CN101928752A - 他莫昔芬辅助治疗乳腺癌疗效检测 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测个体他莫昔芬辅助治疗乳腺癌疗效的试剂盒。该试剂盒包括检测他莫昔芬用药靶向位点CYP2D6基因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、荧光定量PCR常规组件等。本发明的试剂盒通过检测他莫昔芬用药靶向位点CYP2D6基因多态性位点来评估个体他莫昔芬辅助治疗乳腺癌疗效。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测个体他莫昔芬辅助治疗乳腺癌疗效的试剂盒，通过检测他莫昔芬用药靶向位点CYP2D6基因多态性位点来评估个体他莫昔芬辅助治疗乳腺癌疗效。
背景技术
乳腺癌是乳腺导管上皮细胞在各种内外致癌因素的作用下，细胞失去正常特性而异常增生，以致超过自我修复的限度而发生癌变的疾病，临床以乳腺肿块为主要表现。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，有发病率高、具侵袭性、但病程进展缓慢、自然生存期长等特点。
乳腺癌是主要危害妇女身体健康的疾病，男性也可患乳腺癌，但男性患乳腺癌的机会比女性要少100倍。乳腺癌的好发部位以乳房外上占多数。早期乳腺癌可无任何自觉症状，病变晚期可出现乳腺肿块，质地硬韧，边界不甚清晰，无包膜感，推之移动性小，多数无明显疼痛，乳头出现回缩、偏位，乳头溢流黄水或血水，癌性湿疹样改变。
乳腺癌不但有损妇女体态，而且严重影响生活质量，甚至导致死亡。近年来随着乳腺癌发病率的增高，乳房保护运动(粉红丝带运动)在各地兴起，人们对乳腺癌的关注越来越多，迫切需要更加灵敏、有效的乳腺癌风险检测和治疗指导手段。
他莫昔芬(Tamoxifen，TAM)是一种非甾体抗雌激素药物，在临床已广泛应用于乳腺癌的预防和治疗。其结构与雌激素相似，在靶器官内竞争雌激素受体(ER)，减少细胞质内ER的含量，阻止核内雌激素生成、基因转录和ER再合成。在组织培养中可见ER阳性细胞的生长可直接被TAM所抑制。TAM还通过作用于信号转导过程的MAPK通路、阻断蛋白激酶C介导的ERK激活、激活TGF-β(转化生长因子-β)来抑制肿瘤细胞的生长。
CYP2D6基因参与约25％临床常用药物的代谢，包括β受体阻滞剂、抗抑郁药物、抗精神病药物及化疗药物等。由于CYP2D6基因存在遗传多态性导致个体之间CYP2D6酶活性有差异，出现药物代谢能力的多态性，导致病人用药时很难获得最佳血药浓度，如血药浓度过低无法有效发挥药物疗效或浓度过高出现毒副作用。他莫西芬作为无活性的前药，在体内主要由CYP2D6催化形成有活性的化学成分Endoxifen，发挥药物疗效，因此CYP2D6基因多态性导致的酶活性改变将直接影响他莫西芬用药效果。所以CYP2D6基因的分型检测对于临床他莫西芬用药指导有重要意义。
CYP2D6基因呈现高度多态性，目前已知有63种主要的等位基因，导致酶活性增加、降低或缺失。CYP2D6等位基因活性的改变是由于基因突变造成表达产物酶分子的改变，从而产生代谢缺陷。基因突变的主要方式是碱基缺失或替换引起读码框架移位，或者大片段基因的丢失。
发明内容
基于他莫昔芬用药靶向位点CYP2D6基因多态性可用来评估个体他莫昔芬辅助治疗乳腺癌疗效的基础上，本发明提供一种检测个体他莫昔芬辅助治疗乳腺癌疗效的试剂盒。
该试剂盒包括：
检测他莫昔芬用药靶向位点CYP2D6基因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针对；
荧光定量PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反应缓冲液、去离子水等)。
本试剂盒中所述的特异性荧光探针对是能够轻易完成设计的，特异性荧光探针对可用常规的探针合成技术进行合成。
本发明试剂盒的组分和含量包括：
10X荧光定量PCR反应缓冲液1μl，
25mM dNTP混合液0.1μl，
25mM MgCl2溶液0.6μl，
5units/μl Taq DNA聚合酶0.025μl，
20μM特异性引物对每条引物各0.225μl，
10μM特异性荧光探针对每条探针各0.25μl，
去离子水5.325μl。
本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。
实施例检测试剂盒的使用
步骤1：DNA模板的抽取
用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。
步骤2：荧光定量PCR反应
使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装，进行荧光定量PCR反应，反应的体系为总体积10μl，包含浓度为20ng/μl 的DNA模板2μl、1μl 10X荧光定量PCR反应缓冲液、0.1μl 25mM dNTP混合液、0.6μl 25mMMgCl2溶液、0.025μl(5units/μl)Taq DNA聚合酶、20μM的有义引物和反义引物各0.225μl、10μM的带VIC荧光探针和带FAM荧光探针各0.25μl，去离子水5.325μl。
在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为50℃、2分钟，95℃、10分钟，进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟。反应结束后在荧光定量PCR仪上读取样品荧光量。
步骤4：基因型分析
根据试剂盒使用说明书标示的基因分型图示对SNP位点进行基因型分析。
熟悉荧光定量PCR技术的本领域技术人员能够通过辨识荧光定量PCR仪上显示的最终样品荧光量，根据不同序列探针荧光信号的强弱即可确定所检测的SNP位点的基因型。
Claims (2)
1.一种检测个体他莫昔芬辅助治疗乳腺癌疗效的试剂盒，其特征在于：包括检测他莫昔芬用药靶向位点CYP2D6基因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、荧光定量PCR反应缓冲液、去离子水。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：试剂盒的组分和含量包括：
10X荧光定量PCR反应缓冲液1μl，
25mM dNTP混合液0.1μl，
25mM MgCl2溶液0.6μl，
5units/μl Taq DNA聚合酶0.025μl，
20μM特异性引物对每条引物各0.225μl，
10μM特异性荧光探针对每条探针各0.25μl，
去离子水5.325μl。
本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108070659A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-05-25 | 中国医学科学院肿瘤医院 | Snp标志物在预测tam辅助内分泌治疗乳腺癌患者疗效中的应用 |
| CN112410427A (zh) * | 2020-11-19 | 2021-02-26 | 菲思特(广东)精准医疗科技有限公司 | 一种他莫昔芬代谢标志物的检测方法及其应用 |
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2009
- 2009-06-26 CN CN2009100539406A patent/CN101928752A/zh active Pending
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| CN108070659B (zh) * | 2017-12-27 | 2020-05-05 | 中国医学科学院肿瘤医院 | Snp标志物在预测tam辅助内分泌治疗乳腺癌患者疗效中的应用 |
| CN112410427A (zh) * | 2020-11-19 | 2021-02-26 | 菲思特(广东)精准医疗科技有限公司 | 一种他莫昔芬代谢标志物的检测方法及其应用 |
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Addressee: Hainan Zhujian Cell Molecule Genetics Inspection Center Co., Ltd. Document name: Notification of Publication of the Application for Invention |
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Application publication date: 20101229 |