CN101791317A - 一种治疗骨性关节炎的复方制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗骨性关节炎的药物组合物，具体有马钱子碱或其可药用盐与透明质酸钠组成，本发明组合物在治疗骨性关节炎上，具有很好的效果，二者合用可起到互补协同作用。

Description

一种治疗骨性关节炎的复方制剂

技术领域

本发明涉及一种治疗骨性关节炎的复方，属于药物制剂技术领域。

背景技术

骨关节炎(ostoarthritis，OA)是骨科常见疾病，也是一种危害中老年人健康、导致人群功能残疾的慢性进行性骨关节病。随着社会老龄化的发展，该病的发生率也越来越高，成为骨科研究的热点之。在骨关节炎发病过程中，关节软骨受损是其重要病理学特征。既往对其发病研究大多侧重于软骨细胞外基质的降解和/或合成新的基质受到抑制。最近研究表明软骨细胞凋亡在骨关节炎的发病过程中起重要作用，因此抑制软骨细胞的凋亡，能保护软骨，防治骨关节炎。

马钱子自古以来就为治疗痹证之良药，龙马自来丹等方中均以马钱子为君药，目前临床常用治疗骨关节炎的中成药马钱子散、伤科七昧片、益髓冲剂，腰痛舒等均含有马钱子。现代药理表明，马钱子碱是马钱子主要成分，除有显著镇痛抗炎作用外，还能调节免疫能力。张梅等(张梅，李平.马钱子碱对兔软骨细胞增殖的影响.安徽中医学院学报[J].2003，22(3)：39-41)研究发现，马钱子碱高、中、低迹象组可拮抗NO对软骨细胞的增殖抑制作用，能有效促进软骨细胞的增生。

关节腔内注射透明质酸钠被认为是一种治疗骨关节炎的有效方法。研究表明，关节腔内注射外源性SH，不仅可预防处于病变条件下的关节软骨的退行性改变，对已发生退行性改变的关节软骨也有修复和改善作用。①增加关节滑液中SH的含量，改善滑液的生理功能。当关节疾病发生后，关节滑液中的SH浓度明显减小，分子量也降低，导致滑液不能发挥正常的生理功能。关节腔注入高分子量、高浓度、高黏弹性的SH后，一方面起到了补充作用；另一方面还可刺激自身滑膜对玻璃酸的分泌。这样可迅速使关节液中的SH含量达到正常甚至更高水平，有效保护软骨或使破坏的软骨修复。②抑制痛觉感受器及感觉纤维的兴奋性，缓解关节疼痛。当关节发生炎症时，伤害感受器的激活是感觉疼痛的原因。SH对位于滑膜以及滑膜下的痛觉感受器及感觉纤维的兴奋性具有较强的抑制作用。同时，由于关节疼痛缓解，关节活动度增加，促进了滑液的回流，使局部堆积的炎性介质、组织代谢产物得以清除，从而改善了关节内环境，缓解和阻断了关节局部病变的恶性循环。③清除自由基，调节细胞功能。骨关节炎(OA)或类风湿性关节炎(RA)等关节疾病发生时，炎性细胞释放大量的自由基，降解结缔组织中的大分子物质，导致组织损伤和病变。自由基对SH的降解和关节积液对滑液的稀释导致关节滑液中SH的浓度和Mr均明显降低。研究表明，SH可与自由基发生反应而将其清除，因而高Mr SH具有保护软骨细胞免受自由基损伤的作用。④黏附于关节软骨及滑膜组织表面，起保护性屏障作用。Nonaka等观察到SH抑制从OA和RA患者体内分离的滑膜纤维母细胞产生尿激酶型纤溶酶原激活剂，I型纤溶酶原激活剂抑制因子，尿激酶型纤溶酶原激活剂受体等物质，从而可抑制局部炎症的发生。研究表明，关节腔注射SH能够显著降低关节滑液中TNF-a的含量，有利于缓解、减轻OA的炎症反应。

发明内容

本发明的目的在于提供一种由透明质酸钠和马钱子碱组成的用于骨性关节炎的复方制剂。

透明质酸钠被认为是治疗骨性关节炎的一种有效药物，本发明研究人员发现，在透明质酸钠中加入一定量的马钱子碱，当透明质酸钠与马钱子碱的重量比例在60∶1-120∶1之间时，加入的马钱子碱可以增强透明质酸钠对骨性关节炎的治疗作用，起到协同增效的效果。

本发明中，按重量比计，透明质酸钠与马钱子碱的比为60∶1-120∶1，优选为80∶1-100∶1。

本发明中，马钱子碱还可以是其药学上可接受的盐的形似，比如盐酸马钱子碱，硫酸马钱子碱等。

本发明复方的制剂形式可以是口服给药的单元制剂形式，如口服片剂、口服胶囊、口服滴丸等，还可以是经注射给药的单元制剂形式，如注射用粉针，注射用水针；也可以是经皮给药的单元制剂形式，如透皮贴剂、喷雾剂等。

本发明中，优选的单元制剂形式为注射用水针或注射用粉针。每个制剂单元中，所含有的透明质酸钠为5-50mg，所含有的马钱子碱为0.05-1mg，优选为含透明质酸钠10-30mg，马钱子碱0.2-0.3mg，更优选为含透明质酸钠25mg，马钱子碱0.25mg。

本发明中，除含有原料药透明质酸钠和马钱子碱或其可药用盐外，还可以含有其它一些各种剂型适合的制药辅料，比如可以含有填充剂、稀释剂、崩解剂、黏合剂、抗氧剂、缓释基质等的一种或多种，根据制成制剂目的的不同配以不同辅料组合，以制成合格的剂型。

具体实施例

制剂制备实施例

需要指出的是，以下所列举的制备实施例，并不是为了限制本发明原料药组成，本领域技术人员，可以根据本发明的合理配比，进行不同的组合，制备成所需的制剂。

实施例1

注射用水针(100个注射用水针处方)

透明质酸钠2.5g，盐酸马钱子碱25mg，注射用水，适量

将透明质酸钠、盐酸马钱子碱溶于适量注射用水中，超声、搅拌使其完全溶解，加入5g注射用活性炭，60℃水浴中保持30min，0.22um的微孔滤膜过滤，再用截留分子量为8万的超滤膜超滤，补足注射用水至200ml，分装于5ml的安瓿中，每支装2ml，封口，灭菌即得小水针剂。

实施例2

注射用水针(100个水针处方)

透明质酸钠2.0g，马钱子碱30mg，注射用水适量

制备工艺同实施例1。

实施例3

注射用粉针(100个注射用粉针处方)

透明质酸钠2.5g，盐酸马钱子碱25mg，甘露醇8.5g，注射用水适量

将透明质酸钠、盐酸马钱子碱、甘露醇溶解于适量的注射用水中，超声、搅拌使其完全溶解，加入5g注射用活性炭，60℃水浴中保持30min，趁热于0.22um的微孔滤膜过滤，再用截留分子量为8万的超滤膜超滤，补足注射用水至2000ml，分装于10ml西林瓶中，每支装2ml，冷冻干燥中冻干，即得粉针。

实施例4

片剂(1000片处方)

透明质酸钠60g，马钱子碱1g，乳糖200g，微晶纤维素40g，聚维酮4g，硬脂酸镁5g

分别取上述处方量的原料药及辅料，分别粉碎，过80目筛，将透明质酸钠、马钱子碱、乳糖、微晶纤维素混合均匀，以聚维酮的乙醇溶液为黏合剂制软材，制粒、干燥、整粒，加入处方量的硬脂酸镁，混合均匀，压片，即得。

实施例5

胶囊(1000个胶囊处方)

透明质酸钠50g，马钱子碱5g，预胶化淀粉250g

分别取上述处方量原料药及辅料，粉碎，过80目筛，混匀，均匀喷入蒸馏水，制软材、制粒、干燥、整粒，装入胶囊即得。

为更进一步说明本发明的有益效果，以下从药理药效具体实施方式来说明本发明。

本发明组合物注射制剂(实施例1)对兔骨关节炎的治疗作用

动物：健康成年新西兰兔(购于沈阳医学试验动物中心)雌雄不限，体重2.5-3.0kg，共45只，随机编号为1-45。

关节腔内注射药物：

透明质酸钠注射液(广东利远药业有限公司)，1.8mg/kg/次，每只注射给药0.3ml

马钱子碱注射液(本公司自制品)，0.1mg/kg/次，每只注射给药0.3ml

(透明质酸钠+马钱子碱)注射液(实施例1制备的注射用水针)，剂量为(1.8mg+0.018mg)/kg/次，每只注射给药0.3ml。

建立兔关节炎模型：全部动物均在动物实验室的无菌条件下手术，每只兔两侧关节施行手术，术前常规去毛、备皮、消毒及铺巾，以20mg/kg耳静脉注射3％戊巴比妥钠麻醉动物，在髌腱内侧作一长约2cm的直切口，依次切开皮肤、皮下组织、筋膜等，纵行切开关节囊，在直视下切断内侧副韧带，前、后交叉韧带，由此引起的膝关节不稳定在手术台上以侧方应力试验和抽屉试验证实，同时切除内侧半月板，关节腔一庆大霉素生理盐水冲洗干净后，逐层缝合关节囊和伤口。术后不固定伤肢，分笼喂养，强迫其运动(每天驱赶其至少运动30min)，并按每天15mg/kg的剂量肌注庆大霉素，连续肌注4天。

术后4周开始关节腔内分别注射药物透明质酸钠、马钱子碱、(透明质酸钠+马钱子碱)0.3ml，空白组注射生理盐水0.3ml，每周注射一次。1-20号兔的右膝关节注射透明质酸钠(B组)、左膝关节注射马钱子碱(C组)；21-40号兔右膝关节注射(透明质酸钠+马钱子碱)(D组)，左膝关节注射生理盐水(A组)。

取材与标本制备：标本取材均为双膝，每组动物给药4周后麻醉，从髌上囊部位注射入关节腔1ml无菌PBS，反复活动关节后，仔细抽取灌洗液，做好标记后立即置于-70℃冰箱中保存备用，然后空气栓塞处死动物，切开关节腔，将游离的关节和关节囊固定于中性多聚甲醛固定液中。

观察指标：标本于10％多聚甲醛中固定3天后，流水冲洗12小时，内、外股骨髁软骨面用蒸馏水洗净后，用滤纸轻轻檫干，用毛笔将墨汁刷于软骨表面，半分钟后用蒸馏水将墨汁冲去，将上述过程再重复一遍，参照Freemont分度法将骨关节炎分为三级：I度，关节软骨表面变得不规则，浅层软骨细胞周围出现嗜染程度的下降，基质染色不均；II度，关节软骨出现纤维化，部分区域出现垂直于软骨表面的裂隙，软骨细胞出现排列不均、聚集的现象；III度，关节软骨破裂，基质染色不均，软骨细胞数量减少。

一：软骨损伤的治疗作用

具体结果见表1。表1显示，治疗4周后，阴性对照组I级0只，II只4只，III级16只，软骨损伤严重，给予不同治疗药物后(透明质酸钠、马钱子碱及二者合用)对兔骨性关节炎均能起到一定的治疗作用，与阴性对照组相比治疗具有显著性差异(P＜0.01)。然而，将透明质酸钠与马钱子碱组合用于治疗骨性关节炎，发现其合用较单用透明质酸钠或马钱子碱对软骨损伤的治疗效果更佳，对骨关节炎软骨的改善作用明显好于单用透明质酸钠或马钱子碱，差异具有显著性(P＜0.05)。

表1对软骨损伤情况的治疗作用

二：对关节囊中关节液IL-1β、TNF-α含量的影响

关节囊洗液炎性因子检查：采用双抗夹心ABC-ELISA(酶联免疫吸附，enzymelinked immunosorbent assay)方法，每份关节囊洗液，分别取10ul进行IL-1β蛋白表达分析，应用美国Biosource公司提供的ELISA试剂盒，用抗免IL-1β单抗包被与酶标板上，标准品中的兔IL-1β与单抗结合，加入生物素化的抗免IL-1β，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记streptavidin与生物素结合，加入酶底物OPD，出现黄色，加终止浓硫酸，颜色变深，在492nm处测OD值，兔IL-1β含量与OD值成正比，通过绘制标准曲线求出标本兔IL-1β浓度；TNF-α的测定同IL-1β方法程序；关节液中TNF-α、IL-1β含量测定结果见表2。

表2对OA兔关节囊中IL-1β、TNF-α含量的影响

与对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与透明质酸钠或马钱子碱相比，^☆P＜0.05

从上表结果可以看出，各治疗组对OA兔关节IL-1β、TNF-α的含量都有一定的降低作用。本发明组合物对OA兔关节TNF-α的降低作用透明质酸钠、马钱子碱组相比，降低效果更为明显，差异具有显著性(P＜0.05)。

三、对软骨细胞凋亡的影响

给药4周后，取平台内侧关节面、胫骨内踝软骨置10％中性福尔马林溶液中固定4小时，石蜡包埋，原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡及计数，按试剂盒说明书要求进行操作，细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡细胞，数5个高倍视野，分别计算凋亡细胞数和总细胞数，计算凋亡率。

凋亡率＝凋亡细胞数/总细胞数×100％

表3各组动物关节软骨细胞凋亡结果

与骨关节炎对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

从上表结果可以看出，合用透明质酸钠和马钱子碱，其对骨关节炎软骨细胞的凋亡抑制作用明显要强于单独使用透明质酸钠或马钱子碱。

Claims (9)

1.一种治疗骨性关节炎的复方制剂，其特征是由治疗有效量的原料药透明质酸钠和马钱子碱或其盐制成。

2.根据权利要求1所述的复方制剂，其特征是，按重量配比计，原料药透明质酸钠与马钱子碱或其盐的配比为60∶1-120∶1。

3.根据权利要求2所述的复方制剂，其特征是，按重量配比计，原料药透明质酸钠与马钱子碱或其盐的配比为80∶1-100∶1。

4.根据权利要求1至3中任意一权利要求所述的复方制剂，其特征是所述的复方制剂的给药剂型为口服制剂、注射用制剂或经皮给药制剂。

5.根据权利要求4所述的复方制剂，其特征是所述的复方制剂的给药剂型为注射用制剂。

6.根据权利要求5所述的复方制剂，其特征是所述的注射用制剂为注射用粉针或水针。

7.根据权利要求7所述的复方制剂，其特征是所述的注射用粉针或水针中，每个制剂单元中含透明质酸钠为5-50mg，含马钱子碱或其盐为0.05-1mg。

8.根据权利要求8所述的复方制剂，其特征是所述的注射用粉针或水针中，每个制剂单元中含透明质酸钠为10-30mg，含马钱子碱或其盐为0.2-0.3mg。

9.根据权利要求8所述的复方制剂，其特征是所述的注射用粉针或水针中，每个制剂单元中含透明质酸钠为25mg，含马钱子碱或其盐为0.25mg。