CN101985600B - 一种微重力环境下翻转膜生物反应器 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于微重力环境下悬浮生物细胞多批次培养的翻转膜式生物反应器,主要包括生物反应器主体,供气系统,液体加注系统,搅拌系统,循环泵,温度、溶氧、压力和pH参数测量控制系统,排气系统,液体排出系统。该发明通过控制微型蠕动泵的工作时间和流量实现注入或排出液体体积的精确定量,利用多孔疏水透气膜高效供给生物生长所需的氧气,通过中心搅拌桨实现反应器内营养的均匀分布,通过真空泵抽负压实现微生物生长代谢废气二氧化碳的排放,解除其对生物的抑制,利用反应器内设置硅橡胶翻转膜的翻转挤压和排液处蠕动泵的排液作用实现微重力环境下反应器内培养废液的排出,通过自动加注新鲜培养液进行下一次的培养实验,如此反复从而实现反应器内悬浮生物细胞样品的多批次培养。
Description
技术领域
本发明涉及一种悬浮生物细胞多批次培养的翻转膜生物反应器装置,特别涉及一种用于微重力条件下翻转膜生物反应器,主要用于空间站、空间实验室、空间永久基地(如月球、火星基地)等微重力环境下悬浮生物细胞的长时间多批次培养和生物学效应研究。
背景技术
空间科学研究是人类空间活动的主要领域之一,是人类探索宇宙奥秘、获取更多自然资源、开拓生存空间的必然发展方向。在空间条件下开展科学目标明确的生命科学研究是世界各航天强国空间科学发展的重要内容。
空间微重力环境为生命科学研究提供了前所未有的机遇,为人类认识自身以及发展新型生物技术开辟了新的途径。空间微重力科学研究的快速发展给空间生命科学创造了越来越多的在真实空间环境条件下进行生命科学研究的机会,同时也对空间生命科学研究的仪器装备提出了更高的要求。
在微重力环境中,气体和液体中的对流现象消失,浮力消失,不同密度引起的组分分离和沉浮现象消失,流体的静压力消失,液体仅由表面张力约束,润湿和毛细现象加剧等等。这使得气液固三相很难分离,从而使地面上很容易实现的过程变得十分复杂,增加了生物细胞培养过程中氧气的供给、废气的排出以及生物细胞多批次培养等的难度,使得进行微重力条件下的生物细胞培养研究非常困难。
为了进行空间微重力环境生物医学效应和空间细胞生物学、微生物学的相关研究,必须开发适合空间微重力环境的生物细胞培养技术,研制相应的培养设备。经过美国、俄罗斯、欧洲、日本等航天强国多年的研究,空间细胞微生物培养设备和技术取得了长足的进步。走过了从简单到复杂的发展历程,经历了从静态的批量培养到动态的连续灌流式培养,再到实现在线监测、显微观察甚至是可进行远程控制的细胞培养的发展变化过程。一些新的在线观测、检测和控制手段以及新型的分析仪器不断被集成,空间生物实验系统正逐步成为开展空间微重力环境生物医学效应和空间细胞生物学相关研究的关键设备。
目前世界各国重点发展能支持短期和长期的空间在轨生物科学与生物技术的设备研究。一些新型的生物细胞培养单元硬件设备如为“国际空间站”提供的空间生物培养单元已经投入使用,可用于从高等生物如动物、植物到微生物、细胞、组织水平,从空间生物医学到空间生物技术等不同层次研究。
然而世界各国研制开发的微重力环境下的生物细胞培养装置只能进行一次性培养,营养物质交换主要通过体外循环实现,反应器中气液传质问题无法完全解决,不能满足微重力环境下悬浮生物细胞长时间多批次培养、多参数实时检测和自动调控研究的任务要求。
发明内容
本发明的目的是为了解决在微重力环境下的生物细胞培养装置只能进行一次性培养、不能满足微重力条件下悬浮生物细胞长时间、多批次培养研究的技术问题,提供一种结构简单、培养效率高,能实现培养体系多参数实时检测和自动调控,可用于微重力环境下进行悬浮生物细胞的长时间多批次培养、多参数实时检测和自动调控的翻转膜生物反应器。
本发明的目的是通过下述技术方案实现的。
本发明的一种用于微重力环境下翻转膜生物反应器,包括生物反应器主体、供气系统、液体加注系统、搅拌系统、循环泵、温度,溶氧、压力和pH值参数测量控制系统、排气系统和液体排出系统。其中,生物反应器主体顶部设置有第一排气口和底部设有第二排气口,左侧壁体从上到下设置有翻转膜气体进口、供养进气口和液体进口,右侧壁体从上到下设置有排液口和循环液出口,外壁表面设置有加热套;翻转膜设置在生物反应器主体内上部并与生物反应器主体内壁密封;温度传感器探头和压力传感器探头设置在生物反应器主体底部并与其密封连接;生物反应器主体内壁侧下部设置有盘绕的供气膜组件,供气膜组件被支撑固定在生物反应器主体内壁的支撑槽上;多叶片搅拌桨位于生物反应器主体内底部上方并与反应器内底壁密封连接;中心排气膜装置位于搅拌桨上方并与其同轴连接,搅拌桨在磁力电机的驱动下可绕中心排气膜装置旋转;微型溶氧测定探头和pH值测定探头设置在反应器外部的检测盒中并与检测盒上表面密封连接;蠕动泵连接在反应器主体和检测盒的外循环回路上。
所述生物反应器主体为立式结构,生物反应器高径比为1.5-2。
通过压力监控系统控制聚乙烯膜管中的气体压力与反应器内的压力差10-70KPa,实现生物反应器内氧气的无泡供给。
通过五个蠕动泵分别进行液体种子、培养基、酸碱液的加注及反应器内废液的排出和待测样输送,五个蠕动泵的流量范围均为0.1-15ml/min。
生物反应器内搅拌系统可以为磁力驱动或电机直接驱动的搅拌桨,搅拌桨采用斜叶叶片,搅拌速度为10-100rpm,用于培养微生物、细胞和组织,实现气液固的充分混合。
生物反应器中心设置排气膜装置,反应器内顶部设置有硅橡胶翻转膜,利用设置在反应器中心的排气膜装置和反应器内顶部硅橡胶翻转膜的疏水透气功能,实现反应体系内微生物生长代谢产生大量二氧化碳气体的高效排放。
生物反应器内顶部设置可上下翻转运动的硅橡胶翻转膜,实现培养体系废液的挤压排出,进而实现反应器内生物样品的多批次培养。
生物反应器内设置温度测定系统,反应器外设置加热套和控制系统,利用设置在反应器外壁的加热套对反应器加热,通过微型温度传感器对体系内温度进行实时监测和调控。
生物反应器设置外循环泵和检测盒,利用外循环泵的循环作用实现反应器内液体和检测盒中液体的均匀,通过设置有微型传感器的检测盒和控制软硬件,实现溶氧值(0-150%)和pH值(2-12)的实时在线监测和调控。
有益效果
本发明的翻转膜生物反应器装置能实现微重力环境下悬浮生物细胞的长时间多批次培养、多参数实时检测和自动调控。
附图说明
图1为本发明翻转膜生物反应器装置实施例示意图;
图2为本发明生物反应器主体实施例剖面示意图;
图3为本发明搅拌装置实施例剖面示意图;
图4为本发明中心排气膜装置实施例剖面示意图;
图中:1-生物反应器主体;2-供养膜组件;3-搅拌桨;4-中心排气膜装置;5-加热套;6-硅橡胶翻转膜;7-供气瓶;8-减压阀;9-气体流量计;10-供养截止阀;11-翻转截止阀;12-酸液袋;13-碱液袋;14-培养液袋;15-种子低温贮藏室;16-酸液输送蠕动泵;17-碱液输送蠕动泵;18-培养液输送蠕动泵;19-种子液输送蠕动泵;20-微型压力探头;21-微型磁力电机;22-微型温度传感器探头;23-微型溶氧传感器探头;24-微型pH传感器探头;25-检测盒;26-外循环蠕动泵;27-排液蠕动泵;28-废液收集袋;29-样品分析检测单元;30-真空泵;31-废气收集袋;101-进液口;102-加热区;103-供养进气口;104-翻转膜进气口;105-顶部第一排气口;106-排液口;107-供养膜支撑件;108-循环液出口;109-压力参数测量区;110-低部第二排气口;111-温度参数测量区;301-搅拌桨底座;302-搅拌叶片;303-搅拌桨固定点;304-磁片;401-膜管支撑组件;402-膜管;403-排气口。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做详细说明。
如图1所示,本发明的实施例包括生物反应器主体,供气系统,液体加注系统,搅拌系统,循环泵,温度、溶氧、压力和pH值参数测量控制系统,排气系统,液体排出系统。其中生物反应器主体1采用防腐性和生物相容性较高的材料制成,反应器高径比为1.5-2,反应器体积为150ml。生物反应器主体1顶部设置有第一排气口105,底部设有第二排气口110,左侧壁体从上到下设置有翻转膜气体进口104、供养进气口103和液体进口101,右侧壁体从上到下设置有排液口106和循环液出口108,外侧壁面设有加热套102;供气系统由空气气瓶7、减压阀8、气体流量计9和截止阀10组成,通过控制气体流速20-30ml/min和气体压力与反应器的压力差10-70KPa,实现沿反应器内壁盘绕的供养聚乙烯膜管内氧气向培养液无泡供给;搅拌系统由电机测控系统21、磁力搅拌底座301和搅拌桨叶片302组成,搅拌叶片为斜叶,叶片数为4片,利用磁力驱动搅拌桨旋转,磁电机功率为12W,搅拌速度最大可达到100rpm,用来培养微生物细胞而不会造成细胞壁的破碎,同时实现氧气和营养液的充分混合;液体加注系统由可变形贮液袋(酸液袋12,碱液袋13,培养液袋14,液体种子袋15)、蠕动泵(酸液输送蠕动泵16,碱液输送蠕动泵17,培养液输送蠕动泵18,种子液输送蠕动泵19)和测控系统组成,通过控制各蠕动泵的工作时间和流量实现液体的精确脉冲加注和定量排出,蠕动泵的功率为8W,流量为0.1-15ml/min;温度控制系统由微型温度探头22,加热套5和测控系统组成,当反应器内温度低于预设温度时,加热套5按程序开始工作,实现温度的精确控制,加热套功率为15W;温度传感器探头22和压力传感器探头20密封安装在反应器底部并与反应器底面呈90度角;微型溶氧测定探头23和pH值测定探头24密封固定在反应器外部的检测盒25中并与其上表面呈90度角密封连接;蠕动泵26连接在反应器主体1和检测盒21的外循环回路上,通过蠕动泵26的脉冲循环作用实现反应器内液体与检测盒25中液体的均匀;废气排出系统由中心排气膜装置4,顶部硅橡胶透气膜6和真空泵30组成;排液硅橡胶翻转膜系统,由硅橡胶翻转膜6、截止阀11和微型蠕动泵27组成。
工作过程:
在进行悬浮生物细胞发酵培养时,首先,蠕动泵18将培养液袋14中的无菌培养液以15ml/min的速度向翻转膜生物反应器中加注,通过控制蠕动泵14工作时间10min使液体充满翻转膜生物反应器1;气体经空气气瓶7、减压阀8、气体流量计9和截止阀10进入沿反应器内壁盘绕的供氧聚乙烯膜管中,通过控制气体流速20-30ml/min和气体压力与反应器的压力差10-70KPa,实现反应器内氧气的无泡供给,提高氧气利用效率;对反应器中培养体系接种时,4℃低温贮存盒中的种子液15通过蠕动泵19在监控系统的控制下向反应器内脉冲式加注,通过控制蠕动泵19的工作时间5s,实现种子液加注量为7.5ml;利用功率为12W的磁力电机21驱动反应器内的搅拌桨3绕中心排气膜装置4以30rpm的速度旋转,通过搅拌桨3上斜叶叶片的旋转运动,实现反应器内固液气三相的均匀分布;利用微型温度探头22,加热套5和测控系统控制反应器内悬浮细胞培养所需微环境的稳定,当温度传感器探头22检测到反应器内温度低于预设温度30度时,监控系统自动开启加热套5开关,加热套开始加热,达到预设温度时,加热套5开关自动关闭,实现温度(±0.5度)的精确监控;蠕动泵26的循环作用使生物反应器主体1内的培养体系与检测盒25中液体保持均匀,利用反应器外循环回路检测盒25上设置的微型溶氧测定探头23和微型pH测定探头24,对悬浮生物细胞发酵培养体系的溶氧值(0-150%)和pH值(2-12)进行实时在线检测并按预先设定的值,通过控制酸液输送蠕动泵16和碱液输送蠕动泵17的工作时间,实现对培养体系pH值的精确控制,通过控制氧气进入反应器的流量,实现对培养体系溶氧值的精确控制。
在悬浮生物细胞培养的中后期,细胞生长代谢消耗大量的氧气,产生大量的废物此时溶氧值也随之降低,在监控系统的控制下,排气处真空泵30开始工作,对连接中心排气膜装置4和硅橡胶翻转膜6的管路抽负压(≤0.08MPa),实现生物细胞代谢废物二氧化碳气体的快速高效排放,降低其对细胞生长代谢的抑制作用。
在悬浮生物细胞培养结束,进行培养系统排液时,供气系统处截止阀10关闭,截止阀11开启,气体通过生物反应器主体1上部的进气口104进入反应器主体1的上部与硅橡胶膜翻转膜6形成的腔中,高压气体的挤压作用使硅橡胶膜翻转膜6变形并由反应器顶部翻转向下运动挤压生物反应器主体1下半部分的液体,同时排废液处蠕动泵27开始工作,硅橡胶膜翻转膜6和排废液处蠕动泵27的协同作用实现反应器内95%废液的排出,完成第一次悬浮生物细胞发酵培养,剩余的5%培养液作为下一次实验的种子液。
在进行第二次悬浮生物细胞发酵培养之前,排气处真空泵30开始工作,使生物反应器主体1上部的气体压力降低至80-90KPa,通过自动控制系统控制蠕动泵18定量加注新鲜的培养液,硅橡胶膜翻转膜6在生物反应器主体1下部液体的挤压下向上翻转运动,直至回到反应器顶部,此时142ml无菌培养液加注完成。监控系统按自动控制程序进行第二次的悬浮生物细胞发酵培养和相关操作,直至发酵结束,如此反复进行实现反应器内生物样品的多批次培养。
以上所述的具体描述,对发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明,所应理解的是,以上所述仅为本发明的具体实施例而已,并不用于限定本发明的保护范围,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种微重力环境下翻转膜生物反应器,其特征在于:包括生物反应器主体,供气系统,液体加注系统,搅拌系统,循环泵,温度、溶氧、压力、pH值参数测量控制系统,排气系统,液体排出系统;其中,生物反应器主体(1)顶部设置有第一排气口(105),底部设有第二排气口(110),左侧壁体从上到下设置有翻转膜气体进口(104)、供养进气口(103)和液体进口(101),右侧壁体从上到下设置有排液口(106)和循环液出口(108),外侧壁面设有加热套(102);硅橡胶翻转膜(6)设置在生物反应器主体(1)内上部并与生物反应器主体(1)内壁密封;温度传感器探头(22)和压力传感器探头(20)设置在生物反应器主体(1)底部并与其密封连接;生物反应器主体(1)内壁侧下部设置有盘绕的供气膜组件(2),供气膜组件(2)被支撑固定在生物反应器主体(1)内壁的支撑槽上;搅拌桨(3)位于生物反应器主体(1)内底部上方并与反应器内底壁密封连接,搅拌叶片为斜叶;中心排气膜装置(4)位于搅拌桨(3)上方并与其同轴连接,搅拌桨(3)在磁力电机的驱动下可绕中心排气膜装置(4)旋转;微型溶氧测定探头(23)和pH值测定探头(24)设置在反应器外部的检测盒(25)中并与检测盒(26)密封连接;蠕动泵(26)连接在生物反应器主体(1)和检测盒(25)的外循环回路上。
2.根据权利要求1所述的一种用于微重力环境下翻转膜生物反应器,其特征在于:所述生物反应器主体为立式结构,高径比为1.5-2。
3.根据权利要求1所述的一种用于微重力环境下翻转膜生物反应器,其特征在于:通过压力控制系统控制聚乙烯膜管中的气体压力与生物反应器内的压力差10-70KPa,实现生物反应器内氧气的无泡供给。
4.根据权利要求1所述的一种用于微重力环境下翻转膜生物反应器,其特征在于:液体种子、培养基、酸碱液的加注及生物反应器内废液的排出和待测样输送的微型蠕动泵流量为0.1-15ml/min。
5.根据权利要求1所述的一种用于微重力环境下翻转膜生物反应器,其特征在于:所述生物反应器内搅拌系统为磁力驱动的搅拌桨,搅拌桨采用斜叶叶片,搅拌速度为10-100rpm,用来培养微生物、细胞和组织,在不造成细胞的破碎同时,实现气液固的充分混合。
6.根据权利要求1所述的一种用于微重力环境下翻转膜生物反应器,其特征在于:所述生物反应器设置中心排气膜装置,生物反应器内上部设置有硅橡胶翻转膜,利用设置在生物反应器中心的排气膜装置和生物反应器内上部硅橡胶翻转膜的疏水透气功能,实现反应体系内微生物生长代谢产生大量二氧化碳气体的高效排放。
7.根据权利要求1所述的一种用于微重力环境下翻转膜生物反应器,其特征在于:所述生物反应器内上部设置可上下翻转运动的硅橡胶翻转膜,实现培养体系废液的挤压排出,进而实现生物反应器内生物样品的多批次培养。
8.根据权利要求1所述的一种用于微重力环境下翻转膜生物反应器,其特征在于:所述生物反应器内设置温度测定系统,生物反应器外设置加热套和控制系统,利用设置在生物反应器外壁的加热套对生物反应器加热,通过微型温度传感器对体系内温度进行实时监测和调控。
9.根据权利要求1所述的一种用于微重力环境下翻转膜生物反应器,其特征在于:所述生物反应器设置外循环泵和检测盒,利用外循环泵的循环作用实现反应器内液体和检测盒中液体的均匀,通过设置有微型传感器的检测盒和控制软硬件,实现溶氧值0-150%和pH值2-12的实时在线监测和调控。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C17 | Cessation of patent right | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20121226 Termination date: 20131109 |