CN101878737A - 五味子组织培养的方法 - Google Patents

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Abstract

五味子组织培养的方法，由外植体采集及灭菌，切段与接种，培养基的灭菌，初代培养，继代培养，生根培养，移入苗圃程序组成，其特征是1/2B5为基本培养基，1/2B5+BA0.1～0.6mg/L+NAA0.01～0.06mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L为诱导、增生培养基；采用瓶内或外生根培养，瓶内生根时，以WPM为基本培养基，以WPM+NAA0.2mg/L+蔗糖15g/L+琼脂9g/L为生根培养基；瓶外生根时，以珍珠岩和草炭为基质，上层珍珠岩3～4厘米厚，下层草炭5厘米厚，幼苗基部用300～500mg/L吲哚丁酸浸沾后扦插到基质中，温度控制在26～28℃，瓶外生根25～45天。

Description

五味子组织培养的方法
技术领域
本发明属于用组织培养方法繁育五味子苗木技术。
背景技术
五味子[Schisandra chinensis(Turcz)Baill]是主产于我国东北的常用名贵中药材。由于野生资源逐年减少而社会需求逐年增加，五味子种植业悄然兴起。可靠的繁殖方法是许多种植物得以推广的先决条件。
植物的繁殖方法可分为两大类，即有性繁殖和无性繁殖。有性繁殖的后代具有双亲的遗传特性，有较强的生命力与变异性；无性繁殖因能稳定地保持原品种的特性和特征，一致性强，对果实类木本药用植物而言是培育生产用苗的主要方法。
国内一些科技工作者做了大量工作，如周鑫五味子组织培养，中国林副特产，第6～7页，2001年第4期；朱俊义北五味子愈伤的诱导，东北林业大学学报，第34卷第6期，2006年11月；陈雅君药用植物北五味子的组织培养，植物研究，第318～322页，第19卷第3期，1999年7月，均对五味子组织培养诱导增生培养基、生根培养基进行了研究并取得了成果。但仍然适应不了规模化繁育良种苗木的需要。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术存在的问题，提供一种五味子组织培养的方法，以满足五味子良种苗木快速繁育的需要。
本发明的技术方案是：一种五味子组织培养的方法，由外植体采集，外植体灭菌，切段与接种，培养基的灭菌，初代培养，继代培养，生根培养，移入苗圃程序组成，其特征是：以1/2B5为基本培养基，以1/2B5+BA0.1～0.6mg/L+NAA0.01～0.06mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L为诱导、增生培养基，用于初代和继代培养；生根培养于瓶内或瓶外进行。瓶内生根时，以WPM为基本培养基，以WPM+NAA0.2mg/L+蔗糖15g/L+琼脂9g/L为生根培养基；瓶外生根时，以珍珠岩和草炭为基质，上层为珍珠岩3～4厘米厚，下层为草炭5厘米厚；瓶外生根，幼苗基部用300～500mg/L吲哚丁酸浸沾后扦插到基质中，温度控制在26～28℃，瓶外生根时间25～45天。
本发明经过40多种培养基试验，确定1/2B5为基本培养基，1/2B5+BA0.1-0.6mg/L+NAA0.01-0.06mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L为诱导、增生培养基，与同类研究相比研究相比，接种后侧芽萌发时间缩短5～10天，诱导率提高10％，增值系数提高1.9～2.5倍，幼苗生长时间缩短了5～10天，大大提高了繁殖效率；在组培幼苗生根研究中，确定WPM为基本培养基，提出WPM+NAA0.2mg/L+蔗糖15g/L+琼脂9g/L为最佳生根培养基，幼苗生根率达到96.4％，与前人研究结果相比，生根率提高6.4％；首次以珍珠岩和草炭为基质(上层为珍珠岩3-4厘米厚，下层为草炭5厘米厚)进行了瓶外生根试验，幼苗基部用300-500mg/L吲哚丁酸浸沾后扦插到基质中，温度控制在26-28度，瓶外生根时间25-45天，生根率达到94.2％。
为使五味子大面积栽培健康发展，满足生产对良种苗木的大量需求，经过试验培养筛选出适宜的诱导、增生和生根培养基，为实现五味子试管苗工厂化生产奠定了好基础。新选育的单株或新引进的良种，利用试管繁殖，可在短期内提供大量的无性系苗木，以满足生产上的需要。利用此项技术用1个五味子芽1年内可繁殖40万株苗，由此可见其应用前景十分广阔。本研究目的在于探索五味子离体快繁的有效途径，以便建立快速高效的五味子离体快繁技术体系。
具体实施方式
一种五味子组织培养的方法，有外植体采集：选晴天上午9:00-11:00，从健康植株上部剪取腋芽发育良好的一年生带芽枝条，剪去叶片，留1厘米长叶柄，将枝条剪成5厘米长的带芽茎段，放入垫有湿布的容器中备用；外植体灭菌：将剪好的外植体放入容器中，用洗洁精漂洗15分钟，注意不要损伤腋芽，冲洗干净，放入容器中用自来水冲洗6-8小时，取出放入4℃冰箱备用，接种时先用75％酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗5次，再用0.3％氯化汞(升汞)浸泡5分钟，浸泡过程摇晃使外植体上气泡溢出，与消毒液充分接触，最后用无菌水彻底冲洗干净，放入无菌容器备用；切段与接种：经外植体灭菌后，切成长度约1.5厘左右的小段，腋芽居中，留0.7厘米长叶柄，每段至少有1个芽，置于无菌培养皿内，用无菌滤纸吸去表面水分，移到超净工作台(市场购进)上无菌容器中，按无菌操作要求接种于培基上，每个100毫升三角瓶内放置4～5段；培养基的灭菌：对装入三角瓶的培养基，用0.1MPa热压灭菌20分钟；培养条件：将接种后的三角瓶置于温度25～28℃、光照强度2000勒克斯的培养室，光照时间每天为12小时；初代培养：接种后20天左右，叶腋处有腋芽萌发，待芽长至1厘米左右时把芽从茎段上切下，接种于继代培养基中，当新芽长至4～5厘米时，进行继代培养；继代培养：把初代培养产生的芽苗切成带腋芽茎段，根据腋芽发育情况接入相应培养基进行继代扩增培养；生根培养：当苗高2～2.5厘米时，转入生根培养基，待苗基部长出数条粗壮短根时，逐渐开瓶锻炼3天，然后移入营养钵中，湿度保持90％；移入苗圃：幼苗长到6厘米以上时，带土坨移入苗圃，移入苗圃应在当地终霜期过后进行，其特征是本发明以1/2B5为基本培养基，1/2B5+BA0.1～0.6mg/L+NAA0.01～0.06mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L为诱导、增生培养基，用于初代和继代培养；组培幼苗生根，采用瓶内或瓶外生根培养，瓶内生根，确定WPM为基本培养基，以WPM+NAA0.2mg/L+蔗糖15g/L+琼脂9g/L为生根培养基；瓶外生根培养时，本发明首次以珍珠岩和草炭为基质，上层为珍珠岩3～4厘米厚，下层为草炭5厘米厚；进行了瓶外生根试验，幼苗基部用300～500mg/L吲哚丁酸浸沾后扦插到基质中，温度控制在26～28℃，瓶外生根时间25～45天，生根率达到942％。
通过表1、2、3、4中的数据的比较，进一步表明本发明具有突出的实质性特点和显著的进步、积极的效果。
表1用于比较的诱导增生培养基种类
  技术来源   诱导、增生培养基
  陈雅君   MS+BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+ZT0.1mg/L LH+蔗糖30g/L+琼脂9g/L
  朱俊义   MS+BA.2mg/L+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂9g/L
  周鑫   MS+BA0.1-0.2mg/L+NAA0.01-0.02mg/L++蔗糖30g/L+琼脂9g/L
  本发明   1/2B5+BA0.1-0.6mg/L+NAA0.01-0.06mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
表2诱导增生培养使用效果的比较
  技术来源   接种后侧芽萌发时间   诱导率   增值系数  苗2厘米生长时间
  陈雅君   20-30天   90％   3.0-4.5   50-60天
  朱俊义   20-30天   90％   3.2-4.5   50-60天
  周鑫   20-30天   90％   3.2-4.5   50-60天
  本发明   15-20天   100％   5.5-6.4   40-50天
表3用于比较的生根培养基种类
  技术来源   五味子组织培养生根培养基
  陈雅君   MS+IBA2mg/L+LH 1000mg/L+蔗糖15g/L+琼脂9g/L
  朱俊义   MS+IBA2mg/L+蔗糖15g/L+琼脂9g/L
  周鑫   MS+BA02mg/L+蔗糖15g/L+琼脂9g/L
  本发明   WPM+NAA0.2mg/L+蔗糖15g/L+琼脂9g/L
表4生根培养基使用效果的比较
  幼苗生根时间   生根率   瓶外生根时间   生根率
  陈雅君   25-50天   90％
  朱俊义   25-50天   90％
  幼苗生根时间   生根率   瓶外生根时间   生根率
  周鑫   25-50天   90％
  本发明   25-50天   96.4％   25-45天   94.2％
随着五味子基地建设规模的不断扩大，良种匮乏、繁殖技术短缺，严重制约产业化基地建设的水平。本发明对推进五味子科技产业化基地建设健康发展具有十分重要的现实和长远意义。

Claims (1)

1.一种五味子组织培养的方法，由外植体采集，外植体灭菌，切段与接种，培养基的灭菌，初代培养，继代培养，生根培养，移入苗圃程序组成，其特征是以1/2B5为基本培养基，以1/2B5+BA0.1～0.6mg/L+NAA0.01～0.06mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L为诱导、增生培养基，用于初代培养和继代培养；生根培养于瓶内或瓶外进行，瓶内生根时，以WPM为基本培养基，以WPM+NAA0.2mg/L+蔗糖15g/L+琼脂9g/L为生根培养基；瓶外以珍珠岩和草炭为基质，上层为珍珠岩3～4厘米厚，下层为草炭5厘米厚；瓶外生根，幼苗基部用300～500mg/L吲哚丁酸浸沾后扦插到基质中，温度控制在26～28℃，瓶外生根时间25～45天。
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