CN101969960A - 使用γ抑制剂化合物减轻疼痛的方法 - Google Patents

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Abstract

本文中的公开内容涉及修饰的γPKC抑制肽，产生所述肽的方法，和使用γPKC抑制肽治疗疼痛的方法。

Description

使用γ抑制剂化合物减轻疼痛的方法
技术领域
本公开内容涉及调节不同类型的疼痛的化合物，其中所述化合物包括一种或多种与至少一种载体部分偶联的γPKC(γPKC)抑制肽，且所述抑制肽、载体部分、或二者已从原型序列被修饰，以增加由此产生的化合物的稳定性、效力、或二者。
背景技术
蛋白激酶C(“PKC”)是参与各种各样的细胞功能(包括细胞生长、基因表达的调节、和离子通道活性)的信号转导中的关键酶。PKC同工酶家族包括至少11种不同的蛋白激酶，基于它们的同源性和对激活剂的敏感性可分为至少三个亚家族。所述家族是经典的、新型的、和非典型的亚家族。每种同工酶包括许多同源(“保守的”或“C”)结构域，其间散布有同工酶-独特的(“可变的”或“V”)结构域。γPKC，连同α、βI(也称为B2)、和βII{也称为B1))PKC，都是所述“常规”亚家族的成员。
多种疾病状态的机制中涉及了PKC的单独同工酶。已经生成了源自εPKC的εPKC抑制肽，并显示出影响伤害感受。例如，参见美国专利号6,376,467和6,686,334。美国公开号20030223981中也公开了γPKC来源的γPKC抑制肽，于此将其作为参考引入。
这种方法的一个问题是切除的片段的“裸露的”末端与它们在蛋白质中的情境不同，在该片段与蛋白质其余部分附着的位置显示出自由的胺基和羧基。这些外部部分可以致使所述肽对蛋白酶更敏感。作为这些倾向的结果，所述肽的效力可能不太理想，且体内半衰期可能显著缩短。
现有技术的第二个领域利用类似的策略，其中将“载体”肽设计为HIV-Tat和其他蛋白的片段。这些肽片段模拟亲本蛋白穿过细胞膜的能力。特别感兴趣的是，“货物”肽可以附着于这些载体肽从而将货物和载体肽通过这些载体肽片段运载到细胞中的特性。
认识到载体肽是片段，类似的缺陷可以如上所示地适用于所述货物肽。即，暴露的末端可以使其具有不理想的特性，包括蛋白酶易感性。
现有技术的货物/载体肽构建体在货物和载体之间使用了Cys-Cys二硫键，其在所述肽进入细胞时可以通过许多试剂、诸如谷胱甘肽还原而裂解。该特性已被认为对生物活性很重要，因为货物和载体的物理分离容许这两个部分在细胞内发挥它们独立的作用。然而，该假说尚未得到有说服力的检验，且不可裂解的类似物事实上可以具有良好的活性。此外，二硫键的组装很麻烦，并倾向于化学降解。
现有技术的货物/载体肽的某些设计是基于来自该蛋白的连续氨基酸序列。然而，该肽的最佳长度尚未得到充分定义，这是基于理想序列的序列比较分析和理论预测而不是基于类似物测试的经验基础。因此，由前述货物肽的类似物可以预测增加的效力，所述类似物包含与其来源的γPKC结构域相对应的另外的残基。
附图简述
图1显示用γPKC抑制蛋白处理的样品的蛋白质印迹，其显示出该抑制剂对细胞溶胶中和膜级分上的酶水平的影响。
图2显示线图，其描绘在使用2克von Frey丝的研究中的爪缩回次数对比L5横断后天数。
图3显示线图，其描绘在使用12克von Frey丝的研究中的爪缩回次数对比L5横断后天数。
图4A和4B显示两幅线图，其描绘在使用2和12克von Frey丝的两项研究中的平均爪缩回次数对比横断后天数和在横断后第7.5天时的交叉事件。
图5显示线图，其描绘在热痛觉过敏研究中以秒为单位的爪缩回潜伏时间对比L5横断后天数。
图6显示线图，其描绘在第7.5天时具有交叉事件的热痛觉过敏研究中以秒为单位的爪缩回潜伏时间对比L5横断后天数。
图7显示线图，其描绘在热痛觉过敏研究中以秒为单位的爪缩回潜伏时间对比时间，其中在横断后第1-7天，用一定剂量抑制肽攻击动物，所述抑制肽是在通过泵接受所述肽后第14天皮下施用的。
图8显示线图，其描绘在热痛觉过敏研究中以秒为单位的爪缩回潜伏时间对比时间，其中在横断后第7-14天，用一定剂量抑制肽攻击动物，所述抑制肽是在通过泵接受所述肽后第14天皮下施用的。
图9显示线图，其描绘在热痛觉过敏研究中以秒为单位的爪缩回潜伏时间对比时间，其中用一定剂量抑制肽攻击动物，所述抑制肽是在横断后第14天皮下施用的。
发明内容
本文中的公开内容涉及修饰的γPKC抑制肽，产生所述肽的方法，和利用γPKC抑制肽治疗疼痛的方法。从以下的详细说明，本领域中的那些技术人员应该清楚其他方面和实施方案。
发明详述
本发明涉及修饰的肽，其抑制γ蛋白激酶(γPKC)同工酶。典型地，本文中讨论的γPKC抑制肽与载体部分偶联，从而促进该抑制肽向靶细胞的转运。可以相对于原型对照而修饰货物抑制肽、载体肽、或二者，以增加由此产生的货物/载体肽构建体的稳定性。本发明的修饰的γPKC肽有效用于预防和治疗多种类型的疼痛，诸如急性疼痛、慢性疼痛和炎性疼痛。
定义
用于本说明书中时，下列词语和短语通常意欲具有如下所示的含义，除非在使用它们的上下文中作出另外的指示。
“PKC抑制肽”指能够抑制或灭活γPKC酶的肽。
术语“封端的”指已经被化学修饰以改变氨基末端、羧基末端、或二者的肽。与未修饰的货物肽通过二硫键结合的封端的载体肽显示在图2中。
术语“载体”指促进细胞摄取的部分，诸如阳离子聚合物、肽和抗体序列，包括聚赖氨酸、聚精氨酸，触角足(Antennapedia)-来源的肽，HIVTat-来源的肽等，如例如美国专利和公开号4,847,240，5,888,762，5,747,641，6,593,292，US2003/0104622，US2003/0199677和US2003/0206900中所述。载体部分的实例是“载体肽”，其为促进细胞摄取γPKC抑制肽的肽，所述γPKC抑制肽与转运肽化学联合或结合。
术语“预防”指作为“治疗”的要素意欲包括如本文中定义的“预防”和“抑制”。本领域中的那些技术人员应该理解，在人类医学中，不总是可能区分“预防”和“抑制”，因为一件或多件最终的诱导事件可能是未知的、潜在的，或患者直到该一件或多件事件完全发生后才确定。
术语“稳定性”一般指改善保存期(shelf-life)的修饰，例如，延迟基于保存期的cys-cys交换，通过延迟蛋白水解降解，或二者。术语“效力”涉及获得特定结果所需要的特定肽组合物的量。当可以减少一种肽组合物的剂量以获得理想终点时，该肽组合物比另一种更有效力。可以对给定的肽组合物进行某些修饰，以改善该组合物的效力。
γ蛋白激酶C(γPKC)抑制肽
多种γPKC抑制剂记述在本文中，并可以通过本文公开的方法使用。抑制肽可以源自任何结构域，无论是可变的还是恒定的结构域。因此，抑制肽可以源自V1，V2，V3，V4，或V5。抑制肽还可以源自恒定区C1(C1a，C1b)，C3，C4，或C5。还预期肽与这些区域中的一个或多个重叠。货物肽源自各种结构域且长度在5-30个氨基酸的长度范围内。更具体地，源自PKC结构域的肽的长度是5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，或30个残基。原型肽的另一种来源可以在美国专利申请号11/011,557，标题为“Isozyme-specific antagonists ofprotein kinase C(蛋白激酶C的同工酶-特异性拮抗剂)”中找到，其采用激活剂肽并将其转化为抑制肽，将该专利申请的全部内容引入本文作为参考。
在一个实施方案中，货物肽是γPKC的γPKC抑制肽衍生物，其包括氨基酸序列R-L-V-L-A-S(SEQ ID NO：1)，位于该肽的氨基或羧基末端、或位于中间的半胱氨酸残基，和与所述货物肽连接的载体肽。上述货物肽还可以包括一种或多种另外的货物肽，其彼此连接且最终连接于载体肽。
对载体肽和货物肽均进行了修饰，其目的在于提高效力，在生物流体/组织中的稳定性，和化学稳定性。这些改变提供了具有增强特性的γPKC抑制剂，以用于多种临床适应证。
已经应用的一些修饰包括：
1.对货物和/或载体肽进行封端，从而阻碍体内蛋白水解，并由此提高效力和/或功效持续时间；
2.生成重叠肽，引入亲本蛋白的另外的连续区，从而提高效力；
3.制备线性肽，其在单一肽链中具有货物和载体，从而提高药物产品的化学稳定性和保存期；
4.制备多聚体肽，其具有两个或更多个拷贝的活性肽，从而提高蛋白酶抗性和效力；
5.制备肽的逆反(retro-inverso)类似物，从而阻碍蛋白水解；和
6.引入二硫化物类似物，从而提供改善的化学稳定性。
本文中所述的修饰改进了被修饰的γPKC抑制肽的效力、血浆稳定性、和化学稳定性。通过选择原型γPKC抑制肽和将这些肽修饰为用于治疗疼痛的货物肽来确定对γPKC抑制肽的有效修饰。作为γPKC抑制肽，原型肽可以是目前已知的肽或是尚未确定的肽。尽管任何抑制性γPKC肽可以作为起始货物序列使用，但是优选的原型序列是R-L-V-L-A-S(SEQ IDNO：1)，其中肽是未修饰的并通过位于货物和载体肽氨基末端的Cys残基与载体缀合。考虑了多种修饰的或类似物肽。一些所述类似物包括重叠并超过原型序列延伸的氨基酸序列。其他类似物肽相对于原型是截短的。另外，原型序列的类似物相对于原型序列可以具有一个或多个氨基酸取代，其中被取代的氨基酸是丙氨酸残基或天冬氨酸残基。所述包含丙氨酸或天冬氨酸的肽的系统生成称为“扫描”。还预期生成包括所述类似物和修饰的载体肽的线性肽。
对原型序列的另外的修饰是针对修饰一种或多种货物肽、一种或多种载体肽、或二者中的特定降解位点，并引入氨基酸取代或其他化学修饰，这些修饰阻断这些位点的降解。
下述表格列出为了作为原型序列在本发明中使用的许多例举性γPKC抑制肽。
表1
Figure G2008800188672D00061
表2
Figure G2008800188672D00071
表3
Figure G2008800188672D00081
表4
表5
Figure G2008800188672D00101
表6
Figure G2008800188672D00111
表7
Figure G2008800188672D00121
表8
表9
Figure G2008800188672D00141
Figure G2008800188672D00151
表10
Figure G2008800188672D00161
表11
Figure G2008800188672D00171
表12
Figure G2008800188672D00181
表13
Figure G2008800188672D00191
表14
Figure G2008800188672D00201
表15
Figure G2008800188672D00211
表16
表17
另外的变量：
●高半胱氨酸与巯基[丙、乙、丁]酸的所有组合和排列是可应用的
■具有任何巯基[丙、乙、丁]酸载体的高半胱氨酸货物和反之亦然
■在所有情形中高半胱氨酸可以是N-末端或C-末端
■巯基[丙、乙、丁]酸仅可以是N-末端
●以上所有表中的载体可以用触角足(Antennapedia)、聚(多)精氨酸或其它载体替换。
如下更完整讨论地，优选地，γPKC抑制肽与载体部分，诸如载体肽化学联合。在一个实施方案中，所述抑制肽和载体肽通过二硫键连接。也可以使用静电和疏水性相互作用来化学联合载体部分和γPKC抑制肽。在形成二硫键的情形中，向PKC抑制肽序列或向载体肽序列添加Cys残基可能是有利的。Cys残基可以添加到氨基或羧基末端，或二者。Cys残基还可以位于货物或载体肽的氨基酸序列内。所述内源的Cys残基显示出稳定载体和货物肽之间的二硫键连接。
载体部分
已经发现意欲用于细胞摄取的广泛多样的分子(特别是大分子诸如肽)的跨细胞膜转运能力很差。在提议的促进细胞摄取的方案中已经使用了载体部分诸如阳离子(即带正电的)聚合物，肽和抗体序列，包括聚赖氨酸、聚精氨酸、触角足-来源的肽、HIV Tat-来源的肽等。(见，例如，美国专利和公开号4,847,240，5,888,762，5,747,641，6,593,292，US2003/0104622，US2003/0199677和US2003/0206900。)
使用方法和制剂
本文中所述的修饰肽有效用于预防和治疗疼痛。为了该讨论的目的，疼痛及其治疗分类为不同的类型：急性、慢性、神经性、和炎性疼痛的治疗。本文中所述的修饰的γPKC抑制肽有效用于治疗急性、慢性、神经性、和炎性疼痛。
有趣地，本文中公开的化合物还有效用于减轻或预防由多种刺激引起的神经性疼痛的发展。本发明考虑施用本文中所述的γPKC抑制肽，预防性地，与诱导疼痛的刺激同时，或在接受所述诱导疼痛的刺激后，应该有效减轻或预防慢性、炎性或神经性疼痛病症的发展。
一旦装配了货物/载体肽构建体并测试出其与原型相比增加的稳定性、效力、或二者，将该构建体置于药用制剂中，用于在疼痛诱导事件之前、过程中、或贯穿其间连续施用于受试者。
“药用制剂”包括适合于以这样的方式施用修饰的γPKC抑制剂的制剂，所述方式是提供理想结果，且还不产生足以使医师确信其对患者的潜在伤害高于对该患者的潜在益处的不利副作用。适合与修饰的γPKC抑制剂一起使用的药用制剂的成分部分地通过施用途径和方法确定。所述制剂通常包括一种或多种引入到药用载体中的修饰的γPKC抑制肽，所述药用载体典型地包括简单化学剂诸如糖、氨基酸或电解质。示范性的溶液典型地用盐水或缓冲液制备。药用载体可以包含本领域中公知的赋形剂，且可以用在多种制剂中。参见，例如Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷 明顿制药科学)，第18版，A.R.Gennaro，编辑，Mack Publishing Company(马克出版公司)(1990)；Remington：The Science and Practice of Pharmacy (雷明顿：制药学科学和实践)，第20版，A.R.Gennaro，编辑，LippincottWilliams & Wilkins(2000)；Handbook of Pharmaceutical Excipients(药物赋 形剂手册)，第3版，A.H.Kibbe，编辑，American Pharmaceutical Association(美国药物协会)，和Pharmaceutical Press(药物出版社)(2000)；和Handbook of Pharmaceutical Additives(药物添加剂手册)，由Michael和Irene Ash汇编，Gower(1995)。
在制剂中抑制剂的剂量应该根据多种参数变化，所述参数受货物/载体构建体的稳定性和效力、施用途径、和所需给药方案的影响。预期日剂量范围为1μg/kg-100mg/kg体重，优选1μg/kg-1mg/kg和最优选10μg/kg-1mg/kg。
修饰的γPKC抑制剂可以局部或系统施用。局部施用可以通过局部施用、皮内施用、鞘内施用、腹膜内施用、或皮下注射实现。修饰的γPKC抑制剂的系统施用优选是肠胃外的，但是也考虑口服、口腔、和鼻内施用。肠胃外施用通常特征在于通过皮下、肌内、腹膜内、和静脉内注射。修饰的抑制肽的可注射形式可以以常规形式制备，如液体溶液或混悬液，适合于在注射前重构为液体溶液或混悬液的固体(例如，干燥的或冻干的)形式，或为乳剂。通常，合适的赋形剂包括，例如，水、盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等。另外，可以使用小量非毒性辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、增溶剂、张力调节剂(tonicifiers)等，包括，例如，乙酸钠、失水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、环糊精等。
需要时，可以施用修饰的γPKC抑制肽来治疗疼痛。对于预防，修饰的γPKC化合物可以在疼痛-诱导事件之前施用。例如，该肽可以在预期的疼痛-诱发事件前5，10，15，20，25，30，35，40，45，50，55分钟，1小时，数小时，1天，1周，或数周时施用。甚至更长时期的预防施用可以通过使用在体内特别稳定的修饰肽，或通过使用肽的持续释放制剂，例如由鞘内泵递送来实现。
实施例
以下实施例用于更充分地描述使用上述发明的方式，以及阐明对实施本发明的不同方面所考虑的最佳模式。应当理解这些实施例不以任何方式起限制本发明真实范围的作用，而是为了举例说明的目的而提供。本文中引用的所有参考文献作为整体引入于此作为参考。
实施例1
施用γPKC抑制剂减少膜结合的酶
在以下讨论的研究中使用雄性Holtzman大鼠(Harlan，印第安纳波利斯，IN)。实验过程中始终努力最小化动物的不适并减少所用动物的数量。用可随意获得的食物和水将所有大鼠(在神经横断时200-250g)饲养在12小时光/暗循环(7AM打开灯)中。
对研究动物进行L5脊神经横断。用处于O2载体中的氟烷(诱导4％，维持2％)麻醉大鼠。在覆盖L5-S1的皮肤上切一个小切口，随后从脊椎横突缩回脊椎旁侧的肌肉组织。部分除去L6横突，暴露出L4和L5脊神经。确定、轻提、并横断L5脊神经。伤口用盐水冲洗并用3-0聚酯缝合线(筋膜面(fascial plane))和外科手术缝皮钉以两层闭合。
对获自横断后七(7)天的动物的腰椎脊髓样品进行蛋白质印迹分析。用利用皮下泵施用的γPKC抑制剂处理动物，所述皮下泵以10，100，或1000pmol提供所述抑制剂。
如图1中所示，增加所述抑制剂的量导致减少膜制备物中可检测到的γPKC的量。在测试的细胞溶胶样品中检测到增高的酶水平。这些结果证明：皮下施用γPKC抑制肽有效诱导γPKC酶的易位。
实施例2
用修饰的γPKC抑制肽预防末梢神经损伤——诱导的机械异常性疼痛
使用系统预防性范例，修饰的γPKC抑制肽处理在即将手术前，通过植入皮下输注泵起始。输注持续7天。
如前在Sweitzer等，(1999)Brain Res(脑研究)829：209-221中所述，所有动物在身体同侧后爪上利用2-和12-g von Frey丝(Stoelting，WoodDale，IL)测试机械异常性疼痛。使动物适应测试程序。在手术日前，收集三个基线测量值。使大鼠经历三组使用每种丝的10次刺激，每组刺激之间至少10分钟，以防止敏化。异常性疼痛的特征为针对该正常无害刺激强烈地缩回爪。结果报告为30次2-和12-g的von Frey丝刺激中平均爪缩回次数。
还完成了关于sc输注泵放置的交叉研究(n＝8/处理)。一组动物用预防性疼痛范例测试，其中当L5脊神经横断时开始处理并持续直到横断后第7天。横断后第7天时，终止PKC抑制剂处理并跟踪动物直到第14天。第二组动物，在现有的疼痛范例中，在横断后第7天接受sc泵并持续到第14天。
如图2、3、和4中所示(交叉研究)，施用10和100pmol的γPKC抑制肽有效减少针对2-和12g von Frey丝的机械异常性疼痛响应。有趣地，更高的剂量不是抗-异常性疼痛的。该结果类似于由利用εPKCε抑制剂的工作产生的结果，尽管本文中γ抑制剂的浓度是εPKC抑制剂所用浓度的10倍。
实施例3
用修饰的γPKC抑制肽减轻热痛觉过敏
将辐射热源集中在饲养在丙烯酸树脂测试室(4”x 8”x4”)中的自由运动动物的爪趾面上，并测量爪缩回潜伏时间，以评估修饰的γPKC抑制肽对热痛觉过敏的影响。进行中间(pilot)实验以确定在未处理的动物中提供～10秒的爪弹开(flick)潜伏时间所需要的灯光强度。为了确保无组织损伤发生，根据制造商的说明，所有测试具有30秒的截止点。在炎性刺激前，测试每只动物的两只爪的基线灵敏度。每次测试由同一爪的三次测量组成，每次测定之间有最少5分钟的时间间隔。爪缩回阈值是这三次测量的平均值。
如图5和6中所示，γPKC抑制肽的施用是有效的抗痛觉过敏试剂，一直到第7天。图6中的数据显示如实施例1中所述进行的交叉研究的结果。
实施例4
利用修饰的γPKC抑制肽皮下攻击
用于评估皮下施用修饰的γPKC抑制肽效力的研究。按照实施例2中所述的方法准备动物。在攻击前，在横断后第1-7天，对一组动物施用γPKC抑制肽。在攻击前，在横断后第7-14天，对第二组动物施用γPKC抑制肽。第三组动物在没有预先施用抑制肽的条件下攻击。在所有三组中，动物接受100pmol所述抑制肽或载体的皮下攻击，其在横断后第14天施用。然后测量爪缩回潜伏时间。来自第一、第二和第三组的数据分别显示在图7、8和9中。来自这些研究的许多结果是特别令人感兴趣的。第一，爪缩回潜伏时间在所有接受抑制肽的组中保持相对于基线升高，从超过100分钟开始，而不管是否预先施用抑制肽。第二，甚至没接受所述肽预先处理的动物与载体对照相比，也表现出爪缩回潜伏时间显著缩短。第三，皮下施用的抑制肽的保护性作用是系统性的，即应用于所有四只爪，而不是局部的。
本发明所属技术领域中的技术人员应该清楚不背离本发明的实质和范围的备选实施方案。因此，本发明的范围由后附权利要求而非前述说明书来限定。
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Claims (28)

1.γ蛋白激酶C(γPKC)抑制肽组合物，包含：
与胞内载体肽共价连接的γPKC抑制肽，其中所述胞内载体肽、所述抑制肽、或二者在N-末端被修饰。
2.权利要求1的组合物，其中所述PKC抑制肽通过二硫键与所述胞内载体肽连接。
3.权利要求1的组合物，其中所述胞内载体肽是修饰的tat肽，其包括YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：)。
4.权利要求1的组合物，其中所述胞内载体肽是修饰的tat肽，其包括CYGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：)。
5.权利要求3或4的组合物，其中所述修饰的tat肽在其N-末端被酰基、烷基、或磺酰基取代。
6.权利要求5的组合物，其中所述修饰的tat肽在其N-末端被酰化。
7.权利要求1的组合物，其中所述tat肽还在其C-末端被修饰。
8.权利要求1的组合物，其中所述抑制肽包括氨基酸序列R-L-V-L-A-S和末端Cys。
9.权利要求8的组合物，其中所述末端Cys位于所述抑制肽的C-末端。
10.权利要求1的组合物，其中所述抑制肽包括氨基酸序列R-L-V-L-A-S-G-G和末端Cys。
11.权利要求10的组合物，其中所述末端Cys位于所述抑制肽的C-末端。
12.权利要求1的组合物，其中所述tat肽通过在其C-末端形成酰胺而被进一步修饰。
13.权利要求1的组合物，其中所述PKC抑制肽与所述修饰的tat肽的氨基酸的侧链共价连接。
14.权利要求13的组合物，其中所述PKC抑制肽与选自半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、酪氨酸和谷氨酰胺的一个残基的侧链共价连接。
15.权利要求13的组合物，其中所述PKC抑制肽与N-末端半胱氨酸残基的侧链共价连接。
16.权利要求15的组合物，其中所述tat肽的N-末端半胱氨酸是被酰化的。
17.权利要求15的组合物，其中所述tat肽的C-末端精氨酸是伯羧酰胺。
18.权利要求15的组合物，其中所述PKC抑制肽通过其N-末端的酰化、或其C-末端的酰胺化、或其N-末端的酰化和其C-末端的酰胺化二者而被修饰。
19.权利要求1的组合物，其中所述tat肽是Ac-YGRKKRRQRRRC-NH2。
20.权利要求19的组合物，其中所述PKC抑制肽与所述tat肽通过所述tat肽的半胱氨酸残基的巯基基团共价连接。
21.权利要求1的组合物，其还包括第二膜转运肽。
22.线性治疗肽，其包括：
载体肽和γPKC抑制性货物肽，其中所述载体肽和所述货物肽通过肽键连接。
23.权利要求22的线性治疗肽，其还包括位于所述载体肽和所述货物肽之间的连接肽，其中所述载体肽和所述货物肽通过肽键与所述连接肽连接。
24.治疗疼痛的方法，其包括：
将有效量的修饰的γ蛋白激酶C(γPKC)抑制性构建体施用于患有疼痛的受试者，其中所述修饰的γPKC肽与原型序列相比更稳定、更有效力、或既更稳定又更有效力。
25.权利要求24的方法，其中所述受试者患有的疼痛选自由急性疼痛、慢性疼痛、神经性疼痛、和炎性疼痛组成的组。
26.权利要求24的方法，其中增加的效力是由比所述原型序列更快开始作用或更长的活性持续时间导致的。
27.权利要求24的方法，其中所述修饰的γPKC抑制肽在受试者接受疼痛刺激之前、过程中、或之后施用于所述受试者。
28.权利要求27的方法，其中所述抑制肽在所述疼痛刺激前5，10，15，20，25，30，35，40，45，50，55，一小时，数小时，一天，数天，一周，或数周施用。
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