CN101878228A - 尼古丁特异性人单克隆抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及重组产生的特异性结合尼古丁的人单克隆抗体，以及编码它们的核酸。本发明还涉及这些抗体在治疗尼古丁成瘾中的应用。

Description

尼古丁特异性人单克隆抗体
技术领域
本发明涉及重组产生的特异性结合尼古丁并且能够阻止尼古丁从血液转移至脑中的人单克隆抗体。本发明进一步涉及这些抗体在被动免疫中的应用，优选地在人的被动免疫中的应用，并且涉及这些抗体在治疗人的尼古丁成瘾中的应用。
背景技术
Bjercke等人.1986(J Immunol Methods，Vol.90(2)pp.203-13)公开了抗(S)-(-)-尼古丁的立体特异性单克隆抗体。Bjercke等人.1986的单克隆抗-尼古丁抗体通过杂交瘤技术产生，因此来源于小鼠细胞。Bjercke等人.1986进一步描述了这些单克隆抗体在开发基于ELISA的尼古丁分析中的应用。
Isomura等人.2001(J.Org.Chem.Vol.66pp.4115-4121)描述了半抗原的制备，该半抗原用于产生具有高光学纯度的天然存在的(S)-尼古丁、(S)-和(R)-降烟碱和代谢物(S)-可替宁的特异性抗体。作者报告了抗尼古丁抗体(包括单克隆抗体)的初步数据。Isomura等人.2001的单克隆抗体从小鼠获得，并且显示1.6x10-7M至3.4x10-7M的尼古丁结合Kd值。
Keyler等人.2005(Drug Metab Dispos，Vol.33(7)pp.1056-61)描述了使用抗尼古丁单克隆抗体对大鼠的被动免疫。作者尤其发现被动免疫后尼古丁向脑的分布减少。Keyler等人.2005的单克隆抗体也是通过杂交瘤技术产生的。
Pentel等人.2006(J Pharmacol Exp Ther，Vol.317(2)pp.660-6)尤其研究了单克隆抗体Nic311对大鼠的被动免疫，该抗体由Kepler等人.2005描述，由此特别研究了使用该抗体的被动免疫对急性和慢性尼古丁脑分布的不同影响。现有技术中已经提示使用尼古丁特异性抗体对人的被动免疫在尼古丁成瘾的治疗中可能有用，并且可能在戒烟过程中是有利的。但是，关于Nic311，Pentel等人.2006进一步得出以下结论：治疗性单克隆抗体需要进行人源化来降低其自身的免疫原性才能用于临床应用。
现有技术已知的抗尼古丁单克隆抗体来自于非人来源，因此，由于它们在人体中的强免疫原性和由此引起的安全性考虑，它们在治疗上是不可用的。
发明内容
本发明提供特异性结合尼古丁的人单克隆抗体，其中优选地所述单克隆抗体是完全人抗体。典型且优选地，此处公开的单克隆抗体在人体中没有免疫原性，因此适用于人类的被动免疫。此外，已经惊奇地发现，本发明的单克隆抗体特异性结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁。同(S)-(-)-尼古丁一样，尼古丁的(R)-(+)-立体异构体也存在于烟草植物中。另外，它也可以通过吸烟时的燃烧过程形成，并且具有与(S)-(-)-尼古丁性质上相似的对中枢神经系统的活性(Hukkanen J.等人.，2005，Pharmacol.Rev.57，79-115)。
本发明的单克隆抗体按照PCT/EP2007/061570中公开的方法克隆：(1)选择人类受试者的尼古丁特异性B细胞；(2)将这些细胞的VH和VL区克隆到甲病毒文库中；(3)在哺乳动物细胞上进行scFv抗体的细胞表面展示；(4)选择展示尼古丁特异性scFv抗体的细胞；(5)克隆这些scFv抗体的VH和VL区；和(6)以不同的形式表达特异性结合尼古丁的单克隆抗体，例如作为scFv-Fc-融合蛋白或者作为人IgG2，优选地作为完全人IgG2。通过应用这一方法，获得了7个独立的抗体克隆，当它们表达为scFv-Fc融合蛋白或IgG2时，以纳摩尔或低纳摩尔范围的Kd值结合尼古丁。
因此，一方面，本发明涉及特异性结合尼古丁的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体，并且其中优选地所述人单克隆抗体是完全人单克隆抗体。
将这些克隆测序，并且鉴定提供尼古丁特异性的人CDR。惊奇地发现，这些抗体中的几种具有不同组合的相同的CDR(见表1)。
表1.尼古丁-特异性人抗体的CDR序列的SEQ ID NO
在进一步的方面，本发明涉及特异性结合尼古丁的单克隆抗体，其中优选地所述单克隆抗体是人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个重链可变区(HCVR)，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：1、11和17中任一个的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：2、12和18中任一个的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3包含或者优选地由SEQ IDNO：3、4、13和19中任一个的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处。
在进一步的方面，本发明涉及一种特异性结合尼古丁的单克隆抗体，其中优选地所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，其中所述单克隆抗体包含至少一个轻链可变区(LCVR)，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：5、6、7、14和20中任一个的肽组成；并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：8、15和21中任一个的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：9、10、16和22中任一个的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在进一步的方面，本发明涉及一种特异性结合尼古丁的单克隆抗体，其中优选地所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HCCDR1，其中所述HC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：1、11和17中任一个的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：2、12和18中任一个的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3包含或者优选地由SEQ IDNO：3、4、13和19中任一个的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；和/或，优选地，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LCCDR1，其中所述LC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：5、6、7、14和20中任一个的肽组成；并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LCCDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：8、15和21中任一个的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：9、10、16和22中任一个的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
典型且优选地，所述单克隆抗体是重组产生的。本发明的单克隆抗体可以以任何天然存在的或合成的形式表达。在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体是IgG，优选地是IgG2。
在进一步的方面，本发明涉及单克隆抗体的HCVR，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体特异性结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，并且其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3和4中任一个的肽组成。
在进一步的方面，本发明涉及单克隆抗体的LCVR，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体特异性结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，并且其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5、6和7中任一个的肽组成；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成；(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9和10中任一个的肽组成。
在进一步的方面，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM。在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-70nM，优选地1-40nM，进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-70nM，优选地1-50nM，进一步优选地1-40nM，再进一步优选地1-20nM，更加进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在一个非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-70nM，优选地1-40nM，进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-20nM，进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在一个更加非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。优选地，所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HCCDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：1、11和17中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：2、12和18中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个HCCDR3，其中所述HC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：3、4、13和19中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：3的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；和/或，优选地，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：5、6、7、14和20中任一个的肽组成；非常优选地由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LCCDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：8、15和21中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：9、10、16和22中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：9的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-10nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-10nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ IDNO：9的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处，并且其中优选地所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ IDNO：26的肽组成。
在进一步的方面，本发明涉及编码本发明的可变区、本发明的单克隆抗体或其单个链的核酸分子。
在进一步的方面，本发明涉及包含至少一种本发明的核酸分子的表达载体。在进一步的方面，本发明涉及包含至少一种本发明的核酸分子或至少一种本发明的表达载体的宿主细胞。
本发明的单克隆抗体可用于被动免疫，优选地用于人的被动免疫，以及用于治疗尼古丁成瘾。因此，在进一步的方面，本发明涉及包含至少一种本发明的单克隆抗体的药物组合物。
在进一步的方面，本发明涉及一种被动免疫方法，所述方法包括给受试者施用有效量的本发明的单克隆抗体或有效量的本发明的药物组合物。
在进一步的方面，本发明涉及一种治疗尼古丁成瘾的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本发明的单克隆抗体或有效量的本发明的药物组合物。
在进一步的方面，本发明涉及用于被动免疫，优选地用于人的被动免疫的本发明的单克隆抗体或本发明的药物组合物。
在进一步的方面，本发明涉及用于治疗尼古丁成瘾，优选地用于治疗人的尼古丁成瘾的本发明的单克隆抗体或本发明的药物组合物。
在进一步的方面，本发明涉及本发明的单克隆抗体在制备用于被动免疫(优选地针对尼古丁)的药物中的用途。
在进一步的方面，本发明涉及本发明的单克隆抗体在制备用于治疗(优选地人的)尼古丁成瘾的药物中的用途。
本发明的另一方面是本发明的抗体在定量和/或定性检测尼古丁的方法中的应用，优选地检测血样，最优选地通过ELISA检测。
应当理解，此处公开的所有实施方案和技术特征都涉及本发明的所有方面以及任何可能的组合。
附图说明
图1.IgG2-F018的特异性。在浓度逐渐增加的未标记的(-)-尼古丁、(-)-可替宁或乙酰胆碱的存在下，通过平衡透析法检测氚标记的(-)-尼古丁(56nM)与IgG2-F018(50nM)的结合。给出了两个独立实验的平均值及标准差。
发明详述
“抗体”：本文使用的术语“抗体”是指一种分子，优选地一种蛋白质，它能够特异性结合一种抗原，典型且优选地，通过结合所述抗原的表位或抗原决定簇，或结合半抗原。优选地，术语抗体是指包含至少一个可变区的抗原或半抗原结合分子，其中优选地所述分子包含至少一个HCVR和/或至少一个LCVR。进一步优选地，术语抗体是指包含至少一个、优选地正好两个抗原结合位点的抗原或半抗原结合分子，其中所述抗原结合位点中的每一个由一个HCVR和一个LCVR形成。此外，术语抗体还指完整的抗体，优选IgG、IgA、IgE、IgM或IgD类别的抗体，更优选IgG类别的抗体，最优选IgG1、IgG2、IgG3和IgG4类别的抗体，及其抗原结合片段。在一个优选实施方案中，所述完整抗体包含κ或λ轻链。术语“抗体”也指抗原或半抗原结合抗体片段，优选蛋白水解片段及其重组类似物，最优选Fab、Fab′和F(ab′)2和Fv。术语抗体进一步包括包含至少一个、优选两个可变区的蛋白质，其中进一步优选地所述蛋白质包含正好一个HCVR和正好一个LCVR。在一个优选实施方案中，术语抗体是指单链抗体，优选scFv。因此，优选的抗体是单链抗体，优选scFv、二硫键连接的Fv(sdFv)和包含轻链可变区(LCVR)或重链可变区(HCVR)的片段。在本发明的上下文中，术语“抗体”优选地指重组抗体，包括由一个多肽组成的重组蛋白，其中所述多肽包含至少一个、优选正好一个可变区。在本发明的上下文中，重组抗体可以进一步包含功能元件，如接头区、信号肽或疏水前导序列、检测标签和/或纯化标签(例如Fc)。
“Fv”：术语Fv是指能够结合抗原或半抗原的抗体的最小的蛋白水解片段，以及所述片段的重组类似物。
“单链抗体”：单链抗体是由一个多肽组成的抗体。优选的单链抗体由包含至少一个、优选地正好一个VR的多肽组成，其中优选地所述VR是HCVR。更优选的单链抗体由包含至少一个、优选地正好一个HCVR和至少一个、优选地正好一个LCVR的多肽组成。再更优选的单链抗体包含正好一个HCVR和正好一个LCVR。最优选的单链抗体是scFv，其中所述scFv由一个包含正好一个HCVR和正好一个LCVR的多肽组成，其中所述HCVR和所述LCVR通过接头区彼此连接，其中优选地所述接头区由至少15个、优选地15-20个氨基酸组成(Bird等人.(1988)Science，242(4877)：423-426)。进一步优选的单链抗体是scFv，其中所述scFv由一个编码区编码，其中所述编码区在5′至3’方向上以下列顺序包含：(1)由来自κ或λ轻链的轻链构架(LC FR)1、互补决定区(LC CDR)1、LC FR2、LC CDR 2、LC FR3、LC CDR3和LCFR4组成的轻链可变区(LCVR)；(2)柔性接头(L)；和(3)由构架(HCFR)1、互补决定区(HC CDR)1、HC FR2、HC CDR2、HC FR3、HCCDR3和HC FR4组成的重链可变区(HCVR)。或者，单链抗体是scFv，其中所述scFv由一个编码区编码，其中所述编码区在5′至3’方向上以下列顺序包含：(1)由构架(HC FR)1、互补决定区(HC CDR)1、HC FR2、HC CDR2、HC FR3、HC CDR3和HC FR4组成的重链可变区(HCVR)；(2)柔性接头(L)；和(3)由来自κ或λ轻链的轻链构架(LC FR)1、互补决定区(LC CDR)1、LC FR2、LC CDR2、LC FR3、LC DR3和LC FR4组成的轻链可变区(LCVR)。
“双链抗体(diabody)”：术语“双链抗体”是指包含两个多肽链、优选地两个相同的多肽链的抗体，其中每条多肽链包含HCVR和LCVR，其中所述HCVR和所述LCVR通过接头区彼此连接，其中优选地所述接头区包含最多10个氨基酸(Huston等人.(1988)，PNAS85(16)：587958-83；Holliger等人.(1993)，PNAS 90(14)：6444-6448，Hollinger & Hudson，2005，Nature Biotechnology 23(9)：1126-1136；Arndt等人.(2004)FEBS Letters 578(3)：257-261)。双链抗体的优选的接头区包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸。
“人抗体”：本文使用的术语“人抗体”是指基本上具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，优选重组抗体，或其片段，并且包括从人免疫球蛋白文库中分离的抗体。在本发明的上下文中，“人抗体”可以包含有限数量的与天然人抗体序列相比的氨基酸交换。这些氨基酸交换可以是，例如，由克隆过程引起的。但是，本发明的人抗体中这些氨基酸交换的数目优选地最小化。优选地，人抗体的氨基酸序列与天然人抗体的序列至少85％，优选地90％，更优选地95％，甚至更优选地至少96％，更优选地97％，更优选地98％，更优选地99％，最优选地100％相同。更优选地，人抗体的氨基酸序列与特异性结合目的抗原或半抗原的天然人抗体的序列至少85％，优选地90％，更优选地95％，甚至更优选地至少96％，更优选地97％，更优选地98％，更优选地99％，最优选地100％相同。最优选地，人抗体的氨基酸序列与特异性结合尼古丁、优选(S)-(-)-尼古丁和/或(R)-(+)-尼古丁的天然人抗体的序列至少85％，优选地90％，更优选地95％，更优选地至少96％，更优选地97％，更优选地98％，更优选地99％，最优选地100％相同。
优选的重组人抗体与天然人抗体最多有20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸不同，非常优选地，通过分子克隆消除重组人抗体与天然人抗体的氨基酸序列的差异，因此，最优选地，重组人抗体与天然人抗体的氨基酸序列相同。这种抗体也被称为“完全人抗体”。实施例6提供了一个如何从选自人抗体文库的人抗体获得完全人抗体的说明性实施例。典型且优选地，完全人抗体在人体中没有免疫原性。
优选的人抗体包含：(a)至少一个，优选一个HCVR，(b)至少一个，优选一个HCCR，(c)至少一个，优选一个LCVR，和(d)至少一个，优选一个LCCR，其中所述至少一个HCVR和/或所述至少一个HCCR和/或所述至少一个LCVR和/或所述至少一个LCCR与相应的天然人区域至少85％，优选地90％，更优选地95％，更优选地至少96％，更优选地97％，更优选地98％，更优选地99％，最优选地100％相同。
已经确定，免疫球蛋白(包括人免疫球蛋白)的恒定区以多种同种型存在，即，群体的个体之间所述恒定区的氨基酸序列可能有一定程度的不同。非常深入地研究了人免疫球蛋白的恒定区的同种型，技术人员容易从各种来源获得序列信息，包括Immuno GeneticsInformation System(http://imgt.cines.fr/)。应当理解，对于本发明的目的，一种免疫球蛋白的恒定区的不同同种型可以交换。例如，本发明的单克隆抗体的γ2重链可以包含人γ2HCCR的任何存在的同种型。
“单克隆抗体”：本文使用的术语“单克隆抗体”是指只包括一个抗体种类(即，具有相同氨基酸序列的抗体)的抗体群体。
“恒定区(CR)”：术语“恒定区”是指抗体的轻链恒定区(LCCR)或重链恒定区(HCCR)。典型且优选地，所述CR包含1-4个以二硫键稳定化的环结构为特征的免疫球蛋白结构域。优选的CR是免疫球蛋白的CR，优选地是人免疫球蛋白的CR，其中进一步优选地，所述免疫球蛋白，优选地所述人免疫球蛋白，选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM和IgD。非常优选的CR是包含或由可从公共数据库中获得的氨基酸序列组成的人CR，所述数据库包括，例如，Immunogenetic Information System(http://imgt.cines.fr/)。
轻链恒定区(LCCR)：LCCR，更特别地κLCCR或λLCCR，一般代表天然抗体的天然κ或λ轻链的C-末端部分。LCCR一般包含大约110个氨基酸，代表一个免疫球蛋白结构域。
重链恒定区(HCCR)：重链的恒定区包含抗体重链的大约四分之三或更多，并且位于其C-末端。HCCR一般包含3或4个免疫球蛋白结构域。优选的HCCR选自γHCCR、αHCCR、εHCCR、我们的HCCR和δHCCR。非常优选的是γHCCR，其中优选地所述γHCCR选自γ1HCCR、γ2HCCR、γ3HCCR和γ4HCCR，其中最优选地所述γHCCR是γ2HCCR。
“可变区(VR)”是指抗体的可变区或可变域，更具体地是指重链可变区(HCVR)或轻链可变区(LCVR)。典型且优选地，VR包含一个免疫球蛋白结构域。优选的VR是免疫球蛋白的VR，优选人免疫球蛋白的VR，其中进一步优选地，所述免疫球蛋白，优选地所述人免疫球蛋白，选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM和IgD。各个种类的VR是本领域已知的。优选的VR是人VR，其中所述人VR的构架显示与任何已知人VR序列的构架有至少80％，优选地至少85％，更优选地90％，更优选地至少95％，最优选地至少99％的序列同一性。优选的VR是人VR，其中所述人VR的构架显示与可从公共数据库获得的任何人VR序列的构架，最优选地与可从ImmunogeneticsInformation System(http://imgt.cines.fr/)获得的任何人VR序列，有至少80％，优选地至少85％，更优选地90％，更优选地至少95％，最优选地至少99％的序列同一性。
每个VR包含所谓的互补决定区(CDR)，互补决定区决定抗体的结合特性，并且包埋在所谓的构架内。典型且优选地，VR包含3个CDR，优选地为CDR1、CDR2和CDR3，它们包埋在构架(FR 1-4)内。因此，在一个优选实施方案中，VR从N-端到C-端以如下顺序包含以下元件：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
通常，VR包含多肽或优选地由多肽组成，其中所述多肽是V-基因区段家族的成员与其它基因区段例如D和J基因区段(HCVR)或J基因区段(LCDR)组合的产物。
“轻链可变区(LCVR)”：轻链可变区由重排的核酸分子编码，并且是κLCVR或λLCVR。人κLCVR包含一个多肽，其中所述多肽是人κV-基因区段家族1-7的成员的产物。在本发明的上下文中，优选的κLCVR是人κLCVR，优选地是由一种DNA编码的人κLCVR，该DNA可以使用PCT/EP2007/061570作为SEQ ID NO：49-52公开的任一种寡核苷酸与PCT/EP2007/061570作为SEQ ID NO：53-56公开的任一种寡核苷酸的引物组合，进一步优选地，使用PCT/EP2007/061570的实施例3所述的PCR条件，从人B细胞扩增。
人λLCVR包含一个多肽，其中所述多肽是人λV-基因区段家族1-11的成员的产物。在本发明的上下文中，优选的λLCVR是人λLCVR，优选地是由一种DNA编码的人λLCVR，该DNA可以使用PCT/EP2007/061570的SEQ ID NO：57-65中的任一种与PCT/EP2007/061570的SEQ ID NO：66-68中的任一种的引物组合，进一步优选地，使用PCT/EP2007/061570的实施例3所述的PCR条件，从人B细胞扩增。
典型且优选地，LCVR包含三个LC CDR，优选地LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，它们包埋在轻链构架(LC FR 1-4)内。因此，在一个优选实施方案中，LCVR从N-端到C-端以如下顺序包含以下元件：LC FR1-LC CDR1-LC FR2-LC CDR2-LC FR3-LC CDR3-LCFR4。
“重链可变区(HCVR)”：重链可变区由重排的核酸分子编码。人HCVR包含一个多肽，其中所述多肽是人λV-基因区段的家族1-7的成员的产物。在本发明的上下文中，优选的HCVR是人HCVR，优选地是由一种DNA编码的人HCVR，该DNA可以使用PCT/EP2007/061570的SEQ ID NO：42-47中的任一种与PCT/EP2007/061570的SEQ ID NO：48的引物组合，进一步优选地，使用PCT/EP2007/061570的实施例3所述的PCR条件，从人B细胞扩增。
典型且优选地，HCVR包含三个HC CDR，优选地HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，它们包埋于重链构架(HC FR 1-4)内。因此，在一个优选实施方案中，HCVR从N-端到C-端以如下顺序包含以下元件：HC FR1-HC CDR1-HC FR2-HC CDR2-HC FR3-HC CDR3-HCFR4。
“CDR”：抗体的HCVR和LCVR的互补决定区(CDR)1、2和3分别可以通过本领域公知的方法来鉴定。对于本申请，CDR和FR边界如Scavinger等人.1999(Exp Clin Immunogenet.，Vol.16pp.234-240)或Lefranc等人.2003(Developmental and Comparative Immunology Vol.27pp.55-77)所述定义。
“抗原”：本文使用的术语“抗原”是指被抗体结合的分子。抗原被免疫系统和/或体液免疫应答识别，并且可能具有一个或多个表位，优选地B细胞表位，或抗原决定簇。
“半抗原”：术语“半抗原”通常是指一种化学化合物，其中所述化合物本身不能在动物中诱导免疫应答，但是其中所述化合物当与载体结合、优选地与载体蛋白结合时能够在动物中诱导免疫应答。在本发明的上下文中，“半抗原”是指尼古丁。
“尼古丁”：本文使用的术语“尼古丁”优选地是指(S)-(-)-尼古丁或(R)-(+)尼古丁或其任何混合物。最优选地，尼古丁是指(S)-(-)-尼古丁。
“特异性结合”：抗体的特异性与抗体特异性结合抗原或半抗原的能力有关。抗体与抗原/半抗原之间这种相互作用的特异性(亲和力)用结合常数来表征，或者相反地，用解离常数(Kd)来表征。应当理解，多价相互作用中抗体对抗原/半抗原的表观亲和力取决于抗体和抗原/半抗原的结构，并且取决于实际测定条件。由于亲合力，多价相互作用中抗体对抗原/半抗原的表观亲和力可能显著高于单价相互作用。因此，优选地在有利于单价相互作用的条件下确定亲和力。Kd可以用本领域已知的方法来确定。抗体和抗原/半抗原的给定组合的Kd优选地通过ELISA来确定，其中恒定量的固定的抗原/半抗原与已知浓度的纯化抗体(优选单价抗体，例如scFv或Fab片段)的连续稀释液接触。然后以观察到半数最大结合时的抗体浓度确定Kd。在一个优选实施方案中，优选地在实施例7所述的条件下，通过平衡透析确定Kd。或者，抗体与抗原/半抗原的单价相互作用的Kd通过Biacore分析作为结合速率(kon)与解离速率(koff)的比例来确定。与较高的数值相比，较低的Kd值表示特异性更高的抗体与抗原/半抗原的结合。在本申请的上下文中，当解离常数(Kd)(优选地如上所述测定的，进一步优选地在单价相互作用中测定的)最多为1mM(＜＝10-3M)，优选地最多为1μM(＜＝10-6M)，最优选地最多为1nM(＜＝10-9M)时，抗体被认为“特异性结合抗原/半抗原”。非常优选的是能够以低于100nM(“低纳摩尔范围”)的Kd结合抗原/半抗原的抗体，其中进一步优选地，在单价相互作用中测定Kd。进一步优选的抗体能够以1-1000nM，更优选地以5-800nM，更优选地以5-90nM，最优选地以5-50nM的Kd结合抗原/半抗原，其中进一步优选地在单价相互作用中测定Kd。
“相等”：在本申请的上下文中，当单克隆抗体和物质的两个解离常数(Kd)的值相差最多10倍，优选最多9倍，更优选最多8倍，更优选最多7倍，更优选地最多6倍，更优选最多5倍，更优选地最多4倍，更优选最多3倍，更优选最多2倍，最优选最多1.5倍时，所述值被认为是“相等”的。在一个非常优选的实施方案中，当两个Kd值相差不到5倍时，它们被认为是相等的。
“有效量”：本发明的单克隆抗体或本发明的药物组合物的有效量通常是指在必要的剂量和时间段内足以获得希望的治疗结果的量，其中优选地所述结果是预防、减少或减缓尼古丁向(优选地人)脑中的进入，和/或，最终戒烟。对于人的治疗性处置，“有效量”一般是指1mg至1000mg，优选地10mg至500mg，更优选地10mg至300mg，更优选地50mg至200mg，最优选地大约100mg所述单克隆抗体的量。
“标签”：术语标签，优选地纯化或检测标签，是指能够连接到第二多肽上以提供第二多肽的纯化或检测或者提供第二多肽与底物连接的位点的多肽区段。原则上，可以获得其抗体或其它特异性结合剂的任何肽或蛋白质可以用作亲和力标签。标签包括血凝素标签、myc标签、聚组氨酸标签、蛋白A、谷胱甘肽S转移酶、Glu-Glu亲和力标签、P物质、FLAG肽、链霉亲和素结合肽或其它抗原性表位或结合域(大多数来自US06686168)。
PCT/EP2007/061570中公开了一种用于鉴定、分离和克隆特异性结合目的抗原或半抗原的scFv的基于文库的筛选方法。具体而言，所述方法可以鉴定、分离和克隆人scFv及随后产生完全人抗体，包括Fab片段和整个IgG。通过应用所述技术，已经鉴定和克隆了特异性结合尼古丁的人单克隆抗体。
在一方面，本发明提供特异性结合尼古丁的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体，其中优选地所述尼古丁选自(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，并且其中最优选地所述尼古丁是(S)-(-)-尼古丁；并且其中进一步优选地，所述人单克隆抗体是完全人单克隆抗体。
在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体特异性结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁。
在一个实施方案中，所述单克隆抗体结合尼古丁，优选地结合(S)-(-)-尼古丁，其解离常数Kd为1-1000nM，更优选1-800nM，更优选1-100nM，最优选5-90nM，其中进一步优选地，使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在一个进一步优选的实施方案中，Kd在单价相互作用中测定，最优选地在基本如实施例7所述的分析中测定。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的结合的解离常数Kd为1-100nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的结合的解离常数Kd为1-100nM。
在一个更优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的结合的解离常数Kd为0.1-100nM，优选地0.1-70nM，进一步优选地0.1-50nM，再进一步优选地0.1-40nM，再进一步优选地0.1-20nM，进一步优选地0.1-10nM，进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-100nM，优选地0.1-70nM，进一步优选地0.1-50nM，再进一步优选地0.1-40nM，再进一步优选地0.1-20nM，并且再进一步优选地0.1-10nM，再进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在另一个非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-40nM，进一步优选地0.1-10nM，再进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-50nM，优选地0.1-20nM，进一步优选地0.1-10nM，再进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在又另一个非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-10nM，优选地1-10nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-10nM，优选地1-10nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-1000nM，优选地1-800nM，更优选地1-100nM，再进一步优选地1-70nM，再进一步优选地1-50nM，再进一步优选地1-40nM，再进一步优选地1-20nM，更进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-1000nM，优选地1-800nM，更优选地1-100nM，再进一步优选地1-70nM，再进一步优选地1-50nM，再进一步优选地1-40nM，再进一步优选地1-20nM，更进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在一个非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM，优选地1-70nM，再进一步优选地1-40nM，进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM，优选地1-70nM，再进一步优选地1-50nM，再进一步优选地1-40nM，再进一步优选地1-20nM，进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在又一个非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-70nM，优选地1-40nM，进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-50nM，优选地1-20nM，进一步优选地1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在一个更加非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于100nM，优选地低于70nM，进一步优选地低于50nM，再进一步优选地低于40nM，再进一步优选地低于20nM，并且再进一步优选地低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的所述解离常数Kd低于100nM，优选地低于70nM，进一步优选地低于50nM，再进一步优选地低于40nM，再进一步优选地低于20nM，并且再进一步优选地低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在一个非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于70nM，优选地低于40nM，进一步优选地低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于50nM，优选地低于20nM，进一步优选地低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在另一个非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于20，优选地低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。在一个更加非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。
在一个进一步优选的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd和所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd相等，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。
在另一个优选实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd的2-5倍，优选大约2倍，最优选2倍，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体能够防止、减少或减慢尼古丁向(优选地人)脑中的进入。在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体能够减少尼古丁向脑中的进入，当在基本如实施例8所述的条件下测定时，优选地减少至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。最优选地，所述单克隆抗体能够减少尼古丁向脑中的进入，当在基本如实施例8所述的条件下测定时，优选地减少至少60％。
在一个进一步优选的实施方案中，当施用于受试者，优选地施用于人时，所述单克隆抗体能够防止、减少或减慢尼古丁向所述受试者(优选地所述人)脑中的进入，其中优选地所述单克隆抗体以1mg至1000mg，优选地10mg至500mg，更优选地10mg至300mg，再更优选地50mg至200mg，最优选地大约100mg的量施用于所述受试者，优选地施用于所述人。
抗体的特异性主要取决于所述抗体的重链可变区(HCVR)中互补决定区(CDR)的氨基酸序列和/或所述抗体的轻链可变区(LCVR)的CDR。本发明公开了单克隆抗体的HCVR的CDR(HC CDR)和LCVR的CDR(LC CDR)，其中所述单克隆抗体能够特异性结合尼古丁。
因此，在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HCCDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：1、11和17中任一个的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2包含或者优选地由SEQ IDNO：2、12和18中任一个的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：3、4、13和19中任一个的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LCCDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：5、6、7、14和20中任一个的肽组成；并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：8、15和21中任一个的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个LCCDR3，其中所述LC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：9、10、16和22中任一个的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
已经惊奇地发现，一些能够以纳摩尔范围的Kd结合尼古丁的单克隆抗体，特别是F018、F063、J004、J042和N049，具有不同组合的相同的HC CDR和/或LC CDR(参见表1)。此外，已经惊奇地发现，抗体F018、F063、J004、J042和N049的重链和轻链可变区彼此非常相关，只在几个氨基酸位置处不同。
因此，在一个非常优选的实施方案中，(a)所述HC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：1的肽组成；(b)所述HC CDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：2的肽组成；且(c)所述HC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：3和4中任一个的肽组成，其中优选地(a)所述LC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：5、6和7中任一个的肽组成；(b)所述LCCDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：8的肽组成；且(c)所述LC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：9和10中任一个的肽组成。
在一个优选实施方案中，所述HCVR包含一个构架，其中所述构架是V-基因区段的VH家族的成员、优选V-基因区段的VH4家族的成员与JH-基因区段组合的产物。
在一个非常优选的实施方案中，(a)所述HC CDR1由SEQ IDNO：1的肽组成；(b)所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成；且(c)所述HC CDR3由SEQ ID NO：3的肽组成。
在一个进一步非常优选的实施方案中，(a)所述HC CDR1由SEQID NO：1的肽组成；(b)所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成；且(c)所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成。
在一个实施方案中，所述HCVR的第7-117位由SEQ IDNO：24、28、33和39中任一个的肽组成。在另一个实施方案中，所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：23、27、32、29和38中任一个的核酸编码。
本发明的抗体可能由于克隆伪迹(cloning artifacts)而在VR的某些氨基酸位置处与完全人抗体不同，其中这些位置一般位于可变区的N-末端和/或C-末端附近。优选地，为了获得完全人抗体从抗体中除去这些伪迹。实施例6中说明了一种从仍然包含所述克隆伪迹的抗体产生完全人单克隆抗体的方法。一种类似的方法应用于此处公开的所有HCVR和LCVR。例如，为了获得完全人HCVR，将本发明的HCVR的第1-6位替换为SEQ ID NO：50。因此，在一个优选实施方案中，所述HCVR的第1-6位由SEQ ID NO：50组成。
在一个进一步的实施方案中，所述LC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：5、6和7中任一个的肽组成；(b)所述LC CDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：8的肽组成；且(c)所述LC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：9和10中任一个的肽组成。
在进一步的实施方案中，所述LCVR包含一个构架，其中所述构架是V-基因区段的Vλ家族的成员、优选V-基因区段的Vλ1家族的成员与Jλ基因区段组合的产物。
在一个优选实施方案中，所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成；(b)所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成；且(c)所述LC CDR3由SEQ ID NO：9的肽组成。
在一个进一步优选的实施方案中，(a)所述LC CDR1由SEQ IDNO：6的肽组成；(b)所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成；且(c)所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成。在一个进一步优选的实施方案中，(a)所述LC CDR1由SEQ ID NO：7的肽组成；(b)所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成；且(c)所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成。在一个进一步优选的实施方案中，(a)所述LC CDR1由SEQ IDNO：5的肽组成；(b)所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成；且(c)所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成。
在一个非常优选的实施方案中，所述LCVR的第5-107位由SEQID NO：26、31、35、37和41中任一个的肽组成。在进一步非常优选的实施方案中，所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：25、30、34、36和40中任一个的核酸编码。在一个进一步优选的实施方案中，所述LCVR的第1-4位由SEQ ID NO：51组成。在一个进一步优选的实施方案中，所述LCVR的第108-110位由SEQ ID NO：53组成。
在一个进一步非常优选的实施方案中，(a)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：26的肽组成；(b)所述HCVR的第7-117位由SEQ IDNO：28的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：31的肽组成；(c)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：33的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：35的肽组成；(d)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：28的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：37的肽组成；或者(e)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：39的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：41的肽组成。在另外一个进一步非常优选的实施方案中，(a)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：26的肽组成。
在一个进一步优选的实施方案，所述特异性结合尼古丁的人单克隆抗体包含至少一个HCVR和至少一个LCVR，其中所述HCVR的第7-117位与SEQ ID NO：24、28、33和39的第7-117位、优选地与SEQID NO：24的第7-117位至少80％，优选地85％，更优选地90％，再更优选地95％，甚至更优选地至少96％，更优选地97％，更优选地98％，更优选地99％，最优选地100％相同；并且其中所述LCVR的第5-107位与SEQ ID NO：26、31、35、37和41的第5-107位、优选地与SEQ ID NO：26的第5-107位至少80％，优选地85％，更优选地90％，更优选地95％，甚至更优选地至少96％，更优选地97％，更优选地98％，更优选地99％，最优选地100％相同。
一种肽或多肽的氨基酸序列是否与另一种的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、97％或99％相同可以使用已知的计算机程序如Bestfit程序常规确定。
在另一个优选实施方案中，所述特异性结合尼古丁的人单克隆抗体包含至少一个HCVR和至少一个LCVR，其中所述HCVR的第7-117位与SEQ ID NO：24、28、33和39的第7-117位、优选地与SEQ IDNO：24的第7-117位至少80％，优选地85％，更优选地90％，更优选地95％，甚至更优选地至少96％，更优选地97％，更优选地98％，更优选地99％，最优选地100％相同；并且其中所述LCVR的第5-107位与SEQ ID NO：26、31、35、37和41的第5-107位、优选地与SEQ IDNO：26的第5-107位至少80％，优选地85％，更优选地90％，更优选地95％，甚至更优选地至少96％，更优选地97％，更优选地98％，更优选地99％，最优选地100％相同，并且其中所述HCVR包含：(i)一个由SEQ ID NO：1的肽组成的HC CDR1；(ii)一个由SEQ ID NO：2的肽组成的HC CDR2；和(iii)一个由SEQ ID NO：3的肽组成的HC CDR3，并且其中所述LCVR包含：(i)一个由SEQ ID NO：5的肽组成的LCCDR1；(ii)一个由SEQ ID NO：8的肽组成的LC CDR2；(iii)一个由SEQ ID NO：9的肽组成的LC CDR3。
在一个进一步非常优选的实施方案中，(a)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：23的核酸编码，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：25的核酸编码；(b)所述HCVR的第7-117位由SEQID NO：27的核酸编码，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ IDNO：30的核酸编码；(c)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：32的核酸编码，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：34的核酸编码；(d)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：29的核酸编码，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：36的核酸编码；或者(e)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：38的核酸编码，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：40的核酸编码。
本发明的抗体可以作为单链抗体的形式产生。因此，在一个进一步非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含或者优选地由SEQ IDNO：60、62、64、66和68中任一个的肽组成。在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体是一种单链抗体，其中优选地所述单链抗体包含或者优选地由SEQ ID NO：60、62、64、66和68中任一个的肽组成。在进一步非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含或者优选地由一个肽组成，其中所述肽由SEQ ID NO：59、61、63、65和67中任一个的核酸编码。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体表达为IgG，优选地表达为IgG2。因此，在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个γ2重链，其中优选地所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：73、75、77和80中任一个的肽组成。在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个λ轻链，其中优选地所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：74、76、78、79和81中任一个的肽组成。
在一个非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个γ2重链和至少一个λ轻链，其中(a)所述γ2重链包含或者优选地由SEQ IDNO：73的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：74的肽组成；(b)所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：75的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：76的肽组成；(c)所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：77的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：78的肽组成；(d)所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：75的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：79的肽组成；或者(e)所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：80的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：81的肽组成。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含轻链恒定区(LCCR)，其中优选地所述LCCR是λLCCR。
在另一个实施方案中，(a)所述HC CDR1包含或者优选地由SEQID NO：11的肽组成；(b)所述HC CDR2包含或者优选地由SEQ IDNO：12的肽组成；且(c)所述HC CDR3包含或者优选地由SEQ IDNO：13的肽组成，其中优选地所述HCVR包含一个构架，其中所述构架是V-基因区段的VH家族的成员、优选V-基因区段VH4家族的成员与JH-基因区段组合的产物。
在一个优选实施方案中，(a)所述HC CDR1由SEQ ID NO：11的肽组成；(b)所述HC CDR2由SEQ ID NO：12的肽组成；且(c)所述HCCDR3由SEQ ID NO：13的肽组成。
在一个进一步优选的实施方案中，所述HCVR的第7-121位由SEQ ID NO：43的肽组成。在一个进一步优选的实施方案中，所述HCVR的第7-121位由SEQ ID NO：42的核酸编码。并且在一个进一步优选的实施方案中，所述HCVR的第1-6位由SEQ ID NO：50组成。
在一个进一步优选的实施方案中，(a)所述LC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：14的肽组成；(b)所述LC CDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：15的肽组成；且(c)其中所述LC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：16的肽组成，其中优选地所述LCVR包含一个构架，其中进一步优选地所述构架是V-基因区段的Vκ家族的成员、优选V-基因区段Vκ3家族的成员与Jκ基因区段组合的产物。
在一个进一步优选的实施方案中，(a)所述LC CDR1由SEQ IDNO：14的肽组成；(b)所述LC CDR2由SEQ ID NO：15的肽组成；且(c)所述LC CDR3由SEQ ID NO：16的肽组成。在一个进一步优选的实施方案中，所述LCVR的第5-104位由SEQ ID NO：45的肽组成。在一个进一步优选的实施方案中，所述LCVR的第5-104位由SEQ ID NO：44的核酸所编码。并且在一个进一步优选的实施方案中，所述LCVR的第1-4位由SEQ ID NO：52组成。并且在一个进一步优选的实施方案中，所述LCVR的第105-107位由SEQ ID NO：54组成。
在一个非常优选的实施方案中，所述HCVR的第7-121位由SEQID NO：43的肽组成，并且所述LCVR的第5-104位由SEQ ID NO：45的肽组成。在一个非常优选的实施方案中，所述HCVR的第7-121位由SEQ ID NO：42的核酸编码，并且所述LCVR的第5-104位由SEQ IDNO：44的核酸编码。
在一个进一步非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含或者优选地由SEQ ID NO：70的肽组成。在一个进一步非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体是一种单链抗体，其中所述单链抗体包含或者优选地由SEQ ID NO：70的肽组成。在一个进一步非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含或者优选地由一个肽组成，其中所述肽由SEQ ID NO：69的核酸编码。
在一个进一步非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个γ2重链，其中所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：82的肽组成。在一个进一步非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个κ轻链，其中所述κ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：83的肽组成。在一个进一步非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个γ2重链和至少一个κ轻链，其中所述γ2重链包含或者优选地由SEQID NO：82的肽组成，并且其中所述κ轻链包含或者优选地由SEQ IDNO：83的肽组成。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含轻链恒定区(LCCR)，其中优选地所述LCCR是κLCCR。
在进一步的实施方案中，(a)所述HC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：17的肽组成；(b)所述HC CDR2包含或者优选地由SEQ IDNO：18的肽组成；且(c)所述HC CDR3包含或者优选地由SEQ IDNO：19的肽组成，其中优选地所述HCVR包含一个构架，其中所述构架是V-基因区段的VH家族的成员、优选V-基因区段VH4家族的成员与JH-基因区段组合的产物。
在一个优选实施方案中，(a)所述HC CDR1由SEQ ID NO：17的肽组成；(b)所述HC CDR2由SEQ ID NO：18的肽组成；且(c)所述HCCDR3由SEQ ID NO：19的肽组成。在一个非常优选的实施方案中，所述HCVR的第7-121位由SEQ ID NO：47的肽组成。在一个进一步非常优选的实施方案中，所述HCVR的第7-121位由SEQ ID NO：46的核酸编码。在一个进一步优选的实施方案中，所述HCVR的第1-6位由SEQ ID NO：50组成。
在进一步的实施方案中，(a)所述LC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：20的肽组成；(b)所述LC CDR2包含或者优选地由SEQ IDNO：21的肽组成；且(c)其中所述LC CDR3包含或者优选地由SEQ IDNO：22的肽组成，其中优选地所述LCVR包含一个构架，其中所述构架是V-基因区段的Vλ家族的成员、优选V-基因区段Vλ1家族的成员与Jλ基因区段组合的产物。
在一个优选实施方案中，(a)所述LC CDR1由SEQ ID NO：20的肽组成；(b)所述LC CDR2由SEQ ID NO：21的肽组成；且(c)所述LCCDR3由SEQ ID NO：22的肽组成。
在一个进一步优选的实施方案中，所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：49的肽组成。在一个进一步优选的实施方案中，所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：48的核酸编码。并且在一个优选实施方案中，所述LCVR的第1-4位由SEQ ID NO：51组成。并且在一个优选实施方案中，所述LCVR的第108-110位由SEQ ID NO：53组成。
在一个非常优选的实施方案中，所述HCVR的第7-121位由SEQID NO：47的肽组成，并且所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：49的肽组成。
在一个非常优选的实施方案中，所述HCVR的第7-121位由SEQID NO：46的核酸编码，并且所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：48的核酸编码。
在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体包含或者优选地由SEQID NO：72的肽组成。在进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体是一种单链抗体，其中所述单链抗体包含或者优选地由SEQ ID NO：72的肽组成。在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体包含或者优选地由一个肽组成，其中所述肽由SEQ ID NO：71的核酸编码。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个γ2重链，其中优选地所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：84的肽组成。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个λ轻链，其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：85的肽组成。
在一个非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含至少一个γ2重链和至少一个λ轻链，其中所述γ2重链包含或者优选地由SEQ IDNO：84的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：85的肽组成。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含轻链恒定区(LCCR)，其中优选地所述LCCR是λLCCR。
本发明的单克隆抗体可以作为天然存在的形式或合成的形式重组产生。以下实施方案详细说明了本发明的所有方面和实施方案。在一个实施方案中，所述单克隆抗体是一种重组抗体。在一个优选实施方案中，本发明的单克隆抗体是选自以下的抗体：(a)单链抗体，优选地scFv；(b)Fab片段；(c)F(ab’)2片段；(d)scFv-Fc融合蛋白；(e)IgG1；(f)IgG2；(g)IgG3；(h)IgG4；(i)IgA；(j)IgE；(k)IgM；(1)IgD；和(m)双链抗体。
在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体包含或者优选地由正好一个HCVR和/或正好一个LCVR组成。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含重链恒定区(HCCR)，其中优选地所述HCCR选自(a)γHCCR、(b)αHCCR、(c)εHCCR、(d)我们的HCCR，和(e)δHCCR，其中进一步优选地，所述HCCR，优选地所述γHCCR、αHCCR、εHCCR、我们的HCCR和/或δHCCR，是人HCCR。
在进一步优选的实施方案中，所述HCCR是γHCCR，其中优选地所述γHCCR选自(a)γ1HCCR；(b)γ2HCCR；(d)γ3HCCR；和(c)γ4HCCR；其中优选地所述γHCCR是γ2HCCR。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含轻链恒定区(LCCR)，其中优选地所述LCCR选自(a)λLCCR；和(b)κLCCR，其中进一步优选地所述LCCR，最优选地所述λLCCR和/或所述κLCCR，是人LCCR。
优选地，本发明的单克隆抗体是IgG2，最优选地是完全人IgG2。因此，在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体包含两个，优选正好两个所述γ2重链，其中进一步优选地，所述两个，优选地所述正好两个所述γ2重链是相同的。
在一个进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体包含两个，优选地正好两个轻链，其中优选地所述轻链选自(a)λ轻链；和(b)κ轻链；其中进一步优选地，所述两个，优选地所述正好两个所述轻链是相同的。
优选地，所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1包含或者优选地由SEQID NO：1、11和17中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：2、12和18中任一个的肽组成，非常优选地由SEQID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：3、4、13和19中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：3的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；和/或，优选地，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LCCDR1，其中所述LC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：5、6、7、14和20中任一个的肽组成；非常优选地由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2包含或者优选地由SEQ IDNO：8、15和21中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：9、10、16和22中任一个的肽组成，非常优选地由SEQID NO：9的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁；并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HCCDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-10nM，优选地1-10nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-10nM，优选地1-10nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HCCDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LCCDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-10nM，优选地1-10nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-10nM，优选地1-10nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体包含一个γ2重链和一个λ轻链，其中所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：73的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：74的肽组成。
在另一个优选实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd等于，优选地2-5倍于，更优选地大约2倍于，最优选地2倍于所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ IDNO：9的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
优选地，所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1包含或者优选地由SEQID NO：1、11和17中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2包含或者优选地由SEQ ID NO：2、12和18中任一个的肽组成，非常优选地由SEQID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：3、4、13和19中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：3的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；和/或，优选地，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LCCDR1，其中所述LC CDR1包含或者优选地由SEQ ID NO：5、6、7、14和20中任一个的肽组成；非常优选地由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2包含或者优选地由SEQ IDNO：8、15和21中任一个的肽组成，非常优选地由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和/或(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3包含或者优选地由SEQ ID NO：9、10、16和22中任一个的肽组成，非常优选地由SEQID NO：9的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个更加非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HCCDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁；并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HCCDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：6的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为10-100nM，优选地25-75nM，最优选地25-35nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-10nM，优选地1-10nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HCCDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：6的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ IDNO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为10-100nM，优选地25-75nM，最优选地25-35nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-10nM，优选地1-10nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；所述单克隆抗体包含一个γ2重链和一个λ轻链，其中所述γ2重链包含或者优选地由SEQ IDNO：75的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：76的肽组成。
在另一个优选实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd等于，优选地2-7倍于，更优选地大约5倍于，最优选地5倍于所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：6的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ IDNO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个更加非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于40nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HCCDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：6的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁；并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HCCDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：7的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为10-100nM，优选地25-75nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-20nM，优选地10-15nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HCCDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LCCDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：7的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为10-100nM，优选地25-75nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-20nM，优选地10-15nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体包含一个γ2重链和一个λ轻链，其中所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：77的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：78的肽组成。
在另一个优选实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd等于，优选地2-7倍于，更优选地大约5倍于，最优选地5倍于所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：7的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ IDNO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个更加非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于75nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于15nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HCCDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：7的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HCCDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为20-60nM，优选地30-50nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-10nM，优选地1-10nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HCCDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LCCDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为20-60nM，优选地30-50nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-10nM，优选地1-10nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；其中所述单克隆抗体包含一个γ2重链和一个λ轻链，其中所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：75的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：79的肽组成。
在另一个优选实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd等于，优选地2-7倍于，更优选地大约4倍于，最优选地4倍于所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ IDNO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个更加非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于60nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于10nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HCCDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HCCDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：6的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为20-80nM，优选地30-75nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-15nM，优选地1-12nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HCCDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HCCDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LCCDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：6的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
在一个非常优选的进一步的实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为20-80nM，优选地30-75nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为0.1-15nM，优选地1-12nM，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；其中所述单克隆抗体包含一个γ2重链和一个λ轻链，其中所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：80的肽组成，并且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：81的肽组成。
在另一个优选实施方案中，本发明涉及一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd等于，优选地2-7倍于，更优选地大约3倍于，最优选地3倍于所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合，其中优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：6的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ IDNO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。在一个更加非常优选的实施方案中，所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于80nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd低于15nM，其中进一步优选地使用IgG2形式的所述单克隆抗体测定Kd，并且其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：(a)一个HCCDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR1位于所述HCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR2位于所述HCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：4的肽组成，并且其中优选地所述HC CDR3位于所述HCVR的构架内的CDR3位置处；并且，其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：6的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR1位于所述LCVR的构架内的CDR1位置处；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR2位于所述LCVR的构架内的CDR2位置处；和(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ IDNO：10的肽组成，并且其中优选地所述LC CDR3位于所述LCVR的构架内的CDR3位置处。
应当理解，本领域技术人员知道如何使用特异性结合尼古丁的第一抗体的HCVR从合适的来源中选择相应的LCVR，以及产生第二抗体，其中所述第二抗体包含所述第一抗体的所述HCVR和选择的LCVR，并且其中所述第二抗体能够以与所述第一抗体大约相同的特异性结合尼古丁(“链改组(chain suffling)”，参见实施例9)。而且本领域技术人员明白，以类似的方式，可以使用第一抗体的LCVR从合适的来源中选择相应的HCVR。用于扩增LCVR和/或HCVR的合适的来源是，例如，来自天然人B细胞的cDNA、来自用尼古丁-载体偶联物免疫的人受试者的B细胞的cDNA，以及完全合成的文库，如Morphosys’HuCAL文库。这些方法在Kang AS等人.(Proc Natl AcadSci USA 88，11120-11123，1991)，Marks JD等人.(Biotechnology(N Y)10，779-783，1992)，和Jespers等人.(Biotechnology(N Y)12，899-903，1994)中有详细描述。
因此，本发明的一个进一步的方面是单克隆抗体的HCVR，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体特异性结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，并且其中所述HCVR包含：(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成；(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成；和(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3和4中任一个的肽组成。
在一个优选实施方案中，所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24、28、33和39中任一个的肽组成。
本发明的另一方面是单克隆抗体的LCVR，其中所述单克隆抗体是一种人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体特异性结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，并且其中所述LCVR包含：(a)一个LCCDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5、6和7中任一个的肽组成；(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成；(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9和10中任一个的肽组成。
在一个优选实施方案中，所述LCVR的第5-107位由SEQ IDNO：26、31、35、37和41中任一个的肽组成。
在进一步的方面，本发明涉及一种编码本发明的可变区、本发明的单克隆抗体或其各个链的核酸分子。在一个优选实施方案中，所述核酸分子编码选自以下的肽：(a)本发明的HCVR，其中优选地所述HCVR包含或者优选地由SEQ ID NO：24、28、33、39、43和47中任一个的肽组成；(b)本发明的LCVR，其中优选地所述LCVR包含或者优选地由SEQ ID NO：26、31、35、37、41、45和49中任一个的肽组成；(c)本发明的单链抗体，其中优选地所述单链抗体包含或者优选地由SEQ ID NO：60、62、64、66、68、70和72中任一个的肽组成；(d)本发明的γ2重链，其中优选地所述γ2重链包含或者优选地由SEQ IDNO：73、75、77、80、82和84中任一个的肽组成；(e)本发明的λ轻链，其中优选地所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：74、76、78、79、81和85中任一个的肽组成，(f)本发明的κ轻链，其中优选地所述κ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：83的肽组成；和(g)本发明的单克隆抗体。
在一个进一步优选的实施方案中，所述核酸分子包含或由以下序列组成：SEQ ID NO：23、27、29、32、38、42和46中任一个的核苷酸序列；和/或SEQ ID NO：25、30、34、36、40、44和48中任一个的核苷酸序列；和/或SEQ ID NO：59、61、63、65、67、69和71中任一个的核苷酸序列。
在进一步的方面，本发明涉及包含至少一种本发明的核酸分子的表达载体。适于表达本发明的单克隆抗体的表达载体例如在PCT/EP2007/061570中公开。
在进一步的方面，本发明涉及包含本发明的至少一种核酸分子或至少一种表达载体的宿主细胞，其中优选地所述宿主细胞是细菌细胞或真核细胞。在一个优选实施方案中，所述宿主细胞是选自以下的真核细胞：(a)酵母细胞，(b)昆虫细胞；和(c)哺乳动物细胞，其中优选地所述哺乳动物细胞选自HEK-293T细胞、CHO细胞和COS细胞。非常优选地，所述哺乳动物细胞是HEK-293T细胞。
本发明的单克隆抗体可以掺入适于向受试者施用的组合物中。因此，在进一步的方面，本发明涉及一种包含至少一种本发明的单克隆抗体的药物组合物，其中优选地所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂例如在Remington，The Science and Practice of Pharmacy，19th edition，Gennaro(ed.)，Mack publishing Co.，Easton，PA，1995中公开。本发明的药物组合物以单剂量或多剂量施用。
在一个优选实施方案中，所述药物组合物进一步包含至少一种另外的抗体，其中优选地所述至少一种另外的抗体特异性结合尼古丁。
本发明的单克隆抗体可以用于被动免疫，优选地用于人的被动免疫，进一步优选地用于对抗尼古丁。本发明的单克隆抗体因此在尼古丁成瘾的治疗中有用。在进一步的方面，本发明涉及一种被动免疫方法，优选地对抗尼古丁的被动免疫方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本发明的单克隆抗体或有效量的本发明的药物组合物。
本发明的单克隆抗体和/或药物组合物优选地施用于受试者，优选地施用于人，使用标准给药技术，优选地选自口服、静脉内给药、腹膜内给药、皮下给药、经肺给药、透皮给药、肌肉内给药、鼻内给药、口腔给药、舌下给药和栓剂给药。
在进一步的方面，本发明涉及一种治疗尼古丁成瘾的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本发明的单克隆抗体或有效量的本发明的药物组合物，其中优选地所述受试者是人，并且其中进一步优选地所述受试者为尼古丁成瘾的。
在进一步的方面，本发明涉及用于被动免疫的本发明的单克隆抗体或本发明的药物组合物，优选地用于对抗尼古丁，优选地用于人，其中进一步优选地所述单克隆抗体施用于所述人。
在进一步的方面，本发明涉及用于治疗(优选地人的)尼古丁成瘾的本发明的单克隆抗体或本发明的药物组合物。
在进一步的方面，本发明涉及本发明的单克隆抗体在制备用于被动免疫(优选地对抗尼古丁)的药物中的用途。
在进一步的方面，本发明涉及用于被动免疫(优选地对抗尼古丁)的本发明的单克隆抗体。
在进一步的方面，本发明涉及本发明的单克隆抗体在制备用于治疗(优选地人的)尼古丁成瘾的药物中的用途。
在进一步的方面，本发明涉及在治疗(优选地人的)尼古丁成瘾的方法中使用的本发明的单克隆抗体。
本发明的另一方面是本发明的抗体在定量和/或定性检测尼古丁的方法中的应用，优选地检测血样，最优选地通过ELISA检测。
应当理解，本发明的所有方面都涉及此处公开的任何单克隆抗体。
实施例
实施例1
通过哺乳动物细胞展示法鉴定尼古丁特异性单链抗体
使用BD VacutainerTM CPTTM试管法(BD Bioscience)，从接种Qβ-尼古丁的志愿者的32ml肝素化血液中分离外周血单核细胞(PBMC)。PBMC与Alexa 647nm-标记的Qβ(3μg/ml)和小鼠γ球蛋白(10ug/ml；Jackson ImmunoResearch)预温育，然后用以下物质染色：(1)Qβ-尼古丁(1μg/ml)与Alexa 488nm-标记的Qβ-特异性小鼠mAb(1μg/ml)和Alexa488nm-标记的尼古丁特异性小鼠mAb(1μg/ml)组合；(2)PE-标记的小鼠抗人IgM(1∶50稀释；BD Biosciences Pharmingen)，小鼠抗人IgD(1∶100稀释；BD Biosciences Pharmingen)，小鼠抗人CD14(1∶50稀释；BD Biosciences Pharmingen)和小鼠抗人CD3(1∶50稀释；BD BiosciencesPharmingen)抗体；和(4)PE-德克萨斯红-标记的小鼠抗人CD19抗体(1∶50稀释；Caltag Laboratories)。染色后，洗涤并过滤细胞，并且在FACSVantage SE流式细胞仪(Becton Dickinson)中分选443个尼古丁特异性B细胞(FL1-阳性、FL2-阴性、FL3-阳性、FL4-阴性)。
基本如以前所述使用抗原特异性B细胞构建基于辛德毕斯病毒的scFv细胞表面展示文库(基于辛德毕斯病毒的筛选总的请见WO1999/025876A1，其在抗体筛选中的应用请见PCT/EP2007/061570)。展示尼古丁特异性scFv抗体的细胞使用RNase-尼古丁与RNase特异性兔多克隆抗体(2.5μg/ml；Abcam)和FITC-标记的驴抗兔IgG抗体(1.5μg/ml；Jackson ImmunoResearch)的组合进行分离。将每个细胞分选到含有50％汇合的BHK饲养细胞的24孔板的一个孔中。病毒扩散后(分选后2天)，通过FACS分析检测感染的细胞的尼古丁结合，以鉴定编码尼古丁特异性scFv抗体的病毒克隆。
实施例2
尼古丁特异性抗体的基因拯救、ELISA筛选和测序
如以前所述(参见申请PCT/EP2007/061570)对编码推断的尼古丁特异性抗体的BHK细胞的上清液(均含有单克隆重组辛德毕斯病毒)进行RT-PCR。得到的各自包含scFv编码区的PCR产物用限制性内切核酸酶Sfi1消化，并克隆到表达载体pCEP-SP-Sfi-Fc(在申请PCT/EP2007/061570中作为SEQ ID NO：37公开)中，以允许在CMV启动子的控制下表达与C-末端人Fc-γ1结构域融合的scFv蛋白。
对于ELISA分析，使用Lipofectamin 2000(Invitrogen)，按照厂商推荐，以24孔板的形式，用每个克隆转染HEK-293T细胞。转染2-3天后，收集含有瞬时表达的scFv-Fc融合蛋白的上清液。为了检查尼古丁特异性结合，用在磷酸盐缓冲液(PBS)中浓度为4μg/ml的尼古丁偶联的RNAse包被ELISA板，4℃过夜。平行地，通过夹心法ELISA监测scFv-Fc表达水平。为此，用浓度为2.5μg/ml的Fcγ特异性的山羊抗人F(ab′)2抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories 109-006-098)包被一组相同的板。然后用洗涤缓冲液(PBS/0.05％Tween)洗板，并用洗涤缓冲液中的3％BSA在室温下封闭2小时。然后再次洗板，并与开始于1/10稀释液的细胞培养上清液的3倍连续稀释液温育。所有稀释都在洗涤缓冲液中进行。板在室温下温育2小时，然后用洗涤缓冲液充分洗涤。然后如下检测结合的scFv-Fc融合蛋白：与HRPO-标记的Fcγ-特异性山羊抗人IgG抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories 109-035-098)温育1小时。用洗涤缓冲液充分洗涤后，用OPD溶液将板显色(1个OPD片，25ml OPD缓冲液和8μl 30％H2O2)5-10分钟，用5％H2SO4溶液终止反应。然后用ELISA读板器(Biorad Benchmark)在OD 450nm读板。
编码尼古丁特异性scFv抗体的ELISA阳性克隆如以前所述进行测序(参见申请PCT/EP2007/061570)，包括克隆F018、F063、J004、J042、N049、I022和N038(参见表2)。
表2.尼古丁特异性scFv抗体的核酸序列和氨基酸序列的SEQ ID NO
  scFv   核酸序列   氨基酸序列
  F018   59   60
  F063   61   62
  J004   63   64
  J042   65   66
  N049   67   68
  I022   69   70
  N038   71   72
其中，所有重链可变区包含VH4家族序列(SEQ ID NO：24、28、33、39、43和47)。除包含Vκ3序列(SEQ ID NO：45)的I022以外，轻链可变区都包含Vλ1家族序列(SEQ ID NO：26、31、35、37、41和49)。重要的是，抗体F018、F063、J004、J042和N049的重链和轻链可变区彼此非常密切地相关，仅在几个氨基酸位点处不同。克隆F063和J042的重链可变区相同(SEQ ID NO：28)。关于尼古丁结合抗体的可变区包含的核酸序列和氨基酸序列的概括在表3中提供。
表3.尼古丁特异性抗体HCVR和LCVR包含的核酸序列和氨基酸序列的SEQ ID NO
  scFv   核酸序列(HCVR)1   氨基酸序列(HCVR)   核酸序列(LCVR)2   氨基酸序列(LCVR)
  F018   23   24   25   26
  F063   27   28   30   31
  J004   32   33   34   35
  J042   29   28   36   37
  N049   38   39   40   41
  I022   42   43   443   45
  N038   46   47   48   49
1)所有HCVR包含VH4序列；
2)除了I022的LCVR以外，所有LCVR包含Vλ1序列；
3)I022的LCVR包含Vκ3序列。
实施例3
尼古丁特异性scFv-Fc融合蛋白的表达和纯化
scFv-Fc融合蛋白的大规模表达在HEK-293T细胞中进行。转染前一天，对于将要表达的每种蛋白质，将5x106个293T细胞接种到10cm组织培养板上。然后使用Lipofectamin Plus(Invitrogen)，按照厂商推荐，用相应的scFv-Fc融合构建体转染细胞，温育1天，并重新接种到一块存在1μg/ml嘌呤霉素的14cm培养皿上。选择3天后，将嘌呤霉素抗性细胞转移到三个用聚-L-赖氨酸包被的14cm板上，并生长至汇合。然后将培养基替换为无血清培养基，每3天收集含有相应的scFv-Fc融合蛋白的上清液，并通过0.22μM Millex GV无菌滤器(Millipore)过滤。
对于每种scFv-Fc融合蛋白，将连续收获物合并在一起，并且加到蛋白A-sepharose柱上。用10倍柱体积的磷酸盐缓冲液(PBS)洗柱，结合的蛋白质用0.1M甘氨酸pH 3.6洗脱。将1ml级分收集在含有用于中和的0.1ml 1M Tris pH 7.5的试管中。通过SDS-PAGE分析并合并含蛋白质级分。通过使用10'000MWCO Slide-A-Lyzer透析盒(Pierce)透析将缓冲液更换为PBS。然后将PBS中的纯化蛋白质通过0.22μMMillex GV无菌滤器(Millipore)过滤，并等分。将工作贮存液保存在4℃下，而长期贮存的等份在液氮中快速冰冻，并保存在-80℃下。
实施例4
通过抑制ELISA验证尼古丁特异性结合
为了排除抗体的可能的接头特异性，通过抑制ELISA证实与游离尼古丁的结合。因此，ELISA板用在磷酸盐缓冲液(PBS)中浓度为4μg/ml的尼古丁-偶联的RNAse包被，4℃过夜。然后用洗涤缓冲液(PBS/0.05％Tween)洗板，并在室温下用洗涤缓冲液中的3％BSA封闭2小时。然后再次洗板，在存在或不存在浓度逐渐提高的游离尼古丁(0.1-100μM)的情况下，与浓度为100ng/ml的纯化的scFv-F018、scFv-F063、scFv-I022、scFv-J004、scFv-N038和scFv-N049温育。板在室温下温育2小时，然后用洗涤缓冲液充分洗涤。然后如下检测结合的scFv-Fc融合蛋白：与HRPO-标记的Fcγ-特异性山羊抗人IgG抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories 109-035-098)温育1小时。用洗涤缓冲液充分洗涤后，用OPD溶液使板显色(1个OPD片，25ml OPD缓冲液和8μl 30％H2O2)5-10分钟，并用5％H2SO4溶液终止反应。然后用ELISA读板器(Biorad Benchmark)在OD 450nm读板。每种抗体与固定的尼古丁的结合被游离的尼古丁有效抑制，IC50值在低微摩尔范围内。
实施例5
人尼古丁特异性IgG2的构建、表达和纯化
使用可变区特异性转移引物(在申请PCT/EP2007/061570中作为SEQ ID NO：92-103公开)，通过PCR扩增scFv-F018、scFv-F063、scFv-I022、scFv-J004、scFv-J042、scFv-N038和scFv-N049的重链和轻链可变区编码区段。例如，使用引物VL-Sac1-F4(5’-CAG GCG GCC GAGATC GAG CTC ACT CAG C-3’)和VL-EcoR5-B1(5’-ACC GCC GAGGAT ATC CAG CTG GGT-3’)扩增编码抗体F018的轻链可变区的DNA。使用引物VH-XhoI-F(5’-SAG GTG CAG CTG CTC GAG TCKGG-3’)和VH-ApaI-B(5’-GCC ACT AGT GAC CGA TGG GCC-3’)扩增编码重链可变区的DNA。编码其它轻链和重链可变区的DNA相应地扩增。
得到的λ或κ轻链可变区PCR产物用限制酶SacI和EcoR5消化，通过琼脂糖凝胶电泳纯化，并分别连接到SacI-EcoR5消化的pCMV-LC-λ或pCMV-LC-κ中(在申请PCT/EP2007/061570中作为SEQID NO：110和71公开)。得到的载体允许表达完整的人轻链，包括信号肽，例如F018λ轻链(SEQ ID NO：56)。类似地，重链可变区PCR产物用限制酶XhoI和ApaI消化，凝胶纯化，并且连接到XhoI-ApaI消化的pCMV-HC-γ2内(在申请PCT/EP2007/061570中作为SEQ ID NO：78公开)。得到的载体允许表达完整的人γ2重链，包括信号肽，例如F018γ2重链(SEQ ID NO：55)。
pCMV-LC-λ或-κ表达构建体各自与相应的pCMV-HC-γ2表达构建体的共表达原则上能够产生完整的IgG2。但是，为了提高产率和有利于大规模的抗体生产，首先将重链和轻链编码区组合到一个基于EBNA的表达载体pCB15中(在申请PCT/EP2007/061570中作为SEQID NO：104公开)。例如，为了将抗体F018表达为完整的IgG2，通过用限制酶AscI和PacI消化从pCMV-F018-HC-γ2上切下γ2重链编码区，得到的1403bp片段通过琼脂糖凝胶电泳纯化，然后连接到Asc1-Pac1消化的pCB15中，产生pCB15-F018-HC-γ2。然后通过用Nhe1和Pme1消化从pCMV-F018-LC-λ上切下F018λ轻链编码区，凝胶纯化得到的723bp片段，然后连接到Nhe1-Pme1消化的pCB15-F018-HC-γ2内，产生完整的IgG表达载体pCB15-F018-IgG2λ。完全如对于scFv-Fc融合蛋白所述(实施例2)，在HEK-293T细胞中进行完整IgG的表达。
实施例6
完全人尼古丁特异性IgG2的构建、表达和纯化
如实施例4所述构建的pCB15表达载体引导主要为人的完整IgG2分子的合成。但是，与完全人抗体相比，仍然存在两个微小的差异。第一，重链或轻链信号肽的序列由表达载体编码，并且一般不对应于所述可变区的天然信号肽。第二，位于重链或轻链可变区侧翼的氨基酸位点由载体预先决定，例如，是由于存在限制性位点。因此，为了产生完全人mAb，需要修正重链和轻链表达载体中每一个的这些差异。例如，引导包括天然信号肽的完全人F018γ2重链(SEQ IDNO：57)表达的载体如下产生。首先使用引物F018-HC-fh-F1(5’-TTCCTC CTG TTG GTG GCA GCA CCC AGG TGG GTG CTG TCC CAGCTG CAA CTG CAG GAG TC-3’)和F018-HC-fh-B1(5’-GAC CGA TGGGCC CTT GGT GGA AGC-3’)，通过PCR从质粒pCMV-F018-HC-γ2扩增F018重链可变区。得到的PCR产物然后使用引物F018-HC-fh-F2(5’-GAG GGC GCG CCA CCA TGA AGC ACC TGT GGT TCT TCCTCC TGT TGG TGG CAG C-3’)和F018-HC-fh-B1进一步扩增。PCR终产物用限制酶Asc1和Apa1消化，通过琼脂糖凝胶电泳纯化，并连接到Asc1-Apa1消化的pCMV-HC-γ2内，产生质粒pCMV-fhF018-HC-γ2。
类似地，引导包括天然信号肽的完全人F018λ轻链(SEQ IDNO：58)表达的载体如下产生。首先，使用引物F018-LC-fh-F1(5’-CCTCCT CAC CCT CCT CAC TCA CTG CGC CGG GTC CTG GGC CCAGTC TGT GCT CAC-3’)和F018-LC-fh-B1(5’-GGG CTG ACC TAG CACGGT CAG CTG GGT GCC-3’)，通过PCR从pCMV-F018-LC-λ扩增F018轻链可变区。平行地，使用引物F018-LC-fh-F3(5’-GGC ACCCAG CTG ACC GTG CTA GGT CAG CCC-3’)和T7(5’-TAA TAC GACTCA CTA TAG GG-3’)扩增λ轻链。其次，使用引物F018-LC-fh-F2(5’-GAG GCT AGC GCC ACC ATG GCC GGC TTC CCC CTC CTC CTCACC CTC CTC ACT C-3’)和T7通过PCR装配得到的PCR产物。PCR终产物用限制酶Nhe1和Pme1消化，通过琼脂糖凝胶电泳纯化，并连接到Nhe1-Pme1消化的pCMV-LC-κ内，产生质粒pCMV-fhF018-LC-λ。
使用如实施例4所述的克隆策略，通过将重链和轻链编码区依次克隆到pCB15内，构建引导完全人mAb F018表达的载体pCB15-fhF018-IgG2λ。引导完全人mAbs F063、I022、J004、J042、N038和N049表达的表达载体以类似的方式构建。
实施例7
通过平衡透析确定亲和力
使用DispoEquilibriumDialyzer(Harvard Biosciences)，通过平衡透析测定抗体对(S)-(-)-尼古丁的亲和力。透析仪的两个室用膜(10'000Da截断值)隔开。一个室充满在PBS/2％BSA中浓度分别为5.4μg/ml或7.5μg/ml的纯化的scFv-Fc或IgG2，而另一个室不含抗体。使用浓度为3-444nM的氚标记的(S)-(-)-尼古丁(Amersham)。让平衡透析进行48-72小时。从室的两侧取等份，并在闪烁计数器中测量放射性。对应于抗体结合的(S)-(-)-尼古丁的放射性通过用含抗体的室测量的放射性减去不含抗体的室测量的放射性而计算。由不含抗体的室测量的放射性确定游离(S)-(-)-尼古丁浓度。通过用单点结合模型拟合作为游离(S)-(-)-尼古丁浓度的函数的测定的结合放射性，获得平衡解离常数(Kd)。大多数尼古丁特异性抗体以低纳摩尔范围的Kd值结合游离的(S)-(-)-尼古丁(表4)。IgG2抗体的亲和力与scFv-Fc相当，Kd值相差不超过大约2倍。IgG2-F018具有7nM的解离常数，几乎比scFv-Fc-F018测量的值低2倍，比另一IgG2的Kd至少低4倍。值得注意的是，抗(S)-(-)-尼古丁多克隆抗体的亲和力为30-70nM，即大大低于克隆F018的亲和力(Maurer P.等人.，2005，Eur.J.Immunol.35，2031-2040)。
表4.通过平衡透析测定的解离常数Kd值(nM)。除了只测定一次的IgG2-N038以外，所示的值为至少2个独立实验的平均值±SD。
  形式   F018   F063   I022   J004   J042   N038   N049
  scFv-Fc   11.5±1.5   70.5±14   42.5±17   33.3±2   47.0±3.1   686.3±58   72.7±5.6
  IgG2   7.4±1.2   31.4±13   89.9±9.8   64.5±2.2   30.2±11   743.8   35.6±3.5
mAb IgG2-F018与(-)-可替宁和乙酰胆碱的交叉反应性通过将这些化合物的10倍连续稀释液(1nM-100μM)与56nM氚标记的(S)-(-)-尼古丁在如上所述的平衡透析室中共温育来确定(图1)。如预期的，未标记的(-)-尼古丁容易置换氚标记的(S)-(-)-尼古丁。相反，在结构上与尼古丁无关但是结合尼古丁乙酰胆碱受体的相同结合袋的乙酰胆碱(CelieP.H.等人.，2004，Neuron 41，907-914)甚至在4000倍摩尔过量时也不干扰(S)-(-)-尼古丁的结合。类似地，作为(S)-(-)-尼古丁的主要代谢产物并且在吸烟者血液中相对于尼古丁10-20倍摩尔过量存在的(-)-可替宁(Benowitz N.L.，1997，Br.J.Clin.Pharmacol.43，259-267)不能与(S)-(-)-尼古丁有效竞争结合IgG2-F018。基于观测到的IC50，可以估计IgG2-F018与(-)-可替宁的结合比与(S)-(-)-尼古丁的结合弱大约1000倍。因此，吸烟者血液中摩尔过量的(-)-可替宁的存在不可能干扰IgG2-F018的治疗效果。
我们接下来测定了mAbs IgG2-F018、-F063、-J004、-J042和-N049对尼古丁的(R)-(+)-异构体的亲和力。这种立体异构体存在于烟草植物中。另外，它可以通过吸烟时的燃烧过程形成，并且对中枢神经系统具有与(S)-(-)-尼古丁性质上相似的活性(Hukkanen J.等人.，2005，Pharmacol.Rev.57，79-115)。因此，在浓度逐渐提高的未标记的(R)-(+)-尼古丁(1nM-100μM)的存在下，通过平衡透析检测固定浓度的氚标记的(S)-(-)-尼古丁(F018：56nM；F063、J004、J042、N049：111nM)与每种抗体的结合。通过用单点竞争模型拟合作为(R)-(+)-尼古丁浓度的函数的测定的结合放射性获得平衡解离常数(Kd)。令人惊奇的是，(R)-(+)-尼古丁在与(S)-(-)-尼古丁竞争结合每种抗体方面非常有效，其Kd值比(S)-(-)-尼古丁大约低2-5倍(表5)。
表5.通过平衡透析测定的抗体-(R)-(+)-尼古丁相互作用的解离常数Kd(nM)
  形式   F018   F063   J004   J042   N049
  IgG2   3.1   6.6   12.6   7.7   10.5
实施例8
小鼠血浆和脑中尼古丁分布的评价
由5-6只雌性Balb/c小鼠组成的各组小鼠腹膜内注射0.1-3mg各种重组人IgG2单克隆抗体。一天后，通过向尾静脉内注射氚标记的(S)-(-)-尼古丁(Amersham)(375、750或1500ng)分析尼古丁进入脑的抑制。5分钟后通过CO2窒息杀死小鼠，并采集血液和脑。由存在的放射性计算血清和脑中的尼古丁浓度。根据脑的血含量校正脑尼古丁浓度(3μl/100mg)。相对于在注射对照IgG的小鼠脑中发现的尼古丁浓度，计算脑中的尼古丁摄取的降低百分比。对于检测的所有尼古丁特异性抗体，观察到尼古丁向脑中分布的减少。对于大多数抗体，在剂量为每只小鼠0.5mg时观察到的减少一般为40％或更高。在这些实验条件下最强的mAb是F018，尼古丁向脑中的进入总是减少60％以上(表6和7)。
表6.尼古丁特异性抗体对尼古丁进入小鼠脑的抑制(使用0.5mg IgG2被动免疫；使用750ng尼古丁攻击)
  抗体   脑尼古丁(cpm/g)   ％减少
  对照IgG   131559±14650   -
  F018   46717±3550   64
  J004   77002±9293   41
  J042   72678±7423   45
  N049   68395±2885   48
表7.尼古丁特异性抗体对尼古丁进入小鼠脑的抑制(使用0.5mg IgG2被动免疫；使用750ng尼古丁攻击)
  抗体   脑尼古丁(cpm/g)   ％减少
  对照IgG   114048±13786   -
  F018   42803±3751   62
  F063   54783±3909   52
  I022   68687±5498   40
  N038   91823±14311   19
实施例9
使用抗尼古丁抗体F018的重链可变区鉴定互补轻链可变区(“链改组”)
本文中未提供序列的、本实施例中使用的所有引物的核苷酸序列可以在Phage Display-A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press，2001，Protocol 9.2中在相同的名称下找到。
使用引物HSCVH35-FL和HSC-F018-B(5’-CCT GGC CGG CCTGGC CAC TAG TGA CCG ATG GGC CCT TGG TGG AAG C-3’，SEQID NO：86)，通过PCR从包含scFv-F018序列(SEQ ID NO：59)的DNA分子扩增编码抗体F018的重链可变区的DNA序列。使用4种有义引物HSCK1-F、HSCK24-F、HSCK3-F和HSCK5-F的等摩尔混合物，加上4种反义引物HSCJK14o-B、HSCJK2o-B、HSCJK3o-B和HSCJK5o-B的等摩尔混合物，通过PCR从来自尼古丁-载体偶联物免疫的人受试者的B细胞的cDNA扩增编码人κ轻链可变区的DNA序列的文库。使用9种有义引物HSCLam1a、HSCLam1b、HSCLam2、HSCLam3、HSCLam4、HSCLam6、HSCLam78、HSCLam9和HSCLam10的等摩尔混合物，加上3种反义引物HSCJLam1236、HSCJLam4和HSCJLam57的等摩尔混合物，通过PCR从来自尼古丁-载体偶联物免疫的人受试者的B细胞的cDNA扩增编码人λ轻链可变区的DNA序列的文库。
为了选择互补轻链可变区，使用引物RSC-F和RSC-B，通过F018 VH PCR产物与Vκ文库PCR产物或Vλ文库PCR产物的PCR重叠延伸，装配scFv编码区。得到的约750-800bp PCR产物编码尼古丁特异性抗体F018的5’轻链可变区文库(κ或λ)和3’重链可变区，该轻链可变区和重链可变区通过18个氨基酸的柔性接头连接，侧翼为两个SfiI限制性位点。scFv-κ和-λ文库片段以等摩尔比例混合，用限制性内切核酸酶SfiI消化，并克隆到载体pDel-SP-TM内，用于基本如实施例1所述通过基于辛德毕斯病毒的scFv细胞表面展示法进行筛选。或者，将SfiI-消化的scFv文库片段克隆到SfiI-消化的pComb3H(Rader C，Barbas CF 3rd.，1997，Curr Opin Biotechnol.8，503-508)中。然后表达抗体，并使用所述的程序通过噬菌体展示法进行选择，用于结合固定的RNAse-尼古丁偶联物(Phage Display：A Laboratory Manual，Cold SpringHarbor Laboratory Press，2001)。
序列表
SEQ ID NO：1 HCDR1-F018/F063/J004/J042/N049
GGSI
 
SEQ ID NO：2 HCDR2-F018/F063/J004/J042/N049
IYSSGST
 
SEQ ID NO：3 HCDR3-F018
VAWFGDLLSLKGVEL
 
SEQ ID NO：4 HCDR3-F063/J004/J042/N049
VVWFGDLLSLKGVEL
 
SEQ ID NO：5 LCDR1-F018/J042
SSNIGSNY
 
SEQ ID NO：6 LCDR1-F063/N049
SSNIGSKN
 
SEQ ID NO：7 LCDR1-J004
SSNIGSSY
 
SEQ ID NO：8 LCDR2-F018/F063/J004/J042/N049
RNN
 
SEQ ID NO：9 LCDR3-F018
AAWDDSLSAWV
 
SEQ ID NO：10 LCDR3-F063/J004/J042/N049
AAWDDSLSGWV
 
SEQ ID NO：11 HCDR1-I022
GGSISSTSYY
 
SEQ ID NO：12 HCDR2-I022
ISYSGST
 
SEQ ID NO：13 HCDR3-I022
ARILWFGEYLGDY
 
SEQ ID NO：14 LCDR1-I022
QSVSNY
 
SEQ ID NO：15 LCDR2-I022
GAS
 
SEQ ID NO：16 LCDR3-I022
QQYYSTPWT
 
SEQ ID NO：17 HCDR1-N038
GYSISSGYY
 
SEQ ID NO：18 HCDR2-N038
SNHSGST
 
SEQ ID NO：19 HCDR3-N038
AREAGYSSSWYFDY
 
SEQ ID NO：20 LCDR1-N038
SSNIGNNY
 
SEQ ID NO：21 LCDR2-N038
DNN
 
SEQ ID NO：22 LCDR3-N038
GTWDSSLSAWV
 
SEQ ID NO：23 VH-F018(117的aa7-117，NA)
TCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCT
CCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTC
TAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCACATCCGTAGACACGTCC
AAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTG
TGGCGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGT
CACCGTCTCCTCA
 
SEQ ID NO：24 VH-F018(117的aa7-117，AA)
SGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTTSVDTS
KNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVAWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSS
 
SEQ ID NO：25 VL-F018(110的aa5-107，NA)
ACTCAGCCACCTTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCA
GCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACT
CCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCT
GGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTG
CAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGCACCCAGCTG
 
SEQ ID NO：26 VL-F018(110的aa5-107，AA)
TQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKS
GTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAWVFGGGTQL
 
SEQ ID NO：27 VH-F063(117的aa7-117，NA)
TCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCT
CCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTC
TAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCC
AAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTG
TGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTCGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGT
CACCGTCTCCTCA
 
SEQ ID NO：28 VH-F063-J042(117的aa7-117，AA)
SGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTS
KNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：29 VH-J042(117的aa7-117，NA)
TCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCT
CCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTC
TAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCC
AAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTG
TGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGT
CACCGTCTCCTCA
 
SEQ ID NO：30 VL-F063(110的aa5-107，NA)
ACTCAGCCACCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCGTCTCTTGTTCTGGAAGCA
GCTCTAACATCGGAAGTAAAAATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACT
CCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCT
GGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTG
CAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCAGCGGAGGCACCAAGGTG
 
SEQ ID NO：31 VL-F063(110的aa5-107，AA)
TQPPSVSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKS
GTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFSGGTKV
 
SEQ ID NO：32 VH-J004(117的aa7-117，NA)
TCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCACACCTGCACTGTCTCTGGTGGCT
CCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTC
TAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCC
AAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTG
TGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGT
CACCGTCTCCTCA
 
SEQ ID NO：33 VH-J004(117的aa7-117，AA)
SGPGLVKPSETLSHTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTS
KNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSS
 
SEQ ID NO：34 VL-J004(110的aa5-107，NA)
ACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCA
GCTCCAACATCGGAAGTAGTTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACT
CCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCT
GGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTG
CAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGCACCGAGCTG
 
SEQ ID NO：35 VL-J004(110的aa5-107，AA)
TQPPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSSYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKS
GTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTEL
 
SEQ ID NO：36 VL-J042(110的aa5-107，NA)
ACCCAGGAGCCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCA
GCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACT
CCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGCCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCT
GGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTG
CAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTG
SEQ ID NO：37 VL-J042(110的aa5-107，AA)
TQEPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGAPDRFSGSKS
GTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKL
 
SEQ ID NO：38 VH-N049(117的aa7-117，NA)
TCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGTT
CCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTC
TAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCC
GAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTG
TGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGT
CACCGTCTCCTCA
 
SEQ ID NO：39 VH-N049(117的aa7-117，AA)
SGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTS
ENQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSS
 
SEQ ID NO：40 VL-N049(110的aa5-107，NA)
ACTCAGCCACCCACAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCA
GCTCCAACATCGGAAGTAAAAATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACT
CCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCT
GGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTG
CAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGCACCAAGGTG
 
SEQ ID NO：41 VL-N049(110的aa5-107，AA)
TQPPTVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKS
GTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKV
 
SEQ ID NO：42 VH-I022(121的aa7-121，NA)
TCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCT
CCATCAGCAGTACTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTG
GATTGGGAGTATCTCTTATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACC
ATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCAGACA
CGGCTGTGTATTACTGTGCGAGGATACTATGGTTCGGAGAGTACCTAGGGGACTACTGGGGCCA
GGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
 
SEQ ID NO：43 VH-I022(121的aa7-121，AA)
SGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVT
ISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARILWFGEYLGDYWGQGTLVTVSS
 
SEQ ID NO：44 VL-I022(107的aa5-104，NA)
ACCCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCA
GTCAGAGTGTTAGCAACTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCT
CATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGG
ACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATCACTGTCAGC
AATATTATAGTACTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAAGTG
 
SEQ ID NO：45 VL-I022(107的aa5-104，AA)
TQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG
TDFTLTISRLEPEDFAVYHCQQYYSTPWTFGQGTKV
SEQ ID NO：46 VH-N038(121的aa7-121，NA)
TCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACT
CCATCAGCAGTGGTTACTACTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGAT
TGGGAGTAGCAATCATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAGGAGTCGAGTCACCATA
TCAGTAGACACGTCCAAGAACCAATTCTCCCTGAAGGTGAACTCTGTGACCGCCGCAGACACGG
CCGTTTATTACTGTGCGAGAGAGGCGGGGTATAGCAGCAGCTGGTACTTTGACTACTGGGGTCA
GGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
 
SEQ ID NO：47 VH-N038(121的aa7-121，AA)
SGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGSSNHSGSTYYNPSLRSRVTI
SVDTSKNQFSLKVNSVTAADTAVYYCAREAGYSSSWYFDYWGQGTLVTVSS
 
SEQ ID NO：48 VL-N038(110的aa5-107，NA)
ACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCA
GCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACT
CCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCT
GGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCG
GAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCCAGCTG
 
SEQ ID NO：49 VL-N038(110的aa5-107，AA)
TQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKS
GTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAWVFGGGTQL
 
SEQ ID NO：50 VH(aa1-6，所有的优选序列，AA)
QX1QLQX2，其中X1选自V和L，并且其中X2选自E和Q
 
SEQ ID NO：51 VL(aa1-4，F018，F063，J004，J042，N049，N038的优选序列，AA)
QSVL
 
SEQ ID NO：52 VL(aa1-4，I022的优选序列，AA)
EIVX1，其中X1选自L和M
 
SEQ ID NO：53 VL(aa108-110，F018，F063，J004，J042，N049，N038的优选序列，AA)
TVL
 
SEQ ID NO：54 VL(aa105-107，I022的优选序列，AA)
X1IK，其中A1选自D和E
 
SEQ ID NO：55 F018 γ2重链(具有侧翼序列和信号肽)
MDWTWRILFLVAAATGAHSQMQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIG
SIYSSGSTYYNPSLKSRVTTSVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVAWFGDLLSLKGVELWGQ
GTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV
LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVF
LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSV
LTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV
KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH
NHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：56 F018 λ轻链(具有侧翼序列和信号肽)
MAWALLLLTLLTQGTGSWAQSELTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAP
KLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAWVFGGGTQLDI
LGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSN
NKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
 
SEQ ID NO：57 完全人F018 γ2重链(具有侧翼序列和信号肽)
MKHLWFFLLLVAAPRWVLSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIG
SIYSSGSTYYNPSLKSRVTTSVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVAWFGDLLSLKGVELWGQ
GTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV
LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVF
LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSV
LTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV
KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH
NHYTQKSLSLSPGK
 
SEQ ID NO：58 完全人F018 λ轻链(具有侧翼序列和信号肽)
MAGFPLLLTLLTHCAGSWAQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAP
KLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAWVFGGGTQLTV
LGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSN
NKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
 
SEQ ID NO：59 scFv-F018 Sfi1-片段(NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCTCGTGCTGACTCAGCCACCTTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAG
GGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAG
CAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCC
CTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTC
CGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGCTTGGGTGTTCGGC
GGAGGCACCCAGCTGACCGTCCTCGGTGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTG
GCTCGGGCGGTGGTGGGGAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGA
GACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCA
GGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCC
TCAAGAGTCGAGTCACCACATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTC
TGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGCGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTG
AAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCC
CATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
 
SEQ ID NO：60 scFv-F018 Sfi1-片段(AA)
XAELVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDR
FSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAWVFGGGTQLTVLGGGSSRSSSSGGGGSG
GGGEVQLVQSGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKS
RVTTSVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVAWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSV
TSGQA
 
SEQ ID NO：61 scFv-F063 Sfi1-片段(NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCTCGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAG
GGTCACCGTCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCTAACATCGGAAGTAAAAATGTATACTGGTACCAG
CAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCC
CTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTC
CGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCAGC
GGAGGCACCAAGGTGACCGTCCTAGGTGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTG
GCTCGGGCGGTGGTGGGGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGA
GACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCA
GGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCC
TCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTC
TGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTG
AAGGGGGTCGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCC
CATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
 
SEQ ID NO：62 scFv-F063 Sfi1-片段(AA)
XAELVLTQPPSVSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDR
FSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFSGGTKVTVLGGGSSRSSSSGGGGSG
GGGEVQLVESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKS
RVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSV
TSGQA
 
SEQ ID NO：63 scFv-J004 Sfi1-片段(NA)
NGGCCCAGGCGGCCGGGCTCGTGGTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAG
GGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAGTTATGTATACTGGTACCAG
CAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCC
CTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTC
CGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGC
GGAGGCACCGAGCTGACCGTCCTCGGTGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTG
GCTCGGGCGGTGGTGGGGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGA
GACCCTGTCCCACACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCA
GGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCC
TCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTC
TGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTG
AAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCC
CATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
 
SEQ ID NO：64 scFv-J004 Sfi1-片段(AA)
XAGLVVTQPPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSSYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDR
FSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTELTVLGGGSSRSSSSGGGGSG
GGGEVQLVESGPGLVKPSETLSHTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKS
RVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSV
TSGQA
 
SEQ ID NO：65 scFv-J042 Sfi1-片段(NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCACGTGGTGACCCAGGAGCCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAG
GGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAG
CAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGCCC
CTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTC
CGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGC
GGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTG
GCTCGGGCGGTGGTGGGCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGA
GACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCA
GGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCC
TCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTC
TGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTG
AAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCC
CATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
 
SEQ ID NO：66 scFv-J042 Sfi1-片段(AA)
XAEHVVTQEPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGAPDR
FSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLGGGSSRSSSSGGGGSG
GGGQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKS
RVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSV
TSGQA
 
SEQ ID NO：67 scFv-N049 Sfi1-片段(NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCTCGTGCTGACTCAGCCACCCACAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAG
GGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAAAAATGTATACTGGTACCAG
CAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCC
CTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTC
CGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGC
GGAGGCACCAAGGTGACCGTCCTAGGTGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTG
GCTCGGGCGGTGGTGGGCAGATCACCTTGAAGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGA
GACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGTTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCA
GGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCC
TCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCGAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTC
TGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTG
AAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCC
CATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
 
SEQ ID NO：68 scFv-N049 Sfi1-片段(AA)
XAELVLTQPPTVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDR
FSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKVTVLGGGSSRSSSSGGGGSG
GGGQITLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKS
RVTISVDTSENQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSV
TSGQA
 
SEQ ID NO：69 scFv-I022 Sfi1-片段(NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCACATGACCCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGA
AAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAACTACTTAGCCTGGTACCAGCAG
AAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAG
ACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGA
AGATTTTGCAGTGTATCACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACC
AAAGTGGATATCAAAGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTG
GTGGGCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT
CACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTACTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAG
CCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTCTTATAGTGGGAGCACCTACTACAACC
CGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCT
GACCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGGATACTATGGTTCGGAGAG
TACCTAGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCC
CATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
 
SEQ ID NO：70 scFv-I022 Sfi1-片段(AA)
XAELHMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRF
SGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYHCQQYYSTPWTFGQGTKVDIKGGSSRSSSSGGGGSGGGGQ
VQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSL
KSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARILWFGEYLGDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV
TSGQA
 
SEQ ID NO：71 scFv-N038 Sfi1-片段(NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCTGGTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAA
GGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTACCAG
CAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTC
CTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGAC
TGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTTGGGTGTTCGGC
GGAGGGACCCAGCTGACCGTCCTCGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTG
GCTCGGGCGGTGGTGGAGAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGA
GACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCAGCAGTGGTTACTACTGGGGCTGG
ATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTAGCAATCATAGTGGGAGCACCT
ACTACAACCCGTCCCTCAGGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAATTCTC
CCTGAAGGTGAACTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGAGAGAGGCGGGG
TATAGCAGCAGCTGGTACTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCT
CCACCAAGGGCCCATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
 
SEQ ID NO：72 scFv-N038 Sfi1-片段(AA)
XAELLVTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDR
FSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAWVFGGGTQLTVLGGGSSRSSSSGGGGSG
GGGEVQLVQSGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGSSNHSGSTYYN
PSLRSRVTISVDTSKNQFSLKVNSVTAADTAVYYCAREAGYSSSWYFDYWGQGTLVTVSSASTK
GPSVTSGQA
 
SEQ ID NO：73 完全人F018 γ2重链
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVT
TSVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVAWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL
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FGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT
CVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVS
NKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE
NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
 
SEQ ID NO：74 完全人F018 λ轻链
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFS
GSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAWVFGGGTQLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEE
LQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSH
RSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
 
SEQ ID NO：75 完全人F063和J042 γ2重链
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVT
ISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL
APCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSN
FGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT
CVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVS
NKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE
NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
 
SEQ ID NO：76 完全人F063 λ轻链
QSVLTQPPSVSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFS
GSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFSGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEE
LQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSH
RSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
 
SEQ ID NO：77：完全人J004 γ2重链
QLQLQESGPGLVKPSETLSHTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVT
ISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL
APCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSN
FGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT
CVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVS
NKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE
NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
 
SEQ ID NO：78 完全人J004 λ轻链
QSVLTQPPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSSYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFS
GSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTELTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEE
LQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSH
RSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
 
SEQ ID NO：79 完全人J042 λ轻链
QSVLTQEPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGAPDRFS
GSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEE
LQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSH
RSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
 
SEQ ID NO：80 完全人N049 γ2重链
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVT
ISVDTSENQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL
APCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSN
FGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT
CVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVS
NKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE
NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
 
SEQ ID NO：81 完全人N049 λ轻链
QSVLTQPPTVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFS
GSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEE
LQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSH
RSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
 
SEQ ID NO：82 完全人I022 γ2重链
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPS
LKSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARILWFGEYLGDYWGQGTLVTVSSASTKGPS
VFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRT
PEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYK
CKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN
GQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
 
SEQ ID NO：83 完全人I022 κ轻链
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSG
SGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYHCQQYYSTPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG
TASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY
ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
 
SEQ ID NO：84 完全人N038 γ2重链
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGSSNHSGSTYYNPSL
RSRVTISVDTSKNQFSLKVNSVTAADTAVYYCAREAGYSSSWYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPS
VFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRT
PEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYK
CKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN
GQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
 
SEO ID NO：85 完全人N038 λ轻链
QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFS
GSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAWVFGGGTQLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEE
LQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSH
RSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
 
SEQ ID NO：86 HSC-F018-B
CCTGGCCGGCCTGGCCACTAGTGACCGATGGGCCCTTGGTGGAAGC

Claims (15)

1.特异性结合尼古丁的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体，并且
(a)其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：
(i)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成；
(ii)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成；和
(iii)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3和4中任一个的肽组成；优选地，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3的肽组成，且
(b)其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：
(i)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5、6和7中任一个的肽组成，优选地，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成；
(ii)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成；
(iii)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9和10中任一个的肽组成，优选地，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9的肽组成。
2.权利要求1的单克隆抗体，其中
(a)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24、28、33和39中任一个的肽组成，优选地，所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24的肽组成；且
(b)其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：26、31、35、37和41中任一个的肽组成，优选地，其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：26的肽组成。
3.前述权利要求中任一项的单克隆抗体，其中
(a)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：26的肽组成；
(b)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：28的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：31的肽组成；
(c)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：33的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：35的肽组成；
(d)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：28的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：37的肽组成；或
(e)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：39的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：41的肽组成；
其中优选地，所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：26的肽组成。
4.前述权利要求中任一项的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体包含至少一个γ2重链和至少一个λ轻链，其中
(a)所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：73的肽组成，且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：74的肽组成；
(b)所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：75的肽组成，且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：76的肽组成；
(c)所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：77的肽组成，且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：78的肽组成；
(d)所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：75的肽组成，且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：79的肽组成；或
(e)所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：80的肽组成，且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：81的肽组成；
其中优选地，所述γ2重链包含或者优选地由SEQ ID NO：73的肽组成，且其中所述λ轻链包含或者优选地由SEQ ID NO：74的肽组成。
5.前述权利要求中任一项的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是IgG2。
6.前述权利要求中任一项的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体特异性结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁。
7.前述权利要求中任一项的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM，优选地，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-70nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-50nM，进一步优选地，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-10nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-10nM。
8.单克隆抗体的HCVR，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体特异性结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁；其中优选地所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM；并且其中进一步优选地所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-70nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-50nM，进一步优选1-20nM；并且再进一步优选1-10nM；并且其中所述HCVR包含：
(a)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成；
(b)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成；和
(c)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3和4中任一个的肽组成，优选地其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3的肽组成。
9.权利要求8的HCVR，其中所述HCVR的第7-117位由SEQID NO：24、28、33和39中任一个的肽组成，其中优选地所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24的肽组成。
10.单克隆抗体的LCVR，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体特异性结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁；其中优选地所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM；并且其中进一步优选地所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-70nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-50nM，进一步优选1-20nM；并且再进一步优选1-10nM；并且其中所述LCVR包含：
(a)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5、6和7中任一个的肽组成，优选地其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成；
(b)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成；
(c)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9和10中任一个的肽组成，优选地其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9的肽组成。
11.权利要求10的LCVR，其中所述LCVR的第5-107位由SEQID NO：26、31、35、37和41中任一个的肽组成，优选地其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：26的肽组成。
12.一种单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体特异性结合(S)-(-)-尼古丁和(R)-(+)-尼古丁，其中所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-100nM；其中进一步优选地，所述单克隆抗体与所述(S)-(-)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-70nM；并且其中所述单克隆抗体与所述(R)-(+)-尼古丁的所述结合的解离常数Kd为1-50nM，进一步优选1-20nM；并且再进一步优选1-10nM。
13.权利要求12的单克隆抗体，
(a)其中所述单克隆抗体包含至少一个HCVR，其中所述HCVR包含：
(i)一个HC CDR1，其中所述HC CDR1由SEQ ID NO：1的肽组成；
(ii)一个HC CDR2，其中所述HC CDR2由SEQ ID NO：2的肽组成；和
(iii)一个HC CDR3，其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3和4中任一个的肽组成；优选地其中所述HC CDR3由SEQ ID NO：3的肽组成，并且
(b)其中所述单克隆抗体包含至少一个LCVR，其中所述LCVR包含：
(i)一个LC CDR1，其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5、6和7中任一个的肽组成，优选地其中所述LC CDR1由SEQ ID NO：5的肽组成；
(ii)一个LC CDR2，其中所述LC CDR2由SEQ ID NO：8的肽组成；
(iii)一个LC CDR3，其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9和10中任一个的肽组成，优选地其中所述LC CDR3由SEQ ID NO：9的肽组成。
14.权利要求12或13的单克隆抗体，其中
(a)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24、28、33和39中任一个的肽组成，优选地其中所述HCVR的第7-117位由SEQ IDNO：24的肽组成；且
(b)其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：26、31、35、37和41中任一个的肽组成，优选地其中所述LCVR的第5-107位由SEQID NO：26的肽组成。
15.权利要求12-14中任一项的单克隆抗体，其中
(a)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：26的肽组成；
(b)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：28的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：31的肽组成；
(c)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：33的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：35的肽组成；
(d)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：28的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：37的肽组成；或者
(e)所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：39的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：41的肽组成；
其中优选地，所述HCVR的第7-117位由SEQ ID NO：24的肽组成，并且其中所述LCVR的第5-107位由SEQ ID NO：26的肽组成。
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