CN101792713B - 一种杂交瘤细胞连续培养装置 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种杂交瘤细胞连续培养装置，包括供给瓶、临时储液瓶、培养室、收集瓶、金属杆、细胞培养床，其中，培养室上部设计为玻璃圆柱状，培养室下部收缩为尖嘴状，培养室下部设有控制开关，收集瓶通过硅胶管与培养室的尖嘴下部连通；临时储液瓶位于培养室上方，与培养室顶端连通；供给瓶通过硅胶管与临时储液瓶连通；金属杆下端插至培养室底部，上端高出培养室顶端开口；细胞培养床位于培养室内，固定在金属杆上。本发明的装置专用于包括杂交瘤细胞株在内的悬浮细胞系的不同规模的培养，使不同规模的悬浮细胞培养方法操作简单化、且容易控制并能减低成本，适用于多数实验室普及应用。

Description

一种杂交瘤细胞连续培养装置
技术领域
本发明涉及一种杂交瘤细胞连续培养装置。
背景技术
采用细胞融合技术获得杂交瘤株、通过培养杂交瘤株是生产单克隆抗体常用的生物学方法，将杂交瘤注射于小鼠体内获得腹水是生产高效价抗体的基本方法，该方法成本高，需要养殖批量小鼠。现有技术中，有人采用微囊固定化细胞培养方法，可连续获得细胞培养液，然后从培养液中提取抗体。该方法效率高，不需要养殖动物，但是对无菌条件要求高，技术含量高，步骤繁多，不易掌握，同时，微囊中的细胞容易老化，寿命有限。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种杂交瘤细胞相对固定、连续化化培养装置，本发明的装置专用于包括杂交瘤细胞株在内的悬浮细胞系的不同规模的培养，使不同规模的悬浮细胞培养方法操作简单化、且容易控制并能减低成本，适用于多数实验室普及应用。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种杂交瘤细胞连续培养装置，包括供给瓶、临时储液瓶、培养室、收集瓶、金属杆、细胞培养床，其中，培养室上部设计为玻璃圆柱状，培养室下部收缩为尖嘴状(类似于滴定管的下部)，培养室下部设有控制开关，收集瓶通过硅胶管与培养室的尖嘴下部连通；临时储液瓶位于培养室上方，与培养室顶端连通；临时储液瓶上设有2个管道，一个位于顶部，为排气管，一个位于底部，为排液管，排气管和排液管上均设有控制开关；供给瓶通过硅胶管与临时储液瓶连通，硅胶管上设有控制开关；金属杆下端插至培养室底部，上端高出培养室顶端开口；细胞培养床位于培养室内，固定在金属杆上。
所述临时储液瓶与培养室之间通过磨砂口装置连接，以保证密封性良好。
所述磨砂口装置实际上相当于培养室的上盖，取下此上盖后，可以向培养室内放置金属杆及细胞培养床，盖上此上盖后，由于为磨砂设计，可以保证培养室密封性良好，与临时储液瓶连接处也为磨砂设计，保证连接后密封性良好。
所述细胞培养床为疏密均一的纤维结构，比如聚苯乙烯纤维，该疏松的纤维结构围绕培养室内金属杆固定(金属杆为轻质材料制成)，金属杆上端高出培养室顶端开口，这样，细胞培养床可以随金属杆的上下移动而活动。
所述疏松的纤维结构要求稍有弹性，纤维直径可以控制于10～100微米。
所述疏松的纤维结构表面接枝氨基，易于细胞吸附。
所述排气管和排液管均链接硅胶管。
所述收集瓶和供给瓶均设计有过滤除菌空气交流结构，以保障液体供给和收集的畅通、交流的空气保持无菌。同时设有硅胶管的空气交流管道，以通气消毒使用。
上述装置设计在局部无菌层流条件下使用，局部无菌层流条件符合《国家医药管理局医药工业洁净厂房设计规范》(主编部门：国家医药管理局上海医药设计院；批准部门：国家医药管理局；施行日期：1997年1月1日)表2.2.1中提到的百级洁净度环境，或符合《中华人民共和国国家标准洁净厂房设计规范》(编号为GB 50073-2001，自2002年1月1日起施行)中表3.0.1洁净室及洁净区空气中悬浮粒子洁净度第3等。
注：《国家医药管理局医药工业洁净厂房设计规范》(主编部门：国家医药管理局上海医药设计院；批准部门：国家医药管理局；施行日期：1997年1月1日)表2.2.1中提到的百级洁净度环境内容是：≥0.5μ尘粒≤3,500个/m3；≥5μ尘粒0个/m3；Φcm碟0.5h沉降菌≤1个；浮游菌≤5个/m3)；《中华人民共和国国家标准洁净厂房设计规范》(编号为GB50073-2001，自2002年1月1日起施行)中表3.0.1洁净室及洁净区空气中悬浮粒子洁净度第3等级(大于或等于0.1μ粒径的最大浓度限度小于1000个，大于或等于0.2μ粒径的最大浓度限度小于24个，大于或等于0.5μ粒径的最大浓度限度小于4个)。
上述层流设计均为行业内常规设计，在此不再赘述。
使用时：先自供给瓶的空气交流管道输入臭氧进行全装置灭菌，然后关闭供给瓶的空气交流管道和收集瓶的空气交流管道，向培养室内预加部分细胞培养液，然后通过临时储液瓶将细胞悬液缓慢加入培养室内，这样，细胞主要聚集于培养室的上端，并附着于聚苯乙烯材料制作的弹性纤维培养床上。然后打开连接供给瓶与临时储液瓶的硅胶管上的控制开关，供给瓶开始供给培养液；临时储液瓶中气体通过排气管排出。同时打开培养室下端的控制开关并控制流速，使培养液以适宜的速度流出，收集培养液到收集瓶中，即获得培养物。
由于接种细胞集中于培养室上端，过夜培养后，上端培养基因细胞生长pH发生变化变为酸性，培养基中的指示剂变为黄色，此时可以打开排气管和排液管，将临时储液瓶中的液体排出，然后将临时储液瓶取下，无菌操作下，将载有疏松的纤维结构(即细胞培养床)的金属杆上下轻轻移动，让细胞从纤维结构上脱落，并随液体的流动向下移动，这样，几天后，细胞就可以长满细胞培养床了。当细胞长满细胞培养床过密时，可以通过金属杆的移动，将细胞抖落，细胞随陪夜流出，以保持适当的细胞密度。
本发明结构简单，成本较低，且操作简单，控制方便，适合普通实验室应用。
附图说明
图1为本发明的结构示意图。
其中，1、供给瓶；2、临时储液瓶；3、磨砂口装置；4、培养室；5、收集瓶；6、金属杆；7、细胞培养床；8、硅胶管；9、排气管；10、排液管；11、控制开关。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步的说明：
一种杂交瘤细胞相对固定化培养装置，包括供给瓶1、临时储液瓶2、培养室4、收集瓶5、金属杆6、细胞培养床7，如图1所示，其中，培养室4中上部设计为玻璃圆柱状，培养室4下部收缩为尖嘴状(类似于滴定管的下部)，培养室4下部设有控制开关11，收集瓶5通过硅胶管8与培养室4底部连通；临时储液瓶2位于培养室4上方，与培养室4顶端连通；临时储液瓶2上设有2个管道，一个位于顶部，为排气管9，一个位于底部，为排液管10，排气管9和排液管10上均设有控制开关11；供给瓶1通过硅胶管8与临时储液瓶2连通，硅胶管8上设有控制开关11；金属杆6下端插至培养室4底部，上端高出培养室4顶端开口；细胞培养床7位于培养室4内，固定在金属杆6上。
所述临时储液瓶2与培养室4之间通过磨砂口装置3连接，以保证密封性良好。
所述细胞培养床7为疏松的纤维结构，为聚苯乙烯纤维，细胞培养床7可以随金属杆6的上下移动而活动。所述纤维结构有弹性，纤维直径控制在1～100微米。所述纤维结构表面接枝氨基，易于细胞吸附。
所述排气管9和排液管10上均连接硅胶管8。
所述收集瓶5和供给瓶1均设计有阻除的空气交流结构，以保障液体供给和收集的畅通，同时设有硅胶管的空气交流管道，以通气消毒使用。这些均为常规设计，在此不再赘述。
使用时：先自供给瓶1的空气交流管道输入臭氧进行全装置灭菌，然后关闭供给瓶1的空气交流管道和收集瓶5的空气交流管道，向培养室4内预加部分细胞培养液，然后通过临时储液瓶2将细胞悬液缓慢加入到装有聚苯乙烯纤维结构的的培养室4内，这样，细胞主要聚集于培养室4的上端。然后打开连接供给瓶1与临时储液瓶2的硅胶管8上的控制开关11，供给瓶1开始供给培养液；临时储液瓶2中气体通过排气管9排出。同时打开培养室4下端的控制开关11，使培养液缓慢流出，收集培养液到收集瓶5中，即获得培养物。
由于接种细胞集中于培养室4上端，过夜培养后，上端培养基因细胞生长pH发生变化变为酸性，培养基中的指示剂变为黄色，此时可以打开排气管9和排液管10，将临时储液瓶2中的液体排出，然后将临时储液瓶2取下，无菌操作下，将载有疏松的纤维结构(即细胞培养床7)的金属杆6上下轻轻移动，让细胞从纤维结构上脱落，并向下移动，这样，几天后，细胞就可以长满细胞培养床7了。当细胞长满细胞培养床7过密时，可以通过金属杆6的移动，将细胞抖落，细胞流出，以保持适当的细胞密度。

Claims (5)

1.一种杂交瘤细胞相对固定化培养装置，其特征在于：包括供给瓶、临时储液瓶、培养室、收集瓶、金属杆、细胞培养床，其中，培养室上部设计为圆柱状，培养室下部收缩为尖嘴状，培养室下部设有控制开关，收集瓶通过硅胶管与培养室的尖嘴下部连通；临时储液瓶位于培养室上方，与培养室顶端连通；临时储液瓶上设有2个管道，一个位于顶部，为排气管，一个位于底部，为排液管，排气管和排液管上均设有控制开关；供给瓶通过硅胶管与临时储液瓶连通，硅胶管上设有控制开关；金属杆下端插至培养室底部，上端高出培养室顶端开口；细胞培养床位于培养室内，固定在金属杆上，细胞培养床为稍有弹性且疏松的纤维结构，细胞培养床可以随金属杆的上下移动而活动；
所述收集瓶和供给瓶均设计有过滤除菌空气交流结构。
2.根据权利要求1所述的一种杂交瘤细胞相对固定化培养装置，其特征在于：所述临时储液瓶与培养室之间通过磨砂口装置连接。
3.根据权利要求1所述的一种杂交瘤细胞相对固定化培养装置，其特征在于：所述细胞培养床为聚苯乙烯纤维制成的。
4.根据权利要求3所述的一种杂交瘤细胞相对固定化培养装置，其特征在于：所述聚苯乙烯纤维的直径为10～100微米。
5.根据权利要求3所述的一种杂交瘤细胞相对固定化培养装置，其特征在于：所述聚苯乙烯纤维表面接枝氨基。
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