CN102008540A - 从植物肥荚红豆中提取的活性成分及其应用 - Google Patents

从植物肥荚红豆中提取的活性成分及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种从植物肥荚红豆中提取的活性成分及其应用，属生物医药技术领域。从植物肥荚红豆中提取的活性成分经如下步骤得到：a.将肥荚红豆的枝或叶用水洗干净后放入烘箱，在60℃温度下烘烤12小时；b.将烘干后的肥荚红豆的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用100％的甲醇浸泡，在40℃的水浴锅上提取，第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次和第三次的时间分别为4和8小时；c.将三次浸提的提取液合并后，在60℃温度下浓缩后得浸膏；d.将浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4℃保存备用。本发明提取的活性成分对人体病原菌金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用，能作为制备抑制人体病原细菌金黄色葡萄球菌制剂的应用，能开发为新的医用抗生素。

Description

从植物肥荚红豆中提取的活性成分及其应用
技术领域：
本发明涉及一种从植物肥荚红豆中提取的活性成分及其应用，属生物医药技术领域。
背景技术：
金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)隶属于葡萄球菌属(Staphylococcus)，是人类的一种重要病原菌，会引起多种严重感染。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，会引起局部化脓感染，也会引起肺炎、甚至败血症、脓毒症的全身感染。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，因而，食品受其污染的机会很多。近年来，由该菌产生的肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的比例一直在上升，因此不断开发抑制金黄色葡萄球菌的新抗生素受到重视。
肥荚红豆(Ormosia fordiana)为豆科植物，又名鸡冠果、青竹蛇、鸡胆豆。具有清热解毒，消肿止痛的功效，主治急性热病，急性肝炎，风火牙痛，跌打肿痛等，目前未有该植物对金黄色葡萄球菌(S.aureus)有抑制活性的报道。
发明内容：
本发明的目的是从植物肥荚红豆代谢产物中，筛选出对人体病原细菌金黄色葡萄球菌(S.aureus)具有强抑制作用的活性成分，作为制备医用抗生素的应用。
本发明是这样实现的：
1活性成分的制备：
a.将肥荚红豆的枝或叶用水洗干净后放入烘箱，在60℃温度下烘烤12小时；
b.将烘干后的肥荚红豆的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用100％甲醇浸泡，在40℃的水浴锅上提取，第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次和第三次的时间分别为4和8小时；
c.将三次浸提的提取液合并后，在60℃温度下浓缩后得浸膏；
d.将浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4℃保存备用。
2、制备试验用的病原细菌
金黄色葡萄球菌(S.aureus)：将金黄色葡萄球菌接种于LB液体培养基(牛肉膏：3克，蛋白胨：10克，氯化钠：5克，自来水1000ml，pH 7.0-7.2)中，于37℃下培养24小时，冻于4℃冰箱中备用。做活性时将LB固体培养基(牛肉膏：3克，蛋白胨：10克，氯化钠：5克，琼脂：18克，自来水1000ml，pH 7.0-7.2)倒入9cm的平板中，待培养基凝固后，取200μL金黄色葡萄球菌菌液用涂布棒涂布均匀备用。
3、试验方法
滤纸片扩散法：在无菌操作台上用微量注射器将样品注入纸片(做三个剂量，1mg/disc，0.5mg/disc，0.1mg/disc)，用电吹风将纸片吹干待溶剂挥发后，置于涂布好病原菌的LB平板上，37℃下培养24小时后，观察抑菌结果，测量抑菌圈的大小(含纸片的直径0.6cm)。同时在纸片上加入提取过程中使用过的溶剂甲醇作为对照，同时还做空白纸片对照。整个实验重复3次，取3次实验结果的平均值。
将试验获得的活性浸膏在100℃沸水中加热30分钟后，用甲醇溶解制备成浓度为10mg/ml的活性成分，用同样的方法做抑菌试验。
本发明提取的活性成分对人体病原菌金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用，能作为制备抑制人体病原细菌金黄色葡萄球菌制剂的应用，能开发为新的医用抗生素。
具体实施方式：
实施例一：
本实施例所用的植物肥荚红豆，采自中国科学院昆明植物研究所植物园内。
肥荚红豆的叶用自来水洗干净后放入烘箱，在60℃温度下烘烤12小时。将10克烘干后的叶切碎，放入三角瓶内，用100ml 100％甲醇浸泡，在40℃的水浴锅上提取。第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次和第三次的浸泡提取时间分别为4小时和8小时。将三次浸提的提取液合并后，在60℃温度下浓缩得浸膏。该浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml，用于做活性测定。同时做对照，结果见表1。
表1  肥荚红豆叶的提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用
-没有抑菌圈出现
结果表明：本发明提取的活性成分对人体病原细菌金黄色葡萄球菌有明显的抑菌活性，提取物在1mg时出现强的抑菌作用，抑菌圈的大小为1.3cm，0.5mg时也出现较强抑菌活性，抑菌圈的大小为1.1cm。
实施例二：
基本同实施例一，不同之处是所用的材料为肥荚红豆的枝。结果见表2。
表2  肥荚红豆枝的提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用
Figure BSA00000357249200031
-没有抑菌圈出现
与叶的提取物相比，枝的提取物的抑菌活性相对较弱些。提取物在1mg时，抑菌圈的大小为1.2cm，0.1mg时也出现抑菌活性，活性相对较弱，抑菌圈的大小为0.8cm。
实施例三：
基本同实施例一，不同之处是提取的浸膏在100℃沸水中加热30分钟后，用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml做活性。同时做对照，结果见表3。
表3  肥荚红豆叶的提取物经高温处理后对金黄色葡萄球菌的抑菌作用
Figure BSA00000357249200032
-没有抑菌圈出现
结果表明，经过高温处理后的样品与未经高温处理的样品具有同样的抑菌活性，说明该活性成分对热稳定。

Claims (2)

1.一种从植物肥荚红豆中提取的活性成分，其特征在于从植物肥荚红豆中提取的活性成分经如下步骤得到：
a.将肥荚红豆的枝或叶用水洗干净后放入烘箱，在60℃温度下烘烤12小时；
b.将烘干后的肥荚红豆的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用100％的甲醇浸泡，在40℃的水浴锅上提取，第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次和第三次的时间分别为4和8小时；
c.将三次浸提的提取液合并后，在60℃温度下浓缩后得浸膏；
d.将浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4℃保存备用。
2.权利要求1所述的从植物肥荚红豆中提取的活性成分，其特征在于该活性成分对人体病原菌金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用，能作为制备抑制人体病原细菌金黄色葡萄球菌制剂的应用，能开发为新的医用抗生素。
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