CN101926860A - 一种芍药提取物甲氨蝶呤组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种芍药提取物甲氨蝶呤组合物及其制备方法与应用，由芍药提取物与甲氨蝶呤配制而成，其治疗类风湿的效果不仅好于甲氨蝶呤单用效果，而且好于甲氨蝶呤与白芍总苷联合用药的效果，同时可以大大减轻或避免甲氨蝶呤引起的肝损害、嗜睡、食欲不振等不良反应。

Description

一种芍药提取物甲氨蝶呤组合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及芍药提取物甲氨蝶呤组合物、芍药提取物甲氨蝶呤组合物的制备方法及其应用。

背景技术

类风湿关节炎为一主要累及关节的全身性系统性风湿病。在人群各种族中均有较高的发病率和严重的致残率，对人类有极大的危害性。

目前临床上治疗类风湿关节炎药物主要包括非甾体抗炎药和慢作用抗风湿病药及生物制剂等，这些药物在临床治疗中发挥了重要作用。但非甾体抗炎药物需长期服用不良反应多，慢作用抗风湿病药需长期使用可造成重要脏器和组织的严重不良反应，生物制剂经常有引起恶性感染和诱发肿瘤的严重不良反应出现。

甲氨蝶呤(Methotrexate，简称MTX)，治疗类风湿关节炎具有疗效显著、严重的副作用少、长期应用耐受性好等特点，目前已经成为治疗类风湿关节炎的首选药。其作用机制可能与抑制二氢叶酸还原酶有关，它使细胞内叶酸缺乏，核蛋白合成减少，从而抑制细胞增殖及复制。治疗时一般每周7.5～15mg(不超过25mg)，可口服、肌注或静脉滴注。不良反应主要有肝损害、骨髓抑制、胃肠道症状、皮疹，偶发肺纤维化。

芍药提取物主要成分为一组糖苷类物质，包括芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等，其中芍药苷含量最高，一般以芍药苷含量作为芍药提取物的指标性成分。芍药提取物可用于治疗类风湿关节炎。

《中国现代药物应用》2008年10月第2卷第20期公开了白芍总苷联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎的疗效情况，两都联合用药比其单独用药具有疗效好，不良反应减少。但其疗效还是不尽人意，还存在一定程度的不良反应。

发明内容

本发明的目的是提供一种芍药提取物甲氨蝶呤组合物及其制备方法与应用。

上述的目的通过以下的技术方案实现：

一种芍药提取物甲氨蝶呤组合物，其组成包括芍药提取物和甲氨蝶呤，所述芍药提取物与甲氨蝶呤的重量份比为芍药提取物∶甲氨蝶呤＝1～8000∶1。

所述芍药提取物是指由芍药或白芍或赤芍中提取获得。芍药或白芍或赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactifloraPall及其任意一种变种植株或任何部位，如跟、根茎、茎、叶、花穗、果实等，或市售白芍或赤芍饮片，同时包括未经任何炮制处理的原药材及饮片和各种炮制品，如炒白芍、酒白芍、炒赤芍、酒赤芍等。芍药提取物主要成分为一组糖苷类物质，包括芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等，其中芍药苷含量最高，一般以芍药苷含量作为芍药提取物的指标性成分，芍药提取物中芍药苷的含量为30％～100％。

所述的甲氨蝶呤为4-氨基-10-甲基叶酸及结构相似物的混合物，主要成分为L-(+)-N-[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲氨基]苯甲酰基]谷氨酸(C₂₀H₂₂N₈O₅)。按干燥品计算，含C₂₀H₂₂N₈O₅不得少于90.0％。

上述芍药提取物甲氨蝶呤组合物的制备方法采用等量递增法或等倍递增法。等量递增法即先用少量芍药提取物饱和用于混合的器械，倒出，加入甲氨蝶呤，取与甲氨蝶呤等量的芍药提取物共同研磨混合均匀，再加入与混合粉等量的芍药提取物混匀……如此反复加入混合，直至量大组分加完，混匀。

依照上述芍药提取物甲氨蝶呤组合物的制备方法，可将本发明组合物制成片剂(包括普通片、分散片、缓释片、控释片、口腔崩解片、含片)或胶囊剂或栓剂或颗粒剂或与其他药物复方制剂。

一种上述的芍药提取物甲氨蝶呤组合物作为药物组合物的活性成分在治疗类风湿关节炎的应用。

这个技术方案有以下有益效果：

1.本发明的芍药提取物与甲氨蝶呤组成药物组合物，治疗类风湿的效果不仅好于甲氨蝶呤单用效果，而且好于甲氨蝶呤与白芍总苷联合用药的效果，同时可以大大减轻或避免甲氨蝶呤引起的肝损害、嗜睡、食欲不振等不良反应。

2.本发明可以制成药剂学上的各种制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂等，并且可以和其他活性成分组成多组分药物组合物。服药方便。

附图说明

图1，芍药提取物甲氨蝶呤组合物对大鼠佐剂性关节炎足爪肿胀度的影响(容积测量)

1、对照组，2、模型组，3、组合物组，4、强的松组

图2，芍药提取物甲氨蝶呤组合物对大鼠佐剂性关节炎关节指数的影响

具体实施方式

实施例1：

取芍药苷含量为50％芍药提取物500g，甲氨蝶呤1g，先用少量芍药提取物饱和用于混合的器械，倒出，加入甲氨蝶呤，先取1g芍药提取物共同研磨混合均匀，再加入2g芍药提取物混匀，再加入4g芍药提取物混匀，再加入8g芍药提取物混匀，再加入16g芍药提取物混匀，再加入32g芍药提取物混匀，再加入64g芍药提取物混匀，再加入128g芍药提取物混匀，再加入剩余的245g芍药提取物混匀，即得本发明的组合物。

实施例2：

取实施例1制备的芍药提取物甲氨蝶呤组合物100g，直接装入0号空心硬胶囊制得胶囊剂，每粒装约0.4g，即得本发明的组合物延伸制剂胶囊。

实施例3：

取实施例1制备的芍药提取物甲氨蝶呤组合物400g，用干法制粒制备成组合物颗粒，过24目标准筛，直接装入0号空心硬胶囊制得胶囊剂，每粒装约0.4g，即得本发明的组合物延伸制剂胶囊。

实施例4：

取芍药苷含量为80％芍药提取物200g，甲氨蝶呤20g，先用少量芍药提取物饱和用于混合的器械，倒出，加入甲氨蝶呤，先取20g芍药提取物共同研磨混合均匀，再加入40g芍药提取物混匀，再加入80g芍药提取物混匀，再加入剩余的60g芍药提取物混匀，即得本发明组合物。

实施例5：

取实施例4制备的芍药提取物甲氨蝶呤组合物100g，加入淀粉1000g，倍他环糊精1000g，混合均匀后，制成颗粒过50目标准筛整粒，加入压片机压制成片剂，每片重约0.3g，即得本发明组合物的延伸制剂片剂。

实施例6：

取实施例4制备的芍药提取物甲氨蝶呤组合物100g，加入可溶性淀粉1000g，蔗糖1000g，混合均匀，制成颗粒过24目标准筛整粒，每袋装1g，即得本发明组合物的延伸制剂颗粒。

实施例7：

取芍药苷含量为90％芍药提取物7000g，甲氨蝶呤1g，先用少量芍药提取物饱和用于混合的器械，倒出，加入甲氨蝶呤，先取1g芍药提取物共同研磨混合均匀，再加入2g芍药提取物混匀，再加入4g芍药提取物混匀，再加入8g芍药提取物混匀，再加入16g芍药提取物混匀，再加入32g芍药提取物混匀，再加入64g芍药提取物混匀，再加入128g芍药提取物混匀，再加入256g芍药提取物混匀，再加入512g芍药提取物混匀，再加入1024g芍药提取物混匀，再加入2048g芍药提取物混匀，再加入剩余的2905g芍药提取物混匀，即得本发明组合物。

实施例8：

取芍药苷含量为35％芍药提取物3500g，甲氨蝶呤1g，先用少量芍药提取物饱和用于混合的器械，倒出，加入甲氨蝶呤，先取1g芍药提取物共同研磨混合均匀，再加入2g芍药提取物混匀，再加入4g芍药提取物混匀，再加入8g芍药提取物混匀，再加入16g芍药提取物混匀，再加入32g芍药提取物混匀，再加入64g芍药提取物混匀，再加入128g芍药提取物混匀，再加入256g芍药提取物混匀，再加入512g芍药提取物混匀，再加入1024g芍药提取物混匀，再加入剩余的1453g芍药提取物混匀，即得本发明组合物。

本发明芍药提取物甲氨蝶呤组合物对大鼠佐剂性关节炎的药效试验。

以下试验中所用的芍药提取物甲氨蝶呤组合物为实施例1制备的组合物。

1、目的：芍药提取物甲氨蝶呤组合物对大鼠佐剂性关节炎的药效。

2、动物：SD大鼠：体重180+20g，雄性

3.方法

3.1实验分组：SD大鼠，随机分为4组，即正常组、模型组、芍药提取物甲氨蝶呤组合物组和阳性对照药强的组。每组12只。

3.2AA模型诱导：大鼠足爪皮内注射福氏佐剂(CFA)0.1ml，同时设生理盐水对照组。炎症出现后用药，用药10天。CFA的配制方法：将10mg卡介苗加入1ml石蜡油中，充分混匀后置4℃冰箱中过夜，注射前再进行充分混匀。

3.3给药时间及用药方法：诱导后，每天观察足爪肿胀，足爪评分，足爪出现红肿，开始用药。灌胃给药，每天一次，用药12天。d28，处死大鼠，观察药效指标。

3.4检测指标：

(1)足爪肿胀度的测定：用足爪容积测量仪于致炎前，致炎后d12、d16、d20、d24、d28定期检测大鼠足爪肿胀度。

(2)全身病变：体重变化，前肢、耳和尾部病变的发生率和严重度。

(3)关节指数：按0-4五级评分，0＝无红肿；1＝小趾关节稍肿；2＝趾关节和足跖肿胀；3＝踝关节以下的足爪肿胀；4＝包括踝关节在内的全部足爪肿胀。

4、结果

4.1对足爪肿胀度的影响

1)大鼠足爪皮内注射CFA(10g/L)0.1ml，用足爪容积测量仪于致炎后d12、d16、d20、d24、d28定期检测大鼠足爪肿胀度。结果显示：足爪肿胀度定期检测值模型组均较正常对照组明显增加(P＜0.05)，见图1。

2)阳性对照药强的松10mg/kg灌胃给药(ig)后第3天(d3)、d7、d11测量足爪容积，与模型组比较，足爪肿胀度均明显减轻(P＜0.05-0.01)，见图1。

3)芍药提取物甲氨蝶呤组合物100mg/kg灌胃给药(ig)后d3、d7、d11测量足爪容积，与模型组比较，可见芍药提取物甲氨蝶呤组合物组足爪肿胀度均明显减轻(P＜0.05-0.01)，见图1。

4.2对全身病变：体重变化，前肢、耳和尾部病变的发生率和严重度

1)分别于注射佐剂致炎后d16(给药前)、致炎后d20(给药d3)、致炎后d24(给药d7)和致炎后d28(给药d11)称体重，计算体重增量。增量(g)＝给药后体重-给药前体重。结果显示，模型组与对照组比较，体重明显下降；与模型组相同，芍药提取物甲氨蝶呤组合物组体重也明显下降，但没有明显的规律。

2)观察记录前肢、耳和尾部病变的发生率和严重度，除对照组，模型组和各受试药物组在致炎后随时间而发生后肢被注射部位不同程度的肿胀，部分发生溃疡或溃烂，前肢和耳发生轻度肿胀、部分大鼠尾巴发生结节，其发生率和严重度在给药前基本是一致的。在开始给药后，芍药提取物甲氨蝶呤组合物组全身病变的没有发生进一步的恶化，开始减轻。

4.3对关节指数的影响

1)大鼠足爪皮内注射CFA(10g/L)0.1ml，按0-4五级评分，于给药后d3、d7、d11定期评估关节指数。结果显示：关节指数评估积分模型组均较正常对照组明显增加(P＜0.01)，见图2。

2)阳性对照药强的松10mg/kg灌胃给药(ig)后d3、d7、d11评估关节指数，与模型组比较，关节指数评估积分均明显减少(P＜0.05-0.01)，见图2。

3)芍药提取物甲氨蝶呤组合物100mg/kg灌胃给药(ig)后d3、d7、d11评估关节指数，与模型组比较，可见芍药提取物甲氨蝶呤组合物组呈剂量依赖减少关节指数积分(P＜0.05-0.01)，见图2。

本发明芍药提取物甲氨蝶呤组合物志愿者药物试验。

试验药物为实施例5制备的芍药提取物甲氨蝶呤组合物片剂，以及同法制备的甲氨蝶呤片剂和芍药提取物片剂。选取了70位患类风湿关节炎志愿者进行临床观察，70位类风湿关节炎完全出于自愿，均签订了知情同意书，都符合美国风湿病协会类风湿关节炎修订分类标准(1987)和活动性类风湿关节炎标准，近期未接受糖皮质激素或抗类风湿关节炎药物治疗，无心、肝、肾等重要脏器疾病。随机分为两组，每组组35例。试验组(芍药提取物甲氨蝶呤组合物片剂组)每人每天一次，每次两片芍药提取物甲氨蝶呤组合物片；对照组(甲氨蝶呤片与芍药提取物片联合用药组)每人每天一次，每次2片甲氨蝶呤片、2片芍药提取物；连续服用12周。

观察指标：晨僵时间；双手握力；关节压痛数；关节肿胀数；血沉(ESR，魏氏法)及C-反应蛋白(CRP，火箭电泳法)；肝功能检测谷丙转氨酶(ALT)；血液白细胞检测；观察不良反应等。于治疗前及治疗期间每隔4周重复检查并记录。

疗效标准：主要以晨僵、握力、关节压痛数、肿胀数、ESR、CRP指标作为评价指标，以下降(握力为增加)50％作为有效计。评定级别：晨僵时间＜15min；握力改善；无关节压痛；无关节肿胀；ESR＜20mm/h或30mm/h(女性)。上述5项中至少具备4项者为临床缓解；5项中至少3项达到上述有效者为显效；5项中至少2项达到上述有效者为有效；5项中不足2项达到“有效”者为无效。

分别于治疗前和治疗后4、8、12周观察并记录检测结果，其结果如下表：

表1患者疗效比较

从以上患者疗效比较可以看出，芍药提取物甲氨蝶呤组合物治疗类风湿关节炎的效果要好于芍药提取物与甲氨喋呤联合用药效果。

经过12周治疗后，不良反应观察情况如下：

表2不良反应情况观察表

从不良反应对比可以看出，芍药提取物甲氨蝶呤组合物治出现不良反应的人数比芍药提取物与甲氨喋呤联合用药要少，组合物未出现白细胞减少与谷丙转氨酶升高等较为严重的不良反应。

Claims (6)

1.一种芍药提取物甲氨蝶呤组合物，其特征是由芍药提取物与甲氨蝶呤按重量份比为芍药提取物∶甲氨蝶呤＝1～8000∶1的比例制成的组合物。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征是所述芍药提取物是指由芍药或白芍或赤芍中提取获得，其中指标性成分芍药苷的含量为30％～100％。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征是甲氨蝶呤为4-氨基-10-甲基叶酸及结构相似物的混合物，主要成分为L-(+)-N-[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲氨基]苯甲酰基]谷氨酸(C₂₀H₂₂N₈O₅)，按干燥品计算，含C₂₀H₂₂N₈O₅不得少于90.0％。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征是该组合物可制成片剂或胶囊剂或栓剂或颗粒剂或与其他药物复方制剂。

5.一种制备权利要求1所述的芍药提取物甲氨蝶呤组合物的制备方法，其特征是采用等量递增法或等倍递增法混合方法，即先用少量芍药提取物饱和用于混合的器械，倒出，加入甲氨蝶呤，取与甲氨蝶呤等量的芍药提取物共同研磨混合均匀，再加入与混合粉等量的芍药提取物混匀，如此反复加入混合，直至量大组分加完，混匀。

6.一种芍药提取物甲氨蝶呤组合物在治疗类风湿中的应用。

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