CN101993903A

CN101993903A - 一种用于生产子囊霉素的发酵培养基及其发酵方法

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Publication number: CN101993903A
Application number: CN2009100565631A
Authority: CN
Inventors: 胡海峰; 陈怡倩; 朱宝泉
Original assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Current assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Priority date: 2009-08-18
Filing date: 2009-08-18
Publication date: 2011-03-30
Anticipated expiration: 2029-08-18
Also published as: CN101993903B

Abstract

本发明提供一种用于生产子囊霉素的发酵培养基及使用该发酵培养基生产子囊霉素的方法。所述的发酵培养基，以所述发酵培养基的总重量计，含有碳源2.0-8.0％，有机氮源1.0-5.0％，和无机盐0.1-0.5％；所述的有机氮源为2种或多于2种的下述物质的组合：酵母提取物、玉米浆干粉、玉米蛋白粉、大豆蛋白胨、黄豆饼粉、棉籽粉、花生粕。

Description

一种用于生产子囊霉素的发酵培养基及其发酵方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于生产子囊霉素的发酵培养基及其发酵方法。

背景技术

子囊霉素(Ascomycin，又名FK-520、FR-900520)是二十世纪六十年代从吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus的培养液中分离而得的一种大环内酯类抗生素。

FK-520的化学名为17α-乙基-1β，14α-二羟基-12β[2-(4α-羟基-3β-甲氧基-1β-1-(E)-甲基乙烯基)]-23α，25β-二甲氧基-13α，19，21α，27β-四甲基-11，28-二氧杂-4-氮杂三环[22，3，1，0]二十八碳-18-2，3，10，16-四酮，一水合物。分子量为810.5，分子式为C₄₃H₆₉NO₁₂H₂O。FK-520结构式如式I所示。

最初人们仅发现了FK-520的抗真菌活性，在美国专利USP3244592中，FK-520被描述为抗真菌剂。之后它的免疫抑制活性得到重视，欧洲专利EP0323865中描述了FK-520作为免疫抑制剂的应用，中国专利CN101036649A中也描述了其作为免疫抑制剂的用途。FK-520的免疫抑制活性的基本机理是通过阻断T细胞活化、抑制细胞因子释放和抑制肥大细胞的活化来产生作用。目前，FK-520的同系物吡美莫司已上市用于治疗特应性皮炎，在美国以商品名ELTJDEL出售。

Junker et al.Biotechnology and Bioengineering 60，580-588，(1998)公布了利用一株缬氨酸过量表达的吸水链霉菌突变株StreptomyceshygroscopicusMA7040来发酵产生FK-520的发酵培养基，产量可高达2.7g/L。但是该培养基仅适用于此突变株，其余的吸水链霉菌在此发酵培养基中，FK-520产量低下。

EP0323865A1公布了利用吸水链霉菌的一株高产菌株Streptomyceshygroscopicus var.ascomyceticus(ATCC14891)(USP3244592)发酵生产FK-520的过程：从斜面培养基上取FK-520产生菌接种于种子培养基摇瓶中，待种子长成后接种于含发酵培养基(葡萄糖4.5％、玉米浆干粉1.0％、酵母粉1.0％、玉米蛋白粉1.0％、小麦胚芽0.5％、CaCO₃0.1％，pH 6.8)的发酵罐中，通风条件下，27℃培养96小时，经HPLC检测效价为40mg/L。该发明公开了一种吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus var.ascomyceticus发酵产生FK-520的发酵培养基，但是该培养基含有固体不溶性成分，不利于发酵生产时的培养基均匀化，且使用该培养基生产FK-520，菌体生长过快，发酵后期供养不足，菌株在该培养基中产物产率低下。

WO029082A3公布了利用同样的菌株吸水链霉菌Streptomyceshygroscopicus var.ascomyceticus(ATCC14891)发酵生产FK-520的过程：从斜面培养基(酵母提取物、麦芽提取物、琼脂斜面)上取FK-520产生菌接种于种子培养基(葡萄糖0.1％、糊精1％、奶粉0.2％、棉籽粉0.25％、酪蛋白水解物0.5％、MgSO₄0.005％、FeSO₄0.0025％、NaCl 0.05％、CaCl 0.002％、ZnSO₄0.004％、MnSO₄0.0005％、pH7.0的磷酸缓冲液2ml/L，pH7.2)摇瓶中，于28℃培养48小时后，接种于含发酵培养基(糊精14％、棉籽粉1.4％、黄豆饼粉1.0％、甘油1.0％、大豆蛋白胨1.0％、聚乙烯乙二醇1.25％、磷酸钾0.08％、CaCO₃0.15％，pH 7.2)的发酵罐中，通风条件下培养，经HPLC检测效价为350-400mg/L。该发明公开了一种吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus var.ascomyceticus发酵产生FK-520的发酵培养基，产物发酵纯度高，产量较先前专利报道的也有很大提高，但是依旧有待提高，且该培养基碳源用量非常大，以致生产成本高。

因此，本领域迫切需要提供一种生产成本低廉、产量高的FH-520发酵培养基及其相应的生产方法。

发明内容

本发明旨在提供一种用于生产如式I所示的子囊霉素的发酵培养基。

本发明的另一个目的是提供一种使用上述发酵培养基生产子囊霉素的方法。

在本发明的第一方面，提供了一种用于生产如式I所示的子囊霉素的发酵培养基，以所述发酵培养基的总重量计，它含有碳源2.0-8.0％，有机氮源1.0-5.0％，和无机盐0.1-0.5％；

所述的有机氮源为2种或多于2种的下述物质的组合：酵母提取物、玉米浆干粉、玉米蛋白粉、大豆蛋白胨、黄豆饼粉、棉籽粉、花生粕；

在另一优选例中，以所述发酵培养基的总重量计，它还含有天然油脂0.2-1.5％。

在另一优选例中，所述的碳源选自蔗糖、葡萄糖、糊精、淀粉、甘露醇、或乳糖。

在另一优选例中，所述的无机盐选自磷酸钾、硫酸镁、碳酸钙、或其组合。

在另一优选例中，所述的天然油脂选自豆油、玉米油、葵花籽油、猪油、或鱼油。

在本发明的第二方面，提供了一种生产如式I所示的子囊霉素的方法，所述的方法包括步骤：

(1)在如上所述的本发明提供的发酵培养基中对Streptomyceshygroscopicus var.ascomyceticus ATCC14891成熟种子进行发酵培养；得到结构如式I所示的子囊霉素。

在另一优选例中，发酵培养温度为28±2℃，pH7.0±1，时间为150-250小时。

在另一优选例中，在发酵中期补加选自下述的物质：葡萄糖、糊精、淀粉、(NH₄)₂SO₄、酵母提取物、玉米浆干粉、或大豆蛋白胨。

在另一优选例中，补加物质的量为0.2-1.0％，按发酵培养基的重量计。

据此，本发明提供一种生产成本低廉、产量高的FH-520发酵培养基及其相应的生产方法。

附图说明

图1显示了不同碳源对FK-520生产的影响。

图2显示了不同有机氮源组合对FK-520生产的影响。

图3显示了天然油脂对FK-520生产的影响。

图4显示了发酵中期补料对FK-520生产的影响。

具体实施方式

经过大量的实验研究，发明人发现了一种用于培养吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus，以生产FK-520的发酵培养基，所述发酵培养基碳源含量较低，发酵过程中培养基均匀性好，生产成本低，FK-520产生菌的菌丝体不会生长过旺，或菌丝结球，发酵产物FK-520的产率高，达到700mg/L，效价较现有技术中的培养基提高了75％。

定义

如本文所用，“大豆蛋白胨”是指以大豆为基质的蛋白胨，可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自国药集团化学试剂有限公司。

如本文所用，“棉籽粉”是指棉籽(cottonseed)，即棉花的种子经压轧的饼打碎後磨碎成的粉末，含有高蛋白。可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自北京华康希望生物科技有限公司。

如本文所用，“黄豆饼”可以使用本领域熟知的方法经榨油工艺生产，例如但不限于，黄豆(大豆)经压榨脱油后的残饼，液压榨油后为圆饼状，螺旋榨油后为薄片状；为坚硬的块状物，一般先打碎后再粉碎。粉碎后的大豆饼具有香味。也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自山东枣庄市豆制品研究中心。

如本文所用，“花生粕”是指从花生仁经压榨提炼油料后的产品，富含植物蛋白。可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自北京华康希望生物科技有限公司。

如本文所用，“玉米浆干粉”是指玉米浆经低温、瞬间喷雾干燥而成的粉末状物质，蛋白质含量≥42％，水份≤10％，在生物发酵过程中作水溶性植物蛋白及水溶性维生素等营养元素补充剂。可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自国药集团化学试剂有限公司。

如本文所用，“玉米蛋白粉”可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自北京海正兴潮生物技术有限公司。

如本文所用，“酵母提取物”可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自安琪酵母股份有限公司。

如本文所用，“糊精”是指淀粉在受到加热、酸或淀粉酶作用下发生分解和水解时，将大分子的淀粉首先转化成为小分子的中间物质，这时的中间小分子物质被称为糊精。干糊精是一种黄白色的粉末，它不溶于酒精，而易溶于水，溶解在水中具有很强的粘性，淀粉质原料在进行蒸煮时，淀粉分子受热分解，首先就生成了糊精。这时如果加入一滴碘时，溶液就会呈红紫色，而不是象淀粉遇碘那样呈蓝色。生产上通常把淀粉质原料在高温、高压下进行蒸煮，使淀粉细胞彻底破裂，淀粉由颗粒状态变为液糊状糊精的过程就叫做原料的糊化。可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自国药集团化学试剂有限公司。

如本文所用，“淀粉”可以使用本领域熟知的方法制备得到。也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自上海诺泰化工有限公司。

如本文所用，“豆油”是指来自于大豆的油脂，可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自上海日清油脂有限公司。

如本文所用，“玉米油”是指来自于玉米的油脂，可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自上海融氏有限公司玉米胚胎油。

如本文所用，“葵花籽油”是指来自于葵花籽的油脂，可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自Molinos纯正葵花籽油。

如本文所用，“鱼油”是指鱼体内的全部油类物质的总称，它包括体油、肝油和脑油。可以使用本领域熟知的方法制备得到，例如但不限于作为鱼粉加工的副产品，即为鱼及其废弃物经蒸、压榨和分离而得到。鱼油的主要成分是甘油三脂、磷甘油醚、类脂、脂溶性维生素，以及蛋白质降解物等。也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自上海日清油脂有限公司。

如本文所用，“猪油”可以使用本领域熟知的方法制备得到，也可以通过商业渠道获得，例如但不限于购自上海益洋油脂有限公司。

本发明提供的一种用于生产如式I所示的子囊霉素的发酵培养基，包含有机氮源、碳源、无机盐和金属离子。

本发明采用菌株为Streptomyces hygroscopicus var.ascomyceticusATCC14891(由美国菌种保藏中心保藏)。

所述培养基中有机氮源为酵母提取物、玉米浆干粉、玉米蛋白粉、大豆蛋白胨、黄豆饼粉、棉籽粉和花生粕等，优选酵母提取物、玉米浆干粉、大豆蛋白胨、黄豆饼粉、和棉籽粉中三种物质形成的组合氮源，更优选为酵母提取物、玉米浆干粉、大豆蛋白胨的组合氮源。以培养基的总重量计，其中有机氮源的含量为1.0-5.0％，较优为1.3-4.0％，最优为2.5％。以培养基的总重量计，其中酵母提取物的含量为0.5-1.5％，最优为1.0％；大豆蛋白胨含量为0.5-1.5％，最优为1.0％；玉米浆干粉含量为0.3-1.0％，最优为0.5％。

所述碳源为蔗糖、葡萄糖、糊精、淀粉、甘露醇、乳糖等，其中优选为糊精、淀粉、和葡萄糖，较佳地为糊精和淀粉，更优选糊精。以培养基的总重量计，其中碳源的含量为2.0-8.0％，较优为3.0-5.0％，最优为4.5％。

培养基中还需加入磷酸盐、镁等金属离子和碳酸钙。培养基中还可加入维生素、氨基酸等微量元素。

在培养基中加入少量的天然油脂可以促进菌体的生长，同时更好的促进底物在发酵液中的转化，所述天然油脂可以为豆油、玉米油、葵花籽油、猪油、鱼油等，以培养基的总重量计，其中天然油脂的含量为0.2-1.5％，最优为1.0％。

本发明还提供一种生产如式I所示的子囊霉素的方法，其中包括步骤：

在上述的本发明提供的发酵培养基中对Streptomyces hygroscopicusvar.ascomyceticusATCC14891成熟种子进行发酵培养，得到子囊霉素。在发酵过程中，适当添加补料可以延长菌体生长时间，防止发酵后期菌体供养不足导致的菌体自溶，从而更好地促进代谢产物的产生。所述发酵中期补料可以为葡萄糖、糊精、淀粉、(NH₄)₂SO₄、酵母提取物、玉米浆干粉、蛋白胨等，其中优选补入糊精、淀粉、酵母提取物、玉米浆干粉、或大豆蛋白胨，更佳地为糊精。以培养基的总重量计，加入的补料的含量为0.3-1.0％，最优为0.5％。

如本文所用，“成熟种子”是指刮取在ISP2平板培养基上，(ISP2培养基：酵母提取物0.4％、麦精1.0％、葡萄糖0.4％、琼脂1.8％，余量为水，pH 7.3；121℃灭菌20min)，于28℃培养了5-6天的成熟孢子，在种子培养基(酵母提取物1.5％、麦精1.0％、葡萄糖2.0％、甘油0.5％、MgSO₄·7H₂O 0.05％、FeCl3·H₂O0.003％，余量为水，pH 7.3，121℃灭菌20min)里通氧培养了三天的种子。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

本发明的主要优点在于：

1、本发明提供的发酵培养基成本低廉。

2、使用本发明提供的发酵培养基生产FK-520产率高。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

本发明实施例和试验例中使用的高效液相色谱(HPLC)方法如下：

HPLC采用的色谱仪是Waters510型高效液相色谱仪，色谱柱是C18柱，检测器是Waters 996 Photodiode Array Detector，流动相是甲醇∶水(7∶3)，流速是1.0ml/min，进样量是20μl，柱温是室温。

本发明实施例1-6中发酵得到的FK-520相对效价计算公式为：

实施例1

发酵培养方法及标准相对效价的制定

将Streptomyces hygroscopicus var.ascomyceticus ATCC14891种子取出活化后接种斜面培养基(ISP2培养基：酵母提取物0.4％、麦精1.0％、葡萄糖0.4％、琼脂1.8％，余量为水，pH 7.3；121℃灭菌20min)，将已接种菌种的斜面置于28℃恒温培养箱中，培养5-6天，得到成熟的孢子，然后将成熟的孢子接种于装有50ml种子培养基(酵母提取物1.5％、麦精1.0％、葡萄糖2.0％、甘油0.5％、MgSO₄·7H₂O 0.05％、FeCl3·H₂O 0.003％，余量为水，pH 7.3，121℃灭菌20min)的250ml摇瓶中，在28℃、240rpm摇床上培养3天，得到成熟的种子，得到的种子以4％的接种量接入装有50ml发酵培养基(糊精14％、棉籽粉1.4％、黄豆饼粉1.0％、甘油1.0％、大豆蛋白胨1.0％、聚乙烯乙二醇1.25％、磷酸钾0.08％、CaCO₃0.15％，余量为水，pH 7.2)的250ml摇瓶中，置于28℃、240rpm摇床继续培养192小时，取发酵液1ml，用1ml乙酸乙酯萃取，离心取上清用HPLC进行FK-520含量的测定。

实施例2

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为175％

实施例3

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精3.0％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为149％

实施例4

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精5.0％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为154％

实施例5

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物0.5％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为151％

实施例6

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.5％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为166％

实施例7

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨0.5％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为148％

实施例8

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.5％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为167％

实施例9

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.3％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为150％

实施例10

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉1.0％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为169％

实施例11

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物0.5％、大豆蛋白胨0.5％、玉米浆干粉0.3％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为129％

实施例12

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.5％、大豆蛋白胨1.5％、玉米浆干粉1.0％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为158％

实施例13

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、棉籽粉1.0％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为144％

实施例14

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、黄豆饼粉1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为161％

实施例15

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油0.2％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为147％

实施例16

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油1.5％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为172％

实施例17

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.5％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为133％

实施例18

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精0.3％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为167％

实施例19

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。发酵中期补糊精1.0％，pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为162％

实施例20

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基：糊精4.5％、酵母提取物1.0％、大豆蛋白胨1.0％、玉米浆干粉0.5％、豆油1％、磷酸钾0.08％、MgSO₄·7H₂O 0.02％、CaCO₃0.15％，余量为水。pH 7.0。121℃灭菌20min。

发酵过程同实施例1，相对效价为158％

试验例1

碳源影响试验

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基中的碳源分别是蔗糖、葡萄糖、糊精、淀粉、甘露醇、和乳糖，含量为均为4.5％，发酵终点用HPLC检测产物效价，以用糊精作为碳源时测得的产物效价作为对照(100％)，结果如图1。

结果表明，不同碳源对发酵产生FK-520有较明显的影响，其中淀粉和糊精的效果较佳，糊精最佳。

试验例2

有机氮源影响试验

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基中的有机氮源分别是酵母提取物、玉米浆干粉、玉米蛋白粉、大豆蛋白胨、黄豆饼粉、棉籽粉和花生粕七种有机氮源中的三种的组合，氮源总含量为2.5％，发酵终点用HPLC检测产物效价，以用大豆蛋白胨、黄豆饼粉、棉籽粉复合氮源时测得的产物效价作为对照(100％)，其配方设计见表1，结果见图2。

表1发酵培养基中不同氮源的组合(％)

结果表明，不同氮源对发酵产生FK-520有很明显的影响，其中大豆蛋白胨、酵母提取物和玉米浆干粉结合的复合氮源效果最佳。

试验例2

天然油脂影响试验

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵培养基中加入的天然油脂有机氮源分别是豆油、玉米油、葵花籽油、鱼油和卵磷脂等多种，加入量度为1.0％，发酵终点用HPLC检测产物效价，以没有加入天然油脂时测得的产物效价作为对照(100％)，结果见图3。

结果表明，加入豆油的效果最好。

试验例3

补料影响试验

斜面培养基和种子培养基同实施例1。

发酵中期补料加入发酵培养基中的物质分别选取葡萄糖、糊精、淀粉、(NH₄)₂SO₄、酵母提取物、玉米浆干粉、大豆蛋白胨等营养成分，加入量为0.5％，以没有补料时测得的产物效价作为对照(100％)，结果见图4。

结果表明，加入糊精作为发酵中期补料的效果最好。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims

1.一种用于生产如式I所示的子囊霉素的发酵培养基，其特征在于，以所述发酵培养基的总重量计，它含有碳源2.0-8.0％，有机氮源1.0-5.0％，和无机盐0.1-0.5％；

2.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，以所述发酵培养基的总重量计，它还含有天然油脂0.2-1.5％。

3.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，所述的碳源选自蔗糖、葡萄糖、糊精、淀粉、甘露醇、或乳糖。

4.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，所述的无机盐选自磷酸钾、硫酸镁、碳酸钙、或其组合。

5.如权利要求2所述的发酵培养基，其特征在于，所述的天然油脂选自豆油、玉米油、葵花籽油、猪油、或鱼油。

6.一种生产如式I所示的子囊霉素的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

(1)在如权利要求1-5任一所述的发酵培养基中对Streptomyceshygroscopicus var.ascomyceticus ATCC14891成熟种子进行发酵培养；得到结构如式I所示的子囊霉素。

7.如权利要求6所述的生产方法，其特征在于，发酵培养温度为28±2℃，pH7.0±1，时间为150-250小时。

8.如权利要求6所述的生产方法，其特征在于，在发酵中期补加选自下述的物质：葡萄糖、糊精、淀粉、(NH₄)₂SO₄、酵母提取物、玉米浆干粉、或大豆蛋白胨。

9.如权利要求8所述的生产方法，其特征在于，补加物质的量为0.2-1.0％，按发酵培养基的重量计。