CN101946701A

CN101946701A - 猬实的快速繁殖方法

Info

Publication number: CN101946701A
Application number: CN 201010252817
Authority: CN
Inventors: 袁秀云
Original assignee: Zhengzhou Normal University
Current assignee: Zhengzhou Normal University
Priority date: 2010-08-13
Filing date: 2010-08-13
Publication date: 2011-01-19
Anticipated expiration: 2030-08-13
Also published as: CN101946701B

Abstract

一种猬实的快速繁殖方法。以猬实带芽茎段为外植体，进行丛生芽的启动诱导，将诱导的丛生芽分株进行增殖培养获得丛生苗，再将丛生苗分株进行生根培养，得到再生植株。本发明的方法使猬实的繁殖打破了季节的限制，取材方便，可随时取得猬实的离体器官，快速诱导大量丛生苗，获得再生植株，繁殖周期大大缩短，再生植株成活率高达100％，而且具有变异小和遗传稳定性高的优点。

Description

猬实的快速繁殖方法

技术领域

本发明属于植物离体组织培养方法技术领域，特别涉及植物猬实的快速繁殖方法。

背景技术

猬实(Kolkwitzia amabilis Graebn)是忍冬科(Caprifliaceae)猬实属(Kolkwitzia)落叶灌木，是德国植物学家Richard Kolkwitz 1901年发现命名的中国特有的单种属植物，在我国的山西、陕西、甘肃、河南、湖北、安徽等地均有野生分布，国家环保局1987年《中国濒危保护植物名录》将猬实定为三级稀有保护濒危植物。猬实在忍冬科中处于孤立地位，是中国秦岭至大别山区植物区系的古老残遗单属种植物，对于研究植物区系、古地理和忍冬科系统发育具有较高的科学价值。猬实株高可达3米，树干丛生，植株紧凑，株丛姿态优美；伞房状聚伞花序，花序紧簇密集，花冠钟状，先端五裂，呈粉红至紫色，色彩艳丽，盛开时繁花似锦，满树娇艳，开花期正值5～6月的初夏百花凋谢时；9～10月夏秋时节全树挂满果实，果实密被毛刺，形如刺猬，甚为别致，也因此得名猬实，是一种极具观赏花、果价值的花木，可用于草坪、角隅、山石旁、亭廊附近列植或丛植，也可盆栽欣赏或作切花，同时，猬实耐寒、耐旱、耐贫瘠土壤，对生态环境要求不严，是一种优良的园林植物，也因此被欧美广为引种，誉为美丽的灌木(Beauty bush)。

猬实被国家定为三级稀有保护濒危植物的主要原因是它的有性繁殖过程存在障碍，在自然条件下种群拓展非常有限，种群逐渐减少。近些年人们对其种群繁育、种子特性及栽培技术等方面有较多研究。高润梅、何志、唐宇丹等(“稀有花卉植物猬实种子特性的研究”-《种子》2005年第7期；“猬实种子质量”-《种子科学》2005.6；“猬实种子休眠特性研究”-《园艺学报》2008.10)研究发现，猬实的果实有坚硬的果皮包被，胚乳中含有萌发抑制物质，休眠特性独特，种子结实率低，种子质量低劣，有活力的种子不足全部果实的12％，种子的平均发芽率也只有33％左右，有性生殖困难，造成了该物种的濒危现状。我们也曾做过猬实种子的发芽试验，使用常规培养方法，猬实种子的发芽率几乎是零。李智选等(“稀有花卉猬实在华山地区种群繁育和分布特征”-《西北植物学报》2004.11)调查研究发现，猬实在自然分布区内未见实生苗，主要依靠根蘖繁殖，因此猬实植株间变异小，后代与亲本具有极高相似性，竞争力下降。猬实所处群落为旱生的灌丛或疏林带，群落组成简单，物种多样性较低，猬实所处群落处于演替的初级阶段，稳定性较差(“猬实植物群落外貌和物种多样性的研究”-《湖北林业科技》2005.4)。目前，猬实的繁殖方法依然主要靠播种、扦插、分株和压条繁殖(“珍稀园林植物猬实的繁殖栽培技术及其开发利用”-《现代农业科技》2007.19；“珍稀花卉植物猬实物候学观察及栽培技术”-《江苏农业科学》2003.5)，由于上述原因，猬实播种繁殖的局限性，扦插、分株和压条的季节性限制、周期长及繁殖系数低等问题，一直阻碍着猬实的快速大量繁殖。对于猬实的组织培养及快速繁殖方法的研究较少，扆铁梅等(“猬实下胚轴愈伤组织的生长和器官分化研究”-《山西农大学报》2000.1)以猬实下胚轴为试验材料，进行愈伤组织和器官分化研究，提出了BA(1～3)mg/L和NAA(0.1～0.2)mg/L配合下能诱导猬实下胚轴愈伤组织芽的分化，用0.2mg/L NAA或IBA可诱导无根苗生根，但并没有建立有效的离体培养快繁体系；同时利用下胚轴作为外植体，要在健康种子发芽形成无菌苗的基础上才能进行，前文已述猬实种子的种种特性，要使其发芽不仅需要特殊的去除休眠的方法，而且发芽率依旧不理想，获得下胚轴外植体较难；用其它组织作为外植体进行愈伤诱导进行分化、增殖及生根的过程也比较烦琐，周期较长，很难达到猬实快速繁殖的要求。鉴于濒危物种保护、科学研究和园林绿化方面的应用需要，利用猬实离体器官进行组织培养，进行快速繁殖及工厂化育苗成为猬实研究的新趋势。

发明内容

本发明的目的在于克服猬实现有繁殖技术的不足，提供一种猬实离体培养及快速繁殖的方法。

本发明以猬实的带芽茎段为外植体，接种于启动诱导培养基中形成丛生芽，将丛生芽分株进行增殖培养，形成丛生苗，选出较大的丛生苗进行生根诱导形成生根苗，生根苗经过炼苗得到再生植株。启动诱导和增殖培养培养基均为MS基本培养基，启动诱导培养基所用添加剂组合为：6-BA1～3mg/L和NAA0.04～0.06mg/L；增殖培养基所用添加剂组合为：6-BA 1～3mg/L和IAA 0.2～0.4mg/L；生根培养基为1/2MS，所用添加剂为：NAA0.1～0.3mg/L、IBA0.2～0.4mg/L和2，4-D 0.01mg/L。丛生芽的诱导率为100％，诱导系数4～6，增殖系数7～10，生根率达到100％。

本发明通过以下技术方案实现，包括如下步骤：

步骤一，取猬实带芽枝条，去掉叶片，剪成带芽小段，放于自来水管下冲洗5～6小时，去除表面污垢，然后在超静工作台上用体积分数为75％的酒精浸泡2～3分钟，用无菌水冲洗5次，用质量分数为1‰的升汞溶液浸泡10～15分钟，再用无菌水冲洗5次，将消毒后的带芽茎段接于丛生芽的启动诱导培养基中。丛生芽的启动诱导培养基为MS基本培养基，添加剂为：6-BA1～3mg/L，NAA0.04～0.06mg/L。培养条件为：温度23～27℃，光照时间：10～14小时/天，光照强度为1800～2200Lux，不定芽的诱导时间30～40天。

步骤二，将经过步骤一形成的丛生芽分株进行增殖培养，形成更多的丛生芽，丛生芽逐渐形成丛生苗，小的丛生芽用于再次增殖培养，大的丛生苗用于生根培养。增殖培养基为MS基本培养基，添加剂为6-BA 1～3mg/L，IAA0.2～0.4mg/L。培养条件为：温度23～27℃，光照时间10～14小时/天，光照强度1800～2200Lux，培养时间30～40天；

步骤三，将步骤二得到的大丛生苗分株进行生根培养，得到生根苗，生根培养基为1/2MS，添加剂为NAA0.1～0.3mg/L，IBA0.2～0.4mg/L，2，4-D0.01mg/L。培养条件为：温度23～27℃，光照时间10～14小时/天，光照强度1800～2200Lux，培养时间30～40天。

步骤四，将步骤三中的生根苗进行练苗，练苗后将其与空气接触，23～25℃下生长3～5天；然后用流水洗去生根苗根部的培养基，移栽到消毒的栽培基质(泥炭土∶蛭石＝2∶1)中培养，得到再生植株，再生植株的成活率达100％。

本发明以猬实的带芽茎段为外植体进行猬实的离体培养，使猬实的繁殖打破了季节的限制，取材方便，可随时取得猬实的离体器官，快速诱导大量丛生苗，获得再生植株，整个培养繁殖周期约为3个月，与现有技术相比大大缩短了繁殖周期，丛生芽的诱导率为100％，诱导系数4～6，增殖系数7～10，生根率达到100％，再生植株成活率高达100％，而且再生植株变异小，遗传稳定性高。本发明为实现猬实快速、大量繁殖的目标提供了快速有效的途径。

附图说明

图1为诱导启动的丛生芽图片；

图2为增殖培养的丛生苗图片；

图3为生根苗图片。

具体实施方式

本实施例的猬实离体培养及快速繁殖方法，包括以下步骤：

步骤一，取猬实当年生枝条，去掉叶片，剪成带芽小段，放于自来水管下冲洗6小时，去除表面污垢，然后在超静工作台上用体积分数为75％的酒精浸泡2分钟，用无菌水冲洗5次，用质量分数为1‰的升汞溶液浸泡12分钟，再用无菌水冲洗5次，将消毒后的茎段接种于丛生芽的启动诱导培养基中。丛生芽的启动诱导培养基为MS基本培养基，添加剂为：6-BA 2mg/L，NAA0.05mg/L，培养条件为：温度25℃，光照时间12小时/天，光照强度2000Lux，丛生芽诱导时间40天(效果见图1)。

步骤二，将丛生芽分株进行增殖培养，形成更多的丛生芽，丛生芽逐渐形成丛生苗，小的丛生芽用于再次增殖培养，大的丛生苗用于生根培养。增殖培养基为MS基本培养基，添加剂为：6-BA 2mg/L，IAA0.3mg/L，培养条件为：温度25℃，光照时间12h小时/天，光照强度2000Lux，培养23天形成丛生苗(效果见图2)。

步骤三，将步骤二得到的丛生苗分株进行生根培养，形成生根苗。生根培养基为1/2MS，添加剂为NAA0.2mg/L，IBA0.3mg/L，2，4-D 0.01mg/L，培养条件为：温度25℃，光照时间12小时/天，光照强度2000Lux，生根培养40天形成生根苗(效果见附图3)。

步骤四，将步骤三中经生根培养后得到的生根苗进行练苗，练苗后将其与空气接触，25℃下生长3～5天；然后用流水洗去生根苗根部的培养基，移栽到消毒的栽培基质(泥炭土∶蛭石＝2∶1)中培养，得到再生植株，再生植株成活率达100％。

Claims

1.猬实的快速繁殖方法，其特征在于，以猬实的带芽茎段为外植体，接种于启动诱导培养基中形成丛生芽，将丛生芽分株进行增殖培养，形成丛生苗，选出较大的丛生苗进行生根诱导形成生根苗，生根苗经过炼苗得到再生植株。

2.根据权利要求1所述猬实的快速繁殖方法，其特征在于，启动诱导培养基为MS基本培养基，所用添加剂组合为：6-BA 1～3mg/L和NAA0.04～0.06mg/L。

3.根据权利要求1所述猬实的快速繁殖方法，其特征在于，增殖培养基为MS基本培养基，所用添加剂组合为：6-BA 1～3mg/L和IAA 0.2～0.4mg/L。

4.根据权利要求1所述猬实的快速繁殖方法，其特征在于，生根培养基为1/2MS，所用添加剂组合为：NAA 0.1～0.3mg/L、IBA0.2～0.4mg/L和2，4-D0.01mg/L。