CN101880669B - 小粒野生稻抗白叶枯病主效基因Xa3/Xa26-3和它在改良水稻抗病性中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及植物基因工程技术领域。具体涉及包含小粒野生稻抗白叶枯病主效基因Xa3/Xa26-3的DNA片段的分离克隆和功能验证。Xa3/Xa26-3基因编码富亮氨酸蛋白激酶类蛋白质。它能够赋予水稻抵抗由细菌性病原菌-白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)引起的病害。将该片段与其自身调控序列直接转入水稻，携带Xa3/Xa26-3的转基因水稻对白叶枯病的抵抗能力显著增强。

Description

小粒野生稻抗白叶枯病主效基因Xa3/Xa26-3和它在改良水稻抗病性中的应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域。具体涉及一个水稻抗白叶枯病主效基因Xa3/Xa26-3的分离克隆、功能验证和应用。所述的DNA片段能够赋予水稻抵抗由白叶枯病菌引起的病害。将该片段与其内源调节序列直接转入植物体，转基因水稻可以产生由该基因介导的对白叶枯病菌的防卫反应。 

技术背景

植物在生长的过程中，受到多种病原物的侵害。植物病原物的种类繁多，包括病毒、细菌、真菌和线虫等。病原物侵入植物导致两种结果：(1)病原体成功的在寄主植物内繁殖，引起相关的病症；(2)寄主植物产生抗病反应，杀死病原物或阻止其生长。利用抗性基因资源改良植物的抗病性，是预防病害同时又保护环境的根本出路。 

植物的抗病反应是多基因参于调控的复杂过程。参于植物抗病反应的基因分为两类：(1)抗病(主效)基因，又称R(resistance)基因和(2)抗病相关基因。 

根据目前人们对抗病基因功能的认识，抗病基因的产物主要是作为受体，直接或间接与病原蛋白相互作用，启动植物体内的抗病信号传导路径(Chisholm等，2006)。抗病基因介导的抗病反应抗性强，是很好的基因资源。但是农作物栽培种中抗病基因的资源有限。从近缘物种中发掘新的抗病基因用于农作物遗传改良一直是研究者工作的一个重要目标。 

水稻是世界上重要的粮食作物，但病害的影响常常造成其产量和品质的下降。水稻白叶枯病由白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)引起，是世界上对水稻危害最大的细菌性病害之一(过崇俭，1995)。水稻栽培种(Oryzasativa L.)中抗病基因的资源非常有限。如目前知道的抗白叶枯病基因只有大约30个(储昭晖和王石平，2007)。由于野生稻长期处于野生状态，经受了各种不良环境和灾害的自然选择，形成了极其丰富的遗传多样性。野生稻中蕴藏有优良抗病基因资源，是人们发掘新的优良基因的一个重要资源库。已知的大约30个抗白叶枯病基因中就有多个基因是从野生稻中导入进栽培稻中的。如抗白叶枯病显性基因Xa21源自西非长药野生稻(Oryza longistaminata)，对大多数白叶枯病菌株表现高抗；但是该基因是成株期抗性，即只有在水稻成株期才对白叶枯病菌具有完全抗性(Khush等，1990；Wang等，1996)。Xa21基因已经被分离克隆(Song等，1995)。一个尚未被分离克隆的抗白叶枯病显性基因Xa23源自普通野生稻(Oryza rufipogon)，它具有广谱抗性(章琦等，2000)。另一个已经被分离克隆的抗白叶枯病基因Xa27来自于四倍体小粒野生稻(Orzyaminuta)，该基因抗白叶枯病菌菲律宾小种2、3、5和6(Amante-Bordeos等，1992；Gu等，2005)。此外，尚未被分离克隆的抗白叶枯病基因Xa29(t)和Xa30(t)是分别从药用野生稻(Orzya officinalis)和普通野生稻中鉴定出的(谭光轩等，2004；王春连等，2004)。 

发明内容

本发明的目的是分离克隆小粒野生稻(Oryza minuta)中携带的抗白叶枯病基因Xa3/Xa26-3和包含调控这个基因的启动子的DNA片段，利用这个基因改良水稻品种或其他 植物抵御病害的能力。 

本发明涉及分离和应用包含Xa3/Xa26-3基因的DNA片段，它的核苷酸序列如序列表SEQID NO：1所示，它的编码序列如序列表SEQ ID NO：1中第6072-8979和9084-9451位所示。该基因(片段)赋予水稻对由白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)所引起的病害产生特异性的抗病反应。这一发明适用于所有对该病原菌敏感的植物。这些植物包括单子叶植物和双子叶植物。除上述所述的如SEQ ID NO：1所示的DNA片段外，本发明所定义的基因还包括基本上相当于SEQ ID NO：1所示的DNA序列，或者其功能相当于SEQ 

ID NO：1所示序列的亚片段。对序列表SEQ ID NO：1所示序列进行生物信息学分析表明，该DNA序列编码一种受体蛋白激酶，它包含细胞外的富亮氨酸重复(leucine-rich repeat，LRR)结构域和细胞内的蛋白质激酶结构域。 

可以采用已经克隆的Xa3/Xa26-3基因作探针，从cDNA和基因组文库中筛选到本发明的基因或同源基因。同样，采用PCR(polymerase chain reaction)技术，也可以从基因组、mRNA和cDNA中扩增得到本发明的Xa3/Xa26-3基因以及任何感兴趣的一段DNA或与其同源的一段DNA。采用以上技术，可以分离得到包含Xa3/Xa26-3基因的序列或者包含一段Xa3/Xa26-3基因的序列，将这一序列与合适的载体连接，可以转入植物细胞，并表达Xa3/Xa26-3基因，产生抗病转基因植物。采用这种转基因技术创造抗病植物是传统育种技术所不能达到的。 

将克隆的抗病基因转入感病的植物，有助于产生新的抗病植物。特别是可以用遗传转化技术在植物中累加多个抗病基因，而不会产生传统育种技术中伴随出现的将遗传连锁累赘引入需改良的品种。同时，抗病基因的克隆可以克服传统育种不能在植物种间转移抗病基因的问题。本发明能够进一步提供或应用利用上述DNA片段获得的抗病的转基因植株和相应的种子，可以用有性杂交的方式将本发明的基因转入其它的植物。 

本发明为增强水稻对白叶枯病的抗性提供了一种新的方法。这种方法包括将来源于野生稻的Xa3/Xa26-3基因和它的调控DNA序列与遗传转化载体连接、转入感病水稻，改良水稻对白叶枯病的抗性。 

更详细的技术方案见《具体实施方式》所述。 

附图说明

序列表SEQ ID NO：1.是本发明克隆的Xa3/Xa26-3基因的DNA序列。 

图1.本发明鉴定和分离克隆水稻抗白叶枯病基因Xa3/Xa26-3以及验证Xa3/Xa26-3基因功能的流程图。 

图2.籼稻品种明恢63中Xa3/Xa26基因和MRKa基因的结构及用于制备DNA探针的PCR引物(箭头)位置。 

图3.Xa3/Xa26基因片段的DNA探针与7个BAC克隆的杂交结果。 

图4.籼稻品种明恢63和小粒野生稻中Xa3/Xa26基因家族成员的分布和序列同源性。每一个箭头代表一个Xa3/Xa26家族成员和转录方向。Xa3/Xa26和Xa3/Xa26-3基因下游约有1.4kb核苷酸序列同源程度达到83％。13.7kb区段是用于遗传转化的DNA片段。 

图5.遗传转化载体pCAMBIA1301的结构。 

图6.T1代遗传转化植株中的报告基因GUS与抗病表型共分离。说明与GUS基因紧密连锁的Xa3/Xa26-3基因与抗病表型共分离。对照为水稻感病品种牡丹江8(遗传转化的受体)。病斑面积为接种白叶枯病菌PXO61两周后的数据。 

图7.与对照牡丹江8相比，携带Xa3/Xa26-3基因的遗传转化植株(D103OM26)对不同白叶枯病菌的抗性都增强了。 

图8.Xa3/Xa26-3基因结构。箭头示用于基因结构分析的PCR引物位置和方向。“ATG”和“TGA”分别是翻译起始密码和终止密码。数字示每一种结构的核苷酸数目。 

具体实施方式

本发明的前期研究结果显示来源于籼稻(Oryza sativa L.ssp.indica)品种明恢63的抗白叶枯病显性基因Xa3/Xa26属于多基因家族成员；这个家族的成员以串连排列的形式位于水稻11号染色体的长臂(Yang等，2003；Sun等，2004，2006；Xiang等2006)。在明恢63中，Xa3/Xa26家族由4个成员(Xa3/Xa26、MRKa、MRKc和MRKd)组成，它们的编码区之间的DNA序列同源性为60％至78％(Sun等，2004)。Xa3/Xa26编码一个富亮氨酸重复(leucine-richrepeat，LRR)蛋白激酶类蛋白(Sun等，2004)。根据本发明中的目标基因与Xa3/Xa26基因序列同源性分析和它在小粒野生稻(Oryza minuta)的Xa3/Xa26家族中与其他成员的相对应位置关系，确定该基因是Xa3/Xa26基因的又一个等位基因，故命名为Xa3/Xa26-3基因(视Xa3/Xa26基因为Xa3/Xa26-1)。 

以下实施例中进一步定义本发明。图1描叙了鉴定和分离克隆Xa3/Xa26-3基因以及验证Xa3/Xa26-3基因功能的流程。根据以下的描述和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征、并且在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明做出各种改变和修改，以使其适用各种用途和条件。 

实施例1：从小粒野生稻中分离克隆Xa3/Xa26-3基因和基因结构分析 

1.鉴定携带Xa3/Xa26基因同源序列的大片段DNA 

本发明研究人员首先用Xa3/Xa26基因的特异性PCR引物RKb-3’race2(5’-TGGTCAAATACCGGAAGGAG-3’)和RKb-2R(5’-CAGTCCACCACATGGACAAG-3’)和Xa3/Xa26家族成员MRKa基因的特异性PCR引物RKa-11L(5’-TTGGCTTGAACGGCTTAACT-3’)和RKa-1R(5’-AAGATGAAATATGCTCGGTGGT-3’)从水稻品种明恢63(中国大面积推广的水稻品种)中扩增出Xa3/Xa26基因和MRKa的DNA片段，扩增长度各约1kb(图2)。将这两段PCR扩增产物混合作为探针筛选小粒野生稻(Oryzaminuta)的基因组BAC(bacterial artificial chromosome)文库(Ammiraju等，2006)，鉴定了7个阳性BAC克隆。这7个阳性BAC克隆(Ammiraju等，2006)由美国University of Arizona大学的Rod Wing教授惠赠。将筛选到得BAC克隆扩大培养，采用标准碱裂解法分离提取BAC质粒(Sambrook和Russell，2001)。将所得BAC质粒用HindIII完全酶切、电泳、转移至尼龙膜；然后用上述Xa3/Xa26基因片段探针和MRKa基因片段探针分别与载有BAC质粒的尼龙膜杂交(Sambrook和Russell，2001)。用Xa3/Xa26基因片段作探针的杂交结果显示BAC 克隆OMBa0293H21与其他三个BAC克隆有相同的杂交带型，它们的杂交带最多(图3)，推测这些BAC克隆可能覆盖Xa3/Xa26基因家族区段。故选择对OMBa0293H21克隆进行测序。 

2.BAC克隆的shotgun文库的构建 

本发明研究人员首先构建了用于测序的OMBa0293H21克隆的shotgun文库。采用超声波法构建shotgun文库(Sambrook和Russell，2001)。用超声波处理OMBa0293H21克隆的环形质粒1.6秒(超声破碎仪Soniprep 150为SANYO公司产品，具体操作参考该仪器的使用说明书)。通过1％琼脂糖凝胶电泳分离大约2.0-3.5kb的DNA片段，用UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒(购自中国上海生工生物工程有限公司)从电泳凝胶中纯化DNA。纯化后的DNA用T4DNA聚合酶补平末端，与限制性内切酶SmaI酶切的去磷酸化的pUC19载体(购自美国Amersham Bioscience公司)平端连接，电转化大肠杆菌DH10B(购自美国Invitrogen公司)(电转化仪为eppendorf公司产品，本实施例所用电压为1800V，具体操作参考该仪器的使用说明书)。挑克隆检测插入片段大小：提取阳性克隆质粒，并用空pUC19质粒进行电泳比较，剔除假阳性克隆及小片段克隆，或用EcoRI和HindIII双酶切重组质粒，检测插入片段大小，筛选插入片段大小合适的克隆作为shotgun文库用于测序。 

3.Shotgun文库的测序 

采用M13-F(5′-GTAAAACGACGGCCAGT-3′)和M13-R(5′-CAGGAAACAGCTATGAC-3′)通用引物(购自中国上海生工生物工程有限公司)、美国Perkin Elmer公司的测序试剂盒(BigDye Kit)，根据试剂盒说明书以双脱氧核苷酸末端终止法分别从shotgun文库中随机挑选的克隆两端测序。 

4.原始序列的拼接 

使用Squencer 4.5软件(美国Gene Codes Corporation)拼接序列。用Squencer4.5软件自动去除末端测序较差的序列和pUC19载体序列；软件没有去除干净的序列则用手工删除。BAC载体的碎片序列和污染的细菌DNA序列通过和BAC序列进行比较或BLAST分析的方法(Altschul等，1997)加以去除。用Squencer4.5软件对两条序列进行拼接的参数是：重叠序列长度(Mini Overlap)大于20bp(base pair)，重叠序列的一致性(Mini Match)大于85％。每一个碱基的确定都要参照重叠在该位点的多个shotgun片段序列。对于由一个shotgun片段序列所覆盖的区域要再次测序验证，以确保碱基的准确性。 

5.DNA序列分析 

首先用Blastn和Blastx方法(Altschul等，1997)分析所得序列。然后采用Fgenesh(http://www.softberry.ru/berry.phtml)(Salamov和Solovyev，2000)和GeneMark.hmm(http://exon.gatech.edu/GeneMark/eukhmm.cgi)(Besemer和Borodovsky，2005)软件分析预测基因结构，分析结果进一步用Blastp方法(Altschul等，1997)进行确定。两条或多条核苷酸或氨基酸序列的比较分析使用BLAST 2 sequence方法(Tatusova等，1999)和ClustalW方法(http://www.ebi.ac.uk)。 

对BAC克隆OMBa0293H21测序和序列拼接形成九个大的序列片段，其长度分别为71.3kb，24.9kb，17.6kb，11.1kb，8.1kb，6.6kb，4.6kb，4.1kb和1.1kb。序列分析发现在71.3kb的片段上有5个基因编码LRR-蛋白激酶类蛋白，与水稻抗白叶枯病基因Xa3/Xa26编码的产物有不同程度的同源性，它们被命名为OmRKa、OmRKb1、OmRKb、OmRKg和OmRKc(图4)。用Fgenesh、GeneMark.hmm和Blastx分析表明，OmRKa和OmRKb是2个完整的基因，OmRKb1和OmRKg是不完整基因，OmRKc是假基因(图4)。OmRKa和OmRKb的转录方向相同，而OmRKc的转录方向与OmRKa和OmRKb相反(图4)。 

将该区段与水稻品种明恢63中Xa3/Xa26基因家族区段进行比较分析。发现小粒野生稻中的OmRKa基因和明恢63中的MRKa基因的同源性达到80％，小粒野生稻中的OmRKc基因和明恢63中的MRKc基因的同源性达到83％，小粒野生稻中的OmRKb基因和和明恢63中的Xa3/Xa26(又称为MRKb)基因同源性高达95％；并且OmRKb和MRKb基因下游约有1.4kb区段同源性达到83％，所以OmRKb为Xa3/Xa26的等位基因，我们命名该基因为Xa3/Xa26-3(图4)。 

实施例2：Xa3/Xa26-3基因的功能验证 

1.遗传转化载体的构建 

本发明所用载体是pCAMBIA1301(图5)，它是常用的水稻遗传转化载体(Sun等，2004)。用限制性内切酶SmaI从BAC克隆OMBa0293H21上酶切后回收13.7kb包含Xa3/Xa26-3基因的编码区、启动子以及尾部序列的片段(图4)。同时，用限制性内切酶SmaI酶切遗传转化载体pCAMBIA1301；酶切完毕，用SAP(虾碱性磷酸酶)去磷酸化；用氯仿∶异戊醇(体积比24∶1)抽提、纯化酶切产物。用包含Xa3/Xa26-3基因的酶切回收片段和纯化好的载体做连接反应。通过酶切验证阳性克隆，获得的重组质粒被命名为D103O。 

2.遗传转化和T₀代遗传转化植株分析 

采用农杆菌介导的遗传转化方法(Lin和Zhang，2005)将D103O导入水稻感病品种牡丹江8(Oryza sativa L.ssp.japonica)。获得的遗传转化植株被命名为D103OM(该命名的前面部分即D103O为遗传转化载体名称，M代表水稻品种牡丹江8)。本发明共获得阳性独立转化植株19株，对全部阳性转化植株接种白叶枯病菌株PXO61。白叶枯病菌接种采用剪叶法对成株期的水稻进行接种(Sun等，2004)。白叶枯病菌株PXO61由菲律宾国际水稻研究所惠赠(Sun等，2004；Wu等，2008)。白叶枯病菌的培养遵循已经公开发表的方法(Sun等，2004)。接种14天后调查病斑面积(病斑长度/病叶长度×％)。与对照牡丹江8相比，所有阳性遗传转化植株的抗性显著增强(表1)。 

表1.T₀代遗传转化植株(D103OM)接种白叶枯病菌株PXO61的表型 

(1)每株遗传转化基因植株接种3-5片叶，14天后调查病斑和病叶长度，每个数据来自多个叶片的平均值±标准差。 

3.遗传转化植株的共分离分析 

为了验证遗传转化植株的抗病能力增强是否与Xa3/Xa26-3基因转入相关，对在T₀代抗性增强的2株遗传转化植株(D103OM25、D103OM43)的T₁代家系进行基因型和抗性共分离分析。在孕穗期时接种白叶枯病菌PXO61，接种14天后调查病斑面积。同时取样抽取DNA，采用遗传转化载体所携带的报告基因GUS(β-葡萄糖醛酸酶)的PCR引物Gus2F(5’-CCAGGCAGTTTTAACGATCAGTTCGC-3’)和Gus2R(5’-GAGTGAAGATCCCTTTCTTGTTACCG-3’)扩增检测阳性遗传转化植株。分析发现遗传转化植株的抗性增强和GUS基因共分离(图6)。说明遗传转化植株的抗性增强是因为Xa3/Xa26-3基因的存在，Xa3/Xa26-3是一个抗白叶枯病基因。 

4.遗传转化植株的抗谱分析 

对来源于T₀植株D103OM26的T₁代遗传转化家系和对照牡丹江8在孕穗期接种不同白叶枯病菌株，分析遗传转化植株的抗谱。接种采用上述剪叶法。菲律宾白叶枯病菌株PXO61、PXO71、PXO112、PXO341由菲律宾国际水稻研究所惠赠(Sun等，2004；Wu等，2008)。中国白叶枯病菌株JL691是常用菌株(Sun等，2004)。日本菌株T7174也是常用白叶枯病菌株(Cao等，2007)。与遗传转化受体水稻品种牡丹江8相比，携带Xa3/Xa26-3基因的遗传 转化植株显著增强(P＜0.01)了对不同白叶枯病菌株的抗性(图7)。遗传转化植株的病斑面积只是对照牡丹江8的30％至78％。这些结果说明Xa3/Xa26-3基因对白叶枯病菌具有广谱抗性。 

5.Xa3/Xa26-3基因结构和编码产物分析 

本发明研究人员利用转基因植株(D103OM)分析了Xa3/Xa26-3基因的结构。转基因植株的总RNA的抽提采用TRIzol Reagent(美国Invitrogen公司)，操作方法按该公司提供的说明书进行。 

先将用于反转录的总RNA用无RNA酶活性的DNA酶I(美国Invitrogen公司)处理，室温放置15分钟，去除总RNA中可能存在的DNA污染；再将总RNA在65℃处理10分钟，灭活DNA酶I。用SuperScript III反转录酶(美国Invitrogen公司)，按试剂供应商提供的说明书进行反转录。采用跨越预测内含子位置的PCR引物RKb3F和RKb2R(表2)扩增基因组DNA和RNA反转录产物，RT-PCR产物比基因组扩增产物小，说明该区段确实存在一个内含子(图8)。采用Xa3/Xa26-3基因区段的其它引物(表2)进行反转录(RT)-PCR分析，没有再发现其它内含子的存在。 

基因末端序列分析采用Clontech公司SMARTer RACE cDNA Amplification Kit试剂盒，根据试剂盒说明书，通过RACE(rapid amplification of cDNA end)分析方法，确定Xa3/Xa26-3基因的5’和3’末端序列。 

表2.用于RT-PCR和RACE分析的基因特异性引物 

采用上述DNA测序方法，对RT-PCR产物进行测序。比较分析Xa3/Xa26-3基因的cDNA序列和基因组序列，确定该基因由3601个核苷酸组成，包含两个外显子和一个内含子(图8)。第一个外显子由2954个核苷酸组成(位于序列表SEQ ID NO：1的6026-8979bp处)，其中包含由46个核苷酸组成的5’端非翻译区(untranslated region，UTR)(位于序列表SEQ ID NO：1的6026-6071bp处)和2908个核苷酸组成的编码区(位于序列表SEQ ID NO：1的6072-8979bp处)；内含子由104个核苷酸组成(位于序列表SEQ ID NO：1的8980-9083bp处)；第二 个外显子由543个核苷酸组成(位于序列表SEQ ID NO：1的9084-9626bp处)，其中包含由368个核苷酸组成的编码区(位于序列表SEQ ID NO：1的9084-9451bp处)和由175个核苷酸组成的3’端UTR(位于序列表SEQ ID NO：1的9452-9626bp处)。 

Xa3/Xa26-3基因编码一个由1092个氨基酸组成的LRR受体激酶类蛋白质。XA3/XA26-3蛋白与XA3/XA26蛋白的氨基酸一致性为92％，氨基酸的同源性为95％。 

参考文献 

储昭晖，王石平，(2007)，抗性基因分离克隆、结构与功能和分子进化，见：章琦主编，水稻白叶枯病抗性的遗传及改良。北京：科学出版社，pp.349-377。 

过崇俭(1995)中国农作物病虫害。中国农业科学院植物保护研究所主编，中国农业出版社，pp.14-24。 

谭光轩，任翔，翁清妹，时振英，祝莉莉，何光存，药用野生稻转育后代一个抗白叶枯病新基因的定位，遗传学报，(2004)31：724-729。 

王春连，赵炳宇，章琦，赵开军，邢全党，水稻白叶枯病新抗源Y238的鉴定及其近等基因系培育，植物遗传资源学报，(2004)5：26-30。 

章琦，赵炳宇，赵开军，普通野生稻的抗水稻白叶枯病新基因Xa23的鉴定和分子标记定位，作物学报，(2000)26：536-542。 

Altschul SF，Madden TL，Schaffer AA，Zhang J，Zhang Z，Miller W，Lipman DJ(1997)GappedBLAST and PSI-BLAST：a new generation of protein database search programs.NucleicAcids Res.25：3389-3402. 

Amante-Bordeos A，Sitch LA，Nelson R，Dalmacio RD，Oliva NP，Aswidinnoor H，Leung H(1992)Transfer of bacterial blight and blast resistance from the tetraploid wild rice Oryza minuta tocultivated rice，Oryza sativa.Theor.Appl.Genet.84：345-354. 

Ammiraju JS，Luo M，Goicoechea JL，Wang W，Kudrna D，Mueller C，Talag J，Kim H，SisnerosNB，Blackmon B，Fang E，Tomkins JB，Brar D，MacKill D，McCouch S，Kurata N，Lambert G，Galbraith DW，Arumuganathan K，Rao K，Walling JG，Gill N，Yu Y，SanMiguel P，SoderlundC，Jackson S，Wing RA(2006)The Oryza bacterial artificial chromosome library resource：construction and analysis of 12 deep-coverage large-insert BAC libraries that represent the 10genome types of the genus Oryza.Genome Res.16：140-147. 

Besemer J，Borodovsky M(2005)GeneMark：web software for gene finding in prokaryotes，eukaryotes and viruses.Nucleic Acids Res.33：451-454. 

Cao Y，Ding X，Cai M，Zhao J，Lin Y，Li X，Xu C，Wang S(2007)The expression pattern of a ricedisease resistance gene Xa3/Xa26 is differentially regulated by the genetic backgrounds anddevelopmental stages that influence its function.Genetics 177：523-533. 

Chisholm ST，Coaker G，Day B，Staskawicz BJ(2006)Host-microbe interactions：shaping theevolution of the plant immune response.Cell 124：803-814. 

Gu K，Yang B，Tian D，Wu L，Wang D，Sreekala C，Yang F，Chu Z，Wang GL，White FF，Yin Z.(2005)R gene expression induced by a tyPe-III effector triggers disease resistance in rice.Nature 435：1122-1125. 

Lin YJ，Zhang Q(2005)Optimising the tissue culture conditions for high efficiency transformationof indica rice.Plant Cell Rep.23：540-547. 

Khush GS，Bacalangco E，Ogawa T(1990)A new gene for resistance to bacterial blight from O.longistaminate.Rice Genet.Newslett.7：121-122. 

Salamov A，Solovyev V(2000)Ab initio gene finding in Drosophila genomic DNA.Genome Res.，10：516-522. 

Sambrook J，Russell D(2001)Molecular cloning：A laboratory manual.Cold Spring Harbor，NY：Cold Spring Harbor Laboratory Press. 

Song WY，Wang GL，Chen LL，Kim HS，Pi LY，Holsten T.Gardner J，Wang B，Zhai WX，Zhu LH，Fauquet C，Ronald P(1995)A receptor kinase-like protein encoded by the rice diseaseresistance gene，Xa21.Science 279：1804-1806. 

Sun X，Cao Y，Yang Z，Xu C，Li X，Wang S，Zhang Q(2004)Xa26，a gene conferring resistance toXanthomonas oryzae pv.Oryzae in rice，encoding a LRR receptor kinase-like protein.Plant J.37：517-527. 

Sun X，Cao Y，Wang S(2006)Point mutations with positive selection were a major force during theevolution ofa receptor-kinase resistance gene family of rice.Plant Physiol.140：998-1008. 

Tatusova TA，Madden TL(1999)BLAST 2 Sequences，a new tool for comparing protein andnucleotide sequences.FEMS Microbiol.Lett.174：247-250. 

Wang GL，Song WY，Ruan DL，Sideris S，Ronald PC(1996)The cloned gene，Xa21，confersresistance to multiple Xanthomonas oryzae pv.oryzae isolates in transgenic plants.Mol.Plant-Microbe Interact.9：850-855. 

Wu X，Li X，Xu C，Wang S(2008)Fine genetic mapping of xa24，a recessive gene for resistanceagainst Xanthomonas oryzae pv.oryzae in rice.Theor.Appl.Genet.118：185-191. 

Xiang Y，Cao Y，Xu C，Li X，Wang S(2006)Xa3，conferring resistance for rice bacterial blight andencoding a receptor kinase-like protein，is the same as Xa26.Theor.Appl.Genet.113：1347-1355. 

Yang Z，Sun X，Wang S，Zhang Q(2003)Genetic and physical mapping of a new gene for bacterialblight resistance in rice.Theor.Appl.Genet.106：1467-1472. 

序列表

<110>华中农业大学

<120>小粒野生稻抗白叶枯病主效基因Xa3/Xa26-3和它在改良水稻抗病性中的应用

<130>

<141>2010-03-25

<160>2

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>13653

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>gene

<222>(6026)..(9626)

<220>

<221>5’UTR

<222>(6026)..(6071)

<220>

<221>CDS

<222>(6072)..(8979)

<220>

<221>Intron

<222>(8980)..(9083)

<220>

<221>CDS

<222>(9084)..(9451)

<220>

<221>3’UTR

<222>(9452)..(9626)

<400>1

gggaacgaga ggagggggag ggagtaggtc gagagggaag tcggcccgag tggaggaggg     60

aggtaaagtg gactttacca gagaaaatga aagagggagt ttgagggctc agattcgaaa    120

tccgattttg cggttttctc cgggattgag acgagagggg gaacacgaga ccaggcacac    180

gacaagactt gaccaagaac aaaattttcg caaatagggt ttttagagaa ctaggttttc    240

ccactaacgc cacgacgaaa caggcgttac atatttttaa cacaaaaaac atattatcaa    300

aatatattca atgttagatt taatgaaact aatttgatat ttcagatttt gctaaatttt    360

tctataaact taatcaaact taacaaagtt tgactagaaa aaaattcaaa tgacttataa    420

tatgaaatgg agagagtacc gatttcttgc gttgctgttg catctgtata aatctctctg    480

tgagtgtgtg ttgttatctt gttgcttcta agttccctct gttacatttt ctggttgcag    540

tccaggttcc ctggaagatc aatgctgcta caagtaaaac atccttctcc tcggcaatga    600

ttccccttca caatcacgcg aagtgagccg aaaatgcttc aatacggacg ttcggtgcgg    660

ataaaaaatc ggaccccaca tgtaaccact catttcttat cctcccatct ccttcgtctt    720

tcacgcaggg cggagaagac agccattgcg gcgtcgcctt cgcgcttccc ctacgaagcc    780

aaccgccacg cagctccctc acgcttgctc cttcctcctc cacctctgac tgctgtagca    840

tgctgggcga cggcagatgg taaggccacc ttcctcatgt cccccatcta gatccatcaa     900

tctagttgga gcgtgctttc tgtgcttggt agccggcacc gcaatggcga aagaagaggg     960

ggaaggaagc acagtttgaa agaaatggag tgctttttga tgggtccggt caccggagca    1020

gaggaagaag atggatccag ccatcgaagt agaagaagac agatctagtc acctaagtgg    1080

atgaaaaaga cagacggtag agttgttgca atctattgta tatgtttgtt gcactctatt    1140

ttatttacgt gtttcaccct cgttttatcg gatgttgcac atgatgtaca atgtgtgttt    1200

cttcgatgtt gcagagtaga gtcttgatgt tgcgggtagt gttttttcat tgtttcatct    1260

gattgaaaca ttctttacca agcgatgaaa tatttctcat cgagtaatga aatatcttaa    1320

acatctttta ttgaaacatt attcattgag tgatgaaaca tctgaaatat ttttttacat    1380

gtgatgaaac accgtctgat ttgtagtctt tttttaggtg ataatatctt aatgctattt    1440

atttatacct agcttagtgg tcccaatcta gattgtttct ctctggtgga atttcgctat    1500

gattctatac tgaaaaaaat ttcttaggag tctaaccaag ttcgtcacag gtcttgacca    1560

atcaaattat ttgcttactt ctacatgatt aagtgcatgc ctgcctgcaa tatactacct    1620

ccttttcaaa atgtacgatg ctgttgactt ctcgtatgac gttttcaaaa tgtacgatgc    1680

cgttgacttc tcgtatgacg tttgattata cgtcttattc aaaaaatcta ttatatatta    1740

aaaatccatt aaacttccta caaaaagtca ccatgtggca cttctataaa cactcctatg    1800

ccgccacgtg tcatatctcc aaattaagag aaaatctata gattctgaaa aaaggaaaaa    1860

tatccaacca tcgatttcac ttaaatcggt gatccattat tttagatcat tagattagat    1920

ctattaaata aagcaaatcc ctccctccta actcccgtat atgtacatag aagtagaaaa    1980

agaatacgta ctaccctatt ttcctggaga aaaaggtcga aaacaaaata cactattcat    2040

caggaaaaaa gcaaaaaaaa acatacaaac atatttgtac ggccacctga agtagtgaaa    2100

aaacacagaa aaaagcatac gtcccctcgc ctgattgtag aaaaacatta tattattaca    2160

attaaattta caatgctaaa cttgtattaa ctgtatattt taatttgaga aataattatt    2220

ttactttggg ttttattcta aatttatatg tcacccaaat aatcataaaa aatataaaac    2280

aactaaaact gatatttaaa aattactgac tggtatgaaa ttatgatatg ttaaaataaa    2340

tttactacta gatttataaa aaaaataaaa taaaactaat tccatttatt tatttcatca    2400

taaaaataat aacaaaaata acaatattga ttataccatt atacataact tcataaatat    2460

ggataacaaa attatatcta tgattattcg aagtaaatat tttctttgtt atgaaacttt    2520

gataagctat aataacatta aagtcctaat aacattataa aattgtcata taaactactt    2580

tcatgtattc atatttttaa ttttcattgt gaatatattg caagaaagac aagatacaaa    2640

gctcttgcta tggttcaacc tacacaggtt atacgtggat aacttaaagg tatcaatcat    2700

atgtctcatt aatcttgaat gtgtcagccc cacttacaaa ttcgtatcca ccaattgcta    2760

acgaggtatt tgtgcatcat ctcatatatc ttagatatga tgagcatgtg taccattaga    2820

cgtataataa agataaaggg cattttataa tatagattat atcattctat atcattttat    2880

aaacatacat agccaaagtc atgtgtgatt tactttaaat ctaactaaaa aaatcatgtc    2940

tacaataata agaatcatag aaatttaaaa aacagaaaaa ctcaagagca tataccctaa    3000

tagtaaataa aaatatcaat ggctaatccc taggacatat aaaattataa aggtttgtta    3060

aacgtcctat agaaccctcc tacagtgtct attaaagcct ttaacaaata agagaaaact    3120

ttaaaattct tctataatag acaaagcatc caacacttaa tcctcattaa tttaatgctc    3180

ccattaattt tagctattgg tcatgtcaat gggtatgtgt atacacacat tatttaataa    3240

aaaaaaccat ccattcaagc gtgttttgta atagaaaatt atttgagatg tcaggtgagg    3300

ttgtagtgac ctgttgcaag gttcacaggg ttgtagcaag aatgaccagc atcaagttgc    3360

atgaggttgc cagccatcta atgtatcact aaaagagccc ataggagata tttgtgtttt    3420

gttgattaga gccacaacca aaagaaggca acaagagaac cccaacacaa ataataattt    3480

ttatgaataa accttctctc aactcaagta tctatgtaat attatttaag tcgcatcagc    3540

ttgaaacatg cataatttga taacatggta tatctagaag gctatatgtt agaacattca    3600

attaacccac cttagaaata ataatactta gcaagaactc atgcatgtaa caaatttcta    3660

tctttaattt tgatatttaa ttttatcact gaaaaggggg agatagagta tgtgaatatt    3720

gtccaatttg caagctaaat gtttttttaa atgtgatagt tcagttggtt actgattctc    3780

aagtattatc atactattca agagtagagc aagcaataat catatccaaa acagatacaa    3840

agaacttaca tatcatagat aattttaaca tttagaaaca cgaagatgcc tgcccaaccg    3900

cgtgggctac cttcctagtt aatataaata tgtaaaggta taacttaaga ttataattta    3960

tttgatgata aaacaagtat ttatgtatat atatatatat ttaataaaat gaatgatcaa    4020

acgctatacg aaaaatcaac ggcgtcgtgc attttgaaat ggaggaagta tttttttcga    4080

ggtaatcgtt atgtttgagg aaatgtggca tgagttcacc acttgccaac ttggaatata    4140

acacatcgta tcgttagtgt tccatgcact aaaagtctct ttctttcccc tttggaatga    4200

gaacaatata gcttggtaat actgttcatc ttattcgcct ttttcctcct ttggaaaggg    4260

acagttgagc ggtggtctgg tggttacatc taaaacatgc catgagaagc tttggcactg    4320

tgtgtcttgt gcttcaaatg gctcgacatt acaacctaat aaatctgaac actttgttcc    4380

atcttggact tcagagcact ggtacttcag tacatgccca agggtagctt agaagcactc    4440

tgcactcaga acaaggaaag caattaggct ttctccagag gttggttatt atgctagatg    4500

tgtcaatggc aatggaatac ctacatcatg agcactatga ggtggtctta cactacgatt    4560

tgaagcctag caacgtacta tttgacgatg ataggatggc acatgtggca gactttggca    4620

ttgcaaggtt attgttaggt gatgacaact ccatgatctc agctagcatg ccaggaacag    4680

ttgggtacat ggcaccaggt aattagtact agtttttgtt gtcttgctca aacattgcct    4740

gatattttat tattatcgag tagggtgcaa ctaatttttg gttgtctatc tttctgcgca    4800

gagtatgggg ctcttggaaa agcatcacag aagagcgacg tgttcagcta cgggatcatg    4860

ctactcgaag tgttcactag gaagagatcc acagatgtta tgtttgtagg agaactgaac    4920

atcaggcagt gggttcacca ggcgtttcct gcagagcttg tccatttgat ggactgccaa    4980

cttctacagg atggctcttc ttcttcttcc agtaacatgc atggcttcct tgtgccagtg    5040

ttcgagctgg gcttgctctg ctcagctgac tccccggagc aaaggatggc gatgagcgat    5100

gtggtcgtga cactgaagaa gattaggaag gactatgtca aattgatggc aaccacaggg    5160

agcgctgtgc agcaatgatc catcgctctg tcgtggtata tgagcgaata aaatatatat    5220

catttgcatc catttcttct tctgcatcag gaatagcatc agtgcatgcc cagtgatcga    5280

ttaccctatt tgtgtacggt tgaattgaat atatctgtgg tgcttcaggt tcagcaataa    5340

tttagttggt gtaaaaatgt gattgaactg ttggtcaata aatttgcatg atgaaaatgg    5400

gagtagatga tgtgctgctt atgttttctt atttctggcc aaaataaata aaaaaaagaa    5460

tattctgggc acagcatcac aactccggct caatcagcct taaacagcca cagttaacag    5520

tcctaagcat agaaacttaa caagcttttc aggcaaacaa aacatcaaaa ggtccacaag    5580

acaacagggt cttcagggag cacatcttca ggctgtgatg caaaaaggat ctgacagccg    5640

tatgataact actgaacagg tcgtgcatat tgataaggtc cgccactaac cacccaatca    5700

acaaaagagt aaggccgttg ccgtcaaatt gtttgacaga aaaaaaaaat ttcagtgagt    5760

gtatggctga tgaccgagcg acacagctat catatctagc gtgtcgtgca caccgcgatc    5820

tgctgaatat atattttgtg atgactttat tttccagcgt ttacctagta gtgctgccaa    5880

atatttatga ctggaatttg actggaggga gtatcattta agtttctttc actttctgag    5940

agcaacagtc aaggtcgtcc gagatgttga aagcaagcta gcactacgta ctgtgctaaa    6000

taaagctcaa cttgatcgtc actgtgaagt atgatgcact cttgttgcca atgcatcaca    6060

cacaaccaga c atg gcg ctt gga ttg cca gta tgg att ttc att gcg ttg     6110

             Met Ala Leu Gly Leu Pro Val Trp Ile Phe Ile Ala Leu

             1               5                   10

ttg atc gct ttg tcc act gtg cct tgt gct tcc tct cta ggt ccg agc      6158

Leu Ile Ala Leu Ser Thr Val Pro Cys Ala Ser Ser Leu Gly Pro Ser

    15                  20                  25

aac agt agc ggc agt gac acc gac ctc gct gca ctt ttg gct tta aaa    6206

Asn Ser Ser Gly Ser Asp Thr Asp Leu Ala Ala Leu Leu Ala Leu Lys

30                  35                  40                  45

tcg cag ttc tct gat cct gat aac att ctt gcc ggc aac tgg acc att    6254

Ser Gln Phe Ser Asp Pro Asp Asn Ile Leu Ala Gly Asn Trp Thr Ile

                50                  55                  60

ggc acg cca ttc tgc caa tgg atg ggt gtc tcg tgc agc cac cgc cgg    6302

Gly Thr Pro Phe Cys Gln Trp Met Gly Val Ser Cys Ser His Arg Arg

            65                  70                  75

cag cgc gtc acc gcc ctg gaa ctg cca aac gtt cct ctc caa gga gag    6350

Gln Arg Val Thr Ala Leu Glu Leu Pro Asn Val Pro Leu Gln Gly Glu

        80                  85                  90

ctc agc tct cac ctt ggt aac att tct ttt ctc ttg atc ctc aac ctc    6398

Leu Ser Ser His Leu Gly Asn Ile Ser Phe Leu Leu Ile Leu Asn Leu

    95                  100                 105

acc aac acc ggc ctc aca ggc ttg gtg ccg gat tat ata gga agg cta    6446

Thr Asn Thr Gly Leu Thr Gly Leu Val Pro Asp Tyr Ile Gly Arg Leu

110                 115                 120                 125

cgt cgc ctt gag atc ctt gat ctc ggc cac aat gcc ttg tca ggt ggc    6494

Arg Arg Leu Glu Ile Leu Asp Leu Gly His Asn Ala Leu Ser Gly Gly

                130                 135                 140

gtc cca atc gcc ata ggg aac ctc acg agg ctt cag cta ctt aat cta    6542

Val Pro Ile Ala Ile Gly Asn Leu Thr Arg Leu Gln Leu Leu Asn Leu

            145                 150                 155

cag ttt aac cag cta tat ggt cca atc cca gca gag ctg cag ggg ctg    6590

Gln Phe Asn Gln Leu Tyr Gly Pro Ile Pro Ala Glu Leu Gln Gly Leu

        160                 165                 170

cac agt ctt gac agc atg aat ctc cgt cac aat tac ctc act gga tca    6638

His Ser Leu Asp Ser Met Asn Leu Arg His Asn Tyr Leu Thr Gly Ser

    175                 180                 185

att ccg gac aat ctg ttc aac aac aca tct ttg cta act tat ctc aac    6686

Ile Pro Asp Asn Leu Phe Asn Asn Thr Ser Leu Leu Thr Tyr Leu Asn

190                 195                 200                 205

gtt ggt aac aat agc ctg tca gga ccg ata ccg ggt tgc atc ggt tcc    6734

Val Gly Asn Asn Ser Leu Ser Gly Pro Ile Pro Gly Cys Ile Gly Ser

                210                 215                 220

ttg cca atc ctc caa tac ctt aac ttg cag gcc aat aac tta act ggg    6782

Leu Pro Ile Leu Gln Tyr Leu Asn Leu Gln Ala Asn Asn Leu Thr Gly

            225                 230                 235

gcg gtg cca cca gcc atc ttc aac atg tct aaa tta agt act att tct    6830

Ala Val Pro Pro Ala Ile Phe Asn Met Ser Lys Leu Ser Thr Ile Ser

        240                 245                 250

ctt ata tcg aat ggt tta act ggc cct atc cct ggt aat aca agt ttc    6878

Leu Ile Ser Asn Gly Leu Thr Gly Pro Ile Pro Gly Asn Thr Ser Phe

    255                 260                 265

agc ctc cca gtt cta caa tgg ttc gcc atc agt aaa aac aat ttc ttt    6926

Ser Leu Pro Val Leu Gln Trp Phe Ala Ile Ser Lys Asn Asn Phe Phe

270                 275                 280                 285

ggt caa att cca ctg ggg ttc gca gcg tgt cca tac ctc caa gtt att    6974

Gly Gln Ile Pro Leu Gly Phe Ala Ala Cys Pro Tyr Leu Gln Val Ile

                290                 295                 300

gcc ctg cct tat aat tta ttc gag ggt gtt ttg cca cca tgg ctg ggc    7022

Ala Leu Pro Tyr Asn Leu Phe Glu Gly Val Leu Pro Pro Trp Leu Gly

            305                 310                 315

aag ttg acg agt ctt aat acc atc tcc ttg ggt ggg aat aac ctt gat    7070

Lys Leu Thr Ser Leu Asn Thr Ile Ser Leu Gly Gly Asn Asn Leu Asp

        320                 325                 330

gct ggc ccg atc cct act gaa ctt agc aac ctc acc atg ctg gca gtc    7118

Ala Gly Pro Ile Pro Thr Glu Leu Ser Asn Leu Thr Met Leu Ala Val

    335                 340                 345

tta gat ttg acg acg tgc aac ctg aca gga aac atc cct gca gat att    7166

Leu Asp Leu Thr Thr Cys Asn Leu Thr Gly Asn Ile Pro Ala Asp Ile

350                 355                 360                 365

ggg cac cta ggc caa ctt tca tgg ttg cat ctt gcg agg aat caa cta    7214

Gly His Leu Gly Gln Leu Ser Trp Leu His Leu Ala Arg Asn Gln Leu

                370                 375                 380

aca gga cct att cct gct tct ctt ggc aac ctt tca tcg tta gca atc    7262

Thr Gly Pro Ile Pro Ala Ser Leu Gly Asn Leu Ser Ser Leu Ala Ile

            385                 390                 395

ctg cta ttg aaa gga aac ttg ttg gat gga tca tta cca gcg aca gtt    7310

Leu Leu Leu Lys Gly Asn Leu Leu Asp Gly Ser Leu Pro Ala Thr Val

        400                 405                 410

gat agc atg aac tca cta act gca gtt gat gtt act gaa aac aat cta    7358

Asp Ser Met Asn Ser Leu Thr Ala Val Asp Val Thr Glu Asn Asn Leu

    415                 420                 425

cac gga gat ctc aac ttc ctt tct act gtt tcc aat tgt aga aag ctt    7406

His Gly Asp Leu Asn Phe Leu Ser Thr Val Ser Asn Cys Arg Lys Leu

430                 435                 440                 445

tct acc ctt caa atg gac ttt aat tat gtc acc gga agc ctc cca gac    7454

Ser Thr Leu Gln Met Asp Phe Asn Tyr Val Thr Gly Ser Leu Pro Asp

                450                 455                 460

tat gtt ggg aac ctg tcg tca cag ctg aaa tgg ttc acg tta tct aac    7502

Tyr Val Gly Asn Leu Ser Ser Gln Leu Lys Trp Phe Thr Leu Ser Asn

            465                 470                 475

aac aag tta act ggc acg ctt cca gct acc att tca aat tta act ggt    7550

Asn Lys Leu Thr Gly Thr Leu Pro Ala Thr Ile Ser Asn Leu Thr Gly

        480                 485                 490

ctt gag gtg ata gat ctt tcg cat aac caa ctg cgc aat gca att cca    7598

Leu Glu Val Ile Asp Leu Ser His Asn Gln Leu Arg Asn Ala Ile Pro

    495                 500                 505

gaa tca atc atg acg att gag aat ctc caa tgg ctt gac cta agt gga    7646

Glu Ser Ile Met Thr Ile Glu Asn Leu Gln Trp Leu Asp Leu Ser Gly

510                 515                 520                 525

aat agc ttg tct ggc ttc atc cca tcg aat act gca ctt cta agg aac    7694

Asn Ser Leu Ser Gly Phe Ile Pro Ser Asn Thr Ala Leu Leu Arg Asn

                530                 535                 540

att gta aaa cta ttc ctt gaa agc aac gaa att tct ggc tcc ata cca    7742

Ile Val Lys Leu Phe Leu Glu Ser Asn Glu Ile Ser Gly Ser Ile Pro

            545                 550                 555

aag gac atg aga aac ctc act aat cta gag cac ctt cta ttg tct gat    7790

Lys Asp Met Arg Asn Leu Thr Asn Leu Glu His Leu Leu Leu Ser Asp

        560                 565                 570

aac caa tta acg tca acc gtg cca cca agc tta ttt cat ctt gat aaa    7838

Asn Gln Leu Thr Ser Thr Val Pro Pro Ser Leu Phe His Leu Asp Lys

    575                 580                 585

atc atc agg cta gat ctt tct cga aac ttc ttg agt ggt gca ctg ccg    7886

Ile Ile Arg Leu Asp Leu Ser Arg Asn Phe Leu Ser Gly Ala Leu Pro

590                 595                 600                 605

gtt gat gta ggg tac ttg aag caa att acc atc ata gat ctc tct gac    7934

Val Asp Val Gly Tyr Leu Lys Gln Ile Thr Ile Ile Asp Leu Ser Asp

                610                 615                 620

aac agc ttt tct ggc agc atc cca gat tcg ata gga gaa ctt caa atg    7982

Asn Ser Phe Ser Gly Ser Ile Pro Asp Ser Ile Gly Glu Leu Gln Met

            625                 630                 635

tta aca cac ctg aat cta tca gct aac gaa ttc tat gat tct gtt cca    8030

Leu Thr His Leu Asn Leu Ser Ala Asn Glu Phe Tyr Asp Ser Val Pro

        640                 645                 650

gac tct ttt ggt aat tta act ggc ttg caa act ttg gac ata tcc cat    8078

Asp Ser Phe Gly Asn Leu Thr Gly Leu Gln Thr Leu Asp Ile Ser His

    655                 660                 665

aac agt att tct ggt acc atc cca aac tac ttg gct aat ttt acg acc    8126

Asn Ser Ile Ser Gly Thr Ile Pro Asn Tyr Leu Ala Asn Phe Thr Thr

670                 675                 680                 685

ctt gtt agc ttg aac cta tct ttc aat aaa cta cat ggt caa ata ccg    8174

Leu Val Ser Leu Asn Leu Ser Phe Asn Lys Leu His Gly Gln Ile Pro

                690                 695                 700

gaa gga ggt atc ttt gca aac atc act tta caa tac ttg gtg ggg aac    8222

Glu Gly Gly Ile Phe Ala Asn Ile Thr Leu Gln Tyr Leu Val Gly Asn

            705                 710                 715

tca ggg cta tgt ggt gct gcc cgt tta gga ttc cca cca tgc caa acc    8270

Ser Gly Leu Cys Gly Ala Ala Arg Leu Gly Phe Pro Pro Cys Gln Thr

        720                 725                 730

acc tcc ccc aag aga aat ggt cac atg cta aaa tac ttg cta ccg act    8318

Thr Ser Pro Lys Arg Asn Gly His Met Leu Lys Tyr Leu Leu Pro Thr

    735                 740                 745

ata atc ata gta gtt gga gtt gta gct tgt tgc ttg tat gta atg att    8366

Ile Ile Ile Val Val Gly Val Val Ala Cys Cys Leu Tyr Val Met Ile

750                 755                 760                 765

aga aag aaa gct aac cat caa aag att tct gct ggt atg gct gac ctt    8414

Arg Lys Lys Ala Asn His Gln Lys Ile Ser Ala Gly Met Ala Asp Leu

                770                 775                 780

atc agc cat caa ttt ctg tcc tat cat gag ctt ctt cgt gca acc gat    8462

Ile Ser His Gln Phe Leu Ser Tyr His Glu Leu Leu Arg Ala Thr Asp

            785                 790                 795

gat ttc agt gat gat aac atg ttg ggc ttc gga agc ttt gga aaa gtt    8510

Asp Phe Ser Asp Asp Asn Met Leu Gly Phe Gly Ser Phe Gly Lys Val

        800                 805                 810

ttt aag gga cag ttg agc aac ggt atg gtg gtt gcc ata aaa gtt ata    8558

Phe Lys Gly Gln Leu Ser Asn Gly Met Val Val Ala Ile Lys Val Ile

    815                 820                 825

cac cag cat ctg gaa cat gcc atg aga agc ttt gac acc gag tgt cgt    8606

His Gln His Leu Glu His Ala Met Arg Ser Phe Asp Thr Glu Cys Arg

830                 835                 840                 845

gta ctc cga att gct cga cat cgt aac ctg ata aag att ctg aac act    8654

Val Leu Arg Ile Ala Arg His Arg Asn Leu Ile Lys Ile Leu Asn Thr

                850                 855                 860

tgt tcc aac ctg gac ttc aga gca ctc gta ctt cag tac atg ccc aag    8702

Cys Ser Asn Leu Asp Phe Arg Ala Leu Val Leu Gln Tyr Met Pro Lys

            865                 870                 875

ggt agc tta gaa gca ctc ctg cac tca gaa caa gga aag caa tta ggc    8750

Gly Ser Leu Glu Ala Leu Leu His Ser Glu Gln Gly Lys Gln Leu Gly

        880                 885                 890

ttt ctc aag agg ttg gat att atg cta gat gtg tca atg gca atg gaa    8798

Phe Leu Lys Arg Leu Asp Ile Met Leu Asp Val Ser Met Ala Met Glu

    895                 900                 905

tac ctg cat cat gag cac tat gag gtg gtc tta cac tgc gat ttg aag    8846

Tyr Leu His His Glu His Tyr Glu Val Val Leu His Cys Asp Leu Lys

910                 915                 920                 925

cct agc aac gta cta ttt gac gat gat atg acg gca cat gtg gca gac    8894

Pro Ser Asn Val Leu Phe Asp Asp Asp Met Thr Ala His Val Ala Asp

                930                 935                 940

ttt ggc att gca agg ttg ttg tta ggt gat gac aac tcc atg atc tca    8942

Phe Gly Ile Ala Arg Leu Leu Leu Gly Asp Asp Asn Ser Met Ile Ser

            945                 950                 955

gct agc atg cca gga aca gtt ggg tac atg gca cca g gtacttagta       8989

Ala Ser Met Pro Gly Thr Val Gly Tyr Met Ala Pro

        960                 965

ctagtttttg ttgtcttgct caagcattgc ctgatctttt attattatca agtagggtgc  9049

gactaatttt tggtaactaa cttttcttga gcag ag  tat ggg gct cta gga aag  9103

                                      Glu Tyr Gly Ala Leu Gly Lys

                                                          975

gcg tca cgg aag agc gat gtg ttc agt tac ggg atc atg ttg ttt gaa    9151

Ala Ser Arg Lys Ser Asp Val Phe Ser Tyr Gly Ile Met Leu Phe Glu

            980                 985                 990

gtg ttc act ggg aag aga ccc aca  gat gct atg ttt gtg  gga gaa ctg    9199

Val Phe Thr Gly Lys Arg Pro Thr  Asp Ala Met Phe Val  Gly Glu Leu

        995                 1000                 1005

aac atc  agg cag tgg gtt cac  cag gcg ttt cct gca  gag ctt gtc       9244

Asn Ile  Arg Gln Trp Val His  Gln Ala Phe Pro Ala  Glu Leu Val

    1010                 1015                 1020

cat gtg  gtg gac tgc caa ctt  cta cat gat ggc tct  tct tcc agt       9289

His Val  Val Asp Cys Gln Leu  Leu His Asp Gly Ser  Ser Ser Ser

    1025                 1030                 1035

aac atg  cat ggc ttc cat gtg  cca gtg ttc gag ctg  ggc ttg ctc       9334

Asn Met  His Gly Phe His Val  Pro Val Phe Glu Leu  Gly Leu Leu

    1040                 1045                 1050

tgc tca  gct gac tcc ccg gag  caa agg atg gcg atg  agc gat gtg       9379

Cys Ser  Ala Asp Ser Pro Glu  Gln Arg Met Ala Met  Ser Asp Val

    1055                 1060                 1065

gtc gtg  aca ctg aag aag att  agg aag gac tat gtc  aaa ttg atg       9424

Val Val  Thr Leu Lys Lys Ile  Arg Lys Asp Tyr Val  Lys Leu Met

    1070                 1075                 1080

gca acc  aca gag aac gct gtg  cag cag tgattcatca ctttcttgtg          9471

Ala Thr  Thr Glu Asn Ala Val  Gln Gln

    1085                 1090

gtatatgagc gaatgaaatg tatatccttt gcatccattt cttcttctgc attaggaaca    9531

gcatcaatgc atgcccagtg atcgaataac ccttttgctt ctatttgtgt atggttgaat    9591

tgaatatatc tacggtgctt caggttcagc aacaatttag ttggtgtaaa aatgtgattg    9651

aactgctggt cgataaattt gcatcatgaa aatgaaaatg ggagtagatg atgtgctgct    9711

tatattttct atttctggcc aaatatatat aaaaaaggat attctcactt gaaaacagaa    9771

tgaggtttgc tttgtagaca ttgggccttt gtcgtgggct tcactggtac cctgacatgc    9831

tttatagccc atgggcctat gtttgtaatg ggcttttgtt tctttcgaat gactcaaggt    9891

atattaaggc ctgtttgaac acttcggaat attttgcggt ggtagaggtg gacactaaac    9951

gacgacatag gtaaaatgat atatagaaac aaaattaatt caaacgatat actcatgcta    10011

taaatttgag atatggtaat taataaaact tcacataggc gacgaaccgt atatataaca    10071

gttaatgcat aataatggca gagatttcgt aatgaatcct ccaagattta ctcttgcgac    10131

tctatataaa cagctgcaaa atgaagctag gtagtcagca tatgcagtag cttccttcta    10191

aaagaagatc tctcatctca tcatggagca acttctcaac aagaaggctg cagtgttctt    10251

gttcatagct cttatggtga tggctaccgt aaatttctca tcctgtcata ctacacaagg    10311

tatatacctc tggaattaat ttctgcatca catccatata tattgaaaac agtttaactt    10371

gttctctttt gcaatggctc catcacatca atgaagctag aataatctga tatagcctga    10431

caagtatatg tgcattttac attttctgta tgaactattt tagctttctg taaaagtcgg    10491

gtcattaaca atataatgat cttttctcta aaaacatgca ttttacatgt gtatatatat    10551

aggtggatat ggagaaatgg attcgtgcat ggtccttgaa cgttgcgata tgaacaagtg    10611

catgagtgcc tgccaagtca acaagtacaa cggaggtcag tgcgacggcg agttgaacga    10671

ccactgctgc tgtactgatg aggccccgca caaatagtag atttctcttg tccaaatcaa    10731

cgacgacggt tgtataatca acggcaatct tattattgac tgatgcagag attccataat    10791

aaacttgcag ttgatgcttg taccaattca ctcagtatgt caattagtaa aaggagaatc    10851

ccgcgcaaat gtgcgggcaa cttatttatt ctttattaaa agaataaatt ttatttaaag    10911

actatagatt atcttatgtc attaaaaaag aaatatctct accctgaaat tgaccataga    10971

ctttgataca ctaaagtaac ttataagaat atctctcata ttaaaaaaga tcactatgtc    11031

ttggttatat ataaactttc ctatcacaac tacttattat tctctcgaaa aagctaagta    11091

tgtttttaat agatagaatt gcttattaaa aaacaaacat aatacatcat taatgcaata    11151

aaaaaatcat ctctatttca ttccgaagtg cacatgtctc acttgtgtct gaatgtataa    11211

atatttaaaa atgccgtttc tgtcaattaa tgaaagaaaa ccattaaaat tagatataaa    11271

tacccatata atgtgtgaag ttggtcatag ctgctaaggc tttattctct aatgccttga    11331

aacatgggtc ctgcattgac gtagccgtgc ccctcaagac tacgtcgatc ataattttga    11391

cacctagctc actctctaca catttataaa gaattgtatt agtaagtagg ctagttgagc    11451

tctacctcca agagtgaaag aagtcatagg ggattcgatg gactgatcct atgtatgtgt    11511

gtacaaacat aataacattt tagttttaaa tttgaggatt tggagggaaa gattaatatt    11571

ttttcaattg tacatgcata catatatttt tttctagggt tttggatgaa cagtacttat    11631

ttttctgtgg tagtggtact tacatgggag attaacaggg aaggatcact ttaatacatc    11691

taatctaata ttttaaaata atgggtatat tggtttaagt ataaatcaat ggtagatgtt    11751

ttgctttttt ctcatatttt tttatatttt caccaattta ttagagcatc aggttgttgc    11811

cttaggagcg tttgtagaga ttaggtggga gtgattagtt taacagatct aatctaataa    11871

ttaaaaatat tgggtcaacc catttaagta taatcaatcg ctagatgttt tacttttttg    11931

ttaggatttc ttggattttt tctaatttat tagagcacca tgtgatggtt taagattgtt    11991

tgtagcagtg ccacatggtg gcttagaagc gtttgtatga ttttcaatgg acttttaata    12051

tataataata tttttgtctc aatgattggt ggatagcact gcatatgtag aattgataca    12111

tgagtttgag tctgacataa aattaacaca taaggtaaga catgcatgag tcaaatacat    12171

tggatcttat ttattatata cccagattaa cttaagttta aactgcagag actgaagaga    12231

aaaagatcaa catatatgcc tcctattact cttaattaag acatatcgat ccggttcatt    12291

taatcattta ttttctatag tcctttacaa tatatctaga tttatattac tgtgataatt    12351

gatattttaa agcgaagata atatttttta atggtaatca caattagagt attttagttt    12411

ggaacattgt agattgcttt aaatattaaa gttatgatga tgtcaatcat gaaagattta    12471

agtaaagtta ttttgttttg tgaaaaataa tattgtttta acatataaat attttagaac    12531

agtggtatta ttttttggga gtgctaatca aaactaatta gaatatttta ttttgtgata    12591

ttattgagct aatctaatta tgcatgattg tgaaatgata tatgatgata tgatctacat    12651

tatctatttt cttcacaacc ttttttattg ttgggatgac atgcaaaagg ttagggtatg    12711

atttaaaata ctagagggaa tattttttgg aacgtcactc acgatttaag tgtttttgtt    12771

ttttcatatc tatcatattt aatttatttg tgcatgtttt ataaagtgat atatgatcat    12831

ataatatacg ttgtcatttt ttgtatttaa cagcttcaat tgcatactaa ggttaggatg    12891

tgataaaaat taaatatttt ttatgagtta aagaatgtag tggcttatat gggtatttga    12951

atggttaatt aagcttcatg aatacaatta taaagaatga taaaaagatt tatgtgcact    13011

agaggagggg gagggggagg gggaggggaa ggggggtggg ttggtggggg agaggggagg    13071

gaggtgtatt gtggggtttt ttttaaaaaa ataaatctaa tagataaata tagtgggcct    13131

accgatctaa tagataaaaa tagtaggcct accgatttat tagagagtca tatggcaact    13191

tagaagcatt tatagaagcc ccacgtgacg gcttgagaat gtttagtaga agtttaatgg    13251

actagggtaa tagctagtgt gtttatcttc atgaaatctt catcggctgc ttctagtaat    13311

ttgctttaga catgttaaaa taggccgatg agattagatc tgtttcaatt tatttattat    13371

cttgagtaag ccgatacagc tttgccctat cggctgggtt ataacaatgt gtcatcggct    13431

tatcggccga tcgaccattg ttttctgata tggtttactt gtttcttgtt gattgcagat    13491

caaatcaact ggcacgctct gcgtacgact aggcaagcca atttggacct gcactggagt    13551

taagcagatc tcccagaccg ccgtggtaac gcggaacccg ttttgttgct agacgggtcc    13611

aaattctgcg ccaacaaacc ccaagtacta aagcaacacc cg                       13653

<210>2

<211>1092

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>2

Met Ala Leu Gly Leu Pro Val Trp Ile Phe Ile Ala Leu Leu Ile Ala

1               5                   10                  15

Leu Ser Thr Val Pro Cys Ala Ser Ser Leu Gly Pro Ser Asn Ser Ser

            20                  25                  30

Gly Ser Asp Thr Asp Leu Ala Ala Leu Leu Ala Leu Lys Ser Gln Phe

        35                  40                  45

Ser Asp Pro Asp Asn Ile Leu Ala Gly Asn Trp Thr Ile Gly Thr Pro

    50                  55                  60

Phe Cys Gln Trp Met Gly Val Ser Cys Ser His Arg Arg Gln Arg Val

65                  70                  75                  80

Thr Ala Leu Glu Leu Pro Asn Val Pro Leu Gln Gly Glu Leu Ser Ser

                85                  90                  95

His Leu Gly Asn Ile Ser Phe Leu Leu Ile Leu Asn Leu Thr Asn Thr

            100                 105                 110

Gly Leu Thr Gly Leu Val Pro Asp Tyr Ile Gly Arg Leu Arg Arg Leu

        115                 120                 125

Glu Ile Leu Asp Leu Gly His Asn Ala Leu Ser Gly Gly Val Pro Ile

    130                 135                 140

Ala Ile Gly Asn Leu Thr Arg Leu Gln Leu Leu Asn Leu Gln Phe Asn

145                 150                 155                 160

Gln Leu Tyr Gly Pro Ile Pro Ala Glu Leu Gln Gly Leu His Ser Leu

                165                 170                 175

Asp Ser Met Asn Leu Arg His Asn Tyr Leu Thr Gly Ser Ile Pro Asp

            180                 185                 190

Asn Leu Phe Asn Asn Thr Ser Leu Leu Thr Tyr Leu Asn Val Gly Asn

        195                 200                 205

Asn Ser Leu Ser Gly Pro Ile Pro Gly Cys Ile Gly Ser Leu Pro Ile

    210                 215                 220

Leu Gln Tyr Leu Asn Leu Gln Ala Asn Asn Leu Thr Gly Ala Val Pro

225                 230                 235                 240

Pro Ala Ile Phe Asn Met Ser Lys Leu Ser Thr Ile Ser Leu Ile Ser

                245                 250                 255

Asn Gly Leu Thr Gly Pro Ile Pro Gly Asn Thr Ser Phe Ser Leu Pro

            260                 265                 270

Val Leu Gln Trp Phe Ala Ile Ser Lys Asn Asn Phe Phe Gly Gln Ile

        275                 280                 285

Pro Leu Gly Phe Ala Ala Cys Pro Tyr Leu Gln Val Ile Ala Leu Pro

    290                 295                 300

Tyr Asn Leu Phe Glu Gly Val Leu Pro Pro Trp Leu Gly Lys Leu Thr

305                 310                 315                 320

Ser Leu Asn Thr Ile Ser Leu Gly Gly Asn Asn Leu Asp Ala Gly Pro

                325                 330                 335

Ile Pro Thr Glu Leu Ser Asn Leu Thr Met Leu Ala Val Leu Asp Leu

            340                 345                 350

Thr Thr Cys Asn Leu Thr Gly Asn Ile Pro Ala Asp Ile Gly His Leu

        355                 360                 365

Gly Gln Leu Ser Trp Leu His Leu Ala Arg Asn Gln Leu Thr Gly Pro

    370                 375                 380

Ile Pro Ala Ser Leu Gly Asn Leu Ser Ser Leu Ala Ile Leu Leu Leu

385                 390                 395                 400

Lys Gly Asn Leu Leu Asp Gly Ser Leu Pro Ala Thr Val Asp Ser Met

                405                 410                 415

Asn Ser Leu Thr Ala Val Asp Val Thr Glu Asn Asn Leu His Gly Asp

            420                 425                 430

Leu Asn Phe Leu Ser Thr Val Ser Asn Cys Arg Lys Leu Ser Thr Leu

        435                 440                 445

Gln Met Asp Phe Asn Tyr Val Thr Gly Ser Leu Pro Asp Tyr Val Gly

    450                 455                 460

Asn Leu Ser Ser Gln Leu Lys Trp Phe Thr Leu Ser Asn Asn Lys Leu

465                 470                 475                 480

Thr Gly Thr Leu Pro Ala Thr Ile Ser Asn Leu Thr Gly Leu Glu Val

                485                 490                 495

Ile Asp Leu Ser His Asn Gln Leu Arg Asn Ala Ile Pro Glu SerIle

            500                 505                 510

Met Thr Ile Glu Asn Leu Gln Trp Leu Asp Leu Ser Gly Asn Ser Leu

        515                 520                 525

Ser Gly Phe Ile Pro Ser Asn Thr Ala Leu Leu Arg Asn Ile Val Lys

    530                 535                 540

Leu Phe Leu Glu Ser Asn Glu Ile Ser Gly Ser Ile Pro Lys Asp Met

545                 550                 555                 560

Arg Asn Leu Thr Asn Leu Glu His Leu Leu Leu Ser Asp Asn Gln Leu

                565                 570                 575

Thr Ser Thr Val Pro Pro Ser Leu Phe His Leu Asp Lys Ile Ile Arg

            580                 585                 590

Leu Asp Leu Ser Arg Asn Phe Leu Ser Gly Ala Leu Pro Val Asp Val

        595                 600                 605

Gly Tyr Leu Lys Gln Ile Thr Ile Ile Asp Leu Ser Asp Asn Ser Phe

    610                 615                 620

Ser Gly Ser Ile Pro Asp Ser Ile Gly Glu Leu Gln Met Leu Thr His

625                 630                 635                 640

Leu Asn Leu Ser Ala Asn Glu Phe Tyr Asp Ser Val Pro Asp Ser Phe

                645                 650                 655

Gly Asn Leu Thr Gly Leu Gln Thr Leu Asp Ile Ser His Asn Ser Ile

            660                 665                 670

Ser Gly Thr Ile Pro Asn Tyr Leu Ala Asn Phe Thr Thr Leu Val Ser

        675                 680                 685

Leu Asn Leu Ser Phe Asn Lys Leu His Gly Gln Ile Pro Glu Gly Gly

    690                 695                 700

Ile Phe Ala Asn Ile Thr Leu Gln Tyr Leu Val Gly Asn Ser Gly Leu

705                 710                 715                 720

Cys Gly Ala Ala Arg Leu Gly Phe Pro Pro Cys Gln Thr Thr Ser Pro

                725                 730                 735

Lys Arg Asn Gly His Met Leu Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ile Ile Ile

            740                 745                 750

Val Val Gly Val Val Ala Cys Cys Leu Tyr Val Met Ile Arg Lys Lys

        755                 760                 765

Ala Asn His Gln Lys Ile Ser Ala Gly Met Ala Asp Leu Ile Ser His

    770                 775                 780

Gln Phe Leu Ser Tyr His Glu Leu Leu Arg Ala Thr Asp Asp Phe Ser

785                 790                 795                 800

Asp Asp Asn Met Leu Gly Phe Gly Ser Phe Gly Lys Val Phe Lys Gly

                805                 810                 815

Gln Leu Ser Asn Gly Met Val Val Ala Ile Lys Val Ile His Gln His

            820                 825                 830

Leu Glu His Ala Met Arg Ser Phe Asp Thr Glu Cys Arg Val Leu Arg

        835                 840                 845

Ile Ala Arg His Arg Asn Leu Ile Lys Ile Leu Asn Thr Cys Ser Asn

    850                 855                 860

Leu Asp Phe Arg Ala Leu Val Leu Gln Tyr Met Pro Lys Gly Ser Leu

865                 870                 875                 880

Glu Ala Leu Leu His Ser Glu Gln Gly Lys Gln Leu Gly Phe Leu Lys

                885                 890                 895

Arg Leu Asp Ile Met Leu Asp Val Ser Met Ala Met Glu Tyr Leu His

            900                 905                 910

His Glu His Tyr Glu Val Val Leu His Cys Asp Leu Lys Pro Ser Asn

        915                 920                 925

Val Leu Phe Asp Asp Asp Met Thr Ala His Val Ala Asp Phe Gly Ile

    930                 935                 940

Ala Arg Leu Leu Leu Gly Asp Asp Asn Ser Met Ile Ser Ala Ser Met

945                 950                 955                 960

Pro Gly Thr Val Gly Tyr Met Ala Pro Glu Tyr Gly Ala Leu Gly Lys

                965                 970                 975

Ala Ser Arg Lys Ser Asp Val Phe Ser Tyr Gly Ile Met Leu Phe Glu

            980                 985                 990

Val Phe Thr Gly Lys Arg Pro Thr  Asp Ala Met Phe Val  Gly Glu Leu

        995                 1000                 1005

Asn Ile  Arg Gln Trp Val His  Gln Ala Phe Pro Ala  Glu Leu Val

    1010                 1015                 1020

His Val  Val Asp Cys Gln Leu  Leu Hi s Asp Gly Ser  Ser Ser Ser

    1025                 1030                 1035

Asn Met  His Gly Phe His Val  Pro Val Phe Glu Leu  Gly Leu Leu

    1040                 1045                 1050

Cys Ser  Ala Asp Ser Pro Glu  Gln Arg Met Ala Met  Ser Asp Val

    1055                 1060                 1065

Val Val  Thr Leu Lys Lys Ile  Arg Lys Asp Tyr Val  Lys Leu Met

    1070                 1075                 1080

Ala Thr  Thr Glu Asn Ala Val  Gln Gln

    1085                 1090

Claims (1)

1.一种分离的对白叶枯病产生抗性的基因Xa3/Xa26-3，它的核苷酸序列如序列表SEQID NO：1所示。

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