CN101796390A - 用于光谱分析的样品池及使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于对接触流体样品后透射或反射的光进行光谱分析的样品池;该样品池为柱状,并在各末端具有至少一个窗口和至少一个引入导管;其中该柱状有助于光在沿穿过至少一个末端窗口的轴向方向的光路内的传播;该柱状具有足以容许通过所述末端窗口对所述样品进行分析的轴向长度;该样品池能够以无气泡的方式容纳一定体积的流体样品。本发明还涉及一种用于对接触液体样品后的光透射或反射进行光谱分析的样品池;该样品池具有反射侧壁,并在光路内包括光散射材料。

Description

用于光谱分析的样品池及使用方法
技术领域
本发明涉及用于对流体样品进行光谱分析的样品池领域,该样品池能够以无气泡的方式容纳一定体积的流体样品。
背景技术
当利用例如光谱法的光学技术测量流体样品时,样品典型地容纳于称为池或管的器皿内。这些设备包括由光学性能材料组成的两个侧面,其容许光线穿过样品。当分析较小样品体积时,例如5微升或更少的体积,常规的样品池则具有局限性。穿过样品池透射的光的量依赖于光与包含与样品体积内分析物的相互作用。短路径长度可导致较不灵敏的测量结果。因此,在保持高灵敏度的同时,减少样品池的尺寸,以容纳极少量的样品体积,是一个挑战。另外,小样品池通常难以填充,和/或易于截获气泡,其可影响光学测量和分析。容纳小体积的样品池通常难以清洗并且耗费时间。
美国专利申请公开2006/0193752(Levine)描述了一种微体积的流动池装置,它具有椭圆形孔,带有颈缩入窄通道(约1mm)的宽出口通道,以使气泡从光路移开。另外,可对流动池的表面进行处理以减少气泡形成。该处理可通过利用电晕(corona)、等离子(plasma)或火焰处理(flame treatment)进行,以在该表面产生可选择性地与可能在低气压腔室内存在的不同气态成分相作用的活性物。
其他专利描述了一种无需使用样品池、但依赖于悬浮于两个相对的多模式光纤末端之间的液滴的方法(例如,美国专利公开2006/0077390(Kralik))。一个源光纤将光引入到该液滴上,而第二检测光纤收集透射光。没有样品池容纳样品的一个缺点是路径长度短以及在液滴内产生光散射。另外,样品液滴的尺寸和表面张力会产生变化,这可导致大信号变化。
因此,非常期望提供用于对流体样品进行光谱分析的样品池,该样品池能够以无气泡的方式容纳一定体积的流体样品。
发明内容
根据本发明,提供了一种用于对流体样品进行光谱分析的样品池,该样品池能够以无气泡的方式容纳一定体积的流体样品。
根据本发明的一个实施方式,一种样品池具有柱状,并在各末端具有至少一个窗口和至少一个引入导管;光穿过至少一个末端窗口,沿柱状的轴向传播,并且该柱状具有足以容许通过末端窗口对样品进行分析的轴向长度,并且该样品池能够以无气泡的方式容纳一定体积的流体样品。
该配置容许液体的体积减小(例如,小于15微升,优选地小于5μL),同时保持在轴向方向上通过该柱状体积的长的路径长度。柱状体积的横截面可以备选地为取代圆形的椭圆形,其不负面地影响这些实施方式的效果。该池可以透射或反射的模式工作。该样品池可以是流通池。
根据本发明的另一个实施方式,流动池设备具有引入导管,其因引入导管内流体的运动而适合有利于截留气泡。优选地,该引入导管和样品池适合于共同工作以产生流体动态条件,这些条件可降低当小体积的流体样品流动入该设备并穿过该设备时留在样品池内的气泡的可能性。该样品池设计所蕴含的物理学原理避免了微小气泡的形成和聚集,这是常规设计的主要局限。该机制通过样品注射器的弧形入口以及出口部分提供。该回路在柱形池的水动力流内引入了涡流,由此防止了气泡在死区空隙(dead volume)区域内的聚集。该弧形通道的具体几何形状取决于典型形成的气泡的尺寸。
根据另一个实施方式,该实施方式中气泡实质上从未出现在池设备中样品的光路内,该发明提供了制备用于分析的样品、以及分析该样品的方法,而无需筛查(screening)或检查是否存在气泡,以从所得的分析数据中取出错误的测量。
根据一个实施方式,该样品池设备为一次性的。
为本发明目的,以下用语定义如下。
用语“氟碳聚合物”(fluorocarbon polymer)是指含有氟原子的聚合物,包括,但不限于,聚四氟乙烯(PTFE),TeflonTM、以及氟化乙烯的聚合物。“氟碳聚合物”的特征为高度抗溶解、酸和碱。
用语“柱形”(cylindrical)是指该形状为狭长状,两个末端彼此平行,并沿狭长轴界定长度,并且各末端通过由直线沿某一曲线并同时大体上垂直该末端表面运动所产生的弯曲表面结合在一起。
用语“光谱测定法(spectrometry)或光谱测定的(spectormetric)”是指物质和辐射之间的相互作用随能量范围的分析,其中幅度和能量为各分析而定义。
用语“流体”指物质的相的子集,流体包括液体、凝胶(gel)以及柔性固体(flexible solid)。根据本发明的流体样品包括,但不限于,均匀溶液或可以是液体、悬浮液或凝胶的异质混合物。流体样品对于利用本发明的方法进行的分析是灵敏的,例如多种来源的污水液体、用于不同目的(包括法医学目的)的实验室样品、以及生物样品,例如水性蛋白液体(aqueous proteinaceous liquid)、细菌和细胞悬浮液、细胞培养媒介、细胞培养成分、血液、血产品、血成分、淋巴液、粘液分泌、唾液、精液、血清、血浆、眼泪以及重组冻干粪样(reconstitutedlyophilized feces)。
用语“条形码”是指在表面上可视形式的可机读的信息的表示形式。条形码以多种方式存储信息,包括但不限于,印刷平行线形成的宽度和空隙、点状的样式、同心圆、以及藏于图像后的代码。条形码由称为条形码读取器的光学扫描器读取,或者利用软件对图像进行扫描(例如,Smartscan Xpress)。
用语“射频识别”是指一种自动识别方法,其依赖于利用称为射频识别(RFID)标签、发射器、或转发器的设备存储和远端获取信息。RFID发射器是能够粘附于或整合入产品、动物或者人的物体,以用于利用无线电波进行识别的目的。
用语“水印”是指嵌入材料内的图像、图案和/或代码,用于建立拥有权和/或真实性。水印可以是可见的或不可见的。
用语“缩微印刷”是指很小的印刷字符和/或文本,其通常用于确认在其上印制的物品是否是真的。
用语“全息图”是指平面光学图像,但裸眼看来是三维的。在高温下压印在物品上的全息图可用作额外水平的保护,以防止产生仿制物品。
用语“流通”是指样品从样品池的开端到末端以连续流程形式的样品流动。
文中提及的所有参考文献均通过引用合并入此处。
附图说明
图1显示了根据本发明的一个实施方式的工具的立体图;
图2显示了根据图1中所示实施方式的工具的不同角度的立体图;
图3显示了根据图1中所示实施方式的工具的放大立体图;
图4显示了根据图1中所示实施方式的工具的放大立体图;
图5显示了根据本发明另一个实施方式的工具的立体图;
图6显示了对胚胎是否导致受孕的NMR光谱分析;
图7显示了NIR光谱(A)平均偏差为35.8%,(B)平均偏差为3.5%。
具体实施方式
如图1所示,流动池设备10具有键状,带有邻接末端12和柄12,用于插设入光学分析器。
池20具有约0.5至5μL的容积,并由注射流体填充入引入管22,然后引入管24由弧形通道26接至柱形池20的第一末端。弧形通道26和28以及柱20由窗口16和18封堵隔离。流体持续地通过第二弧形通道28和引入管30及32流出池20的第二末端。显示的弧形通道26和28可有效地防止在其内聚集气泡和/或在池20内产生流动态,其可帮助防止气泡附着于柱形池20的侧壁。
参考图2,引入管22和32直径约为0.7mm,容许标准凝胶装载端头的插设。相反地,这些通道可用于连接到确保通过池20持续流动的流体系统。
参考图3和4,显示了池20、弧形通道26和28、以及引入管22、24、30和32的放大图。这些管相互连接,确保了流体从入口通道22到出口通道28的流动。通道24(图4)确保了流体从入口管22流动至弧形通道26。
如图5所示,管状柄34可用于将池20插设入光学分析器,管状柄34可用于容置追踪和/或验证样品池使用的装置。
1.该设备用于透射模式的光学分析。光通过窗口16进入池20,然后通过窗口18射出。窗口16材料可以是玻璃或塑料,而池16整合入塑料主体,例如丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物(ABS)或TeflonTM,或者金属,例如铝或不锈钢。优选的材料为ABS,其具有非常小的散射特征,并实质上反射光线,由此防止了光与池材料的相互作用。优选地,设备10在一种材料中整块铸模并对池20的容差特别处理,以提高通过窗口的信号重现性。
2.窗口16和18通过将它们压入池20而置位。为确保围绕通道的紧致密封,形成一个25um高的v形边缘。
3.为增加光与样品的相互作用,已发现当利用反射材料(例如铝)用于池20时,在窗口16内加入散射材料是有效的,例如TeflonTM。通过该方式,光在进入池入口处稍微散射,并且大部分光在射出之前至少对侧壁形成部分反射。这增加了光和池20内包含的样品分析物之间的相互作用。
4.穿过池透射的光的量取决于光与样品池内流体样品的相互作用。较短的路径长度可导致较不灵敏的测量,因为光与流体样品之间的相互作用较少。通过减少池的容量但同时保持显著的路径长度,减少样品的体积仍然是可能的。通过减少光通过的直径,容量可显著减少。例如,具有1mm直径和3mm长度的柱体可容纳仅3微升的样品体积。
5.设备10优选地用于容纳小量的用于光学属性的特征化的流体样品,例如从UVis到NIR和IR的透射。为提高所测分析物信号的精确度,在光路中使用光散射体(例如TeflonTM)。TeflonTM可设置在该池的检测和/或透射一侧。
6.设备10的设计容许引入小量的流体样品(小于15μL优选地小于5μL)而同时不会在光路内聚集气泡。引入通道26设计成其可防止聚集气泡的死区空间(dead space)。引入的小量流体样品可完全填充池20,由此允许对样品的精确测量。池20可根据具体需要和所用样品体积具有不同的路径长度。池20的较短路径长度可确保对较少量样品体积的分析。设备10可利用标准的铸模处理制造,由此可经济实惠并可一次性使用。特别是当所分析的生物样品需避免交叉污染时,或者对池的清洗耗费成本或甚至有害时,该特征尤其重要。
实施例1
小量体积样品的光谱分析
本发明的设备10针对对30μL或更少的流体体积的分析,优选地小于5μL。其他微量体积的样品池使用一个槽,该槽内由小量的池体积产生弯液面,其因内部反射妨碍了光透射,并且该妨碍与样品体积负相关。本发明的设备10可容纳相对小量的样品体积,其可使用光谱技术进行分析,而不会被微小气泡或现有技术中的其他局限所干扰。
本发明的设备10在分析小量体积的流体样品甚为重要的领域内,具有宽泛的应用范围。这些领域包括,但不限于,流体样品在小量有限量内可用的领域,例如法医学、生物学、生物化学、分子生物学、分析化学、有机和无机化学以及药物学。其他可以使用本发明设备10的领域为那些减少所化验样品体积可带来经济上好处的领域。这可通过多种方式达到,例如,但不限于,减少分析样品的量和/或容许更多数量的待分析样品。这个因素可能是重要的一个代表性的领域是环境测试。其中体积可能不是局限,但在相同成本下增加待测样品数量是有利的。另一个代表性的领域是化学化合物的高流量筛选,其中通过减少在分析中使用的给定化学化合物的量以及增加一次性可进行的分析的数量,从而该降低分析体积可减少成本。
本发明的设备10是有利的再一个示例在生殖医学领域。根据辅助生殖技术学会(SART)的统计,2005年美国进行了122638 IVF周期,这是世界范围内其他估计数量的三倍。每个周期移植的胚胎平均数量在2.4(<35岁母亲年龄)以及3.3(41-42岁)之间。同时,受孕率在43%到18%的范围。体外受精(IVF)治疗的一个最重要的并发症是高得多胞胎率,这可带来医学上母婴并发症的高发,因此将带来较高的健康护理成本。单胚胎移植(SET)是最小化多胞胎风险的有效手段。因为,仅一个胚胎被移植,选取具有最优移植潜力的胚胎将非常重要。本发明的样品池对于单胚胎培养的近红外(NIR)光谱测量是特别有利的。类似地,本发明的设备10对于来自于不同成熟阶段卵细胞的培养媒介的近红外(NIR)光谱的测量也是有利的,这些卵细胞在卵巢刺激后单独保存。
当胚胎作为单个细胞培养(embryo culture)生长时,仅需要非常少的媒介(medium)(典型地20μL)。对如此少量的体积进行光谱分析,样品池必须能够容纳微小体积的样品,典型地小于10μL,以用于NIR光谱的测定。
通过确定胚胎培养媒介的代谢轮廓(metabolomic profiling)是否与单个胚胎的繁殖潜力(reproductive potential)相关,显示了在繁殖实践中本发明设备10的功用。在生物系统中发现的小分子代谢物的完整系列构成代谢组(metabolome)并反映出功能性显型(fuctionalphenotype)。代谢组学(Metabolomics)是作为小分子生物标记的代谢物动态余量的系统化研究,这些生物标记代表生物系统内的功能性显型。使用各种分析方法,,包括光谱测量,代谢组学试图确定和量化与生理和病理状态相关联的代谢物。
通过以下示例,将会更容易地理解本发明,该示例用于说明本发明,而不是限制其范围。
在该示例中,展示了导致受孕的胚胎由其代谢轮廓不同于未导致受孕的胚胎,并且该差异可通过利用本发明的样品池,并使用小量胚胎培养的目标光谱分析,从而由胚胎培养媒介的快速评估而被检测到。
材料和方法
样品。分别在胚胎移植后的第三天收集来自于结果已知(0或100%的稳定着床率(implantation rate))的14位患者的34个已用媒介样品,并利用本发明的设备10通过近红外(NIR)光谱进行评估。在分析前,体外受精(IVF)媒介样品在室温下(25℃)解冻30分钟。然后这些样品在13,000RPM下被离心10分钟,并存于冰上直到分析进行。
数据获取。利用带有512位光敏二极管和钨光源的InGaAs光谱计(B&WTek,Newark,Delaware)进行随机化样品的NIR测量。本发明的具有3mm路径长度的样品池填充入7μL的样品媒介用于光谱测量。在每次测量前,设备10利用0.1M的氢氧化钠(NaOH)清洗然后利用蒸馏纯净水清洗。NIR光谱在21.0℃±0.1℃温度下纪录范围为从900-1700nm。控制媒介样品用于补偿信号中的任何漂移,并且计算用于控制媒介光谱的样品光谱比率。确定所得光谱的平均值,并由所有样品光谱减除。
数据分析。使用遗传算法(GA)优化在选择的波长区域内确定变量的最简约组合(most parsimonious combination),从而从所得的平均中心化NIR光谱量化受孕结果的样品属性预测。选取的波长区域利用反向最小二乘回归法计算的系数被加权。计算用于每个样品的反映出生殖潜力的存活指标(viability indices)。为避免随机相关,利用弃一次法(leave one out)交叉验证方法,以连续生殖潜力指标估计各样品的受孕存活性。切口盒形图用于表明所得的存活指标,并且应用t-测试确定“受孕”和“未受孕”群组的明显差异。并计算预测存活性的敏感度和特异性。
结果
来自于14位患者的共33个胚胎的培养媒介利用NIR光谱进行评估。在33个移植的胚胎中,16个着床并分娩(100%着床),而17个胚胎未着床(0%着床)。所有的样品被成功分析并包括在数据分析内。
利用上述方法分析NIR光谱,通过减去在各波长点的平均值,均值中心化信号,并且为每个研究群组计算平均值。利用GA优化,并且NIR光谱范围内的四个区域被识别,并给出相对权重,作为两个研究群组之间的最佳鉴别。利用将这些区域及其权重考虑在内的数学模型,可计算得出存活指标。
具有证明为繁殖潜力的已用胚胎培养媒介的NIR光谱分析相比那些未着床的胚胎(0.29227+0.22355),显示出较高的存活指标(0.6712+0.27615)(P<0.05)(图6)。NIR光谱测定识别的着床/受孕潜力的敏感度为75%,差异性为83.3%。
示例2
生殖性测量中气泡的影响
本发明设计的设备10关注于以无气泡方式的一定量流体测量。本发明的设备10包括阻止微气泡形成以及样品聚集的特征。该示例显示了当前设计的具有弧形引入导管的设备10,与具有笔直引入导管的类似设计的样品池之间的比较。
材料和方法
样品。在分析前,体外受精(IVF)媒介样品在室温下(25℃)解冻30分钟。然后这些样品在13,000RPM下被离心10分钟,并存于冰上直到分析进行。
数据获取。利用带有512位光敏二极管和钨光源的InGaAs光谱计(B&WTek,Newark,Delaware)进行随机化样品的NIR测量。本发明的具有3mm路径长度的样品池填充入7μL的样品媒介用于光谱测量。在每次测量前,设备10利用0.1M的氢氧化钠(NaOH)清洗然后利用蒸馏纯净水清洗。NIR光谱在21.0℃±0.1℃温度下纪录范围为从580-1100nm。
数据分析。为每个样品池类型分析十个样品。记录的NIR光谱被平均,并且为每一组计算相对标准差,以及计算波长580-1100nm之间的光强度百分比变化。然后为各样品池绘出这些值的曲线图。
结果
由缺少弧形引入导管的样品池所得的测量显示为35.8%的平均百分比变化(图7A),而具有弧形引入导管的样品池显示为3.5%的平均百分比变化(图7B)。
在当前设备10的设计中添加弧形引入导管影响了流体动力学,并防止了微气泡的形成,从而相比缺少该改进的样品池,可得出更稳定的强度测量10折较少变量(10-fold less variable)。
虽然已结合具体的实施方式描述了本发明,但应当理解其能够进行进一步的修正,并且本发明意在覆盖任何变型、使用、或遵循本发明原理的对本发明的调整,并包括在本发明所属的领域内,在应用关键特征时根据已知技术和惯常实践而对本发明进行的变化,并遵循后附权利要求的范围。

Claims (14)

1.一种用于对接触流体样品后透射或反射的光进行光谱分析的样品池;所述样品池为柱状,并在各末端具有至少一个窗口和至少一个引入导管;其中所述柱状可有助于光在沿穿过至少一个末端窗口的轴向方向的光路内的传播;所述柱状具有足以容许通过所述末端窗口对所述样品进行分析的轴向长度;所述样品池能够以无气泡的方式容纳一定体积的流体样品。
2.根据权利要求1所述的样品池,其中所述柱状具有反射侧壁,并进一步在光路内包括光散射材料。
3.根据权利要求2所述的样品池,其中所述光散射材料为氟碳聚合物。
4.根据权利要求1所述的样品池,其中所述引入导管为弧形,以防止气泡聚集。
5.根据权利要求1所述的样品池,其中利用从吸收光谱测定法和/或发射光谱测定法中选择的光谱技术进行所述光谱分析。
6.根据权利要求5所述的样品池,其中利用从光度测定法、荧光测定法、和/或磷光测定法中选择的光谱技术进行所述光谱分析。
7.根据权利要求1所述的样品池,其中利用从透射或反射中选择的模式进行所述光谱分析。
8.根据权利要求1所述的样品池,其中所述柱状为圆形或椭圆形。
9.根据权利要求1所述的样品池,其中该轴向长度能够容纳30微升或更少的流体样品体积。
10.根据权利要求9所述的样品池,其中所述流体体积为5微升或更少。
11.根据权利要求10所述的样品池,其中所述流体体积在2微升与5微升之间。
12.根据权利要求1所述的样品池,其中所述样品池为流通池。
13.根据权利要求1所述的样品池,进一步包括追踪该样品池使用的装置。
14.根据权利要求1所述的样品池,进一步包括验证该样品池的装置。
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