CN102018699A

CN102018699A - Xyloketal B在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用

Info

Publication number: CN102018699A
Application number: CN2010105865974A
Authority: CN
Inventors: 王冠蕾; 庞冀燕; 林永成; 刘捷; 解煜; 刘灿昭
Original assignee: Sun Yat Sen University
Current assignee: Sun Yat Sen University
Priority date: 2010-12-14
Filing date: 2010-12-14
Publication date: 2011-04-20
Anticipated expiration: 2030-12-14
Also published as: CN102018699B

Abstract

本发明公开了Xyloketal B在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。实验证明，Xyloketal B对动脉粥样硬化损伤具有缩小斑块面积和调血脂作用，可以通过保护血管内皮、调节血脂水平，如降低LDL-C、升高HDL-C和体内抗氧化应激等多种作用机制防治动脉粥样硬化。本发明Xyloketal B在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用开拓了Xyloketal B的新应用领域，并且Xyloketal B安全无毒，药理作用强，有很好的药用前景。

Description

Xyloketal B在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用

技术领域

本发明涉及Xyloketal B在制药领域中的用途，具体涉及Xyloketal B在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。

背景技术

Xyloketal类化合物是从南海红树林内生真菌Xyloraria sp. 2508分离得到的一系列新化合物，结构珍奇，有10多个，Xyloketal B是其中之一。“三类南海海洋真菌次级代谢产物的合成研究进展”，有机化学2009年第29卷第3期341-349页公开了这种化合物的结构及制备方法。即以间苯三酚为原料经过一锅法、多米诺式反应合成得到。中国专利申请200910042204.0公开了Xyloketal B在制备治疗自由基损伤疾病的药物中的应用，指出其在治疗自由基损伤疾病中疗效显著，尤其适合于治疗神经元缺血缺氧再灌注损伤，具有安全无毒，药理作用强的特点。

动脉粥样硬化（AS）是缺血性心脑血管病的主要病理学基础，防治AS则是防治心脑血管病的重要措施。xyloketal B在抗动脉粥样硬化中的应用还未见报道。。

发明内容

本发明的目的在于提供Xyloketal B在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

Xyloketal B 在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。

上述抗动脉粥样硬化包括缩小粥样硬化斑块面积、保护血管内皮、调节血脂水平、抗氧化应激中的一种或几种。

上述调节血脂水平是指降低LDL-C（低密度脂蛋白胆固醇）、升高HDL-C（高密度脂蛋白胆固醇）中的一种或两种。

Xyloketal B在制备抗氧化应激药物中的应用，抗氧化应激是指抗Ox-LDL（氧化型低密度脂蛋白）抗体。

与现有的Xyloketal B的应用相比，本发明具有以下有益效果：

本发明的化合物Xyloketal B能够降低ApoE（载脂蛋白E）基因缺陷动脉粥样硬化小鼠血清中LDL-C水平，升高其HDL-C水平，能够显著减少粥样斑块内的巨噬细胞沉积。体内应用Xyloketal B可以通过保护血管内皮、调节血脂水平和体内抗氧化应激等多种作用机制防治动脉粥样硬化。本发明发掘了Xyloketal B新的制药用途，开拓了一个新的应用领域，且Xyloketal B安全无毒，药理作用强，具有很好的药用前景。

附图说明

图1：油红“O”染色分析Xyloketal B对小鼠主动脉内膜粥样斑块面积的影响，(A)为油红“O”染色示各组主动脉内膜及粥样斑块；(B)为定量分析斑块面积与整个主动脉内膜面积的比值，^a vs C57BL／6J, P<0.001; ^b vs ApoE^(-/-), P<0.05; ^c vs Vehicle, P<0.05; ^d vs Simv., P>0.05, n=9；

图2：油红“O”染色分析Xyloketal B对小鼠主动脉窦粥样斑块面积的影响，(A)为油红“O”染色示各组主动脉窦横切面及粥样斑块；(B)为定量分析斑块面积与整个主动脉窦横切面面积的比值，^a vs C57BL／6J, P<0.001; ^b vs ApoE^(-/-), P<0.05; ^c vs Vehicle, P<0.05; ^d vs Simv., P>0.05, n=9；

图3：各组小鼠血清LDL-C、HDL-C水平比较，A为血清LDL-C，B为血清HDL-C，^a vs C57BL／6J, P<0.001; ^b vs ApoE^(-/-), P<0.05; ^c vs Vehicle, P<0.01; ^d vs Simv., P>0.05, n=9；

图4：各组小鼠血清中抗Ox-LDL抗体水平比较，^a vs C57BL／6J, P<0.001; ^b vs ApoE^(-/-), P<0.05; ^c vs Vehicle, P<0.05; ^d vs Simv., P>0.05, n=9；

图5：各组小鼠主动脉窦斑块内 mac-3沉积比较(40×) ；

图6：免疫荧光方法比较各组小鼠主动脉根部血管内皮标识物 PECAM-1的表达，红色示血管内皮细胞，蓝色示DAPI复染细胞核，各组左侧图示完整血管横切面，(10×); 右侧图为白色小方框局部区域放大，(40×)。

具体实施方式

实施例1 Xyloketal B对动脉粥样硬化小鼠斑块面积的影响

（一）材料与方法

1、药物：

Xyloketal B，白色粉末。先溶于DMSO，贮存浓度80mmol/L，保存于4℃备用，给药时以10%丙二醇生理盐水稀释后，经腹腔注射给药（Xyloketal B终浓度 14mg/kg·d）。辛伐他汀购自杭州默沙东制药有限公司（40mg片剂，批号为07279），给药时研成粉末，溶于去离子水中灌胃给药（辛伐他汀终浓度为10 mg/kg·d）。

2、实验动物分组、喂养及给药

本实验选用apoE基因敲除小鼠（品系C57BL/6J，雄性，清洁级，5周龄）及野生型雄性C57BL／6J小鼠。所有动物适应性饲养1周，共分成5组，包括野生型C57BL／6J小鼠组（9只）及4组apoE基因敲除小鼠（n＝9）：模型组(ApoE^(-/-))、溶剂对照组 (ApoE^(-/-)+Vehicle])、辛伐他汀组(ApoE^(-/-)+Simvastatin )、Xyloketal B防治组( ApoE^(-/-)+Xyl-B )。给药和喂饲方案如下：

① 野生型雄性C57BL／6J小鼠组：高脂饲料喂养；

② 模型组：高脂饲料喂养；

③ 溶剂对照组：给予高脂饲料喂养，同时腹腔注射溶剂(按Xyloketal B终浓度 14mg/kg·d计算10%丙二醇生理盐水给予量，但不含Xyloketal B )；

④ Xyloketal B防治组：给予高脂饲料喂养，同时腹腔注射Xyloketal B （终浓度14mg/kg·d）；

⑤ 辛伐他汀组：给予高脂饲料喂养，同时灌胃给予辛伐他汀（10 mg/kg·d）。

高脂动物饲料（western-type diet, WD）由广东省实验动物中心提供，由普通小鼠饲料加入脂肪和胆固醇（含21%脂肪和0.15%胆固醇，w/w）制成，辐照消毒。所有动物寄养在中山大学公共卫生学院清洁级动物实验室，均喂养高脂饲料。按照上述动物分组，将5组小鼠按组别在层流架中分笼喂养，自由饮水摄食，室温控制在24℃左右，12小时白天/夜晚周期，每天用紫外灯消毒一次。所有动物同步给药，每天一次，实验到第16周末结束，此时小鼠为22周龄。

3、形态学检测方法（油红“O”染色）

将动物麻醉后断头处死，在剑突下剪开皮肤，小心打开小鼠腹腔，暴露胸腔，迅速用眼科剪在心尖处剪开一小口，从该伤口处进针，灌注生理盐水8～10分钟(灌注速度为4mL/分钟)，然后灌注4％多聚甲醛固定液8～10分钟。解剖分离出心脏，主动脉。主动脉在10%甲醛中固定24小时后，用显微眼科剪纵向剪开。用PBS洗3次，0.3%油红“O”染色液染色，然后在60%异丙醇中脱去未染上的油红“O”，用蒸馏水清洗。用显微镜观察主动脉窦部和主动脉弓处红色的动脉粥样硬化斑块的情况，并应用全自动图像分析系统，统计分析各组动物主动脉粥样硬化斑块的面积占主动脉内膜总面积的百分比。

4、统计分析方法

结果用mean±S.E.M.表示。组间分析用spss10.0软件包进行单因素方差分析（ANOVA）检验，P<0.05时为统计学上有显著性差异。

（二）实验结果

1、Xyloketal B对小鼠主动脉粥样硬化斑块面积的影响

主动脉油红“O”染色结果如图1，野生型C57BL／6J小鼠组、模型组（ApoE^(-/-)）、溶剂对照组(ApoE^(-/-)+Vehicle)、辛伐他汀组(ApoE^(-/-)+Simvastatin)、Xyloketal B防治组(ApoE^(-/-)+xyl-B)的主动脉粥样斑块面积分别为0、20.1±1.5%、20.7±5.2%、12.9±2.0%、9.4±1.0%。野生型C57BL／6J小鼠组未见斑块形成，模型组、溶剂对照组均有明显的斑块形成，与野生型C57BL／6J小鼠组比较具有显著性差异（P<0.05, n=9）。模型组、溶剂对照组相比无显著性差异（P>0.05, n=9）。Xyloketal B防治组的斑块面积与溶剂对照组相比明显减少（P<0.05, n=9）、辛伐他汀组斑块面积与模型组相比较明显减少（P<0.05, n=9），但Xyloketal B组与辛伐他汀组两组斑块面积并无显著性差异,（P>0.05, n=9）。B表示定量分析斑块面积与整个主动脉内膜面积的比值。

、Xyloketal B对小鼠主动脉窦粥样硬化斑块面积的影响

主动脉窦冰冻切片油红“O”染色结果如图2A，图2B示定量分析结果，野生型C57BL／6J小鼠组、模型组、溶剂对照组、辛伐他汀组、Xyloketal B防治组的主动脉窦处粥样斑块面积分别为0、32.7±2.4%、36.9±4.1%、29.9±3.8%、21.6±2.8%。野生型C57BL／6J小鼠组未见粥样硬化斑块，模型组、溶剂对照组均有明显的斑块形成，与野生型C57BL／6J小鼠组比较有显著性差异（P<0.05, n=9），但模型组、溶剂对照组相比无显著性差异（P>0.05, n=9）。Xyloketal B防治组的斑块面积与溶剂对照组相比明显减少（P<0.05, n=9）、辛伐他汀组斑块面积与模型组相比较明显减少（P<0.05, n=9），但Xyloketal B组与辛伐他汀组两组斑块面积并无显著性差异。（P>0.05, n=9）。B表示定量分析斑块面积与整个主动脉窦横切面面积的比值。

（三）实验讨论及化合物评价

上述结果表明ApoE 基因缺陷动脉粥样硬化小鼠模型建模成功，Xyloketal B在所用剂量下有明显的缩小斑块面积的作用。ApoE 基因缺陷动脉粥样硬化小鼠模型是国际公认的动脉粥样硬化动物模型，其发病机制和病理改变与人类动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS) 过程相似。Xyloketal B在整体动物模型的应用实验表明该化合物可防治AS。

载脂蛋白E(ApoE)是34kDa大小的多功能糖蛋白，主要在肝脏合成，是CM、VLDL、IDL和部分HDL的重要组分，ApoE作为一种配体可参与LDL受体介导的血浆脂蛋白的清除，并参与胆固醇的再分布、转运和胞内胆固醇的外流等重要环节，在脂类代谢中发挥重要作用。ApoE基因敲除小鼠动物模型能很好地重现人类AS发病过程中粥样硬化斑块形成的全部时期，是国际公认的AS模型。

他汀类药物是目前临床应用广泛的抗动脉粥样硬化药物，其抗动脉粥样硬化作用的靶点是通过选择性阻断胆固醇(CH)合成的限速酶（HMG-CoA还原酶）,影响CH生物合成，同时代偿性地促进LDL受体合成，加速LDL降解，从而有效地降低血脂。我们在实验中采用辛伐他汀(Simvastatin)作为阳性对照药物，发现Xyloketal B在所用剂量下其缩小斑块面积的效应与辛伐他汀作用类似。

我们先前的研究发现Xyloketal B在体外对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤模型有明显保护作用，提示Xyloketal B具有极强的抗氧化应激损伤和保护血管内皮作用。Ox-LDL诱导血管内皮损伤是动脉粥样硬化发病过程中的血管内皮病变的重要机制，因此我们以往的研究已提示该化合物可能在氧化应激相关疾病中（如AS）具有保护血管内皮的作用。但我们先前研究无法证实Xyloketal B 是否具有抗AS疗效。另外，许多在体外细胞实验中针对AS相关发病机制有效的药物，在整体动物模型上并未如预期观察到良好疗效，本实验则在国际公认的AS整体动物模型上新发现其防治动脉粥样硬化的疗效，使其成为抗动脉粥样硬化新药的可能性大大增加。

近年研究提示，抗AS药物除了直接对抗高血脂的有害作用以外，其抗AS效应还得益于非降脂作用机制，如：①改善内皮功能。②抗炎症反应。③促进斑块稳定。④抑制血管平滑肌细胞增殖及迁移。⑤抑制LDL的氧化修饰。⑥抗氧化作用。我们针对Xyloketal B的抗AS机制进行了研究（见实施例2-3）。

实施例2 Xyloketal B对动脉粥样硬化小鼠血脂水平和抗Ox-LDL抗体的影响

（一）材料与方法

1、药物准备，动物模型分组、给药见实施例1

2、血浆和试剂健康人新鲜血浆购于中山大学第一附属医院血液科，Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether) -N,N,N’, N’-tetraacetic acid (EGTA)，聚乙二醇(PEG 6000)，琼脂糖(agarose)，考马斯亮蓝G-250，均购自Sigma公司。酶法检测血脂分析直接高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒、直接低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒。购自中生北控生物科技股份有限公司。血清抗Ox-LDL 抗体测定试剂盒(Protein Detector^TM ELISA Kit)购自 Kirkegaard Perry Labs公司。

3、低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）的分离、提纯和氧化

采用密度梯度离心法分离血浆LDL。用密度1.006 g/ml的溶液（0.85％NaCl，0.01％EDTA，pH 7.6）来配置密度为1.400 g/ml的溴化钠（NaBr）母液，然后用母液按不同比例稀释分别得到密度为1.063 g/ml和1.020 g/ml的密度液。取健康人新鲜血浆100 ml，装入透析袋中，分离前用聚乙二醇浓缩至32 ml，用固体NaBr调节血浆密度达1.200 g/ml。在离心管中分别加入密度为1.200 g/ml的血浆5 ml，密度为1.063 g/ml的密度液4 ml，密度为1.020 g/ml的密度液4 ml。在4℃，50,000 rpm离心5 h。离心后，吸取淡黄色脂蛋白带即为所需的LDL。将LDL于透析液（20 mM Tris-Cl，150 mM NaCl，300 μM EDTA，15 mM NaN3，pH 7.4）中4℃透析24 h，期间换液3次。LDL用0.45 μm微孔滤膜过滤除菌，于4℃避光保存备用。用Bradford法测定蛋白含量。用琼脂糖凝胶电泳法鉴定LDL纯度。氧化主要步骤如下：LDL用PBS调节蛋白浓度至0.5~1 mg蛋白/ml。将LDL用无EDTA的PBS透析24 h以除去EDTA。每1 ml LDL加入100 μM CuSO₄溶液50 μl，使得CuSO₄终浓度为5 μM，于37℃下氧化24 h，然后在含200 μM EDTA的PBS中室温下透析24 h。Ox-LDL用0.45 μm微孔滤膜过滤除菌，于4℃避光保存备用。

采用硫代巴比妥酸反应物质（thiobarbituric acid reactive substances，TBARS）测定法、改良Schuh法和相对电泳迁移率（relative electropherosis mobility，REM）鉴定LDL和ox-LDL的纯度。

4、血生化检测方法

动物实验于第16周末结束时，全部动物禁食（但不禁水）8h，小鼠麻醉后，自小鼠眼眶静脉采血，室温静置3h后离心（4℃，4000rpm，15min），分离血清，－20℃保存备用。分别使用直接高密度脂蛋白胆固醇试剂盒、直接低密度脂蛋白胆固醇试剂盒分析血清HDL-C、LDL-C水平。检测时设3复孔，取平均值。

5、血清抗氧化型低密度脂蛋白抗体水平的测定

按试剂盒Protein Detector ^TM ELISA Kit说明，测定血清中ox-LDL抗体的水平[以Ox-LDL与天然LDL的吸光度(Optical Density ,OD)的差值来表示]。

6、统计学处理

数据资料以mean±S.E.M.表示。组间分析用spss10.0软件包进行单因素方差分析（ANOVA）检验，P<0.05时为统计学上有显著性差异。

（二）实验结果

1、不同实验组小鼠血清HDL-C、LDL-C水平的比较

如图3A，野生型C57BL／6J小鼠组、模型组、溶剂对照组、辛伐他汀组、Xyloketal B防治组血清LDL-C水平分别为：0.8±0.04 mmol/L、15.99±0.61 mmol/L、16.00±0.85 mmol/L、12.14±0.73 mmol/L、13.4±0.78 mmol/L。ApoE 基因缺陷小鼠血清LDL-C 水平明显升高，Xyloketal B、辛伐他汀均可明显降低动脉粥样硬化小鼠血清中LDL-C水平, Xyloketal B与辛伐他汀组LDL-C水平无显著差异。如图3B，野生型C57BL／6J小鼠组、模型组、溶剂对照组、辛伐他汀组、Xyloketal B防治组血清HDL-C水平分别为：3.07±0.24mmol/l、2.2±0.13mmol/l、2.1±0.14mmol/l、2.63±0.13mmol/l、2.78±0.24mmol/l。ApoE 基因缺陷小鼠血清HDL-C 水平明显降低，Xyloketal B、辛伐他汀均可明显升高动脉粥样硬化小鼠血清中HDL-C水平, Xyloketal B与辛伐他汀组HDL-C水平无显著差异。

2、不同实验组小鼠血清抗氧化型低密度脂蛋白抗体水平的比较

检测血清中抗Ox-LDL抗体水平, 如图4所示，野生型C57BL／6J小鼠组、模型组、溶剂对照组、辛伐他汀组、Xyloketal B防治组抗Ox-LDL抗体水平分别为：0.11±0.05、0.51±0.06、0.54±0.09、0.33±0.01、0.24±0.07。ApoE 基因缺陷小鼠血清抗Ox-LDL抗体水平显著升高，Xyloketal B、辛伐他汀均可明显降低ApoE小鼠血清中抗Ox-LDL抗体水平。Xyloketal B组与辛伐他汀组的抗Ox-LDL抗体水平无显著性差异。

（三）实验讨论及化合物评价

脂质代谢障碍的病人极易发生动脉粥样硬化，具有很高的患冠心病的风险，降低血浆中低密度脂蛋白胆固醇（LDL）或升高HDL既是抗AS的重要机制，也是预防心血管疾病发生发展的一个重要措施。

我们的实验结果提示，Xyloketal B能够降低ApoE基因缺陷动脉粥样硬化小鼠血清中LDL-C水平，升高其HDL-C水平。其调血脂强度与辛伐他汀无显著性差异。Xyloketal B还能够减低降低血清中抗Ox-LDL自身抗体水平，这一作用可能得益于Xyloketal B的抗氧化应激作用。

LDL升高是AS发生发展过程中一个最重要的病理生理学机制。当血浆LDL水平升高时，可促使动脉内膜产生氧自由基及其他代谢产物，使进入内皮的LDL发生氧化，成为Ox-LDL，Ox-LDL能抑制其本身与受体结合，并抑制巨噬细胞移动，因而不能像正常LDL那样移出内膜或被巨噬细胞所清除，于是便大量沉积在内膜下。沉积的Ox-LDL可导致内皮细胞通透性增加和内皮功能损伤，使LDL向动脉内膜下的迁移进一步增加。此外Ox-LDL还促使内皮细胞产生白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α），并促使血管细胞表面黏附因子-1（VCAM-1）的大量产生，使血流中的单核细胞与内皮细胞黏附并大量进入内皮下，摄取脂质并转化为巨噬细胞，后者进一步摄取脂质而转化为泡沫细胞，粥样斑块进一步发展增大。

血浆中HDL是拮抗AS发生发展的保护性因素。大量流行病学研究和动物实验表明，血浆HDL水平与AS的发生呈负相关，当血浆LDL-胆固醇水平降低，HDL-胆固醇水平升高时，胆固醇可以从动脉粥样硬化斑块中被清除。HDL有抗动脉粥样硬化发生发展的作用已得到肯定。临床上治疗高脂血症的药物大多数能明显增加HDL-胆固醇水平，如烟酸和他汀类药物。

LDL在机体内氧化修饰后产生Ox-LDL，Ox-LDL 具有免疫原性，能刺激机体产生抗Ox-LDL抗体,血清中因此能检测到抗Ox-LDL自身抗体。目前公认， Ox-LDL自身抗体的增加是体内LDL氧化易感性增加的一个生物标志物，反映机体氧化应激的水平。患有与氧化应激有关疾病的病人，血清中抗Ox-LDL自身抗体增加。Ox-LDL和抗Ox-LDL抗体在斑块内形成的免疫复合物可促进脂质向单核/巨噬细胞的集中，可激活泡沫细胞分泌各种炎症因子。抗体水平的高低可作为预测急性冠脉事件和评价动脉粥样硬化危险的因子。Xyloketal B的抗Ox-LDL抗体水平与辛伐他汀无显著差异，说明Xyloketal B具有抗Ox-LDL抗体的作用。

实施例3 Xyloketal B对动脉粥样硬化小鼠斑块内成分和动脉内皮损伤的影响

（一）材料与方法

1、药物准备，动物模型分组、给药方法见实施例1

2、其它实验材料：Mac-3( BD Bio sciences) 、CD31( [PECAM-1]) (BD Pharmingen)。防脱载玻片、显微镜盖玻片、鼠两步法检测试剂盒、兔两步法检测试剂盒、DAB显色试剂盒、免疫荧光二抗（均购自北京中杉金桥生物公司）、中性树脂胶（北京化学试剂四厂）、丙酮（广州市化学试剂有限公司）。

3、免疫组化和免疫荧光检测方法

免疫组化实验步骤：（1）冰冻切片使用－20℃丙酮固定10分钟，PBS洗5分钟。（2）0.3％H₂O₂甲醇液（封闭内源性酶）10分钟。（3）水洗后经PBS洗2次。（4）牛血清白蛋白室温孵育30分钟。（5）甩掉牛血清白蛋白滴加适当稀释度的特异性抗体，置湿盒中4℃过夜。（6）PBS洗3次,每次5分钟。（7）滴加适当稀释的酶标抗体标本上，37℃孵育30分钟。（8）PBS洗3次,每次5分钟。（9）显色。在酶的底物溶液中於显微镜下观察控制呈色反应，以结果清晰，背景无非特异性染色为度。（10）自来水充分冲洗。（11）用Mayer’s苏木素复染胞核。（12）封片。DAB呈色，可经酒精脱水，二甲苯透明，树胶封片。（13）对照染色。设空白对照、阳性对照。

免疫荧光实验步骤：（1）冰冻切片使用－20℃丙酮固定10分钟，PBS洗5分钟。（2）水洗后经PBS洗2次。（3）牛血清白蛋白室温孵育30分钟。（4）甩掉牛血清白蛋白滴加适当稀释度的特异性抗体，置湿盒中4℃过夜。（5）PBS洗3次,每次5分钟。（6）滴加适当稀释的荧光标记抗体标本上，37℃孵育30分钟。（11）用DAPI复染胞核，5分钟。（12）封片。（13）对照染色。设空白对照、阳性对照。

（二）实验结果

1、不同实验组小鼠主动脉窦斑块内mac-3的比较

如图5所示，模型组和溶剂对照组的主动脉窦斑块基底部可见明显mac-3特异性染色，特异性染色部位延伸至斑块核心及斑块肩部。辛伐他汀组和Xyloketal B防治组斑块内染色不明显，外膜侧的染色改变也不明显，提示辛伐他汀和Xyloketal B能够有效地抑制斑块内巨噬细胞的沉积。

2、不同实验组小鼠主动脉根部PECAM-1免疫荧光结果

如图6所示，PECAM-1特异性染色为红色荧光，用以观察内皮的结构。细胞核采用DAPI染色，呈蓝色。如图7所示，模型组和溶剂对照组的血管内皮结构不完整呈虫蚀状，血管内皮损伤严重，斑块内部有大量的新生血管。辛伐他汀组和Xyloketal B防治组与未治疗AS实验组相比，内皮较完整，光滑，血管内皮细胞的损伤程度明显减轻，提示Xyloketal B能恢复血管内皮层的连续性和完整性。

（三）实验讨论及化合物评价

动脉粥样斑块内有大量的巨噬细胞和脂质沉积。斑块巨噬细胞与脂蛋白相互作用贯穿斑块的形成和发展过程。一方面巨噬细胞通过细胞内多种酶（如脂氧化酶）和活性氧对LDL起氧化修饰作用，使细胞表现出一定的泡沫化倾向。另一方面，正常细胞表面存在的低密度脂蛋白受体（LDL receptor, LDL-R）能够摄取天然LDL，这一作用受到细胞内胆固醇的反馈性抑制，以避免LDL-R过多摄取天然LDL。当天然LDL被氧化修饰形成ox-LDL后，它不再被LDL-R识别，而是经巨噬细胞上的ox-LDL受体识别而被摄取。由于该受体途径不存在反馈性抑制，因而巨噬细胞不断摄取ox-LDL，最终导致泡沫细胞的形成。本实验提示Xyloketal B能够显著减少粥样斑块内的巨噬细胞的沉积，但具体机制尚不清楚。

内皮功能不全不仅是形成动脉粥样硬化病变的始动因素，也贯穿整个动脉粥样硬化发生发展过程。功能不全的内皮细胞合成分泌一氧化氮（NO）及前列环素等舒张血管的活性物质减少，表达多种炎症因子增多，促进炎症的发生，并导致斑块稳定性减弱。本实验表明Xyloketal B能恢复血管内皮层的连续性和完整性，保护血管内皮。

Claims

1.Xyloketal B 在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述抗动脉粥样硬化包括缩小粥样硬化斑块面积、保护血管内皮、调节血脂水平、抗氧化应激中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述调节血脂水平是指降低LDL-C、升高HDL-C中的一种或两种。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述抗氧化应激是指抗Ox-LDL抗体。