CN101804053B - 一种手性苯并喹嗪-2-羧酸精氨酸盐组合物、其制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，主要涉及一种手性苯并喹嗪-2-羧酸精氨酸盐的药物组合物，包括作为活性成分的精那沙星、L-精氨酸和金属络合剂。该组合物可以是注射液，也可以是冻干粉针。本发明降低了S-(-)-那氟沙星L-精氨酸盐水溶液稳定性低，存在一定刺激性的现有技术不足，提供了一种稳定而刺激性低的精那沙星药物组合物。本发明同时还提供了该药物组合物在制备抗生素药物中的应用。

Description

一种手性苯并喹嗪-2-羧酸精氨酸盐组合物、其制备方法及用途

技术领域

本发明属药物制剂领域，涉及一种稳定而刺激性低的手性苯并喹嗪-2-羧酸精氨酸盐组合物，含有作为活性成分的精那沙星及L-精氨酸，并含有至少一种选自药学上可接受的金属络合剂。本发明同时涉及该组合物的制备方法及其用途。

背景技术

喹诺酮类药物现在已发展到四代，第一代以萘啶酸为代表，第二代以吡哌酸为代表，仅对革兰氏阴性菌有效，第三代是此类药物发展的高峰期，出现了大量新药，并且是广谱抗菌，这其中以诺氟沙星，环丙沙星等为代表。第四代喹诺酮类抗生素则是在第三代广谱的基础上又进一步扩大了抗菌谱，使之可对抗支原体和衣原体感染。

国内抗生素研发一直比较热门，目前市场上应用最多的是第三代喹诺酮类药物。那氟沙星由日本大冢公司开发，属于第三代喹诺酮抗菌药，外用治疗痤疮和毛囊炎。1993年首次在日本上市(商品名：Acuatim)，2004年在德国上市(商品名：Nadixa)，2005年在中国上市(商品名：依尤宁，1％软膏)。

那氟沙星由于其吸收和血管刺激性等问题，仅能制成外用制剂，用于体外疮疱丙酸杆菌(propionibacterium acnes)引起的痤疮。其中S-(-)-那氟沙星是主要起作用的异构体，其抗菌活性是R型异构体的64～256倍，是消旋体的2倍。

精那沙星是在S-(-)-那氟沙星的基础上成盐而制得。显著改善了那氟沙星的溶解度以及体内吸收利用，因此它保留了那氟沙星抗菌谱广，抗菌活性强，尤其对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌和甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌有效的特点(Antimicrobial Agents andChemotherapy，2004，3188～31920；J.Med.Chem.2005(48)，5232～5242)。临床前试验证明，本品与市场上抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗生素比较有更好的疗效，包括万古霉素、曲伐沙星、奎奴普丁+达福普汀、利奈唑胺等。

精那沙星分子结构式如下式所示：

S-(-)-那氟沙星与L-精氨酸成盐后，进一步提高了起主要抗菌作用的S-(-)-那氟沙星异构体的含量，并且提高了口服生物利用度，使其能够开发为口服或注射制剂。

国际申请WO2004058303公开了L-精氨酸具有使精那沙星溶解性增加的数据。

精那沙星的水溶解性虽然较那氟沙星有了显著性增加，血管刺激性也有所降低，但是，药物水溶液在光照下不稳定，也依然存在一定的刺激性，因此不能用简单的制剂处方来制备其注射剂。

发明内容

本发明人意外的发现，在精那沙星制剂中加入金属络合剂和L-精氨酸，可以显著的提高精那沙星溶液的溶解性和稳定性。所制备的溶液在高温灭菌时也能保持稳定。并且可以极大的降低其血管刺激性。

本发明的目的在于提供一种稳定的、低血管刺激性的药物组合物，该组合物含有作为活性成分的精那沙星，并含有L-精氨酸和至少一种选自药学上可接受的金属络合剂。

所述的精那沙星，包括精那沙星无水物、精那沙星一水物、精那沙星四水合物以及其他各种形式存在的精那沙星，其剂量均以无水物计。精那沙星可依照文献方法(J.Med.Chem.，2005，48，5232～5242)制备得到。

所述的药物组合物，每个剂量单位所含活性成分精那沙星的量为50～1000mg。

所述的金属络合剂，选自乙二胺四乙酸二钠或乙二胺四乙酸二钠钙。

本发明人在研究过程中发现，精那沙星水溶液在光照条件下颜色容易发生变化，性质不稳定，本发明人进一步发现，在制剂中加入L-精氨酸和金属络合剂乙二胺四乙酸二钠或乙二胺四乙酸二钠钙能达到良好的稳定本品的作用。

下表对比了采用同一批次精那沙星(有关物质99.80％)制备的无L-精氨酸和金属络合剂存在的精那沙星溶液(样品A、样品B)和有L-精氨酸和金属络合剂存在的精那沙星溶液(样品C、样品D)在高温(60℃)、高湿(RH75％)和强光(4000Lx)的条件下放置10天后监测指标的变化：

样品	颜色	有关物质
			样品A	浅黄	99.56％
样品B	浅黄	99.58％
			样品C	无色	99.79％
样品D	无色	99.79％

另外，对比了采用同一批次精那沙星制备的无L-精氨酸和金属络合剂存在的精那沙星溶液和有L-精氨酸和金属络合剂存在的精那沙星溶液的刺激性试验的结果，对比结果表明，加入L-精氨酸和金属络合剂后，其局部刺激性显著性降低。

对比试验表明，加入有L-精氨酸和金属络合剂后的精那沙星溶液稳定性更好，刺激性更低，更适合于工业上制备成药品。

所述的组合物，可以注射给药，例如可以是注射液，或者进一步制备成注射用冻干粉针的剂型。在本发明的注射液中或冻干粉针冷冻干燥前的溶液中精那沙星的浓度为1mg～40mg/ml，优选为2mg～30mg/ml。

所述的金属络合剂中，由于乙二胺四乙酸二钠可与钙离子结合成可溶的络合物引起钙的减少，静脉制剂中使用乙二胺四乙酸二钠会导致血钙下降，因此，需密切关注和严格控制静脉给药制剂中乙二胺四乙酸二钠的用量。一般药品使用的范围为0.01～1.0％，据此，本发明组合物中，精那沙星与金属络合剂的重量比为50∶0.1～5∶1，优选为40∶0.1～10∶1。

所述的药物组合物中L-精氨酸用量为：那氟沙星精氨酸盐∶L-精氨酸重量比为1∶0.2～1∶5，优选为1∶0.25～1∶2。

所述的药物组合物，按照制剂的一般要求，还可以包括用于注射液或注射用冻干粉针的其他药学上可接受的常规辅料。这些常规的辅料包括但不限于冷冻干燥赋形剂、防腐剂、稳定剂、pH调节剂、等渗剂。其中赋形剂可选自但不限于甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、氯化钠、水解明胶、右旋糖酐、蔗糖、甘氨酸、聚乙烯吡咯烷酮等中的一种或几种，优选为甘露醇或葡萄糖。防腐剂可以选自但不限于苯酚、甲酚、三叔丁醇、苯甲醇、尼泊金中的一种或几种。稳定剂可以选自但不限于焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫脲、维生素C、叔丁基对羟基茴香醚、二丁基苯酚、没食子酸丙酯、生育酚、甲硫氨酸、盐酸半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、抗坏血酸棕榈酸酯、乙二胺四乙酸的一种或几种。pH调节剂包括但不限于盐酸、马来酸、枸橼酸、酒食酸、磷酸、偏磷酸、聚偏磷酸、碳酸、氢氧化钠、氢氧化钾、枸橼酸钠、枸橼酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸胺、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、碳酸钠、酒石酸钠钾、偏磷酸钾中的一种或几种。等渗剂可以选自但不限于氯化钠、葡萄糖、氯化钾、乳酸钠、甘露醇或山梨醇。

本发明的药物组合物中，精那沙星的用量没有特别的限制，可以是在注射液中通常使用的任何剂量。一般地，在上述的注射剂型中，每个制剂单位含有效成分50～1000mg。所说的每个制剂单位，是指水针或粉针的每支、输液的每瓶等。

本发明的精那沙星的药用组合物可以是澄明的可注射的水溶液形式，或为注射用冻干粉针的形式。可以用注射用水、5％葡萄糖溶液或0.9％氯化钠直接溶解冻干粉针，得到澄明的注射液。

本发明的精那沙星组合物具有以下特点：不需要专用溶媒，稳定性好，便于临床使用，刺激性小。

本发明的精那沙星注射液或注射用冻干粉针适合于皮下注射、肌内注射、静脉注射或静脉滴注。

另一方面，本发明提供了一种改善精那沙星稳定性和刺激性组合物的制备的方法，包括将(S)-那氟沙星精氨酸盐和金属络合剂混合于水性溶媒(水溶液、甘露醇水溶液或含有其他任意辅料的水溶液)的步骤，混合后加入活性炭搅拌，经过0.8μm滤膜粗滤炭后，再用0.22μm滤膜除菌，分装。另外该方法还可以再进一步包括将上述注射液冷冻干燥制成冻干粉针的步骤，其中冷冻干燥采用药剂领域中冷冻干燥注射剂的常规冻干技术，本领域技术人员根据现有技术以及教科书中的技术教导不需要创造性劳动即可完成。

本发明的第三个方面是将本发明的精那沙星组合物用于抗生素药物的制备中。所述组合物可用于治疗革兰氏阳性菌和阴性菌导致的各种疾病，包括脓毒血症、尿路感染、呼吸道感染。

本发明的各种改进和变化对本技术领域技术人员是显而易见的，以下具体优选实施方式描述了本发明，但应理解要求保护的本发明不应限制于以下具体实施方案。

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1 10ml规格注射液配方

精那沙星            10.0g

L-精氨酸            5.0g

氯化钠                8.0g

乙二胺四乙酸二钠钙    0.1g

注射用水至            1000ml

制成                  100支

实施例2 10ml规格注射液配方

精那沙星              20.0g

L-精氨酸              7.0g

硫代硫酸钠            0.2g

氯化钠                9.0g

乙二胺四乙酸二钠钙    0.3g

注射用水至            1000ml

制成                  100支

实施例3 20ml规格注射液配方

精那沙星              25.0g

L-精氨酸              20.0g

葡萄糖                70.0g

亚硫酸氢钠            2.0g

乙二胺四乙酸二钠      0.4g

注射用水至            2000ml

制成                  100支

上述实施例样品制备工艺如下：

(1)取精那沙星和L-精氨酸，加入40～60℃注射用水中，调pH9.0～10.0，加入其他添加剂，再补充注射用水至规定量；

(2)加入适量活性碳搅拌15～20min，趁热脱炭，放冷，过滤至澄明，分装于10ml或20ml西林瓶中，同时充入氮气；

(3)加塞，轧盖，121℃灭菌15min，并检漏；

(4)灯检，包装，全检后即得成品。

实施例4：冻干粉针剂

精那沙星            25.0g

L-精氨酸            10.0g

甘露醇              150.0g

β-环糊精           20.0g

乙二胺四乙酸二钠    0.2g

注射用水至          2500ml

制成                1000支

实施例5：冻干粉针剂

精那沙星            25.0g

L-精氨酸            7.0g

乳糖                120.0g

乙二胺四乙酸二钠    0.2g

甘露醇              50.0g

注射用水至          5000ml

制成                1000支

上述实施例样品制备工艺如下：

(1)取精那沙星和L-精氨酸，加入400～60℃注射用水中，调pH9.0～10.0，加入其他添加剂，再补充注射用水至规定量；

(2)加入适量活性碳搅拌15～20min，趁热脱炭，放冷，过滤至澄明，

(3)测定中间体，分装于10ml或20ml西林瓶中，半加胶塞，

(4)预冻，将样品冷冻至-30℃以下，保持4小时左右。抽真空，干燥，直至水分在5％以下，取出，压塞，轧盖。

实施例6 250ml规格输液配方

精那沙星              50.0g

L-精氨酸              100.0g

氯化钠                225g

乙二胺四乙酸二钠钙    5g

苯甲酸钠              20g

注射用水至            25000ml

制成                  100支

实施例7 250mL规格输液配方

精那沙星              100g

L-精氨酸              70g

葡萄糖                700g

氯化钠                200g

乙二胺四乙酸二钠钙    2.5g

注射用水至            25000ml

制成                  100支

实施例8 500mL规格输液配方

精那沙星              75g

L-精氨酸              50g

葡萄糖                2500g

乳酸                  适量

乙二胺四乙酸二钠      8g

注射用水至            50000ml

制成                  100支

实施例9 500mL规格输液配方

精那沙星              100g

L-精氨酸              90g

葡萄糖                2000g

乙二胺四乙酸二钠      9g

注射用水至            50000ml

制成                  100支

上述实施例样品制备工艺如下：

(1)取精那沙星、L-精氨酸，加入40-60℃注射用水中，调节pH9.0～10.0，加入其他添加剂，再补充注射用水至规定量；

(2)加入适量活性碳搅拌15-20min，趁热脱炭，放冷，过滤至澄明，分装于250或500ml输液瓶中，同时充入氮气；

(3)加塞，轧盖，121℃灭菌15min，并检漏；

(4)灯检，包装，全检后即得成品。

实施例10刺激性试验

药物配制：

精那沙星∶L-精氨酸∶乙二胺四乙酸二钠重量比为2∶1∶0.2为样品A；精那沙星∶L-精氨酸重量比∶乙二胺四乙酸二钠为1∶2∶0.15为样品B；精那沙星∶L-精氨酸∶乙二胺四乙酸二钠重量比为1∶0.25∶0.2为样品C；精那沙星∶氢氧化钠重量比为20∶1为样品D；精那沙星∶L-半胱氨酸重量比为2.5∶1的药物组合物为样品E；精那沙星为样品F。六种样品的浓度均为20mg/mL。临用前，用生理盐水(NS)配成4mg/mL。

试验方法：实验采用单盲、平行法进行，待实验结束后揭盲。根据实验结果比较不同那氟沙星精氨酸盐注射组合物所引起的动物刺激性。

1.扭体试验

选取清洁级健康雄性小鼠64只，体重为18～20g，按体重随机分为8组，每组8只。分为空白对照组(空白处方)、阳性对照组(0.7％醋酸)、及6个不同样品组。采用单盲法平行给药，每只动物腹腔注射0.2mL药液，立即计时，观察注射后10min内发生扭体反应的动物数、扭体次数。采用T-Test或卡方检验，与空白对照组进行统计学分析。

2.舔足反射试验

上述动物经3天清洗期后，保持原分组，动物体重均小于22g。每只动物右后肢足底皮下注射20uL药液，立即计时，放入大烧杯中，采用单盲法、平行观察。阳性对照组给予同体积1％的甲醛。观察注射后5min内和15～30min内动物发生自发性缩足、舔足反射次数和舔足时间，并在不同时间段对疼痛进行分级。采用T-Test或卡方检验，与空白对照组比较进行统计学分析。

评分标准：0＝注射足承担正常重量；

1＝运动时跛行、休息时足轻触地面；

2＝注射足抬高，最多用指甲触地；

3＝出现针对注射足的舔、咬和理毛行为。

实验结果：

1.扭体试验结果

当给药浓度为4mg/mL时，样品D、E、F有少数动物在注射后1min内发生1或2次扭体(详见表1)。提示在该实验条件下，样品A、B、C在4mg/mL浓度下注射对小鼠腹腔的刺激性小。

表1那氟沙星不同样品4mg/ml注射后致小鼠扭体比较表

与空白组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。

2.舔足反射试验结果

阳性对照组1％甲醛引起的疼痛反应如文献报道，分为两相：I相反应(0～5min)是甲醛对足底感受器的直接刺激性所致；II相反应(15～30min)主要是继发性炎症刺激反应。

各样品以4mg/ml足底皮下注射后，前5min内动物疼痛反应明显，评分为2～3级，5个不同样品组的舔足次数和缩足、舔足累积时间均明显大于空白对照组的，其中以样品D的最为显著(详见表2、3)。结果表明，在4mg/ml浓度下，注射各样品对小鼠足底有一定的刺激性，引起的急性刺激性反应程度依次为：1％甲醛＞样品D＞样品E≈样品F＞样品C≈样品B＞样品A＞空白组。

实验观察30min后，各样品组动物的注射足红肿现象明显消退，故不再做其它观察。

表2精那沙星不同样品4mg/ml注射后动物舔足反射评分比较表

表3精那沙星不同样品4mg/ml注射后动物舔足时间比较表(n＝8)

与空白组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。

我们利用小鼠的镇痛实验模型，比较五种不同精那沙星组合物样品诱导的小鼠扭体反应、舔足反射情况。结果显示，在4mg/ml的注射浓度下，6个组合物样品引发的主要为I相疼痛反应，即对疼痛感受器的直接刺激性，且红肿、疼痛反应在注射30min后基本缓解。根据试验结果，引起的急性刺激性反应程度依次为：阳性药＞样品D＞样品E≈样品F＞样品C≈样品B＞样品A＞空白组。

根据以上试验，可得出结论，精那沙星加入了金属络合剂和L-精氨酸的药物组合物在刺激性试验中显示出较好的优势，与氢氧化钠和那氟沙星精氨酸盐的药物组合物及其它氨基酸和那氟沙星精氨酸盐的药物组合物比较，显著降低了其刺激性。

Claims (4)

1.一种手性苯并喹嗪-2-羧酸精氨酸盐组合物，含有作为活性成分的精那沙星，并含有L-精氨酸和一种选自金属络合剂的药学上可接受的添加剂，其特征在于所述的金属络合剂为乙二胺四乙酸二钠，精那沙星、L-精氨酸、乙二胺四乙酸二钠的重量比为2∶1∶0.2、1∶2∶0.15、1∶0.25∶0.2中的一种。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中组合物为注射液或冻干粉针。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于每个剂量单位所含活性成分精那沙星的量为50～1000mg。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中组合物中还进一步包括药学上可接受的注射剂辅料。