CN101954076A - 自身免疫性肝炎的免疫疗法和预防 - Google Patents

Abstract

本发明涉及免疫学和微生物学领域，更具体地说，本发明涉及用于治疗和预防肝炎和自身免疫疾病的一种组合物，所述组合物包括治疗有效量的部分水解抗原，其中所述部分水解抗原来自于感染了一种病毒的供体的体液。本发明还公开了制备和使用该组合物的方法。

Description

自身免疫性肝炎的免疫疗法和预防

相关申请的交互引用

本申请要求以2009年4月27日提交的美国临时专利申请No.61/172,829以及2009年9月8日提交的美国临时专利申请No.61/240,491作为优先权基础，这两篇申请的全部内容以援引的方式纳入本文。

技术领域

本发明涉及肝炎和其他自身免疫性疾病的免疫疗法和预防。具体地说，本发明涉及一种组合物、制备所述组合物的方法以及使用方法。

背景技术

肝炎可以来源于病毒。病毒来源的肝炎与在人类和其他宿主物种的肝脏和其他细胞中发现的五种病毒有关，它们通常表示为甲型到戊型(英文为A到E型)。最近还发现了其他新的肝炎病毒。在下文中将对这些病毒进行简要的描述以为本发明提供背景知识。

甲型肝炎病毒(HAV)是一种微小的、球形的并具有特别抗性的RNA病毒。它优先通过粪口途径传播，并只在肝脏中复制。感染通常是自限性的，然而个体案例也可能具有较长的甚至复发的过程。然而未观察到真正的慢性感染。HAV在世界范围内分布。在卫生条件较差的国家，该病毒存在于环境中并且几乎100％的人口在儿童时期获得过感染。随着年龄的增长，感染在临床上变得越来越明显，在青春期以及青春期以后，超过80％的患者出现黄疸，在一些情况下甚至出现突发性和致命性肝炎。预防措施依赖于严格的个人卫生和饮食卫生以及接种灭活的甲型肝炎疫苗。这些疫苗具有高度的免疫原性，可诱导针对甲型肝炎的长时间的保护。目前还没有特异性的抗病毒疗法。

乙型肝炎病毒(HBV)是较大的肝DNA病毒科(hepadnaviridae family)中的DNA病毒，在世界范围内感染大约3亿5千万个个体，是慢性肝脏疾病和肝细胞癌的首要致病因素。每年大约有500,000例死亡是由HBV导致的。从1981年以来，血浆来源的乙型肝炎疫苗被广泛使用。1987年FDA批准了由Merck Sharp & Dohme制造的第一种基因工程乙型肝炎疫苗Recombivax HB。虽然接种程序已经减少了许多国家的HBV发病率，但它仍然是较大的公共健康问题，尤其是在亚洲和非洲。

丙型肝炎病毒(HCV)是黄病毒科中的有包膜RNA病毒，它似乎具有较窄的宿主范围。只有人类和黑猩猩是已知的易于感染的物种，这两种物种出现相似的疾病。HCV是另一种全球公共健康问题，感染大约1亿7千万人。WHO估计每年有三百万到四百万人新感染HCV。大约85％的急性感染发展为HCV的长期存活，大约25％的这些慢性感染个体发展为致命性的肝脏疾病。目前没有预防性疫苗来预防该疾病，也没有特异性的抗病毒药物来控制HCV复制。

丁型肝炎病毒(HDV)是一种亚病毒卫星(subviral satellite)，乙型肝炎病毒(HBV)是它的天然辅助病毒。在进入肝细胞后，它利用宿主的细胞结构通过双滚环机制来复制。HDV最常通过与污染的血液和体液接触而传染，这与HBV感染相似。全球大约5％的HBV携带者也同时感染了HDV，导致全球总共1千至1千5百万HDV携带者。HDV感染可以与HBV感染同时发生(同时感染)或者发生于已经感染了HBV的患者中(重叠感染)。在旱獭模型中试验的接种手段诱导了特异性的B细胞和T细胞应答，但仍无法防止HDV感染。治疗HDV也是个问题，并且没有有效的疗法来消除该病毒。

戊型肝炎病毒(HEV)是一种小RNA病毒，是戊型肝炎(一种急性病毒肝炎)的病原。HEV是肝炎病毒科(Hepeviridae)中的肝炎病毒属(Hepevirus)中的唯一成员。HEV是热带和亚热带国家中暴发和散发的病毒肝炎病例中的主要原因，但在工业化国家中不常见。总死亡率在年轻成人和孕妇中分别为0.5-3％和15-20％。该病毒具有粪口传播循环，通过环境污染、主要通过饮用水的污染来传染。近来通过研究从动物物种中分离HEV样病毒也表明，该病毒可通过动物传播，例如通过猪传播。已经发现了适于繁殖该病毒的细胞培养体系，已经记载了对于预防性HEV疫苗的初步的、有前景的试验。

庚型肝炎病毒(HGV)被发现于20世纪90年代晚期。在通常人群中的患病率较高，大约2％。HGV是单链RNA病毒，属于黄病毒科(flavivirusfamily)。HGV不同于HCV。新发现的黄病毒物质(flaviviris agent)GBV-A和GBV-B也不同于HGV，而GBV-C表现为一种HGV的分离株。已经提出将GBV-C/HGV菌株分为至少三种基因型(西非、欧洲/北美、亚洲)。HGV基因组的结构类似于HCV。HGV在外周血细胞中复制，直到目前还未观察到在肝细胞中的复制。许多涉及HGV的研究分析表明，该病毒是亲淋巴性的。已经确定HGV或GBV-C影响HIV感染患者的进程和预后。直到现在，由于GBV-C经常在同时感染、血液疾病和胆病中出现，所以没有理由表明它是没有病理学意义的无害病毒。

最近发现了多种新的肝炎病毒，例如输血转染的环状DNA病毒(TTV)和SEN(SEN-V)，一种源于血液的单链无包膜DNA病毒。针对这些病毒，尚无预防性或治疗性疫苗。

除了甲型、乙型和戊型肝炎之外，没有开发出针对其他病毒的有效的预防性疫苗，对此类疫苗的需求还未满足。另外，没有开发出针对任何上述肝炎病毒的治疗性疫苗，表明对此类疫苗的强烈需求。

除了病毒性肝炎之外，还有其他形式的肝炎也具有类似的临床症状，例如乙醇诱导的肝炎或者医源性肝炎，即由肝毒性药物或物质诱导。虽然肝炎经常由无关的病毒或其他因素引发，但它们仅仅是该疾病的诱因。肝炎的主要起因是异常的免疫反应攻击到肝脏并导致发炎。

蛋白质、多肽和肽被通称为抗原，它们通常由注射或其他途径给药以避免消化降解。用于治疗或预防的口服抗原是制药和疫苗工业多少年来没有解决的难题。口服疫苗领域的这种不令人满意的状态由我们在综述文章中广泛地记载(Silin et al.，Oral vaccination：where we are？ExpertOpinion Drug Delivery 2007；4：1-18)。本申请人的先前的临床研究已经表明，当口服给予肝炎患者时，热灭活的肝炎抗原是安全有效的(Batdelger etal.，Open label trial of therapeutic hepatitis B vaccine V-5 Immunitor(V5)delivered by oral route.Lett Drug Design Discovery 2007；4：540-44；Batdelger et al.，Open label trial of therapeutic immunization with oralV-5 Immunitor(V5)vaccine in patients with chronic hepatitis C.Vaccine2008；26：2733-2737)。

从20世纪60年代以来，水解的血液制品就已经在临床上使用。此类制品的实例有Hydroprot、Aminokrovin、Infusarnin、Fibrinosol等，它们是通过在人类或动物血液中加入酸和葡萄糖制成。它们仅有的给药途径是静脉途径或直肠灌注，这是由于这些制品在口服给药时不起作用，原因是它们在进入胃后由于消化过程导致失去生物活性。另外，这些水解产物由酸水解过程产生，主要由氨基酸组成。因此，这些制品不具有任何由氨基酸长序列(如肽和多肽)带来的抗原性或免疫原性。

通常认为，用于疫苗组合物的肝炎抗原在低或高pH时是不稳定的或者是没有生物活性的，将抗原暴露于这些条件是不可取的。然而一些肝炎病毒适于生长在胃肠道中，例如甲型和戊型肝炎，在低pH时仍保持相当的感染性(Scholz et al.，Acid stability of hepatitis A virus.J Gen Virol，1989Sep；70(Pt 9)：2481-5)，这主要是因为它们是无包膜病毒，无包膜病毒在不利环境中通常比有包膜病毒更加“强壮”。然而其他病毒对低pH和热处理都更加敏感，在较温和的条件下失去抗原性(例如参见Rombautet al.，Thermal inactivation of oral polio vaccine：contribution of RNA andprotein inactivation.J Virol 1994Oct；68(10)：6454-7)。

因此，当前在疫苗领域的主流意见认为，水解导致失去抗原性，即失去生物活性，这使得由水解的抗原制成的疫苗完全不起作用，特别是当抗原也暴露于高温环境中时(例如参见Nath et al.，Stability of therecombinant hepatitis B core antigen.J Clin Microbiol 1992 Jun；30(6)：1617-9；Nuanualsuwan and Cliver.Inactivation of picornaviruses andcaliciviruses；Part 2：Inactivation.Thai J Veterinary Medicine 30September 2003；Vol.33No.3，以及其中的参考文献)。

当前对丙型肝炎的治疗标准是给予干扰素α-2a(Roferon-A)和干扰素α-2b(Intron-A)，或者单独或者与病毒唑(ribavirin，Copegus，Rebetol)一起给予长效干扰素(PEG-Intron，Pegasys)。治疗应答依赖于病毒亚型，基因型2和3中有76至80％、而基因型1或4中只有大约40％获得了持续的病毒学应答。对于乙型肝炎的最常用的治疗方案是给予干扰素α和其长效形式的Pegasys。Glaxo-Wellcome的制品拉米夫定(lamivudine)(Epivir)在1998年推出。第二种肝炎药物阿德福韦二匹伏酯(adefovirdipivoxil)(Hepsera，Gilead Sciences)在2002年9月由FDA批准。Bristol-Myers Squibb生产的恩替卡韦(Entecavir)(Baraclude)在2005年3月被批准。最近被批准的telbivudine(Tyzeka)是另一种核苷类似物，由Idenix开发。这些药物通过减少复制性病毒的量而用作病毒抑制剂，然而通常治疗一旦中断病毒立即复发。另外，这些药物中大多数具有明显的副作用或毒性作用。许多患者由于副作用而放弃或拒绝治疗。病毒抵抗力是长期抗抗毒化学疗法的另一个缺点。Larnivudine单一治疗导致的抗性(第1年，10-27％；第2年，37-48％；第4年，60-65％)要高于阿德福韦(adefovir)(第1年，0％；第2年，3％；第5年，29％)或者telbivudine(第1年，3-4％；第2年，9-22％)。恩替卡韦(Entecavir)抗性在幼年个体中罕见(第4年，＜1％)，但在拉米夫定抗性患者中随时间增加到43％。

因此很明显，需要更好的治疗方式以提高肝炎患者的临床效果。一种可解决目前在治疗肝炎中的缺陷的方法在本发明中公开，如下文所述。

发明内容

本发明不同于通常的观念，即需要复杂的组合物来克服在开发有效的肝炎免疫疗法和预防方法中缺少进展的问题。本发明的特征是一项惊人的发现，即水解的肝炎病毒抗原在其临床效能方面并不比常规的热灭活病毒抗原差。因此，该组合物可作为用于治疗或预防病毒性肝炎感染或自身免疫性肝炎的疫苗。另一项可增强本发现的吸引力的特征是要求保护的组合物在口服剂型中是有效的。为了在生物学上应用，本发明的一种抗原被埋入或包被在制药学上可接受的基质中。另外，当该组合物通过口服给药时，无需免疫佐剂即可产生所需效果。

一方面，本发明包括一种固体口服组合物，包括治疗上有效量的部分水解抗原，其中所述的部分水解抗原来自于感染了一种肝炎病毒的供体的体液。该固体口服组合物可方便地制成片剂或丸剂。该体液可包括肝炎病毒或者肝炎病毒抗原。该组合物进一步包括埋入例如金属盐等基质中的异型抗原(alloantigen)或异种抗原(xenoantigen)。在本发明的另一个更加宽泛的方面，该组合物包括埋入金属基质中的酸水解的抗原、异型抗原或其组合。

水解抗原可用作预防肝炎感染的免疫治疗剂或者预防性制剂，所述感染例如丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎病毒(HBV)、庚型肝炎病毒(HGV)、丁型肝炎病毒(HDV)、甲型肝炎病毒(HAV)以及其他已知的和有待发现的肝炎病毒。本发明也适用于属于肝炎病毒科(包括虫媒病毒(flaviviruse))的病毒。具体地说，本发明涉及一种组合物，以及制备和使用所述组合物的方法。

本发明的第二方面是一种组合物，包括异型抗原和肝炎病毒抗原两者。这是属于本发明的惊人方面的另一个特征。该特征的一个优选的实施方案是一种固体组合物，包括埋入可口服的金属盐基质中的部分酸水解的异型抗原，其中该异型抗原或异种抗原是埋入二价金属盐基质中的人异型抗原，并且优选经过热处理。这种组合物的优选给药方式是口服。

因此，本发明的一个优选特征是该组合物优选为例如片剂或丸剂等固体口服形式。

本发明的另一方面是制备该组合物的方法，它通常包括：部分水解肝炎病毒、肝炎病毒的片段或者异型抗原，将水解产物埋入固体基质，并将该基质制成适于口服的组合物。

在本发明的另一方面中，水解抗原经过热处理，以使该组合物变得安全并且杀灭任何存留的、未水解的、外来的、可成为感染源的病毒。虽然该步骤很重要，但并不是必需的，因为水解和包埋过程在较高温度下(至少56℃，优选高于80℃)进行较长时间，例如长于2小时。

在本发明的另一方面中，该组合物在给药时没有免疫佐剂。

不仅考虑到该组合物来自身体器官或者体液，如全血或者血浆或者血清，本发明也考虑到了重组病毒和病毒抗原，例如本领域公知的以及医学文献中的那些重组病毒和病毒抗原。这些重组病毒或其部分包括构成此类抗原的天然存在的氨基酸或核酸序列、与天然存在的序列基本相似的天然存在的序列的衍生物、或者模拟它们的线性或三级结构形式的序列、以及在一种组成中具有多于一种肝炎病毒(如HEV和HCV)的嵌合序列。

疫苗的各种形式的这些和其他的变换均被考虑而不受限制，它们在本领域中公知，例如由Silin等记载(Silin et al.，Oral vaccination：where weare？Expert Opinion Drug Delivery 2007；4：1-18)，该文献的全部内容是本公开的一部分。

本发明的另一方面是一种治疗患者的方法，包括向患者给予治疗有效量的部分水解的肝炎病毒感染的细胞、肝炎病毒或其片段的步骤。除了治疗感染肝炎病毒的患者，本发明还涉及一种预防性给予所述疫苗以减少最终肝炎感染的可能性或者严重程度的方法。

在另一个实施方案中，本发明涉及一种在脊椎动物受试者中诱发细胞免疫应答的方法，包括向脊椎动物受试者给予治疗有效量的本发明的埋入金属基质中的所选大分子。

具体实施方式

总述

与先前的尝试相反，本发明解决的不是肝炎的诱因而是真正原因，即针对感染肝脏的自身免疫反应。因此，本发明在总体上解决了自身免疫疾病的治疗和预防。因此，本发明解决了前人很少研究的问题。因此，本发明不同于本领域长时间信奉的明显的教条，只有克服了该教条才会有进一步发展的空间。

更具体地说，本申请人在本文中公开了当HBV或HCV抗原被部分水解然后口服给药，它们惊人地比未经水解的热灭活抗原更加安全有效。

定义

如本文所定义，肝炎是一种肝脏损伤，其特征在于在该器官的组织中存在会损害肝脏的炎性细胞。从该观点考虑，肝炎是一种自身免疫疾病，它由身体针对自身组织的活性过度的免疫应答引发。换句话说，免疫系统攻击其自身的细胞。

由HAV感染带来的肝脏损伤极有可能不直接来源于病毒复制，而是细胞介导的病毒特异性免疫与感染的肝细胞相互作用的结果。

本文中使用的术语“肝炎病毒抗原”是指任何来源于肝炎病毒的抗原性材料，可以是天然的也可以是重组的，它可用于在有此需要者中(例如人中)产生有益的临床效果。本文使用的术语“部分水解的抗原”是指通过水解成比最初的天然形式更小的片段而获得的抗原。水解通过酸或碱进行，更具体地说是指酸介导的水解。其他形式的水解，例如酶水解被称为“消化”。

两个术语“异型抗原”和“异种抗原”也可被称为“非自身抗原”，平等地分别用于表示前面术语中的每一个。异型抗原是在相同物种的不同个体的相同的基因座中编码的以等位基因形式呈现的抗原。

异型抗原可以是可作为异型抗原的任何蛋白质、肽、氨基酸或者核酸。例如，当从一个个体向同种的另一个个体移植外源组织或细胞时，异型抗原在异源免疫期间存在于宿主免疫系统中，这种情况为移植免疫学家所熟知。当从一个物种的个体向另一个物种的个体移植异种抗原时，在异种移植期间会发生类似的情况。

疫苗专家使用的术语“佐剂”是指任何这样一种化合物，当与一种抗原一起注射时，会非特异性地提高对该抗原的免疫应答。虽然优选的给药方式是没有佐剂，本领域技术人员也可将该组合物与本领域中已知的免疫佐剂一起给药。特别有利的是那些能够有利地诱导免疫耐受并且同时产生有益的临床效果并且能够清除感染的佐剂。

“患者”是指容易被肝炎病毒感染的宿主，例如人。患者可以被肝炎病毒感染也可以未被感染。患者的实例有人、黑猩狸、鸭子、猪、狗、猫、旱獭和其他容易被肝炎病毒感染的物种。

通过定义，术语“抗原”是指含有一个或多个表位的分子，当该抗原根据本发明呈现时，能够刺激宿主的免疫系统产生细胞免疫应答或者体液抗体应答。诱导免疫应答的能力可被理解为“免疫原性”。

术语“治疗有效量”是指该组合物中所含有的量，它可导致受试者产生足够的应答，以便预防、减轻、消除或诊断症状。确切的量将依赖于被治疗的受试者；被治疗的受试者的年龄和总体状况；所治疗疾病的严重程度；在免疫应答的情况下，受试者的免疫系统合成抗体的能力；所需的保护水平和所选的特定抗原和其给药方式等因素。适合的有效量可由本领域技术人员容易地确定。因此，“治疗有效量”将是一个相对较宽的范围，可通过常规实验例如临床试验来确定。

除非另有说明，涉及术语时的例如“一”或“一种”并不限制于一。例如，“一种疫苗”并不排斥多种疫苗。有时用例如“一种或多种”之类的短语来强调可能存在多种。

详细说明

在实验过程中惊人地发现，当肝炎病毒(如存在于肝炎病毒携带者血液中的病毒)被部分水解时，它们获得了这样一种生物活性，即当给予肝炎患者时可诱导更加有利的临床效果，或者作为预防感染的手段。

部分水解可通过将酸处理作为优选的水解方式而容易地实现。pH范围优选低于6，更优选在0.5和5之间，更优选在1和4之间，更优选在1.0和3.0之间，更优选在1.0和2.0之间。虽然给出了最佳范围，但并不阻止本领域技术人员来确定最佳范围，这仍在本发明的范围之内。本发明的重要的实施方案是部分水解这样来实现：水解过程在完成之前结束，即在抗原被消化成基本不含肽的氨基酸之前结束。这样，病毒抗原仍然具有所需的抗原性质。

在优选的部分水解反应条件下，该组合物并不缩减为由游离氨基酸或其片段组成的组合物。优选地，有足量的有免疫性质的较大残基，它们可以是蛋白质、多肽和肽。基于要获得的临床效果不同，浓度可根据需要调整，而无需过多的实验。部分水解的抗原例如蛋白质占未水解的天然抗原的重量比为至少10％，优选至少20％，优选至少30％，优选至少40％，优选至少50％，优选至少60％，优选至少70％，优选至少80％，可为至少90％。100％水解的意思是这样一种情况，即在水解反应之后所有的蛋白质均被水解成游离氨基酸，没有任何较大的残基，例如残留的肽。其他水解程度较低的状态为“部分水解”。

用于部分水解的酸可为无机酸，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸等。有机酸的实例有例如乙酸、柠檬酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、延胡索酸、酒石酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、水杨酸、对甲苯磺酸等等。

另一种水解方法是使用有机或无机碱溶液进行碱处理。这种情况下的pH范围优选高于8.5、更优选在9.5和15.0之间，更优选在10和14之间，更优选在11和13.5之间。另外，部分酸水解的产物中可添加碱，以提高裂解物的pH值，所添加的碱例如氢氧化钠、氢氧化镁、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾等。应理解，本文使用的术语“水解”不表示暴露于水、低渗溶液、空气、热、冷冻或者任何气体，这可导致例如存在于血液中的细胞裂解。

抗原的来源并不一定是来自血液或血液衍生物，如血浆或血清。可以容易地修改本发明以便使用痰或者其他体液，例如尿、胃肠分泌液、组织液或肿瘤液、滑液、唾液、痰、囊内液、羊水、脑脊液、腹水、肺灌洗液、精液、淋巴液、泪液、汗和前列腺液。这些液体中可含有粒细胞、淋巴细胞或同样有利的其他细胞。不限制于液体，固体组织如肝脏、胰脏、骨骼肌、心脏、肾脏、肺、脑、骨髓、肿瘤组织、皮肤、髓鞘、胶原、粪便以及其他组织如相应分散的接种病毒的卵都是优选实施方案的一部分。

全血、或血清或血浆、或存在有病原感染的细胞的细胞培养基、或者重组获得的含有抗原的肝炎病毒优选使用酸或碱处理。本领域技术人员可使用其他水解剂，如酶或洗涤剂。被部分水解的样品可将来自同一个体的汇集在一起，或者将不同批次的汇集在一起。在这些情况下，酸与血液中存在的蛋白质或异型抗原反应，所述血液还含有肝炎病毒。在这些条件下，这些蛋白质被部分水解减小为较小的片段，这被定义为部分水解的蛋白质。这些片段可为多肽、肽和一些氨基酸。这些组分之间的比例可通过实验确定，无需过多的实验。

部分水解的时间可从5分钟到几个小时，更优选从10分钟到5小时，更优选从20分钟到3小时。该时间可为较短的几个小时时间，可在常规的水解条件下由简单的实验确定，这对于本领域技术人员来说非常熟悉。因此，部分水解的时间可为30分钟、1小时、1.5小时、2小时、2.5小时或3小时，或者中间时间。

在一个实施方案中，当该组合物为液体溶液并且在部分水解过程中，部分水解的产物可使用形成了盐的金属或者碱金属氢氧化物溶液来沉淀。该步骤有效地结束了水解过程，因为抗原被包被或埋入固体物质的基质中，不再与水解剂反应。沉淀可与水解同时进行，或者在水解步骤之后启动，这取决于最终制品的目标用途。例如，由抗原和异型抗原、优选约90％至约20％蛋白质、更优选约80％至约40％蛋白质溶液构成的水溶液，用酸处理，直到pH为约1至约6、优选约1至约4、更优选约1至约2。将该溶液以低速搅拌，优选约10至约500rpm、更优选约30至约300，更优选约60至约200rpm，持续约60分钟至约120分钟，优选约45至约80分钟，更优选约30至约60分钟。然后将金属盐添加到搅拌中的溶液形成浆液，浆液凝固形成固体物质。将该物质冲洗约1分钟至约60分钟，优选约5分钟至约45分钟，更优选约10至约30分钟，然后在烘箱中通过加热来干燥，所述加热在约56至约200℃进行，优选约70至约150℃，更优选约80至约140℃，更优选约100至约120℃，持续约1小时至约72小时，优选约3至约48小时，更优选约5至约12小时。然后将干燥的固体物质还原为粉末。

同样有利的是开始进行沉淀并在该步骤之后加入水解剂(hydrolyzant)。在另一个实施方案中，金属盐在部分水解之前即存在，在所述金属盐的存在下，蛋白质被部分水解，同时地并发地被沉淀。包埋活性成分(如抗原与异型抗原一起，或者只有抗原没有异型抗原，或者只有异型抗原没有抗原)的方法的代表性步骤可包括：使异型抗原与金属盐溶液接触以形成浆液；使获得的混合物与酸接触以使其部分水解，以使该混合物硬化并变成固相或者固态形式，该方法也作为一组固体物质而已知。然后将该固体形式减小为粉末颗粒，其中包埋有活性成分。它们的顺序可事先容易地确定，无需过多实验即可实施，只要含有活性成分的最终制品在临床研究中被证实是临床上有效的即可。

部分水解的肝炎抗原和异型抗原可埋入盐中，包括但不限于：锂、铍、钠、硅酮、镁、铝、铝、钾、钙、钛、钡、铬、锰、钴、镍、铜、锌、砷、锆、钼、银、镉、锑、钡、锇、铂、金、汞、铊、铅或铀。

适当的可溶性盐包括氯化钠、氯化钾、氯化钙或氯化镁。代表性金属例如镁的盐的实例有硼化镁铝、乙酸镁钙、磷酸二镁、氢氧化镁铝(Magaldrate)、铝化镁、天冬氨酸镁、苯甲酸镁、溴化镁、碳酸镁、氯化镁、六水合氯化镁、柠檬酸镁、二硼化镁、二谷氨酸镁、二铀酸镁、氟化镁、葡糖酸镁、六水合镁、氢化镁、氢氧化镁、碘化镁、乳酸镁、乙酰丙酸镁、硝酸镁、氮化镁、乳清酸镁、氧化镁、氯氧化镁、氧硫化镁、高氯酸镁、过氧化镁、磷酸镁、氧脯氨酸镁(pidolate)、硅化镁、硬脂酸镁、硫酸镁、硫化镁、亚硫酸镁、三硅酸镁、磷酸一镁、柠檬酸三镁等。

本领域技术人员还可采用与其他酸反应形成的盐，包括但不限于甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α酮戊二酸盐、α甘油磷酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、丙酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、草酸盐、氯氧化物、马来酸盐、水杨酸盐、硫酸盐、磺酸盐、硝酸盐、氢溴酸盐、氢溴化物、氢碘化物等。

通常，金属的盐可以是：硼化物、乙酸盐、磷酸盐、铝化物、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、溴化物、碳酸盐、氯化物、六水合氯化物、柠檬酸盐、二硼化物、二谷氨酸盐、二铀酸盐、氟化物、葡糖酸盐、六水合物、氢化物、氢氧化物、氧化物、碘化物、乳酸盐、乙酰丙酸盐、硝酸盐、氮化物、乳清酸盐、氯氧化物、氧硫化物、高氯酸盐、过氧化物、氧脯氨酸盐(pidolate)、硅化物、硬脂酸盐、硫酸盐、硫化物、亚硫酸盐、三硅酸盐等。

在本发明的另一方面，可同时使用两种或多种金属。例如，氯化钙和氯化镁可以各种可接受的比例混合，并埋入部分水解的抗原。不限制于两种金属来源，很明显多种来源包含有多种金属或其合金的少量混合成分。例如，氧化镁可含有少量的钙和其他金属。该混合物中的钙例如碳酸钙不会干扰该组固体物质，因为高比例的反应性氧化镁发挥主要作用。反应性镁可方便地与其他混合成分结合，以形成固体物质，如铝酸钙，或者在例如石膏或水泥样组合物中发现的其他成分，并且这是特别有利的。在另一个实施方案中，天然存在的矿物质，如粘土、高岭土、白垩、二氧化硅、石膏、长石、钠长石、钙长石、正长石、碳灰石、岩盐、方解石、白云石、碳酸钠、菱铁矿、黑云母、皂土、白云母、绿泥石、辉沸石、黄铁矿、赤铁矿等可被粉碎并制成浆液，并将抗原混入其中并部分水解。

在部分水解在其他步骤中进行，例如在抗原的包埋步骤之后或者与该步骤同时进行的情况下，这可被归类为促进剂反应，这对于本发明的组合物是有帮助的。有用的化学物质的实例可以有例如碱性化学物质(它将抗原固定在基质内)、上述的酸和酸的盐、以及作为该反应的有机促进剂的蛋白质、肽和氨基酸。作为本发明的一部分的碱性化学物质包括例如碱和碱土氢氧化物、碳酸盐、甲酸盐、铝酸盐和硅酸盐。这些碱性促进剂的剂量无需过多实验即可确定，并且是本发明的组合物的一部分。最有效的可以是例如将硅酸钠和铝酸钠作为方便的试剂。

优选的水解剂为酸和酸的可溶性盐，通常阳离子和阴离子都有助于总体效果。一些阴离子可产生显著的优点，例如卤素离子、氯离子、硝酸根、亚硝酸根、甲酸根、硫代硫酸根和硫氰酸根。还注意到二价和三价阳离子如钙、镁、钡和铝似乎比一价离子如钠、钾和铵更加有吸引力。其他酸性试剂包括硫酸亚铁和硫酸钙或铵、氯化钙等。

这些方法在回收和生成固体物质中是等效的。该固体物质可被进一步处理，如热处理、制成粉末以及制成颗粒、丸剂或片剂。这些步骤可以是任何逻辑上可接受的顺序。减小的或者部分水解的形式本来就是抗原体的一部分。

根据一个实施方案，部分水解的抗原保持其物理结构和形状(例如其分子和超分子形状)接近于原始的三维形状或者结构体。根据另一个实施方案，减小形式的抗原相对于原始结构有变化，但可显示相同的抗原性。本发明组合物和现有技术组合物(具有主要吸附在例如氢氧化铝等免疫佐剂的表面的抗原)的区别在于本发明抗原被安全地包埋在基质中，这使得它保持完整的物理结构，即使在通常不利的条件下，即长时的高温。

已知暴露于高温，例如在56℃或更高的温度，如80℃加热一个小时或更长时间，可使HBV、HCV、HIV、HAV和其他病毒灭活。这样的热处理或变性可有效地破坏感染性并同时去掉抗原性，因为病毒的抗原(如蛋白质、糖、脂质、糖蛋白、氨基酸和核酸)通过加热它们的原始天然结构而被不可逆地灭活。这些畸形抗原被本领域技术人员看作是无用的，因为在疫苗制剂中使用它们是无益的实践。被这些畸形抗原训练的免疫系统将不能够识别例如存在于患者肝脏病毒上的天然抗原，从而错误地指导免疫应答。这已经是并且仍然是疫苗学的基石。因此，暴露于称为“高温”的超过80℃的温度并持续较长的时间可用于破坏感染性病毒，但不可用于制备疫苗。然而令人惊奇地，本组合物在暴露于高温时不失去其抗原性，显示出良好的临床效果。因此，本组合物可安全地使用，由于本组合物中存在的潜在的感染性病毒已经通过暴露于高温1小时或更长时间而被有效地杀灭。热处理的优点虽然从消除感染性病毒的观点看是显而易见的，但从保持抗原性的观点看根本不是显而易见的，这种现象与本领域中的主流意见刚好相反。

该优点还消除了所谓的“冷链”要求，这是常规疫苗的特征，需要冷藏。本发明组合物可在数年中保持稳定，可经历环境温度如室温或热带温度的保存，对其生物学活性没有任何有害作用。具体地说，该组合物在室温时稳定至少一年，更优选在室温稳定至少1.5年，更优选在室温稳定2年以上。

这些抗原的粉末或小颗粒微粒和/或纳米微粒的组合为来源有效提供了进一步变换的方式，例如与片剂赋形剂相结合。赋形剂通常被看作是惰性物质，它被添加到活性成分中以形成大块，例如片剂。它们可以是任何下述成分，或者性质相似的化合物：粘合剂如微晶纤维素、树胶或凝胶；赋形剂如淀粉或乳糖，崩解剂如褐藻酸或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁；助流剂如胶体二氧化硅；增甜剂如蔗糖或糖精；或者调味剂如薄荷或其他一些香料。与赋形剂的混合是通过湿法或干法制粒过程完成的，这对剂型专家来说是熟知的，生成的混合物被压缩成片剂。赋形剂的各种性质，如水分含量、颗粒大小和分布、多形性、无定形、结晶惯态、水合状态以及影响压紧的润滑剂和粘合剂水平均在实施者的常规知识之内。压片速度和压片的机械学方面，如选择冲压机/模具、压片机器可由技术人员无需过多实验进行选择。另外，剂型中可包括其他各种修饰物理形状的材料，例如糖包衣、虫胶或其他肠内吸收剂。

片剂可被肠溶包衣材料覆盖，所述材料主要在肠液中溶解，但在胃的胃液中是基本不溶的。实例包括聚乙烯醇酞酸酯(PVAP)、醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)、醋酸纤维素酞酸酯(CAP)、异丁烯酸共聚物、羟丙甲纤维素琥珀酸酯、醋酸纤维素琥珀酸酯、醋酸纤维素六氢酞酸酯、羟丙甲纤维素六氢酞酸酯、羟丙甲纤维素酞酸酯(HPMCP)、丙酸纤维素酞酸酯、醋酸纤维素马来酸酯、醋酸纤维素偏苯三酸酯、醋酸纤维素丁酸酯、醋酸纤维素丙酸酯、甲基丙烯酸/异丁烯酸聚合物、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物、异丁烯酸乙酯-异丁烯酸甲酯-氯三甲铵异丁烯酸乙酯共聚物等，以及包含一种或多种上述肠溶聚合物的组合。其他实例包括天然树脂，如虫胶、SANDARAC、copal collophorium以及包含一种或多种上述聚合物的组合。肠溶聚合物的其他实例包括带有羧基的合成树脂，甲基丙烯酸：丙烯酸乙酯共聚物。优选地，肠溶包衣材料从可购得的材料中选择，但是也可在实施者的技能范围内选择新材料。

优选的剂型是口服固体剂型，如片剂或丸剂。而且，本文所述的药物组合物可制成适当的剂型，包括但不限于液态口服分散剂、液态口服悬液、气溶胶、可控释放制剂、速溶制剂、泡腾制剂、自乳化分散剂、固溶体、脂质体分散剂、冻干制剂、胶囊、粉末、延迟释放制剂、立即释放制剂、可变释放制剂、延长释放制剂、脉冲释放制剂、多微粒制剂以及混合立即释放和可控释放的制剂。

用于这些方法的设备是可购得的。本领域技术人员可以容易地从下列设备中选择合适的设备：旋转鼓(Rotary Drums)、截面冷却器(SectionalCoolers)、(干燥和冷却)快速干燥器((Drying and Cooling)Flash Dryers)、流化床车间(Fluidized Bed Plants)、涡轮盘式干燥机(Turbo-Tray Dryers)、固化器(Solidizer)、盘式干燥机(Disc Dryers)、Spirocorn，带式干燥机(BeltDryers)、托盘干燥机(Tray Dryers)Simplicior和Favorit、气混机(Air Mix)、喷混机(Spray Mix)、碾磨机(Mills)和分粒机(Classifiers)并从多个厂商如Duske Engineering、Inc.Fenwal、Baxter等处订购。

在本发明的另一个实施方案中，片剂中活性成分的量，即，通过固体剂型(如片剂或丸剂)给予受试者的部分水解的病毒抗原与异型抗原的量，是本领域中已知的获得有需要的人或动物的药物的治疗有效浓度。例如，一种或多种活性成分的量可以为约0.001微克至约1g。在另一个实施方案中，活性成分的量可为约0.01微克至约100mg。在另一个实施方案中，活性成分的量可优选为约0.1微克至约10,000微克，约0.5微克至约1,000微克或者约1微克至约500微克。在另一个实施方案中，固体剂型的给药量为约10微克至约500微克。在另一个实施方案中，固体剂型中的活性成分制剂的给药量为约1-100微克。在另一个实施方案中，基于组合物总重量的活性成分的量为约0.00001％至约30％，优选该量为约0.001％至20％，优选该量为约0.01％至10％，优选该量为约0.1％至5％。含量可根据目标用途而改变。治疗用途与预防用途的组合物相比，含量可提高大约一个数量级。例如，如果在治疗性组合物中HBV表面抗原(HBsAg)的等效量为60微克，那么在预防性组合物中，该剂量可减少至5或10微克。然而，这并不是绝对的要求。与有效剂量相关的这些和其他一些表示并非意在限制，它们仅以举例的方式提供。活性成分的确切的“治疗有效”量由标准的临床试验确定，其中临床效果通过本领域技术人员公知的手段监测。

在一些实施方案中，制剂在给药后的约3小时至约24小时的时间内提供治疗有效量的组合物，如果需要，可以例如每天一次、每天两次(b.i.d.)或每天三次(t.i.d.)给药。优选每天一或两片的简单剂量方案。给药可以是单片给药，更优选是至少一星期长达一个月至一年的重复给药，或者根据需要进行。治疗可在1-3个月后停止，在停止一个月后再重复，但对于一些患者，反复治疗3或6个月之久是不必要的。有一些则愿意停止一年然后再重复。在一些个体中，不必重复治疗，因为患者已经治愈，无需更多的剂量。

在本发明的另一方面，给予该组合物时无需免疫佐剂。虽然这是优选的给药方式，但是本领域技术人员可以将该组合物与本领域中已知的免疫佐剂一起给药。优选的佐剂为能够帮助产生免疫耐受状态的佐剂。这类佐剂的代表性实例有Toll样受体(TLR)佐剂，如酵母多糖(zymosan)和维生素A。本领域技术人员能够发现等效的佐剂。其他免疫佐剂的实例包括但不限于：细菌佐剂；细胞因子佐剂；来源于植物的佐剂等。合成佐剂的实例有苏氨酰基胞壁酰二肽(Threonyl muramyl dipeptide)；金刚烷基酰胺二肽(adamantylamide dipeptide，AdDP)；癸酸；聚阳离子神经鞘脂(polycationic sphingolipid)、N-棕榈酰基D-红-鞘氨醇氨甲酰基-精胺(神经酰胺氨甲酰基-精胺，CCS)；1，25-二氢维生素D3；以及阿夫立定(Avridine)-合成的脂样胺。细菌佐剂的实例有大肠杆菌(E.coli)不耐热毒素(LT)及其衍生物LTK63、LTR72和R192G；霍乱毒素(CT)；CT的B亚基(CTB)；布鲁氏菌2，4-二氧四氢喋啶合酶(Brucella lumazine synthase)、志贺氏菌透明质酸酶复合物(Shigella invasion complex)；炭疽杆菌水肿毒素(Bacillusanthracis edema toxin)；嗜盐弧菌鞭毛素(Vibrio vulnificus flagellin)FlaB；脑膜炎双球菌(Neisseria meningitides)的外膜蛋白；Protollin(脑膜炎双球菌外膜蛋白与弗氏志贺菌(Shigella flexneri)2a脂多糖非共价复合)。TLR配体是I型跨膜蛋白，可识别与肠道粘膜接触的微生物，该配体的实例有TLR-2/6激动剂MALP-2；双链聚肌苷酸-聚胞苷酸(poly(I:C)；含CpG的寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN))；以及TLR-4激动剂，如氨基烷基氨基葡糖苷磷酸盐(AGP)。细胞因子佐剂的实例有I型干扰素(IFN)；IL-12；Flt3配体(Flt3L)；IL-1α；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)；细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)；巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)；吲哚胺2，3-加双氧酶；CD40L和可作为替在佐剂报道的其他细胞因子。植物来源的佐剂的实例有菜豆植物血细胞凝集素(Phaseolus vulgarisphytohaemagglutinin，PHA)；槲寄生凝集素(mistletoe lectins，MLI，MLII，MLIII)；番茄凝集素(tomato lectin，LEA)；小麦凝集素(wheat agglutinin，WGA)；荆豆凝集素1(Ulex europaeus lectin 1，UEA-I)；洗涤剂样物质皂草苷(saponin)QS-21，来自于南美肥皂树(South American soap tree)的树皮；另一种皂树(Quillaja saponaria)来源物Quil A；皂草苷(quillajasaponin)衍生物GPI-0100；瞿麦属种(Gypsophila sp.)皂草苷(Saponin)；藜(Chenopodium  quinoa)；远志(Polygala tenuifolia)；浮萍的apiogalacturonanic pectin(Lemna minor)、Lemnan LM；水茄(Solanumtorvum)(STE)；Ricin B；白桦(Betula alba)花粉；Thujae summitates、赝靛(Baptisiae tinctoriae)根、紫松果菊(Echinaceae purpureae)根和白锥菊(Echinaceae pallidae)根；银杏(Ginkgo biloba)；以及苦瓜(Momordicacharantia)。表位佐剂的实例有例如破伤风毒素(TTE)的氨基酸残基830-843，结核菌热休克蛋白65(TBE)的1-20，风疹蛋白E2-4(ME)的54-65以及沙眼热休克蛋白60(CE)的35-48；P.vivax的MSP1(DYDVVYLKPLAGMYK)；以及DR-限制性辅助T细胞表位，称为PADRE。其他本领域已知的佐剂有明矾、铝、矿物油、可代谢的有机油、MF59、ISCOM、佐剂65(含花生油、二缩甘露醇一油酸(mannidemonooleate)和单硬脂酸铝)、普卢兰尼克聚醇(pluronic polyol)L-121、乳化剂如弗氏不完全佐剂和角鲨烯(鲨鱼油)。应理解，当使用基于金属的免疫佐剂如铝盐或明矶时，它们不是用于包埋抗原的金属基质的一部分。

一旦在肠中消化，基质释放出该抗原的初始部分或片段，将其呈现于宿主的免疫系统。宿主通过细胞途径处理抗原，如通过1类或2类MHC的抗原呈现，这通过作为抗原呈现细胞(APC)的特化的粘膜和/或树突细胞来实现。虽然本发明中，所要求保护的组合物的作用机制不是本发明的必需部分，但它为本领域技术人员提供了一种感兴趣的物质，这并非对本发明的深度和要旨没有任何影响，本发明的深度和要旨由上述实例中的临床证据支持。

在一个优选的实施方案中，部分水解的肝炎病毒与异型抗原一起存在于该组合物中，可用于预防和治疗用途，以预防或治疗肝炎和肝炎病毒感染。在疫苗现有技术中，花费了很大力气从非病毒抗原中纯化抗原。这是由于，注射这些非病毒抗原会导致不期望的免疫反应，这些反应有时会危及生命。因此，使异型抗原与病毒抗原一起存在于该组合物中违背了本领域的主流观点。异型抗原可以是例如白蛋白、MHC分子、细胞因子、淋巴素(lymphokine)、趋化因子、免疫球蛋白以及可以单个优选组合存在于宿主中的其他分子。部分水解的肝炎病毒与异型抗原的比例可由已知的方法无需过多的实验来确定。优选地，理想的比例为天然存在的比例，例如在全血中的比例，即，肝炎病毒的量与其他宿主细胞如血液中存在的总蛋白的量的比例。这同样适用于以下情形：病毒或其抗原在繁殖细胞中重组表达，所述细胞如酵母细胞或哺乳动物细胞如CHO细胞。这些重组体是公知的，例如第三代HBV疫苗含有两种病毒表面抗原的pre-S1、pre-S2和S抗原成分，在使用重组乙型肝炎表面抗原DNA传染后可在连续的哺乳动物细胞系小鼠c127克隆细胞系中产生。在组合物成分在非人物种的细胞中培养但打算用于人的情况下，则将异型抗原称为异种抗原，本发明的目的可被称为异型抗原。在另一种情况下，有需要时，可以容易地培养不是部分病毒，而是整个病毒，例如在人肺癌A549细胞培养物中培养的HEV病毒。虽然陈述了优选的比例，也可有意地增加异型抗原或抗原的量。在任何情况下，异型抗原的量不应太少，以致可看作标准疫苗(如由血浆制备的乙型肝炎疫苗)的污染物。虽然在由汇集的血浆制备的乙型肝炎疫苗中污染的血浆蛋白即异型抗原的量根据批次或厂商的不同而不同，但它通常少于1％。在甲型肝炎疫苗的情况下，WHO推荐污染的白蛋白的量少于50纳克/剂(参见例如WHO网站地址：http://www.who.intlbiologicals/publications/trs/areas/vaccines/hepatitis/WHO TRS 858 A2.pdf)。因此，这些要求使得本发明的组合物和现有技术中的常规疫苗有明显的区别，因为在本发明中总异型抗原与抗原的比例总是高于1∶100，当用白蛋白来计量异型抗原物质的量时总是高于50纳克水平。这样的组合物，特别是口服形式的组合物，将用于有需要的宿主，如有需要的人宿主或其他物种。本发明可包含肝炎病毒以及与之有关的病毒。例如，与丙型肝炎有关的虫媒病毒(黄病毒科，Flaviviridae)包括但不限于：阿布塞塔罗夫病毒(Absettarov)；阿尔弗黄病毒(Alfuy)；Apoi病毒；Aroa病毒；Bagaza病毒；Banzi病毒；Bououi病毒；Bussuquara病毒；Cacipacore病毒；Island病毒；Dakar bat病毒；登革热病毒1，2，3和4；Edge Hill病毒；Entebbe bat病毒；Gadgets Gully病毒；Hanzalova病毒；Hypr病毒；Ilheus病毒；以色列土耳其脑膜炎病毒(Israel turkeymeningoencephalitis)；日本脑炎(Japanese encephalitis)；Jutiapa病毒；Kadam病毒；Karshi病毒；Kedougou病毒；Kokoera病毒；Koutango病毒；Kumlinge病毒；Kunjin病毒；基亚萨努森林病(Kyasanur Forest disease)；Langat病毒；羊跳跃病(Louping ill)；Meaban病毒；Modoc病毒；蒙大拿蝙蝠脑白质炎(Montana myotis leukoencephalitis)；澳洲墨莱溪谷脑炎(Murray valley encephalitis)；Naranjal病毒；Negishi病毒；Ntaya病毒；鄂木斯克出血热(Omsk hemorrhagic fever)；Phnom-Penh bat；Powassan病毒；Rio Bravo病毒；Recio病毒；Royal Farm病毒；俄罗斯春夏型脑炎(Russian spring-summer encephalitis)；Saboya病毒；圣路易士脑炎(St.Louis encephalitis)；Sal Vieja病毒；San Perlita病毒；Saumarez Reef病毒；Sepik病毒；Sokuluk病毒；Spondweni病毒；Stratford病毒；Temusu病毒；Tyulenly病毒；Uganda S，Usutu，Wesselsbron；西尼罗河病毒；Yaounde病毒；黄热病毒(Yellow fever)；以及Zika病毒。

其他被发现在血液中循环的人病毒同样适合单独地用于本发明的组合物中或者与属于以下科的所关注的病毒结合用于本发明的组合物中，所述科为肝脱氧核糖核酸病毒科(Hepadnaviridae)(乙型肝炎病毒)；微小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)(例如甲型肝炎病毒；以及相关脊髓灰质炎病毒(polio virus)、肠道病毒(enterovirus)、人柯萨奇病毒(human Coxsackie virus)、鼻病毒(rhinovirus)、埃可病毒(echovirus))；黄病毒科(Flaviridae)(例如登革热病毒(dengue virus)、脑炎病毒、黄热病病毒)。其他病毒的实例可包括但不限于：逆转录病毒科(Retroviridae)(例如人免疫缺陷病毒)；杯状病毒科(Caliciviridae)(例如导致肠胃炎的毒株)；披膜病毒科(Togaviridae)(例如马脑炎病毒、风疹病毒(rubella virus))；冠状病毒科(Coronoviridae)(例如冠状病毒(coronavirus))；弹状病毒科(Rhabdoviradae)(例如水泡性口膜炎病毒(vesicular stomatitis virus)、狂犬病毒(rabies virus))；纤丝病毒科(Filoviridae)(例如埃博拉病毒(ebola virus))；Parantyxoviridae；副粘病毒科(Paramyxoviridae)(例如副流感病毒(parainfluenza virus)、腮腺炎病毒(mumps virus)、麻疹病毒(measles virus)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus))；正粘病毒科(Orthornyxoviridae)(例如流感病毒))；布尼亚病毒科(Bungaviridae)(例如汉坦病毒(Hantaan virus)、布尼病毒(bungavirus)、静脉病毒(phlebovirus)和内罗病毒(Nairo virus))；沙粒病毒科(Arenaviridae)(出血热病毒(hemorrhagic fever virus))；呼肠孤病毒科(Reoviridae)(例如呼肠孤病毒(reovirus)、环状病毒(orbiviurs)和轮状病毒(rotavirus))；双RNA病毒科(Birnaviridae)；细小病毒科(Parvoviridae)(细小病毒(parvovirus))；乳多空病毒科(Papovaviridae)(乳头状瘤病毒(papilloma virus)、多瘤病毒(polyomavirus))；腺病毒科(Adenoviridae)(大多数腺病毒))；疱疹病毒科(Herpesviridae)(I型和II型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)、水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus)、巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)、疱疹病毒(herpes virus)；痘病毒科(Poxyiridae)(类天花病毒(variola virus)、痘苗病毒(vaccinia virus)、痘病毒(pox virus))；虹彩病毒科(Iridoviridae)(非洲猪病毒(Africanswine virus))；以及未分类的病毒(例如海绵状脑病的病原)。

本发明的制剂不仅仅可以用于抗病毒。存在于宿主中任何病原体的抗原均可用于诱发足够的免疫反应。例如，考虑治疗真菌感染时，则可从皮肤真菌(Dermatophytres)获得真菌抗原，包括：絮状表皮癣菌(Epidermophyton floccusum)、头癣小孢子菌(Microsporum audouini)、大小孢子菌(Microsporum canis)、扭曲小孢子菌(Microsporumdistortum)、马类小孢子菌(Microsporum equinum)、石膏样小孢子菌(Microsporum gypsum)、矮小孢子菌(Microsporum nanum)、同心性发癣菌(Trichophyton concentricum)、马发癣菌(Trichophytonequinum)、鸡发癣菌(Trichophyton gallinae)、石膏样发癣菌(Trichophyton gypseum)、麦格氏发癣菌(Trichophyton megnini)、须发癣菌(Trichophyton mentagrophytes)、昆克努发癣菌(Trichophytonquinckeanum)、红色发癣菌(Trichophyton rubrum)、许兰发癣菌(Trichophyton schoenleini)、断发发癣菌(Trichophyton tonsurans)、疣状发癣菌(Trichophyton verrucosum)、疣状发癣菌白色变种(T.verrucosum var.album)、疣状发癣菌discoides变种(var.discoides)、疣状发癣菌ochraceum变种(var.ochraceum)、堇色发癣菌(Trichophyton violaceum)和/或蜜块状发癣菌(Trichophytonfaviforme)。不限于这些真菌，其他目的真菌病原体包括烟色曲霉(Aspergillus fumigatus)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、土曲霉(Aspergillus terreus)、聚多曲霉(Aspergillus sydowi)、Aspergillusflavatus、灰绿曲霉(Aspergillus glaucus)、头状芽生裂殖菌(Blastoschizomyces capitatus)、白念珠菌(Candida albicans)、念珠菌烯醇酶(Candida enolase)、热带念珠菌(Candida tropicalis)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、克鲁斯念珠菌(Candida krusei)、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)、星状念珠菌(Candida stellatoidea)、久世念珠菌(Candida kusei)、Candida parakwsei、葡萄牙念珠菌(Candidalusitaniae)、假热带念珠菌(Candida pseudotropicalis)、吉利蒙德念珠菌(Candida guilliermondi)、卡氏枝孢霉(Cladosporium carrionii)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、皮炎芽生菌(Blastomnycesdermatidis)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、棒地霉(Geotrichum clavatum)、夹膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)、肺炎克雷伯氏杆菌(Klebsiellapneumoniae)、巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)、卵状糠秕孢子菌(Pityrosporum ovale)、诡谲腐霉(Pythiumn insidiosum)、酿酒酵母(Sacharomnyces cerevisae)、布拉酵母(Saccharomycesboulardii)、粟酒裂殖酵母(Saccharomyces pombe)、尖端赛多孢子菌(Scedosporium apiosperum)、申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii)、白色毛孢子菌(Trichosporon beigelii)、鼠弓形体(Toxoplasma gondii)、马尔尼菲青霉(Penicillium marnaeffei)、马拉色氏霉菌属种(Malasseziaspp.)、产色芽生菌属种(Fonsecaea spp.)、万吉拉菌属种(Wangiellaspp.)、孢子丝菌属种(Sporothrix spp.)、担子菌团属种(Basidiobolusspp.)、耳霉属种(Conidiobolus spp.)、根霉属种(Rhizopus spp)、毛霉属种(Mucor spp)、腐化米霉菌属种(Absidia spp)、被孢霉属种(Mortierella spp)、小克银汉霉属种(Cunninghamella spp)、瓶霉属种(Saksenaea spp.)、链格孢属种(Alternaria spp)、弯孢霉属种(Curvularia spp)、长蠕孢菌属种(Helminthosporium spp)、镰孢菌属种(Fusarium spp)、曲霉属种(Aspergillus spp)、青霉菌属种(Penicillium spp)、褐腐菌属种(Monolinia spp)、丝核菌属种(Rhizoctonia spp)、拟青霉属种(Paecilomyces spp)、皮司霉属种(Pitliomyces spp)和分支孢子菌属种(Cladosporium spp)。

所述组合物同样可用于治疗存在于宿主血液或体液中的微生物感染，所述微生物包括例如：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)、中华根瘤菌属(Sinorhizobium)种(例如草木犀属(meliloti))、李斯特菌属(Listeria)种(例如产单核细胞(monocytogenes))、梭菌属(Clostridium)种(例如acetabutylicum、艰难梭菌(difficile))、弧菌属(Vibrio)种(例如霍乱弧菌(cholerae))、棒状杆菌属(Corynebacterium)种(例如白喉棒杆菌(diptheriae))、布鲁氏菌属(Brucella)种(例如猪流产布氏杆菌(suis))、假单胞菌属(Pseudomonas)种(例如绿脓假单胞菌(aeruginosa)、香假单孢杆菌(syringae)、恶臭假单胞菌(putida))、希瓦氏菌属(Shewanella)种(例如腐败希瓦氏菌(putrefasciens))、中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium)种(例如百脉根中慢生根瘤菌(loti))、柄杆菌属(Caulobacter)种(例如新月柄杆菌(crescentus))、乳球菌属(Lactococcus)种(例如乳酸乳球菌(lactis))、分支杆菌属(Mycobacterium)种(例如耻垢分枝杆菌(smegmatis))、伯克霍尔德菌属(Burkholderia)种(例如鼻疽伯克霍尔德菌(mallei)、性鼻疽伯克霍尔德菌(pseudomallei))、地杆菌属(Geobacter)种(例如硫还原地杆菌(sulfurreducens))、密螺旋体属(Treponema)种(例如齿垢密螺旋体(denticola))、杆菌属(Bacillus)种(例如嗜热脂肪芽胞杆菌(stearothermophilus)、炭疽杆菌(anthracis)、枯草杆菌(subtilis)、耐盐嗜碱芽孢杆菌(halodurnas))、埃希氏杆菌属(Escherichia)种(例如大肠埃希杆菌(coli))、肠球菌属(Enterococcus)种(例如粪肠球菌(faecalis))、沙门氏菌属(Salmonella)种(例如都伯林沙门氏菌(dublin)、肠炎沙门氏菌(enteriditis)、副伤寒沙门氏菌(paratyphi)、伤寒沙门氏菌(typhi))、克雷伯氏菌属(Klebsiella)种(例如肺炎克雷伯氏菌(pneumoniae))、博德特氏菌(Bordetella)种(例如副百日咳博德特氏菌(parapertussis))、放线杆菌属(Actinobacillus)种(例如伴放线菌放线杆菌(actinomycetemcomitans))、链霉菌属(Streptomyces)种(例如天蓝色链霉菌(coelicolor))、链球菌属(Streptococcus)种(例如酿脓链球菌(pyogenes)、肺炎链球菌(pneumoniae))、耶尔森氏菌属(Yersinia)种(例如鼠疫耶尔森氏菌(pestis))、土壤杆菌属(Agrobacterium)种(例如根瘤土壤杆菌(tumefaciens))和不动杆菌属(Acinetobacter)种。

本发明还包括治疗自身免疫性疾病，无论其是由微生物感染或病毒感染导致的还是具有未知的病因。这些疾病例如包括：急性坏死性出血性白质脑炎(Acute necrotizing hemorrhagic leukoencephalitis)、阿狄森氏病(Addison′s disease)、无丙球蛋白血症(Agammaglobulinemia)、变应性哮喘(Allergic asthma)、变应性鼻炎(Allergic rhinitis)、斑秃(Alopecia areata)、淀粉样变(Amyloidosis)、强直性脊柱炎(Ankylosingspondylitis)、抗-GBM/抗-TBM肾炎(Anti-GBM/Anti-TBM nephritis)、抗磷脂综合征(Antiphospholipid syndrome，APS)、自身免疫性再生障碍性贫血(Autoimmune aplastic anemia)、自身免疫性家族性自主神经异常(Autoimmune dysautonomia)、自身免疫性肝炎(Autoimmunehepatitis)、自身免疫性高脂血症(Autoimmune hyperlipidemia)、自身免疫性免疫缺陷(Autoimmune immunodeficiency)、自身免疫性内耳疾病(Autoimmune inner ear disease，AIED)、自身免疫性心肌炎(Autoimmune myocarditis)、自身免疫性血小板减少性紫癜(Autoimmune thrombocytopenic purpura，ATP)、自身免疫性甲状腺病(Autoimmune thyroid disease)、轴突及神经元神经病变(Axonal&neuronal neuropathies)、巴洛病(Balo disease)、贝切特氏病(Behcet′s disease)、大疱性类天疱疮(Bullous pemphigoid)、心肌病(Cardiomyopathy)、巨大淋巴结增生症(Castleman disease)、口炎性腹泻(非热带的)(Celiac sprue(nontropical))、查加斯病(Chagas disease)、慢性疲乏综合征(Chronic fatigue syndrome)、慢性炎症性脱髓鞘性多神经病(Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy，CIDP)、变应性肉芽肿性血管炎(Churg-Strauss syndrome)、疤痕性类天疱疮/良性黏膜类天疱疮(Cicatricial pemphigoid/benign mucosal pemphigoid)、耳蜗前庭综合征(Cogans syndrome)、冷凝集素疾病(Cold agglutinindisease)、先天性心脏传导阻滞(Congenital heart block)、柯萨奇病毒性心肌炎(Coxsackie myocarditis)、CREST病、克隆氏病(Crohn′sdisease)、脱髓鞘神经病(Demyelinating neuropathies)、皮肌炎(Dermatomyositis)、德维克病(Devic disease)、盘状狼疮(Discoidlupus)、德雷斯勒氏综合(Dressler′s syndrome)、子宫内膜异位症(Endometriosis)、嗜酸细胞性筋膜炎(Eosinophilic fasciitis)、结节性红斑(Erythema nodosum)、特发性混合型冷沉淀球蛋白血症(Essentialmixed cryoglobulinemia)、伊文思综合征(Evans syndrome)、实验性变应性脑脊髓炎(Experimental allergic encephalomyelitis)、纤维肌痛(Fibromyalgia)、纤维化肺泡炎(Fibrosing alveolitis)、巨细胞动脉炎(颞动脉炎)(Giant cell arteritis(temporal arteritis))、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture′s syndrome)、格雷夫斯氏病(Graves′disease)、格-巴二氏综合征(Guillain-Barre syndrome)、桥本氏病(Hashimoto′s drsease)、溶血性贫血(Hemolytic anemia)、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonleinpurpura)、妊娠疱疹(Herpes gestationis)、低丙球蛋白血症(Hypogammaglobulinemia)、特发性肺纤维变性(Idiopathic pulmonaryfibrosis)、(Idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)、(IgAnephropathy)、特发性血小板减少性紫癜(Immunoregulatorylipoproteins)、包涵体肌炎(Inclusion body myositis)、胰岛素依赖性糖尿病(1型)(Insulin-dependent diabetes(type 1))、间质性膀胱炎(Interstitial cystitis)、幼年型关节炎(Juvenile arthritis)、青少年糖尿病(Juvenile diabetes)、川崎综合征(Kawasaki syndrome)、兰伯特-伊顿综合征(Lambert-Eaton syndrome)、白细胞破裂性脉管炎(Leukocytoclastic vasculitis)、扁平苔癣(Lichen planus)、硬化性苔癣(Lichen sclerosus)、木样结膜炎(Ligneous conj unctivitis)、线性IgA病(Linear IgA disease，LAD)、狼疮(SLE)(Lupus(SLE))、莱姆病(Lymedisease)、梅尼尔氏病(Meniere′s disease)、显微镜下多血管炎(Microscopic polyangiitis)、混合性结缔组织病(Mixed connective tissuedisease，MCTD)、莫伦氏溃疡(Mooren′s ulcer)、穆哈-哈伯曼二氏病(Mucha-Habermann disease)、多发性硬化(Multiple sclerosis)、肌无力性肌炎(Myasthenia Myositis)、发作性睡病(Narcolepsy)、嗜中性白血球减少症(Neutropenia)、眼瘢痕性类天疱疮(Ocular cicatricialpemphigoid)、复发性风湿病(Palindromic rheumatism)、链球菌相关的小儿自身免疫性神经精神障碍(PANDAS(Pediatric AutoimmuneNeuropsychiatric Disorders Associated with Streptococcus))、副肿瘤性小脑变性(Paraneoplastic cerebellar degeneration)、阵发性夜间血红蛋白尿(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH)、扁平部睫状体炎(周边葡萄膜炎)(Pars planitis(peripheral uveitis))、神经痛性肌萎缩(Parsonnage-Turner syndrome)、天疱疮(Pemphigus)、外周神经病(Peripheral neuropathy)、静脉周围性脑脊髓炎(Perivenousencephalomyelitis)、恶性贫血(Pernicious anemia)、POEMS综合征、结节性多动脉炎(Polyarteritis nodosa)、风湿性多肌痛(Polymyalgiarheumatica)、多肌炎(Polymyositis)、心肌梗塞后综合征(Postmyocardial infarction syndrome)、心包切开术后综合征(Postpericardiotomy syndrome)、原发性胆汁性肝硬变(Primary biliarycirrhosis)、黄体酮皮炎(Progesterone dermatitis)、银屑病(Psoriasis)、(Psoriatic arthritis)、单纯红细胞再生障碍性贫血(Pure red cellaplasia)、坏疽性脓皮病(Pyoderma gangrenosurn)、雷诺现象(Raynauds phenomenon)、交感反射性营养不良(Reflex sympatheticdystrophy)、莱特尔氏综合征(Reiter′s syndrome)、复发性多软骨炎(Relapsing polychondritis)、多动腿综合征(Restless legs syndrome)、风湿热(Rheumatic fever)、类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis)、结节病(Sarcoidosis)、施密特综合征(Schmidt syndrome)、巩膜炎(Scleritis)、硬皮病(Scleroderma)、斯耶格伦氏综合征(Sjogren′ssyndrome)、精子及睾丸自身免疫(Sperm & testicular autoimmunity)、僵人综合征(Stiff person syndrome)、亚急性细菌心内膜炎(Subacutebacterial endocarditis，SBE)、交感性眼炎(Sympathetic ophthalmia)、高安氏动脉炎(Takayasu′s arteritis)、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血小板减少性紫癜(Thrombocytopenic purpura，TTP)、托洛萨-亨特综合征(Tolosa-Hunt syndrome)、横贯性脊髓炎及坏死性脊髓病(Transversemyelitis & necrotizing myelopathy)、I、II及III型自身免疫性多腺综合征(Type I，II，& III autoimmune polyglandular syndromes)、溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis)、未分化结缔组织病(Undifferentiatedconnective tissue disease，UCTD)、葡萄膜炎(Uveitis)、血管炎(Vasculitis)、水泡性皮炎(Vesiculobullous dermatosis)、白癜风(Vitiligo)、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener′s granulomatosis)等。

并非进一步限制，本发明的优选实施方案考虑到了支原体感染，例如肺炎支原体(Mycoplasma pneurnoniae)、尿素分解尿素原体(Ureaplasma urealyticum)、生殖器支原体(Mycoplasma genitalium)、军团杆菌病(Legionellosis)、嗜肺性军团病菌(Legionellapneumophilia)、鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)、钩端螺旋体病(Leptospirosis)、钩端螺旋体属(Leptospira)、鼠咬热(哈佛希耳热)(Rat-Bite Fever(Haverhill Fever))、念珠状链杆菌(Streptobacillusmoniliformis)、蜱传播的疾病(Tick-Borne Diseases)。螺旋体属：博氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、游走性红斑(Erythema migrans)、萎缩性肢皮炎(Acrodermatitis Atrophicans)、螺旋体淋巴细胞瘤(BorrelialLymphocytoma)、回归热(Relapsing Fever)、埃里希体病(Ehrlichiosis)、土拉菌病(Tularemia)。衣原体感染，肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae)、鸟病(Ornithosis)、鹦鹉热(Psittacosis)、鹦鹉热(ParrotFever)、鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)、巴尔通体感染(BartonellaInfection)、Q热(Q Fever)。立克次氏体感染，如落矶山斑疹热(RockyMountain Spotted Fever)、斑疹伤寒(Typhus)、流行性虱传播的丛林斑疹伤寒(Epidemic Louse-Borne Scrub typhus)。苍白密螺旋体(Treponema pallidum)、弧菌感染等。细胞内病原体如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)的感染等。

本发明可以为具有病毒和微生物抗原的组合疫苗。这些增补的抗原可以选自白喉类毒素(D)(diphtheria toxoid(D))、破伤风类毒素(T)(tetanus toxoid(T))、无细胞百日咳抗原(acellular pertussis antigens，Pa)、灭活脊髓灰质炎病毒(inactivated polio virus，IPV)、嗜血杆菌流感抗原(haemophilus influenza antigen，Hib)、甲型肝炎抗原、单纯疱疹病毒(HSV)、衣原体、GSB、HPV、肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae)和奈瑟菌属(neisseria)抗原。赋予针对其他疾病的保护作用的抗原也可以被组合到本发明的疫苗制剂中。

本发明的另一个优选实施方案为一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法与病毒感染相关或不相关。这些疾病包括由肝炎病毒导致的肝炎；自身免疫性肝炎；与细小病毒B19感染相关的贫血；自身免疫性溶血性贫血；同种异体移植骨髓或器官移植受体；糖尿病；胎儿同种免疫性血小板减少症(fetal alloimmune thrombocytopenia)；儿童难治性癫痫(pediatric intractable epilepsy)；低丙球蛋白血症；X连锁的无丙种球蛋白血症(X-linked agammaglobulinemia)；常见变异型免疫缺陷病(common variable immunodeficiency)；威斯科特-奥尔德里奇综合征(Wiskott-Aldrich syndrome)；原发性血小板减少性紫癜(idiopathicthrombocytopenia purpura)；川崎综合征；皮肌炎；阿尔茨海默病(Alzheimer disease)、多发性硬化；多发性骨髓瘤(multiple myeloma)；重症肌无力(myasthenia gravis)；多肌炎(polymyositis)；格-巴二氏综合征；炎性脱髓鞘性多神经病(inflammatory demyelinatingpolyneuropathy)；红斑狼疮(lupus erythematosus)；兰伯特-伊顿综合征(Lambert-Eaton myasthenia)；落叶型天疱疮(pemphigus foliaceus)等。本领域技术人员将容易地识别并且采用本发明来治疗其他自身免疫性疾病，如急性播散性脑脊髓炎(Acute disseminatedencephalomyelitis)；阿狄森氏综合征；斑秃；强直性脊柱炎；抗磷脂抗体综合征(Antiphospholipid antibody syndrome)；自身免疫性溶血性贫血；自身免疫性肝炎；抗平滑肌肌动蛋白(Anti-Smooth Muscle Actin)；自身免疫性内耳病；II型大疱性类天疱疮抗大疱性类天疱疮抗原1和2(半桥粒抗原)(Bullous pemphigoid II Anti-Bullous PemphigoidAntigen 1 and 2(Hemidesmosome antigens))；腹部疾病(Coeliacdisease)；查加斯病(Chagas disease)；肺慢性阻塞性疾病(Chronicobstructive pulmonary disease)；克罗恩病(Crohns Disease)；皮肌炎；糖尿病(Diabetes mellitus)；子宫内膜异位症；古德帕斯彻氏综合征；抗基底膜胶原蛋白；心脏缺血(Heart ischemia)和中风(stroke)；格雷夫斯氏病；格-巴二氏综合征；抗神经节苷脂(Anti-ganglioside)；桥本氏病；化脓性汗腺炎(Hidradenitis suppurativa)；川畸病(Kawasakidisease)；肾病(nephropathy)；原发性血小板减少性紫癜；间质性膀胱炎；红斑狼疮；混合性结缔组织病；硬斑病(Morphea)；多发性硬化；抗髓磷脂碱蛋白(Anti-Myelin Basic Protein)；重症肌无力；发作性睡病(Narcolepsy)；神经性肌强直(Neuromyotonia)；寻常型天疱疮(Pemphigus Vulgaris)；抗维管束原(Anti-Desmogein)；牙周炎(Periodontitis)；恶性贫血；(Polymyositis)；(Primary biliary cirrhosis)；抗-p62、抗-sp100、抗线粒体；银屑病；类风湿性关节炎；类风湿因子(Rheumatoid factor)；精神分裂症(Schizophrenia)；硬皮病；(Anti-topoisornerase)；斯耶格伦氏综合征；僵人综合征；颞动脉炎；溃疡性结肠炎；原发性炎性肠病(Idiopathic inflammatory boweldisease)；血管炎；(Vitiligo)；韦格纳氏肉芽肿病等。

本发明的组合物可与另一种抗肝炎病毒药物联合给药。所给的剂量应取决于药物的吸收、失活和排出率，以及其他本领域技术人员已知的因素。抗病毒药物的实例在本发明的背景技术部分以及在例如美国专利7,456,155(通过引用的方式纳入本文)的专利文献中有述。同样注意到了结合使用本发明与任何其他生物活性物质的可能性，所述生物活性物质如具有药物活性的物质，包括但不限于抗炎药、镇痛药、安定剂、抗焦虑药、解痉剂、抗抑郁药、抗紧张剂、抗焦虑药、麻醉拮抗剂、抗帕金森病药、胆碱能激动剂、化学治疗药、免疫抑制剂、抗病毒药、抗微生物药如抗生素、食欲抑制剂、抗胆碱能药、antimetrics、抗组胺药、抗偏头痛药、冠状动脉、小脑或外周血管扩张药、激素、避孕药、抗血栓剂、利尿药、抗高血压剂、心血管药、阿片样物质等。

并不仅限于药物，其他物质同样与本发明的组合物结合使用，如亚细胞组分如核或线粒体、细胞、质体、细菌、病毒、外膜囊泡制剂，以及分子包括但不限于脂质、有机物、蛋白和肽(合成的和天然的)、肽模拟物、天然激素(如hCG、FSH、LH、肽类激素和类固醇)、D氨基酸和L氨基酸多聚体、寡糖、多糖、核苷酸、寡核苷酸和核酸包括DNA和RNA、蛋白核酸杂合体、小分子及其生理活性类似物。此外，所述调节剂可来源自天然来源，或者通过重组和合成方法制备，并且所述调节剂包括类似物、激动剂和同系物。

根据下文额外提供的具体实施方式，本发明的其他特征和优势是显而易见的，所述实施方式包括不同的实施例。下文提供的实施例举例说明了可用于实施本发明的不同组分和方法。所述实施例并非限制要求保护的发明。根据本公开内容，本领域技术人员可以识别并且采用其他组分和方法来实施本发明，但是根据本发明的公开内容这些组分和方法将是显而易见的。

实施例

实施例1.在动物体内的急性毒性

根据用于急性毒性的标准试验，强制给实验室小鼠喂食过量的本发明的组合物2周，以鉴别50％致死剂量(LD50)。但是，在等于约27g/kg制剂的最大试验日剂量下，未观察到小鼠群中有小鼠死亡。如果将该剂量外推到平均体型的人，则其相当于每天1.9kg产品——等于每天2,000片的剂量。此外，通过尸检未观察到器官中存在可辨别的形态变化。因此，未能确定LD50。

实施例2.动物体内的慢性毒性

即使在最高的测试w/w剂量下，在使用实施例1的组合物进行慢性毒性研究的过程中也未观察到在雌性和雄性大鼠中存在与处理相关的死亡。在该2.5％组的一些动物中，观察到伴随有软便的水消耗增加。这似乎导致在正常体重增加方面产生轻微而非统计学上显著的降低，但仅仅是在给予高剂量的雄性中。总之，在任何给药处理组中，均不存在可觉察的饮食习惯、行为、症状、形态和器官重量变化。

实施例3.人体内的安全性研究

将本发明的口服剂型组合物以每天1-2片的日剂量给予正常人志愿者，持续2个月，所述组合物含有来源自慢性肝炎携带者的经部分水解的HBV和HCV抗原。在给药前和给药后，记录血液生物化学和其他关于肝脏和肾脏功能的标准测量值以及免疫系统参数。对结果进行统计学分析并且在表1中示出。从结果中可以看出，本发明的组合物是安全的，对任何参数均没有任何不良影响。在一些个体中，发现CD4T淋巴细胞计数升高，表明对细胞免疫性有积极作用。值得注意的是，观察到在有饮酒嫌疑的那些个体中，肝功能得到了改善。在这类个体中特别是在代偿失调的肝脏硬化患者中，本发明的组合物可有效改善酒精导致的肝炎的指标。

表1.通过各种实验室参数测量的安全性研究的结果

参数	前	后	正常范围	P值(学生t检验)
					BUN(mg/dL)	13.5	12.7	7-21	0.23
肌酸(mg/dL)	0.96	0.98	0.5-1.4	0.72
					总蛋白(g/dL)	7.55	7.61	6.3-8.2	0.71
白蛋白(U/L)	4.35	4.31	3.5-4.8	0.6
					球蛋白(g/dL)	3.18	4.23	1.5-4.5	0.1
血红蛋白(g/dL)	122	121	12-16.2	0.2
					血细胞比容(％)	36	38	37-52	0.3
总胆红素(mg/dL)	0.7	0.68	0.2-1.3	0.0004
					直接胆红素(mg/dL)	0.17	0.1	＜0.3	0.001
AST(U/L)	24.5	20.1	5-35	0.06
					ALT(U/L)	26.6	25.6	7-56	0.3
Alk.磷酸酶(U/L)	95	65	38-126	0.0005
					血小板(1000/μL)	217	218	140-450	0.6
WBC(细胞/μL)	5,592	5,327	4,100-10,900	0.2
					嗜中性粒细胞(％)	51.7	50.9	40-70	0.8
嗜酸性粒细胞(％)	5.6	5.4	0-7	0.8
					单核细胞(％)	4.3	5.9	2-12	0.03
嗜碱性粒细胞(％)	1.3	0.9	0-2	0.06

实施例4.预防性用途

将在体外鸟类肝脏细胞中增殖的LMH(表达鸭乙型肝炎病毒(DHBV)核心抗原(DHBcAg))整体部分水解，包埋到金属盐基质中，并且制成混有鸟食的固体形式片剂，然后将其喂给鸭。一个月后，通过静脉内接种感染性DHBV来对所述鸭进行激发。激发后第4天进行的肝脏活组织检查证明疫苗接种并未能预防肝脏感染，因为在所有接种的鸭和未接种的对照鸭中均检测到类似比例的被感染肝细胞。然而，令人意外的是，在对激发后第10天或更长时间时获得的肝脏组织进行的分析表明，13只接种的鸭中有10只清除了DHBV感染，没有任何可检测的感染细胞或病毒。相反，对照组中13只未接种的鸭中有11只已经显示出慢性DHBV感染。对照组和接种组在结果上的差异非常显著，因为Fisher 2x2精确检验的P＝0.0048。因此，用带有重组DHBcAg的部分水解细胞对鸭进行的接种诱发了足以将DHBV感染快速消除的免疫反应。当将表达用HBsAg增敏的人HBV抗原而非DHBV的酵母喂给鸟类时，获得了相同的结果，所述酵母是在植物细胞培养物和鸭肝脏细胞培养物中表达的。

实施例5.肝炎的免疫疗法

选择20名诊断患有慢性丙型肝炎的患者，并且每日给予1-2片本发明的组合物，持续一个月。所述组合物是从感染有肝炎病毒的供体的血液中获得的，并且通过以下步骤进行了加工：水解、加热和用镁盐沉淀，然后将其配制成片剂。这些患者除HCV外还感染有结核分支杆菌(TB)和HIV，并且同时给予TB药物进行治疗。一个月后，获得了生理、临床和实验室分析结果并且将其与输入水平(“前”)参数进行比较。如表2中所示，除1名患者之外，所有患者均得到相当大的改善。这些结果证明除预防性效果之外，本发明的组合物作为免疫治疗剂也非常有效。这可通过以下事实证明，即肝炎的临床症状如腹痛、疲劳和黄疸消失。具体的肝炎征候如肝脏肿大、转氨酶(ALT)和胆红素升高在给药后均回到了正常水平。值得注意的是，在一个月后，TB和HIV病症也得到了改善，表明免疫疗法的效果并不仅限于肝炎，同时也可有效治疗其他病毒和细菌感染。考虑到一个月后仅用TB或AIDS药物治疗的对照患者大多数均没有明显的改善，本发明免疫疗法的这一优势特别显而易见。特别值得注意的是，所述组合物的好处是在一个月内20名患者中有19名患者的唾液样品中结核分枝杆菌消失，血红蛋白水平升高回正常水平，以及体重显著增加。所述制品还显示出强效的抗炎症活性和退烧活性，这可通过以下事实证实：在给药后1-3天内红细胞沉降率降低、异常白细胞计数降低、由发烧快速恢复到正常体温。值得注意的是，处理后患者不再有足癣真菌感染。

表2同时患有TB和HIV感染的肝炎患者的基线特征以及治疗一个月后的结果特征

实施例6.同时治疗多种肝炎病毒感染

给予三名同时带有乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的患者本发明的组合物，其中一名患者被怀疑带有第三种δ肝炎病毒的感染。大约一个月后，他们的肝脏功能测试表明肝脏功能正常，并且没有可检测水平的乙型肝炎表面抗原，并且没有针对HCV和HDV抗体。乙型和丙型肝炎病毒载量测试表明血流中不存在病毒。这些结果表明由于摄入本发明的组合物导致的免疫反应能够清除病毒，不论是任何类型的病毒或者它们是单独存在或组合存在。因此，本发明的一个实施方案为同时抗多种病原体的多价疫苗。

实施例7.治疗和预防肠型肝炎病毒

两名患者被送到传染医院的急诊室，一名患有甲型肝炎，另一名患有急性戊型肝炎。患者患有黄疸并且患有严重的腹泻。取粪便样品、离心以除去固体物质，并且对上清液进行加工以按照制备所述组合物的步骤来制备组合物。第二天，将制剂给予卧床的患者，每日三次(t.i.d.)。发烧和昏迷状态在一天内消失，并且患者在一周后完全康复出院，实验室测试正常。这些结果表明，所述组合物甚至对无包被病毒也有效。

实施例8.用于抗未知病毒

一名患有多器官衰竭(包括肝脏衰竭)和危及生命的出血的患者被送到医院，其被迫在严格隔离的急诊室中住院治疗。由于所有用于已知病毒感染的可行测试均获得阴性结果，因此无法进行准确的诊断。患者来自于中非国家，已知该地区流行马尔堡病毒(Marburg virus)或埃博拉病毒——纤丝病毒家族成员——具有高致死率的单链RNA病毒。从患者身上采血，并且进行加工以制备本发明的组合物。第二天，将所述组合物通过静脉给予所述患者，因为患者处于昏迷之中不能吞咽药丸所以通过静脉给药。两天后，所述患者恢复意识并且三天后完全康复出院。尽管不能进行明确的诊断，但是临床症状使人想起诸如马尔堡病毒感染的出血性病毒感染，对于所述感染尚无经证实的治疗方法并且结果几乎总是死亡。

实施例9.用于抗自身免疫性疾病

给予患有自身免疫性肝炎但是没有任何可检测出的肝炎病毒感染的患者本发明的组合物，所述组合物是用来自正常供体的未被感染的血液制备的。因此所述制剂仅含有同种异型抗原。两周内，所有自身免疫的指征均已消失，并且肝功能测试恢复正常。医生决定将该组合物给予一名患有多发性硬化的患者。值得注意的是，在治疗之前不能走路的患者得到了显著的改善并且现在可以在无任何帮助的情况下走路。在患有子宫内膜异位、银屑病、不育(unfertile)和风湿的女性患者中观察到类似的结果，所述患者由于一种被称为原因不明的复发性自然流产(RSA)导致的对胎儿的自身免疫性排斥而多年无法怀孕。在进行治疗一个月后，所述患者怀孕并且分娩了一名健康的婴儿。值得注意的是，由于摄入组合物，她的子宫内膜异位、银屑病、风湿性关节炎以及顽固性生殖器白色念珠菌均消失并且没有任何复发。

实施例10.用在器官移植患者中

两名处于肝炎晚期肝脏衰竭的患者接受了肝脏移植手术。他们选择接受每日剂量的所述组合物，而没有用免疫抑制药物进行治疗。患者存活并且情况良好，没有任何器官排斥且肝脏功能正常。

本说明书中所引用的所有出版物、专利和专利公开均通过引用的方式全文纳入本文，每篇单独的出版物或专利公开均具体地且单独地通过引用的方式纳入本文。

对于本领域技术人员来说显而易见的是，本发明可以不同于上文中具体公开的那些实施方案的实施方案实施，而不偏离本发明的主旨或必要特征。因此，上文所述的本发明的具体实施方案应被认为是示例性的和非限制性的。本发明的范围如所附权利要求中所阐述的，而不限于前述说明书中所含的实施例。

Claims (35)

1.一种口服组合物，包括治疗有效量的部分水解抗原，其中所述的部分水解抗原来自于感染了一种病毒的供体的体液。

2.权利要求1的组合物，其中所述病毒为肝炎病毒。

3.权利要求1的组合物，其中所述抗原为肝炎病毒抗原。

4.权利要求1的组合物，其中所述抗原为一种异型抗原。

5.权利要求1的组合物，其中所述抗原为异种抗原。

6.权利要求1的组合物，其中所述体液主要由全血组成。

7.权利要求1的组合物，其中所述体液主要由血浆组成。

8.权利要求1的组合物，其中所述血液主要由血清组成。

9.权利要求1的组合物，其中所述组合物中不含有免疫佐剂。

10.权利要求1的组合物，其中所述组合物为固体组合物。

11.权利要求1的组合物，其中所述组合物为片剂或丸剂。

12.权利要求1的组合物，其中所述抗原被埋入在基质中。

13.权利要求12的组合物，其中所述基质为选自下列的金属或其盐：碱金属、碱土金属、过渡金属、类金属、碱性金属、稀土元素。

14.一种预防人肝炎病毒感染的方法，包括给予有效量的权利要求1所述的组合物。

15.一种治疗肝炎病毒感染的人的方法，包括给予有效量的权利要求1所述的组合物。

16.一种制备用于治疗或预防肝炎的如权利要求1所述的口服组合物的方法，包括：部分水解肝炎病毒或其片段，使用金属盐沉淀，并且制成固体口服组合物。

17.权利要求16所述的制备口服组合物的方法，包括将肝炎病毒或其片段埋入金属盐的步骤。

18.权利要求17的方法，其中所述金属主要选自碱金属、碱土金属、过渡金属、类金属、碱性金属或者稀土元素。

19.权利要求17的方法，其中所述金属盐包括：硼化物、乙酸盐、磷酸盐、铝化物、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、溴化物、碳酸盐、氯化物、六水合氯化物、柠檬酸盐、二硼化物、二谷氨酸盐、二铀酸盐、氟化物、葡糖酸盐、六水合物、氢化物、氢氧化物、氧化物、碘化物、乳酸盐、乙酰丙酸盐、硝酸盐、氮化物、乳清酸盐、氯氧化物、氧硫化物、高氯酸盐、过氧化物、氧脯氨酸盐、硅化物、硬脂酸盐、硫酸盐、硫化物、亚硫酸盐或者三硅酸盐。

20.权利要求17的方法，其中该方法的一个附加的步骤包括加热步骤。

21.一种治疗肝炎的方法，包括向有此需要的受试者给予有效量的口服组合物，所述口服组合物包括部分水解的肝炎病毒感染的细胞或者其片段。

22.权利要求21的方法，所述方法用于保护有此需要的未感染的受试者免受肝炎病毒感染。

23.一种治疗或预防微生物感染的疫苗，所述疫苗包括片剂或丸剂形式的部分水解的微生物抗原以及异型抗原。

24.权利要求23的疫苗，所述微生物感染主要选自由下列微生物导致的病毒感染：肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)、小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、黄病毒科(Flaviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)、杯状病毒科(Caliciviridae)、披膜病毒科(Togaviridae)、冠状病毒科(Coronoviridae)、弹状病毒科(Rhabdoviradae)、纤丝病毒科(Filoviridae)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、布尼亚病毒科(Bungaviridae)、沙粒病毒科(Arenaviridae)、细小病毒科(Parvoviridae)、乳多空病毒科(Papovaviridae)、腺病毒科(Adenoviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、痘病毒科(Poxyiridae)、虹彩病毒科(Iridoviridae)等。

25.一种组合物，包括部分酸水解的肝炎抗原、一种异型抗原，其中所述部分酸水解的肝炎抗原和异型抗原被埋入金属盐基质中。

26.权利要求25的组合物，其中所述组合物是经热处理的。

27.权利要求26的组合物，其中所述组合物是经至少2小时热处理的。

28.权利要求26的组合物，其中所述组合物经过高于56摄氏度的热处理。

29.权利要求26的组合物，其中所述组合物经过高于80摄氏度的热处理。

30.权利要求26的组合物，其中所述组合物经过pH低于3的条件下的酸水解。

31.权利要求30的组合物，其中所述组合物经过pH低于2的条件下的酸水解。

32.一种固体组合物，包括在可口服的金属盐基质中包埋的酸水解的异型抗原。

33.权利要求32的组合物，其中所述异型抗原是人异型抗原。

34.权利要求32的组合物，其中所述异型抗原经过热处理。

35.权利要求32的组合物，其中所述金属盐来自二价金属。