CN101978862B - 蛭弧菌蛭质体在防控生鱼片生产过程中的细菌的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蛭弧菌蛭质体在防控生鱼片生产过程中的细菌的应用，所述蛭弧菌菌株为蛭弧菌BDFM05，由中国典型培养物保藏中心保藏，其简称为CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：M 209172，保藏时间为2009年8月7日；将上述菌株制成蛭弧菌蛭质体菌液作为杀菌剂用于生鱼片制作过程中，特别适用于生鱼片制作过程中生鲜原料初洗减菌，操作台、加工车间和盛放碟盘中携带细菌的消毒杀菌。本发明将蛭弧菌蛭质体制成的蛭弧菌液用于防治生鱼片生产过程中可能染菌的关键环节菌落总数和致病菌的控制，对生鱼片上的常见食物中毒细菌防控效果良好，且具有无毒、对食品无副作用等特点，应用前景良好。

Description

蛭弧菌蛭质体在防控生鱼片生产过程中的细菌的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的是一种蛭弧菌及利用该蛭弧菌蛭质体制成的蛭弧菌液，在防控生鱼片制作关键环节菌落总数和致病菌的应用，特别是应用于制作生鱼片的生鲜原料加工初洗时生鱼片减菌，操作台、加工车间和盛放碟盘的消毒杀菌。

背景技术

民以食为天，食品是人类赖以生存和发展的最基本的物质条件。食品质量安全直接关系到人们的身体健康和生活质量，关系到每一个消费者的切身利益。食源性疾病引起的食品质量安全已成为影响公共健康的重要问题。据多方面的研究和调查结果显示，除意外事故和人为因素以外，食源性疾病主要是由微生物和化学药物所引起的。“生食疗法”作为膳食疗法中的一种，近年来倍受到消费者的喜爱。特别是日本料理中的生鱼片，它堪称是日本菜的代表，很受到消费者的欢迎，在中国广东一带也有生食鱼片的习惯。生鱼片的加工工艺流程大概包括：选料，暂养，放血，初洗，开片，去皮，磨皮，修整，分级，清洁，装盘，如果是立即食用，加配饰料，再加上佐料就可以马上食用；非立即食用，装盘后可以急冻，称重包装，冷冻贮藏。由于生鱼片是以鲜活(鲜冻)的鱼类为原料，经过处理后直接食用，这些产品本身可能带菌或者在生产加工过程中污染上病原微生物，引起食物中毒。造成生鱼片食源性中毒的微生物主要包括原料自身携带，海产鱼带有弧菌属、假单胞菌属、无色杆菌属及黄杆菌属等致病菌，淡水鱼常常有假单胞菌属、气单胞菌属等。如受生活用水污染，则鱼体可能带有肠道致病菌，如沙门氏菌属、志贺氏菌属、致病性大肠埃希氏菌属等。这些细菌多分布在鱼的体表、肠腔等处。另外在整个生鱼片制作操作过程中，操作台、加工车间和盛放碟盘也可能使生鱼片染菌。蛭弧菌是寄生于其他细菌，并能导致宿主菌裂解的一类细菌。我们的最新研究表明，有些蛭弧菌可以裂解包括大肠杆菌埃希氏菌属、沙门氏菌、恶臭假单胞菌、弧菌等一些常见生鱼片携带致病或潜在致病性细菌。如能应用蛭弧菌蛭质体制成的蛭弧菌液于生鱼片制作生鲜原料加工时生鱼片减菌，操作台、加工车间和盛放碟盘的消毒杀菌。则能有效地控制生鱼片产品的菌落总数和致病菌含量，预防中毒事件的发生。

蛭弧菌的生活史一般分两个阶段：在宿主菌外，可以自由游动，不进行增殖的游泳体阶段和在特定宿主菌的周质空间内进行生长繁殖的蛭质体阶段。蛭弧菌蛭质体是蛭弧菌在特定宿主菌的周质空间内进行生长繁殖的形式。蛭弧菌进入宿主菌细胞周质空间后，主要通过降解宿主细胞的大分子营养物质成为单体，然后用于提供自身生物大分子的合成。随着细胞增殖和水解酶作用，使宿主细胞壁膜被破坏，从而裂解释放出蛭弧菌。蛭弧菌游泳体是指蛭弧菌侵入宿主菌前的生长形式。蛭弧菌在游泳体阶段，可以识别并与宿主发生不可逆结合，然后侵入宿主。

已有的研究表明，作为一种有益微生物制剂，无论是在食品工业还是在(海洋)水产养殖等领域，蛭弧菌的应用均是安全的。例如：在国外，Lenz and Hespell(1978)研究发现，蛭弧菌及对动物及人的细胞不具侵染性[Lenz R.W.，HespellR.B.Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells.Archives of Microbiology，1978，119(3)：245-248]。在国内，林茂等(2006)研究了蛭弧菌对鱼类细胞的作用，发现它对鱼类细菌没有侵染作用[林茂，杨先乐，薛晖，曹海鹏，邱军强。蛭弧菌BDH21 02对鱼类细胞及病原菌的作用。微生物学通报，2006，33(1)：7-11]。蛭弧菌蛭质体，是蛭弧菌在特定宿主菌的周质空间内进行生长繁殖的形式。因此与游泳体相比，它具有自己独特的优势，制备、保存更为方便，环境耐受力强，杀菌作用时间虽略慢但持久。目前对生鱼片制作过程的消菌，主要用到自来水清洗，但此方法存在保质期短，清洗不彻底，易残留细菌易染菌的缺陷；利用蛭弧菌蛭质体对生鱼片进行食用前的消菌，是一种无公害、无毒无副作用的新生物方法，国内外尚未见过有相关的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在保质期短、菌数多、有潜在危害的缺陷，提供一种蛭弧菌蛭质体在防控生鱼片生产过程中的细菌的应用。特别是应用于制作生鱼片关键环节中的生鲜原料加工初洗时生鱼片减菌，操作台、加工车间和盛放碟盘的消毒杀菌。

为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：

蛭弧菌蛭质体在防控生鱼片生产过程中的细菌的应用，将蛭弧菌蛭质体菌液作为杀菌剂用于生鱼片制作过程中，以防控生鱼片上的菌落总数和致病菌，其中菌落总数指的是生鱼片上所有的细菌，致病菌指的是沙门氏菌属、大肠杆菌埃希氏菌属、弧菌属、假单胞菌属等对人体有害的细菌。

所述蛭弧菌菌株为蛭弧菌BDFM05，由中国典型培养物保藏中心保藏，其简称为CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：M 209172，保藏时间为2009年8月7日。BDFM05呈单细胞，椭圆形，大小为1.43×0.53μm，端生鞭毛，鞭毛长度至少2μm；所述蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05以双层平板法于28℃培养三天可形成直径2～3mm的透明圆形噬菌斑，将得到的圆形噬菌斑接种后，采用蛭质体高密度发酵方法发酵。

优选地，所述蛭弧菌蛭质体菌液的浓度为10²～10⁹pfu/mL。

优选地，所述蛭弧菌混合菌液采用擦涂、喷洒或浸泡的方式作用于生鱼片生鲜原料或盛放碟盘，或者采用擦涂、喷洒的方式作用于操作台或加工车间。

优选地，所述浸泡时间为15～45秒。

优选地，所述浸泡时间为30秒。

优选地，对生鱼片生鲜原料初洗杀菌时，蛭弧菌蛭质体菌液的浓度为10³～10⁹pfu/mL。

优选地，对生鱼片盛放碟盘杀菌时，蛭弧菌蛭质体菌液的浓度为10²～10⁹pfu/mL。

优选地，所述擦涂、喷洒时，蛭弧菌蛭质体菌液的使用量为10～100mL/m²。

优选地，蛭弧菌蛭质体菌液的制备方法为：

在含有乳链球菌(Streptococcus lactis)的DNB(dilute nutrient broth)液体培养基中接入蛭弧菌BDFM05，于20～35℃、150～300rpm培养36～48h，培养液经4℃6000～8000rpm离心15～20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，沉淀即是蛭弧菌蛭质体；然后用DNB液体培养基、无菌水、生理盐水或0.2mol/L pH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液悬浮，即制得蛭弧菌蛭质体菌液。

本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果：

1、本发明所述蛭弧菌蛭质体菌液在防控生鱼片携带的菌落总数和致病菌效果显著。

所述的蛭弧菌蛭质体在对生鱼片中菌落总数和致病菌防控效果，如图3、图4、图5、图8所示。所述的蛭弧菌蛭质体菌液对生鱼片菌落总数和致病菌防控作用，达到蛭弧菌液的最低起效浓度时，能够有效控制菌落总数含量，而致病菌在优选范围内不存在。本应用方法特别适用于生鱼片制作过程中的消菌处理，为日本料理提供优质原材料和加工上的便利，确保生鱼片制作过程中产品的优质，有效地解决了食品安全问题。

2、采用本发明防控日本料理中的生鱼片制作过程中的菌落总数和致病菌安全性好。

利用蛭弧菌蛭质体防控生鱼片制作过程中的菌落总数和致病菌，是一种生物的方法，由于蛭弧菌具有侵染和裂解宿主菌的特性，使其具备作为抑止或清除生物体及其环境中菌落总数和致病菌的条件，且其在裂解完宿主菌后，会因饥饿而自动消亡，因此对人和动物无毒副作用。不仅可提高消费者生食生鱼片的安全系数，保护消费者的健康，也为生鱼片的绿色加工生产提供保障。

3、将本发明应用于生鱼片制作过程生鲜原料初洗减菌，方便、安全且效果好。

把上述蛭弧菌蛭质体应用于生鱼片生鲜原料加工过程初洗减菌，特别有利于预防细菌的感染，减少细菌总量，避免致病菌的残留，增加生鱼片的安全性，确保生鱼片的优质。用于生鱼片生鲜原料加工过程初洗减菌，检测结果显示，对细菌的清除在蛭弧菌蛭质体浓度≥10³pfu/mL作用30秒后，效果显著。可有效地延长在常温或者低温下的保藏时间，防止或延缓腐败变质，操作方便、安全且效果好，直接提高了生鱼片产品品质。

4、将本发明应用于制作生鱼片的操作台、加工车间和盛放碟盘的消毒杀菌，方便、安全且效果好。

把上述蛭弧菌液应用于制作生鱼片的操作台、加工车间和盛放碟盘的消毒杀菌，有利于减少菌落总数的含量，控制致病菌的残留，确保生鱼片的优质。应用于生鱼片制作操作台和加工车间中菌落总数和致病菌的防控时，检测结果显示，在蛭弧菌液浓度≥10²pfu/mL，擦涂使用量≥10mL/m²菌落总数在1h后残留率不到0.1％，致病菌没有检测出。应用于生鱼片盛放碟盘中菌落总数和致病菌的防控时，检测结果显示，采用浸泡方法在蛭弧菌液浓度≥10²pfu/mL时，1h后菌落总数残留率不到0.2％，致病菌没有检测出。可见该技术能有效地延长生鱼片产品在常温或者低温下的保藏时间，防止或延缓腐败变质，且操作过程方便、安全，直接提高了产品品质。

5、本发明克服了之前生鱼片产品保质期短、菌数多、有潜在危害的缺陷。把该蛭弧菌蛭质体应用于生鱼片食用前的菌落总数和致病菌控制，能有效地减少菌落总数含量和致病菌的残留，而且所述的蛭弧菌蛭质体作用时间长，从而能够长时间地确保生鱼片产品的优质，从根本上避免生鱼片食物中毒事件的发生，保护了消费者的健康。

附图说明

图1为自来水用浸渍的方法在防控鲈鱼制成生鱼片生鲜原料加工初洗时菌落总数残留率-时间图；

图2为自来水用浸渍的方法在防控鲈鱼制成生鱼片生鲜原料加工初洗时致病菌残留率-时间图；

图3为蛭弧菌液用浸渍的方法在防控鲈鱼制成生鱼片生鲜原料加工初洗时落总数残留率-浓度图；

图4为蛭弧菌液用浸渍的方法在防控鲈鱼制成生鱼片生鲜原料加工初洗时，时间2h时制得致病菌残留率-浓度图；

图5为蛭弧菌液用擦涂的方法应用于生鱼片制作操作台和加工车间的消毒杀菌时，采用最低蛭弧菌液浓度10²pfu/mL，时间1h时制得的菌落总数残留率-擦涂量图；

图6为自来水用擦涂的方法应用于生鱼片制作操作台和加工车间的消毒杀菌时，菌落总数残留率-时间图；

图7为自来水用擦涂的方法应用于生鱼片制作操作台和加工车间的消毒杀菌时，致病菌残留率-时间图；

图8为蛭弧菌液用浸渍的方法应用于生鱼片盛放碟盘的消毒杀菌，采用最低蛭弧菌液浓度10²pfu/mL，时间1h时制得的菌落总数残留率-浓度图；

图9为自来水用浸渍的方法应用于生鱼片盛放碟盘的消毒杀菌，菌落总数残留率-时间图；

图10为自来水用浸渍的方法应用于生鱼片盛放碟盘的消毒杀菌，致病菌残留率-时间图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步具体详细描述，但本发明的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。

所述沙门氏菌属、大肠杆菌埃希氏菌属、弧菌属、假单胞菌属等致病菌同时出现均有效，但为实验结果及图表数据表达清晰，致病菌以鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium，购自广东省微生物菌种保藏中心，编号GIM1.237)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila，购自广东省微生物菌种保藏中心，编号GIM1.172)和大肠杆菌(Escherichia coli，购自广东省微生物菌种保藏中心，编号GIM 1.137)为例。

实施例1

蛭弧菌蛭质体在防控生鱼片制作过程中生鲜原料加工初洗时的菌落总数和致病菌的应用。下面生鱼片以鲈鱼为例。

应用方法包括以下具体步骤及其条件：

步骤一：蛭弧菌液的制备

所述蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05以双层平板法于28℃培养三天可形成直径2～3mm的透明圆形噬菌斑，所用的蛭弧菌蛭质体通过高密度蛭弧菌蛭质体的发酵方法进行发酵：在装有100mL MRS液体培养基(蛋白胨10g，牛肉膏粉8g，酵母膏粉4g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸三氨2g，乙酸钠5g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，1g吐温80，pH值6.0～6.4)的锥形瓶中接种2mL浓度为10¹⁰cfu/mL乳链球菌(Streptococcus lactis，购自广东省微生物菌种保藏中心，编号GIM1.156)，200rpm、28℃摇床培养18小时，培养液于4℃、5000rpm离心15min，弃上清。沉淀菌体用5mL无菌水重新悬浮，之后加入到装有100mL DNB(dilute nutrient broth)液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，海水晶28g，溶于1000mL蒸馏水，pH值为7.2～7.6)的锥形瓶中，再接入2mL浓度为10³pfu/mL的蛭弧菌BDFM05(CCTCC M209172)。恒温摇床250rpm、28℃培养36h。培养液于4℃6000rpm离心20min，沉淀即为蛭弧菌蛭质体，在沉淀中加入DNB液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，海水晶28g，溶于1000mL蒸馏水中，pH值为7.2～7.6)重新悬浮沉淀物，制成浓度为10⁹～10¹⁰pfu/mL，然后稀释成10²～10⁹pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液，待用；

步骤二：蛭弧菌液在防控鲈鱼生鱼片生鲜原料加工初洗时菌落总数和致病菌的应用实验

(1)鼠伤寒沙门氏菌、嗜水气单胞菌和大肠杆菌的制备于3个含100mL普通营养肉汤(NB)培养基的锥形瓶，分别接入1mL x10³cfu/mL的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium，购自广东省微生物菌种保藏中心，编号GIM1.237)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila，购自广东省微生物菌种保藏中心，编号GIM1.172)和大肠杆菌(Escherichia coli，购自广东省微生物菌种保藏中心，编号GIM1.137)，摇床培养，160rpm 28℃培养12-16。增殖培养液经5000rpm、4℃离心20min，弃上清液，沉淀菌体用无菌水重新悬浮，使其浓度为10⁹cfu/mL，最后制备上述三种菌的混合液，每种菌的终浓度为10⁵cfu/mL。

(2)蛭弧菌液对鲈鱼生鱼片生鲜原料加工初洗时菌落总数和致病菌的防控实验

用浸渍的方法，具体过程如下：

用无菌刀把鲈鱼的肉片切割成每块重量相近的实验样品生鱼块，每块重约0.25kg。试验设对照组和试验组，其中对照组三块，为三个平行样，剩下鱼片为试验组，每小组三块，为三个平行样。先将它们浸渍于75％的酒精中杀菌，在无菌操作台放置至酒精发挥干，后将它们浸渍于步骤二(1)的致病菌混合液中，致病菌混合液是指鼠伤寒沙门氏菌、嗜水气单胞菌和大肠杆菌的终浓度分别达到1×10⁵cfu/mL，30秒后取出，在无菌操作台放置15min使菌体自然吸附。分别测试验组和对照组的菌落总数和致病菌含量，然后对试验组每个小组的鱼片再直接浸渍在不同浓度的蛭弧菌液。将试验组浸渍于浓度为10²pfu/mL、10³pfu/mL、10⁴pfu/mL、10⁵pfu/mL、10⁷pfu/mL或10⁹pfu mL的蛭弧菌液中，每浓度均有三个平行样，30秒后取出；对照组的生鱼片用自来水(常规方法)浸泡，30秒后取出；试验组和对照组的样品，在无菌操作台，放置于室温下，分别于2小时和4小时检测菌落总数和致病菌的含量。菌落总数和致病菌具体检测方法是：每次检测从每组试样中取出鱼片放入无菌绞肉机中同时加入搅碎，震荡均匀后取原液依次进行10倍稀释后，然后采用MPN(most probable number)方法(单位为cfu/kg)，对细菌进行计数，菌落总数采用营养肉汤固体培养基；致病菌检测其中鼠伤寒沙门氏菌的检测采用XLD(xylose-lysine-deoxycholate)选择性培养基，嗜水气单胞菌的检测采用RimLer-shotts(R-S培养基)选择性培养基，大肠杆菌的检测采用TBX(Tryptone Bile X-glucuronide)选择性琼脂培养基。

检测结果如图1、图2、图3、图4、所示，从图1、图2、和图3、图4、的比较可以看出，用蛭弧菌液浸泡的菌落总数和致病菌的残留率低于传统用自来水浸泡的方法。从图3和图4可以看出，蛭弧菌液的浓度越高，菌落总数和致病菌的残留率越小，防控菌落总数和致病菌的能力越强。作用时间越久，防控效果越好。由图3，可知在2h时各个浓度菌落总数的残留率可以控制在1％以下。优于自来水浸泡，使菌落总数含量能够得到很好的控制。而致病菌的残留率仅在浓度为10³pfu/mL，时间2h时检测到致病菌，其它浓度和时间为零，如图4所示。因此，在防控鲈鱼生鱼片制作初洗携带的菌落总数和致病菌中，蛭弧菌液应用于控制菌落总数的浓度≥10²pfu/mL，最佳使用浓度在10²～10⁹pfu/mL。蛭弧菌液控制致病菌的浓度≥10³pfu/mL，最佳使用浓度在10³～10⁹pfu/mL。

关于对生鱼片品质的评价，除了从上述生鱼片的微生物卫生安全方面做出检测外，持水力、嫩度、pH、肉色以及硬度及湿度也是考查的内容。

对持水力的考察方法：采用目前通用的48小时滴水法，将肉制品悬挂在0～4℃悬挂贮存48小时后计算失重率，结果使用蛭弧菌液的试验组的鱼片在悬挂48h持水率均较高，失重率平均为2.0％，而对照组的失重率平均为则为11％。由此明显看出对照组鱼片品质的下降。

鱼片颜色评价，结果是使用蛭弧菌液的试验组鲈鱼呈现鲜红色，稍有光泽；而未使用蛭弧菌液的对照组肉色光泽暗淡，且不断有水外渗。主观评价可以看出未加蛭弧菌液的(对照组)肉色明显的劣于试验组。

pH值测定，结果显示未加蛭弧菌液的鱼片(对照组)的pH值都接近5，这是肌肉的持水力下降的标志，此时的pH值对鱼片的风味产生较大影响，而使用蛭弧菌液的试验组pH值维持在6.0～6.5，这说明肉的品质保持的比对照组的好。

从嫩度方面的考察，是通过嫩度仪来评估的，评估的结果两者之间没有很明显的区别，但实验组嫩度略微的优于对照组。

对硬度主观评价是通过切面是否容易变形来确定的，而对湿度评价是通过切面液体渗出的多少来确定的，结果是4h时对照组的鱼片切面很容易变形，而且还有水渗出，可以鉴定等级为渗出。试验组的鱼片切面不容易变形，也没有水渗出，可以鉴定等级为潮湿。

从以上肉品质的综合鉴定来看，试验组的鱼片品质明显的优于对照组。这说明蛭弧菌液在防控生鱼片生鲜原料加工初洗时的菌落总数和致病菌方面效果显著，可以推广应用于日本料理等生鱼片为材料的产品制作工程菌落总数和致病菌的防控。

实施例2

蛭弧菌蛭质体应用于生鱼片制作操作台和车间的消毒杀菌。

试验包括以下具体步骤及其条件：

步骤一：同实施例1的步骤一

步骤二：蛭弧菌蛭质体应用于生鱼片生制作操作台和车间的消毒杀菌实验。

采用本发明的应用方法，选用大小规格一样的操作台和加工车间，分成多个不同试验组和对照组，其中对照组三个，为三个平行样，剩下为试验组，每小组三个，为三个平行样。分别测试验组和对照组的菌落总数和致病菌含量，然后在试验组加工生鱼片操作台和车间的表面，均匀擦涂浓度为10²pfu/mL的蛭弧菌液，擦涂使用量则按试验组的不同分别为10mL/m²、25mL/m²、50mL/m²、70mL/m²、或100mL/m²，每个试验组擦涂一遍；对照组(常规方法)用自来水擦涂，每个组擦涂一遍；室温下放置，分别于1h和2h检测菌落总数和致病菌。检测方法同上述。

随后的操作台和加工车间菌落总数的检测结果，显示试验组仅在喷洒量为10mL/m²中1小时后检测到菌落总数的残留率如图5所示，没有检测到致病菌，其他喷洒量的试验组没有检测到菌落总数和致病菌。对照组检测到菌落总数的残留率如图6所示，致病菌的检测结果如图7所示；比较图5和图6、图7，可知用蛭弧菌液的效果优于常规的方法。本试验研究的结果表明该蛭弧菌液应用于生鱼片制作操作台和加工车间的消毒杀菌方面效果显著，可确保生鱼片产品品质。由此可见，该蛭弧菌液可以广泛地推广应用于生鱼片产品的操作环境中的消毒杀菌。

实施例3

蛭弧菌液应用于生鱼片盛放碟盘的消毒杀菌。

试验包括以下具体步骤及其条件：

步骤一：同实施例1的步骤一

步骤二：蛭弧菌液在生鱼片盛放碟盘消毒杀菌的应用实验。

采用本发明的应用方法，分成多个不同试验组和对照组，选规格大小一样的碟盘，其中对照组三个，为三个平行样，剩下为试验组，每小组三个，为三个平行样。分别测试验组和对照组的菌落总数和致病菌含量。然后把盛放的碟盘直接浸渍在不同浓度的蛭弧菌液。将试验组分别渍于浓度为10²pfu/mL、10³pfu/mL、10⁴pfu/mL、10⁵pfu/mL、10⁷pfu/mL或10⁹pfu mL的蛭弧菌液中，每浓度均有三个平行样，浸泡30秒取出晾干，对照组(常规方法)用自来水浸泡30秒取出晾干，在无菌操作室，室温下放置，分别于1h和2h检测菌落总数和致病菌的含量。检测方法同上述。

菌落总数和致病菌残留率的检测结果，显示仅在浓度为10²pfu/mL的试验组1h检测到菌落总数，结果如图8所示，没有检测到致病菌。其他浓度的试验组没有检测到菌落总数和致病菌。对照组菌落总数残留率结果如图9所示，致病菌的检测结果如图10所示。比较图8和图9、图10，可知使用蛭弧菌液优于常规的方法。本试验研究的结果表明该蛭弧菌液应用于生鱼片盛放碟盘的消毒杀菌方面效果显著，可确保生鱼片产品品质。由此可见，该蛭弧菌液可以广泛地推广应用于生鱼片盛放碟盘中的消毒杀菌。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不局限于上述实施例子，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.蛭弧菌蛭质体在防控生鱼片生产过程中的细菌的应用，其特征在于，所述蛭弧菌菌株为蛭弧菌BDFM05，由中国典型培养物保藏中心保藏，其简称为CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：M 209172，保藏时间为2009年8月7日；将上述菌株制成蛭弧菌蛭质体菌液作为杀菌剂用于生鱼片生产过程中；蛭弧菌蛭质体菌液的制备方法为：

在含有乳链球菌的DNB液体培养基中接入蛭弧菌BDFM05，于20～35℃、150～300rpm培养36～48h，培养液经4℃6000～8000rpm离心15～20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，沉淀即是蛭弧菌蛭质体；然后用DNB液体培养基、无菌水、生理盐水或0.2mol/L pH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液悬浮，即制得蛭弧菌蛭质体菌液。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蛭弧菌蛭质体菌液的浓度为10²～10⁹pfu/mL。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述蛭弧菌蛭质体菌液采用擦涂、喷洒或浸泡的方式作用于生鱼片生鲜原料或盛放碟盘，或者采用擦涂、喷洒的方式作用于操作台或加工车间。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述浸泡时间为15～45秒。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述浸泡时间优选为30秒。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，对生鱼片生鲜原料初洗杀菌时，蛭弧菌蛭质体菌液的浓度为10³～10⁹pfu/mL。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，对生鱼片盛放碟盘杀菌时，蛭弧菌蛭质体菌液的浓度为10²～10⁹pfu/mL。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述擦涂、喷洒时，蛭弧菌蛭质体菌液的使用量为10～100mL/m²。

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