mmol)和TBDMSCl(12.1g，80mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物真空浓缩，除去吡啶。将残渣溶于300mL乙酸乙酯和200mL水。将有机相分离，用盐水洗涤，干燥，浓缩，用15％乙酸乙酯/己烷作为洗脱液，用硅胶闪柱纯化。从而得到化合物187.1，为油状物(10.1g，94％)。
步骤2：将化合物187.1(10.1g，47.7mmol)溶于70mL乙腈。向其中加入NMO(50％水溶液，22.5mL，95.4mmol)和OsO4(4％水溶液，9.1mL，1.43mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将其用600mL乙酸乙酯稀释，用盐水、饱和碳酸氢钠洗涤，干燥，浓缩，用60％乙酸乙酯/己烷作为洗脱液，经硅胶闪柱纯化，得到化合物187.2(10.8g，92％)，为油状物。
步骤3：将二醇187.2(10.8g，43.9mmol)溶于200mL DCM。在冰浴中，向其中加入吡啶(17.7mL，219mmol)，然后滴加MsCl(8.2mL，105mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将其用500mLDCM稀释，用盐水洗涤×3，干燥，浓缩，用45％乙酸乙酯/己烷作为洗脱液，用硅胶闪柱纯化，得到化合物187.3(16.8g，95％)，为油状物。
步骤4：将化合物187.3(15.7g，39mmol)溶于80mL DMF和20mLHMPA。向其中加入叠氮化钠(16.5g，253mmol)。将混合物在100℃下搅拌过夜(24h)。将混合物用800mL乙酸乙酯稀释，用水洗涤，用盐水洗涤×2，干燥，浓缩，用10％乙酸乙酯/己烷作为洗脱液，经硅胶闪柱纯化，分离到二叠氮化物187.4(3.16g，27％)，为油状物。
步骤5：将化合物187.4(1.21g，4.1mmol)溶于60mL无水THF。向其中加入TBAF(1.0M的THF溶液，8.2mL，8.2mmol)。将混合物搅拌2h。将其用甲醇淬灭，真空浓缩，用40-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱液，经硅胶柱处理，分离到化合物187.5(854mg，99％)，为油状物。
步骤6：将化合物187.5(450mg，2.5mmol)溶于100mL乙酸乙酯。加入10％ Pd/C(500mg)。将混合物在H2环境下搅拌过夜(20h)。通过硅藻土将其过滤。用乙酸乙酯将硅藻土充分洗涤。将滤液浓缩，通过硅胶柱处理，分离到化合物187.6(650mg，79％)，为固体。C16H30N2O5的MS实测值为(M+H)+ 331.3。
步骤7：将化合物187.6(72mg，0.22mmol)溶于10mL无水DCM。向其中加入4A分子筛(活化)(100mg)、NMO(固体，39mg，0.33mmol)，最后加入TPAP(8mg，0.022mmol)。将混合物在室温下搅拌2h。将其浓缩，直接加载在硅胶闪柱，分离到化合物187.7(77mg，100％)，为固体。C16H28N2O5的MS实测值为(M+H)+ 329.3。
步骤8：将酮187.7(134mg，0.41mmol)溶于10mL DCM。向其中加入DAST(110μL，0.82mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将其直接加载在硅胶闪柱上，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，分离到化合物187.8(C16H28F2N2O4的MS实测值为(M+H)+ 351.2)。然后将其在室温下用纯TFA处理1h，浓缩至干，得到化合物187.9。C6H12F2N2的MS实测值为(M+H)+ 151.2。
步骤9：将化合物187.10(72mg，0.2mmol)溶于3mL NMP。向其中加入DIEA(350μL，2mmol)和在步骤8中制备的所有粗化合物187.9。将混合物在90℃下搅拌2h，通过反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物187(外消旋体)。C18H22F2N6O的MS实测值为(M+H)+ 377.2.UV λ＝239，292nm.NMR(CD3OD)：δ8.51(s，1H)，7.45(m，1H)，7.34(m，1H)，7.25(m，1H)，7.02(m，1H)，4.61(m，1H)，4.10(m，1H)，2.36(s，3H)，1.8-2.1(m，6H)ppm。
实施例307：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2R)-2-氨基-3，3-二氟环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体)
Figure BPA00001277505202371
用实施例306中所示相同化学流程制备标题化合物。C19H21F2N9O的MS实测值为(M+H)+ 430.4.UV λ＝250nm。
实施例308：2-((1R，2R，3R)-2-氨基-3-氟环己基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶5-甲酰胺(外消旋体)
Figure BPA00001277505202372
流程
Figure BPA00001277505202373
步骤1：将化合物187.6(实施例306中所述)(350mg，1.06mmol)溶于20mL DCM。在-78℃下，向其中滴加DAST(280μL，2.12mmol)的10mLDCM溶液。将混合物在冷浴中搅拌45分钟，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，浓缩，经闪柱处理，分离到化合物189.1，收率30％。C16H29FN2O4的MS实测值为(M+H)+ 333.2。将其用3mL纯TFA处理20分钟。将混合物浓缩至干，得到粗化合物189.2。C6H13FN2的MS实测值为(M+H)+ 133.1。
步骤2：将化合物187.10(108mg，0.3mmol)溶于3mL NMP。向其中加入DIEA(260μL，1.5mmol)和步骤1中制备的所有粗化合物189.2。将混合物在90℃下搅拌2h，通过反相制备型HPLC处理，分离到标题化合物189(外消旋体)。C18H23FN6O的MS实测值为(M+H)+ 359.2.UV λ＝240，292nm.NMR(CD3OD)：δ8.51(s，1H)，7.45(m，1H)，7.38(m，1H)，7.24(m，1H)，6.97(m，1H)，4.83-4.78(m，2H)，3.65(m，1H)，2.36(s，3H)，1.8-2.2(m，6H)ppm。
实施例309：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2R，3R)-2-氨基-3-氟环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体)
Figure BPA00001277505202381
用实施例308中所示相同化学流程制备标题化合物。C19H22FN9O的MS实测值为(M+H)+ 412.4.UV λ＝251nm。
实施例310：2-((1R，2R，3S)-2-氨基-3-羟基环己基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体，191A)和2-((1S，2S，6R)-2-氨基-6-羟基环己基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体，191B)
Figure BPA00001277505202382
流程
Figure BPA00001277505202391
步骤1：将化合物187.4(实施例306中所述)(180mg，0.60mmol)溶于50mL乙酸乙酯。向其中加入10％ Pd/C(100mg)，在氢环境下，将混合物搅拌过夜。使混合物通过硅藻土过滤，然后将其用甲醇充分洗涤。将滤液真空浓缩，得到定量收率的化合物191.1，为油状物。C12H28N2Osi的MS实测值为(M+H)+ 245.3。
步骤2：将步骤1中的化合物191.1溶于5mL NMP。向其中加入DIEA(313μL，1.8mmol)和化合物187.10(108mg，0.3mmol)。将混合物在90℃下搅拌90分钟。然后向其中加入10mL甲醇、10mL TFA和3mL水。将混合物在80℃下搅拌2h。将其真空浓缩，通过反相制备型HPLC纯化，分离到外消旋标题化合物191.A和191.B。通过分析型HPLC测定，191.A(极性较小)和191.B的比例为7∶1。化合物191.A：C18H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 357.3。UV λ＝243，294nm。化合物191.B：C18H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 357.3.UV λ＝243，290nm。
实施例311：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2R，3S)-2-氨基-3-羟基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体，192.A)和4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1S，2S，6R)-2-氨基-6-羟基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体，192.B)
Figure BPA00001277505202392
用实施例310中所示相同化学流程制备该两种标题外消旋化合物。通过分析型HPLC测定，192.A(极性较小)和192.B的比例为1.6∶1。化合物192.A：C19H23N9O2的MS实测值为(M+H)+ 410.4。UV λ＝250nm。化合物192.B：C19H23N9O2的MS实测值为(M+H)+ 410.4.UV λ＝249nm。
实施例312：2-((1R，2R，3S)-2-氨基-3-甲氧基环己基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体，193.A)和2-((1S，2S，6R)-2-氨基-6-甲氧基环己基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体，193.B)
Figure BPA00001277505202401
流程
Figure BPA00001277505202402
步骤1：将化合物187.4(实施例306中所述)(1.21g，4.1mmol)溶于60mL无水THF。向其中加入TBAF(1.0M的THF溶液，8.2mL，8.2mmol)。将混合物在室温下搅拌2h。将其浓缩，加载在硅胶闪柱上，分离到化合物193.1(854mg，99％)，为固体。
步骤2：将化合物193.1(124mg，0.68mmol)溶于10mL无水THF。向其中加入NaH(60％(重量)的矿物油悬浮液，55mg，1.36mmol)，5分钟后，再加入碘代甲烷(0.42mL，6.8mmol)。将混合物搅拌1h。将其真空浓缩，加载到硅胶闪柱上，分离到化合物193.2(115mg，85％)，为油状物。
步骤3：将步骤2中制备的化合物193.2(115mg，0.58mmol)溶于80mL乙酸乙酯。向其中加入100mg 10％ Pd/C，将混合物在H2环境下搅拌过夜。通过硅藻土将其过滤，将硅藻土用甲醇充分洗涤。将滤液真空浓缩，得到化合物193.3。
步骤4：将步骤3中制备的所有化合物193.3溶于3mL NMP。向其中加入化合物187.10(180mg，0.5mmol)和DIEA(0.26mL，1.5mmol)。将混合物在90℃下搅拌1h，得到6∶1的193.A(极性较小)和193.B的混合物。用反相制备型HPLC将两种外消旋标题化合物分离。化合物193.A：C19H26N6O2的MS实测值为(M+H)+ 371.3。UV λ＝247，295nm。化合物193.B：C19H26N6O2的MS实测值为(M+H)+ 371.3.UV λ＝242，289nm。
实施例313：2-((1s，4s)-4-氨基环己基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202411
在室温下，向反式-4-氨基环己醇(2.07g，13.6mmol)和NaHCO3(3.50g，41.7mmol)在H2O(20mL)中的混合物加入氯甲酸苄酯(1.92mL，13.6mmol)的二
Figure BPA00001277505202412
烷(15mL)溶液。将混合物在室温下搅拌20h。收集白色沉淀，为(1R，4R)-4-羟基环己基氨基甲酸苄酯(3.37g)。
在室温下，向(1R，4R)-4-羟基环己基氨基甲酸苄酯(1.14g，4.58mmol)和三乙胺(1.30mL，9.34mmol)的CH2Cl2(15mL)悬浮液中加入甲磺酰氯(0.425mL，5.49mmol)。将混合物在室温下搅拌20h。再加入甲磺酰氯(0.425mL，5.49mmol)和三乙胺(1.00mL)。继续搅拌48h。将反应溶液依次用5％NaHCO3、1N HCl洗涤。将有机相分离，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到(1R，4R)-4-(苄氧基羰基)环己基甲磺酸酯，为固体(1.13g)。
将(1R，4R)-4-(苄氧基羰基)环己基甲磺酸酯(1.13g，3.46mmol)和NaN3(0.674g，10.4mmol)在DMF(10mL)中的混合物在100℃下搅拌20h。加入水和EtOAc。将有机相分离，用水洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到(1s，4s)-4-叠氮环己基氨基甲酸苄酯(0.819g)。
在氢环境下，将(1s，4s)-4-氮氮环己基氨基甲酸苄酯(400mg，1.46mmol)和Pd-C(10％，70mg)在MeOH(20mL)(含5滴6N HCl)中的混合物氢化20h。通过硅藻土将其过滤。将滤液真空浓缩。得到(1s，4s)-环己烷-1，4-二胺(223mg)。
向(1s，4s)-环己烷-1，4-二胺(60mg，0.40mmol)和TEA(0.208mL，1.50mmol)的DMF(2mL)和MeOH(1mL)溶液中加入化合物2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(65mg，0.18mmol)。将混合物在室温下搅拌20h。将其真空浓缩。残渣经HPLC纯化，得到标题化合物(30mg)。MS 341.2(M+H)；UV 247.8，298.8.
实施例314：2-((4-氨基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202421
将化合物187.10(实施例306中所示)(70mg，0.19mmol)溶于3mLNMP。向其中加入市售4-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-4-胺(78mg，0.38mmol)和DIEA(0.20mL，1.14mmol)。将混合物在90℃下搅拌2h。用反相制备型HPLC将该混合物中的标题化合物分离。C18H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 357.3.UV λ＝240nm。
实施例315：(R)-4-(1H-吲唑-6-基氨基)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202431
步骤1：搅拌下，向羧酸165.1(85g，540mmol)的亚硫酰氯(425mL)溶液中缓慢加入吡啶(8.5mL，0.11mmol)。将反应物在75℃下搅拌过夜，随后将其浓缩，真空干燥至浅黄色粉末。将该黄色固体用750mL乙醇缓慢稀释，回流过夜。次日，通过HPLC测定反应完全，然后在冰浴中冷却，将固体过滤，用乙醚洗涤，得到乙酯165.2，为灰白色粉末(91g，两步合计87％)。C7H8N2O4的MS实测值为(M+H)+ 185.0。
步骤2：将酯165.2(22g，120mmol)溶于磷酰氯(60mL，600mmol)，将混合物用N，N-二乙基苯胺(27mL，167mmol)处理，将混合物加热至105℃直至通过HPLC测定反应完全。然后将其冷却至室温，缓慢加入到1L冰块，导致形成浅褐色沉淀，过滤，收集，真空干燥，得到二氯化物165.3，为浅黄色粉末(22.5g，85％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.13(s，1H)，4.37(q，2H)，1.32(t，3H).
步骤3：将二氯嘧啶165.3(1.04g，4.7mmol)溶于NMP(30mL)，在冰浴中搅拌。向其中加入6-氨基吲唑165.4(690mg，5.2mmol)，然后滴加乙基二异丙胺(DIEA，1.64mL，9.4mmol)。将混合物搅拌40分钟，向其中加入甲硫醇钠(660mg，9.4mmol)。将混合物搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤3次，真空浓缩，得到粗化合物165.5，为定量收率的浅棕色固体。C15H15N5O2S的MS实测值为(M+H)+ 330.1。
步骤4：将乙酯165.5(4.7mmol)溶于60mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(236mg，5.6mmol)和20mL水。将混合物搅拌过夜，向其中加入1N HCl直至pH达到2。将混合物真空浓缩，除去THF。将白色固体击碎，用布氏漏斗分离。将其用水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物165.6(1.14g，81％)，为白色固体。C13H11N5O2S的MS实测值为(M+H)+ 302.1。
步骤5：将羧酸165.6(1.14g，3.8mmol)溶于30mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(1.09g，5.7mmol)和HOBt水合物(770mg，5.7mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后向其中加入氨水(市售0.5N二
Figure BPA00001277505202441
烷的溶液，22mL，11.4mmol)。将混合物搅拌2小时。然后将其真空浓缩，溶于水和乙酸乙酯。将有机相分离，用盐水洗涤4次。然后有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到化合物165.7，为浅黄色固体(820mg，72％)。C13H12N6OS的MS实测值为(M+H)+ 301.1。
步骤6：将化合物165.7(40mg，0.13mmol)溶于3mL NMP。向其中加入MCPBA(纯度65％，53mg，0.18mmol)。将其在室温下搅拌45分钟。然后向其中加入H-D-Leu-NH2HCl(108mg，0.65mmol)和DIEA(230μL，1.3mmol)。将混合物在120℃浴中搅拌90分钟。然后该混合物通过制备型HPLC处理，分离到标题化合物165。C18H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 383.2.UV λ＝246，303nm。
实施例316：(R)-4-(1H-吲唑-6-基氨基)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用H-D-Ala-NH2 HCl代替H-D-Leu-NH2 HCl，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C15H16N8O2的MS实测值为(M+H)+ 341.2。UV λ＝245，302nm。
实施例317：(R)-4-(1H-吲唑-6-基氨基)-2-(2-氨基-2-氧代-1-苯基乙氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202451
用H-D-Phe-NH2 HCl代替H-D-Leu-NH2 HCl，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C20H18N8O2的MS实测值为(M+H)+ 403.2.UV λ＝249，298nm。
实施例318：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(喹啉-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤1：将二氯嘧啶169.1(500mg，2.3mmol)溶于NMP(20mL)，在冰浴中搅拌。向其中加入6-氨基喹啉169.2(390mg，2.7mmol)，然后滴加乙基二异丙胺(DIEA，0.72mL，4.1mmol)。将混合物搅拌2小时，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤3次，真空浓缩，得到粗化合物169.3，为定量收率的浅棕色固体。C16H13ClN4O2的MS实测值为(M+H)+ 329.1.
步骤2：将乙酯169.3(2.3mmol)溶于30mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(193mg，4.6mmol)和6mL水。将混合物搅拌7小时，向其中小心加入1N HCl溶液直至pH达到5。将混合物真空浓缩，除去THF，用乙酸乙酯萃取5次。将有机相合并，干燥，真空浓缩，得到粗酸169.4。C14H9ClN4O2的MS实测值为(M+H)+ 301.1。
步骤3：将羧酸169.4(220mg，0.73mmol)溶于18mL NMP。向其中加入EDC盐酸盐(210mg，1.1mmol)和HOBt水合物(150mg，1.1mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后向其中加入氨水(市售0.5N二
Figure BPA00001277505202461
烷的溶液，7.3mL，3.65mmol)。将混合物搅拌2.5小时。然后将其真空浓缩，溶于水和乙酸乙酯。将有机相分离，用盐水洗涤3次，然后有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到化合物169.5，为固体(180mg，62％)。C20H14N8O2的MS实测值为(M+H)+ 399.1。
步骤6：将化合物169.5(71mg，0.18mmol)溶于3mL NMP。向其中加入H-D-Leu-NH2 HCl(150mg，0.90mmol)和DIEA(0.31mL，1.8mmol)。将混合物在120℃浴中搅拌90分钟。然后该混合物通过制备型HPLC处理，分离到外消旋标题化合物169。C20H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 394.2.UV λ＝241，283nm。
实施例319：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202462
用6-氨基苯并噻吩代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C18H21N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 400.2.UV λ＝243，303nm。
实施例320：(R)-4-(1H-吲哚-5-基氨基)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用6-氨基吲哚代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C19H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 382.2.UV λ＝245nm。
实施例321：(R)-4-(1H-吲唑-5-基氨基)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202472
用5-氨基吲唑代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C18H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 383.2.UV λ＝247，301nm。
实施例322：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(3-(甲基磺酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202473
用3-(甲基磺酰基)苯胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C18H24N6O4S的MS实测值为(M+H)+ 421.2.UV λ＝249，285nm。
实施例323：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(甲基磺酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202481
用4-(甲基磺酰基)苯胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C18H24N6O4S的MS实测值为(M+H)+ 421.2.UV λ＝250，300nm。
实施例324：(R)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)苯氨基)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用1-(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)乙酮代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C23H32N8O3的MS实测值为(M+H)+ 469.3.UV λ＝243，296nm。
实施例325：((R)-4-(1H-苯并[d]咪唑-6-基氨基)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202483
用1H-苯并[d]咪唑-6-胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C18H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 383.2.UV λ＝244，297nm。
实施例327：(R)-4-(1H-吲唑-5-基氨基)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202491
用H-D-Ala-NH2 HCl代替H-D-Leu-NH2 HCl，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C15H16N8O2的MS实测值为(M+H)+ 341.2.UV λ＝245，299nm。
实施例328：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(N-甲基乙酰氨基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用N-(4-氨基苯基)-N-甲基乙酰胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C20H27N7O3的MS实测值为(M+H)+ 414.2.UV λ＝245，296nm。
实施例329：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(4-(N-甲基乙酰氨基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202493
用H-D-Ala-NH2 HCl代替H-D-Leu-NH2 HCl，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C17H21N7O3的MS实测值为(M+H)+ 372.2.UV λ＝244，295nm。
实施例330：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202501
用H-D-Ala-NH2 HCl代替H-D-Leu-NH2 HCl，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C15H15N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 358.1.UV λ＝244，303nm.NMR(CD3OD)：δ9.22(s，1H)，8.51(m，2H)，8.07(d，J＝8.8Hz，1H)，7.71(d，J＝8.8Hz，1H)，4.44(m，1H)，1.55(d，J＝6.8Hz，3H)ppm。
实施例331：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(苯并[d]噻唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用5-氨基苯并噻吩代替6-氨基苯并噻吩，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C15H15N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 358.1.UV λ＝249，292nm.NMR(CD3OD)：δ9.34(s，1H)，8.67(s，1H)，8.51(s，1H)，8.10(d，J＝8.8Hz，1H)，7.59(d，J＝8.8Hz，1H)，4.64(m，1H)，1.55(d，J＝7.2Hz，3H)ppm。
实施例332：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(苯并[d]噻唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用5-氨基苯并噻吩代替6-氨基苯并噻吩，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C18H21N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 400.2.UV λ＝247，295nm。
实施例333：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202511
用咪唑并[1，2-a]吡啶-6-胺代替6-氨基苯并噻吩，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C15H16N8O2的MS实测值为(M+H)+ 341.2.UV λ＝250nm。
实施例334：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202512
用咪唑并[1，2-a]吡啶-6-胺代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C18H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 383.2.UV λ＝252nm。
实施例335：(R)-4-(1H-吲哚-5-基氨基)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用H-D-Ala-NH2 HCl代替H-D-Leu-NH2 HCl，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C16H17N7O2的MS实测值为(M+H)+ 340.2.UV λ＝224nm.NMR(CD3OD)：δ8.38(s，1H)，7.84(m，1H)，7.40(m，1H)，7.26(m，2H)，6.51(s，1H)，4.44(m，1H)，1.50(d，J＝7.6Hz，3H)ppm.8.82(s，1H)，8.74(m，1H)，8.61(s，1H)，8.10(d，J＝8.8Hz，1H)，7.87(d，J＝8.4Hz，1H)，4.54(m，1H)，3.82(m，1H)，1.99-1.62(m，8H)ppm。
实施例336：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧芑-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202521
用2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧芑-6-胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C19H24N6O4的MS实测值为(M+H)+ 401.2.UV λ＝243，310nm。
实施例337：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧芑-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202522
用H-D-Ala-NH2 HCl代替H-D-Leu-NH2 HCl，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C16H18N6O4的MS实测值为(M+H)+ 359.2.UV λ＝243，312nm。
实施例338：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(喹喔啉-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202523
用喹喔啉-6-胺代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C19H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 395.2.UV λ＝243nm。
实施例339：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(喹喔啉-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202531
用H-D-Ala-NH2 HCl代替H-D-Leu-NH2 HCl，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C16H16N8O2的MS实测值为(M+H)+ 353.2.UV λ＝242nm。
实施例340：(R)-4-(4-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202532
用4-(1H-吡唑-1-基)苯胺代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C20H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 409.2.UV λ＝241，308nm。
实施例341：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202533
用4-(噻唑-4-基)苯胺代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C20H23N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 426.2.UV λ＝240，314nm。
实施例342：(R)-4-(4-(1，2，3-噻二唑-4-基)苯氨基)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用4-(1，2，3-噻二唑-4-基)苯胺代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C19H22N8O2S的MS实测值为(M+H)+ 427.2.UV λ＝233，311nm。
实施例343：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(苯并[c][1，2，5]噻二唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用苯并[c][1，2，5]噻二唑-5-胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C17H20N8O2S的MS实测值为(M+H)+ 400.2.UV λ＝240nm。
实施例344：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(吡啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用4-(吡啶-2-基)苯胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C22H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 420.2.UV λ＝244，314nm。
实施例345：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-吗啉代苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202551
用4-吗啉代苯胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H29N7O3的MS实测值为(M+H)+ 428.2.UV λ＝244，294nm。
实施例346：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(3-氟-4-吗啉代苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202552
用3-氟-4-吗啉代苯胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H28FN7O3的MS实测值为(M+H)+ 446.2.UV λ＝240，310nm。
实施例347：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(3-吗啉代苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202553
用3-吗啉代苯胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H29N7O3的MS实测值为(M+H)+ 428.2.UV λ＝246nm。
实施例348a：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(哌啶-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用4-(哌啶-1-基)苯胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C22H31N7O2的MS实测值为(M+H)+ 426.2.UV λ＝247，291nm。
实施例348b：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(吡咯烷-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202562
用4-(吡咯烷-1-基)苯胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H29N7O2的MS实测值为(M+H)+ 412.2.UV λ＝247，292nm。
实施例349a：(R)-4-(4-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202563
用4-(1H-咪唑-1-基)苯胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C20H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 409.2.UV λ＝247，297nm。
实施例349b：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(3-(嘧啶-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用3-(嘧啶-5-基)苯胺代替6-氨基喹啉169.2，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 421.2.UV λ＝247nm。
实施例350：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(3-(吡啶-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用3-(吡啶-4-基)苯胺代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C22H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 420.2.UV λ＝241，314nm。
实施例351：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(3-(吡啶-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202573
用3-(吡啶-3-基)苯胺代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C22H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 420.2.UV λ＝250nm。
实施例352：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(3-(吡啶-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202581
用3-(1H-咪唑-1-基)苯胺代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C20H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 409.2.UV λ＝243，284nm。
实施例353：(R)-4-(3-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用3-(1H-吡唑-1-基)苯胺代替6-氨基吲唑165.4，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C20H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 409.2.UV λ＝250nm。
实施例354：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(4-(
Figure BPA00001277505202583
唑-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用4-(
Figure BPA00001277505202585
唑-5-基)苯胺代替6-氨基苯并噻吩，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C17H17N7O3的实测为MS(M+H)+ 368.2。
实施例355：(R)-4-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氨基)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202591
用4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯胺代替6-氨基苯并噻吩，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C16H17N9O2的MS实测值为(M+H)+ 368.2。
实施例356：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(2-(吗啉代甲基)喹啉-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202592
用2-(吗啉代甲基)喹啉-6-胺代替6-氨基苯并噻吩，用实施例315中所示相同合成流程制备以上化合物。C22H26N8O3的MS实测值为(M+H)+ 451.2。
实施例357：(R)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202593
流程：
Figure BPA00001277505202601
将化合物179.6(100mg，0.31mmol)溶于5mL NMP。向其中加入MCPBA(97mg，0.37mmol)，将混合物搅拌30分钟。向其中依次加入DIEA(0.32mL，1.86mmol)、市售H-D-Leu-NH2.HCl(155mg，0.93mmol)。将混合物在120℃下搅拌3h。用反相制备型HPLC将混合物中的标题化合物分离。C19H23N9O2的MS实测值为(M+H)+ 410.3.UV λ＝251nm。
实施例358：(R)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(1-氨基-1-氧代丁-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202602
用类似于实施例357中所示化学流程制备标题化合物。C17H19N9O2的MS实测值为(M+H)+ 382.3.UV λ＝250nm。
实施例359：(R)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202603
用类似于实施例357中所示化学流程制备标题化合物。C16H17N9O2的MS实测值为(M+H)+ 368.3.UV λ＝251nm。
实施例360：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(2-氨基-2-氧代乙氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202611
用类似于实施例357中所示化学流程制备标题化合物。C15H15N9O2的实测为(M+H)+ 354.3.UV λ＝250nm。
实施例361：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202612
用类似于实施例357中所示化学流程制备标题化合物。C22H28N6O3的MS实测值为(M+H)+ 425.4.UV λ＝240，313nm。
实施例362：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202613
用标准催化氢化方法，通过在H2环境下用10％ Pd/C处理实施例261产物的甲醇溶液，由实施例361产物制备标题化合物。C22H30N6O3的MS实测值为(M+H)+ 427.4.UV λ＝244，298nm。
实施例363：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基氧基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202621
用实施例315中示范相同化学流程，用相应的市售苯胺制备标题化合物。C22H30N6O4的MS实测值为(M+H)+ 443.4.UV λ＝244，295nm。
实施例364：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基磺酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202622
用实施例315中示范相同化学流程，用相应苯胺(化合物266合成流程中所示)制备标题化合物。C22H30N6O5S的MS实测值为(M+H)+ 491.4.UV λ＝251，302nm。
实施例365：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-(吗啉代磺酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202623
实施例366：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(环丁氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202631
将苯并三唑基醚1.7(509mg，0.17mmol)、(R)-缬氨酸盐酸盐(30mg，0.26mmol)、二异丙基乙胺(89uL，0.51mmol)和5mL 1，4-二氧杂环己烷混合，加热至120℃过夜。然后将反应混合物冷却，用水稀释，经制备型HPLC纯化，得到需要的化合物。C14H22N6O2的MS实测值为(M+H)+ 307.3。
实施例367：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(4-噻吩-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202632
然后按类似方法，用4-噻吩-2-胺制备标题化合物。MS 363.3(M+H)；UV 201.6，244.3，326.1nm。
实施例368：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(4-噻吩-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202633
然后按类似方法，用4-甲基噻吩-2-胺制备标题化合物。MS 349.3(M+H)；UV 202.9，251.0，324.8nm。
实施例369：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202641
用实施例318中示范的相同化学流程制备标题化合物。C20H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 396.3.UV：λ＝216.9，244.0.
实施例370：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(2-甲基-2H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例318中示范的相同化学流程制备标题化合物。C19H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 397.4.UV：λ＝213.3，244.0，333.1.
实施例371：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202643
用实施例318中示范的相同化学流程制备标题化合物。C18H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 383.4.UV：λ＝241.6，318.8.
实施例372：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202651
用实施例318中示范的相同化学流程制备标题化合物。C19H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 397.4.UV：λ＝207.5，244.0，325.9.
实施例373：(R)-2-(-氨基-3-甲基-1氧代丁-2-基氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202652
步骤1&2与实施例100中所述相同。
步骤3：将二氯嘧啶165.3(5.09g，22.6mmol)溶于乙腈(50mL)，在冰浴中搅拌。向其中加入3，5-二甲基苯胺(2.19g，18.2mmol)，然后滴加乙基二异丙胺(DIEA，5.74mL，33.9mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤3次，真空浓缩，得到粗化合物4，为浅棕色固体2.4g(收率88％)。C15H16ClN3O2的MS实测值为(M+H)+ 306.09.
步骤4：将乙酯4(9.8mmol)溶于20mL THF。向其中加入氢氧化锂水合物(530mg，10.2mmol)和15mL水。将混合物搅拌过夜，向其中小心加入1N HCl溶液直至pH达到2。将混合物真空浓缩，除去THF。将白色固体击碎，用布氏漏斗分离。将其用水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物5(2.14g，81％)，为白色固体。C13H12ClN3O2的MS实测值为(M+H)+ 278.1.
步骤5：将羧酸5(1.09g，3.6mmol)溶于30mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(1.24g，6.4mmol)和HOBt水合物(870mg，6.4mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物冷却至0℃，然后向其中加入氨水(市售0.4M二烷的溶液，16mL，8.3mmol)。将混合物搅拌2小时。然后将其真空浓缩，溶于水和乙酸乙酯。将有机相分离，用盐水洗涤4次。然后有机相经MgSO4干燥，真空浓缩，得到化合物6，为固体(150mg，55％)。C19H17N7O2的MS实测值为(M+H)+ 376.1。
步骤6：将化合物6(188mg，0.5mmol)溶于3mL NMP。向其中加入H-D-Val-NH2 HCl(174mg，1.5mmol)和DIEA(0.200mL，1.0mmol)。将混合物在120℃浴中搅拌90分钟。然后该混合物通过制备型HPLC处理，分离到标题化合物7。C18H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 357.20。
实施例374：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(3，5-二甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202662
用3，5-二甲氧基苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C18H24N6O4的MS实测值为(M+H)+ 388。
实施例375：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(3-溴苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺.
Figure BPA00001277505202663
用3-溴苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C16H19BrN6O2的MS实测值为(M+H)+ 407。
实施例376：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(3-乙氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202671
用3-乙氧基苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C18H24N6O3的MS实测值为(M+H)+ 373
实施例377：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(3-乙基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202672
用3-乙基苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C18H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 356.3
实施例378：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(3-(三氟甲基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用3-三氟甲基苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C17H19F3N6O2的MS实测值为(M+H)+ 396.3
实施例379：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(3-氰基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202674
用3-氨基苄腈代替3，5-二甲基苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C17H19N7O2的MS实测值为(M+H)+ 353.38
实施例380：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(3-甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202681
用3-甲氧基苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C17H22N6O3的MS实测值为(M+H)+ 358.4
实施例381：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(3-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用间-甲苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C17H22N6O2的MS实测值为(M+H)+ 343
实施例382：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202683
用H-D-Ala-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C16H20N6O2的MS实测值为(M+H)+ 328.2。
实施例383：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(3，5-二甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202684
用3，5-二甲氧基苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例382中所示相同合成流程制备以上化合物。C16H20N6O4的MS实测值为(M+H)+ 360.3。
实施例384：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(3-溴苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202691
用3-溴苯胺代替3，5-二甲基，用实施例382中所示相同合成流程制备以上化合物。C14H15BrN6O4的MS实测值为(M+H)+ 360.3。
实施例385：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(3-乙基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202692
用3-乙基苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例382中所示相同合成流程制备以上化合物。C16H20N6O2的MS实测值为(M+H)+ 328.3。
实施例386：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用间甲苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例382中所示相同合成流程制备以上化合物。C15H18N6O2的MS实测值为(M+H)+ 314.34。
实施例387：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丙-2-基氨基)-4-(3-甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202701
用3-甲氧基苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例382中所示相同合成流程制备以上化合物。C15H18N6O3的MS实测值为(M+H)+ 330.34。
实施例388：(R)-2-(2-氨基-2-氧代-1-苯基乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202702
用H-D-Phe-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H22N6O2的MS实测值为(M+H)+ 328.2。
实施例389：(R)-2-(2-氨基-2-氧代-1-苯基乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202703
用H-D-Phe-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用3，5-二甲氧基苯胺代替3，5-二甲苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H22N6O4的MS实测值为(M+H)+ 423.
实施例390：(R)-2-(2-氨基-2-氧代-1-苯基乙氨基)-4-(3-甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202704
用H-D-Phe-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用3-甲氧基苯胺代替3，5-二甲苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C20H20N6O3的MS实测值为(M+H)+ 392.4.
实施例391：(R)-2-(2-氨基-2-氧代-1-苯基乙氨基)-4-(3-三氟甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202711
用H-D-Phe-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用3-三氟甲基苯胺代替3，5-二甲苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C20H17F3N6O2的MS实测值为(M+H)+ 430.39.
实施例392：(R)-2-(2-氨基-2-氧代-1-苯基乙氨基)-4-(3-溴苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202712
用H-D-Phe-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用3-溴苯胺代替3，5-二甲苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C19H17BrN6O2的MS实测值为(M+H)+ 441.29.
实施例393：(R)-2-(1-氨基-3-羟基-1-氧代-2-基氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202713
用H-D-Ser-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C16H20N6O3的MS实测值为(M+H)+ 344.37.
实施例394：(R)-2-(1-氨基-3-羟基-1-氧代-2-基氨基)-4-(3-乙基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202721
用H-D-Ser-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用3-乙基苯胺代替3，5-二甲苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C16H20N6O3的MS实测值为(M+H)+ 344.37。
实施例396：(R)-2-(1-氨基-3-羟基-1-氧代-2-基氨基)-4-(3-间甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用H-D-Ser-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用间甲苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C15H18N6O3的MS实测值为(M+H)+ 330.34。
实施例397：(R)-2-(1-氨基-3-羟基-1-氧代-2-基氨基)-4-(3-溴苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用H-D-Ser-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用3-溴苯胺代替3，5-二甲基苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C14H15BrN6O3的MS实测值为(M+H)+ 395.22。
实施例398：(R)-2-(1-氨基-3-羟基-1-氧代-2-基氨基)-4-(3-甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202731
用H-D-Ser-NH2 HCl代替H-D-Val-NH2 HCl，用3-甲氧基苯胺代替3，5-二甲苯胺，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C15H18N6O4的MS实测值为(M+H)+ 346.34。
实施例399：(R)-2-(2-氨基-2-氧代-1-间甲苯基乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202732
用(S)-2-氨基-2-间甲苯基乙酰胺代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C22H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 404.47。
实施例400：(R)-2-(2-氨基-1-(3-氯苯基)-2-氧代乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202733
用(S)-2-氨基-2-(3-氯苯基)乙酰胺代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H21ClN6O2的MS实测值为(M+H)+ 424.89。
实施例401：(R)-2-(2-氨基-1-(3-氟苯基)-2-氧代乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用(S)-2-氨基-2-(3-氟苯基)乙酰胺代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H21FN6O2的MS实测值为(M+H)+ 408.43.
实施例402：(R)-2-(2-氨基-2-氧代-1-对甲苯基乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202742
用(S)-2-氨基-对甲苯基乙酰胺代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C22H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 404.47。
实施例403：(R)-2-(2-氨基-2-氧代-3-(三氟甲基苯基)乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202743
用(S)-2-氨基-2-(3-氟甲基苯基)乙酰胺代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C22H21F3N6O2的MS实测值为(M+H)+ 404.47。
实施例404：(R)-2-(2-氨基-2-氧代-1-(吡啶-3-基)乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202751
用(S)-2-氨基-2-(吡啶-3-基)乙酰胺代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C20H21N7O2的MS实测值为(M+H)+ 391.43。
实施例405：(R)-2-(2-氨基-1-(4-甲氧基苯基)-2-氧代乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202752
用(S)-2-氨基-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C22H24N6O3的MS实测值为(M+H)+ 420.47。
实施例406：(R)-2-(2-氨基-1-(3-羟基苯基)-2-氧代乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202753
用(S)-2-氨基-2-(3-羟基苯基)乙酰胺代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H22N6O3的MS实测值为(M+H)+ 406.44。
实施例407：(R)-2-(2-氨基-1-(4-羟基苯基)-2-氧代乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202761
用(S)-2-氨基-2-(4-羟基苯基)乙酰胺代替H-D-Val-NH2 HCl，用实施例373中所示相同合成流程制备以上化合物。C21H22N6O3的MS实测值为(M+H)+ 406.44。
实施例408：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(苯并[d]噻唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202762
搅拌下，向368.1溶液(110.mg，0.347mmol)中加入mCPBA(65％，130mg，0.49mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟，随后加入DIEA(～0.3mL)和市售368.2(180mg，1.18mmol)。在120℃下，将反应物在密闭试管中加热3h。将反应物冷却，用TFA水溶液将其变为微酸性，通过反相制备型HPLC处理，得到标题化合物(28mg)。C17H19N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 386.3.UV λ＝248，294nm
实施例409：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(喹啉-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202771
按实施例408方法，使中间体369.1与346.1反应。经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C18H19N7O2的MS实测值为(M+H)+ 366.2.UV λ＝240，283nm.δ1.15(t，3H)，1.90-2.10(m，2H)，3.10-3.35(m，2H)，4.32-4.40(m，1H)，7.80-7.90(m，1H)，8.07-8.18(m，2H)，8.59(s，1H)，8.70-8.75(m，1H)，8.95-9.05(m，2H).
实施例410：(R)-2-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202772
按实施例408中所述化学流程，使中间体371.1与368.2反应。经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C17H19N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 386.4.UV λ＝243，302nm。
实施例411：(R)-2-(1-氨基-1-氧代丁-2-基氨基)-4-(苯并[d]噻唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202781
按实施例408中所述化学流程，使中间体368.1与346.1反应。经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C16H17N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 372.3.UV λ＝246，293nm
实施例412：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例417中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 396.3.UV：λ＝216.9，244.0.
实施例413：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(2-甲基-2H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202783
用实施例315中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 397.4.UV：λ＝213.3，244.0，333.1.
实施例414：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例315中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 383.4.UV：λ＝241.6，318.8.
实施例415：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202792
用实施例315中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 397.4.UV：λ＝207.5，244.0，325.9.
实施例416：2-(2-氨基乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202793
流程：
Figure BPA00001277505202794
将化合物195.1(64mg，0.17mmol)溶于3mL NMP。向其中加入市售乙二胺(41mg，0.68mmol)。将混合物在90℃下搅拌2h。用反相制备型HPLC将该混合物中的标题化合物分离。C15H20N6O的MS实测值为(M+H)+ 301.2.UV λ＝240，292nm.
实施例417：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(2-氨基乙氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202801
流程：
Figure BPA00001277505202802
将化合物179.6(50mg，0.15mmol)溶于3mL NMP。向其中加入MCPBA(49mg，0.18mmol)，将混合物搅拌30分钟。向其中加入乙二胺(36mg，0.60mmol)。将混合物在90℃下搅拌2h。用反相制备型HPLC将该混合物中的标题化合物分离。C15H17N9O的MS实测值为(M+H)+ 340.3.UV λ＝249nm。
实施例418：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(3-氨基丙基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202803
用实施例417中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H19N9O的MS实测值为(M+H)+ 354.4.UV λ＝251nm。
实施例419：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(4-氨基丁氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202811
用实施例417中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 368.4.UV λ＝252nm。
实施例420：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(2-氨基-2-甲基丙基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202812
用实施例417中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 368.4.UV λ＝249nm。
实施例421：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((4-氨基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202813
用实施例417中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H23N9O2的MS实测值为(M+H)+ 410.4.UV λ＝249nm。
实施例422：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(2-(甲基氨基)乙氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202821
用实施例417中所示相同合成流程，用市售2-氨基乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯，然后用TFA处理，使BOC基团裂解，制备标题化合物。C16H19N9O的MS实测值为(M+H)+ 354.4.UV λ＝250nm。
实施例423：4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-((1R，2S)-2-羟基环己基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(外消旋体)
Figure BPA00001277505202822
用实施例417中所示相同合成流程，用市售顺式-2-氨基-1-环己醇和DIEA制备标题外消旋化合物。C19H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 395.4.UV λ＝254nm。
实施例424：(R)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(1-氨基丙-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202823
流程：
Figure BPA00001277505202831
步骤1：将市售H-D-Ala-NH2.HCl(2.0g，16mmol)溶于60mL水和20mL二
Figure BPA00001277505202832
烷。向其中加入BzCl(2.7mL，19.3mmol)和碳酸钠(5.1g，48mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将其用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤×3，干燥，浓缩。然后将残渣溶于450mL己烷和50mL DCM，在30℃下剧烈搅拌30分钟，过滤。化合物210.1(收率＞90％)存在于固体相中，多数杂质和副产物存在于滤液中。
步骤2：将步骤1中的化合物210.1(16mmol)溶于100mL THF。在室温下，向其中加入BH3.Me2S(3.8mL，40mmol)。将混合物加热至85℃，缓慢回流5h。将其冷却至室温。向其中加入100mL水。将混合物在室温下搅拌。然后加入K2CO3(6.62g，48mmol)和BOC2O(7.00g，32mmol)。将混合物在室温下搅拌1h。将其用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤×3，干燥，浓缩，通过硅胶闪柱处理，用35％乙酸乙酯/己烷洗脱，分离到化合物210.3(1.22g，3步合计25％)，为白色固体。
步骤3：将步骤2中的化合物210.3(3.96mmol)溶于200mL乙酸乙酯。向其中加入500mg 10％ Pd/C，在H2环境下，将混合物搅拌过夜。使其通过硅藻土过滤，将硅藻土用甲醇充分冲洗。将滤液真空浓缩，得到化合物210.4，为粘稠油状物。将其溶于NMP，制备0.20M储备液。
步骤4：将化合物179.6(100mg，0.30mmol)溶于6mL NMP。向其中加入MCPBA(96mg，0.36mmol)。将混合物在室温下搅拌40分钟。向其中加入DIEA(0.21mL，1.2mmol)和化合物210.4(0.20M，3mL，0.60mmol)。将混合物在90℃下搅拌2h。将其冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用饱和Na2CO3洗涤×2，用盐水洗涤，干燥，真空浓缩。将残渣用纯TFA在室温下处理1h，然后浓缩。然后通过反相制备HPLC处理残渣，分离到标题化合物。C16H19N9O的MS实测值为(M+H)+ 354.3.UV λ＝250nm。
实施例425：(R)-2-(1-氨基丙-2-基氨基)-4-(3-(嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202841
用实施例424中所示相同合成流程，用实施例424和化合物249.4(实施例172给出)制备标题化合物。C18H20N8O的MS实测值为(M+H)+ 365.3.UV λ＝247nm。
实施例426：(R)-2-(1-氨基丙-2-基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202842
用实施例424中所示相同合成流程，用化合物187.10(实施例187给出)制备标题化合物。C15H20N6O的MS实测值为(M+H)+ 301.3.UV λ＝243，289nm。
实施例427：(R)-2-(1-氨基丙-2-基氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例424中所示相同合成流程，用化合物185.1(实施例195给出)制备标题化合物。C16H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 315.3.UV λ＝243，289nm.
实施例428：(S)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(2-氨基丙基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202851
用类似于实施例424中所述化学流程制备标题化合物。C16H19N9O的MS实测值为(M+H)+ 354.3.UV λ＝250nm。
实施例215：(S)-2-(2-氨基丙基氨基)-4-(3-(嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202852
用类似于实施例424中所述化学流程制备标题化合物。C18H20N8O的MS实测值为(M+H)+ 365.3.UV λ＝247nm。
实施例216：(R)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(1-氨基-3-甲基丁-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用类似于实施例424中所述化学流程制备标题化合物。C18H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 382.4.UV λ＝251nm。
实施例217：(R)-2-(1-氨基-3-甲基丁-2-基氨基)-4-(3-(嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202861
用类似于实施例424中所述化学流程制备标题化合物。C20H24N8O的MS实测值为(M+H)+ 393.4.UV λ＝249nm。
实施例218：(S)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(1-氨基-3-羟基丙-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202862
用类似于实施例424中所述化学流程制备标题化合物。C16H19N9O2的MS实测值为(M+H)+ 370.3.UV λ＝248nm。
实施例219：(S)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(1-氨基-3-甲氧基丙-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202863
流程：
用实施例414中所示化合物210.3的化学流程制备化合物219.1。将化合物219.1(2.0g，6mmol)溶于100mL DCM。在室温下，向其中加入质子海绵(3.2g，15mmol)。3分钟后，加入Me3O+BF4 -(2.2g，15mmol)。将混合物在室温下搅拌3天。将其用500mL乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤×2，干燥，浓缩，通过硅胶闪柱(40％乙酸乙酯/己烷)处理，得到化合物219.2(1.77g，87％)，为白色固体。
用类似于实施例424中所示化学流程，用化合物218.2制备标题化合物。C17H21N9O2的MS实测值为(M+H)+ 384.3.UV λ＝249nm。
实施例220：(S)-2-(1-氨基-3-甲氧基丙-2-基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202871
用类似于实施例219中所示化学流程制备标题化合物。C16H22N6O2的MS实测值为(M+H)+ 331.3.UV λ＝240，289nm。
实施例221：(R)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)-2-(1-氨基-4-甲基戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202872
用类似于实施例424中所示化学流程制备标题化合物。C19H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 396.4.UV λ＝250nm。
实施例428：(R)-4-(3-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)-2-(1-氨基-4-甲基戊-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用类似于实施例424中所示化学流程制备标题化合物。C20H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 395.4.UV λ＝247nm。
实施例429：(R)-2-(1-氨基-4-甲基戊-2-基氨基)-4-(3-(嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202882
用类似于实施例424中所示化学流程制备标题化合物。C21H26N8O的MS实测值为(M+H)+ 405.4.UV λ＝247nm。
实施例431：(R)-2-(1-氨基-4-甲基戊-2-基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202883
用类似于实施例424中所示化学流程制备标题化合物。C18H26N6O的MS实测值为(M+H)+ 343.4.UV λ＝244，288nm。
实施例432：(R)-2-(1-氨基-4-甲基戊-2-基氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用类似于实施例424中所示化学流程制备标题化合物。C19H28N6O的MS实测值为(M+H)+ 357.4.UV λ＝241，290nm。
实施例433：2-(4-氨基丁氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202892
向1，4-二氨基丁烷(0.48g，5.5mmol)的DMF(5mL)溶液中滴加化合物2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基氧基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.53g，1.47mmol)的DMF(5mL)溶液。然后将其在室温下搅拌20h。将其真空浓缩。残渣经HPLC纯化，得到标题化合物，为三氟乙酸盐(0.55g)。MS 315.2(M+H)；UV 249.7.
实施例434：(S)-2-(2-氨基-3-环丙基丙基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202893
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 380.4.UV：λ＝219.8，241.1，330.3.
实施例435：(S)-2-(2-氨基丁氨基)-4-(1-乙基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202901
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 368.4.UV：λ＝219.2，240.4，331.9.
实施例436：(S)-2-(2-氨基-2-环丙基乙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H23N7O的MS实测值为(M+H)+ 366.4.UV：λ＝220.2，241.4，330.6.NMR(CD3OD)：δ8.27(s，1H)，8.08(s，1H)，7.85(d，J＝2.4Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.06-7.00(m，3H)，6.80(m，1H)，6.12(m，1H)，4.18(m，1H)，2.67(m，2H)，1.19(m，3H)，0.97(m，1H)，0.42-0.31(m，6H)ppm。
实施例437：(S)-2-(2-氨基丁氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202903
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H23N7O的MS实测值为(M+H)+ 354.4.UV：λ＝219.2，240.4，333.1.
实施例438：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙基氨基)-4-(1-乙基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202911
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 398.4.UV：λ＝219.3，239.4，326.7.
实施例439：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙基氨基)-4-(1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H21N7O2的MS实测值为(M+H)+ 356.4.UV：λ＝216.7，238.7，327.2.
实施例440：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202913
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 370.4.UV：λ＝219.2，239.3，331.9.
实施例441：(R)-2-(2-氨基-3-甲基丁氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202921
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 368.4.UV：λ＝220.4，325.9.
实施例442：2-((2R，3R)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(1-乙基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202922
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 398.4.UV：λ＝220.4，239.9，331.6.
实施例443：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202923
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 384.3.UV：λ＝219.2，239.3，331.9.
实施例444：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202931
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 370.3.UV：λ＝215.7，238.1，327.1.
实施例445：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(2-甲基-2H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202932
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 371.3.UV：λ＝214.9，241.7，324.1.
实施例446：(R)-2-(2-氨基-4-甲氧基丙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 384.3.UV：λ＝219.2，240.4，331.9.
实施例447：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(2，3-二氢-1H-吡咯并[1，2-a]吲哚-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202941
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 396.4.UV：λ＝203.9，244.0，303.3.
实施例448：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(2-甲基-2H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 385.4.UV：λ＝208.6，240.4，283.1，324.7.
实施例449：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(2，3-二氢-1H-吡咯并[1，2-a]吲哚-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202943
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 410.4.UV：λ＝221.6，336.7.
实施例450：(S)-2-(2-氨基-4-甲氧基丙氨基)-4-(2，3-二氢-1H-吡咯并[1，2-a]吲哚-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202951
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 410.4.UV：λ＝222.8，336.7.
实施例451：2-((2R，3R)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(2，3-二氢-1H-吡咯并[1，2-a]吲哚-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202952
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 410.4.UV：λ＝221.6，335.5.
实施例452：(S)-2-(2-氨基-3，3-二甲基丁氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202953
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 382.4.UV：λ＝219.2，239.3，327.1.
实施例453：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-(3-氟苯氨基甲酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(41)
步骤1：将二氯嘧啶酯41.1(3.44g，15.5mmol)溶于乙腈(20mL)，在冰浴中搅拌。用加料漏斗，向其中滴加苯胺41.2(3.0g，14.1mmol)和乙基二异丙胺(DIEA，3.85mL，35.5mmol)的10mL乙腈溶液。将混合物搅拌1小时，将溶剂蒸发，然后用水稀释，得到沉淀化合物41.3，为黄色固体(4.2g，75％)。MS：(M+H)+ 416.09
步骤2：将乙酯41.3(2g，5mmol)溶于10mL TH。向其中加入氢氧化锂水合物(275mg，6.5mmol)和10mL水。将混合物搅拌1小时，向其中小心加入1N HCl溶液直至pH达到3。将混合物真空浓缩，除去THF。将白色固体击碎，用布氏漏斗分离。将其用水洗涤，在真空箱中干燥，得到化合物41.4(1.65g，89％)，为白色固体。MS：(M+H)+ 388.06
步骤3：将羧酸41.4(1g，2.7mmol)溶于15mL DMF。向其中加入EDC盐酸盐(934mg，4.86mmol)和HOBt水合物(660mg，4.86mmol)。将混合物在室温下搅拌90分钟。然后在0℃下，向其中加入氨水(市售0.5N二
Figure BPA00001277505202962
烷的溶液，14mL，6.75mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。向反应混合物中加入水，得到化合物41.5，为白色固体(1.26g，86％)。MS：(M+H)+ 485.14.
步骤4：将苯并三唑基醚41.5(500mg，1mmol)溶于15mL CAN。向其中加入(S)-1-氨基丙-2-基-氨基甲酸叔丁酯(373mg，2.1mmol)。将混合物在50℃下搅拌过夜。冷却后，加入水，搅拌1h，得到化合物41.6，为白色固体(0.541g，92％)。C26H30FN7O4的MS实测值为(M+H)+ 524.24。
步骤5：在室温下，将化合物41.6(100mg，0.2mmol)在1∶1的TFA和二氯甲烷的混合物(5mL)中搅拌15分钟。将其真空浓缩，然后加入异丙醚，得到41号化合物，为白色固体(50mg，59％)。C21H22FN7O2的MS实测值为(M+H)+ 424.19。
实施例454：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-(4-氯苯氨基甲酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(57)
Figure BPA00001277505202971
用3-氨基-N-(4-氯苯基)苯甲酰胺代替3-氨基-N-(3-氟苯基)苯甲酰胺，用实施例453中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H22ClN7O2的MS实测值为(M+H)+ 440.
实施例455：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-(异唑-3-基氨基甲酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202973
用3-氨基-N-(异唑-3-基)苯甲酰胺代替3-氨基-N-(3-氟苯基)苯甲酰胺，用实施例453中所示相同合成流程制备标题化合物C18H20N8O3的MS实测值为(M+H)+ 396。
实施例456：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-(苯氨基甲酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用3-氨基-N-苯基苯甲酰胺代替3-氨基-N-(3-氟苯基)苯甲酰胺，用实施例453中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H23N7O3的MS实测值为(M+H)+ 406。
实施例457：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(4-氨基甲酰基-3-甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(121)
Figure BPA00001277505202981
用4-氨基-2-甲氧基苯甲酰胺代替3-氨基-N-(3-氟苯基)苯甲酰胺，用实施例453中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H21N7O3的MS实测值为(M+H)+ 360
实施例458：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-(5-甲基噻唑-2-基氨基甲酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(123)
Figure BPA00001277505202982
用3-氨基-N-(5-甲基噻唑-2-基)苯甲酰胺代替3-氨基-N-(3-氟苯基)苯甲酰胺，用实施例453中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H22N8O2S的MS实测值为(M+H)+ 427
实施例459：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-((5-氯噻唑-2-基甲基氨基甲酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺(125)
Figure BPA00001277505202983
用3-氨基-N-((5-氯噻唑-2-基)甲基)苯甲酰胺代替3-氨基-N-(3-氟苯基)苯甲酰胺，用实施例453中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H21ClN8O2S的MS实测值为(M+H)+ 447
实施例460：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-(甲氧基苯氨基甲酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202991
用3-氨基-N-(4-甲氧基苯基)苯甲酰胺代替3-氨基-N-(3-氟苯基)苯甲酰胺，用实施例453中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H25N7O3的MS实测值为(M+H)+ 436
实施例461：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-(3-氯苯氨基甲酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202992
用3-氨基-N-(3-氯苯基)苯甲酰胺代替3-氨基-N-(3-氟苯基)苯甲酰胺，用实施例453中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H22ClN7O2的MS实测值为(M+H)+ 440
实施例462：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-(4-氟苯氨基甲酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505202993
用3-氨基-N-(4-氟苯基)苯甲酰胺代替3-氨基-N-(3-氟苯基)苯甲酰胺，用实施例453中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H22FN7O2的MS实测值为(M+H)+ 424
实施例463：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203001
用3-氨基-N-(苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺代替3-氨基-N-(3-氟苯基)苯甲酰胺，用实施例453中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H22N8O2S的MS实测值为(M+H)+ 463
用实施例453中所示相同合成流程制备编号140、141、144、156、163、164、166、172、173、176、177、180、191194、200、201、213、215、218、221、222、228、233、237、238和239化合物。
实施例464：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(4-甲基-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203002
按类似于实施例87中81的方法制备该化合物。但用4-甲基-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)衍生物代替4-(噻唑-4-基)衍生物81.1。另用N-((S)-2-氨基-1-甲基乙基)氨基酸叔丁酯333.2[CAS 146552-71-8]代替(1S，2R)-2-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯81.2。C17H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 368.4.UV λ＝242nm。
实施例465：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(5-甲基-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203011
按类似于实施例464中333的方法制备该化合物。但用5-甲基-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)衍生物334.1代替4-甲基-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)衍生物333.1。C17H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 368.3.UV λ＝246nm
实施例466：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203012
按流程464，用335.3作原料苯胺制备标题化合物。C17H18F3N9O的MS实测值为(M+H)+ 422.3.UV λ＝260nm
实施例467：(R)-2-(1-氨基丁-2-基氨基)-4-(3-甲基苯基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203021
将市售(R)-(-)-2-丁酰胺盐酸盐(346.1；2.41g，17.4mmol)[CAS 103765-03-3]溶于含Na2CO3(5.53g，52.2mmol)的水/二
Figure BPA00001277505203022
烷(60mL/20mL)。搅拌下，向该溶液中加入氯甲酸苄酯(2.81mL，20.9mmol)[CAS 501-53-1]。将反应物在室温下搅拌96h。将反应混合物用EtOAc(400mL)和水(100mL)稀释。将各液层分离，将有机层再用水(2x150mL)和盐水(2x150mL)洗涤。将EtOAc层干燥(MgSO4)和浓缩。将得到的白色固体用360mL己烷/50mL CH2Cl2研磨1h。将固体过滤，用己烷洗涤，干燥，得到346.2(3.46g)。
搅拌下，向346.2(3.46g，14.7mmol)的无水THF(100mL)溶液中滴加BH3·Me2S(3.45mL，36.6mmol)。在氩环境下，将溶液在85℃下搅拌18h。将反应混合物冷却，缓慢加入冰-冷水(100mL)。将得到的溶液搅拌1h。然后，依次加入K2CO3(6.08g，44.1mmol)、Boc酐(6.40g，29.4mmol)。将反应物搅拌18h，然后用EtOAc稀释。将有机层用5％ K2CO3、5％ NaHCO3、水和盐水洗涤。然后经MgSO4干燥，浓缩，得到346.3。
将粗346.3溶于～50mL EtOAc，加入催化量的10％ Pd/C。向该悬浮液中充入氢气，搅拌过夜。使混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩，得到346.4。
按实施例13中所述化学流程使中间体346.4与344.1反应。脱去Boc-保护后，经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C16H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 315.4.UV λ＝238，284nm。
实施例468：(R)-2-(1-氨基丁-2-基氨基)-4-(3，5-二甲基苯基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203031
按实施例13中所述化学流程使中间体346.4与345.1反应。脱去Boc保护，经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C17H24N6O的MS实测值为(M+H)+ 329.5.UV λ＝240，290nm.δ1.05(t，3H)，1.70-1.80(m，2H)，2.38(s，6H)，3.15-3.35(m，2H)，4.16-4.23(m，1H)，6.90(s，1H)，7.19-7.25(m，2H)，8.50(s，1H)
实施例469：(R)-2-(1-氨基丁-2-基氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203032
按实施例424中所述化学流程，使中间体346.4与343.5反应。脱去Boc保护后，经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C17H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 368.4.UV λ＝248nm.δ1.05(t，3H)，1.70-1.80(m，2H)，3.10-3.35(m，2H)，4.55-4.61(m，1H)，7.35(d，1H)，7.55(t，1H)，7.92(d，1H)，8.00(s，2H)，8.58(s，1H)，9.00(s，1H)
实施例470：(R)-2-(1-氨基丁-2-基氨基)-4-(3-(嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203033
Figure BPA00001277505203041
按实施例424中所述化学流程，使中间体346.4与349.1反应。脱去Boc保护后，经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C19H22N8O的MS实测值为(M+H)+ 379.5.UV λ＝248nm.δ1.05(t，3H)，1.70-1.80(m，2H)，3.10-3.35(m，2H)，4.48-4.55(m，1H)，7.41(t，1H)，7.55-7.60(m，2H)，8.25-8.35(m，1H)，8.55(s，1H)，8.89(d，2H)，9.00(s，1H)
实施例471：2-((R)-1-氨基丁-2-基氨基)-4-(3-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203042
按实施例424中所述化学流程，使中间体346.4与350.1反应。脱去Boc保护后，经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C18H22N8O的MS实测值为(M+H)+ 367.4.UV λ＝246nm.δ1.05(t，3H)，1.70-1.80(m，2H)，3.10-3.35(m，2H)，4.48-4.55(m，1H)，6.58(br s，1H)，7.30(d，1H)，7.50-7.62(m，2H)，7.80(br s，1H)，8.32(br s，1H)，8.55(s，1H)，8.68(br s，1H)
实施例472：(R)-2-(1-氨基-3-环丙基丙-2-基氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203051
按实施例424中所述化学流程，使中间体354.5与343.5反应。脱去Cbz保护后，经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV λ＝250nm。
实施例473：(R)-2-(1-氨基-3-环丙基乙氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203052
按类似于实施例424的方法制备标题化合物。C18H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 380.4.UV λ＝250nm.δ0.50-0.85(m，4H)，1.15-1.25(m，1H)，3.10-3.35(m，2H)，3.90-4.00(m，1H)，7.30-7.36(m，1H)，7.60(t，1H)，7.93-8.00(m，1H)，8.05(s，2H)，8.56(s，1H)，8.90(br s，1H).
实施例474：2-((1-氨基环丙基甲基)氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
按类似于实施例424的方法制备标题化合物。C17H19N9O的MS实测值为(M+H)+ 366.4.UV λ＝248nm。
实施例475：2-((1-氨基环丙基甲基)氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
按类似于实施例424的方法制备标题化合物。C18H21N7O的MS实测值为(M+H)+ 352.4.UV λ＝217，239，331nm。
实施例476：2-((1-氨基环丙基甲基)氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203063
按类似于实施例424的方法制备标题化合物。C17H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 327.4.UV λ＝241，290nm。
实施例478：2-(1-氨基-4，4，4-三氟丁-2-基氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203064
Figure BPA00001277505203071
按实施例424中所述化学流程，使中间体360.6与343.5反应。脱去Boc保护后，经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C17H18F3N9O的MS实测值为(M+H)+ 422.4.UV λ＝245nm.2.70-2.80(m，2H)，4.25-4.35(m，1H)，7.35-7.41(m，1H)，7.49-7.55(m，1H)，7.88-7.94(m，1H)，7.98(s，2H)，8.59(s，1H)，8.86(br s，1H).
实施例479：2-((1-甲基氨基环丙基甲基)氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203072
按实施例408中所述化学流程，使中间体345.1与1-(氨基甲基)-N-甲基环丙胺反应。经反相制备型HPLC纯化，得到标题化合物。C18H24N6O的MS实测值为(M+H)+ 341.5.UV λ＝240nm。
实施例480：(S)-2-(2-氨基-3-环丙基丙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203073
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 380.4.UV：λ＝219.8，241.1，330.3.
实施例481：(S)-2-(2-氨基丁氨基)-4-(1-乙基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203081
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 368.4.UV：λ＝219.2，240.4，331.9.
实施例482：(S)-2-(2-氨基-2-环丙基乙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203082
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H23N7O的MS实测值为(M+H)+ 366.4.UV：λ＝220.2，241.4，330.6.
实施例483：(S)-2-(2-氨基丁氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H23N7O的MS实测值为(M+H)+ 354.4.UV：λ＝219.2，240.4，333.1.
实施例484：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(1-乙基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203091
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 398.4.UV：λ＝219.3，239.4，326.7.
实施例485：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203092
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H21N7O2的MS实测值为(M+H)+ 356.4.UV：λ＝216.7，238.7，327.2.
实施例486：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203093
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 370.4.UV：λ＝219.2，239.3，331.9.
实施例487：(R)-2-(2-氨基-3-甲基丁氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203101
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O的MS实测值为(M+H)+ 368.4.UV：λ＝220.4，325.9.
实施例488：2-((2R，3R)-2--氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(1-乙基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203102
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 398.4.UV：λ＝220.4，239.9，331.6.
实施例489：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203103
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 384.3.UV：λ＝219.2，239.3，331.9.
实施例490：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203111
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 370.3.UV：λ＝215.7，238.1，327.1.
实施例491：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(2-甲基-2H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203112
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 371.3.UV：λ＝214.9，241.7，324.1.
实施例492：(R)-2-(2-氨基-4-甲氧基丙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203113
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 384.3.UV：λ＝219.2，240.4，331.9.
实施例493：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(2，3-二氢-1H-吡咯并[1，2-a]吲哚-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203121
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 396.4.UV：λ＝203.9，244.0，303.3.
实施例494：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(2-甲基-2H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203122
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 385.4.UV：λ＝208.6，240.4，283.1，324.7.
实施例495：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(2，3-二氢-1H-吡咯并[1，2-a]吲哚-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203123
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H27N7O2的MS实测值的(M+H)+ 410.4.UV：λ＝221.6，336.7.
实施例496：(S)-2-(2-氨基-4-甲氧基丙氨基)-4-(2，3-二氢-1H-吡咯并[1，2-a]吲哚-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203131
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 410.4.UV：λ＝222.8，336.7.
实施例497：2-((2R，3R)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(2，3-二氢-1H-吡咯并[1，2-a]吲哚-8-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203132
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 410.4.UV：λ＝221.6，335.5.
实施例498：(S)-2-(2-氨基-3，3-二甲基丁氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203133
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H27N7O的MS实测值的(M+H)+ 382.4.UV：λ＝219.2，239.3，327.1.
实施例499：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(6-氨基甲酰基(carbomoyl)萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203141
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H23N7O3的MS实测值为(M+H)+ 410.2.UV：λ＝224.9，316.2.
实施例500：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(1，2-二甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203142
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 384.4.UV：λ＝223.9.
实施例501：2-((2R，3R)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(2-甲基-2H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203143
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 385.3.UV：λ＝203.9，241.6.
实施例502：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(2-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203151
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 370.4.UV：λ＝220.4，333.1.
实施例503：(S)-2-(2-氨基-4-甲氧基丁氨基)-4-(2-甲基-2H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203152
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 385.4.UV：λ＝209.8，240.4，283.1，325.9.
实施例504：(S)-2-(2-氨基-3-环丙基丙氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203153
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H24N6O的MS实测值为(M+H)+ 341.4.UV：λ＝241.7，285.9.
实施例505：2-((2R，3R)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203161
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 370.4.UV：λ＝216.7，238.1，324.8.
实施例506：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203162
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H22N6O2的MS实测值为(M+H)+ 367.2.UV：λ＝213.3，239.3，305.6.
实施例507：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(2-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203163
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 384.4.UV：λ＝220.4，240.4.
实施例508：(R)-2-(2-氨基-3-苯氧基丙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C23H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 432.4.UV：λ＝218.6，242.3.
实施例509：(S)-2-(2-氨基-4-甲基戊基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203172
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H27N7O的MS实测值为(M+H)+ 382.4.UV：λ＝219.8，241.7.
实施例510：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203173
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 345.4.UV：λ＝240.3，290.0.
实施例511：2-((2R，3R)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203181
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N7O2的MS实测值为(M+H)+ 384.4.UV：λ＝218.0
实施例512：(R)-2-(2-氨基-3-苯氧基丙氨基)-4-(2-甲基-2H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203182
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H25N8O2的MS实测值为(M+H)+ 433.4.UV：λ＝211.3，242.3，330.9.
实施例513：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(联苯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203183
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 393.4.UV：λ＝202.8，246.3.
实施例514：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(6-甲氧基萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203191
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H24N6O3的MS实测值为(M+H)+ 397.0.UV：λ＝221.6，315.2.
实施例515：(R)-2-(2-氨基-3-苯氧基丙氨基)-4-(联苯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203192
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C26H26N6O2的MS实测值为(M+H)+ 455.4.UV：λ＝203.4，246.6.
实施例516：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(6-(甲基氨基甲酰基萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203193
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H25N7O3的MS实测值为(M+H)+ 424.4.UV：λ＝222.8，316.4.
实施例517：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203201
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 371.5.UV：λ＝208.8，241.7，316.7.
实施例518：(S)-2-(2-氨基丁氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203202
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O的MS实测值为(M+H)+ 329.5.UV：λ＝240.5，288.4.
实施例519：(S)-2-(2-氨基丁氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203203
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 315.4.UV：λ＝241.1，286.5.
实施例520：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203211
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H20N8O2的MS实测值为(M+H)+ 357.3.UV：λ＝206.3，240.4，311.6.
实施例521：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3，5-二甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203212
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O4的MS实测值为(M+H)+ 377.3.UV：λ＝203.8，235.5，290.0.
实施例522：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(6-(吗啉-4-羰基)萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203213
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C24H29N7O4的MS实测值为(M+H)+ 480.4.UV：λ＝218.0，311.6.
实施例523：2-氨基-3-(5-氨基甲酰基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-2-基氨基)丙酸
Figure BPA00001277505203221
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C15H18N6O3的MS实测值为(M+H)+ 331.1.UV：λ＝239.3，289.0.
实施例524：(S)-2-(2-氨基-3-环丙基丙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203222
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H26N6O的MS实测值为(M+H)+ 355.5.UV：λ＝241.1，287.7.
实施例525：(S)-2-(2-氨基-3-甲基丁氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203223
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O的MS实测值为(M+H)+ 329.4.UV：λ＝241.7，285.9.
实施例526：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(萘-1-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H22N6O2的MS实测值为(M+H)+ 367.4.UV：λ＝219.2，282.8.
实施例527：(S)-2-(2-氨基-2-环丙基乙氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H22N6O的MS实测值为(M+H)+ 327.4.UV：λ＝241.7，286.5.
实施例528：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(6-(二甲基氨基甲酰基)萘-2-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203232
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H27N7O3的MS实测值为(M+H)+ 438.2.UV：λ＝216.9，309.2.
实施例529：2-((2R，3R)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 345.4.UV：λ＝240.4，284.2.
实施例530：(S)-2-(2-氨基-2-环丙基乙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H24N6O经的MS实测值为(M+H)+ 341.4.UV：λ＝241.4，287.7.
实施例531：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-(吡啶-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203242
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H23N7O2的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV：λ＝242.8.
实施例532：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-(噻唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203243
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H21N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 400.2.UV：λ＝240.4，290.2.
实施例533：(S)-2-(2-氨基-3-环丙基丙氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203251
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H23N9O的MS实测值为(M+H)+ 394.4.UV：λ＝204.6，251.5.
实施例534：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3，4-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203252
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 345.5.UV：λ＝239.3，291.4.
实施例535：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-(异唑-3-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203254
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H21N7O3的MS实测值为(M+H)+ 384.3.UV：λ＝242.3，285.4.
实施例536：(S)-3-氨基-4-(5-氨基甲酰基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-2-基氨基)丁酸
Figure BPA00001277505203261
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H20N6O3的MS实测值为(M+H)+ 345.1.UV：λ＝239.3，285.4.
实施例537：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203262
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 371.3.UV：λ＝202.8，238.1，308.0.
实施例538：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 385.3.UV：λ＝208.6，240.4，319.9.
实施例539：(R)-2-(2-氨基丁氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203271
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 368.4.UV：λ＝203.9，249.9.
实施例540：(S)-2-(2-氨基-4-甲氧基丁氨基)-4-(联苯-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203272
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H26N6O2的MS实测值为(M+H)+ 407.4.UV：λ＝202.1，246.0.
实施例541：(S)-2-(2-氨基-3，3-二甲基丁氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203273
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H26N6O的MS实测值为(M+H)+ 343.4.UV：λ＝240.5.
实施例542：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203281
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H21N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 374.4.UV：λ＝238.7，295.1.
实施例543：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(4-氯-3-甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203282
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H21lN6O2的MS实测值为(M+H)+ 365.2，367.1(Cl形式).UV：λ＝215.7，240.4，289.0.
实施例544：(R)-2-(2-氨基-3-乙氧基丙氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203283
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 345.6.UV：λ＝238.1，284.2.
实施例545：(R)-2-(2-氨基-3-异丙氧基丙氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203291
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H26N6O2的MS实测值为(M+H)+ 359.8.UV：λ＝241.6，286.6.
实施例546：(S)-2-(2-氨基-3-甲基丁氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O的MS实测值为(M+H)+ 343.5.UV：λ＝239.9，284.7.
实施例547：2-((2R，3R)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203293
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 371.4.UV：λ＝238.1，299.7.
实施例548：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-甲氧基苯基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H22N6O3的MS实测值为(M+H)+ 347.2.UV：λ＝239.7.
实施例549：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-乙基苯基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203302
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O2的和MS实测值为(M+H)+ 345.2.UV：λ＝239.3，286.6.
实施例550：(S)-2-(2-氨基-4-(氟苯基)丙氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203303
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C23H24FN7O的MS实测值为(M+H)+ 434.5.UV：λ＝215.5，241.7，330.9.
实施例551：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203311
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H21N9O2的MS实测值为(M+H)+ 384.3.UV：λ＝249.9.
实施例552：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-(1H-吡唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203312
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 383.3.UV：λ＝247.2.
实施例553：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-(嘧啶-5-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203313
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 395.3.UV：λ＝243.6.
实施例554：(R)-2-(2-氨基-3-羟基丙氨基)-4-(间-甲苯基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203321
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C15H20N6O2的MS实测值为(M+H)+ 317.2.UV：λ＝238.1，286.6.
实施例555：(R)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)-2-(哌啶-3-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203322
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H23N7O的MS实测值为(M+H)+366.4.UV：λ＝218.0，241.6，335.5.
实施例556：(R)-2-(2-氨基-3-羟基-3-甲基丁氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203323
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 345.2.UV：λ＝239.3.
实施例557：(S)-2-(2-氨基-4-甲氧基丁氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203331
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 345.4.UV：λ＝240.5，286.5.
实施例558：4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)-2-(2-(甲基氨基)乙氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203332
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H21N7O的MS实测值为(M+H)+ 340.4.UV：λ＝220.4，239.3.
实施例559：2-((2R，3S)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(间-甲苯基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203333
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 345.2.UV：λ＝239.3，285.4.
实施例560：2-((2R，3S)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(3-甲氧基苯基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203341
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O3的MS实测值为(M+H)+ 361.2.UV：λ＝239.3.
实施例561：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-(1H-咪唑-1-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203342
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H22N8O2的MS实测值为(M+H)+ 383.5.UV：λ＝238.1，281.9.
实施例562：(R)-2-(1-氨基-4-甲基-1-硫代戊-2-基氨基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例318中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H25N7OS的MS实测值为(M+H)+ 412.4.UV：λ＝250.3.
实施例563：2-((2R，3R)-2-氨基-3-甲氧基丁氨基)-4-(1-甲基-1H-吲唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203351
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H24N8O2的MS实测值为(M+H)+ 385.3.UV：λ＝208.6，240.4，311.6.
实施例564：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(4-甲氧基-3-甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203352
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O3的MS实测值为(M+H)+ 361.2.UV：λ＝238.1，292.6.
实施例565：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(苯并[d]噻唑-7-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203353
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H19N7O2S的MS实测值(M+H)+ 374.3.UV：λ＝232.6，287.8.
实施例566：(S)-2-(2-氨基-4-甲基戊基氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203361
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H28N6O的MS实测值(M+H)+ 357.4.UV：λ＝239.3，287.8.
实施例567：(S)-2-(2-氨基-2-环丙基乙氨基)-4-(3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203362
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H21N9O的MS实测值为(M+H)+ 380.4.UV：λ＝204.6，250.9.
实施例568：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(4-氟-3-甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203363
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H21FN6O2的MS实测值为(M+H)+ 349.0.UV：λ＝211.0，239.3.
实施例569：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-三氟甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203371
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H19F3N6O2的MS实测值为(M+H)+ 385.2.UV：λ＝242.8.
实施例570：2-氨基-3-(5-氨基甲酰基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-2-基氨基)丙酸甲酯
Figure BPA00001277505203372
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H20N6O3的MS实测值为(M+H)+ 345.1.UV：λ＝238.1，290.2.
实施例580：(R)-2-(2-氨基-3-苯氧基丙氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203373
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C21H24N6O2的MS实测值为(M+H)+...UV：λ＝213.3，239.3.
实施例581：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(苯并[d]噻唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203381
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H19N7O2S的MS实测值为(M+H)+ 374.3.UV：λ＝243.6，292.1.
实施例582：(S)-2-(2-氨基-4-甲基戊基氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203382
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H26N6O的MS实测值为(M+H)+ 343.4.UV：λ＝239.3，285.4.
实施例583：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3，4-二甲氧基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203383
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O4的MS实测值为(M+H)+ 377.1.UV：λ＝235.7，285.4.
实施例584：(S)-2-(2-氨基-3-(噻唑-4-基)丙氨基)-4-(间-甲苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203391
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H21N7OS的MS实测值为(M+H)+ 384.1.UV：λ＝240.4，287.8.
实施例585：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(苯并[c][1，2，5]噻二唑-4-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203392
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C15H18N8O2S的MS实测值为(M+H)+ 375.2.UV：λ＝235.7，315.2.
实施例586：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(4-(嘧啶-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H22N8O2的实测(M+H)+ 395.4.UV：λ＝230.1，311.2.
实施例587：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(喹喔啉-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203401
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H20N8O2的MS实测值为(M+H)+ 369.2.UV：λ＝245.4.
实施例588：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(4-(二甲基氨基)-3-甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203402
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H27N7O2的MS实测值为(M+H)+ 374.3.
实施例589：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203403
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C18H26N6O4的MS实测值为(M+H)+ 391.4.UV：λ＝202.8，239.9，282.2.
实施例590：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(3-甲基-4-吗啉代苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203411
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C20H29N7O3的MS实测值为(M+H)+ 416.2.UV：λ＝238.1，293.8.
实施例591：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧芑-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203412
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H22N6O4的MS实测值为(M+H)+ 375.3.UV：λ＝239.3，292.7.
实施例592：(S)-2-(2-氨基-3，3-二甲基丁氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203413
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H28N6O的MS实测值为(M+H)+ 357.4.UV：λ＝240.4.
实施例593：(S)-2-(2-氨基-4-(氟苯基)丙氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203421
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C22H25FN6O的MS实测值为(M+H)+ 409.4.UV：λ＝241.7，288.4.
实施例594：(R)-2-(2-氨基-3-甲氧基丙氨基)-4-(苯并[d]异唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203423
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C16H19N7O3的MS实测值为(M+H)+ 358.3.UV：λ＝203.9，235.7，292.6.
实施例595：(R)-2-(2-氨基-3-羟基-3-甲基丁氨基)-4-(3，5-二甲基苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203424
用实施例596中所示相同合成流程制备标题化合物。C17H24N6O2的MS实测值为(M+H)+ 359.2.UV：λ＝239.3.
实施例596
合成243.2：在0℃下，向NaH(6g，0.25mol)的THF(220mL)悬浮液中滴加MeOH(18mL)，然后将混合物在环境温度下搅拌1h，得到的溶液用于后续步骤。
向N-BocL-丝氨酸243.1(6g，0.029mol)的THF(300mL)溶液中加入120mL以上溶液和MeI(3mL)。在环境温度下搅拌1h后，加入剩余的以上溶液，然后再加入MeI(6mL)，将混合物再搅拌18h。然后将混合物真空浓缩，除去THF，将残渣溶于水；将水溶液用乙醚洗涤，用柠檬酸酸化至pH 2。将酸化的水溶液用EtOAc萃取(3×)，将EtOAc层合并，用稀Na2S2O3、盐水洗涤，干燥，浓缩，得到243.2和回收的243.1的混合物。将残渣溶于H2O(100mL)，用DCM萃取(3×)。将DCM层合并，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到243.2，为浅黄色油状物(3.2g)。
合成243.3：在-15℃下，向243.2(3.2g，14.60mmol)的THF(20mL)溶液中加入N-甲基吗啉(1.60mL，14.60mmol)和氯甲酸异丁酯(1.91mL，14.60mmol)。在-15℃下搅拌5分钟后，将混合物缓慢加入硼氢化钠(1.66g，43.8mmol)的水(7mL)溶液(放出气体)。将混合物在-15℃下持续搅拌10分钟，用EtOAc稀释，将有机相用水，饱和NaHCO3、盐水洗涤，干燥，浓缩，得到粗残余物，经柱(Hex/EtOAc＝2∶1-2∶3)纯化，得到243.3(2.1g，70％)。
合成243.4：在0℃下，向243.3(2.1g，10.24mmol)的DCM(30mL)溶液中加入三乙胺(2.15mL，15.36mmol)和甲磺酰氯(1.19mL，15.36mmol)。在0℃下搅拌30分钟后，将其用DCM稀释，将有机相用水、饱和NaHCO3、盐水洗涤，干燥，浓缩，得到粗甲磺酸酯。
向以上粗甲磺酸酯的DMF溶液(20mL)中加入NaN3(1.95g，30.72mmol)和TBAI(37mg，0.124mmol)。在75℃下加热2h后，将其用EtOAc稀释，将有机相用水、盐水洗涤，干燥，浓缩，得到粗叠氮化物(1.7g)。
向以上粗叠氮化物(1.7g)的EtOAc(16mL)溶液中加入Pd/C(400mg)，充入H2(1大气压)。在环境温度下搅拌15h后，将Pd/C滤除，将滤液浓缩，得到243.4(1.5g)。
合成243：向含243.5的固体样品(0.76g，2.1mmol)的密闭试管中加入243.4(0.75g，3.68mmol)的AcCN(8.5mL)溶液。在65℃下加热5h后，将混合物冷却，加入水(40mL)。过滤，收集沉淀，得到偶合产物(0.85g)。
向以上偶合产物(0.85g)的DCM(6mL)悬浮液中加入TFA(2mL)。在环境温度下搅拌15分钟后，将混合物浓缩，残渣经制备型HPLC纯化，得到F(0.99g)，为TFA盐。
实施例597
Figure BPA00001277505203441
合成243.2：在0℃下向NaH(6g，0.25mol)的THF(220mL)悬浮液中滴加MeOH(18mL)，然后将混合物在环境温度下搅拌1h，得到的溶液用于后续步骤。
向N-Boc L-丝氨酸243.1(6g，0.029mol)的THF(300mL)溶液中加入120mL以上溶液和MeI(3mL)。在环境温度下搅拌1h后，加入剩余的以上溶液，然后再搅拌18h。然后将混合物真空浓缩，除去THF，将残渣溶于水；将水溶液用乙醚洗涤，柠檬酸酸化至pH 2。用EtOAc将酸化水溶液萃取(3×)。将EtOAc层合并，用稀Na2S2O3稀释、盐水洗涤，干燥，浓缩，得到243.2和回收的243.1的混合物。将残渣溶于H2O(100mL)，用DCM萃取(3×)。将DCM层合并，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到243.2，浅黄色油状物(3.2g)。
合成243.3：在-15℃下，向243.2(3.2g，14.60mmol)的THF(20mL)溶液中加入N-甲基吗啉(1.60mL，14.60mmol)和氯甲酸异丁酯(1.91mL，14.60mmol)。在-15℃下搅拌5分钟后，将混合物缓慢加入硼氢化钠(1.66g，43.8mmol)的水(7mL)溶液(放出气体)。将混合物在-15℃下持续搅拌10分钟，用EtOAc稀释，将有机相用水、饱和NaHCO3、盐水洗涤，干燥，浓缩，得到粗残余物，经柱(Hex/EtOAc＝2∶1-2∶3)纯化，得到243.3(2.1g，70％)。
合成243.4：在0℃下，向243.3(2.1g，10.24mmol)的DCM(30mL)溶液中加入三乙胺(2.15mL，15.36mmol)和甲磺酰氯(1.19mL，15.36mmol)。在0℃下搅拌30分钟后，将其用DCM稀释，将有机相用水、饱和NaHCO3、盐水洗涤，干燥，浓缩，得到粗甲磺酸酯。
向以上粗甲磺酸酯的DMF溶液(20mL)中加入NaN3(1.95g，30.72mmol)和TBAI(37mg，0.124mmol)。在75℃下加热2h后，将其用EtOAc稀释，将有机相用水、盐水洗涤，干燥，浓缩，得到粗叠氮化物(1.7g)。
向以上粗叠氮化物(1.7g)的EtOAc(16mL)溶液中加入Pd/C(400mg)，充入H2(1大气压)。在环境温度下搅拌15h后，将Pd/C滤除，将滤液浓缩，得到243.4(1.5g)。
合成243：向含243.5的固体样品(0.76g，2.1mmol)的密闭试管中加入243.4(0.75g，3.68mmol)的AcCN(8.5mL)溶液。在65℃下加热5h后，将混合物冷却，加入水(40mL)。过滤，收集沉淀，得到偶合产物(0.85g)。
向以上偶合产物(0.85g)的DCM(6mL)悬浮液中加入TFA(2mL)。在环境温度下搅拌15分钟后，将混合物浓缩，残渣经制备型HPLC纯化，得到F(0.99g)，为TFA盐。
实施例598：(S)-2-(2-氨基-2-环丙基乙氨基)-4-(2-氨基-3，3-二甲基丁氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203461
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C19H25N9O的MS实测值为(M+H)+ 396.4.UV：λ＝248.7.
实施例599：2-(1-乙酰基哌啶-4-基氨基)-4-(环丙氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203462
用实施例218中所示相同合成流程制备标题化合物。C15H22N6O2的MS实测值为(M+H)+ 319.4.UV：λ＝238.7.
实施例600：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(环丁氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203463
步骤1：搅拌下，向醇3.1(4.16g，24mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中依次加入二异丙基乙胺(5.8mL，33mmol)，并滴加甲磺酰氯(2.23mL，29mmol)。30分钟后，用1M HCl将反应物稀释，将两相分离。然后将有机层用碳酸钠(饱和水溶液)洗涤，经硫酸镁干燥。浓缩，得到需要的产物3.2，为浅棕色固体(5.07g，83％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ6.93(d，1H)，4.03(d，2H)，3.72(m，1H)，3.15(s，3H)，1.37(s，9H)，1.06(d，3H).
步骤2：将甲磺酸酯3.2(2.0g，7.9mmol)溶于20mL DMF，用叠氮化钠(2.6g，39.5mmol)处理，加热至80℃过夜。次日，将反应物冷却至室温，用水和乙酸乙酯分配，将两层分离。将水相用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸镁干燥。浓缩，得到需要的叠氮化物3.3，该产物立即用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ6.91(d，1H)，3.62(m，1H)，3.20(d，2H)，1.38(s，9H)，1.01(d，3H).
步骤3：将前一步骤3.3中的粗叠氮化物用甲醇(20mL)稀释，用约200mg Pd/C(10％(重量)，潮湿)处理，置于氢环境下。3小时后，通过硅藻土过滤，浓缩，得到定量的需要的胺，放置后，形成结晶，得到白色蜡状固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ6.52(d，1H)，3.38(m，1H)，2.42(m，2H)，1.36(s，9H)，0.96(d，3H).
步骤4：将苯并三唑基醚1.7、中间体3.4、二异丙基乙胺和5mL 1，4-二氧杂环己烷合并，加热至120℃过夜。然后将反应混合物冷却，用水稀释，经制备型HPLC纯化，得到需要的化合物。C12H20N6O的MS实测值为(M+H)+ 265.2.
实施例601：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-溴-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203471
流程
Figure BPA00001277505203481
将化合物601-1(150mg，0.46mmol)溶于15mL DMF。向其中加入N-溴代琥珀酰亚胺(NBS，122mg，0.69mmol)。将混合物在室温下搅拌12分钟。因此，所有化合物601-1转化为相应亚砜。再向其中加入N-溴代琥珀酰亚胺(122mg，0.69mmol)。将混合物在室温下搅拌1h。向其中加入DIEA(0.4mL，2.3mmol)和化合物601-2(200mg，0.92mmol)。将混合物在90℃下搅拌3h，得到产物601-3和601-4，它们的比例为4∶1。将混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤×3，干燥，浓缩，通过闪柱处理，分离到化合物601-3和化合物601-4。
将化合物601-3在室温下用1∶1的TFA和DCM处理。将混合物在室温下搅拌过夜。将其浓缩，通过反相HPLC处理，分离到标题化合物。C19H22BrN9O的MS为(M+H)+ 472.3，474.3.λ＝246，294nm。
实施例602：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-溴-5-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
将化合物602-1(在实施例601中制备的)在室温下用1∶1的TFA和DCM处理。将混合物在室温下搅拌过夜。将其浓缩，通过反相HPLC处理，分离到标题化合物。C19H22BrN9O的MS实测值为(M+H)+ 472.3，474.3.λ＝253，272nm。
实施例603：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(4-氯-3-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
流程：
Figure BPA00001277505203492
将化合物603-1(150mg，0.46mmol)溶于15mL DMF。向其中加入N-氯琥珀酰亚胺(NCS，300mg，2.2mmol)。将混合物在室温下搅拌80分钟。向其中加入DIEA(0.4mL，2.3mmol)和化合物603-2(200mg，0.92mmol)。将混合物在90℃下搅拌2h，得到产物603-5和603-6，它们的比例为2.6∶1。将混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤×3，干燥，浓缩，经闪柱处理，分离到化合物603-5和化合物603-6。
将化合物603-5在室温下用TFA处理。将混合物在室温下搅拌30分钟。将其浓缩，经反相HPLC处理，分离到标题化合物。C19H22ClN9O的MS实测值为(M+H)+ 428.3.λ＝246，291nm。
实施例604：2-((1R，2S)-2-氨基环己基氨基)-4-(3-氯-5-(2H-1，2，3-三唑-2-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203501
将化合物604-6(在实施例603中制备的)在室温下用TFA处理。将混合物在室温下搅拌30分钟。将其浓缩，经反相HPLC处理，分离到标题化合物。C19H22ClN9O的MS实测值为(M+H)+ 428.3.λ＝252nm。
实施例605：(S)-4-(4-(1，2，3-噻二唑-4-基)苯氨基)-2-(2-氨基丙氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203502
用实施例424中所示相同化学流程制备标题化合物。UV λ＝230，306nm.C16H18N8OS的MS为(M+H)+ 371.3.NMR(CD3OD)：δ9.23(s，1H)，8.54(s，1H)，8.15(m，2H)，7.81(m，2H)，3.70(m，2H)，3.46(m，1H)，1.32(d，J＝6.8Hz，3H)ppm。
实施例606：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(4-(噻唑-4-基)苯氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203503
用实施例424中所示相同化学流程制备标题化合物。UV λ＝238，311nm。C17H19N7OS的MS实测值为(M+H)+ 370.3.NMR(CD3OD)：δ9.05(d，J＝2.0Hz，1H)，8.51(s，1H)，8.00(d，J＝8.0Hz，2H)，7.89(s，1H)，7.70(d，J＝7.2Hz，2H)，3.70(m，2H)，3.47(m，1H)，1.30(d，J＝6.0Hz，3H)ppm。
实施例607：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(喹喔啉-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203511
用实施例424中所示相同化学流程制备标题化合物。UV λ＝242，273nm。C16H18N8O的MS实测值为(M+H)+ 339.3.NMR(CD3OD)：δ8.85(s，1H)，8.82(s，1H)，8.86(s，1H)，8.59(s，1H)，8.10(d，J＝8.8Hz，1H)，7.84(d，J＝-8.4Hz，1H)，3.75(m，2H)，3.62(m，1H)，1.38(d，J＝6.0Hz，3H)ppm。
实施例608：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(苯并[d]噻唑-5-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203512
用实施例424中所示相同化学流程制备标题化合物。UV λ＝246，291nm。C15H17N7OS的MS实测值为(M+H)+ 344.3.NMR(CD3OD)：δ9.34(s，1H)，8.72(s，1H)，8.56(s，1H)，8.11(d，J＝8.8Hz，1H)，7.52(d，J＝8.8Hz，1H)，3.78-3.54(m，3H)，1.29(d，J＝6.4Hz，3H)ppm。
实施例609：(S)-2-(2-氨基丙氨基)-4-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)嘧啶-5-甲酰胺
Figure BPA00001277505203513
用实施例424中所示相同化学流程制备标题化合物。UV λ＝241，297nm。C15H17N7OS的MS实测值为(M+H)+ 344.3.NMR(CD3OD)：δ9.24(s，1H)，8.56(s，1H)，8.41(s，1H)，8.10(d，J＝8.8Hz，1H)，7.72(d，J＝8.8Hz，1H)，3.71-3.44(m，3H)，1.23(d，J＝6.4Hz，3H)ppm。
实施例610
本实施例说明评价本发明化合物的方法和由此类测定方法得到的结果。可通过本领域中已知的各种方法(例如测试化合物抑制人血浆syk活性的能力试验)测定本发明化合物在体外和体内抑制人syk的活性。可通过IC50值(以nM计)测定本发明化合物显示的抑制人syk的有效亲和力。IC50值为使人syk蛋白水解活性抑制50％所需的化合物浓度(按nM计)。IC50值越小，表示化合物抑制syk活性的活性(有效性)越高。
用于检测和测定抑制syk活性的体外测定方法如下：
抑制sky酪氨酸磷酸化活性
通过测定试验化合物抑制syk介导的syk特异性底物的酪氨酸磷酸化的能力，评价候选分子抑制syk酪氨酸磷酸化活性的效力。
采用由Perkin Elmer Life和Analytical Sciences(Boston，MA)开发的LANCETM技术，测定SYK酪氨酸磷酸化活性。LANCETM是指均相时间分辨荧光分析，该方法采用技术例如时间分辨荧光共振能量转移测定(TR-FRET)(通常参见Perkin Elmer Application Note-如何优化用基于时间分辨荧光分析的LANCE检测的酪氨酸激酶测定(How to Optimize a Tyrosine Kinase Assay Using Time Resolved Fluorescence-Based LANCE Detection)中的方法，wwww.perkinelmer.com/lifesciences)。该测定主要涉及采用从磷酸特异性铕标记抗体转移到链亲和素-别藻蓝素作为受体的能量转移测定磷酸化底物。
为测试候选分子抑制SYK酪氨酸磷酸化活性的能力，将分子在30％的DMSO中复溶，按1∶3比例进行系列稀释，最终稀释液含DMSO但不含候选分子。在测定中，最终DMSO浓度为3％。通过两部分反应进行激酶实验。第一部分反应为激酶反应，反应物含有候选分子、全长活性重组SYK酶(Millipore，CA)和生物素标记的SYK特异性底物即生物素-DEEDYESP-OH。第二部分反应涉及激酶反应的终止且同时加入检测试剂-铕标记的抗磷酸酪氨酸试剂(Eu-W1024-PY100，Perkin Elmer，Boston，MA)和链亲和素-别藻蓝素检测试剂(SA-APC，Prozyme，CA)。在黑色U形底96孔微量板中进行激酶反应。用含50mM Tris pH 7.5、5mM MgCl2和1mM DTT的缓冲液稀释至终反应体积为50μL，含1nM终浓度的活性SYK酶、550nM SYK底物和100μM ATP。使反应在室温下进行1小时。淬灭缓冲液含有100mM Tris pH 7.5，300mM NaCl2，20mM EDTA，0.02％ Brii35和0.5％ BSA。按以下稀释度，将检测试剂加入反应混合物：对于Eu-W1024-PY100而言按1∶500加入，对于SA-APC而言按1∶250加入。通过加入50μL含检测试剂的淬灭缓冲液将激酶反应终止。在室温下检测1h。在抑制剂存在或不存在的情况下，在TR-FRET仪Analyst HT(Molecular Probes，Sunnyvale，CA)中检测磷酸化底物，用CriterionHost Release 2.0(Molecular Probes，Sunnyvale，CA)设置测定条件。使用的参数设置如下：激发波长360nm，发射波长665-7.5nm，分束器350nm 50/50，闪光100脉冲，迟滞60us，积分400us，z-高度2mm。与不存在抑制剂的情况相比，根据在抑制剂的存在下观察到的最大响应计算SYK-酪氨酸激酶活性的抑制。通过非线性回归分析得出IC50值。
用细胞内磷酸-流式细胞计量法测试化合物对完整非霍奇金淋巴瘤细胞系Ramos和SUDHL-6中Syk活性的抑制。吸取处于log期生长的10×106细胞的等份试样；通过将细胞与3μg/ml的B细胞受体的特异性抗体温育10分钟激活Syk激酶。随后在室温下，将细胞在1％多聚甲醛中固化5分钟，在磷酸盐缓冲盐水中洗涤，然后通过在冰冷甲醇中培育2小时将其透化。将细胞再在磷酸盐缓冲盐水中洗涤，然后与磷酸化的Erk(Y204)和BLNK(Y84)的特异性抗体一起温育30分钟，磷酸化的Erk(Y204)和BLNK(Y84)为Syk激酶活性的指示剂、磷酸化的Syk(Y352)为Src家族激酶活性的量度指标。使用的所有抗体均购自BD Pharmingen(San Jose，CA)。与抗体一起温育后，再次洗涤细胞，通过流式细胞仪检测。化合物抑制B细胞受体信号的代表性数据在表1中以IC50范围形式列出。
也评价了化合物对非霍奇金淋巴瘤B细胞系SUDHL-4、SUDHL-6和Toledo的抗增殖作用。SUDHL-4和SUDHL-6的生长和存活需要B细胞受体信号，而Toledo细胞系(在本文中用作阴性对照)不需要。将细胞等份试样加入96孔板的各孔中，与递增浓度的化合物一起温育72小时，然后根据厂商的说明，用MTT测定法(Chemicon International，Inc.，Temecula，CA)测定细胞存活和增殖。在本文表和图中，详细给出以IC50值+或-标准差的形式给出由5或6个独立实验得到的数据。
通过测定凋亡标记半胱氨酸天冬氨酸酶3评价对非霍奇金淋巴瘤B细胞系SUDHL-4、SUDHL-6和Toledo凋亡的诱导。将细胞与1、3或10μM化合物一起温育24、48和72小时。在每个时间点，采用单克隆兔抗活性半胱氨酸天冬氨酸酶-3抗体试剂盒和相关方案(BD Pharmingen)对细胞进行流式细胞计分析。表7A和7B给出由两个独立实验得到的数据，它们代表在指定条件下与化合物一起温育后经历凋亡的总细胞百分率。
如所示，不仅B细胞信号事件、增殖和存活需要Syk活性，而且该活性对B细胞受体交联时细胞激活也至关重要。B细胞激活导致与细胞信号事件、抗原呈递和粘附有关的几种蛋白的细胞表面表达增加。其中通常通过测定CD80、CD86和CD69以确定B细胞激活状态。因此，吸取从脾分离的初级小鼠B细胞的等份试样，在山羊抗小鼠IgD(eBiosciences，Inc.，San Diego，CA)的存在下，将各试样与递增浓度的化合物(0.05-2μM)一起温育20小时，使其与B细胞受体交联。然后，将细胞洗涤，在冰上与CD80、CD86和CD69B细胞激活标记的特异性抗体一起培育30分钟。用B细胞标记CD45RO染色，鉴定合并的种群中的B细胞。所有抗体购自BD Pharmingen。表8中给出其中这些化合物抑制B细胞受体诱导的小鼠初级B细胞激活的IC50范围。
在下表中，化合物在Syk和/或Jak实验中的活性如下：+++++＝IC50＜0.0010μM；++++＝0.0010μM＜IC50＜0.010μM，+++＝0.010μM＜IC50＜0.10μM，++＝0.10μM＜IC50＜1μM，+＝IC50＞1μM。
表6a：
  实施例   UV   MW   MH+   Syk IC50
  1   240，297   452.6   453.2   ++
  2   236，312   459.6   460.1   ++
  3   239，304   392.5   393.2   ++
  4   231，311   410.5   411.2   +++
  5   238，337   403.5   404.2   +++
  6   239，311   403.5   404.2   +++
  7   241，330   403.5   404.2   +++
  8   243，308   404.5   405.2   +++
Figure BPA00001277505203551
Figure BPA00001277505203561
Figure BPA00001277505203571
Figure BPA00001277505203581
Figure BPA00001277505203591
Figure BPA00001277505203601
Figure BPA00001277505203611
Figure BPA00001277505203651
Figure BPA00001277505203661
Figure BPA00001277505203671
Figure BPA00001277505203681
Figure BPA00001277505203691
体外抑制GPVI介导的血小板功能
通过测定对GPVI特异性激动剂凝集素蛋白原诱导的人血小板钙动员或聚集的抑制，测定候选分子抑制syk介导的血小板功能的能力。在96孔微量板中，在人洗涤血小板中评价钙动员。通过96孔微量板测定评价血小板聚集(通常参见Jantzen，H.M等，(1999)Thromb.Hemost.81：111-117中的方法)，或按标准比色池透光率集合度测定法，用人富含血小板血浆(PRP)评价凝集。
体外抑制凝集素蛋白原介导的血小板钙动员
用FLIR钙3测定试剂盒(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)，在人洗涤血小板中测定对凝集素蛋白原诱导的钙动员的抑制。为制备洗涤血小板，将从健康志愿者中采集的不含药物的人静脉血加入含PGI2的ACD (85mM柠檬酸钠，111mM葡萄糖，71.4mM柠檬酸)(最终1.25ml ACD含0.2μM PGI2；PGI2得自Sigma，St.Louis，MO)。在室温下，通过在160×g下离心20分钟制备富含血小板血浆(PRP)。通过在730g下将PRP离心10分钟制备洗涤血小板，将血小板沉淀再悬浮于CGS(13mM柠檬酸钠，30mM葡萄糖，120mM NaCl；2ml CGS/10ml原始血液体积)。在37℃下温育15分钟后，通过在730g下离心10分钟收集血小板，按3×108血小板/ml的浓度再悬浮于Hepes-Tyrode′s缓冲液(10mM Hepes，138mM NaCl，5.5mM葡萄糖，2.9mM KCl，12mM NaHCO3，pH 7.4)。将该血小板悬浮液在室温下保持＞45分钟，然后用于钙动员测定。
为进行96孔板钙动员试验，将等体积3×108洗涤血小板/ml与悬浮于1×Hank’s平衡盐溶液，pH 7.4，20mM Hepes缓冲液的等体积钙-3测定试剂A一起温育。总反应体积0.2ml/孔中含1.5×108/ml洗涤血小板/钙-3测定试剂A混合液、10μM埃替非巴肽(Millennium Pharmaceuticals Inc，Cambridge，MA)、用0.75％ DMSO系列稀释(1∶3)的试验化合物溶液。按每8孔组加入1孔(1 well of each 8 set)方式，仅加入DMSO，以便读取最大钙动员数。在室温下预温育20分钟后，将96孔微量板读板器安装在FlexStation(Molecular Devices，Sunnyvale，Calif)上。用SOFTMax Pro设置测定钙动员的FlexStation实验条件。使用的参数设置详述如下，荧光参数-测定模式：挠曲，激发波长485nM、525nM，在515nM处遮光(cut-off)；参数-PMT灵敏度-6，移液枪高度230μl，读板时间2分钟40秒，读板间隔2秒，温度为23-25℃。基线读板18秒后，通过加入凝集素蛋白原至终浓度125ng/ml启动钙动员。与抑制剂不存在的情况相比，根据在抑制剂存在下观察的最大响应相对值计算钙动员抑制。通过非线性回归分析获得IC50。
体外抑制凝集素蛋白原介导的血小板聚集
为制备用于聚集测定法的人富含血小板血浆(PRP)，将从健康志愿者中采集的不含药物的人静脉血加入0.38％柠檬酸钠(0.013M，终pH 7.0)。通过在室温下在160×g下将全血离心20分钟制备富含血小板血浆。将PRP层取出，转移到新试管中，如果需要，用贫血小板血浆(PPP)调节血小板计数，以达到血小板浓度～3×108血小板/ml。通过将剩余血液样品(除去PRP后)在800×g下离心20分钟制备PPP。然后该PRP制剂可用于96孔板或标准吸收池集合度测定的聚集测定。
根据类似于Frantantoni等，Am.J.Clin.Pathol.94，613(1990)所述方法，在96孔平底微量滴定板中，用微量滴定板摇床和读板器测定凝集素蛋白原诱导的聚集的抑制。所有步骤均在室温下进行。对于用富含血小板血浆(PRP)进行96孔板聚集试验而言，总反应体积0.2ml/孔中含190μl PRP(～3×108血小板/ml，参见以上)和5μl用30％ DMSO系列稀释的试验化合物溶液或缓冲液(用作对照孔)。在室温下预温育20分钟后，将5μl 320ng/ml凝集素蛋白原激动剂溶液加入各孔，得到终浓度8ng/ml凝集素蛋白原。然后将板在微量滴定板摇床上振摇5分钟，在微量滴定板读板器(Softmax，Molecular Devices，Menlo Park，Calif.)中记录5分钟读数。由t＝5分钟时，计算在650nm处减少的OD的聚集。通过非线性回归分析获得IC50。
也可用比色池透光率聚集测定法测定抑制的凝集素蛋白原诱导的聚集，在96孔V形底板中，在30％ DMSO中制备系列稀释度(1∶2)的试验化合物(在小杯中的终DMSO浓度为0.3％)。将试验化合物(5μl系列稀释度的DMSO溶液)与PRP一起预温育20分钟，然后于37℃通过在ChronoLog血凝计中将激动剂(125-250ng/ml凝集素蛋白原)加入495μL PRP，启动聚集反应。记录聚集反应4分钟，通过在4分钟测定期间发生的最大聚集程度与基线的相对差异，确定最大聚集程度。根据在抑制剂的存在下和不存在抑制剂下观察的最大反应相对值计算聚集抑制。通过非线性回归分析获得IC50。表2-5中给出实施例的化合物及其syk和PRP IC50值。
在通过BCR交联诱导的Ramos细胞中进行的钙通量分析
在实验前，按5×105细胞/ml的浓度，将Ramos细胞(2G6.4C10，伯基特淋巴瘤，ATCC目录号：CRL-1923)在新制培养基中亚培养3或4天。将细胞收获，按8×106细胞/ml的浓度，将细胞再悬浮于新制培养基中，然后染色。加入等体积的钙3上样色素(Molecular Device)，将其与细胞悬浮液混合。在96孔板中分配上样细胞，温育30分钟。然后将化合物加入染色细胞中，再温育30分钟。将细胞在1000rpm下离心3分钟，然后在FlexStation中测定荧光。通过加入5μg/ml抗体(AffiniPure F(ab’)2驴抗人IgM片段，Jackson ImmunoResearch Laboraotries)刺激BCR。
在通过TCR交联诱导的Jurkat细胞中进行的钙通量分析
该方案与前述章节中所述B细胞钙通量分析方案非常相似。唯一的区别是用T细胞(克隆E6-1，急性T细胞白血病，ATCC目录号：Tib-152)和抗人CD3(功能级纯化的抗人CD3，克隆OKT3，eBioscience，编号16-0037)代替B细胞和抗人IgM。保持细胞密度不变，但使用100ng/ml浓度的抗体。
TCR交联诱导的Jurkat细胞中IL-2的分泌
Jurkat细胞的繁殖和化合物温育方法与前述章节中Jurkat钙通量分析方案中所述相同。按100ng/孔，将抗体(抗CD3，OKT3)涂在新板(不含细胞)上。按8×106细胞/ml的浓度，将细胞悬浮，在另一个板中与化合物一起温育30分钟。在温育结束时，将细胞转移到涂布抗体的板中，温育16小时。温育后取100μl的细胞培养基用于测定温育后的IL-2。用IL-2 ELISA试剂盒(人IL-2 ELISA试剂盒II，BD Bioscience，编号550611)测定IL-2水平。
实施例611：Millipore Upstate激酶ProfilerTM筛选
该测定直接测定化合物对JAK3的催化活性的作用。从昆虫细胞中得到纯化的人JAK3(GenBank AF513860)序列(残基781-C末端)。用放射膜过滤结合法测定ATP的催化水解。将具有33[P]ATP的激酶与底物一起温育，使得33[P]掺入底物，然后可通过过滤将该底物与其它反应成分分离。在1、0.3或0.1μM化合物的存在或不存在下，用10μM ATP进行测定。活性以相对于对照抑制的％表示。
实施例612：Ambit KinomeScan筛选
该测定法为依赖ATP位点的竞争性结合测定法，其中将目的人激酶与专属标记(T7噬菌体)融合。在试验化合物存在或不存在下，测定与固定化活性位点定向的配体结合的激酶量。Ambit’s JAK测定使用激酶域和非全长蛋白。用于JAK1结合的域为拟激酶域，而与JAK3结合的域为催化域(Mazen W Karaman，Sanna Herrgard，Daniel K Treiber等，对激酶抑制剂选择性的定量分析(A Quantitative analysis of kinase inhibitotr selectivity).Nature Biotechnology，2008，第26卷，第1期，第127-132页)。
表6b：激酶抑制效力和特异性(IC50以nM计)
Figure BPA00001277505203731
Figure BPA00001277505203741
实施例605：JAK3/STAT6细胞测定
通过白介素4(IL4)刺激Ramos B细胞诱导通过JAK1/JAK3的信号产生STAT6(信号转导蛋白和转录活化剂)磷酸化。可通过测定磷酸化的STAT6的量评价化合物对JAK3和/或JAK1的抑制作用。可通过蛋白质印迹法，用特异性磷酸-STAT6抗体进行该测定。
将Ramos B细胞悬浮于10mMHepes-缓冲的RPMI培养基(2×107细胞/ml)。将细胞(90μl)与10μl 3.3μg/ml白介素4(R & D Systems Inc，目录号#204-IL；终浓度：0.33μg/ml)一起温育。在2μl用30％ DMSO稀释的化合物存在或不存在下，在37℃下温育10分钟。通过加入等体积2×溶胞缓冲液(100mM TRIS-HCl pH 8.0，2％ Triton-X-100，5mM EDTA，250mM NaCl，20％甘油，1.25mM PMSF，5mM原钒酸钠，5mM β-甘油磷酸盐，基本完全EDTA蛋白酶抑制剂混合物(Sigma))将反应终止。
将样品与1μl benzonase核酸酶(Novagen，目录号# 71205-3)一起在室温下温育1小时，然后加入50μl 5×上样缓冲液(330mM TRIS pH 6.8，9.5％ SDS，34％甘油，0.01％溴酚蓝，10％ β-巯基乙醇)。
在减压条件下，使细胞裂解物(15μL)通过SDS-PAGE(Novex 4-12％ TRIS-甘氨酸凝胶，Invitrogen)，然后经电印迹-转移到硝基纤维素膜上。然后在室温(RT)下，将膜在Zymed封闭缓冲液(Invitrogen)中温育1h，然后在4℃下，在Zymed封闭缓冲液中与1∶500抗磷酸酪氨酸-STAT6(Cell Signaling Technology，目录号#9364)初级抗体一起放置过夜。用Tris-缓冲盐水、0.25％ NP40(TBSN)洗涤5×10分钟后，在1∶10,000的共轭HRP的驴抗兔次级抗体(Amersham Biosciences，目录号#NA934V)的存在下，在Zymed封闭缓冲液中，将印迹在室温下温育1h。用TBSN洗涤4×10分钟后，通过ECL (Pierce Western Lightening，Perkin Elmer目录号#NEL101)使印迹显色。为测定总β3含量，将印迹剥离，用TBSN洗涤4×，在4℃下用在封闭缓冲液中的1∶2000的C3A抗体过夜再探测(re-probed)。用TBSN洗涤4×10分钟后，将印迹在封闭缓冲液中与1∶10,000的山羊抗小鼠二级抗体温育，再用TBSN洗涤4次，然后暴露于Western Lightening试剂。通过光密度测定法测定相对于背景的化合物的刺激水平和抑制程度。
实施例606：在用IL-4刺激的Ramos B-细胞系中测定JAK激酶活性抑制
这些实施例说明用于体外和体内评价本发明化合物对人JAK激酶活性的作用的方法，可通过本领域中已知的各种方法例如测试化合物抑制人血浆JAK激酶活性的能力的试验测定本发明化合物对人JAK激酶活性的作用。可通过IC50值(以nM计)测定本发明化合物显示出的对人JAK激酶抑制的有效亲和力。IC50值为抑制50％人JAK激酶活性需要的化合物的浓度(以nM计)。IC50值越小，表示化合物抑制JAK激酶活性的活性越高(强)。
一种检测和测定抑制JAK激酶活性的体外测定法如下：
用设计的测试JAK抑制程度的细胞测定确认化合物对JAK激酶的活性。简而言之，在用细胞因子白介素-4(IL-4)激活的人Ramos B-细胞中测试JAK抑制。刺激后20-24小时，为测定CD23上调和进行FACS分析，将细胞染色。用IL-4刺激B-细胞，导致通过JAK激酶JAK1和JAK3磷酸化的JAK/STAT通路激活，激活该通路又导致转录因子STAT-5和STAT-6磷酸化并激活转录。低亲和力IgE受体(CD23)被激活的STAT-5上调。
为进行该测定，根据与细胞一起提供的繁殖方案，将人Ramos B-细胞(ATCC，目录号CRL-1596)含10％胎牛血清(JRH，目录号12106-500M)的RPMI 1640培养基(Cellgro，目录号10-040-CM)中培养，在约3.5×105细胞/ml密度下保存。在测定前一天，将细胞稀释至3.5×105细胞/ml，确保它们处于对数生长期。将细胞离心，使悬浮于含根据ATCC繁殖方案加热失活的5-10％胎牛血清(FBS)(JRH Biosciences，Inc，Lenexa，Kans.，目录号12106-500M)的RPMI 1640培养基(Cellgro，MediaTech，Inc.，Herndon，Va.，目录号10-040-CM)中。在3.5×104-5细胞/ml的密度下保存细胞。在测定前一天，将Ramos B-细胞稀释至3.5×105细胞/ml，确保它们处于对数生长期，将其等份试样分配到96孔组织培养板中。将细胞与试验化合物(溶于DMSO)或DMSO(对照)一起在37℃下温育1h，然后用IL-4(Pepotech，目录号200-04)刺激20-24小时(终浓度为50单位/ml)。
将细胞离心，悬浮于含5％血清的RPMI中。在96孔组织培养板中，每个点使用5×104细胞。在37℃培养箱中，将细胞与化合物或DMSO(Sigma-Aldrich，St.Louis，Mo.，目录号D2650)溶媒对照一起温育1小时。然后将细胞用终浓度50单位/mL的IL-4(Peprotech Inc.，Rocky Hill，N.J.，目录号200-04)刺激20-24小时。然后将细胞离心，用抗CD23-PE(BD Pharmingen，San Diego，Calif.，目录号555711)染色，通过FACS分析。用购自Becton Dickinson Biosciences of San Jose，Calif.的BD LSR I System流式细胞计数器检测。
用CellTiter-Glo.RTM发光细胞生存力测定法(Promega)测定增殖，该方法通过定量存在的ATP，测定培养基中存活细胞数，ATP为代谢活性细胞的指示剂。将底物解冻，使其恢复至室温。与Cell Titer-Glo试剂和稀释剂混合在一起后，向各孔加入100μL。将板在定轨摇床上振摇2分钟，诱导溶胞，在室温下再温育10分钟，使得信号达到平衡。用购自Perkin Elmer，Shelton，Conn.的Wallac Victor2 1420多标记计数器(multilabel counter)进行检测。
次日，将A549细胞与2，4-嘧啶二胺试验化合物或DMSO(对照)(Sigma-Aldrich，St.Louis，Mo.，目录号D2650)预温育1小时。然后将细胞采用IFNγ(75ng/mL)(Peprotech Inc.，Rocky Hill，N.J.，目录号300-02)刺激，温育24小时。在200μL含5％ FBS、0.3％ DMSO的F12K培养基中，最终试验化合物的剂量范围为30μM-14nM。
第3日，将细胞培养基除去，细胞用200μL PBS(磷酸盐缓冲盐水)洗涤。向各孔加入胰蛋白酶，将细胞裂解，然后通过加入200μL完全F12K培养基将溶液中和。将细胞沉淀，在4℃下，用共轭APC的小鼠抗人ICAM-1(CD54)(BD Pharmingen，San Diego，Calif.，目录#559771)抗体染色20分钟。将细胞用冰冷的FACS缓冲液(PBS+2％ FBS)洗涤，通过流式细胞计量法分析表面ICAM-1表达。用购自BD Biosciences of San Jose，Calif.的BD LSR I System流式细胞计数器进行检测。对不同细胞进行分类(gated)，计算几何平均值(Becton-Dickinson CellQuest软件3.3版，Franklin Lakes，N.J.)。用几何平均值对化合物浓度作图，生成剂量响应曲线。
实施例607：在非霍奇金淋巴瘤细胞系中抑制Syk介导的通过B细胞受体的信号转导
将细胞用或不用化合物(0.02-2uM)预处理1小时，然后通过将细胞与3μg/ml抗μ抗体于37℃温育10分钟刺激B细胞受体信号。用钙3上样染料和FlexStation(Molecular Device)测定Ca2+通量。根据BD Pharmingen(San Jose，CA)提供的方案，通过细胞内磷酸流式细胞计量法分析B细胞受体信号事件。通过在84位氨基酸上诱导BLNK酪氨酸磷酸化(pBLNK Y84)和在204位氨基酸上诱导ERK1/2酪氨酸磷酸化(pERK Y204)，测定Syk激活。通过在352位氨基酸上诱导Syk酪氨酸磷酸化(pSyk Y352)测定激活的Src家族成员Lyn。以μM IC50给出数据。各化合物能够有效抑制B细胞受体诱导的Ca2+流出并抑制Syk激活，但不抑制Src家族成员Lyn。
表7A：
Figure BPA00001277505203771
  pBLNK Y84   0.5-0.75
  pERKY204   0.02-0.125
  pSyk Y352   0.75-2
表7B：
Figure BPA00001277505203781
表7C：
Figure BPA00001277505203782
表7D：
Figure BPA00001277505203791
实施例608：Syk抑制可产生对非霍奇金淋巴瘤细胞系的抗增殖作用
将细胞与递增浓度的各化合物一起温育，然后，根据厂商提供的方案，于72小时用MTT测定(公司，市，州)评价增殖程度。按μM IC50值给出数据，这些数据代表从5或6个独立实验得到的平均值+/-标准差。各化合物在较低的μM范围内能够抑制SUDHL-4和-6细胞系增殖，而SUDHL-4和-6细胞系的存活和生长信号依赖于Syk。不需要Syk的Toledo细胞明显对Syk抑制导致的抗增殖作用较不敏感。
表8
Figure BPA00001277505203792
Figure BPA00001277505203801
实施例609：抑制Syk能够诱导非霍奇金淋巴瘤细胞系凋亡
数据代表两个独立实验的结果，用这些结果评价Syk和Syk/JAK抑制对弥散性大非霍奇金淋巴瘤B细胞系存活的作用。SUDHL-4和SUDHL-6细胞系的存活依赖Syk介导的B细胞受体信号事件，而Toledo细胞不依赖该信号。将细胞与规定浓度的化合物一起在规定时间内温育；通过流式细胞计，用半胱氨酸天冬氨酸酶3检测Kit(Sigma-Aldrich，Saint Luis，MO)测定诱导的凋亡。根据对凋亡标记物半胱氨酸天冬氨酸酶3呈阳性的总细胞百分率给出数据。正如所料，抑制Syk能够诱导SUDHL-4和-6细胞系凋亡，但不诱导Toledo细胞系凋亡。
表9A：
Figure BPA00001277505203802
Figure BPA00001277505203803
实施例87
Figure BPA00001277505203811
表9B
Figure BPA00001277505203812
实施例87
Figure BPA00001277505203821
实施例87
表9C：
Figure BPA00001277505203832
Figure BPA00001277505203841
实施例610：Syk抑制剂抑制小鼠初级B细胞激活
将小鼠初级脾细胞用递增浓度(0.05-2μM)的各化合物预处理1小时，然后加入对照或山羊抗小鼠IgD血清。16小时后，通过流式细胞计量法测定抗IgD诱导的B细胞激活，染色，检测激活标记物CD80/86和CD69。数据代表化合物抑制B细胞激活的IC50范围。
表10：
Figure BPA00001277505203842
Figure BPA00001277505203851
表11：
Figure BPA00001277505203852
实施例611：免疫介导的血小板减少症小鼠模型
通过抗血小板表面糖蛋白的抗体、抗血小板表面上的含药物复合物的抗体，或者通过与血小板表面相互作用的抗体包被的细胞或免疫复合物，造成免疫介导的血小板减少症。评价选择的化合物在抗体介导的血小板减少症小鼠模型中抑制血小板清除的能力。在该模型中，由静脉内给予大鼠抗小鼠GPIIb(克隆MWReg30)抗体(BD Biosciences，Pharmingen)导致循环血小板快速清除(约50％)。为评价化合物抑制血小板清除的能力，将化合物悬浮于0.5％甲基纤维素的水溶液中，通过经口管饲法(100ul/小鼠)给予，当化合物即将达到最大血浆浓度时(通常1-2小时，取决于该化合物的不同的药物动力学实验)，注射抗体。在注射抗体后4和8小时，通过心脏穿刺，从溶媒和试验品处理的小鼠组(n＝5-10只小鼠/组)得到末端血样。用柠檬酸三钠或EDTA抗凝血。在血液学分析仪(Hemavet，Drew Scientific)上测定全血样中的血小板数。将剩余血样进一步处理，得到血浆，通过质谱测定其中的化合物浓度。
通过测定非抗体处理组与给予大鼠抗小鼠GPIIb抗体的动物组之间的血小板数之差的平均值确定血小板清除率。通过比较溶媒和化合物处理的动物间的血小板清除率差确定血小板清除率的抑制。
表12
*表示通过2-侧，非配对，STUDENTS T检验得到相对于溶媒对照的临床炎症分数在统计学上显著减少。
Figure BPA00001277505203871
*表示通过2侧、非配对Students t检验得到的相对于溶媒对照在统计学上显著减少的临床炎症分数。
实施例612：胶原抗体诱发的小鼠关节炎模型
在胶原抗体诱发的小鼠关节炎(CAIA)模型中，研究选择的化合物的抑制活性。通过II型胶原和补体的自身抗体介导胶原诱发的关节炎，因此可通过给予II型胶原的多克隆抗体或单克隆抗体的混合物诱发关节炎。CAIA模型(Chondrex，Inc.，Redmond，WA)采用4种克隆的混合物，这些克隆识别聚簇在II型胶原的83氨基酸肽片段内的各个表位。这些表位具有共同的包括鸡、小鼠、大鼠、牛、猪、猴和人在内的多种不同物种的II型胶原含有的氨基酸序列。在该小鼠模型中依次用单克隆抗体混合物、细菌脂多糖(LPS)持续7天诱发严重和的关节炎。根据通过肠胃道吸附的细菌毒素起协同和病理作用的学说，采用II型胶原的自身抗体触发类风湿性关节炎患者关节炎发作，得到该模型。
为进行这些实验，在第0日，向8周龄雌性Balb/C小鼠(Charles River，Inc.)通过尾静脉以4mg/小鼠(40mg/ml)的剂量静脉内注射单克隆抗体混合物(批号# OC-708)，然后以25ug/小鼠的剂量腹膜内注射用标准盐水稀释的LPS。在IV注射抗体混合物前或后，开始给予试验品。将化合物悬浮于0.5％甲基纤维素的水悬浮液，在7-10天研究期间，每日通过经口管饲法(100ul/小鼠)给予。每日测评临床炎症分数。在实验结束时，根据溶媒和试验品处理的小鼠之间的差异，确定对临床炎症分数的抑制。血浆浓度代表在研究终止日给予最后剂量后1小时的峰浓度。
表13：
Figure BPA00001277505203881
*表示通过2侧、非配对t-检验得到相对于溶媒对照在统计学上显著减少的临床炎症分数。
实施例613：在Ramos B细胞中抑制IL-4诱导的JAK1/3-Stat-6磷酸化
按所述，在加入IL-4前，将Ramos B细胞用递增浓度的化合物预处理1小时。将细胞与IL-4一起温育10分钟，然后通过细胞内流式细胞计，测定抑制IL-4诱导Stat-6的百分率。
实施例614：在Ramos B细胞中抑制IL-4诱导的JAK1/3-Stat-6磷酸化
按所述，在加入IL-4前，将Ramos B细胞用所述递增浓度的化合物预处理1小时。将细胞与IL-4一起温育10分钟，然后通过细胞内流式细胞计，测定抑制IL-4诱导Stat-6的百分率。
实施例615：用IL-2刺激的初级人T-细胞增殖测定
由外周血液中分离初级人T-细胞，通过T-细胞受体刺激将其预激活，作为对细胞因子白介素-2(IL-2)的响应，CD28在体外增殖。该增殖响应依赖于JAK-1和JAK-3酪氨酸激酶的激活，JAK-1和JAK-3酪氨酸激酶激活将转录因子Stat-5磷酸化并将其激活。
人初级T细胞制备如下。从健康志愿者中得到全血，将其按1∶1的比例与PBS混合，按2∶1血/PBS：Fincoll的比例分层于(layer on to)Ficoll Hypaque(Amersham Pharmacia Biotech，Piscataway，N.J.，目录#17-1440-03)，于4℃以1750rpm的速度离心30分钟。将在血清：Fincoll界面上的淋巴细胞回收，用5体积的PBS洗涤2次。将细胞再悬浮于含40U/mL重组IL2(R and D Systems，Minneapolis，Minn.，目录#202-IL(20μg))的Yssel′s培养基(Gemini Bio-products，Woodland，Calif.，目录#400-103)，接种到预涂布有1μg/mL抗CD3(BD Pharmingen，San Diego，Calif.，目录#555336)和5μg/mL抗CD28(Immunotech，Beckman Coulter of Brea Calif.，目录#IM1376)的烧瓶中。将初级T-细胞刺激3-4天，然后转移到新烧瓶中，在含10％ FBS和40U/mL IL-2的RPMI中保存。
将初级T-细胞用PBS洗涤两次，将IL-2除去，以2×106细胞/mL的浓度再悬浮于Yssel′s培养基中。将50μL含80U/mL IL-2的细胞悬浮液加入平底96孔黑板的各孔中。在板上的最后一列不加入IL-2作为未刺激的对照。按3倍稀释度，起始浓度5mM，将化合物用二甲亚砜(DMSO，纯度99.7％，细胞培养试验用，Sigma-Aldrich，St.Louis，Mo.，目录号D2650)系列稀释，然后在Yssel′s培养基中稀释至1∶250。将50μL 2×化合物加入各孔，一式两份，将细胞在37℃下繁殖72小时。
用CellTiter-Glo.RTM.发光细胞成活测定(Promega)测定增殖，该方法根据定量存在的ATP测定培养基中的活细胞数，ATP为代谢活性细胞的指示剂。将底物解冻，使其恢复到室温。与Cell Titer-Glo试剂和稀释剂混合在一起后，向各孔分别加入100μL。将板在轨道摇床上振摇2分钟，诱导溶胞，在室温下再温育10分钟，使信号达到平衡。用购自Perkin Elmer，Shelton，Conn.的Wallac Victor2 1420多标记计数器检测。
实施例616：用IFNγ刺激的A549上皮系
A549肺上皮细胞上调ICAM-1(CD54)表面表达，作为对多种不同刺激的响应。因此，用ICAM-1表达作为示值读数，可在相同细胞型中评价化合物对不同信号事件通路的作用。IFNγ通过激活JAK/Stat通路上调ICAM-1。在该实施例中，评价被IFNγ上调的ICAM-1。
A549肺上皮癌细胞系得自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)。用含10％胎牛血清，100I.U.青霉素和100ng/ mL链霉素的F12K培养基(Mediatech Inc.，Lenexa，Kans.，目录号10-025-CV)(完全F12k培养基)进行常规培养。在5％ CO2潮湿环境下将细胞在37℃下温育。在用于测定前，将A549细胞用PBS洗涤，用胰蛋白酶(Mediatech Inc.，目录号25-052-CI)酶解，使细胞溶解。将胰蛋白酶细胞悬浮液用完全F12K培养基中和，离心，使细胞沉淀。按2.0×105/mL的浓度，将细胞沉淀再悬浮于完全F12K培养基。按20,000/孔、总体积100μL，将细胞接种在平底组织培养板中，使其粘附过夜。
第2天，将A549细胞与2，4-嘧啶二胺试验化合物或DMSO(对照)(Sigma-Aldrich，St.Louis，Mo.，目录号D2650)一起预温育1小时。然后将细胞用IFNγ(75ng/mL)(Peprotech Inc.，Rocky Hill，N.J.，目录号300-02)刺激，温育24小时。在200μL含5％ FBS、0.3％ DMSO的F12K培养基中，最终试验化合物剂量范围为30μM-14nM。
第3天，将细胞培养基除去，将细胞用200μL PBS(磷酸盐缓冲盐水)洗涤。向各孔加入胰蛋白酶，将细胞裂解，然后通过加入200μL完全F12K培养基中和。将细胞沉淀，在4℃下，用共轭APC的小鼠抗人ICAM-1(CD54)(BD Pharmingen，San Diego，Calif.，目录#559771)抗体染色20分钟。将细胞用冰冷FACS缓冲液(PBS+2％ FBS)洗涤，通过流式细胞计量法分析表面ICAM-1表达。用购自BD Biosciences of San Jose，Calif.的BD LSR I System流式细胞计数器检测。对细胞进行分类，计算几何平均值(Becton-Dickinson CellQuest软件3.3版，Franklin Lakes，N.J.)。用几何平均值对化合物浓度作图，生成剂量响应曲线。
实施例617：U937 IFNγICAM1 FACS测定
U937人单核细胞上调ICAM-1(CD54)表面表达，以响应多种不同刺激。因此用ICAM-1表达作为示值读数，可在相同细胞型中评价化合物对不同信号事件通路的作用。IFNγ通过激活JAK/Stat通路上调ICAM-1。在该实施例中，评价被IFNγ上调的ICAM-1。
U937人单核细胞系得自Rockville，Md.，目录号CRL-1593.2的ATCC，在含10％(v/v)FCS的RPMI-1640培养基中培养。使U937细胞在10％ RPMI中生长。然后以100,000细胞/160μL的浓度，将细胞加入96孔平底板的孔中。然后将试验化合物稀释如下：将10mM试验化合物按1∶5用DMSO稀释(3μL 10mM试验化合物溶于12μL DMSO)，然后将试验化合物用DMSO按1∶3进行系列稀释(将6μL试验化合物用12μL DMSO进行系列稀释，得到3倍稀释度)。然后将4μL试验化合物转移到76μL 10％ RPMI中，得到10×溶液(100μM试验化合物，5％ DMSO)。对于对照孔而言，将4μL DMSO用76μL 10％ RPMI稀释。
对刺激条件下用8个点(8个3倍稀释浓度孔，每孔溶液体积10μL)和仅含DMSO的4个孔(对照孔)以及无刺激下的仅含DMSO的4个孔进行平行测定。
将稀释化合物板用multimek(Beckman Coulter of Brea，Calif.)混合2×，然后将20μL稀释化合物转移到含160μL细胞的96孔板中，然后将它们在低速下混合两次。然后将细胞和化合物在37℃、5％ CO2下预温育30分钟。
通过在10％ RPMI中制备100ng/mL人IFNγ溶液，制备10×刺激混合物。然后将细胞和化合物用20μL IFNγ刺激混合物刺激，得到终浓度10ng/mL IFNγ、10μM的试验化合物和0.5％ DMSO。在37℃、5％ CO2中，将细胞在这些条件下保持刺激18-24小时。
将细胞转移到96孔圆底板中用于染色，然后在冰上保持至染色结束。在4℃下，将细胞在1000rpm下离心5分钟，然后将上清液除去。除去上清液后，向每100μL FACS缓冲液中加入1μL共轭APC的小鼠抗人ICAM-1抗体。然后将细胞在冰上避光温育30分钟。培养结束后，加入150μL FACS缓冲液，在4℃下，将细胞在1000rpm下离心5分钟，然后除去上清液。除去上清液后，加入200μL FACS缓冲液，使细胞再悬浮。悬浮后，在4℃下，将细胞在1000rpm下离心5分钟。然后除去上清液，然后使细胞悬浮于150μL FACS缓冲液中。
用购自BD Biosciences of San Jose，Calif.的BD LSR I System流式细胞计数器检测。对活细胞进行分类，测定ICAM-APC的几何平均值(Becton-Dickinson Cell Quest软件，3.3版，Franklin Lakes，N.J.)。分析活细胞％和ICAM-1表达。平行测定试验化合物和已知活性的对照化合物。对照化合物的EC50通常为40-100nM。
实施例618：分析B细胞信号事件：
人非霍奇金淋巴瘤B细胞系SUDHL-4(#ACC 495)、SUDHL-6(#ACC572)和Karpas-422(#ACC32)得自DSMZ(Braunschweig，Germany)；Toledo(#CRL-2631)和Ramos(#CRL-1596)得自American Type Culture Collection(ATCC；Manassas，VA)。所有细胞用补充10％胎牛血清(ATCC)和青霉素/链霉素(Invitrogen)的RPMI培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA)维持，且在37℃潮湿组织培养箱中维持。用于这些研究的抗体包括多克隆山羊F(ab)’2抗人IgG(H+L)和抗人IgM(BioSource，Camarillo，CA)；兔抗人Syk、兔抗人磷酸Syk(Y525/526)、兔抗人磷酸Syk(Y352)、抗人BLNK，抗人磷酸BLNK(Y84)得自Cell Signaling Technologies，Inc.(Danvers，MA)。用于磷酸流式细胞计量的以下抗体得自Becton Dickenson(San Jose，CA)：共轭Alexa fluor 488的小鼠抗人磷酸STAT6(Y641)、共轭Phycoerythrin(PE)的小鼠抗人磷酸Zap70(Y319)/Syk(Y352)和共轭异硫氰酸荧光素(FITC)的小鼠抗人磷酸ERK1/2(T202/Y204)。
基本上按另外文献(Irish，Czerwinski等，Blood 108(9)：3135-42(2006)所述进行磷酸-流式细胞计量。在生长培养基中，将0.5×106细胞用1μg/ml抗-μ或抗-γ抗体刺激10分钟。按照规定时间，通过立即加入多聚甲醛(Electron Microscopy Sciences，Hatfield，PA)至终浓度1％终止诱发的信号事件。将细胞与多聚甲醛在室温下一起温育5分钟，用磷酸缓冲盐水(PBS)洗涤一次，然后再悬浮，于4℃、在预冷却甲醇(公司，地址)(-80℃)中培育过夜。然后将固定化和透化的细胞在PBS中洗涤一次，再在含1％牛血清白蛋白(BSA)(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)的PBS中洗涤，然后用按1∶20在PBS+1％ BSA中稀释的所述抗体染色。30分钟后，将细胞在PBS中洗涤一次，采用FACS Calibur(Becton Dickenson)的流式细胞计测定。为进行印迹分析，将106细胞用2μg/ml所述BCR特异性抗体刺激30分钟。将细胞再悬浮于溶胞缓冲液，终止信号事件，在冰上培养1小时。通过离心将细胞残渣除去，通过10％ SDS-PAGE分离澄清的蛋白溶胞液，按照厂商的建议用所述抗体探测。按照其中所述方法，将细胞在37℃下与多种浓度的Syk抑制剂或溶媒对照(0.5％ DMSO)一起温育1小时，然后用抗BCR抗体刺激。
实施例619：Syk活性的选择性抑制
对化合物抑制纯化的Syk的能力进行实验。发现实施例596和实施例87(表1b中所示的Syk特异性系列中的两个化合物)和P420-89(具有Syk和JAK双重抑制活性)能够抑制Syk激酶活性，它们的IC50分别为43nM、6nM和31nM。通过于300nM的浓度下筛选化合物对抗一组270种独立纯化激酶(Millipore)的活性，从而测定这些化合物对Syk的选择性，计算相对于溶媒对照的抑制百分率，将数值转换为热图(heat-map)；绿色代表无抑制，混有红色的颜色增加代表抑制百分率的增加，黄色代表50％抑制，红色代表100％抑制(图9)。如图9A所示，实施例596和实施例87具有高度Syk特异性(分别为第一和第二行)，而P420-89抑制多种激酶(第3行)。图9B中表示被3种化合物中任一化合物抑制≥80％的激酶亚组。实施例596抑制Syk和MLK-1(第1行)。在300nM下，实施例87抑制10种不同激酶(第2行)。但当以50nM(大于其6nM的Syk IC50值约10×)下再测试时，Syk是仍然能够被抑制的唯一激酶(第3行)。P420-89抑制Syk、JAK2和JAK3以及几种其它激酶(第4行)。
采用一组Milipore纯化激酶，在50nM下，实施例87(IC50＝1nM)抑制98％纯化的Syk激酶活性。在Millipore激酶组中，测定在300nM下能够被抑制＞80％的那些激酶的IC50值。
  激酶   IC50(nM)
  Syk(h)   1
  MLK1   60
  Fgr(h)   81
  Yes(h)   123
  Flt3(h)   139
  PAK5   166
  Lyn(h)   199
  cSRC(h)   244
  Lck(h)   300
相反，多激酶抑制剂P420-89与Rigel’s R788更相似。在300nM的浓度下，P420-89能够抑制Syk达88％，并且对另外32种其他激酶的抑制＞80％。其中被抑制的有JAK 2和3(分别抑制93％和85％)、Flt-3(抑制83-92％)和cKit(抑制95-97％)，淋巴细胞功能治疗性处理的所有靶标。
实施例620：非霍奇金淋巴瘤B细胞系中Syk的钙通量和选择性抑制测定
在实验前3-4天，将Ramos细胞在生长培养基培养(保持约0.5×106细胞/ml)。将细胞收获，以8×106细胞/ml的浓度再悬浮于新制培养基中，然后染色。将等体积的钙3上样色素(Molecular Device，Sunneyvale，CA)加入细胞悬浮液。将染色细胞分配到96孔板中，温育20分钟。然后将Syk抑制剂加入染色细胞中，再温育30分钟。将B细胞用5μg/ml抗μ抗体刺激。用FlexSTATion(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)测定细胞内Ca2+浓度变化。
通过蛋白质印迹分析测定BCR介导的pSyk Y525/526和pBLNK Y84的诱导(均为Syk激酶活性的度量)和pSyk Y352的诱导(Src激酶活性的度量)，首先检测B细胞中Syk抑制的选择性和效力。在各Syk抑制剂或溶媒对照存在或不存在下，将SUDHL-6B细胞用抗BCR特异性抗体刺激30分钟。采用光密度测定法评价(未提供数据)，用0.16或1μM的各化合物处理，分别导致BCR诱导的Syk自磷酸化(Y525/526)减少约40％和60％。采用更大范围的浓度进一步评价这些化合物对BCR诱导的Syk和Src激酶活性的作用。如图10A-C中所示，各化合物抑制Syk活性(pBLNK Y84)，IC50值为0.16-1μM，但达到2.5μM的浓度也未观察对Src活性(pSyk Y352)的作用。
还测定了各化合物抑制离BCR更远端(distal)信号事件的能力。在各种浓度的各Syk抑制剂存在或不存在下，用抗BCR抗体再次刺激细胞。测定对作为特异性对照的pSyk Y352的诱导，而对pERK1/2/Y204的诱导作为更远端的依赖Syk的信号事件的度量(Jiang，Craxton等，J Exp Med 188(7)：1297-306(1998)。图13C显示有代表性FACS图，该图描绘3个中对BCR信号事件作用具有最高特异性和效力的Syk抑制剂实施例87。在125nM下，ERK1/2激活完全被抑制，而刺激的细胞仍然显示Syk Y352染色阳性。重复该实验，其中测定所有3种化合物对Src和Syk活性的作用(图11A)。小于125nM的浓度足以抑制BCR诱导的向ERK1/2发出的Syk信号。相反，需要高得多的浓度才能导致对Src活性的中等抑制；在蛋白质印迹中未观察到对Src的作用(图10，A-C)。这些Syk抑制剂无一抑制PMA诱导的ERK1/2酪氨酸磷酸化，证明这些化合物不抑制PKC的下游信号事件。
而在纯化和细胞测定中，实施例596和实施例87能够特异性抑制Syk，还证明，P420-89具有抗纯化JAK激酶的活性。对这些化合物在B细胞中抑制IL-4通过JAK1/3向STAT-6发出信号的能力进行了试验，该信号事件通路不需要Syk。在高达2μM浓度下，Syk特异性化合物不抑制IL4信号。相反，P420-89不抑制IL4信号事件，IC50为约125nM(图11B)。
该结果显示，在B细胞中，选择性抑制Syk导致BCR诱导的Ca2+通量的抑制，IC50值为约100nM。由此说明，通过抑制Syk，这些化合物能够抑制信号事件通路，阻滞细胞反应。
Syk的选择性抑制足以抑制BCR信号事件，但不影响Src(图10、11和13)或JAK(图11B)。实施例87抑制NHL细胞系的效力与多激酶抑制剂P420-89的相同(表，图18C)。另外，实施例87和P420-89在这些细胞中同等诱导凋亡(图12B)。该数据证明了Syk信号事件在NHL细胞系存活中的作用，且证明了不需要对除Syk以外的激酶抑制也能完成该作用。
实施例621：半胱氨酸天冬氨酸酶3和增殖测定：Syk抑制能够导致破坏非霍奇金淋巴瘤B细胞系的增殖和存活
根据供应商的说明，用PE共轭的单克隆活性半胱氨酸天冬氨酸酶-3抗体凋亡试剂盒(Becton Dickenson)，测定凋亡的诱导。将细胞悬浮于生长培养基(0.5×106细胞/ml)，用规定浓度的各Syk抑制剂或溶媒对照处理24、48或72小时，然后进行FACS分析。根据厂商的说明，用MTT(溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓，一种四唑)(公司名)测定法测定细胞存活力和生长。将细胞用规定浓度的各Syk抑制剂或溶媒对照处理72小时。
SUDHL-4和SUDHL-6细胞已划分为“BCR型”(Monti，Savage等，Blood 105(5)：1851-61(2005)；Polo，Juszczynski等，Proc Natl Acad Sci USA 104(9)：3207-12(2007)，它们对被R406抑制的Syk敏感(Chen，Monti等，2008)。因此，分别缺乏BCR和BLNK表达的Toledo和Karpas-422细胞系(Gabay，Ben-Bassat等，Eur J Haematol 63(3)：180-91(1999)；Sprangers，Feldhahn等，Oncogene 25(36)：5056-62(2006)适合不依赖于BCR信号而存活，它们对R406不敏感(Chen，Monti等，2008)。在各种浓度的各Syk抑制剂的存在或不存在下培养72小时后，测试这些细胞系的增殖。如在图18C的表中所示，各化合物抑制依赖Syk的SUDHL细胞系增殖，IC50值在低μM范围内。Toledo细胞增殖需要高得多的浓度。P420-89双重抑制Syk和JAK激酶的抗增殖作用似乎不大于单一抑制Syk的抗增殖作用。
Syk的选择性抑制足以在“BCR型”NHL细胞系中诱发凋亡。将细胞与1或3μM实施例87Syk特异性抑制剂一起温育72h。如图12A所示，SUDHL-4和-6细胞各自凋亡，而Toledo和Karpas-422细胞未凋亡(图12A)。在平行实验中，实施例596和实施例87特异性抑制Syk，仅在SUDHL和Ramos细胞系中诱发凋亡。作为对比，有效抑制Syk和JAK激酶的P420-89在所有“BCR型”细胞系和缺乏BCR及BLNK表达的多发性骨髓瘤细胞系Karpas-422和JJN-3中诱发凋亡(Sprangers，Feldhahn等，Oncogene 25(36)：5056-62(2006)。Toledo细胞持续对所有3种化合物不敏感(图12B)。在另一个实验中，发现SUDHL-6和Toledo细胞对用1μM PMA处理72h诱发的凋亡同等敏感。这些数据证明，某些NHL细胞系的存活特别需要Syk。
实施例622：异种移植研究和肿瘤及血浆浓度分析
抑制Syk可在异种移植小鼠模型中阻止肿瘤形成。小鼠得自(公司)，在临用前，使动物适应环境至少3天。用27号针，将Ramos细胞(3×106)皮下注射到清醒小鼠的后侧腹区域，注射体积小于0.5ml。注射后，将小鼠随机分为若干处理组(n＝15)，通过经口管饲法给予溶媒或10、15或20mg/kg的Syk抑制剂实施例87，每日两次。每周称重体重至少两次，从肿瘤明显形成开始，每周用卡尺测定肿瘤两次直至研究结束。通过卡尺测定，用式[最大长度×宽度×高度×π/6]计算肿瘤体积。持续每日两次给予溶媒或实施例87直至溶媒或任何处理组出现大小超过1.5克的肿瘤。研究终止时(接种Ramos 5周后)，将小鼠用氯胺酮混合物麻醉。通过心脏穿刺采集血样，用于CBC和血浆浓度测定，颈脱臼将小鼠无痛处死。然后将肿瘤切除，称重。将一半肿瘤在液氮快速冷冻，用于测定肿瘤组织中实施例87的浓度，将另一半放入10％缓冲甲醛液，用于组织学研究。
在异种移植小鼠模型中，评价Syk抑制对Ramos肿瘤形成的作用。从开始接种肿瘤细胞日起，给予小鼠10、15或20mg/kg实施例87或溶媒对照，每日两次。当肿瘤开始形成时，肿瘤接种约3周后，开始卡尺测定，每3天重复测定直至研究终止。当肿瘤开始达到约1.5mg时，终止研究，此时将肿瘤切除，称重。对肿瘤和血浆样品进行药物动力学分析。
用Kontes
Figure BPA00001277505203971
Microtube Pellet Pestle
Figure BPA00001277505203972
棒和电机(Kimble Chase，Vineland，NJ)，将各肿瘤样品按3ml盐水/克肿瘤均化。用液相色谱串联质谱仪(LC/MS/MS)分析血浆和肿瘤样品中的实施例87浓度。简而言之，将血浆和肿瘤样品在96孔CaptivaTM滤板(0.2μm，Varian，Inc.，Palo Alto，CA)中处理。将血浆和均化肿瘤样品等份试样用乙腈沉淀，该乙腈溶液含200ng/mL：
内标化合物A。
将混合物旋转离心，于4℃下冷冻30分钟，使蛋白沉淀完全。将混合物过滤到96孔收集板中。将滤液注射到配备湍流-离子喷雾源的Sciex API3000 LC/MS/MS中。在Phenomenex Luna 5μ HILIC柱(4.6×100mm，5mm；Phenomenex，Torrance，CA)上分离实施例87和化合物A。设置10％流动相A(0.1％甲酸/水)和90％流动相B(0.1％甲酸/90％乙腈，10％水)的流动相梯度混合物在1.1分钟内变为65％流动相B，然后流动相B在0.01分钟内从65％变为90％的梯度程序。按照正离子模式，测定对应于化合物A(内标)的m/z 357/295产物离子的峰面积的实施例87的m/z 394/360产物离子的峰面积。分析范围为2-5000ng/ml。
药物动力学分析显示，在稳态时，肿瘤中实施例87的浓度符合在10、15和20mg/kg剂量组血浆中观察到的浓度-时间模式。观察到，Cmax、AUC(0-8)和肿瘤Cmin按非线性方式随剂量增加而增加，但注意到，血浆Cmin增加按比例方式随剂量增加。在所有检验剂量下，血浆中药物的平均Cmax和AUC(0-8)比肿瘤中药物的平均Cmax和AUC(0-8)大至少2倍；但是，肿瘤中药物的平均最低浓度(Cmin)比血浆中药物的高(表14A)，表明实施例87在肿瘤室中蓄积。
表14A
在血浆中测定
Figure BPA00001277505203991
在肿瘤中测定
Figure BPA00001277505203992
表14B
Figure BPA00001277505203993
注释：给予AM剂量后，在收获日采集最低(0)、1.5、4和8h样品。在收获日不给予第二个剂量；因此，给予单个AM剂量后，在稳态时，测定以上药物动力学值。
*仅一个肿瘤样品可在8h时间点使用，可能为异常值(在8h时肿瘤中浓度为608ng/ml)；因此，在0-4h期间，测定15mg/kg BID实施例87剂量组的药物动力学参数。结果发现，该剂量组的AUC(0-8)和按肿瘤/血浆比计的AUC可能被低估。
由Cmin测得的肿瘤/血浆比的增加表明，血浆与肿瘤的Cmin差异随剂量增加变得更为显著(表14B)。由Cmax和AUC(0-8)测得的各剂量组的肿瘤/血浆比相似。在整个给药期，在10、15和20mg/kg实施例87的稳态浓度下，肿瘤浓度分别持续大于60、170和640nM。
在给予所有3种浓度的实施例87的小鼠体内Ramos肿瘤生长被抑制。这是由卡尺测定(未提供数据)得到的第一个证据，该卡尺测定显示在Syk抑制剂的存在下肿瘤生长速度减慢。研究结束后，将小鼠无痛处死，将肿瘤切除，称重；数据列于图18A。与卡尺测定相符，相对于溶媒对照，所有给药组的平均肿瘤重量减少具有统计学显著性。这些数据表明，亚微摩尔浓度的实施例87可阻止攻击性NHL细胞系在小鼠中形成肿瘤。
给予Syk抑制剂的小鼠中任何亚群血液白细胞数未下降。事实上，观察到的唯一作用是用15mg/kg实施例87处理的小鼠中淋巴细胞数上升，在给予10或20mg/kg的实施例87的小鼠中未能重复该结果(图18B)。经分析，各细胞亚型的相对百分率不受Syk抑制剂的影响(未提供数据)。按平均值计，用溶媒对照处理的小鼠的体重增加9.45％。另外，在整个研究过程中，用10、15和20mg/kg实施例87处理的小鼠平均体重分别增加0.27％、减少1.67％和增加2.27％。但是，体重变化％与肿瘤生长无关(R2＝0.27)。这些数据表明，Syk活性抑制的确介导肿瘤生长抑制。
还在Ramos肿瘤小鼠异种移植模型中测试了Syk特异性抑制剂实施例87的活性。在所有试验浓度下，在BID给予实施例87的小鼠中，观察到具有统计学显著性的肿瘤生长减少。最低试验浓度为10mg/kg，在全天中，达到的肿瘤浓度为64-140nM。在这些浓度下，体内肿瘤生长抑制与在＜125nM浓度下发现的抑制BCR诱导的Ca2+通量和远端BCR向pERKY204发出信号的结果相符(图11和13)。Syk的选择性药理学抑制产生了对NHL细胞系的繁殖和存活的作用。这些数据说明，选择性靶向Syk同样可在多种B-细胞增殖症中具有临床效益。
根据本文中详述的实验可知，Syk与B细胞发育、繁殖和存活有关。另外，Syk还可能作为致癌基因。在过继性转移的骨髓细胞中，构成型活性的Syk的表达在小鼠中诱发白血病，Syk的过度活性与多种人淋巴瘤有关。鉴于Syk在B细胞生物学中的作用，其选择性抑制可在B细胞增殖症中足以提供临床效益，同时能够减少其它不具有靶向导激酶抑制导致的毒性。
本发明提供了多种实施方案。很显然，可改变实施例，以提供本发明其它实施方案。因此，可以理解，本发明范围由其权利要求而非由作为示例的具体实施方案来限定。
本说明书中引用的和/或列在本申请数据单中的所有以上美国专利、美国专利申请公布、美国专利申请、外国专利、外国申请和非专利申请通过引用全文结合到本文中。由上述应当理解，尽管本文中为了说明的目的描述了本发明的某些实施方案，但在不偏离本发明精神和范围的前提下，可进行各种改进。因此除其权利要求外，本发明不受其它限制。

Claims (90)

1.式(I)的化合物、其互变异构体或药学上可接受的盐：
其中：
Y1选自：
Figure FPA00001277505100012
Z为O或S；
D1选自：
(a)被基团R5取代的苯基，其中所述苯基任选进一步被1-2个取代基R7a取代，所述取代基独立选自C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代、C1-8烷基磺酰基和杂环基；
R5选自：
(i)杂芳基；
(ii)杂环基；
(iii)C1-8亚烷基杂环基；
(iv)亚苯基杂芳基
(v)亚苯基杂环基
(vi)-L-苯基；
(vii)-L-杂环基；和
(viii)乙酰氧基；
L选自-CO-、-O-、-SO2-、-CONH-和-CONHCH2-；
各R5任选被1-2个取代基进一步取代，所述取代基独立选自C1-8烷基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基氨基、C1-8烷基羰基、氨基羰基、氰基、羟基、氧代、卤代、卤代C1-8烷基、氨基磺酰基、C3-8环烷基和芳基；
(b)被取代基R7b取代的萘基，所述取代基选自卤素、C1-8烷基羰基、C1-8烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基羰基和氨基羰基；
(c)任选被1-2个取代基R7c取代的C3-8环烷基，所述取代基独立选自C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代、C1-8烷基磺酰基和杂环基；
(d)任选被1-2个取代基R7d取代的杂芳基；所述取代基独立选自：C1-8烷基、氨基、羟基、氧代、卤代、C1-8烷氧基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基羰基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8氨基环烷基、氨基C1-8亚烷基羰基、氨基羰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基羰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8烷氧基羰基、C1-8烷氧基羰基氨基、芳基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基、C1-8烷基磺酰基、氨基C1-8亚烷基磺酰基、氨基磺酰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基磺酰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8烷氧基磺酰基、氨基磺酰基和C1-8烷基杂环基；和
(e)被1-2个取代基R7e取代的杂环基；所述取代基独立选自C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代、C1-8烷基磺酰基和杂环基；
各E1独立选自C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、氨基羰基、C1-8烷氧基羰基C1-8亚烷基、C1-8烷氧基羰基C1-8C1-8烷氧基、C1-8烷氧基羰基氨基、氧代、卤代、氰基、卤代C1-8烷基、卤代C1-8烷氧基、氨基磺酰基、杂芳基亚硫酰基；氨基、羟基、C1-8芳基亚烷基、苯基、氨基C1-8烷基、氨基C3-8环烷基、杂环基、杂芳基和杂环基C1-8亚烷基；
R1a、R1b和R1c各自独立选自：H、C1-8烷基、羟基C1-8烷基、C1-8卤代烷基、氨基、C1-8烷基氨基、C1-8烷氧基羰基氨基C1-8亚烷基、C3-8环烷基、杂芳基、C1-8烷基C3-8环烷基、C1-8烷硫基C1-8烷基、C1-8烷基磺酰基C1-8亚烷基、氨基羰基、C1-8烷氧基C1-8烷基、卤代C1-8烷基、芳基和杂环基；其中所述芳基任选被以下基团取代：羟基、C1-8烷氧基、卤代或卤代C1-8烷基；或与R3以及它们所连接的原子一起形成C3-8环烷基或杂环烷基环；
R2选自H、氨基、C1-8烷基氨基、羟基羰基氨基C1-8烷氧基羰基氨基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基和羟基；
R3选自H、C1-8烷基、C1-8烷基氨基、氨基氨基C1-8烷基、羧基、C1-8烷基氨基C1-8烷基、C1-8烷氧基C1-8烷基、羟基C1-8烷基；羧基C1-8烷基、C3-8环烷基C1-8烷基、芳氧基C1-8烷基、芳基C1-8烷基、杂芳基C1-8烷基、羟基C1-8烷氧基和羟基C1-8烷氧基；或可与R1c或R4以及它们所连接的原子结合形成C3-8环烷基或杂环基环；
R4为H或烷基，或可与R3以及它们所连接的原子结合形成C3-8环烷基或杂环基环；
下标n为0、1、2、3或4；
下标m为1、2或3的整数；且波纹线表示与分子其余部分的连接点。
2.权利要求1的化合物，其中Y1为：
Figure FPA00001277505100031
3.权利要求1，其中Y1为：
4.前述权利要求中任一项的化合物，其中Z为S。
5.前述权利要求中任一项的化合物，其中Z为O。
6.权利要求1-3中任一项的化合物，其中Z为S。
7.前述权利要求中任一项的化合物，其中D1为苯基。
8.权利要求7的化合物，其中R5为杂芳基。
9.权利要求7的化合物，其中R5为杂环基。
10.权利要求7的化合物，其中R5为C1-8亚烷基杂环基。
11.权利要求7的化合物，其中R5为亚苯基杂芳基。
12.权利要求7的化合物，其中R5为亚苯基杂环基。
13.权利要求7的化合物，其中R5为-L-苯基。
14.权利要求7的化合物，其中R5为-L-杂环基。
15.权利要求13或14的化合物，其中L为-CO-。
16.权利要求13或14的化合物，其中L为-O-。
17.权利要求13或14的化合物，其中L为-SO2-。
18.权利要求13或14的化合物，其中L为-CONH-。
19.权利要求13或14的化合物，其中L为-CONHCH2-。
20.权利要求7的化合物，其中R5为乙酰氧基。
21.权利要求1-3中任一项的化合物，其中D1为萘基。
22.权利要求1-3中任一项的化合物，其中D1-选自：
Figure FPA00001277505100041
且
X为卤素。
23.权利要求1-3中任一项的化合物，其中D1为C3-8环烷基。
24.权利要求1-3中任一项的化合物，其中D1选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
25.权利要求1-3中任一项的化合物，其中D1为杂芳基。
26.权利要求1-3中任一项的化合物，其中D1为杂环基。
27.前述权利要求中任一项的化合物，其中单独或作为含杂芳基的基团的一部分的所述杂芳基选自：
Figure FPA00001277505100043
它们各自任选被1-2个取代基取代，所述取代基独立选自：C1-8烷基、氨基、羟基、氧代、卤代、C1-8烷氧基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基羰基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8氨基环烷基、氨基C1-8亚烷基羰基、氨基羰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基羰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8烷氧基羰基、C1-8烷氧基羰基氨基、芳基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基、C1-8烷基磺酰基、氨基C1-8亚烷基磺酰基、氨基磺酰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基磺酰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8烷氧基磺酰基、氨基磺酰基和C1-8烷基杂环基。
28.前述权利要求中任一项的化合物，其中单独或作为含杂芳基的基团的一部分的所述杂芳基选自：
Figure FPA00001277505100051
它们任选被1-3个R7d取代基取代，所述取代基独立选自：C1-8烷基、C1-8烷基羰基、C1-8氨基环烷基、氨基C1-8亚烷基羰基、氨基羰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基羰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8烷氧基羰基、氨基羰基、氨基、C1-8烷氧基羰基氨基、芳基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基、羟基、C1-8烷氧基、C1-8烷基磺酰基、氨基C1-8亚烷基磺酰基、氨基磺酰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基磺酰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8烷氧基磺酰基、氨基磺酰基、氧代、卤代、苯基和C1-8烷基杂环基；且波纹线表示与分子其余部分的连接点。
29.权利要求1-3中任一项的化合物，其中R5选自
Figure FPA00001277505100061
它们各自任选被1-2个取代基取代，所述取代基独立选自C1-8烷基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基羰基、氨基羰基、羟基、氧代、卤代、卤代C1-8烷基、氨基磺酰基和C3-8环烷基。
30.权利要求29的化合物，其中R5选自
它们各自任选被1-2个取代基取代，所述取代基独立选自C1-8烷基、羟基C1-8烷基-、氨基C1-8烷基、C1-8烷基羰基、氨基羰基、羟基、氧代、卤代、卤代C1-8烷基、氨基磺酰基和C3-8环烷基。
31.权利要求29的化合物，其中R5选自
Figure FPA00001277505100071
32.权利要求1-3中任一项的化合物，其中：D1为双环杂芳基。
33.权利要求32的化合物，其中D1选自：
Figure FPA00001277505100072
它们任选被1-3个R7d取代基取代，所述取代基独立选自：C1-8烷基、C1-8烷基羰基、氨基C1-8亚烷基羰基、氨基羰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基羰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8亚烷基羰基、羟基C1-8烷氧基羰基、氨基羰基、氨基、C1-8烷氧基羰基氨基、芳基C1-8烷氧基羰基氨基、羟基、C1-8烷氧基、C1-8烷基磺酰基、氨基C1-8亚烷基磺酰基、氨基磺酰基、C1-8亚烷基氨基C1-8亚烷基磺酰基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8亚烷基磺酰基、羟基C1-8烷氧基磺酰基、氨基磺酰基、氧代、卤代、苯基和C1-8烷基杂环基；和
波纹线表示与分子其余部分的连接点。
34.权利要求33的化合物，其中D1选自：
Figure FPA00001277505100081
Figure FPA00001277505100082
且
波纹线表示与分子其余部分的连接点。
35.权利要求34的化合物，其中D1选自：
Figure FPA00001277505100091
且
波纹线表示与分子其余部分的连接点。
36.权利要求34的化合物，其中D1选自：
Figure FPA00001277505100092
Figure FPA00001277505100093
且
波纹线表示与分子其余部分的连接点。
37.权利要求36的化合物，所述化合物选自：
Figure FPA00001277505100101
38.权利要求1-3中任一项的化合物，其中各E1独立选自C1-8烷基、杂芳基、杂环基、卤代、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、C1-8酰基、氨基C1-8烷基、氨基磺酰基、C1-8烷基磺酰基和酰氨基。
39.权利要求38的化合物，其中各E1独立选自
Figure FPA00001277505100102
40.权利要求38的化合物，其中各E1独立选自
Figure FPA00001277505100103
41.前述权利要求中任一项的化合物，其中R2为氨基。
42.权利要求2的化合物，其中：所述部分：
Figure FPA00001277505100111
为
Figure FPA00001277505100112
其中X和Y各自独立选自：CH2、NH、NCOCH3和S。
43.权利要求2的化合物，其中所述部分：
Figure FPA00001277505100113
选自：
其中R8a和R8b各自独立为H、羟基、卤代，或如果在相邻碳原子上，可与它们所连接的原子结合形成稠合的苯环；
R9a和R9b各自独立为H、羟基、卤代，或如果在相邻碳原子上，可与它们所连接的原子结合形成稠合的苯环；且
波纹线表示与分子其余部分的连接点。
44.权利要求2的化合物，其中：所述部分：
Figure FPA00001277505100115
为
Figure FPA00001277505100116
其中R8a和R8b各自独立为H，或可与它们所连接的原子结合形成稠合的苯环；且波纹线表示与分子其余部分的连接点。
45.权利要求2的化合物，其中所述化合物具有下式：
Figure FPA00001277505100121
其中X和Y各自独立选自：CH2、NH、NCOCH3和S。
46.权利要求2的化合物，其中所述化合物具有下式：
Figure FPA00001277505100122
47.权利要求2的化合物，其中所述化合物具有下式：
Figure FPA00001277505100123
其中X和Y各自独立选自：CH2、NH、NCOCH3和S。
48.权利要求2的化合物，其中所述化合物具有下式：
Figure FPA00001277505100124
49.权利要求2的化合物，其中所述化合物具有下式：
Figure FPA00001277505100131
50.权利要求2的化合物，其中所述化合物具有选自以下的式：
Figure FPA00001277505100132
51.权利要求2的化合物，其中所述化合物具有选自以下的式：
Figure FPA00001277505100133
其中X和Y各自独立选自：CH2、NH、NCOCH3和S。
52.权利要求2的化合物，其中所述化合物具有选自以下的式：
Figure FPA00001277505100134
53.权利要求2的化合物，其中所述化合物具有下式：
Figure FPA00001277505100141
其中X和Y各自独立选自：CH2、NH、NCOCH3和S。
54.权利要求46的化合物，所述化合物选自：
Figure FPA00001277505100142
55.权利要求46的化合物，所述化合物选自：
Figure FPA00001277505100161
56.权利要求54的化合物，所述化合物具有下式：
57.权利要求54的化合物，所述化合物具有下式：
Figure FPA00001277505100172
58.权利要求54的化合物，所述化合物具有下式：
Figure FPA00001277505100173
59.权利要求3的化合物，其中所述部分：
Figure FPA00001277505100174
为
Figure FPA00001277505100175
且波纹线表示与分子其余部分的连接点。
60.权利要求59的化合物，其中所述化合物具有下式：
61.权利要求59的化合物，其中所述化合物具有下式：
Figure FPA00001277505100182
62.权利要求59的化合物，其中所述化合物具有选自以下的式：
Figure FPA00001277505100183
63.权利要求59的化合物，其中R1a选自C1-8烷基、C3-8环烷基、芳基、杂芳基和杂环基。
64.权利要求2的化合物，其中所述部分：
Figure FPA00001277505100184
选自：
Figure FPA00001277505100185
Figure FPA00001277505100191
65.一种化合物或其互变异构体或药学上可接受的盐，所述化合物具有选自式IIa-c的结构：
Figure FPA00001277505100192
其中：
E2a选自C1-8烷氧基、C1-8烷基C3-8环烷基羰基氨基、C1-8烷氧基C1-8亚烷基羰基氨基-、C1-8烷氧基羰基氨基和C1-8烷基羰基氨基；
R3选自H、卤代、C1-8烷基和C1-8烷氧基；和
R4选自H、C1-8烷基和C1-8烷氧基C1-8亚烷基。
66.式(IId)的化合物、其互变异构体或药学上可接受的盐：
Figure FPA00001277505100201
其中R3为H或C1-8烷基。
67.下式的化合物：
Figure FPA00001277505100202
68.式(IIe)的化合物：
Figure FPA00001277505100203
其中：D2为双环芳基。
69.权利要求68的化合物，其中：D2为任选被1-2个取代基E2b取代的萘基，所述取代基独立选自卤代、C1-8烷氧基和C1-8烷基氨基羰基。
70.权利要求68的化合物，其中D2为
Figure FPA00001277505100204
且波纹线表示与分子其余部分的连接点。
71.权利要求68的化合物，其中D2为
且波纹线表示与分子其余部分的连接点。
72.权利要求68的化合物，其中D2选自：
且
且波纹线表示与分子其余部分的连接点。
73.权利要求68的化合物，所述化合物具有下式
Figure FPA00001277505100212
74.化合物，所述化合物具有实施例中给出的结构。
75.化合物，所述化合物具有表中列举的结构。
76.化合物，所述化合物具有图中所示结构。
77.组合物，所示组合物含前述权利要求中任一项的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
78.抑制syk或JAK激酶或至少部分由syk激酶活性介导的信号转导通路的方法，所述方法包括使细胞与前述权利要求中任一项的化合物接触的步骤。
79.在患者中治疗至少部分由syk激酶活性介导的病症或疾病的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的患者治疗有效量的权利要求77的组合物的步骤。
80.权利要求79的方法，其中所述病症或疾病选自心血管病、炎性疾病和自身免疫疾病及细胞增殖病症。
81.权利要求79的方法，其中所述心血管病选自再狭窄、血栓形成、免疫血小板减少性紫癜、肝素引起的血小板减少症、扩张型心肌炎、镰状细胞病、动脉粥样硬化症、心肌梗塞、脉管炎症、不稳定心绞痛和急性冠状动脉综合征。
82.权利要求79的方法，其中所述炎性疾病选自过敏、哮喘、类风湿性关节炎、B细胞介导的疾病例如非霍奇金氏淋巴瘤、抗磷脂综合征、红斑狼疮、银屑病、多发性硬化和晚期肾病。
83.权利要求79的方法，其中所述心血管病选自血栓形成、免疫血小板减少性紫癜和肝素引起的血小板减少症。
84.权利要求79的方法，其中所述炎性疾病为类风湿性关节炎或非霍奇金氏淋巴瘤。
85.权利要求79的方法，其中所述镰状细胞病选自镰状细胞贫血病、血红蛋白C疾病、镰状细胞β+地中海贫血和镰状细胞β0地中海贫血。
86.权利要求79的方法，其中所述免疫相关疾病选自T细胞介导的疾病、自身免疫疾病、移植物抗宿主病、异种移植物抗宿主病、IV型过敏反应和同种异体移植物排斥。
87.权利要求79的方法，其中所述自身免疫疾病选自溶血性贫血、免疫血小板减少性紫癜、多发性硬化、斯耶格伦综合征、糖尿病、类风湿性关节炎、红斑狼疮和银屑病。
88.权利要求79的方法，其中所述细胞增殖症为白血病、淋巴瘤、骨髓增生症、血癌和慢性自发性骨髓纤维变性。
89.权利要求79的方法，其中所述病症为急性骨髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。
90.药盒，所述药盒含权利要求77的组合物、包装和使用说明书。
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